CN105497871A - 一种卡非佐米药物的脂质体冻干组合物及其制备方法 - Google Patents
一种卡非佐米药物的脂质体冻干组合物及其制备方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN105497871A CN105497871A CN201410497889.9A CN201410497889A CN105497871A CN 105497871 A CN105497871 A CN 105497871A CN 201410497889 A CN201410497889 A CN 201410497889A CN 105497871 A CN105497871 A CN 105497871A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- liposome
- lyophilized composition
- feizuo meter
- keep
- parts
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Landscapes
- Medicinal Preparation (AREA)
Abstract
本发明属于药物合成技术领域，具体涉及一种卡非佐米药物的脂质体冻干组合物及其制备方法。本发明的卡非佐米药物的脂质体冻干组合物，其按重量份计算，包括以下组分：卡非佐米，5～20份；抗氧化剂，0.1～1份；pH值调节剂，1～5份；磷脂类，40～100份；胆固醇，5～20份；冻干保护剂，5～25份。本发明的制备方法包括步骤：1)制备多室脂质体混悬液；2)制备单室脂质体；3)制备卡非佐米脂质体冻干粉。本发明得到的卡非佐米脂质体冻干组合物在冻干前后pH值和粒径变化均稳定、包封率保持稳定，冻干后水复溶性较好，水复溶后的粒径均匀，颗粒呈球形或类球形，外观圆整均匀。
Description
技术领域
本发明涉及药物合成技术领域，具体涉及一种卡非佐米药物的脂质体冻干组合物及其制备方法。
背景技术
多发性骨髓瘤是发生在血浆细胞中的血癌，它通常生长在骨髓、大多数的骨骼海绵软组织内，血细胞由骨髓生产。根据美国癌症协会预测，2012年将有21700人被诊断出患有多发性骨髓瘤，10710将死于这种疾病。
美国食品和药物管理局7月20日批准Kyprolis(卡非佐米，又称Carfilzomib)用于此前至少经过两个优先疗法包括万珂(硼替佐米)和免疫调节剂治疗的多发性骨髓瘤患者的治疗。通过对266例事先接受了硼替佐米和沙利度胺治疗的多发性骨髓瘤复发患者进行的临床研究，对Kyprolis的安全性和有效性进行了评估。在超过30％的参加研究者中观察到的最常见副作用有疲劳、低血细胞计数和血小板水平、气短、腹泻、发烧。观察到的与Kyprolis有关的严重副作用包括心脏衰竭和呼吸急促。
卡非佐米化学名称为：
N-{(2S)-2-[(morpholin-4-ylacetyl)amino]-4-phenylbutanoyl}-L-leucyl-N-{(2S)-4-methyl-1-[(2R)-2-methyloxiran-2-yl]-1-oxopentan-2-yl}-L-phenylalaninamide，分子式：C40H57N5O7，分子量：719.9，结构式如下：
卡非佐米是一种四肽基环氧骨架蛋白酶体抑制剂不可逆地结合至20S蛋白酶体含苏氨酸N-端活性部位，蛋白水解的核心颗粒26S蛋白酶体。Carfilzomib在体外实体瘤和血液系统肿瘤细胞有抗增殖和诱导凋亡活性。在动物中，carfilzomib抑制在血液和组织中蛋白酶体活性并在多发性骨髓瘤、血液和实体瘤模型中延迟肿瘤生长。
卡非佐米几乎不溶于水，极微溶于酸性条件，不易做成液体制剂长期存放，大大的限制了在临床中的应用，冻干制剂是较理想的剂型。目前上市的Kyprolis是由60mg卡非佐米、3000mg磺丁基醚-β-环糊精和57.7mg柠檬酸组成的无菌注射粉针剂，虽然磺丁基醚-β-环糊精形成的包合物在一定程度上提高了药物的溶解性，但药物在溶液中非常不稳定，在室温(15-30℃)最多只能稳定4小时，这就要求最好在低温下输液，而现实条件不能完全保证药品的安全性。另外，由于该处方包括磺丁基-β-环糊精，对于长期连续用药的患者来说，由于大量的磺丁基-β-环糊精进入人体血液，存在安全性隐患。该无菌注射粉针剂的pH值为3.5，先用29ml无菌注射用水溶解，取给药剂量再用50ml5％葡萄糖注射液稀释后2至10分钟完成静脉输液，由于输液的pH值偏低，输液速度偏快，不仅给患者带来刺激疼痛感，更会引起血管痉挛和静脉炎。因此需要一种新型卡非佐米药物。
发明内容
为了解决以上问题，本发明引入了脂质体技术，脂质体是由磷脂和胆固醇构成的具有双分子层的微型泡囊体，药物可包封于类脂质双分子层内，具有增加药物溶解性、降低药物毒性、提高药物稳定性、提高药物靶向性和生物利用度等优点。
本发明的目的在于提供一种卡非佐米药物的脂质体冻干组合物及其制备方法，将药物包裹于脂质体并冷冻干燥，得到的卡非佐米脂质体冻干组合物在冻干前后pH值和粒径变化均稳定、包封率保持稳定，在88％以上，冻干后水复溶性较好，水复溶后的粒径均匀，冻干前后粒径均在100～300nm范围内，呈球形或类球形，外观圆整均匀，用5％葡萄糖溶液稀释后稳定性和安全性更好
具体而言，本发明提供的一种卡非佐米药物的脂质体冻干组合物，其特征在于按重量份计算，包括以下组分：
