CN116617161A - 一种大麻二酚的纳米化方法、由其制备得到的纳米化的大麻二酚混悬液及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开一种大麻二酚的纳米化方法、由其制备得到的纳米化的大麻二酚混悬液及其应用。所述大麻二酚的纳米化方法包括如下步骤：将大麻二酚溶于良溶剂中，得到大麻二酚‑良溶剂溶液；将大麻二酚‑良溶剂溶液加入稳定剂的水溶液中，经超声后，旋蒸去除良溶剂，得到纳米化的大麻二酚混悬液；其中，所述稳定剂选自泊洛沙姆、吐温、聚氧乙烯烷基醚、聚乙烯吡咯烷酮、羟丙基甲基纤维素和壳聚糖中的一种或几种。该纳米化方法中，通过难溶性药物纳米化技术，减小难溶性药物大麻二酚的粒径，得到大麻二酚纳米混悬液，且该混悬液中，纳米化的大麻二酚的固含量高，该方法实现了对大麻二酚的增溶作用。

Description

一种大麻二酚的纳米化方法、由其制备得到的纳米化的大麻 二酚混悬液及其应用

技术领域

本发明涉及大麻二酚的纳米化技术领域。更具体地，涉及一种大麻二酚的纳米化方法、由其制备得到的纳米化的大麻二酚混悬液及其应用。

背景技术

大麻二酚是工业大麻中含量最丰富的大麻素，其不具有精神活性，基本无毒副作用。大麻二酚因其治疗的有益潜力而引起了科学界的极大关注。研究表明，大麻二酚具有抗炎、抗坏死和抗氧化作用，对多发性硬化症、阿尔茨海默病、癫痫和帕金森病患者具有显著的治疗用途。目前市场上有两种美国FDA批准的大麻二酚产品，包括Epidiolex®（纯CBD的口服溶液）和Sativex®（CBD和Δ-9 THC口腔粘膜喷雾剂）。然而大麻二酚的水溶性低、胃肠道系统吸收不稳定性和首过代谢，导致其口服给药的生物利用度约为6％。同时，由于大麻二酚极端的亲脂性（log P:5.79），使其易驻留在皮肤的角质层，将大麻二酚输送到更深层的皮肤具有一定挑战性。因此被动扩散类的经皮系统难以实现大麻二酚在体内的循环。

纳米化被定义为一种制药工艺，涉及将活性药物成分的粒径减小到纳米尺寸范围。这意味着实现亚微米范围内的粒径，即粒径<1μm。根据诺伊斯-惠特尼方程，药物粒径的减小导致其表面积增加，因此溶出速率将成比例增加，从而导致难溶性药物的更好吸收。近年来，为了提高大麻二酚的溶解度和生物利用度，研究人员开发了多种大麻二酚纳米化方法，例如口服自乳化系统，纳米脂质体和纳米胶束等，但这些方法对大麻二酚的增溶往往有限，并且体系存在不稳定的情况。

微针是一种主动皮肤渗透增强技术，微针呈针状结构，其长度通常为几百微米，在皮肤上形成微米大小的孔，以增强药物传递。它们不刺激与疼痛相关的神经，可以增加患者的依从性，减轻疼痛。

针对大麻二酚水溶性差，口服生物利用度低，现有技术增溶量有限以及不稳定等情况，有必要开发一种高剂量大麻二酚纳米化技术，并与微针剂型结合，以提高大麻二酚的贮存稳定性和皮肤渗透率，减少给药频次，提高生物利用度和患者从性。

发明内容

基于以上问题，本发明的目的在于提供一种大麻二酚的纳米化方法、由其制备得到的纳米化的大麻二酚混悬液及其应用。

为达到上述目的，本发明采用下述技术方案：

一方面，本发明提供一种大麻二酚的纳米化方法，包括如下步骤：

将大麻二酚溶于良溶剂中，得到大麻二酚-良溶剂溶液；

将大麻二酚-良溶剂溶液加入稳定剂的水溶液中，经超声后，旋蒸去除良溶剂，得到纳米化的大麻二酚混悬液；

其中，所述稳定剂选自泊洛沙姆、吐温、聚氧乙烯烷基醚、聚乙烯吡咯烷酮、羟丙基甲基纤维素和壳聚糖中的一种或几种。此时，得到的纳米化的大麻二酚纳米混悬液中纳米化大麻二酚浓度高、药物负载率高且能很好的控制混悬液中纳米化的大麻二酚的粒径。

