CN103655487B - 一种注射用前列地尔冻干乳剂 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种注射用前列地尔冻干乳剂。该乳剂的冻干保护剂由特定氨基酸和糖类物质组成，将氨基酸和糖类物质加入到前列地尔脂肪乳剂中，按一定冻干工艺可制备出稳定性极高的注射用前列地尔冻干乳剂，该冻干乳不但满足制剂常温储运的要求，同时以氨基酸替代其它冻干保护剂可有效提高了制剂的安全性，降低不良反应发生率。

Description

一种注射用前列地尔冻干乳剂

技术领域

本发明设计医药技术领域，确切地说是一种注射用前列地尔冻干乳剂。

背景技术

前列地尔（前列腺素E1，PGE1）是前列腺素的一种，具有扩张血管、抑制血小板聚集、降低血液黏度和红细胞聚集性，改善微循环，抑制动脉粥样脂质斑块形成，临床用于心肌梗死、血栓性脉管炎和闭塞性动脉硬化等症。但是前列地尔药物本身特性（药物水溶性差、化学性质不稳定、静注血管疼痛）限制了其应用，增加了制剂制备难度，这些都是在制剂研究和制备工艺中急需解决的问题。

前列地尔脂微球是将前列地尔包封入纳米级的乳滴中，可选择性地在创伤部位、粗糙血管内壁、肿瘤及炎症部位蓄积，达到缓释及靶向的作用。该制剂既减少了药物用量，只需要前列地尔粉针剂1/10的用药量就可以达到非常好的疗效，又在一定程度上降低了游离前列地尔对血管的刺激性，并且增强了药物的稳定性。目前临床上最常用的前列地尔制剂为脂微球制剂。但是前列地尔脂微球制剂由于采用了高温灭菌工艺，致使前列地尔的含量有所降低，而降解产物的含量显著升高，且该产品的贮存条件（0～5℃）较为苛刻，有效期仅为1年。为了避免高温灭菌对前列地尔稳定性的负面影响，同时降低产品对贮存和运输的苛刻要求，本领域的技术人员进行了前列地尔冻干乳剂的研究。比如中国专利CN102764240A、CN1562041A、CN1732954A、CN1195990A、CN101332182B、CN101474150B、CN101716147A、CN101843594B、CN1872072A、CN101829054A、CN103301076A、和CN100579529C等，采用葡萄糖、麦芽糖等糖类物质或甘氨酸作为冻干保护剂，将前列地尔乳剂进行冷冻干燥，可得到不易染菌的，且稳定性有一定程度提高的产品，临床使用时病人的疼痛感也得到一定程度的缓解，不过其稳定性和临床使用时病人的疼痛感仍有进一步改善的空间。2010年，重庆药友制药上市注射用前列地尔干乳剂（优帝尔），避免了同类产品要求苛刻的储藏和运输条件、降解产物水平高等缺点，最终产品只需在阴凉处（小于20℃） 保存即可（中国专利CN101843594B）。但其处方中采用环糊精作为冻干保护剂，而环糊精用于静脉注射有一定的肾毒性和溶血性，也有致癌性，而且可能存在未知的更严重的毒副作用，在制剂安全方面埋下了未知隐患。

发明内容

本发明的目的在于提供一种全新注射用前列地尔冻干乳剂及其制备方法，依据该配方及工艺制备的注射用前列地尔冻干乳剂，复乳后制剂质量不发生变化同时可有效控制杂质生成。另外该制剂与目前临床常用的普通脂肪乳制剂相比，具有贮存、运输方便，有效期长的特点，其稳定性进一步提高，临床使用时病人的疼痛感进一步改善，基本避免了静脉注射疼痛和红肿的不良反应，提高了制剂的注射安全性。

发明人在对前列地尔脂肪乳冻干制剂进行研究过程中，意外地发现采用特定种类的氨基酸和糖类物质以一定比例共同用作冻干保护剂，可制得效果优良的前列地尔冻干乳剂。本发明提供的一种注射用前列地尔冻干乳剂，该冻干乳剂由以下成分组成：活性药物成分前列地尔、油性溶剂、乳化剂、糖类物质、氨基酸、甘油和柠檬酸钠，按冷冻干燥前或复溶后，每100ml药液中，各组分的含量如下：

优选的，每100ml药液中，各组分的含量如下：

更优选的，每100ml药液中，各组分的含量如下：

上述的油性溶剂选自大豆油、橄榄油、红花油、沙棘油中的一种或几种，优选上述的油性溶剂选自大豆油、橄榄油、红花油、沙棘油中的一种，更优选是大豆油，尤其是注射用大豆油。