卡非佐米，5～20份，优选5～15，更优选5～10份；
抗氧化剂，0.1～1份，优选0.1～0.8份，更优选0.1～0.5份；
pH值调节剂，1～5份，优选1～4份，更优选1～3份；
磷脂类，40～100份，优选50～80份，更优选50～60份；
胆固醇，5～20份，优选5～15份，更优选5～10份；
冻干保护剂，5～25份，优选5～20份，更优选10～15份。
所述组合物还包括有机溶剂和缓冲溶液。所述有机溶剂为氯仿或无水乙醚；所述缓冲溶液为磷酸盐缓冲液。
所述磷脂类选自高纯度蛋黄卵磷脂、高纯度氢化蛋黄卵磷脂、高纯度氢化大豆卵磷脂(HSPC)、1，2-二油酰基卵磷脂(DOPC)、二棕榈酸磷脂酰胆碱(DPPC)、二硬脂酰磷脂酰胆碱(DSPC)、二癸酰基卵磷脂(DDPC)、二月桂酰基卵磷脂(DLPC)、二肉豆蔻酰基卵磷脂(DMPC)、1-肉豆蔻酰基-2-棕榈酰基卵磷脂(MPPC)、1-肉豆蔻酰基-2-硬脂酰基卵磷脂(MSPC)中的一种或几种；优先的选自高纯度蛋黄卵磷脂、高纯度氢化蛋黄卵磷脂、二硬脂酰磷脂酰胆碱(DSPC)、二肉豆蔻酰基卵磷脂(DMPC)、1-肉豆蔻酰基-2-硬脂酰基卵磷脂(MSPC)中的一种或几种；最优先的选自高纯度氢化蛋黄卵磷脂和)和二硬脂酰磷脂酰胆碱(DSPC)中的一种或两种。
此外，在本发明的组合物中，磷脂的纯度直接影响脂质体的稳定性，不同磷脂水合后会产生不同形态，胆碱磷脂最易形成脂质体，而溶血磷脂、乙醇胺磷脂等易形成胶束及锥形分子，磷脂中非胆碱磷脂的含量过高，会使脂质体膜不稳定及出现脂质体、胶束等多相混合物。因此为了提高药物的包封率和脂质体的稳定性，上述磷脂类的纯度均在98％以上，本申请所述的高纯度指纯度在98％以上。
脂溶性药物主要分散到脂质体膜上，药物的比例越高，则包封率会较高，但同时载药量会降低。为了达到较高的包封率和合适的载药量，本发明选择卡非佐米与所述脂质体的重量之比为1:2～1:20，脂质体重量包括磷脂类、胆固醇和抗氧化剂。
磷脂化学性质活泼，常温下暴露在空气中容易被氧化变质，加入一定比例的胆固醇溶液能起到稳定脂质体化学性质，改善脂质体分子结构，使脂质体被氧化速率显著降低，同时起到改善脂质体膜的通透性及流动性，但当胆固醇比例过大时，组成的脂质体的磷脂的量太少，一方面脂质体微囊膜形成困难，另一方面所形成的脂质体膜也会变的不牢固，过高胆固醇使得脂质体膜亲水性太强，膜容易破坏，包含物将容易渗漏出来，同时脂质体的粒径会随胆固醇的含量增加而先增加后减小，为了解决以上问题，本发明选择磷脂类与胆固醇的重量之比为2:1～20:1。
所述抗氧化剂选自维生素E和维生素C中的一种或两种。脂质体在制备过程中容易氧化，加入一定的抗氧化剂对脂质体起到保护的作用，提高脂质体的稳定性，提高了包封率，相应的减少了渗透率。
所述的pH调节剂选自柠檬酸、醋酸、盐酸、稀盐酸或氢氧化钠中的一种或几种，优先的选自柠檬酸或氢氧化钠。
所述冻干保护剂选自乳糖、甘露醇、山梨醇、海藻糖、蔗糖和葡聚糖的两种或两种以上，优选海藻糖和乳糖的混合物。脂质体混悬液冻干前后粒径很难把握，冻干复溶性差，粒径很容易变大，外观容易塌陷，为了保证脂质体冻干后具有好的复溶性，粒径与冻干前变化不大，外观成疏松块状或粉末状，本发明采用至少两种冻干保护剂，包裹药物的脂质体(包括药物、脂质类、胆固醇和抗氧化剂)的重量是冻干保护剂的2～28.2倍。
本发明还提供了一种制备所述的卡非佐米药物的脂质体冻干组合物的方法，其特征在于包括以下步骤：
1)制备多室脂质体混悬液
按薄膜分散法将药物包裹于脂质体形成薄膜，倒入水相(如缓冲溶液)，振摇后形成O/W乳状多室脂质体混悬液；
2)制备单室脂质体
将步骤1)制备的多室脂质体混悬液经过高压均质法或通过细胞粉碎机制备成粒径100～300nm的单室脂质体，用pH调节剂将pH值调为3.0～6.5，优选3.8～6.5，最优选4.0～5.0；
3)制备卡非佐米脂质体冻干粉
将步骤2)制备的单室脂质体加入冻干保护剂，冷冻干燥制成卡非佐米脂质体冻干粉。
其中步骤1)薄膜形成如下：
首先通过在30～45℃的温度下用旋转蒸发器减压旋蒸除净有机溶剂，用氮气吹干或继续负压旋蒸10分钟以确保有机溶剂除尽。
其中步骤2)中，高压均质的控制参数为温度5～35℃，压力20～80MPa，循环次数为5～15次；细胞粉碎机的控制参数为温度5～35℃，功率100～400W，超声时间为1～10分钟。
其中步骤3)中，冻干保护剂以溶于磷酸盐缓冲液的形式加入。
此外，冻干工艺直接影响脂质体冻干品的质量好坏，不适合的冻干工艺使得出的样品外观容易塌陷、不规则，复溶性差，粒径大，为了得出最佳的脂质体冻干样品，本发明的步骤3)采用以下冻干工艺：
第一阶段，快速降温预冻，90分钟内从20℃降至-45℃，-45℃保持5h；
第二阶段，逐级升温干燥，-25℃保持6h，-10℃保持6h，-3℃保持10h；
第三阶段，10℃保持2h，25℃保持6h。
具体而言，本发明提供的一种卡非佐米药物的脂质体冻干组合物的制备方法如下：
称取磷脂类和胆固醇于梨形瓶中，加适量氯仿或无水乙醚溶解完全，加入卡非佐米原料粉末溶解完全，在30～45℃的温度下用旋转蒸发器减压旋蒸除净有机溶剂，在瓶内壁形成一层均匀的薄膜后，用氮气吹干或继续负压旋蒸10分钟以确保有机溶剂除尽，加入含有抗氧化剂的磷酸盐缓冲溶液(pH6.8)，摇匀，静置20分钟，于55～80℃水浴振摇1～2小时洗膜，直至薄膜完全水化得到O/W乳状多室脂质体混悬液，用pH调节剂将乳液混悬液pH值调为3.0～6.5，置于高压均质机中均质或细胞粉碎机中超声，控制粒径在100～300nm，得到小单室脂质体，加入溶于磷酸盐缓冲液的冻干保护剂，振摇10～40分钟溶解完全，分装于小瓶，冷冻干燥制成卡非佐米脂质体冻干粉。高压均质的控制参数为温度5～35℃，压力20～80MPa，循环次数为5～15次；细胞粉碎机的控制参数为温度5～35℃，功率100～400W，超声时间为1～10分钟。
