CN112972382B - 一种含有脂质的sn-38聚合物胶束及其制备方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种含有脂质的SN‑38聚合物胶束及其制备方法和应用。该含有脂质的SN‑38聚合物胶束由SN‑38、脂质和两亲性嵌段共聚物制备得到,所述SN‑38和两亲性嵌段共聚物的质量比为1:1‑20,所述SN‑38和脂质的质量比为1:0.01‑5;所述脂质选自:磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰甘油、天然卵磷脂和阳离子脂质中的至少一种;所述两亲性嵌段共聚物的亲水链段为聚乙二醇,所述两亲性嵌段共聚的疏水链段选自:聚乳酸、聚乙醇酸、聚己内酯、聚乙交酯丙交酯、聚氨基酸及衍生物。该含有脂质的SN‑38聚合物胶束可以显著提高SN‑38在聚合物胶束中的包封率和稳定性。
Description
技术领域
本发明涉及药物技术领域,特别是涉及一种含有脂质的SN-38聚合物胶束及其制备方法和应用。
背景技术
SN-38是一种喜树碱衍生物,能够选择性结合拓扑异构酶I(Top I)来抑制细胞分裂期间的DNA合成而诱导细胞死亡,从而对癌细胞产生细胞毒性作用。SN-38水溶性极差,不能直接体内给药,临床上应用的是它的联哌酯前药伊立替康(CPT-11),被FDA批准用于结直肠癌、小细胞肺癌、胰腺癌等ZCPT-11及其脂质体制剂虽然已广泛用于临床各种癌症的治疗,但是其抗癌活性较低,在体内需要代谢成SN-38才能发挥作用,转化率极低且存在明显的个体差异性,从而导致CPT-11及其制剂治疗效果的不可预见性,以及出现骨髓抑制和迟发性腹泻等的严重毒性反应。鉴于水溶性SN-38前药小分子在临床应用上的缺陷,如果可以将SN-38直接制成制剂应用于临床,将大大提高其治疗效果。
目前SN-38的纳米递送系统是研究较为广泛的药物制剂,既能解决SN-38的溶解性问题,又能保护药物的内酯环结构,同时还能减少药物用量,降低毒副作用和增强疗效。主要包括SN-38聚合物纳米粒、SN-38聚合物胶束、SN-38脂质体、SN-38脂质纳米粒等。尽管SN-38纳米药物的研究很多,但与多数难溶性抗肿瘤药物类似,SN-38纳米递送系统仍面临着载药量低、药物容易泄露、稳定性差等关键问题和挑战。一般来说,物理包埋的SN-38在脂质体、PEG-PLA和PEG-PLGA等嵌段聚合物纳米粒中载药量基本在10%以内甚至低于5%。这是由于SN-38分子之间因为苯环强烈的π-π堆积作用容易重新形成药物聚集体而析出。为解决SN-38的载药量和药物泄露问题,更多地是通过化学修饰的方法提高SN-38在载体中的稳定性。其中一种是将SN-38通过共价键连接到两亲性嵌段聚合物的疏水链端,再于水溶液中自组装成纳米胶束,譬如已进入临床试验的聚合物胶束药物NK012就是将SN-38直接共价连接到嵌段聚合物的疏水链端,其载药量可达20%。另一种方式是将SN-38制备成前药分子后再进行物理包埋,提高其与载体的亲和性,避免过早的药物泄露。譬如将SN-38制成脂溶性更强的前药分子,从而提高其在油类溶剂中的溶解度或在脂质体和聚合物纳米粒等载体中的载药量。为解决SN-38容易形成药物聚集体而不易被负载的问题,个别研究利用了特殊的化学键实现药物的高效负载。例如,四川大学高会乐教授团队在SN-38分子间引入二硫键来打破SN-38本身的刚性结构,使其能够更加稳定地负载在疏水链端为胆红素的两亲性嵌段聚合物中,载药量从9%提高到了39.06%。除了对SN-38分子进行化学修饰外,也有对载体本身的结构进行改造来提高其与SN-38的亲和性。纽约州立大学罗君涛教授团队设计了一系列由亲水链PEG和树枝状多聚赖氨酸及特定侧链组成的两亲性末端树枝状聚合物用于SN-38的递送,由于端基引进的具有苯环结构的香豆素能与SN-38形成强烈的π-π堆积作用而使SN-38被更好地负载,并且通过调节端基和侧链的结构使SN-38的包封率提高到了92%以上。加州大学李源培教授团队将具有上述类似结构的两亲性末端树枝状聚合物端基上的香豆素换成了具有光敏性的卟啉,通过卟啉与SN-38的π-π堆积和疏水作用构建的SN-38纳米胶束载药系统也提高了SN-38的载药效率。
从以上研究来看,对SN-38进行化学修饰或共价连接到聚合物中虽然在一定程度上能够提高其载药效率,但是进入体内后仍然需要酶催化转化成活性的SN-38才能发挥作用,这就与CPT-11类似地存在转化率的问题。另外,合成新的化合物本身也是比较复杂的过程,耗时且不利于产业化。而从对聚合物本身进行化学修饰改性来看,尽管SN-38的包封率有所提高,但是从报道的结果来看,载药量仍偏低,这就意味着注射进入人体的聚合物载体的量仍会相对较高,从而存在一定的安全性问题。同样地,聚合物的修饰改性也存在着一定的复杂性。因此,如何开发一种简单的,具有高载药效率、药物不易泄露、稳定性好的SN-38纳米载体系统,是目前SN-38纳米药物研究中的关键挑战。
发明内容
基于此,本发明提供了一种具有较低的药物泄露,以及较高的载药效率和稳定性的SN-38聚合物胶束,该SN-38聚合物胶束中添加了一定量的脂质,可以利用脂质破坏SN-38分子间的π-π堆积作用引起的强结晶性,从而可以显著提高SN-38在聚合物胶束中的包封率、载药量和稳定性,大大降低药物泄露。
具体技术方案如下:
一种含有脂质的SN-38聚合物胶束,由SN-38、脂质和两亲性嵌段共聚物制备得到,所述SN-38和两亲性嵌段共聚物的质量比为1:1-20,所述SN-38和脂质的质量比为1:0.01-5;
所述脂质选自:磷脂酰胆碱(PC)、磷脂酰乙醇胺(PE)、磷脂酰甘油(PG)、天然卵磷脂(Lecithin)和阳离子脂质中的至少一种;
所述两亲性嵌段共聚物的亲水链段为聚乙二醇(PEG),所述两亲性嵌段共聚的疏水链段选自:聚乳酸(PLA)、聚乙醇酸(PGA)、聚己内酯(PCL)、聚乙交酯丙交酯(PLGA)、聚氨基酸(如聚谷氨酸(P(Glu))、聚天冬氨酸(P(Asp)))及其衍生物。
