CN105232459A - 一种复溶自组装的水难溶性药物聚合物胶束组合物及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种复溶自组装的水难溶性药物聚合物胶束组合物，包括：水难溶性药物和两亲性嵌段共聚物，水难溶性药物与两亲性嵌段共聚物之比以w/w计为1：19-1：1。还公开了该水难溶性药物聚合物胶束组合物的制备方法，包括：①将水难溶性药物和两亲性嵌段共聚物加入与水互溶的有机溶剂中，搅拌混合均匀；②在搅拌条件下将有机溶剂与水或缓冲溶液混合，有机溶剂和水或缓冲溶液的体积比大于或等于1:3，搅拌后将溶液通过微孔滤膜过滤，干燥得聚合物组合物。制备的组合物可以加入冻干保护剂制成冻干粉，复溶后，20秒内即可形成粒径介于10-100nm的载药溶液。本发明解决了水难溶性药物胶束的冻干产物不易复溶、复溶后载药量低、粒径分布不均匀的缺点。

Description

一种复溶自组装的水难溶性药物聚合物胶束组合物及其制备方法

技术领域

本发明属于医药技术领域，具体涉及一种复溶自组装的水难溶性药物聚合物胶束组合物及其制备方法。

背景技术

近年来，聚合物胶束逐渐发展成为一种适合于增加水难溶性药物溶解度的纳米粒子载体，其优点在于：①采用生物降解性材料制备的胶束可在生物体内降解、生物相容性和安全性好；②聚合物胶束的分子量高，形成的胶束结构稳定，在体内不易解离，具有长效缓释特点；③经聚乙二醇修饰的胶束具有“隐形”特点，在体内具有靶向肿瘤组织的性质；④聚合物胶束疏水的内核可明显增加水难溶性药物的溶解度，使其满足药物静脉注射的要求。

近年来，研究者们一直致力于可生物降解的聚合物材料及其胶束制剂的研究，并取得了明显的进展，以聚乙二醇聚酯嵌段共聚物为代表的数种聚合物胶束制剂已经处于临床评价阶段。已知的聚合物胶束载药方法包括乳化溶剂蒸发工艺、透析工艺和溶剂蒸发工艺。乳化溶剂蒸发工艺需要先制备聚合物和药物的乳液，然后再真空条件下逐渐蒸发溶剂，由于形成乳剂的工艺条件复杂，且乳剂的粒径和粒径分布等参数影响载药胶束的质量。因此并不适合工业化生产。中国专利CN1214818C公开了制备聚乙二醇聚酯嵌段共聚物载药胶束的方法：常温或加热搅拌法、超声波-搅拌法、溶剂蒸发法和渗析法。常温或加热搅拌法及超声波搅拌法是将紫杉醇与聚乙二醇聚酯嵌段共聚物水溶液直接混合，分别在室温、加热(40℃-120℃)或超声波的条件下处理一段时间，然后充分搅拌，使药物充分进入胶束内核。溶剂蒸发法是将紫杉醇溶解于有机溶剂中，然后加至聚乙二醇聚酯嵌段共聚物的水溶液中，然后在搅拌下缓慢蒸干有机溶剂，得到载药胶束溶液。渗析法是将紫杉醇和聚乙二醇聚酯嵌段共聚物溶解于有机溶剂，然后分别用缓冲液和水对有机溶剂进行渗析，得到载药胶束溶液。搅拌法不能获得较高载药量的胶束溶液，渗析法操作费时且麻烦，因此，这两种载药方法并不适合紫杉醇聚乙二醇聚酯胶束的工业化生产。溶剂蒸发法可以作为载药胶束的大规模生产应用，可成功将水难溶性药物包裹进入聚合物胶束的内核，达到增溶的目的。然而，使用溶剂蒸发法制备载药胶束常常会使用毒性较高的有机溶剂，并且胶束产品在复溶时会出现溶液浑浊，表现为药物迅速从胶束内核中析出，产生沉淀，并且胶束的粒径和粒径分布显著增大。这是溶剂蒸发过程中胶束产品中残留的少量有机溶剂和高温下溶剂蒸发所导致的药物在胶束内核中的迁移所造成的。溶剂蒸发工艺制备的胶束产品在使用注射用水或缓冲液复溶后并不能满足静脉注射的要求。专利CN102264351A公开了一种有机溶剂冻干法制备胶束，其将嵌段共聚物与水难溶性药物溶解于有机溶剂中，然后与水相混合，使聚合物形成载药胶束溶液，再进行冻干，除去有机溶剂。为确保聚合物在混合溶剂中形成胶束，该制备方法须严格控制有机溶剂与聚合物/药物的用量，有机溶剂的用量为药物和共聚物组合物重量的0.5％～30％(w/w)。由于该方法使用的有机溶剂比例较低，且为增加聚合物和药物在少量有机溶剂中的溶解度，需要采用加热的办法。众所周知，很多热敏感性的药物是不能够耐受加热条件的，在制备工艺中很可能会产生毒性降解产物或杂质，降低制剂的安全性。由于聚合物/药物用量的限制，此方法并不能够制得高载药量的胶束。此外，胶束的形成会包裹热原和细菌，不利于静脉注射产品的热原和无菌控制。因此，上述公开方法并不能有效制备质量稳定、易工业化生产的胶束产品。理想的胶束产品应在注射用水性溶媒中快速分散并溶解，形成粒径小于100nm且粒径分布均匀的高载药量胶束溶液。