本发明引入了脂质体技术，提供了一种卡非佐米药物的脂质体冻干组合物及其制备方法，将药物包裹于脂质体并冷冻干燥，得到的卡非佐米脂质体冻干组合物在冻干前后pH值和粒径变化均稳定、包封率保持稳定，在88％以上，冻干后水复溶性较好，水复溶后的粒径均匀，冻干前后粒径均在100～300nm范围内，颗粒呈球形或类球形，外观圆整均匀，用5％葡萄糖溶液稀释后稳定性和安全性更好。
具体实施方式
下面通过实施例对本发明作进一步的详细说明，旨在用于说明本发明而非限定本发明。应当指出，对于本领域技术人员而言，在不脱离本发明原理的前提下，还可以对本发明进行若干改进和修饰，这些改进和修饰也同样落入本发明的保护范围之内。
实施例一(药物30-100mg)1000个剂量单位
1.处方
| 卡非佐米 | 60g |
| 维生素E | 2.25g |
| 柠檬酸 | 15g |
| 高纯度氢化蛋黄卵磷脂 | 375g |
| 胆固醇 | 60g |
| 海藻糖 | 45g |
| 乳糖 | 45g |
| 磷酸盐缓冲溶液 | 5000ml |
2.制备工艺
称取高纯度氢化蛋黄卵磷脂和胆固醇于梨形瓶中，加适量氯仿或无水乙醚溶解完全，加入卡非佐米原料粉末溶解完全，在40℃的温度下用旋转蒸发器减压旋蒸除净有机溶剂，在瓶内壁形成一层均匀的薄膜后，用氮气吹干或继续负压旋蒸10分钟以确保有机溶剂除尽，加入含有维生素E的磷酸盐缓冲溶液(pH6.8)，摇匀，静置20分钟，于70℃水浴振摇1～2小时洗膜，直至薄膜完全水化得到O/W乳状多室脂质体混悬液，用pH调节剂将乳液混悬液pH值调为4.5，置于高压均质机中均质或细胞粉碎机中超声，控制粒径在100～300nm，得到小单室脂质体，加入溶于磷酸盐缓冲液的冻干保护剂，用磷酸盐缓冲液定容至5000ml，振摇30分钟溶解完全，分装于1000个小瓶，冷冻干燥制成卡非佐米脂质体冻干粉。高压均质的控制参数为温度25℃，压力60MPa，循环次数为10次；细胞粉碎机的控制参数为温度30℃，功率200W，超声时间为5分钟。
3.冻干工艺
第一阶段，快速降温预冻，90分钟内从20℃降至-45℃，-45℃保持5h；第二阶段，逐级升温干燥，-25℃保持6h，-10℃保持6h，-3℃保持10h；第三阶段，10℃保持2h，25℃保持6h。
对比实施例一
A第一阶段冻干工艺对比
1.处方
| 卡非佐米 | 60g |
| 维生素E | 2.25g |
| 柠檬酸 | 15g |
| 高纯度氢化蛋黄卵磷脂 | 375g |
| 胆固醇 | 60g |
| 海藻糖 | 45g |
| 乳糖 | 45g |
| 磷酸盐缓冲溶液 | 5000ml |
2.制备工艺
称取高纯度氢化蛋黄卵磷脂和胆固醇于梨形瓶中，加适量氯仿或无水乙醚溶解完全，加入卡非佐米原料粉末溶解完全，在40℃的温度下用旋转蒸发器减压旋蒸除净有机溶剂，在瓶内壁形成一层均匀的薄膜后，用氮气吹干或继续负压旋蒸10分钟以确保有机溶剂除尽，加入含有维生素E的磷酸盐缓冲溶液(pH6.8)，摇匀，静置20分钟，于70℃水浴振摇1～2小时洗膜，直至薄膜完全水化得到O/W乳状多室脂质体混悬液，用pH调节剂将乳液混悬液pH值调为4.5，置于高压均质机中均质或细胞粉碎机中超声，控制粒径在100～300nm，得到小单室脂质体，加入溶于磷酸盐缓冲液的冻干保护剂，用磷酸盐缓冲液定容至5000ml，振摇30分钟溶解完全，分装于1000个小瓶，冷冻干燥制成卡非佐米脂质体冻干粉。高压均质的控制参数为温度25℃，压力60MPa，循环次数为10次；细胞粉碎机的控制参数为温度30℃，功率200W，超声时间为5分钟。
3.冻干工艺
第一阶段，慢速降温预冻，2小时内从20℃降至-45℃，-45℃保持5h；第二阶段，逐级升温干燥，-25℃保持6h，-10℃保持6h，-3℃保持10h；第三阶段，10℃保持2h，25℃保持6h。
对比实施例一
B第二阶段冻干工艺对比
1.处方
| 卡非佐米 | 60g |
| 维生素E | 2.25g |
| 柠檬酸 | 15g |
| 高纯度氢化蛋黄卵磷脂 | 375g |
| 胆固醇 | 60g |
| 海藻糖 | 45g |
| 乳糖 | 45g |
| 磷酸盐缓冲溶液 | 5000ml |
2.制备工艺
称取高纯度氢化蛋黄卵磷脂和胆固醇于梨形瓶中，加适量氯仿或无水乙醚溶解完全，加入卡非佐米原料粉末溶解完全，在40℃的温度下用旋转蒸发器减压旋蒸除净有机溶剂，在瓶内壁形成一层均匀的薄膜后，用氮气吹干或继续负压旋蒸10分钟以确保有机溶剂除尽，加入含有维生素E的磷酸盐缓冲溶液(pH6.8)，摇匀，静置20分钟，于70℃水浴振摇1～2小时洗膜，直至薄膜完全水化得到O/W乳状多室脂质体混悬液，用pH调节剂将乳液混悬液pH值调为4.5，置于高压均质机中均质或细胞粉碎机中超声，控制粒径在100～300nm，得到小单室脂质体，加入溶于磷酸盐缓冲液的冻干保护剂，用磷酸盐缓冲液定容至5000ml，振摇30分钟溶解完全，分装于1000个小瓶，冷冻干燥制成卡非佐米脂质体冻干粉。高压均质的控制参数为温度25℃，压力60MPa，循环次数为10次；细胞粉碎机的控制参数为温度30℃，功率200W，超声时间为5分钟。