在其中一些实施例中,所述磷脂酰胆碱选自氢化大豆卵磷脂(HSPC)、二硬脂酰磷脂酰胆碱(DSPC)、单硬脂酰磷脂酰胆碱(MSPC)、二棕榈酰磷脂酰胆碱(DPPC)、二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱(DMPC)、二月桂酰磷脂酰胆碱(DLPC)、二油酰磷脂酰胆碱(DOPC)和硬脂酰溶血卵磷脂(S-LYSO-PC)中的至少一种;所述磷脂酰乙醇胺为二油酰磷脂酰乙醇胺(DOPE);所述磷脂酰甘油为二油酰磷脂酰甘油(DOPG)和/或二棕榈酰磷脂酰甘油(DPPG);所述天然卵磷脂为蛋黄卵磷脂(EPC)和/或大豆卵磷脂(SPC);所述阳离子脂质为(2,3-二油酰基-丙基)-三甲基氯化铵(DOTAP)和/或双十二烷基二甲基溴化铵(DDAB)。
在其中一些实施例中,所述两亲性嵌段共聚物的疏水链段为聚乳酸或者聚乙交酯丙交酯。
在其中一些实施例中,所述两亲性嵌段共聚物的亲水链段的分子量为1000~10000Da,优选为1500~8000Da,更优选为2000~6000Da;所述两亲性嵌段共聚物的疏水链段的分子量为1000~20000Da,优选为1500~10000Da,更优选为1900~9000Da。
在其中一些实施例中,所述SN-38和两亲性嵌段共聚物的质量比为1:2-12。
在其中一些实施例中,所述SN-38和两亲性嵌段共聚物的质量比为1:4-11。
在其中一些实施例中,所述SN-38和两亲性嵌段共聚物的质量比为1:9-11。
在其中一些实施例中,所述SN-38和脂质的质量比为1:0.05-5。
在其中一些实施例中,所述脂质为(2,3-二油酰基-丙基)-三甲基氯化铵(DOTAP),所述SN-38和脂质的质量比为1:0.05-5。
在其中一些实施例中,所述脂质为(2,3-二油酰基-丙基)-三甲基氯化铵(DOTAP),所述SN-38和脂质的质量比为1:0.2-4.2。
在其中一些实施例中,所述脂质为二棕榈酰磷脂酰甘油(DPPG),所述SN-38和脂质的质量比1:0.08-5。
在其中一些实施例中,所述脂质为二棕榈酰磷脂酰甘油(DPPG),所述SN-38和脂质的质量比为1:0.08-2.2。
在其中一些实施例中,所述脂质为二棕榈酰磷脂酰甘油(DPPG),所述SN-38和脂质的质量比1:0.1-0.6。
在其中一些实施例中,所述脂质为氢化大豆卵磷脂(HSPC),所述SN-38和脂质的质量比为1:0.4-5。
在其中一些实施例中,所述脂质为氢化大豆卵磷脂(HSPC),所述SN-38和脂质的质量比1:0.4-2.2。
在其中一些实施例中,所述脂质为氢化大豆卵磷脂(HSPC),所述SN-38和脂质的质量比为1:0.8-1.2。
在其中一些实施例中,所述脂质为蛋黄卵磷脂(EPC),所述SN-38和脂质的质量比1:0.5-5。
在其中一些实施例中,所述脂质为蛋黄卵磷脂(EPC),所述SN-38和脂质的质量比为1:0.8-4.2。
在其中一些实施例中,所述脂质为二棕榈酰磷脂酰胆碱(DPPC),所述SN-38和脂质的质量比1:0.2-5。
在其中一些实施例中,所述脂质为二棕榈酰磷脂酰胆碱(DPPC),所述SN-38和脂质的质量比为1:0.8-2.2。
在其中一些实施例中,所述脂质选自二油酰磷脂酰胆碱(DOPC)、二硬脂酰磷脂酰胆碱(DSPC)、硬脂酰溶血卵磷脂(S-LYSO-PC)、二油酰磷脂酰乙醇胺(DOPE)、二油酰磷脂酰甘油(DOPG)、双十二烷基二甲基溴化铵(DDAB)、二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱(DMPC)、二月桂酰磷脂酰胆碱(DLPC)和单硬脂酰磷脂酰胆碱(MSPC)中的至少一种,所述SN-38和脂质的质量比为0.8-4.2,进一步优选为0.8-2.2,进一步优选为0.8-1.2。
在其中一些实施例中,所述含有脂质的SN-38聚合物胶束的Z均平均粒径为20~300nm,优选为50~180nm,更优选为80~150nm;粒径的多分散系数(PDI)小于0.3,优选地,PDI小于0.2。
本发明还提供了上述含有脂质的SN-38聚合物胶束的制备方法。
具体制备方法如下:
一种上述的含有脂质的SN-38聚合物胶束的制备方法,包括如下步骤:
(1)将所述SN-38、脂质和两亲性嵌段共聚物用有机溶剂溶解,得到混合溶液,除去所得混合溶液中的有机溶剂;
(2)往步骤(1)中得到的干燥样品中加入水进行水化,再经超声或高压均质后得到纳米颗粒溶液,所述纳米颗粒即为所述含有脂质的SN-38聚合物胶束。
在其中一些实施例中,所述制备方法还包括如下步骤:将所述纳米颗粒溶液冷冻干燥。
在其中一些实施例中,所述SN-38和所述有机溶剂的配比为1mg:0.4-2.2ml。
在其中一些实施例中,所述SN-38和所述有机溶剂的配比为1mg:1-2ml。
在其中一些实施例中,所述SN-38和步骤(2)中所述水的配比为1mg:0.15-5.5ml。
在其中一些实施例中,所述SN-38和步骤(2)中所述水的配比为1mg:0.8-1.2ml。
在其中一些实施例中,所述有机溶剂选自氯仿、甲醇、二氯甲烷、乙醇和丙酮中的一种或几种。
在其中一些实施例中,所述有机溶剂为氯仿和甲醇的混合溶剂。
在其中一些实施例中,所述有机溶剂为体积比为2-12:1的氯仿和甲醇的混合溶剂。
在其中一些实施例中,所述有机溶剂为体积比为8-10:1的氯仿和甲醇的混合溶剂。
在其中一些实施例中,所述除去所得混合溶液中的有机溶剂的方法为减压干燥或喷雾干燥。
在其中一些实施例中,所述减压干燥的温度为20~40℃,压力为0~200mbar;所述喷雾干燥的入口温度为50~100℃。
在其中一些实施例中,所述减压干燥的温度为20-30℃,压力为1~4mbar;所述喷雾干燥的入口温度为70-90℃。
在其中一些实施例中,所述水化的温度为10~80℃,优选为25~60℃,所述水化的时间为10s~60min,优选为10~30min。
在其中一些实施例中,所述超声为探针超声或者水浴超声。