目前制备载药胶束的方法均是需要先采用合适的方法制备载药胶束溶液(CN1214818C，CN102264351A)，为了获得小粒径且分布均匀的胶束，可对制备好的胶束溶液进行超声、研磨或挤出，然后再对载药胶束溶液进行冻干，获得适于储存的胶束产品。临用前经注射溶媒稀释获得胶束溶液。目前的制备方法的存在缺陷是：①需要形成载药胶束溶液后再进行冻干，工艺操作复杂且费时，须严格控制有机溶剂的用量或需要加热操作等，并不利于GMP生产中的质量控制；②胶束粒子在冻干过程中形态会发生变化，临前经注射用水性溶媒复溶时会出现胶束粒径增大且粒径分布不均、药物泄露和溶液浑浊等现象，严重地制约了其临床应用。这是由于胶束粒子在冻干过程中由于溶剂的挥发发生了形态和性质的改变，导致胶束结构的破坏或部分药物泄露造成的。

可见，现有的载药技术中，将水难溶性药物与两亲性聚合物先制备成胶束溶液再进行干燥的工艺具有诸多缺陷，而将水难溶性药物与聚合物在不形成胶束溶液的情况下干燥会避免很多制备和应用上的缺陷，同时在保留原有优点的基础上，具有更多的优势。但现有技术中并没有相关的报道。

发明内容

本发明主要解决的技术问题是：针对现有的聚合物胶束载药工艺在干燥过程中出现的胶束粒子形态和稳定性无法有效保证，且在水性溶媒复溶时出现的胶束粒径增大、聚集且形态破坏和药物泄露等严重缺陷，提供了一种具有复溶自组装的水难溶性药物聚合物胶束组合物，并通过简化步骤制备载药聚合物胶束产品的方法，其最大优点是在整个制备过程中不需要形成胶束溶液，从而避免了胶束溶液在干燥和复溶时出现的问题。而且，本发明令人吃惊的发现是采用本发明的方法制备的水难溶性药物聚合物胶束组合物及其冻干粉在使用注射用水性溶媒复溶时，在20秒内即可形成澄清透明的淡蓝色胶束溶液，且无浑浊产生，胶束粒子粒径分布均匀，载药量高，稳定性好。因此，通过本发明的制备技术，简化了本发明的载药工艺操作步骤，可以解决目前水难溶性药物聚合物胶束载药工艺和产品中所面临的难题，适合于工业化生产。

本发明是通过如下技术方案实现的：

本发明所述的水难溶性药物聚合物胶束组合物包括：水难溶性药物：两亲性嵌段共聚物＝1：19-1：1(w/w)，优选为1:9-1:1.5。

所述的水难溶性药物载药聚合物组合物由包括如下步骤的方法制得：

①将水难溶性药物和两亲性嵌段共聚物加入与水互溶的有机溶剂中，搅拌混合均匀；

②在搅拌条件下将有机溶剂与水或缓冲溶液混合，有机溶剂与水或缓冲溶液的体积比大于或等于1:3，优选为2/3～10/1，搅拌后将溶液通过微孔滤膜过滤得滤液，干燥得水难溶性药物聚合物胶束组合物。

本发明中可以加入冻干保护剂，除菌分装于无菌容器中，无菌容器置于冻干机中，-30℃～-50℃条件下冷冻，冻干，得聚合物组合物冻干粉。所述的冻干保护剂选自以下物质的一种或多种：乳糖、甘露醇、蔗糖、山梨醇、葡萄糖、海藻糖和半乳糖。

本发明的冻干保护剂可以在步骤②的水或缓冲溶液中加入，也可以在步骤②过滤得到的滤液中加入。

其中：步骤①所述的有机溶剂选自乙醇、丙醇、丁醇、戊醇和己醇中的一种或多种，所述的丙醇、丁醇、戊醇和己醇包括丙醇、丁醇、戊醇和己醇同分异构体，所述有机溶剂中含有水难溶性药物的浓度为0.05～20mg/ml，两亲性嵌段共聚物浓度为0.1mg～100mg/ml。

步骤①所述的水难溶性药物浓度较佳的是每1毫升有机溶剂含1～15mg，两亲性嵌段共聚物浓度较佳的是每1毫升有机溶剂含1.5～75mg。

步骤②所述的水或缓冲液中含有冻干保护剂的浓度为0.1～100mg/ml。

步骤②所述的冻干保护剂在水或缓冲液中的浓度较佳的是每1毫升含2～80mg。

步骤②所述的搅拌条件为实验室或工业化生产常用的搅拌方式，能够达到混匀的目的即可，可采用手工搅拌、磁力搅拌、电动搅拌等多种方式。

步骤②所述的有机溶剂和水体积比较佳的为2/3～10/1。

步骤②所述的过滤除菌较佳的是通过0.22微米的微孔滤膜过滤除菌，所述的容器优选西林瓶。

所述的水难溶性药物具有小于10mg/ml的溶解度，可选自抗肿瘤药物、抗真菌药物、类固醇、抗炎药物、性激素、免疫抑制剂、抗病毒药物、麻醉药物和止吐药物。选自多柔比星、表柔比星、伊立替康、SN-38、喜树碱、紫杉烷、环孢菌素A、酮康唑、伊曲康唑、泊沙康唑、吲哚美辛、雌二醇、前列地尔、丙泊酚、地塞米松、泼尼松龙。其中，所述的紫杉烷，选自紫杉醇、多西紫杉醇、7-表紫杉醇、t-乙酰基紫杉醇、10脱乙酰基紫杉醇、10脱乙酰基-7表紫杉醇、7-木糖基紫杉醇、10脱乙酰基-7-戊二酰紫杉醇、7-N,N-二甲基甘氨酰紫杉醇、7-L-丙氨酰紫杉醇。