3.冻干工艺
第一阶段，快速降温预冻，90分钟内从20℃降至-45℃，-45℃保持5h；第二阶段，升温干燥，-3℃保持22h；第三阶段，10℃保持2h，25℃保持6h。
实施例二
1.处方
| 卡非佐米 | 50g |
| 维生素E | 2g |
| 柠檬酸 | 15g |
| 二硬脂酰磷脂酰胆碱(DSPC) | 275g |
| 胆固醇 | 50g |
| 蔗糖 | 35g |
| 甘露醇 | 40g |
| 磷酸盐缓冲溶液 | 5000ml |
2.制备工艺
称取二硬脂酰磷脂酰胆碱(DSPC)和胆固醇于梨形瓶中，加适量氯仿或无水乙醚溶解完全，加入卡非佐米原料粉末溶解完全，在38℃的温度下用旋转蒸发器减压旋蒸除净有机溶剂，在瓶内壁形成一层均匀的薄膜后，用氮气吹干或继续负压旋蒸10分钟以确保有机溶剂除尽，加入含有维生素E的磷酸盐缓冲溶液(pH6.8)，摇匀，静置20分钟，于60℃水浴振摇1～2小时洗膜，直至薄膜完全水化得到O/W乳状多室脂质体混悬液，用柠檬酸将乳液混悬液pH值调为5.5，置于高压均质机中均质或细胞粉碎机中超声，控制粒径在100～300nm，得到小单室脂质体，加入溶于磷酸盐缓冲液的蔗糖和甘露醇溶液，用磷酸盐缓冲液定容至5000ml，振摇35分钟溶解完全，分装于1000个小瓶，冷冻干燥制成卡非佐米脂质体冻干粉。高压均质的控制参数为温度30℃，压力50MPa，循环次数为12次；细胞粉碎机的控制参数为温度20℃，功率300W，超声时间为8分钟。
3.冻干工艺
第一阶段，快速降温预冻，90分钟内从20℃降至-45℃，-45℃保持5h；第二阶段，逐级升温干燥，-25℃保持6h，-10℃保持6h，-3℃保持10h；第三阶段，10℃保持2h，25℃保持6h。
对比实施例二
药物：脂质体重量比为1:25
1.处方
| 卡非佐米 | 50g |
| 维生素E | 2g |
| 柠檬酸 | 15g |
| 二硬脂酰磷脂酰胆碱(DSPC) | 1250g |
| 胆固醇 | 50g |
| 蔗糖 | 35g |
| 甘露醇 | 40g |
| 磷酸盐缓冲溶液 | 5000ml |
2.制备工艺
称取二硬脂酰磷脂酰胆碱(DSPC)和胆固醇于梨形瓶中，加适量氯仿或无水乙醚溶解完全，加入卡非佐米原料粉末溶解完全，在38℃的温度下用旋转蒸发器减压旋蒸除净有机溶剂，在瓶内壁形成一层均匀的薄膜后，用氮气吹干或继续负压旋蒸10分钟以确保有机溶剂除尽，加入含有维生素E的磷酸盐缓冲溶液(pH6.8)，摇匀，静置20分钟，于60℃水浴振摇1～2小时洗膜，直至薄膜完全水化得到O/W乳状多室脂质体混悬液，用柠檬酸将乳液混悬液pH值调为5.5，置于高压均质机中均质或细胞粉碎机中超声，控制粒径在100～300nm，得到小单室脂质体，加入溶于磷酸盐缓冲液的蔗糖和甘露醇溶液，用磷酸盐缓冲液定容至5000ml，振摇35分钟溶解完全，分装于1000个小瓶，冷冻干燥制成卡非佐米脂质体冻干粉。高压均质的控制参数为温度30℃，压力50MPa，循环次数为12次；细胞粉碎机的控制参数为温度20℃，功率300W，超声时间为8分钟。
3.冻干工艺
第一阶段，快速降温预冻，90分钟内从20℃降至-45℃，-45℃保持5h；第二阶段，逐级升温干燥，-25℃保持6h，-10℃保持6h，-3℃保持10h；第三阶段，10℃保持2h，25℃保持6h。
实施例三
1.处方
| 卡非佐米 | 70g |
| 维生素C | 5g |
| 柠檬酸 | 40g |
| 高纯度氢化大豆卵磷脂(HSPC) | 600g |
| 胆固醇 | 150g |
| 葡聚糖 | 100g |
| 海藻糖 | 100g |
| 磷酸盐缓冲溶液 | 2500ml |
2.制备工艺
称取高纯度氢化大豆卵磷脂(HSPC)和胆固醇于梨形瓶中，加适量氯仿或无水乙醚溶解完全，加入卡非佐米原料粉末溶解完全，在45℃的温度下用旋转蒸发器减压旋蒸除净有机溶剂，在瓶内壁形成一层均匀的薄膜后，用氮气吹干或继续负压旋蒸10分钟以确保有机溶剂除尽，加入含有维生素C的磷酸盐缓冲溶液(pH6.8)，摇匀，静置20分钟，于75℃水浴振摇1～2小时洗膜，直至薄膜完全水化得到O/W乳状多室脂质体混悬液，用柠檬酸将乳液混悬液pH值调为4.0，置于高压均质机中均质或细胞粉碎机中超声，控制粒径在100～300nm，得到小单室脂质体，加入溶于磷酸盐缓冲液的冻干保护剂，振摇40分钟溶解完全，分装于小瓶，冷冻干燥制成卡非佐米脂质体冻干粉。高压均质的控制参数为温度15℃，压力30MPa，循环次数为15次；细胞粉碎机的控制参数为温度15℃，功率250W，超声时间为5分钟。
3.冻干工艺
第一阶段，快速降温预冻，90分钟内从20℃降至-45℃，-45℃保持5h；第二阶段，逐级升温干燥，-25℃保持6h，-10℃保持6h，-3℃保持10h；第三阶段，10℃保持2h，25℃保持6h。
对比实施例三
磷脂：胆固醇比为30:1
1.处方
| 卡非佐米 | 70g |
| 维生素C | 5g |
| 柠檬酸 | 40g |
| 高纯度氢化大豆卵磷脂(HSPC) | 600g |
| 胆固醇 | 20g |
| 葡聚糖 | 100g |
| 海藻糖 | 100g |
| 磷酸盐缓冲溶液 | 2500ml |
2.制备工艺