在其中一些实施例中,所述超声的时间为0s~30min,优选为30s~5min;所述高压均质的压力为600~1500bar,优选为800~1200bar。
本发明还提供了上述的含有脂质的SN-38聚合物胶束的应用。
具体技术方案如下:
上述的SN-38聚合物胶束在制备防治肿瘤的药物中的应用。
在其中一些实施例中,所述肿瘤为结直肠癌、卵巢癌、胰腺癌、乳腺癌、非小细胞肺癌。
一种防治肿瘤的药物,由上述的SN-38聚合物胶束和药学上可接受的辅料制备而成。
在其中一些实施例中,所述防治肿瘤的药物的剂型为注射液、冻干粉剂、肠溶片剂、颗粒剂、胶囊剂、丸剂、滴丸剂、糖浆剂、散剂。
本发明还公开了一种含有脂质的SN-38聚合物胶束的冻干粉剂。
具体技术方案如下:
一种SN-38聚合物胶束的冻干粉剂,由上述的SN-38聚合物胶束的制备原料和冻干保护剂制备得到。
在其中一些实施例中,所述冻干保护剂选自蔗糖、乳糖、海藻糖、甘露醇、麦芽糖、葡萄糖和白蛋白中的一种或多种。
在其中一些实施例中,所述冻干保护剂的用量按所述两亲性嵌段共聚物的重量比计算,1重量份的两亲性嵌段共聚物加1~52重量份的冻干保护剂。
在其中一些实施例中,所述冻干保护剂的用量按所述两亲性嵌段共聚物的重量比计算,1重量份的两亲性嵌段共聚物加4~22重量份的冻干保护剂。
本发明还提供了上述的脂质辅助的SN-38聚合物胶束的冻干粉剂的制备方法,包括如下步骤:
(1)将所述SN-38、脂质和两亲性嵌段共聚物用有机溶剂溶解,得到混合溶液,除去所得混合溶液中的有机溶剂;
(2)往步骤(1)中得到的干燥样品中加入含有所述冻干保护剂的水溶液进行水化,再经超声或高压均质后得到纳米颗粒溶液,将其分装于西林瓶中,冷冻干燥,即得。
在其中一些实施例中,所述SN-38和所述有机溶剂的配比为1mg:0.4-2.2ml。
在其中一些实施例中,所述SN-38和所述有机溶剂的配比为1mg:1-2ml。
在其中一些实施例中,所述SN-38和步骤(2)中所述水溶液的配比为1mg:0.15-5.5ml。
在其中一些实施例中,所述SN-38和步骤(2)中所述水溶液的配比为1mg:0.8-1.2ml。
在其中一些实施例中,所述有机溶剂选自氯仿、甲醇、二氯甲烷、乙醇和丙酮中的一种或几种。
在其中一些实施例中,所述有机溶剂为氯仿和甲醇的混合溶剂。
在其中一些实施例中,所述有机溶剂为体积比为2-12:1的氯仿和甲醇的混合溶剂。
在其中一些实施例中,所述有机溶剂为体积比为8-10:1的氯仿和甲醇的混合溶剂。
在其中一些实施例中,所述除去所得混合溶液中的有机溶剂的方法为减压干燥或喷雾干燥。
在其中一些实施例中,所述减压干燥的温度为20~40℃,压力为0~200mbar;所述喷雾干燥的入口温度为50~100℃。
在其中一些实施例中,所述减压干燥的温度为20-30℃,压力为1~4mbar;所述喷雾干燥的入口温度为70-90℃。
在其中一些实施例中,所述水化的温度为10~80℃,优选为25~60℃,所述水化的时间为10s~60min,优选为10~30min。
在其中一些实施例中,所述超声为探针超声或者水浴超声。
在其中一些实施例中,所述超声的时间为0s~30min,优选为30s~5min;所述高压均质的压力为600~1500bar,优选为800~1200bar。
在其中一些实施例中,所述冷冻干燥的条件包括:预冻温度为-80~-20℃,预冻时间为2~24h;冻干温度为-60~-5℃,冻干时间为24-96h。
在其中一些实施例中,所述冷冻干燥的条件包括:预冻温度为-40~-60℃,预冻时间为4~8h;冻干温度为-45~-10℃,冻干时间为68-76h。
本发明的发明人通过大量的实验研究发现一定量脂质的加入可以破坏SN-38分子间的π-π堆积作用引起的强结晶性,从而可以显著提高SN-38在聚合物胶束中的包封率,并且脂质的种类和加入的比例对提高SN-38在聚合物胶束中的包封率影响很大,在合适比例以及特定种类的脂质作用下,SN-38可以更为高效地包裹在聚合物胶束中。本发明的SN-38聚合物胶束及其制剂解决了现有递送SN-38的聚合物胶束制剂载药效率低、稳定性差,药物泄漏等问题,大大提高了SN-38聚合物纳米制剂的包封率和稳定性。本发明具有以下有益效果:
本发明的SN-38聚合物胶束具有很高的载药效率和稳定性,既解决了SN-38的溶解性问题,又能保护药物的内酯环结构,明显提高药物在体内的化学稳定性,更好地发挥抗肿瘤活性。
本发明的SN-38聚合物胶束对多种实体瘤具有高效的杀伤作用,特别是对人源卵巢癌和人源结直肠癌具有更高的肿瘤抑制效率。
本发明的SN-38聚合物胶束粒径较小并且均匀,能有效穿透肿瘤血管,通过EPR效应在肿瘤部位聚集,实现被动靶向作用。
本发明的SN-38聚合物胶束所用原辅料均为FDA批准使用,来源广泛,质量可控;而且SN-38聚合物胶束的制备方法简单,可通过喷雾干燥法结合高压均质实现工业化生产,高效率生产出质量稳定的产品。
附图说明
图1为脂质和两亲性嵌段聚合物PEG-PLA对SN-38聚合物胶束中药物包封率的影响示意图。
图2脂质和两亲性嵌段聚合物PEG-PLA对SN-38聚合物胶束粒径分布的影响示意图。
图3为实施例1制备的SN-38聚合物胶束和对比例1制备的SN-38聚合物胶束以及对比例2制备的SN-38脂质体的XRD图谱。
图4为实施例1制备的SN-38聚合物胶束和对比例1制备的SN-38聚合物胶束以及对比例2制备的SN-38脂质体的DSC图谱。
图5为实施例3制备的含有不同脂质的SN-38聚合物胶束的包封率结果图。
图6为实施例4制备的含有不同脂质和不同分子量的PEG-PLA的SN-38聚合物胶束的包封率结果图。
图7为实施例5制备的SN-38聚合物胶束冻干粉针复溶后的透射电镜图。
图8为含有脂质(与SN-38等质量)的不同带电性的SN-38聚合物胶束冻干粉针在结直肠癌裸鼠模型上的药效测试结果图。
具体实施方式
下面通过具体实施例来进一步说明本发明的技术方案。本领域技术人员应该明了,所述实施例仅是帮助理解本发明,不应视为对本发明的具体限制。