上述的乳化剂选自蛋黄卵磷脂、大豆卵磷脂、氢化卵磷脂中的一种或几种，优选上述的乳化剂选自蛋黄卵磷脂、大豆卵磷脂、氢化卵磷脂中的一种，更优选是蛋黄卵磷脂。

上述的糖类物质选自乳糖、蔗糖中的一种或两种。

其中，糖类物质既能在冻结过程中起到低温保护剂的功能，又能在干燥脱水过程中起到脱水保护剂的作用。

所述的氨基酸选自精氨酸和组氨酸一种或组合，优选所述的氨基酸为精氨酸或组氨酸。氨基酸离子本身具有酸、碱两性，因此能够在生物制品的低温保存和冷冻干燥过程中能抑制溶液的pH变化，从而达到保护活性组分的目的。但氨基 酸作为冻干保护剂对不同药物的冻干乳剂选择范围较窄，本发明通过多次试验筛选发现精氨酸和组氨酸在前列地尔冻干乳剂制备中具备非常优秀的冻干保护作用。

其中所述的糖类物质、氨基酸和前列地尔重量比例为：100～1000：10～100：0.01。更优选地，所述的糖类物质、氨基酸和前列地尔重量比例为：200：20：0.01。

所述的甘油作为等渗调节剂使用。

所述的柠檬酸钠作为pH调节剂，其用量使得将所述的等渗调节剂即甘油溶于水中时形成的水相pH调节为4～6。

本发明中，在使用上述特定比例的注射用大豆油、蛋黄卵磷脂、糖类物质、氨基酸和甘油的情况下，无需使用稳定剂，即可获得稳定性优良的前列地尔冻干乳剂。

本发明注射用前列地尔冻干乳剂的制备方法主要包括以下步骤：

1）在氮气保护的条件下，70℃下将乳化剂例如蛋黄卵磷脂加入到油性溶剂例如大豆油中，搅拌溶解；

2）溶解完全后加入前列地尔溶解完全，形成油相；

3）将作为等渗调节剂的甘油溶于水中，并用作为pH调节剂的柠檬酸钠水溶液调节pH为4～6，形成水相；

4）将水相置于70℃氮气保护条件下，在高速剪切条件下将油相滴加至水相中，剪切5min形成初乳；

5）将初乳冷却至室温，定容至100ml；

6）将初乳800～900bar压力下均质5min，冷却至室温；

7）加入糖类物质和氨基酸，搅拌溶解混合均匀，0.22um滤器进行无菌过滤，按一定冷冻干燥程序去除水分，得到干燥的前列地尔冻干乳剂。

本发明注射用前列地尔冻干乳剂的另一种制备方法包括以下步骤：

1）在氮气保护的条件下，70℃下将乳化剂例如蛋黄卵磷脂加入到油性溶剂例如大豆油中，搅拌溶解；

2）溶解完全后加入前列地尔溶解完全，形成油相；

3）将作为等渗调节剂的甘油溶于水中，并用作为pH调节剂的柠檬酸钠水溶 液调节pH为4～6，形成水相；

4）将水相置于70℃氮气保护条件下，在高速剪切条件下将油相滴加至水相中，剪切5min形成初乳；

5）将初乳冷却至室温，800～900bar压力下均质5min，冷却至室温；

6）将糖类物质和氨基酸溶于少量注射用水中，加入到乳剂中，混合均匀后定容至100ml，0.22um滤器进行无菌过滤，按一定冷冻干燥程序去除水分，得到干燥的前列地尔冻干乳剂。

本发明提供的冷冻干燥程序为-40℃下预冻12h，-45℃下预冻3h，2h内降温至-60℃，预冻10h；然后-50℃，60mtor压力下抽真空10h，-40℃，60mtor压力下抽真空6h，-30℃，60mtor压力下抽真空6h。

本发明的前列地尔冻干乳剂的优点在于：

1.相对于前列地尔普通注射液提高了药物的化学稳定性和生理活性，避免了静脉注射疼痛和红肿的不良反应，相对于前列地尔脂微球注射液降低了对生产、运输和贮存条件的要求，延长了有效期。

2.在经过多次摸索筛选实验后创新地使用特定糖类物质和组氨酸和（或）精氨酸以一定比例共同作为冻干保护剂，复乳后制剂质量不发生变化同时可有效控制杂质生成，相对于使用其他氨基酸和糖类物质的组合或单独使用糖类物质、氨基酸作为冻干保护剂的冻干乳剂，明显提高了制剂质量，并且以糖类物质和氨基酸作为冻干保护剂，而避免使用环糊精，明显提高了制剂的注射安全性。