所述的两亲性嵌段共聚物为包含亲水性嵌段(A)和疏水性嵌段(B)的聚合物，选自亲水嵌段和疏水嵌段的A-B、A-B-A和B-A-B型两亲嵌段共聚物，亲水嵌段的数均分子量为500～20000道尔顿，优选为1000～10000；所述的疏水嵌段B的数均分子量为500～20000道尔顿，优选为1000～10000。亲水嵌段A在所述的嵌段共聚物总质量中所占的含量为20-80wt％，优选40％-70wt％。

其中，亲水性嵌段选自聚乙二醇和甲氧基聚乙二醇的一种或两种嵌段；疏水嵌段选自以下各项的一种或多种嵌段：聚丙交酯、聚乙交酯、聚丙交酯乙交酯、聚己内酯、聚己内酯丙交酯、聚己内酯乙交酯、聚对二氧杂环己酮﹑聚氨基酸﹑聚原酸酯﹑聚酐及以上两种或两种以上的共聚物、磷脂(磷脂酰乙醇胺、磷脂酰胆碱、磷脂酰肌醇、磷脂酰丝氨酸、二磷脂酰甘油或溶血胆碱磷脂)。优选：聚乙二醇聚酯嵌段共聚物、聚乙二醇聚谷氨酸嵌段共聚物、单甲氧基聚乙二醇聚乳酸嵌段共聚物、单甲氧基聚乙二醇聚丙交酯乙交酯嵌段共聚物、单甲氧基聚乙二醇聚己内酯嵌段共聚物、单甲氧基聚乙二醇-聚天冬氨酸共聚物、单甲氧基聚乙二醇聚谷氨酸嵌段共聚物、甲氧基聚乙二醇磷脂酰乙醇胺。

在本发明的较好的实施方式中，所述的水难溶性药物聚合物胶束组合物包括：多柔比星5～20％(w/w)，聚乙二醇聚酯嵌段共聚物40～75％(w/w)，冻干保护剂5～55％(w/w)；多烯紫杉醇5～20％(w/w)，聚乙二醇聚聚酯嵌段共聚物40～75％(w/w)，冻干保护剂5～55％(w/w)。

本发明所述的水难溶性药物聚合物胶束组合物冻干粉在临用前加入注射用水、生理盐水、缓冲液或葡萄糖等水性溶媒，可在10～20秒内复溶，形成粒径为10～100nm的澄清透明溶液，每毫升溶液含疏水性类药物为0.5～15mg，优选为5～10mg，两亲性嵌段共聚物1.5mg～150mg，优选为15mg～100mg。然后用等渗注射用水、生理盐水、葡萄糖注射液等适当稀释后静脉注射。水性溶媒用量根据不同品种临床使用浓度确定。

本发明中，所述的冻干保护剂是本领域中常规使用的保护剂，冻干保护剂在溶液的冻干过程中起保护作用，在干燥后起支撑作用，维持冻干产品的疏松外形。本发明所述的冻干保护剂选自以下物质中的一种或几种：乳糖、甘露醇、蔗糖、山梨醇、葡萄糖、海藻糖和半乳糖，优选为乳糖或海藻糖。

本发明的水难溶性药物聚合物胶束组合物中，如有必要还可含有适量的pH调节剂、等渗调节剂和稳定剂，以满足《中国药典》对注射剂的要求，这对本领域技术人员来说是比较容易做到的，可使用的pH调节剂包括盐酸、氢氧化钠、碳酸氢钠、碳酸钠、柠檬酸盐、磷酸盐、醋酸盐、乳酸盐缓冲液等的一种或多种。等渗调节剂包括氯化钠、乳糖、氯化钙、硫酸钠、氯化镁等的一种或多种。稳定剂包括抗氧剂、金属离子螯合剂等。

本发明制备水难溶性药物聚合物胶束组合物可用于静脉内、口服、局部、腹膜内、经皮、外用等途径进行给药。

有益效果

相比于现有技术，本发明的有益效果如下：

与中国专利CN1214818C公开的载药胶束的制备方法相比，本发明提供的水难溶性药物聚合物胶束组合物和制备方法提供了一种易复溶的产品，复溶时间短(完全溶解时间小于20秒)、操作简单(手工振摇即可)、复溶后的溶液澄清透明，粒径小且分布均匀，包封率和载药量均较高，复溶后的溶液稳定性大于12小时。

与中国专利CN1214818C、CN102264351A公开的制备胶束方法和现有的方法相比，本发明提供的水难溶性药物聚合物胶束组合物制备工艺在冻干前为单相溶液，不需要形成胶束溶液后再将其进行冻干，在注射溶媒中复溶时迅速形成粒径均匀的胶束溶液。因此，本发明提供的载药工艺不会出现在冻干过程中破坏胶束粒子的结构和药物泄露的问题，也不需进行超声或高压均质等处理优化胶束的粒径和粒径分布。本发明提供的单相溶液与胶束溶液相比，更易于通过0.22微米滤膜进行灭菌，极大地简化了载药胶束的制备过程和操作成本。此外，本发明提供的载药胶束制备工艺不会形成胶束粒子包裹热原和细菌，极大地方便了静脉注射产品的热原和无菌质量控制。