除非另有定义,本发明所使用的所有的技术和科学术语与属于本发明的技术领域的技术人员通常理解的含义相同。本发明的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的,不用于限制本发明。
本发明的术语“包括”和“具有”以及它们任何变形,意图在于覆盖不排他的包含。例如包含了一系列步骤的过程、方法、装置、产品或设备没有限定于已列出的步骤或模块,而是可选地还包括没有列出的步骤,或可选地还包括对于这些过程、方法、产品或设备固有的其它步骤。
在本发明中提及的“多个”是指两个或两个以上。“和/或”,描述关联对象的关联关系,表示可以存在三种关系,例如,A和/或B,可以表示:单独存在A,同时存在A和B,单独存在B这三种情况。字符“/”一般表示前后关联对象是一种“或”的关系。
以下为具体实施例。
以下实施例中的英文简称对应的中文如下:
SN-38:7-乙基-10-羟基喜树碱;
HSPC:氢化大豆卵磷脂;
PEG-PLA:聚乙二醇-聚乳酸嵌段共聚物;
PEG-PCL:聚乙二醇-聚己内酯嵌段共聚物;
PEG-PGA:聚乙二醇-聚乙醇酸嵌段共聚物;
PEG-PLGA:聚乙二醇-聚乙交酯丙交酯嵌段共聚物;
PEG-P(Glu):聚乙二醇-聚谷氨酸嵌段共聚物;
PEG-P(Asp):聚乙二醇-聚天冬氨酸嵌段共聚物;
PEG5k-PLA8k:聚乙二醇-聚乳酸嵌段共聚物,其中聚乙二醇的分子量为5000Da,聚乳酸的分子量为8000Da;
DOTAP:(2,3-二油酰基-丙基)-三甲基氯化铵;
DPPG:二棕榈酰磷脂酰甘油;
EPC:蛋黄卵磷脂;
DSPC:二硬脂酰磷脂酰胆碱;
DPPC:二棕榈酰磷脂酰胆碱;
DMPC:二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱;
DLPC:二月桂酰磷脂酰胆碱;
MSPC:单硬脂酰磷脂酰胆碱;
DOPC:油酰磷脂酰胆碱;
S-LYSO-PC:硬脂酰溶血卵磷脂;
DOPE:二油酰磷脂酰乙醇胺;
DOPG:二油酰磷脂酰甘油;
DDAB:双十二烷基二甲基溴化铵;
CHOL:胆固醇。
实施例1:含有HSPC的SN-38聚合物胶束的制备
称取SN-385mg、HSPC 5mg、PEG5k-PLA8k 5mg或25mg或50mg,置于250ml的圆底烧瓶中,用6ml氯仿/甲醇(9:1,v/v)混合溶剂充分溶解得到澄清的样品溶液后,于25℃条件下减压旋蒸(2mbar)除去有机溶剂,在瓶壁形成SN-38-脂质-聚合物混合薄膜,加入5ml超纯水于40℃水化30分钟,再于冰水浴中超声2min得到含有HSPC的SN-38聚合物胶束溶液,取适量样品溶液于5000rpm离心10分钟,取上清和原液分别利用HPLC测定SN-38的浓度,根据两者比值计算包封率,结果见图1。将上述制备的含有HSPC的SN-38聚合物胶束溶液用动态光散射(DLS)分析粒径分布情况,结果见图2。将上述制备的含有HSPC的SN-38聚合物胶束溶液用液氮冷冻,然后于-20℃过夜冻干,冻干后进行X射线衍射(XRD)和差式扫描量热法(DSC)检测,结果分别见图3和图4。
对比例1未添加脂质的SN-38聚合物胶束的制备
称取SN-385mg、PEG5k-PLA8k 5mg或25mg或50mg,置于250ml的圆底烧瓶中,用6ml氯仿/甲醇(9:1,v/v)混合溶剂充分溶解得到澄清的样品溶液后,于25℃条件下减压旋蒸(2mbar)除去有机溶剂,在瓶壁形成SN-38-聚合物薄膜,加入5ml超纯水于40℃水化30分钟,再于冰水浴中超声2min得到SN-38聚合物胶束溶液,取适量样品溶液于5000rpm离心10分钟,取上清和原液分别利用HPLC测定SN-38的浓度,根据两者比值计算包封率,结果见图1。将上述制备的SN-38聚合物胶束溶液用动态光散射(DLS)分析粒径分布情况,结果见图2。将上述制备的SN-38聚合物胶束溶液用液氮冷冻,然后于-20℃过夜冻干,冻干后进行X射线衍射(XRD)和差式扫描量热法(DSC)检测,结果分别见图3和图4。
对比例2SN-38脂质体的制备
称取SN-385mg、HSPC 5mg或25mg或50mg,置于250ml的圆底烧瓶中,用6ml氯仿/甲醇(9:1,v/v)混合溶剂充分溶解得到澄清的样品溶液后,于25℃条件下减压旋蒸(2mbar)除去有机溶剂,在瓶壁形成SN-38脂质体薄膜,加入5ml超纯水于40℃水化30分钟,再于冰水浴中超声2min得到SN-38脂质体溶液,取适量样品溶液于5000rpm离心10分钟,取上清和原液分别利用HPLC测定SN-38的浓度,根据两者比值计算包封率,结果见图1。将上述制备的SN-38脂质体溶液用动态光散射(DLS)分析粒径分布情况,结果见图2。将上述制备的SN-38聚合物胶束溶液用液氮冷冻,然后于-20℃过夜冻干,冻干后进行X射线衍射(XRD分析)和差式扫描量热法(DSC)检测,结果分别见图3和图4。
由图1可见,当PEG-PLA中未加入脂质时,PEG-PLA对SN-38的负载效率较低,PEG-PLA加入量为SN-38的10倍时包封率仅有25%左右,而当PEG-PLA的量继续下降时,包封率则继续下降。脂质如HSPC的加入可以明显改善PEG-PLA对SN-38的包载效率,当加入与SN-38等重量的脂质时,与未加脂质时相比包封率得到了显著性的增加,特别是当PEG-PLA与药物的重量比为5:1和10:1时包封率接近100%。说明脂质的加入对于提高SN-38在PEG-PLA聚合物纳米粒中的包载效率起到了关键作用。当不加入PEG-PLA,将SN-38与HSPC脂质制备成相应的脂质体,SN-38和HSPC的质量比为1:1~1:10时,SN-38的包封率均较低(<55%),说明单纯的脂质并无法很好地包载SN-38。
由图2可见,未加脂质时,由于SN-38分子间强烈的π-π堆积作用造成了药物聚集体的形成,在粒径分布图中可见有多峰存在,在大于1000nm处有药物聚集体的峰;同样地,仅有脂质作为载体时,粒径大且分布较宽;在PEG-PLA中掺入与SN-38相同质量的脂质后只能检测到包载了SN-38的聚合物胶束的单峰,说明脂质和PEG-PLA同时存在时,SN-38分子间的π-π堆积作用被削弱,使SN-38得到较好的负载。