进一步地，所述聚氧乙烯烷基醚选自聚氧乙烯(20)十六烷基醚（Brij 58）或聚氧乙烯(20)油醚（Brij 98）。

进一步地，当稳定剂选自泊洛沙姆、吐温、聚氧乙烯烷基醚、聚乙烯吡咯烷酮、羟丙基甲基纤维素和壳聚糖中的几种的混合时，对混合比例没有要求，可以任意比例混合。示例性的，所述稳定剂选自吐温与羟丙基甲基纤维素的混合，两者的混合质量比为1:0.5、所述稳定剂选自吐温与聚乙烯吡咯烷酮的混合，两者的混合质量比为1:0.5-1:0.7、所述稳定剂选自吐温与羧甲基壳聚糖的混合，两者的混合质量比为1:0.7-1:0.8、所述稳定剂选自泊洛沙姆与聚乙烯吡咯烷酮的混合，两者的混合质量比为1:0.4等。

进一步地，所述大麻二酚与稳定剂的质量比为1:0.1-1:10。在一些更具体的示例中，所述大麻二酚与稳定剂的质量比包括但不限于为1:0.1-1:5、1:0.1-1:3、1:0.1-1:2、1:0.1-1:1.2、1:0.1-1:0.8、1:0.1-1:0.6、1:0.1-1:0.5、1:0.3-1:5、1:0.3-1:3、1:0.3-1:2、1:0.3-1:1.2、1:0.3-1:0.8、1:0.3-1:0.6、1:0.3-1:0.5、1:0.5-1:5、1:0.5-1:3、1:0.5-1:2、1:0.5-1:1.2、1:0.5-1:0.8、1:0.5-1:0.6、1:0.3、1:0.5：1:0.6、1:0.8、1:1.2等。此时，得到的纳米化的大麻二酚纳米混悬液中纳米化大麻二酚浓度高、药物负载率高且能很好的控制混悬液中纳米化的大麻二酚的粒径。

进一步地，所述大麻二酚-良溶剂溶液中，大麻二酚的浓度为20-500 mg/mL。在一些更具体的示例中，所述大麻二酚-良溶剂溶液中，大麻二酚的浓度为包括但不限于为25-500 mg/mL、25-400 mg/mL、25-300 mg/mL、25-200 mg/mL、25-150 mg/mL、25-100 mg/mL、100-500 mg/mL、100-400 mg/mL、100-300 mg/mL、100-200 mg/mL、100-150 mg/mL、150-500mg/mL、150-400 mg/mL、150-300 mg/mL、150-200 mg/mL、200-500 mg/mL、200-400 mg/mL、200-300 mg/mL、300-500 mg/mL、300-400 mg/mL、25 mg/mL、100 mg/mL、150 mg/mL、200mg/mL300mg/mL、400 mg/mL、500 mg/mL等。

进一步地，所述良溶剂选自乙醇、异丙醇、丙二醇、乙酸乙酯、二甲基亚砜、二氯乙烷和聚乙二醇中的一种或几种。

进一步地，所述稳定剂的水溶液中，稳定剂的浓度为10-100 mg/mL。在一些更具体的示例中，所述稳定剂的水溶液中，稳定剂的浓度包括但不限于为20-50mg/mL、20-30 mg/mL、30-50 mg/mL、20mg/mL、30mg/mL等。

进一步地，所述良溶剂与水的体积比为1:1-1:10。在一些更具体的示例中，所述良溶剂与水的体积比包括但不限于为1:1-1:7、1:1-1:5、1:1-1:5、1:1-1:3、1:1-1:2、1:2-1:7、1:2-1:5、1:2-1:5、1:2-1:3、1:3-1:7、1:3-1:5、1:3-1:5、1:1、1:2、1:3、1:4：1.5、1:7、1:10等。

进一步地，所述超声的功率为25-75 W，超声的时间为5-30 min。

进一步地，所述纳米化的大麻二酚混悬液中，纳米化的大麻二酚的浓度为10-100mg/mL，粒径为50-1000 nm。

又一方面，本发明提供一种纳米化的大麻二酚混悬液，其由如上所述的方法制备得到。

又一方面，本发明提供一种可溶性微针，以包含如上所述的纳米化的大麻二酚混悬液的药物成分和赋形剂的原料制备得到。

进一步地，所述可溶性微针中，纳米化的大麻二酚的含量为1.5-25wt%。

进一步地，所述赋形剂选自聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、透明质酸、羧甲基纤维素钠和羟乙基纤维素的一种或多种。