与中国专利CN1214818C公开的制备方法相比，本发明采用了与水互溶的更低毒性的醇类有机溶剂，其毒性远远低于氯仿和甲醇等，其可在冻干过程中得到有效去除，在冻干产品中几乎没有残留，增加了产品的安全性。

具体实施方式

下面用实施例进一步说明本发明，但本发明并不受其限制。下列实施例中未具体注明的实验条件及方法为按照常规条件操作，或按照仪器制造厂商所建议的条件。

具体实施方式：

实施例1

称取多烯紫杉醇20mg，单甲氧基聚乙二醇聚乳酸嵌段共聚物(单甲氧基聚乙二醇数均分子量1500，聚乳酸数均分子量1500，MPEG1500-PLA1500)400mg溶于20ml(16g)丙醇(有机溶剂：组合物质量比＝38:1)，称取乳糖600mg溶解于30ml注射用水。将丙醇和水在搅拌条件下混合均匀，溶液为澄清透明无蓝色乳光的单相溶液(未形成胶束粒子)，溶液经0.22微米滤膜除菌过滤，灭菌后分装于洁净的西林瓶中。将西林瓶置于，-30℃～-50℃条件下冷冻，冻干后，经充氮、加塞、轧盖，即得。

实施例2

称取多烯紫杉醇9.75mg，单甲氧基聚乙二醇聚丙交酯乙交酯嵌段共聚物(单甲氧基聚乙二醇数均分子量1500，聚丙交酯乙交酯数均分子量1500，MPEG1500-PLA1500)65mg溶于1.3ml(1.05g)丁醇(有机溶剂：组合物质量比＝14:1)，称取乳糖13mg溶解于1.3ml注射用水。将丁醇和水在搅拌条件下混合均匀，溶液为澄清透明无蓝色乳光的单相溶液(未形成胶束粒子)，溶液经0.22微米滤膜除菌过滤，灭菌后分装于洁净的西林瓶中。将西林瓶置于，-30℃～-50℃条件下冷冻，冻干后，经充氮、加塞、轧盖，即得。

实施例3

称取多柔比星40mg，单甲氧基聚乙二醇聚乳酸嵌段共聚物(单甲氧基聚乙二醇数均分子量1500，聚乳酸数均分子量1500，MPEG1500-PLA1500)200mg溶于80ml(64.6g)丁醇(有机溶剂：组合物质量比＝269:1)，称取乳糖24mg溶解于240ml注射用水。将丁醇和水在搅拌条件下混合均匀，溶液为澄清透明无蓝色乳光的单相溶液(未形成胶束粒子)，溶液经0.22微米滤膜除菌过滤，灭菌后分装于洁净的西林瓶中。将西林瓶置于，-30℃～-50℃条件下冷冻，冻干后，经充氮、加塞、轧盖，即得。

实施例4

称取紫杉醇2mg，单甲氧基聚乙二醇聚乳酸嵌段共聚物(单甲氧基聚乙二醇数均分子量1500，聚乳酸羟基乙酸数均分子量1500，MPEG1500-PLA1500)100mg溶于1ml(0.807g)丁醇(有机溶剂：组合物质量比＝8:1)，称取葡萄糖300mg溶解于3ml注射用水。将丁醇和水在搅拌条件下混合均匀，溶液为澄清透明无蓝色乳光的单相溶液(未形成胶束粒子)，溶液经0.22微米滤膜除菌过滤，灭菌后分装于洁净的西林瓶中。将西林瓶置于，-30℃～-50℃条件下冷冻，冻干后，经充氮、加塞、轧盖，即得。

实施例5

称取多烯紫杉醇40mg，单甲氧基聚乙二醇聚乳酸嵌段共聚物(单甲氧基聚乙二醇数均分子量1000，聚乳酸数均分子量1500，MPEG1500-PLA1000)200mg溶于20ml(15.7g)丙醇(有机溶剂：组合物质量比＝65:1)，称取乳糖300mg溶解于10ml注射用水。将丙醇和水在搅拌条件下混合均匀，溶液为澄清透明无蓝色乳光的单相溶液(未形成胶束粒子)，溶液经0.22微米滤膜除菌过滤，灭菌后分装于洁净的西林瓶中。将西林瓶置于，-30℃～-50℃条件下冷冻，冻干后，经充氮、加塞、轧盖，即得。

实施例6

称取多烯紫杉醇40mg，单甲氧基聚乙二醇聚乳酸嵌段共聚物(单甲氧基聚乙二醇数均分子量1500，聚乳酸数均分子量1500，MPEG1500-PLA1500)160mg溶于8ml(6.28g)丙醇(有机溶剂：组合物质量比＝31:1)，称取乳糖100mg溶解于2.5ml注射用水。将丙醇和水在搅拌条件下混合均匀，溶液为澄清透明无蓝色乳光的单相溶液(未形成胶束粒子)，溶液经0.22微米滤膜除菌过滤，灭菌后分装于洁净的西林瓶中。将西林瓶置于，-30℃～-50℃条件下冷冻，冻干后，经充氮、加塞、轧盖，即得。