由图3可见,未加入脂质时,SN-38和PEG-PLA制备的颗粒中仍能检测到药物和高分子的特征结晶峰;只有脂质作为载体时,药物的结晶峰仍能被检测到,说明单纯的脂质也不能将药物很好地包载;脂质和PEG-PLA同时作为载体时,制备的胶束颗粒中药物和高分子的结晶峰明显变弱和宽化,向不定形结构转化,提示脂质可以辅助破坏药物和聚合物的结晶性,使药物与高分子的作用更强,从而更好地包裹在聚合物胶束中。DSC谱图中药物的熔融峰的变化也能在一定程度上反映药物结晶结构的变化情况。由图4可见,游离药物和聚合物的PEG嵌段分别在200℃和55℃左右有明显的熔融峰(Tm);只有PEG-PLA作为载体时制备的胶束颗粒仍能检测到药物和聚合物中PEG的特征熔融峰,且药物的熔融峰向左偏移到130℃左右,可能是聚合物在其中起到了增塑剂的作用,使药物的熔融温度Tm降低;只有脂质作为载体时,脂质和药物的特征熔融峰也仍能被检测到;脂质和PEG-PLA作为共同载体时,制备的胶束颗粒中可以检测到PEG的熔融峰,然而药物的熔融峰消失,说明药物的结晶性发生了变化。
实施例2:脂质含量对SN-38聚合物胶束理化性能的影响
称取SN-385mg、各种类型的脂质(如DOTAP、DPPG、HSPC、EPC、DPPC)0.01~20mg、PEG5k-PLA8k 50mg置于250ml的圆底烧瓶中,用6ml氯仿/甲醇(9:1,v/v)混合溶剂充分溶解得到澄清的样品溶液后,于25℃条件下减压(2mbar)旋蒸除去有机溶剂,在瓶壁形成SN-38-脂质-聚合物混合薄膜,加入5ml超纯水于40℃水化30分钟,再于冰水浴中超声2min得到SN-38聚合物胶束溶液,取适量样品溶液于5000rpm离心10分钟,取上清和原液分别利用HPLC测定SN-38的浓度,根据两者比值计算测定包封率,结果见表1-5。将上述制备的含有各种脂质的SN-38聚合物胶束溶液用动态光散射(DLS)测定粒径、粒径的多分散系数(PDI)和电位,结果见表1-5。
表1 DOTAP添加量对载有SN-38的聚合物胶束的理化性质的影响
表2 DPPG添加量对载有SN-38的聚合物胶束的理化性质的影响
表3 HSPC添加量对载有SN-38的聚合物胶束的理化性质的影响
表4 EPC添加量对载有SN-38的聚合物胶束的理化性质的影响
表5 DPPC添加量对载有SN-38的聚合物胶束的理化性质的影响
由表1-5可见,脂质的添加量对载有SN-38的聚合物胶束的粒径、电位和包封率等影响较大,且不同脂质提高SN-38在PEG-PLA胶束中的载药效率和对粒径的影响不同,阳离子脂质DOTAP和阴离子脂质DPPG较中性脂质HSPC的作用更强,DOTAP添加量仅为SN-38的5%时包封率为90%以上,DPPG添加量为SN-38的10%时包封率也可达到90%以上,且粒径基本都在120nm以内,PDI小于0.2;而含有饱和长碳链的中性脂质HSPC在添加量为SN-38的50%以上时包封率才可达到90%以上,且粒径均大于120nm。随着添加量的提高,含有DOTAP的SN-38聚合物胶束的粒径逐渐变小(PDI<0.2),电位基本呈上升的趋势,包封率均在95%以上,而含有DPPG的SN-38聚合物胶束的粒径先变小后增大,包封率则先增大后减小,但均保持在90%以上;此外,中性脂质的脂肪碳链的长度对SN-38的包封率和聚合物胶束的粒径也有影响,从结果可以看出,碳链较短的DPPC提高SN-38包封率的效果明显弱于长碳链的HSPC,随着添加量的增大,包封率普遍较低,仅在与SN-38等量时包封率达到85%以上,且粒径均偏大(>140nm),可能是由于脂质的脂肪链较短时与SN-38和PLA的疏水作用较弱,结构更为松散,因此包载效果较差。中性脂质的碳链饱和度对SN-38的包载效果也有影响,含有不饱和长碳链的EPC的载药效果也弱于HSPC,加入量与SN-38等量及以上时才能使SN-38包封率提高到90%以上。以上结果说明脂质的类型对于提高SN-38的包载效率不同,带电性的脂质(如阳离子脂质、PG类脂质)和含有16碳以上饱和长碳链的磷脂酰胆碱(PC)类脂质在较低含量下即能较好地增强PEG-PLA胶束对SN-38的负载效果。
实施例3:脂质类型和聚合物含量对SN-38聚合物胶束包封率的影响
称取SN-38 5mg、各种类型的脂质(如DOTAP、DDAB、DOPG、DPPG、DSPC、HSPC、DPPC、DMPC、DLPC、MSPC、DOPC、EPC、DOPE、CHOL)5mg、PEG5k-PLA8k 12.5mg或25mg或50mg置于250ml的圆底烧瓶中,用6ml氯仿/甲醇(9:1,v/v)混合溶剂充分溶解得到澄清的样品溶液后,于25℃条件下减压(2mbar)旋蒸除去有机溶剂,在瓶壁形成SN-38-脂质-聚合物混合薄膜,加入5ml超纯水于40℃水化30分钟,再于冰水浴中超声2min得到SN-38聚合物胶束溶液,取适量样品溶液于5000rpm离心10分钟,取上清和原液分别利用HPLC测定SN-38的浓度,根据两者比值计算测定包封率,结果见图5。
由图5可见,在不同的PEG-PLA含量下,不同脂质对于提高SN-38的载药效率有一定的差别。总体来看,阳离子脂质DOTAP和中性脂质HSPC对于提高SN-38包封率的效果最佳,在较低的PEG-PLA含量下(SN-38/脂质/聚合物(w/w/w)=1-1-2.5)即可将SN-38的包封率提高到85%以上;对于阳离子脂质来说,不饱和碳链(DOTAP)优于饱和碳链(DDAB);对于阴离子脂质来说,不饱和碳链(DOPG)优于饱和碳链(DPPG);对于中性脂质,饱和碳链(HSPC)优于不饱和碳链(DOPC、EYL),含有14碳以上饱和长碳链的磷脂酰胆碱(DSPC、HSPC、DPPC、DMPC)优于短链的磷脂酰胆碱(DLPC),含有双碳链的脂质(HSPC)对于提高SN-38的包封率的作用明显强于单碳链的脂质(MSPC)。此外,脂质为胆固醇(CHOL)时基本无法把SN-38包埋,包封率极低(<0.1%)。