进一步地，所述原料中还包含致孔剂。致孔剂的作用包括促进针尖溶解。

进一步地，所述致孔剂有助于皮内水分子进入针尖基质内部，调控药物释放速率。所述致孔剂包括但不限于选自海藻糖、麦芽糖、蔗糖和氯化镁的一种或多种。

进一步地，所述可溶性微针为一体针或分层针。当所述可溶性微针为分层针时，所述纳米化的大麻二酚混悬液的药物成分位于针尖部分。

进一步地，所述可溶性微针为涂层微针。

又一方面，本发明提供如上所述的可溶性微针的制备方法，包括如下步骤：

将包含所述纳米化的大麻二酚混悬液的药物成分、赋形剂混合，得到水溶液；

将所述水溶液置于微针模具或微针针尖模具中，干燥，得到所述微针或可溶性微针的针尖。

进一步地，当所述可溶性为针为一体针时，其制备方法包括如下步骤：

将包含所述纳米化的大麻二酚混悬液的药物成分、赋形剂混合，得到水溶液；

将所述水溶液置于微针模具中，干燥，得到所述微针；

当所述可溶性微针为分层针时，其制备方法包括如下步骤：

将包含所述纳米化的大麻二酚混悬液的药物成分、赋形剂混合，得到针尖水溶液；

将所述针尖水溶液置于微针模具中，干燥；

再滴加基底液，对模具进行负压抽真空，干燥，得所述微针。

进一步地，所述水溶液中，赋形剂的固含量为10-25%，致孔剂的固含量为0.03-1%。

本发明的有益效果如下：

本发明中提供的大麻二酚的纳米化方法中，通过难溶性药物纳米化技术，减小难溶性药物大麻二酚的粒径，得到大麻二酚纳米混悬液，且该混悬液中，纳米化的大麻二酚的固含量高，该方法实现了对大麻二酚的增溶作用。在本发明中提供的可溶性微针的制备方法中，将大麻二酚纳米混悬液加入赋形剂后制备微针，省去了以往纳米化难溶性药物混悬液的固体化方法，提高了纳米化药物的稳定性；利用微针的药物靶向性完成对难溶性药物的透皮给药，提高了大麻二酚的皮肤渗透率，较口服药物减少了给药频次，提高了生物利用度。

附图说明

下面结合附图对本发明的具体实施方式作进一步详细的说明。

图1示出本发明实施例10中制备得到的大麻二酚纳米混悬液粒径分布图。

图2示出本发明实施例30中制备得到的微针的光学显微图。

图3示出本发明实施例30中制备得到的微针刺入离体猪皮后台盼蓝染色结果。

图4示出本发明实施例39中制备得到的微针刺入离体猪皮后的溶解高度变化图。

图5示出本发明实施例39中制备得到的微针体外药物释放曲线图。

图6示出本发明实施例39中制备得到的微针透皮累积渗透量曲线图。

图7示出本发明实施例39中制备的微针在大鼠体内的药代动力学曲线。

图8示出本发明实施例47中制备得到的分层微针荧光显微镜形貌图。

具体实施方式

为了更清楚地说明本发明，下面结合优选实施例和附图对本发明做进一步的说明。附图中相似的部件以相同的附图标记进行表示。本领域技术人员应当理解，下面所具体描述的内容是说明性的而非限制性的，不应以此限制本发明的保护范围。

实施例1

大麻二酚纳米混悬液的制备与评价：

按照以下步骤制备大麻二酚混悬液：

大麻二酚纳米混悬液的制备：将0.20 g大麻二酚溶于1mL无水乙醇中，作为有机相，以2%（w/w）吐温水溶液作为水相，控制两项混合体积比为1:5，将有机相向水相中缓慢滴加，并在45W的功率下超声10 min，将得到的混合溶液旋蒸除去有机溶剂，得到吐温-大麻二酚纳米混悬液。