实施例7

称取多烯紫杉醇300mg，单甲氧基聚乙二醇聚乳酸嵌段共聚物(单甲氧基聚乙二醇数均分子量1500，聚乳酸数均分子量1500，MPEG1500-PLA2250)900mg溶于30ml(24g)丙醇(有机溶剂：组合物质量比＝20:1)，称取乳糖250mg溶解于5ml注射用水。将丙醇和水在搅拌条件下混合均匀，溶液为澄清透明无蓝色乳光的单相溶液(未形成胶束粒子)，溶液经0.22微米滤膜除菌过滤，灭菌后分装于洁净的西林瓶中。将西林瓶置于，-30℃～-50℃条件下冷冻，冻干后，经充氮、加塞、轧盖，即得。

实施例8

称取多烯紫杉醇30mg，单甲氧基聚乙二醇聚丙交酯乙交酯嵌段共聚物(单甲氧基聚乙二醇数均分子量12000，聚丙交酯乙交酯数均分子量5100，MPEG12000-PLGA5100)80mg溶于2ml(1.63g)戊醇(有机溶剂：组合物质量比＝15:1)，称取乳糖25mg溶解于0.5ml注射用水。将戊醇和水在搅拌条件下混合均匀，溶液经0.22微米滤膜除菌过滤，灭菌后分装于洁净的西林瓶中。将西林瓶置于，-30℃～-50℃条件下冷冻，冻干后，经充氮、加塞、轧盖，即得。

实施例9称取两性霉素B10mg，聚乙二醇磷脂酰乙醇胺(单甲氧基聚乙二醇数均分子量2000，磷脂酰乙醇胺数均分子量692，MPEG2000-PE692)20mg溶于200ml(164g)己醇(有机溶剂：组合物质量比＝5467:1)，称取乳糖2400mg溶解于40ml注射用水。将己醇和水在搅拌条件下混合均匀，溶液为澄清透明无蓝色乳光的单相溶液(未形成胶束粒子)，溶液经0.22微米滤膜除菌过滤，灭菌后分装于洁净的西林瓶中。将西林瓶置于，-30℃～-50℃条件下冷冻，冻干后，经充氮、加塞、轧盖，即得。

实施例10称取两性霉素B400mg，聚乙二醇磷脂酰乙醇胺(单甲氧基聚乙二醇数均分子量2000，磷脂酰乙醇胺数均分子量692，MPEG2000-PE692)1000mg溶于20ml(16.2g)丁醇(有机溶剂：组合物质量比＝11.5:1)，称取海藻糖200mg溶解于2.5ml注射用水。将丁醇和水在搅拌条件下混合均匀，溶液为澄清透明无蓝色乳光的单相溶液(未形成胶束粒子)，溶液经0.22微米滤膜除菌过滤，灭菌后分装于洁净的西林瓶中。将西林瓶置于，-30℃～-50℃条件下冷冻，冻干后，经充氮、加塞、轧盖，即得。

实施例11

称取7-乙基-10-羟基-喜树碱80mg，单甲氧基聚乙二醇聚谷氨酸嵌段共聚物(单甲氧基聚乙二醇数均分子量5000，聚谷氨酸数均分子量19000，MPEG5000-PGlu19000)800mg溶于20ml(16.2g)丁醇(有机溶剂：组合物质量比＝18:1)，称取乳糖100mg溶解于2ml注射用水。将丁醇和水在搅拌下混合均匀，溶液为澄清透明无蓝色乳光的单相溶液(未形成胶束粒子)，溶液经0.22微米滤膜除菌过滤，灭菌后分装于洁净的西林瓶中。将西林瓶置于，-30℃～-50℃条件下冷冻，冻干后，经充氮、加塞、轧盖，即得。

实施例12

称取多烯紫杉醇324mg，聚乙二醇聚乳酸三嵌段共聚物(聚乙二醇数均分子量1000，聚乳酸数均分子量1700，PLA1700-PEG1500-PLA1700)1620mg溶于27ml(21.2g)丙醇(有机溶剂：组合物质量比＝11:1)，称取乳糖120mg溶解于3ml注射用水。将丙醇和水在搅拌下混合均匀，溶液为澄清透明无蓝色乳光的单相溶液(未形成胶束粒子)，溶液经0.22微米滤膜除菌过滤，灭菌后分装于洁净的西林瓶中。将西林瓶置于，-30℃～-50℃条件下冷冻，冻干后，经充氮、加塞、轧盖，即得。

实施例13

称取多烯紫杉醇20mg，单甲氧基聚乙二醇聚乳酸嵌段共聚物(单甲氧基聚乙二醇数均分子量1500，聚乳酸数均分子量1500，MPEG1500-PLA1500)400mg溶于20ml(16g)丙醇(有机溶剂：组合物质量比＝160:1)，加入30ml注射用水，搅拌混合均匀，溶液经0.22微米滤膜除菌过滤，灭菌后分装于洁净的西林瓶中。将西林瓶置于，-20℃～-50℃条件下冷冻，冻干后，经充氮、加塞、轧盖，即得。

实施例14

称取伊立替康80mg，单甲氧基聚乙二醇聚乳酸嵌段共聚物(单甲氧基聚乙二醇数均分子量2000，聚乳酸数均分子量1500，MPEG2000-PLA1500)800mg溶于20ml(16.2g)丁醇(有机溶剂：组合物质量比＝18:1)，称取乳糖100mg溶解于2ml注射用水，搅拌混合均匀，溶液经0.22微米滤膜除菌过滤，灭菌后分装于洁净的西林瓶中。将西林瓶置于，-20℃～-50℃条件下冷冻，冻干后，经充氮、加塞、轧盖，即得。