实施例4:聚合物分子量对SN-38聚合物胶束包封率的影响
称取SN-38 5mg、各种类型的脂质(DOTAP、DOPG和HSPC)5mg、不同分子量的PEG-PLA(PEG2k-PLA1.9k、PEG5k-PLA5k和PEG5k-PLA8k)25mg置于250ml的圆底烧瓶中,用6ml氯仿/甲醇(9:1,v/v)混合溶剂充分溶解得到澄清的样品溶液后,于25℃条件下减压(2mbar)旋蒸除去有机溶剂,在瓶壁形成SN-38-脂质-聚合物混合薄膜,加入5ml超纯水于40℃水化30分钟,再于冰水浴中超声2min得到SN-38聚合物胶束溶液,取适量样品溶液于5000rpm离心10分钟,取上清和原液分别利用HPLC测定SN-38的浓度,根据两者比值计算测定包封率,结果见图6。
由图6可见,不同脂质对于提高SN-38包封率的效果在一定程度上受PEG-PLA分子量的影响,分子量最高的PEG5k-PLA8k在各种脂质存在下对SN-38的包封率均较高,特别是DOTAP和HSPC存在下包封率>90%;PEG2k-PLA1.9k和PEG5k-PLA5k在脂质作用下也能有效包载SN-38,但是相比PEG5k-PLA8K的作用稍弱。
实施例5:含有脂质的SN-38聚合物胶束冻干粉针的制备
称取SN-385mg、脂质(DOTAP、DPPG、HSPC)5mg、两亲性嵌段聚合物(PEG-PLA、PEG-PLGA、PEG-PCL、PEG-PGA、PEG-P(Glu)、PEG-P(Asp)等)50mg置于250ml的圆底烧瓶中,用6ml氯仿/甲醇(9:1,v/v)混合溶剂充分溶解得到澄清的样品溶液后,于25℃条件下减压(2mbar)旋蒸除去有机溶剂,在瓶壁形成SN-38-脂质-聚合物混合薄膜,加入5ml含10wt%蔗糖的水溶液于40℃水化30分钟,再于冰水浴中超声2min得到含有脂质的SN-38聚合物胶束溶液,将其分装于西林瓶中,于-45℃预冻4小时,-10~-45℃冷冻干燥72小时,即得。
将含有DOTAP的PEG5k-PLA8k聚合物胶束冷冻干燥后的冻干粉剂加超纯水复溶,利用透射电镜观察表面形貌,结果见图7。由结果可见,含有DOTAP的SN-38聚合物胶束(SN-38@LPNPDOTAP)颗粒大小均匀,大部分呈现球形,颗粒尺寸为40-50nm左右。
实施例6:喷雾干燥法制备含有脂质的SN-38聚合物胶束
称取SN-3840mg、DPPG 40mg、PEG5k-PLA8k 400mg置于250ml的圆底烧瓶中,用50ml氯仿/甲醇(9:1,v/v)混合溶剂充分溶解得到澄清的样品溶液后,经喷雾干燥(入口温度80℃)得到白色粉末,加入40ml超纯水于40℃水化30分钟,再经1000bar高压均质得到SN-38聚合物胶束溶液。
实施例7:含有脂质的SN-38聚合物胶束冻干粉针的稳定性
取实施例5的冻干粉于4℃放置3个月后,于0、1、3个月取样,将冻干粉用适量超纯水复溶,取适量样品溶液于5000rpm离心10分钟,取上清和原液分别利用HPLC测定SN-38的浓度,根据两者比值计算测定药物含量和包封率的变化情况,结果见表6。取适量复溶后的SN-38聚合物胶束溶液利用动态光散射(DLS)分析粒径、粒径的多分散系数(PDI)、和电位的变化情况,根据以上指标,评价含有脂质的SN-38聚合物胶束冻干粉针的稳定性,结果见表6。
表6 含有脂质的SN-38聚合物胶束冻干粉针的稳定性
表6所示的稳定性结果表明本发明的含有脂质的SN-38聚合物胶束冻干粉针在放置3个月后,粒径、电位、包封率均没有显著性的变化,表明其具有较好的稳定性,有利于临床开发应用。
实施例8:含有脂质的SN-38聚合物胶束冻干粉针复溶后室温放置的稳定性
取实施例5中的含有脂质的SN-38聚合物胶束冻干粉用适量超纯水复溶,然后在室温放置一段时间后,取适量样品溶液于5000rpm离心10分钟,取上清和原液分别利用HPLC测定SN-38的浓度,根据两者比值计算测定药物含量和包封率的变化情况,结果见表7。取适量SN-38聚合物胶束溶液利用动态光散射(DLS)分析粒径、粒径的多分散系数(PDI)、和电位的变化情况,根据以上指标,评价含有脂质的SN-38聚合物胶束冻干粉针复溶后的稳定性,结果见表8。
表7 含有脂质的SN-38聚合物胶束冻干粉针复溶后的稳定性
冻干粉复溶后室温放置3天的稳定性结果表明,含有脂质的SN-38聚合物胶束冻干粉复溶后粒径、电位、包封率和药物含量均没有显著性的变化,说明该制剂稳定性较好。
实施例9:SN-38聚合物胶束的体外药效研究
利用实施例2中所制备的含有脂质的SN-38聚合物胶束(SN-38@LPNPDOTAP、SN-38@LPNPDPPG和SN-38@LPNPEPC),SN-38/脂质/PEG-PLA=1:1:10(w/w/w),以原药和伊立替康作为对照,与多种肿瘤细胞系(人结直肠癌细胞HT-29和HCT-116、人卵巢癌细胞SKOV3、人胰腺癌细胞BxPC3、人乳腺癌细胞MCF7、人非小细胞肺癌A549)共同孵育72h后,利用MTT法检测其体外抑制肿瘤的作用,结果见表8。
表8 含有脂质的SN-38聚合物胶束与各种人源性肿瘤细胞作用72h后的IC50值
表8结果表明:本发明制备的含有脂质的SN-38聚合物胶束在细胞水平抑制肿瘤增殖的IC50值显著低于伊立替康,其抑制肿瘤的活性与SN-38游离药物相当,具有较强的抗肿瘤活性。
实施例10:含有脂质的SN-38聚合物胶束体内药效研究
Balb/c裸鼠(6周龄,购自广东省实验动物中心)适应环境7天,将对数生长期的HCT-116细胞消化后制成1.6×107/ml细胞悬液,取0.1ml与基质胶混合后在裸鼠右前肢皮下注射建立荷瘤模型。待小鼠肿瘤平均体积为50-100mm3左右时,将其随机分成8组,每组10只。每4天尾静脉注射给药1次,连续给药3次。实验分组为CPT-11组(注射剂量为40mg/kg),SN-38@LPNPs组(包括按实施例5的制备方法制备的3种不同带电性的含有脂质的SN-38聚合物胶束冻干粉针:正电性的SN-38@LPNPDOTAP、负电性的SN-38@LPNPDPPG、中性的SN-38@LPNPHSPC,其中,SN-38、脂质和聚合物的质量比为1:1:10,给药剂量以SN-38计为15mg/kg和25mg/kg)和生理盐水组(对照组)。用卡尺测量各裸鼠的长径(a)和短径(b),按照公式肿瘤体积(V)=(a×b2)/2计算肿瘤体积。