含量测试：将实施例1中的溶液用流动相乙腈:水=75:25稀释100倍，采用高效液相色谱法，进行含量测试，并且进行药物负载率计算。

药物负载率=实际测得的大麻二酚浓度/理论得到的大麻二酚浓度×100%；

理论的得到的大麻二酚浓度=大麻二酚加入量/水相体积。

粒径测试：将实施例1所制备的样品，用超纯水稀释100倍后，采用纳米粒径电位分析仪(Mastersizer2000)测定。

经测试，测得的纳米混悬液中大麻二酚的浓度为24.7 mg/mL，药物负载率为61.8%，纳米化的大麻二酚的粒径为284 nm左右。

对比例1

搅拌制备大麻二酚纳米混悬液：

将0.20g大麻二酚溶于1mL无水乙醇中，作为有机相，以2%（w/w）吐温水溶液作为水相，控制两项混合体积比为1:5，在磁力搅拌下将有机相向水相中缓慢滴加，将得到的混合溶液旋蒸除去有机溶剂，得到吐温-大麻二酚纳米混悬液。

经测试，测得的大麻二酚浓度为17.0 mg/mL，药物负载率为42.5%。粒径大小在93nm左右。

对比例2

搅拌制备大麻二酚纳米乳液：

将0.20 g大麻二酚直接加入到5 mL，2%（w/w）吐温水溶液中，进行磁力搅拌24小时后，得到最终含大麻二酚的乳液。

经测试，测得的大麻二酚的浓度为10.1 mg/mL，药物负载率为25.2%，大麻二酚的粒径大小在55 nm左右。

实施例2-实施例9

制备方法参照实施例1，其中实施例2-9中各组分的参数见表1。

表1

以上结果表明，相较于对比例1-2中使用的方法，实施例中超声反溶剂沉淀法对大麻二酚有着更好的增溶效果。

实施例10

大麻二酚纳米混悬液的制备，包括如下步骤：

将0.30 g大麻二酚溶于1mL无水乙醇中，作为有机相，以3%(w/w)吐温水溶液作为水相，控制两项混合体积比为1:5，将有机相向水相中缓慢滴加，并在45W的功率下超声10min，将得到的混合溶液旋蒸除去有机溶剂，得到大麻二酚纳米混悬液。

经测试，最终测得的混悬液中大麻二酚浓度为46.4 mg/mL，药物负载率为77.33%。如图1所示，实施例10得到的混悬液中大麻二酚的粒径大小在128 nm左右。

实施例11-24，对比例3-6

选用不同稳定剂对制备大麻二酚纳米混悬液，方法同实施例1，配方如下表2所示。

表2

以上结果表明，对比例3-6使用的稳定剂不能够很好的制备大麻二酚纳米混悬液，无法起到理想的增溶作用和稳定作用。而实施例12-24中的稳定剂处方制备的大麻二酚纳米混悬液粒径在50-1000 nm之间，浓度在10-60 mg/mL。

实施例25-29

参照实施例10，使用不同的超声功率和时间制备大麻二酚纳米混悬液，配方及结果如下表3所示。

表3

以上结果表明，实施例26-29，在超声功率为25-75 W，超声时间为5-30 min的范围里都可以满足目标的浓度和纳米化要求。

实施例30

一种载有纳米化大麻二酚的一体化微针的制备方法，包括如下步骤：

（1）微针溶液配制：

取上述实施例10中制备好的4.0g大麻二酚纳米混悬液，向内加入赋形剂聚乙烯吡咯烷酮1.0 g，将两者混合均匀后离心除气泡。

（2）制备微针：

向PDMS模具中加入60 μL微针溶液，抽真空5 min，在室温下干燥，得到微针。

（3）检查微针的各参数

微针完整性：通过体式显微镜观察整片微针的形态，观察是否能够完整脱模，针尖形态是否完整。实施例30中的微针在光学显微镜的形貌如图2所示，微针阵列由144个(12× 12)锥形阵列组成，面积为0.56 cm²，针高度为500 μm。

微针的穿刺性：使用猪幼崽耳部皮肤，裁取适量面积，将微针针尖平整朝下，从微针背部进行20N的进针按压，持续按压10s，按压完成后将微针从皮肤内取出，向施针部位皮肤滴加台盼蓝染色溶液，染色5min后将皮肤擦净，观察到整齐的着色针孔阵列即为具有穿刺性。实施例30的穿刺结果如图3所示，肉眼观测针孔清晰，取下该块皮肤可见针孔阵列整齐，较为完整。