称取高纯度氢化大豆卵磷脂(HSPC)和胆固醇于梨形瓶中，加适量氯仿或无水乙醚溶解完全，加入卡非佐米原料粉末溶解完全，在45℃的温度下用旋转蒸发器减压旋蒸除净有机溶剂，在瓶内壁形成一层均匀的薄膜后，用氮气吹干或继续负压旋蒸10分钟以确保有机溶剂除尽，加入含有维生素C的磷酸盐缓冲溶液(pH6.8)，摇匀，静置20分钟，于75℃水浴振摇1～2小时洗膜，直至薄膜完全水化得到O/W乳状多室脂质体混悬液，用柠檬酸将乳液混悬液pH值调为4.0，置于高压均质机中均质或细胞粉碎机中超声，控制粒径在100～300nm，得到小单室脂质体，加入溶于磷酸盐缓冲液的冻干保护剂，振摇40分钟溶解完全，分装于小瓶，冷冻干燥制成卡非佐米脂质体冻干粉。高压均质的控制参数为温度15℃，压力30MPa，循环次数为15次；细胞粉碎机的控制参数为温度15℃，功率250W，超声时间为5分钟。
3.冻干工艺
第一阶段，快速降温预冻，90分钟内从20℃降至-45℃，-45℃保持5h；第二阶段，逐级升温干燥，-25℃保持6h，-10℃保持6h，-3℃保持10h；第三阶段，10℃保持2h，25℃保持6h。
实施例四
1.处方
| 卡非佐米 | 30g |
| 维生素C | 6g |
| 柠檬酸 | 4g |
| 氢氧化钠 | 2g |
| 二棕榈酸磷脂酰胆碱(DPPC) | 600g |
| 胆固醇 | 30g |
| 山梨醇 | 70g |
| 乳糖 | 80g |
| 磷酸盐缓冲溶液 | 2500ml |
2.制备工艺
称取二棕榈酸磷脂酰胆碱(DPPC)和胆固醇于梨形瓶中，加适量氯仿或无水乙醚溶解完全，加入卡非佐米原料粉末溶解完全，在30的温度下用旋转蒸发器减压旋蒸除净有机溶剂，在瓶内壁形成一层均匀的薄膜后，用氮气吹干或继续负压旋蒸10分钟以确保有机溶剂除尽，加入含有维生素C的磷酸盐缓冲溶液(pH6.8)，摇匀，静置20分钟，于80℃水浴振摇1～2小时洗膜，直至薄膜完全水化得到O/W乳状多室脂质体混悬液，用柠檬酸/氢氧化钠将乳液混悬液pH值调为3.8，置于高压均质机中均质或细胞粉碎机中超声，控制粒径在100～300nm，得到小单室脂质体，加入溶于磷酸盐缓冲液的山梨醇和乳糖溶液，振摇10分钟溶解完全，分装于1000个小瓶，冷冻干燥制成卡非佐米脂质体冻干粉。高压均质的控制参数为温度10℃，压力80MPa，循环次数为5次；细胞粉碎机的控制参数为温度35℃，功率400W，超声时间为10分钟。
3.冻干工艺
第一阶段，快速降温预冻，90分钟内从20℃降至-45℃，-45℃保持5h；第二阶段，逐级升温干燥，-25℃保持6h，-10℃保持6h，-3℃保持10h；第三阶段，10℃保持2h，25℃保持6h。
实施例五
1.处方
| 卡非佐米 | 80g |
| 维生素E | 4g |
| 柠檬酸 | 10g |
| 氢氧化钠 | 30g |
| 二月桂酰基卵磷脂(DLPC) | 640g |
| 胆固醇 | 160g |
| 海藻糖 | 50g |
| 甘露醇 | 30g |
| 磷酸盐缓冲溶液 | 2500ml |
2.制备工艺
称取二月桂酰基卵磷脂(DLPC)和胆固醇于梨形瓶中，加适量氯仿或无水乙醚溶解完全，加入卡非佐米原料粉末溶解完全，在35℃的温度下用旋转蒸发器减压旋蒸除净有机溶剂，在瓶内壁形成一层均匀的薄膜后，用氮气吹干或继续负压旋蒸10分钟以确保有机溶剂除尽，加入含有抗氧化剂的磷酸盐缓冲溶液(pH6.8)，摇匀，静置20分钟，于55℃水浴振摇1～2小时洗膜，直至薄膜完全水化得到O/W乳状多室脂质体混悬液，用柠檬酸/氢氧化钠将乳液混悬液pH值调为6.5，置于高压均质机中均质或细胞粉碎机中超声，控制粒径在100～300nm，得到小单室脂质体，加入溶于磷酸盐缓冲液的海藻糖和甘露醇溶液，振摇40分钟溶解完全，分装于1000个小瓶，冷冻干燥制成卡非佐米脂质体冻干粉。高压均质的控制参数为温度20℃，压力40MPa，循环次数为15次；细胞粉碎机的控制参数为温度10℃，功率100W，超声时间为10分钟。
3.冻干工艺
第一阶段，快速降温预冻，90分钟内从20℃降至-45℃，-45℃保持5h；第二阶段，逐级升温干燥，-25℃保持6h，-10℃保持6h，-3℃保持10h；第三阶段，10℃保持2h，25℃保持6h。
实施例六
1.处方
| 卡非佐米 | 100g |
| 维生素E | 0.5g |
| 柠檬酸 | 15g |
| 1-肉豆蔻酰基-2-棕榈酰基卵磷脂(MPPC) | 200g |
| 胆固醇 | 75g |
| 乳糖 | 15g |
| 葡聚糖 | 10g |
| 磷酸盐缓冲溶液 | 2500ml |
2.制备工艺
称取1-肉豆蔻酰基-2-棕榈酰基卵磷脂(MPPC)和胆固醇于梨形瓶中，加适量氯仿或无水乙醚溶解完全，加入卡非佐米原料粉末溶解完全，在40℃的温度下用旋转蒸发器减压旋蒸除净有机溶剂，在瓶内壁形成一层均匀的薄膜后，用氮气吹干或继续负压旋蒸10分钟以确保有机溶剂除尽，加入维生素E的磷酸盐缓冲溶液(pH6.8)，摇匀，静置20分钟，于80℃水浴振摇1～2小时洗膜，直至薄膜完全水化得到O/W乳状多室脂质体混悬液，用pH调节剂将乳液混悬液pH值调为3.8，置于高压均质机中均质或细胞粉碎机中超声，控制粒径在100～300nm，得到小单室脂质体，加入溶于磷酸盐缓冲液的乳糖和葡聚糖溶液，振摇10分钟溶解完全，分装于1000个小瓶，冷冻干燥制成卡非佐米脂质体冻干粉。高压均质的控制参数为温度5℃，压力20MPa，循环次数为15次；细胞粉碎机的控制参数为温度5℃，功率400W，超声时间为1分钟。
3.冻干工艺
第一阶段，快速降温预冻，90分钟内从20℃降至-45℃，-45℃保持5h；第二阶段，逐级升温干燥，-25℃保持6h，-10℃保持6h，-3℃保持10h；第三阶段，10℃保持2h，25℃保持6h。