实施例15

称取环孢素A80mg，单甲氧基聚乙二醇聚乳酸嵌段共聚物(单甲氧基聚乙二醇数均分子量2000，聚乳酸数均分子量1500，MPEG2000-PLA1500)800mg溶于20ml(16.2g)丁醇(有机溶剂：组合物质量比＝18:1)，称取乳糖100mg溶解于2ml注射用水，搅拌混合均匀，溶液经0.22微米滤膜除菌过滤，灭菌后分装于洁净的西林瓶中。将西林瓶置于，-20℃～-50℃条件下冷冻，冻干后，经充氮、加塞、轧盖，即得。

比较例1混合溶剂-胶束溶液冻干法制备多烯紫杉醇载药胶束

称取单甲氧基聚乙二醇聚乳酸(聚乙二醇数均分子量1500，聚乳酸数均分子量1500，MPEG1500-PLA1500)200mg，在40℃搅拌下溶解于0.09ml乙醇(72mg)，冷却至25℃，加入多烯紫杉醇40mg(有机溶剂：组合物质量比＝0.3:1)，待全部溶解后，加入然后加入5ml注射用水，搅拌均匀，待溶液形成具有蓝色乳光的澄清胶束溶液，称取乳糖100mg溶解于此溶液中，溶液经0.22微米滤膜过滤，分装于洁净西林瓶中，将西林瓶置于-20℃～-50℃条件下冷冻，冻干后，经充氮、加塞、轧盖，即得。

比较例2混合溶剂-胶束溶液冻干法制备多烯紫杉醇载药胶束

称取单甲氧基聚乙二醇聚乳酸(聚乙二醇数均分子量1500，聚乳酸数均分子量1500，MPEG1500-PLA1500)200mg，在70℃搅拌下溶解于0.045ml乙醇(36mg)，冷却至40℃，加入多烯紫杉醇40mg(有机溶剂：组合物质量比＝0.15:1)，待全部溶解后，加入5ml注射用水，搅拌均匀，待溶液形成具有蓝色乳光的澄清胶束溶液，称取乳糖100mg溶解于此溶液中，溶液经0.22微米滤膜过滤，分装于洁净西林瓶中，将西林瓶置于-20℃～-50℃条件下冷冻，冻干后，经充氮、加塞、轧盖，即得。

比较例3溶剂蒸发法制备多烯紫杉醇载药胶束

称取多烯紫杉醇20mg，单甲氧基聚乙二醇聚乳酸(聚乙二醇数均分子量1500，聚乳酸数均分子量1500，MPEG1500-PLA1500)200mg，在40℃搅拌下溶解于20ml乙醇，然后用配有圆底烧瓶的旋转蒸发仪在40℃下减压蒸干乙醇，持续3小时。然后将聚合物与药物的混合物冷却至25℃。称取乳糖400mg溶解于20ml注射用水，25℃水化30分钟，至聚合物完全溶解，取溶液经超声整粒，经0.22微米滤膜过滤，分装于洁净西林瓶中，将西林瓶置于-20℃～-50℃条件下冷冻，冻干后，经充氮、加塞、轧盖，即得。

下面通过实验例对比说明本发明的有益效果。

对比实验1复溶时间、复溶后粒径与稳定性试验

本发明的实施例的主要制备工艺参数如表1所示。导致本发明制备工艺与对比文件(CN102264351A)公开的制备工艺本质区别的为冻干前是否形成胶束溶液。对比文件公开的制备工艺需形成载药胶束溶液后再进行冻干，为确保聚合物在有机溶剂与水的混合溶剂中形成胶束粒子，严格限定了有机溶剂的用量为聚合物胶束组合物质量的0.5％-30％(w/w)，即有机溶剂/胶束组合物的质量比为0.005:1-0.3:1。如果有机溶剂的用量超过此范围，会导致聚合物溶解在有机溶剂中，无法在混合溶剂中形成胶束粒子。此种工艺的缺点包括：①需要形成胶束溶液后再进行冻干，须严格控制有机溶剂的用量并需要加热操作等，会导致一系列的问题：如聚合物和药物由于自身溶解度的限制难以溶解在少量的有机溶剂中，因此溶解困难，导致载药量低；采用加热的操作会使某些热敏感药物产生降解；工艺操作复杂且费时，不利于工业化生产②胶束粒子在冻干过程中形态会发生变化，临用前经注射用水性溶媒复溶时会出现胶束粒径增大且粒径分布不均、药物泄露和溶液浑浊等现象。本发明公开的制备工艺是采用充足量的有机溶剂溶解聚合物和水难溶性药物，所用的有机溶剂/胶束组合物质量比均大于5/1，保证在冻干前形成聚合物和药物的单相溶液，并不形成载药胶束溶液。两种工艺的显著区别可以通过聚合物溶液的外观状态或粒子粒径的测定得到验证(表2)。由表中结果对比可知，本发明公开的制备工艺中，样品溶液在冻干前为澄清无蓝色乳光的单相溶液，粒径测定结果也表明共聚物在溶液中并未形成胶束粒子，而比较1和2的制备工艺中，样品溶液外观具有蓝色乳光，粒径的测定结果分别为34.5nm和36.9nm，表明共聚物在溶液中自聚集形成胶束粒子。因此，本发明的制备工艺与对比文件的工艺相比并非简单的改变，而是通过改变共聚物分子在溶液中的存在形式的本质变化获取更好的载药效果。