具体实施方案

不同主药含量的前列地尔冻干乳制剂

实施例1

制备工艺

1）在氮气保护的条件下，70℃下将1g蛋黄卵磷脂加入到3g大豆油中，搅拌溶解；

2）溶解完全后加入0.0005g前列地尔溶解完全，形成油相；

3）将2.5g甘油溶于水相中，并用柠檬酸钠调节pH为5，形成水相；

4）将水相置于70℃氮气保护条件下，在高速剪切条件下将油相滴加至水相中，剪切5min形成初乳；

5）将初乳冷却至室温，注射用水定容至100ml；

6）将初乳800～900bar压力下均质5min，冷却至室温；

7）加入10g乳糖和1g精氨酸，搅拌溶解混合均匀，0.22um滤器进行无菌过滤，按一定冷冻干燥程序去除水分，得到干燥的前列地尔冻干乳剂。

实施例2

制备工艺

1）在氮气保护的条件下，70℃下将2.5g蛋黄卵磷脂加入到20g大豆油中，搅拌溶解；

2）溶解完全后加入0.01g前列地尔溶解完全，形成油相；

3）将2.5g甘油溶于水相中，并用柠檬酸钠调节pH为6，形成水相；

4）将水相置于70℃氮气保护条件下，在高速剪切条件下将油相滴加至水相中，剪切5min形成初乳；

5）将初乳冷却至室温，800～900bar压力下均质5min，冷却至室温；

6）将10g乳糖和1g组氨酸溶于少量注射用水中，加入到乳剂中，混合均匀后定容至100ml，0.22um滤器进行无菌过滤，按一定冷冻干燥程序去除水分，得到干燥的前列地尔冻干乳剂。

实施例3

制备工艺同实施例1。

不同注射用油种类及含量制备的前列地尔冻干乳剂

实施例4

制备工艺同实施例1。

实施例5

制备工艺同实施例1。

实施例6

制备工艺同实施例1。

不同乳化剂种类及含量制备前列地尔冻干乳剂

实施例7

制备工艺同实施例2。

实施例8

制备工艺同实施例2。

不同冻干保护剂种类及含量制备前列地尔冻干乳剂

实施例9

制备方法同实施例1

实施例10

制备方法同实施例2

实施例11

制备方法同实施例1

实施例12

制备方法同实施例2

实施例13

制备方法同实施例1

其他糖类物质和氨基酸作为冻干保护剂的前列地尔冻干乳剂

对比例1

制备方法同实施例1

对比例2

制备方法同实施例1

对比例3

制备方法同实施例1

单用糖类物质作为冻干保护剂的前列地尔冻干乳剂

对比例4

制备方法同实施例1

对比例5

制备方法同实施例1

单用氨基酸作为冻干保护剂的前列地尔冻干乳剂

对比例6

制备方法同实施例1

对比例7

制备方法同实施例1

对比例8

按照CN10276240A实施例1的方法得到的前列地尔冻干微乳。

实验例1对以上13个实施例和8个对比例制备出的样品测定复溶前后的粒径和含量情况

从结果看出，实施例1～13及对比例8制备的前列地尔冻干乳冻干复溶前后外观良好，粒径和含量也均基本稳定。而对比例1～7制备的前列地尔冻干乳复溶后出现粒径明显增大以及漂油现象。

实验例2实施例1、9、13制备前列地尔冻干乳剂及对比例8制备含前列地尔乳剂的稳定性研究

取实施例1、9、13和对比例8制备的前列地尔冻干乳剂样品进行24个月的长期稳定性研究试验（温度25℃±2℃，湿度60%±10%）结果如下：

从以上结果得出，本发明制备前列地尔冻干乳剂在温度25℃±2℃，湿度60%±%10条件下贮存两年，产品质量仍稳定，且PGA1含量也均小于前列地尔标示 量的3%，符合国家药典规定。对比例8制备前列地尔冻干乳剂从第9个月出现质量明显下降，已不符合制剂要求。

实验例3溶血试验（中国药典2010版附录XI L）

2%红细胞混悬液的制备：取健康家兔血液，放入含玻璃珠的锥形瓶中振荡10分钟，除去纤维蛋白原，使成脱纤血液，加入0.9%氯化钠溶液约10倍量，摇匀，每分钟1500转离心15分钟，除去上清液，沉淀的红细胞再用0.9%氯化钠溶液按上述方法洗涤2次，至上清液不显红色，将所得红细胞用0.9%氯化钠溶液制成2%的混悬液，供试验用。

取洁净玻璃试管16只，编号，1～13为实施例1～13样品管，14号管为阴性对照管，15号管为阳性对照管，16号管为供试品对照管。按下表所示依次加入2%红细胞悬液，0.9%氯化钠溶液，蒸馏水，混匀后，立即置37℃±0.5℃的恒温箱中温育。3小时后观察。