实施例七
卡非佐米脂质体冻干组合物的质量评价及评价方法
显微形态观察：将以上实施例制得的脂质体粉末加水复溶，观察复溶情况，再加适当水稀释，用2％磷钨酸溶液负染，用透射电镜观察粒子情况。
粒径及其分布：将以上实施例制得的冻干前的脂质体混悬液和冻干复溶后的脂质体稀释液，分别用激光散射粒度分析仪测定脂质体平均粒径。
包封率测定：分别取适量以上实施例制得的卡非佐米脂质体组合物混悬液和冻干粉，置超滤浓缩管中(Vivaspin2超滤离心管2000MWCO)，脂质体被截留在上层膜上，游离药物在浓缩管下层离心液中，离心速度8000rpm，离心5分钟，收集离心液，加水到上层膜，摇晃几次，再离心，收集离心液，如此重复三次，合并离心液，分别取适量卡非佐米脂质体组合物混悬液和离心液，测定药物总浓度和游离药物浓度，包封率计算公式为包封率＝W游/W总×100％。
渗漏率测定：分别取以上实施例制得的卡非佐米脂质体组合物混悬液和冻干粉密封于棕色瓶中，25℃条件下放置，定时取样，测其渗漏率。按测包封率的方法测定贮存一定时间后脂质体渗漏出来的游离药物量W1，另将贮存前测定的脂质体的游离药物量记为W2，由脂质体贮存前的包封率，计算贮存前包封的药物量W包。渗漏率＝[(W1-W2)/W包]×100％。
以上实施例的检测结果如下：
从上述实施例的检测结果可以看出，实施例一是较好的结果数据，对比实施一A的预冻采用的是慢冻的方式，得出的脂质体冻干组合物粒径较大，超过300nm，包封率和渗漏率也不符合发明的要求；对比实施例一B的第二冻干阶段采用的是直接升温过程，得出的脂质体组合物外观塌陷，显微镜显示圆整不均匀，包封率和渗漏率也不符合发明要求。对比实施例二是采用药脂比为1:25的处方制备的脂质体组合物，与实施例二对比，得出的脂质体冻干组合物包封率较低，说明要想包封率高，药物的比例就要越高。对比实施例三是采用磷脂类：胆固醇比为30:1的处方制备的脂质体组合物，与实施例三对比，得出的脂质体冻干组合物包封率和渗漏率均较大，说明胆固醇比例低时，脂质体不稳定。实施例四、五、六结果较好。
实施例八
卡非佐米脂质体组合物冻干粉的稳定性考察
取以上实施例制得的卡非佐米脂质体组合物冻干粉和市售的Kyprolis普通粉针先用29ml水复溶，取15ml用5％的葡萄糖稀释至50ml，分别存放于2～8℃和室温(15～30℃)，在0h、4h、8h、16h、24h、48h时间点取样检测有关物质和含量，有关物质和含量均按HPLC法测定。
从上述结果可以看出，不在本发明范围内的对比实施例A和B、对比实施例二和对比实施例三得出的结果较差，含量和有关物质降解较快，市售Kyprolis粉针在2～8℃保存时间为24小时，室温(15～30℃)条件下保存4小时；对比于市售Kyprolis粉针，本发明的实施例一、二、三、四、五和六在2～8℃能保存48小时，室温(15～30℃)条件下能保存24小时，有关物质总杂质含量＜5％，含量＞95％。
Claims (18)
1.一种卡非佐米药物的脂质体冻干组合物，其特征在于按重量份计算，包括以下组分：
卡非佐米，5～20份，优选5～15，更优选5～10份；
抗氧化剂，0.1～1份，优选0.1～0.8份，更优选0.1～0.5份；
pH值调节剂，1～5份，优选1～4份，更优选1～3份；
磷脂类，40～100份，优选50～80份，更优选50～60份；
胆固醇，5～20份，优选5～15份，更优选5～10份；
冻干保护剂，5～25份，优选5～20份，更优选10～15份。
2.根据权利要求1所述的卡非佐米药物的脂质体冻干组合物，其特征在于：
所述组合物还包括有机溶剂和缓冲溶液。
3.根据权利要求2所述的卡非佐米药物的脂质体冻干组合物，其特征在于：
所述有机溶剂为氯仿或无水乙醚；
所述缓冲溶液为磷酸盐缓冲液。
4.根据权利要求1所述的卡非佐米药物的脂质体冻干组合物，其特征在于：
所述磷脂类的纯度在98％以上。
5.根据权利要求4所述的卡非佐米药物的脂质体冻干组合物，其特征在于：
所述磷脂类为胆碱磷脂、溶血磷脂、乙醇胺磷脂。
6.根据权利要求5所述的卡非佐米药物的脂质体冻干组合物，其特征在于：
所述磷脂类选自蛋黄卵磷脂、氢化蛋黄卵磷脂、氢化大豆卵磷脂、1，2-二油酰基卵磷脂、二棕榈酸磷脂酰胆碱、二硬脂酰磷脂酰胆碱、二癸酰基卵磷脂、二月桂酰基卵磷脂、二肉豆蔻酰基卵磷脂、1-肉豆蔻酰基-2-棕榈酰基卵磷脂、1-肉豆蔻酰基-2-硬脂酰基卵磷脂中的一种或几种；
优先的选自蛋黄卵磷脂、氢化蛋黄卵磷脂、二硬脂酰磷脂酰胆碱、二肉豆蔻酰基卵磷脂、1-肉豆蔻酰基-2-硬脂酰基卵磷脂中的一种或几种；
最优先的选自氢化蛋黄卵磷脂和二硬脂酰磷脂酰胆碱中的一种或两种。
7.根据权利要求1所述的卡非佐米药物的脂质体冻干组合物，其特征在于：
磷脂类、胆固醇和抗氧化剂组成脂质体，卡非佐米与所述脂质体的重量之比为1:2～1:20。
8.根据权利要求1或7所述的卡非佐米药物的脂质体冻干组合物，其特征在于：
其中所述磷脂类与胆固醇的重量之比为2:1～20:1。
9.根据权利要求1所述的卡非佐米药物的脂质体冻干组合物，其特征在于：
所述抗氧化剂选自维生素E和维生素C中的一种或两种。
10.根据权利要求1所述的卡非佐米药物的脂质体冻干组合物，其特征在于：
所述的pH调节剂选自柠檬酸、醋酸、盐酸、稀盐酸或氢氧化纳中的一种或几种，优选选自柠檬酸或氢氧化纳。
11.根据权利要求1所述的卡非佐米药物的脂质体冻干组合物，其特征在于：
所述冻干保护剂选自乳糖、甘露醇、山梨醇、海藻糖、蔗糖和葡聚糖的两种或两种以上，优选海藻糖和乳糖的混合物。