表1实施例的主要制备工艺参数

表2实施例与对比例冻干前溶液外观与粒径对比

样品	外观	粒径 (nm)
			实施例1	澄清无蓝色乳光的单相溶液	--
实施例2	澄清无蓝色乳光的单相溶液	--
			实施例3	澄清无蓝色乳光的单相溶液	--
实施例4	澄清无蓝色乳光的单相溶液	--
			实施例5	澄清无蓝色乳光的单相溶液	--
实施例6	澄清无蓝色乳光的单相溶液	--
			实施例7	澄清无蓝色乳光的单相溶液	--
实施例8	澄清无蓝色乳光的单相溶液	--
			实施例9	澄清无蓝色乳光的单相溶液	--
实施例10	澄清无蓝色乳光的单相溶液	--
			实施例11	澄清无蓝色乳光的单相溶液	--
实施例12	澄清无蓝色乳光的单相溶液	--
			实施例13	澄清无蓝色乳光的单相溶液	--
实施例14	澄清无蓝色乳光的单相溶液	--
			实施例15	澄清无蓝色乳光的单相溶液	--
比较例1	澄清蓝色乳光的胶束溶液	34.5
			比较例2	澄清蓝色乳光的胶束溶液	36.9

--表示粒径未检测出。

取上述实施例和比较例制备的样品，加注射用水复溶(每毫升混悬液含5mg药物),采用马尔文激光粒度测定仪测定胶束粒子的平均粒径和粒径分布。以样品复溶后溶液完全澄清透明的时间计为复溶时间，复溶后室温放置，溶液出现浑浊时间计为不稳定时间。结果见表3。实施例7和比较例3的粒径分布对比可知本发明的复溶自组装型胶束的粒径分布很窄，呈单峰分布，粒径分布的多分散系数(PDI)<0.10，而采用薄膜分散法制备的载药胶束(比较例2)粒径呈双峰分布，粒径分布极不均匀，粒径分布的多分散系数(PDI)远远大于本发明的复溶自组装型胶束。溶剂蒸发法制备的载药胶束粒径分布不均匀也是导致其放置稳定性差的一个重要原因，其在室温下放置3小时即可出现肉眼可见的浑浊，表明已经有药物从胶束内核中析出。从复溶时间的对比可以看出，本发明的复溶自组装溶液具有与溶剂蒸发工艺和混合溶剂-胶束溶液制备的胶束相似甚至更短的复溶时间和更小的粒径分布，表明本发明的冻干粉的复溶性好于溶剂蒸发工艺和混合溶剂-胶束溶液冻干制备的胶束，在水性介质中很短的时间即可形成粒径分布很均匀的载药溶液。

表3复溶时间、复溶后粒径与稳定性试验结果

对比实验2聚合物胶束冻干前和复溶后的粒径、载药量和泄露率测定

取上述实施例5,6和7与比较例1、2和3制备的样品，加注射用水复溶(每毫升混悬液含5mg药物),采用马尔文激光粒度测定仪测定胶束粒子的平均粒径、载药量和泄漏率，结果见表4。

取上述实施例和比较例制备的样品，采用超速离心法分离，除去游离药物，进而测定载药量。取样品溶液置于离心管中12000rpm离心10min，弃掉游离的多烯紫杉醇沉淀，取上清胶束溶液，重复此操作两次；精密移取100μL该胶束溶液，置于10mL容量瓶中，超声溶解后，用乙腈定容至刻度，超声20min，通过0.22μm微孔滤膜后，进样20μL，记录峰面积，计算胶束溶液中药物质量。

HPLC条件如下所示：

载药量计算公式如下:

表4聚合物胶束冻干前和复溶后的粒径、载药量和泄露率测定结果

由表4中数据对比可知，混合溶剂-胶束溶液冻干法(比较例1,2)和溶剂蒸发法制备的载药胶束(比较例3)在复溶后胶束粒子的粒径显著增加，分别由原来的34.5nm，36.9nm和47.9nm增加至64.9nm，68.8nm和107.5nm，并且在复溶后出现载药量的降低，泄漏率介于2.2％-3.1％。结果表明，上述两种工艺制备胶束粒子在冻干过程中出现了较为明显的结构变化和稳定性下降的表现。与本发明的工艺相比，上述两种工艺制备的载药胶束的载药量显著降低，混合溶剂-胶束溶液冻干法制备的胶束载药量甚至低于10％。其主要原因在于制备过程中形成胶束粒子的溶剂中含有少量的有机溶剂，部分水难溶性药物会溶解在少量的有机溶剂中，造成包裹在胶束内部的药物量减少。与上述两种制备工艺相比，本发明的制备工艺制备的胶束载药量最高，并且复溶后粒径小且均匀，复溶后粒径与上述两种制备工艺冻干前的胶束溶液粒径接近。注：表中--，本发明实施例5,6,7由于在冻干前不形成胶束溶液，因此并没有冻干前的胶束粒径和载药量的数据。通过实施例与比较例的载药量对比可以明显体现本发明制备工艺的优势。

Claims (12)

1.一种水难溶性药物聚合物胶束组合物，其特征在于，组合物包括水难溶性药物和两亲性嵌段共聚物，其中水难溶性药物与两亲性嵌段共聚物之比以w/w计为1：19-1：1，组合物的制备方法为：