实施例31-34及对比例7-11

在对比例7-11实施例31-34列举了发明人尝试过的赋形剂制得的一体式溶解微针，对比例中赋形剂包括聚谷氨酸(γ-PGA)、硫酸软骨素(CS)、葡聚糖(DEX)、羟丙甲纤维素(HPMC)、羟丙基纤维素(HHPC)，实施例中赋形剂包括聚乙烯醇(PVA)、透明质酸(HA)、羟乙基纤维素(EC)、羧甲基纤维素钠(CMC)，均按照实施例30作方法、按照表1中给出的物质重量百分比制备得到。

按照与实施例30的方法对微针的完整性、穿刺性和针体颜色进行了检测，检测结果见表4。

表4

从表4可以看出，对比例7-11用了不同的微针基质材料，其中以γ-PGA、CS和HPMC在成针时出现了发黄的现象，DEX微针发脆，针尖剥离时易断，均不符合制剂的外观要求；当HHPC作为微针材料时，微针无穿刺性，不符合微针制剂的使用要求；当PVA、PVP、CMC、HA和EC做微针材料时，外观和穿刺性均能满足制剂的外观和使用要求。

实施例35-36及对比例12

可溶性微针中大麻二酚的占比范围：

由于制备得到的纳米化大麻二酚浓度范围在10-100 mg/mL，需要其在制备成为微针的载药率上下限。于是选取了大麻二酚浓度为10 mg/mL考察微针的载药率下限，大麻二酚浓度为100 mg/mL考察载药上限。

按照实施例30作方法、表5中给出的物质重量百分比制备微针，并考察其成针性和微针载药率。

微针含量测试：将一片微针样品加入到离心管中，向内加入3 mL 流动相（乙腈：水=75:25），在涡旋仪上振荡120分钟分组提取大麻二酚，再用0.22 μm滤膜过滤至液相小瓶中，进HPLC测试。

微针中大麻二酚占比=大麻二酚含量/微针中固体总含量×100%。

表5

微针的载药率与大麻二酚的添加量和赋形剂的质量占比有关，如要讨论载药率的下限，应尽可能的提高赋形剂的占比。实施例35选取了70%质量分数的赋形剂，制得的微针成针性良好，载药率在1.5%，若配制质量占比更高的赋形剂，则微针对大麻二酚的载药率应当更低；实施例36制得的微针针尖完整，韧性较好；但对于对比例12，当PVA的比例降低时，微针韧性不够，会出现针尖断裂的情况，故其微针大麻二酚的载药率应控制在25%以内最好。

实施例37-42及对比例13

加入不同致孔剂制备载有纳米化大麻二酚的一体式微针：

（1）微针溶液配制：

取上述实施例10中制备好的5.0g大麻二酚纳米混悬液，向内加入赋形剂0.70g透明质酸，0.30 g PVP。然后，按照表6所示处方加入致孔剂，混合均匀后离心除气泡。

（2）制备微针：

向PDMS模具中加入60 μL的微针溶液，抽真空5 min，在室温下干燥，得到微针。

（3）微针溶解性实验：

将微针贴在离体猪皮上30 s，并将压敏胶贴在衬底层上，维持一段时间。将残留的微针置于荧光显微镜下，研究微针高度的变化，以表征微针的透皮溶解性。

图4示出了实施例39制备得到的微针溶解性实验结果。可知，该微针的溶解速度很快，在10 min内针尖几乎完全溶解，说明微针可以很快的进入皮内，释放药物。

表6

以上结果表明加入致孔剂后，对微针在皮内的溶解速度有所提高，有助于释放药物。

实施例43

大麻二酚微针加速稳定性含量测试：

将实施例39中的微针贴片用泡罩和铝塑袋包装，放置于50℃环境中保存3个月。使用高效液相色谱法对第0天和第3个月的一体式微针中大麻二酚含量进行测定。经液相测试后测得的微针含量仍能保持99.3%，说明将大麻二酚制成微针后，可以保持药物良好的稳定性，且微针剂型易于贮存和运输。