12.根据权利要求11所述的卡非佐米药物的脂质体冻干组合物，其特征在于：
包裹药物的脂质体包括药物、脂质类、胆固醇和抗氧化剂，其重量是冻干保护剂的2～28.2倍。
13.一种制备如权利要求1～12所述的卡非佐米药物的脂质体冻干组合物的方法，其特征在于包括以下步骤：
1)制备多室脂质体混悬液
按薄膜分散法将药物包裹于脂质体形成薄膜，倒入水相，振摇后形成O/W乳状多室脂质体混悬液；
2)制备单室脂质体
将步骤1)制备的多室脂质体混悬液经过高压均质法或通过细胞粉碎机制备成粒径100～300nm的单室脂质体，用pH调节剂将pH值调为3.0～6.5，优选3.8～6.5，最优选4.0～5.0；
3)制备卡非佐米脂质体冻干粉
将步骤2)制备的单室脂质体加入冻干保护剂，冷冻干燥制成卡非佐米脂质体冻干粉。
14.根据权利要求13所述的卡非佐米药物的脂质体冻干组合物的方法，其特征在于：
其中步骤3)中，冻干保护剂以溶于磷酸盐缓冲液的形式加入。
15.根据权利要求13所述的制备卡非佐米药物的脂质体冻干组合物的方法，其特征在于：
其中步骤3)采用以下冻干工艺：
第一阶段，快速降温预冻，90分钟内从20℃降至-45℃，-45℃保持5h；
第二阶段，逐级升温干燥，-25℃保持6h，-10℃保持6h，-3℃保持10h；
第三阶段，10℃保持2h，25℃保持6h。
16.根据权利要求13所述的制备卡非佐米药物的脂质体冻干组合物的方法，其特征在于：
其中步骤2)中，高压均质的控制参数为温度5～35℃，压力20～80MPa，循环次数为5～15次；细胞粉碎机的控制参数为温度5～35℃，功率100～400W，超声时间为1～10分钟。
17.根据权利要求13所述的制备卡非佐米药物的脂质体冻干组合物的方法，其特征在于：
其中步骤1)薄膜形成如下：
首先通过在30～45℃的温度下用旋转蒸发器减压旋蒸除净有机溶剂，用氮气吹干或继续负压旋蒸10分钟以确保有机溶剂除尽。
18.权利要求1-12所述的卡非佐米药物的脂质体冻干组合物在制备用于治疗多发性骨髓瘤的药物中的用途。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201410497889.9A CN105497871A (zh) | 2014-09-25 | 2014-09-25 | 一种卡非佐米药物的脂质体冻干组合物及其制备方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201410497889.9A CN105497871A (zh) | 2014-09-25 | 2014-09-25 | 一种卡非佐米药物的脂质体冻干组合物及其制备方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN105497871A true CN105497871A (zh) | 2016-04-20 |
Family
ID=55706420
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201410497889.9A Pending CN105497871A (zh) | 2014-09-25 | 2014-09-25 | 一种卡非佐米药物的脂质体冻干组合物及其制备方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN105497871A (zh) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP3536309A1 (en) * | 2018-03-06 | 2019-09-11 | Cadila Healthcare Limited | Sterile injectable composition comprising carfilzomib |
| US20210212947A1 (en) * | 2018-05-18 | 2021-07-15 | Shanghai Wei Er Biopharmaceutical Tech Co., Ltd. | Docetaxel palmitate liposome and preparation method thereof |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102525927A (zh) * | 2011-12-31 | 2012-07-04 | 沈阳药科大学 | 一种醋酸奥曲肽制剂及制备方法 |
| WO2014015027A1 (en) * | 2012-07-18 | 2014-01-23 | Onyx Therapeutics, Inc. | Liposomal compositions of epoxyketone-based proteasome inhibitors |
| US20140220111A1 (en) * | 2013-02-01 | 2014-08-07 | Zoneone Pharma, Inc. | Remote loading of sparingly water-soluble drugs into liposomes |
-
2014
- 2014-09-25 CN CN201410497889.9A patent/CN105497871A/zh active Pending