结果：1～13号管与16号管肉眼观察无明显差异，表明无溶血发生。

实验例4血管刺激性试验

按照新药指导原则，以实施例9为例，做血管刺激性试验。选取新西兰大白兔3只，体重约2kg，按临床推荐剂量换算出兔的给药剂量（0.5ug/kg）,按此剂量于兔子右耳缘静脉缓慢静注实施例4制备冻干乳复溶液，左耳缘静脉静注同样体积的生理盐水，每天一次，连续注射三天，观察注射部位是否有水肿、红斑。末次注射2h后，处死动物，取兔耳做病理切片观察。

实验结果：本实验条件下未见前列地尔注射液和生理盐水引起兔耳缘静脉血管和周围组织刺激性病理改变。

Claims (11)

1.一种注射用前列地尔冻干乳剂，该冻干乳剂由以下成分制成：活性药物成分前列地尔、油性溶剂、乳化剂、糖类物质、氨基酸、甘油和柠檬酸钠，按冷冻干燥前或复溶后，每100ml药液中，各组分的含量如下：

其中，

所述的油性溶剂选自大豆油、橄榄油、红花油、沙棘油中的一种或几种；

所述的乳化剂选自蛋黄卵磷脂、大豆卵磷脂、氢化卵磷脂中的一种或几种；

所述的糖类物质选自乳糖和蔗糖中的一种或两种；

所述的氨基酸选自精氨酸和组氨酸的一种或两种；

其中糖类物质、氨基酸和前列地尔重量比例为：100～1000：10～100：0.01。

2.如权利要求1所述的注射用前列地尔冻干乳剂，按冷冻干燥前或复溶后，每100ml药液中，各组分的含量如下：

3.如权利要求1所述的注射用前列地尔冻干乳剂，按冷冻干燥前或复溶后，每100ml药液中，各组分的含量如下：

4.如权利要求1至3任一项所述的注射用前列地尔冻干乳剂，其中，糖类物质、氨基酸和前列地尔重量比例为：200：20：0.01，所述柠檬酸钠是柠檬酸钠水溶液，其用量使得甘油溶于水中时形成的水相的pH值为4～6。

5.如权利要求1至3任一项所述的注射用前列地尔冻干乳剂，其中，糖类物质选自乳糖或蔗糖中的一种。

6.如权利要求1至3任一项所述的注射用前列地尔冻干乳剂，其中，氨基酸选自精氨酸或组氨酸中的一种。

7.如权利要求1至3任一项所述的注射用前列地尔冻干乳剂，其中，所述的油性溶剂选自大豆油、橄榄油、红花油、沙棘油中的一种，所述的乳化剂选自蛋黄卵磷脂、大豆卵磷脂、氢化卵磷脂中的一种。

8.如权利要求1至3任一项所述的注射用前列地尔冻干乳剂，其中，所述的油性溶剂选自注射用大豆油，所述的乳化剂选自蛋黄卵磷脂。

9.种制备权利要求1至8任一项所述的注射用前列地尔冻干乳剂的方法，包括以下步骤：

1)在氮气保护的条件下，70℃下将乳化剂加入到油性溶剂中，搅拌溶解；

2)溶解完全后加入前列地尔溶解完全，形成油相；

3)将甘油溶于水中，并用柠檬酸钠水溶液调节pH为4～6，形成水相；

4)将水相置于70℃氮气保护条件下，在高速剪切条件下将油相滴加至水相中，剪切5min形成初乳；

5)将初乳冷却至室温，定容至100ml；

6)将初乳800～900bar压力下均质5min，冷却至室温；

7)加入糖类物质和氨基酸，搅拌溶解混合均匀，0.22um滤器进行无菌过滤，冷冻干燥去除水分，得到干燥的前列地尔冻干乳剂。

10.一种制备权利要求1至8任一项所述的注射用前列地尔冻干乳剂的方法，包括以下步骤：

1)在氮气保护的条件下，70℃下将乳化剂加入到油溶剂中，搅拌溶解；

2)溶解完全后加入前列地尔溶解完全，形成油相；

3)将甘油溶于水中，并用柠檬酸钠水溶液调节pH为4～6，形成水相；

4)将水相置于70℃氮气保护条件下，在高速剪切条件下将油相滴加至水相中，剪切5min形成初乳；

5)将初乳冷却至室温，800～900bar压力下均质5min，冷却至室温；

6)将糖类物质和氨基酸溶于少量注射用水中，加入到步骤5)中得到的乳剂中，混合均匀后定容至100ml，0.22um滤器进行无菌过滤，冷冻干燥去除水分，得到干燥的前列地尔冻干乳剂。

11.根据权利要求9或10所述的方法，其特征在于，冷冻干燥程序包括：-40℃下预冻12h，-45℃下预冻3h，2h内降温至-60℃，预冻10h；然后-50℃，60mtor压力下抽真空10h，-40℃，60mtor压力下抽真空6h，-30℃，60mtor压力下抽真空6h。