由图8可见,SN-38@LPNPs组及CPT-11组对裸鼠结直肠癌均有较好的抑制作用,各剂量组肿瘤体积与生理盐水组相比均有显著下降,且所有与CPT-11等摩尔剂量的SN-38@LPNPs(25mg/kg)均较CPT-11注射液组(40mg/kg)有更好的抑瘤效果(P<0.05);在更低剂量(15mg/kg)下,SN-38@LPNPs组在开始给药后两个星期内与CPT-11注射液组(40mg/kg)相比也具有更好的抑瘤效果,但随着观察时间的延长,电中性的SN-38@LPNPs组(SN-38@LPNPHSPC)与CPT-11组的小鼠肿瘤生长较快,而带电性的SN-38@LPNPs组(SN-38@LPNPDPPG和SN-38@LPNPDOTAP)具有更好的肿瘤抑制效果(P<0.05),可能是由于带电性的SN-38聚合物胶束制剂组在体内滞留时间更长,从而使SN-38能够更多地在肿瘤组织中聚集。
以上所述实施例的各技术特征可以进行任意的组合,为使描述简洁,未对上述实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述,然而,只要这些技术特征的组合不存在矛盾,都应当认为是本说明书记载的范围。
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式,其描述较为具体和详细,但并不能因此而理解为对发明专利范围的限制。应当指出的是,对于本领域的普通技术人员来说,在不脱离本发明构思的前提下,还可以做出若干变形和改进,这些都属于本发明的保护范围。因此,本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。
Claims (24)
1.一种含有脂质的SN-38聚合物胶束,其特征在于,由SN-38、脂质和两亲性嵌段共聚物制备得到,所述SN-38和两亲性嵌段共聚物的质量比为1:4-11,所述SN-38和脂质的质量比为1:0.05-5;
所述脂质选自:磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰甘油、天然卵磷脂和阳离子脂质中的至少一种;
所述磷脂酰胆碱选自氢化大豆卵磷脂、二硬脂酰磷脂酰胆碱、单硬脂酰磷脂酰胆碱、二棕榈酰磷脂酰胆碱、二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱和二油酰磷脂酰胆碱中的至少一种;所述磷脂酰乙醇胺为二油酰磷脂酰乙醇胺;所述磷脂酰甘油为二油酰磷脂酰甘油和/或二棕榈酰磷脂酰甘油;所述天然卵磷脂为蛋黄卵磷脂;所述阳离子脂质为(2,3-二油酰基-丙基)-三甲基氯化铵和/或双十二烷基二甲基溴化铵;
所述两亲性嵌段共聚物的亲水链段为聚乙二醇,所述两亲性嵌段共聚物的疏水链段为聚乳酸;
所述两亲性嵌段共聚物的亲水链段的分子量为1000~10000 Da;所述两亲性嵌段共聚物的疏水链段的分子量为1000~20000 Da。
2.根据权利要求1所述的含有脂质的SN-38聚合物胶束,其特征在于,所述SN-38和两亲性嵌段共聚物的质量比为1:9-11。
3.根据权利要求1所述的含有脂质的SN-38聚合物胶束,其特征在于,所述脂质为(2,3-二油酰基-丙基)-三甲基氯化铵,所述SN-38和脂质的质量比为1:0.05-5;或者,
所述脂质为二棕榈酰磷脂酰甘油,所述SN-38和脂质的质量比1:0.08-5;或者,
所述脂质为氢化大豆卵磷脂,所述SN-38和脂质的质量比为1:0.4-5;或者,
所述脂质为蛋黄卵磷脂,所述SN-38和脂质的质量比1:0.5-5;或者,
所述脂质为二棕榈酰磷脂酰胆碱,所述SN-38和脂质的质量比1:0.2-5;或者,
所述脂质选自二油酰磷脂酰胆碱、二硬脂酰磷脂酰胆碱、二油酰磷脂酰乙醇胺、二油酰磷脂酰甘油、双十二烷基二甲基溴化铵、二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱和单硬脂酰磷脂酰胆碱中的至少一种,所述SN-38和脂质的质量比为1:0.8-4.2。
4.根据权利要求3所述的含有脂质的SN-38聚合物胶束,其特征在于,所述脂质为(2,3-二油酰基-丙基)-三甲基氯化铵,所述SN-38和脂质的质量比为1:0.2-4.2;或者,
所述脂质为二棕榈酰磷脂酰甘油,所述SN-38和脂质的质量比为1:0.08-2.2或者,
所述脂质为氢化大豆卵磷脂,所述SN-38和脂质的质量比为1:0.4-2.2;或者,
所述脂质为蛋黄卵磷脂,所述SN-38和脂质的质量比为1:0.8-4.2;或者,
所述脂质为二棕榈酰磷脂酰胆碱,所述SN-38和脂质的质量比为1:0.8-2.2;或者,
所述脂质选自二油酰磷脂酰胆碱、二硬脂酰磷脂酰胆碱、二油酰磷脂酰乙醇胺、二油酰磷脂酰甘油、双十二烷基二甲基溴化铵、二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱和单硬脂酰磷脂酰胆碱中的至少一种,所述SN-38和脂质的质量比为1:0.8-2.2。
5.根据权利要求4所述的含有脂质的SN-38聚合物胶束,其特征在于,
所述脂质为二棕榈酰磷脂酰甘油,所述SN-38和脂质的质量比为1:0.1-0.6;或者,
所述脂质为氢化大豆卵磷脂,所述SN-38和脂质的质量比为1:0.8-1.2;或者,
所述脂质选自二油酰磷脂酰胆碱、二硬脂酰磷脂酰胆碱、二油酰磷脂酰乙醇胺、二油酰磷脂酰甘油、双十二烷基二甲基溴化铵、二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱和单硬脂酰磷脂酰胆碱中的至少一种,所述SN-38和脂质的质量比为1:0.8-1.2。