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102525927A (zh) * | 2011-12-31 | 2012-07-04 | 沈阳药科大学 | 一种醋酸奥曲肽制剂及制备方法 |
| WO2014015027A1 (en) * | 2012-07-18 | 2014-01-23 | Onyx Therapeutics, Inc. | Liposomal compositions of epoxyketone-based proteasome inhibitors |
| US20140220111A1 (en) * | 2013-02-01 | 2014-08-07 | Zoneone Pharma, Inc. | Remote loading of sparingly water-soluble drugs into liposomes |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| PUSKÁS I ET AL.: "Influence of cyclodextrins on the physical stability of DPPC-liposomes", 《COLLOIDS AND SURFACES B: BIOINTERFACES》 * |
| 安红 等: "《磷脂化学及应用技术》", 30 June 2006, 中国计量出版社 * |
| 杨明 等: "《药剂学》", 31 August 2014, 中国医药科技出版社 * |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP3536309A1 (en) * | 2018-03-06 | 2019-09-11 | Cadila Healthcare Limited | Sterile injectable composition comprising carfilzomib |
| US20210212947A1 (en) * | 2018-05-18 | 2021-07-15 | Shanghai Wei Er Biopharmaceutical Tech Co., Ltd. | Docetaxel palmitate liposome and preparation method thereof |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN103040748B (zh) | 一种培美曲塞二钠脂质体注射剂 | |
| CN102579341A (zh) | 一种多西他赛固体脂质纳米粒及其制备方法 | |
| BR112015001892B1 (pt) | cocleados feitos com fosfatidilserina de soja e método para a produção de cocleados de fosfatidilserina de soja/ativo biológico | |
| CN102764240B (zh) | 一种前列地尔冻干微乳及其制备方法和应用 | |
| CN101439032A (zh) | 一种紫杉醇脂质复合物及其注射用胶束组合物 | |
| CN103655487B (zh) | 一种注射用前列地尔冻干乳剂 | |
| CN102525930B (zh) | 一种硫辛酸脂质体注射剂 | |
| CN105012248A (zh) | 一种注射用前列地尔脂肪乳及其制备方法 | |
| CN102626390B (zh) | 一种天麻素多相脂质体注射液 | |
| CN102366408B (zh) | 单唾液酸四己糖神经节苷脂钠脂质体注射剂 | |
| CN105497871A (zh) | 一种卡非佐米药物的脂质体冻干组合物及其制备方法 | |
| CN104971049B (zh) | 一种含有福沙匹坦的冻干制剂及其制备方法 | |
| CN102716089B (zh) | 一种盐酸吉西他滨脂质体注射剂 | |
| CN105919935B (zh) | 索拉非尼药物脂质纳米混悬剂及其制备方法 | |
| CN104173301A (zh) | 一种前列地尔冻干乳及其制备方法 | |
| CN102579347B (zh) | 一种注射用胸腺法新脂质体制剂 | |
| CN102552149B (zh) | 一种注射用肝素钙脂质体制剂 | |
| CN101439037A (zh) | 一种前列地尔脂质复合物及其注射用胶束组合物 | |
| CN103637985B (zh) | 一种稳定的pge1冻干乳及其制备方法 | |
| CN102988423B (zh) | 一种复方骨肽脂质体注射剂 | |
| CN103040751B (zh) | 一种细辛脑脂质体注射剂 | |
| CN101181284A (zh) | 注射用伊曲康唑冻干组合物及制备方法 | |
| CN105748415B (zh) | 一种前列地尔冻干微乳组合物及其制备方法 | |
| CN103040744B (zh) | 一种棓丙酯脂质体注射剂 | |
| CN103040753B (zh) | 一种银杏内酯脂质体注射剂 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20160420 |