实施例44

大麻二酚微针体外药物释放的测定：

取实施例制作的微针。取单片微针，置于透析袋内，并用200 μL的接收液分散，然后将透析袋精密封口，悬浮在装有 5 mL 接收液的具塞锥形瓶内。接收液为1%吐温80-PBS溶液。锥形瓶内装有磁子，磁搅拌速度为280 rpm，并置于37 ± 0.2℃恒温水浴中，定时将锥形瓶内的样品全部取出，并同时补加相同体积的释放介质。取出液经0.45 μm滤膜过滤后，转移至液相小瓶，经高效液相色谱测试，得出样品中大麻二酚的浓度。

图5示出将实施例39所得微针体外药物释放率曲线。可以看出实施例39的微针在前2 h存在突释现象，可以达到71.25±1.19%的释放度，并且在8h之后累积释放曲线趋于平滑，最终释放完全。

实施例45

大麻二酚微针大鼠体内皮肤动力学实验

将雄性成年SD大鼠(重量约为250g)固定，使用脱毛膏对其腹部皮肤进行脱毛处理，将所得微针垂直刺入其皮肤，保持按压2、4、8、12、24小时，之后取下微针阵列，用医用酒精蘸取棉球清洗皮肤两次，并与取下的贴片一同放入5 mL离心管中保存。进行残留微针含量提取，并使用高效液相色谱进行含量分析。

图6示出实施例39所得微针进行大鼠体内皮肤动力学实验后的微针透皮累积渗透量曲线图。可以看出在前2h，该微针的渗透速率较快可以达到1246.90±404.07μg/cm²，在之后的时间内，渗透放缓。

实施例46

大麻二酚微针大鼠体内药代动力学实验

将雄性成年SD大鼠(重量约为250 g) 固定，使用脱毛膏对其腹部皮肤进行脱毛处理，将所得微针垂直刺入其皮肤，给药24 h后将微针移除。给药前及给药后预定的时间点对大鼠进行尾静脉采血，置于肝素管中，4℃、5000 rpm离心10 min收集上层血浆保存于 80℃。在血浆处理后进行含量测试。

图7示出实施例39所得微针的大鼠体内药代动力学实验结果。可以看出微针给药可以维持3天的血药浓度，而灌胃组只能维持2天，并且曲线下面积为灌胃组的12倍，说明本发明设计的大麻二酚微针剂型既可以提高大麻二酚的生物利用度又可以实现一定的缓释效果，减少给药频次，提高患者的依从性。

对比例14

有机溶剂溶解的大麻二酚一体式微针的制备、耐热性评价及体外释放评价：

以N,N-二甲基乙酰胺（DMA）为溶剂，配制含10％(w/w) 聚乳酸-羟基乙酸共聚物（PLGA）、10％(w/w) PVP、4% (w/w)大麻二酚的基质溶液，混匀后作为针尖注模液。向PDMS模具中加入50 μL微针溶液，抽真空5 min，在50℃下加热3小时。

耐热性评价：将对比例14制得的微针密封包装后置于60℃的培养箱中10天，并于10天后取出，在光学显微镜下观察微针侧视图，观察微针形貌完整性和颜色。

体外药物释放测定：与实施例44操作相同。

对比例15-18

制备方法按照对比例14，使用了聚乳酸（PLA）、PVA、PVP和HPMC材料进行复配，溶解用的有机溶剂使用了DMA，N,N-二甲基甲酰胺（DMF）和N-甲基吡咯烷酮（NMP），加热工艺采用了加热和自然挥干的方式，以最后进行体外释放评价。其中对比例15-18中各组分及实验结果阐述见表7。

表7

由有机溶解的大麻二酚一体式微针体系，在使用PLGA，PLA，PVA，PVP和HPMC材料时，存在着体外释放困难和在高温条件下容易变色等情况，可见直接用有机溶剂溶解大麻二酚制备一体式微针是不合适的。

实施例47

纳米化大麻二酚分层溶解微针

按照以下步骤制备纳米化大麻二酚分层溶解微针：

（1） 分层微针基质溶液配制：

针尖液配制：取实施例10中的大麻二酚纳米混悬液1.0 g（内含荧光物质香豆素6），向内依次加入0.14 g HA，0.06 g PVP，0.01 g海藻糖。搅拌均匀离心后备用。

基底液配制：称量10.0 g超纯水于离心管中，在离心管中加入称量好的10.0 gPVA，放到80℃烘箱中加热溶胀，每隔半个小时搅拌，直至完全溶解，离心除气泡，得到PVA固含量为50%的基底液。