①将水难溶性药物和两亲性嵌段共聚物加入与水互溶的有机溶剂中，搅拌混合均匀；

②在搅拌条件下将有机溶剂与水或缓冲溶液混合，有机溶剂和水或缓冲溶液的体积比大于或等于1:3，搅拌后将溶液通过微孔滤膜过滤得滤液，干燥得聚合物组合物。

2.如权利要求1所述的组合物，其特征在于，水难溶性药物与两亲性嵌段共聚物之比以w/w计，优选为1:9-1:1.5。

3.如权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述的水难溶性药物具有小于10mg/ml的溶解度，可选自抗肿瘤药物、抗真菌药物、类固醇、抗炎药物、性激素、免疫抑制剂、抗病毒药物、麻醉药物和止吐药物，优选多柔比星、表柔比星、伊立替康、SN-38、喜树碱、紫杉烷、环孢菌素A、酮康唑、两性霉素B、伊曲康唑、泊沙康唑、吲哚美辛、雌二醇、前列地尔、丙泊酚、地塞米松、泼尼松龙；所述的紫杉烷选自紫杉醇、多西紫杉醇、7-表紫杉醇、t-乙酰基紫杉醇、10脱乙酰基紫杉醇、10脱乙酰基-7表紫杉醇、7-木糖基紫杉醇、10脱乙酰基-7-戊二酰紫杉醇、7-N,N-二甲基甘氨酰紫杉醇、7-L-丙氨酰紫杉醇。

4.如权利要求1-3任一项所述的组合物，其特征在于，所述的两亲性嵌段共聚物为包含亲水性嵌段（A）和疏水性嵌段（B）的聚合物，选自亲水嵌段和疏水嵌段的A-B、A-B-A和B-A-B型两亲嵌段共聚物，亲水嵌段的数均分子量为500～20000道尔顿，优选为1000～10000；疏水嵌段B的数均分子量为500～20000道尔顿，优选为1000～10000，亲水嵌段A在所述的嵌段共聚物总质量中所占的含量为20-80wt%，优选30%-70wt%。

5.如权利要求1-4任何一项所述的组合物，其特征在于，亲水性嵌段选自聚乙二醇和甲氧基聚乙二醇的一种或两种嵌段；疏水嵌段选自以下各项的一种或多种嵌段：聚丙交酯、聚乙交酯、聚丙交酯乙交酯、聚己内酯、聚己内酯丙交酯、聚己内酯乙交酯、聚对二氧杂环己酮﹑聚氨基酸﹑聚原酸酯﹑聚酐及以上两种或两种以上的共聚物、磷脂,优选单甲氧基聚乙二醇聚丙交酯嵌段共聚物、单甲氧基聚乙二醇聚丙交酯乙交酯嵌段共聚物、单甲氧基聚乙二醇聚己内酯嵌段共聚物、聚乙二醇聚酯嵌段共聚物、单甲氧基聚乙二醇聚天冬氨酸共聚物、单甲氧基聚乙二醇聚谷氨酸嵌段共聚物、单甲氧基聚乙二醇磷脂酰乙醇胺。

6.如权利要求1-5任何一项所述的组合物，其特征在于，制备中，加入冻干保护剂，-20℃～-50℃条件下冷冻，冻干，得聚合物组合物冻干粉。

7.如权利要求6所述的组合物，其特征在于，制备中，冻干保护剂在步骤②的水或缓冲溶液中加入，或在步骤②过滤得到的滤液中加入。

8.如权利要求1-7任何一项所述的组合物，其特征在于，步骤①所述的有机溶剂选乙醇、丙醇、丁醇、戊醇和己醇中的一种或多种，所述的丙醇、丁醇、戊醇和己醇包括丙醇、丁醇、戊醇和己醇同分异构体，所述有机溶剂中含有水难溶性药物的浓度为0.05～20mg/ml，两亲性嵌段共聚物浓度为0.1mg～100mg/ml，水难溶性药物浓度较佳的是每1毫升有机溶剂含1～15mg，两亲性嵌段共聚物浓度较佳的是每1毫升有机溶剂含1.5～75mg。

9.如权利要求7-8任何一项所述的组合物，其特征在于，步骤②所述的水或缓冲溶液中含有冻干保护剂的浓度为0～100mg/ml，浓度较佳的是每1毫升含2～80mg。

10.如权利要求1-9任何一项所述的组合物，其特征在于，步骤②所述的搅拌条件为手工搅拌、磁力搅拌、电动搅拌中的一种或几种；步骤②所述的有机溶剂和水体积比较佳的为2/3～10/1。

11.如权利要求1-10任何一项所述的组合物，其特征在于，还含有pH调节剂、等渗调节剂或稳定剂。

12.如权利要求1-11所述的组合物，其特征在于水难溶性药物伊立替康与两亲性嵌段共聚物之比以w/w计为1：19-1：1，较优为1:9-1:1.5，组合物的制备方法为：

①将伊立替康和两亲性嵌段共聚物加入与水互溶的有机溶剂中，搅拌混合均匀；

②在搅拌条件下将有机溶剂与水或缓冲溶液混合，有机溶剂和水或缓冲溶液的体积比大于或等于1:3，搅拌后将溶液通过微孔滤膜过滤得滤液，干燥得聚合物组合物。