6.根据权利要求1-5任一项所述的含有脂质的SN-38聚合物胶束,其特征在于,所述含有脂质的SN-38聚合物胶束的Z均平均粒径为20~300 nm;粒径的多分散系数小于0.3。
7.根据权利要求6所述的含有脂质的SN-38聚合物胶束,其特征在于,所述含有脂质的SN-38聚合物胶束的Z均平均粒径为50~180 nm。
8.根据权利要求7所述的含有脂质的SN-38聚合物胶束,其特征在于,所述含有脂质的SN-38聚合物胶束的Z均平均粒径为80~150 nm。
9.根据权利要求6所述的含有脂质的SN-38聚合物胶束,其特征在于,粒径的多分散系数小于0.2。
10.一种权利要求1-9任一项所述的含有脂质的SN-38聚合物胶束的制备方法,其特征在于,包括如下步骤:
(1)将所述SN-38、脂质和两亲性嵌段共聚物用有机溶剂溶解,得到混合溶液,除去所得混合溶液中的有机溶剂;
(2)往步骤(1)中得到的干燥样品中加入水进行水化,再经超声或高压均质后得到纳米颗粒溶液,所述纳米颗粒即为所述含有脂质的SN-38聚合物胶束。
11.根据权利要求10所述的含有脂质的SN-38聚合物胶束的制备方法,其特征在于,还包括如下步骤:将所述纳米颗粒溶液冷冻干燥。
12.根据权利要求10或11所述的含有脂质的SN-38聚合物胶束的制备方法,其特征在于,所述SN-38和所述有机溶剂的配比为1 mg:0.4-2.2 ml;和/或,
所述SN-38和步骤(2)中所述水的配比为1 mg:0.15-5.5 ml ;和/或,
所述有机溶剂选自氯仿、甲醇、二氯甲烷、乙醇和丙酮中的一种或几种;和/或,
所述除去所得混合溶液中的有机溶剂的方法为减压干燥或喷雾干燥;和/或,
所述水化的温度为10~80℃,所述水化的时间为10 s~60 min;和/或,
所述超声的时间为0 s~30 min,所述高压均质的压力为600~1500 bar。
13.根据权利要求12所述的含有脂质的SN-38聚合物胶束的制备方法,其特征在于,所述有机溶剂为氯仿和甲醇的混合溶剂,氯仿和甲醇的体积比为2-12:1;和/或,
所述减压干燥的温度为20~40 oC,压力为0~200 mbar,所述喷雾干燥的入口温度为50~100℃;和/或,
所述水化的温度25~60 ℃,所述水化的时间为10~30 min;和/或,
所述超声的时间为30 s~5 min,所述高压均质的压力为800~1200 bar。
14.权利要求1-9任一项所述的含有脂质的SN-38聚合物胶束在制备防治肿瘤的药物中的应用。
15.根据权利要求14所述的应用,其特征在于,所述肿瘤为结直肠癌、卵巢癌、胰腺癌、乳腺癌、非小细胞肺癌。
16.一种防治肿瘤的药物,其特征在于,由权利要求1-9任一项所述的含有脂质的SN-38聚合物胶束和药学上可接受的辅料制备而成。
17.根据权利要求16所述的防治肿瘤的药物,其特征在于,所述防治肿瘤的药物的剂型为注射液、冻干粉剂、肠溶片剂、颗粒剂、胶囊剂、丸剂、滴丸剂、糖浆剂、散剂。
18.一种含有脂质的SN-38聚合物胶束的冻干粉剂,其特征在于,由权利要求1-5任一项所述的含有脂质的SN-38聚合物胶束的制备原料和冻干保护剂制备得到。
19.根据权利要求18所述的含有脂质的SN-38聚合物胶束的冻干粉剂,其特征在于,所述冻干保护剂选自蔗糖、乳糖、海藻糖、甘露醇、麦芽糖、葡萄糖和白蛋白中的一种或多种。
20.根据权利要求19所述的含有脂质的SN-38聚合物胶束的冻干粉剂,其特征在于,所述冻干保护剂的用量按所述两亲性嵌段共聚物的重量比计算,1重量份的两亲性嵌段共聚物加1~52重量份的冻干保护剂。
21.根据权利要求20所述的含有脂质的SN-38聚合物胶束的冻干粉剂,其特征在于,所述冻干保护剂的用量按所述两亲性嵌段共聚物的重量比计算,1重量份的两亲性嵌段共聚物加4~22重量份的冻干保护剂。
22.一种权利要求18-21任一项所述的含有脂质的SN-38聚合物胶束的冻干粉剂的制备方法,其特征在于,包括如下步骤:
(1)将所述SN-38、脂质和两亲性嵌段共聚物用有机溶剂溶解,得到混合溶液,除去所得混合溶液中的有机溶剂;
(2)往步骤(1)中得到的干燥样品中加入含有所述冻干保护剂的水溶液进行水化,再经超声或高压均质后得到纳米颗粒溶液,将其分装于西林瓶中,冷冻干燥,即得。
23.根据权利要求22所述的含有脂质的SN-38聚合物胶束的冻干粉剂的制备方法,其特征在于,所述SN-38和所述有机溶剂的配比为1 mg:0.4-2.2 ml;和/或,
所述SN-38和步骤(2)中所述水溶液的配比为1 mg:0.15-5.5 ml;和/或,
所述有机溶剂选自氯仿、甲醇、二氯甲烷、乙醇和丙酮中的一种或几种;和/或,
所述除去所得混合溶液中的有机溶剂的方法为减压干燥或喷雾干燥;
所述水化的温度为10~80 ℃,所述水化的时间为10 s~60 min;和/或,
所述超声的时间为0 s~30 min,所述高压均质的压力为600~1500 bar;和/或,
所述冷冻干燥的条件包括:预冻温度为-80~-20 oC,预冻时间为2~24 h;冻干温度为-60~-5 oC,冻干时间为24-96 h。
24.根据权利要求23所述的含有脂质的SN-38聚合物胶束的冻干粉剂的制备方法,其特征在于,所述有机溶剂为氯仿和甲醇的混合溶剂,氯仿和甲醇的体积比为2-12:1;和/或,
所述减压干燥的温度为20~40 oC,压力为0~200 mbar,所述喷雾干燥的入口温度为50~100℃;和/或,
所述水化的温度25~60 ℃,所述水化的时间为10~30 min;和/或,
所述超声的时间为30 s~5 min,所述高压均质的压力为800~1200 bar;和/或,
所述冷冻干燥的条件包括:预冻温度为-40~-60 oC,预冻时间为4~8 h;冻干温度为-45~-10 oC,冻干时间为68-76 h。
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