（2）制备微针：加液枪分别移取5 μL滴加到PDMS微针上，抽真空5 min后，在室温条件下使微针针尖自然干燥30min；然后分别滴加50 μL基底液，对模具进行负压抽真空10min后，在室温条件下自然干燥微针后脱模。

（3）微针形貌观察：如图8所示在荧光显微镜下观察制备的分层微针针尖高度约为300μm。

（4）微针溶解性实验：按照实施例37中步骤，在显微镜中观察到分层针载药针尖载5 min内即可溶解完全。

（5）体外药物释放的测定：按照实施例44的步骤，进行分层针释放速率测定。分层针在前30分钟内累积释放率可达50%以上。

实施例48

纳米化大麻二酚涂层微针

按照以下步骤制备纳米化大麻二酚涂层微针：

（1）将适量PLGA放置于微针一体式基质模具上，模具下方抽真空，并对模具进行高温加热，加热温度为190℃，加热时间为5分钟，将高分子材料按压平整，冷却脱模后得到聚乳酸一体式微针基座。

（2）药物溶液：取实施例10中的大麻二酚纳米混悬液 1.0 g，向内依次加入PVP0.1 g，50%（w/w）PVA溶液0.1 g，0.02 g海藻糖。搅拌均匀离心后备用。

（3）将上述制备的药物溶液放置在300 μm高的载药池中。取已经搭载了PLGA的微针基座，针尖向下落入载药池中进行药液蘸取，然后将微针静置3min使涂层干燥。该蘸液干燥过程重复4次。最终得到载有纳米化大麻二酚的涂层微针。

（4）微针溶解性实验：按照实施例37中步骤，在显微镜中观察到涂层针载药针尖载30 min基本溶解完全。

（5）体外药物释放的测定：按照实施例44的步骤，进行涂层针释放速率测定。涂层针在前8小时内累积释放率可达50%以上。

显然，本发明的上述实施例仅仅是为清楚地说明本发明所作的举例，而并非是对本发明的实施方式的限定，对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动，这里无法对所有的实施方式予以穷举，凡是属于本发明的技术方案所引伸出的显而易见的变化或变动仍处于本发明的保护范围之列。

Claims (10)

1.一种大麻二酚的纳米化方法，其特征在于，包括如下步骤：

将大麻二酚溶于良溶剂中，得到大麻二酚-良溶剂溶液；

将大麻二酚-良溶剂溶液加入稳定剂的水溶液中，经超声后，旋蒸去除良溶剂，得到纳米化的大麻二酚混悬液；

其中，所述稳定剂选自泊洛沙姆、吐温、聚氧乙烯烷基醚、聚乙烯吡咯烷酮、羟丙基甲基纤维素和壳聚糖中的一种或几种。

2.根据权利要求1所述的纳米化方法，其特征在于，所述大麻二酚与稳定剂的质量比为1:0.1-1:10。

3.根据权利要求1所述的纳米化方法，其特征在于，所述大麻二酚-良溶剂溶液中，大麻二酚的浓度为20-500 mg/mL；和/或

所述良溶剂选自乙醇、异丙醇、丙二醇、乙酸乙酯、二甲基亚砜、二氯乙烷和聚乙二醇中的一种或几种。

4.根据权利要求1所述的纳米化方法，其特征在于，所述稳定剂的水溶液中，稳定剂的浓度为10 -100 mg/mL。

5.根据权利要求1所述的纳米化方法，其特征在于，所述良溶剂与水的体积比为1:1-1:10。

6.根据权利要求1所述的纳米化方法，其特征在于，所述超声的功率为25-75 W，超声的时间为5-30 min。

7.根据权利要求1所述的纳米化方法，其特征在于，所述纳米化的大麻二酚混悬液中，纳米化的大麻二酚的浓度为10-100 mg/mL，粒径为50-1000 nm。

8.一种纳米化的大麻二酚混悬液，其特征在于，由如权利要求1-7任一项所述的方法制备得到。

9.一种可溶性微针，其特征在于，以包含如权利要求8所述的纳米化的大麻二酚混悬液的药物成分和赋形剂的原料制备得到。

10.如权利要求9所述的可溶性微针的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

将包含所述纳米化的大麻二酚混悬液的药物成分、赋形剂混合，得到水溶液；

将所述水溶液置于微针模具或微针针尖模具中，干燥，得到所述微针或可溶性微针的针尖。