CN103637985B - 一种稳定的pge1冻干乳及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供一种稳定的PGE1冻干乳制剂及其制备方法。具体为在处方中通过加入维生素E和精制蔗糖或葡萄糖或二者按照一定比例组成的混合物，大大地提高了PGE1理化稳定性，使其在冷冻干燥过程中能够承受条件的剧烈变化，制得的冻干产品外观饱满，为白色疏松块状物或粉末、复溶性好、质量可控、重现性好、报废率低，同时也因为辅料用量的减少而降低产品的生产成本，克服了因冻干制剂辅料加入过多而带来的副作用，患者使用更安全，产品的有效期延长，降低了对生产、运输、贮存条件的要求。

Description

一种稳定的PGE1冻干乳及其制备方法

技术领域

本发明涉及医药技术领域，具体来说涉及一种稳定的PGE1冻干乳及其制备方法。

背景技术

PGE1，又名前列腺素E1，是广泛存在于体内的生物活性物质。瑞典科学家

Burgstrom等三人因为发现PGE1并对其展开的相关药理研究，而获得了1982年的诺贝尔医学奖。

发明内容

由于PGE1具有极强的扩张血管的药物机制，能够有效治疗慢性动脉闭塞症等疾病，因此早在20世纪70年代就开始作为药物进行开发。由于PGE1几乎不溶于水，且稳定性较差，因此早期主要使用助溶剂或环糊精包裹，制作成为冻干粉针。冻干粉针属于全身用药，其浓度较大（通常为0.1mg/ml左右），由于前列地尔的药理活性极强，会造成全身血管肿胀及疼痛等严重的副作用，因此临床应用性很差。

为了解决前列地尔冻干粉针临床应用的问题，PGE1注射液由日本科学家研制成功，并于20世纪80年代在日本上市。北京泰德制药股份有限公司从日本成功引进了该技术，并于1995年在国内上市。目前前列地尔注射液在国内上市十余年，年产量达到千万支。

PGE1注射液中含有磷脂包裹的微小油滴组成的脂微球，其平均粒径在0.2μm左右。前列地尔分布于脂微球中，脂微球由于具有磷脂外壳，因此可以富集于体内毛细血管的血栓位置，从而形成靶向作用。由于脂微球具有靶向作用，前列地尔注射液中前列地尔的含量仅为5μg/ml，在保证药效的前提下极大降低了药物的副作用。

由于PGE1注射乳剂采用了高温灭菌工艺，致使PGE1的含量有所降低，降解产物的含量则显著升高，由于PGE1的贮存条件（0-5℃）较为苛刻，有效期仅为1年。为了避免现有PGE1注射乳剂中存在的不稳定性和有效期短等缺陷，本领域人员进行了PGE1冻干乳剂的研究。中国专利CN1903206A采用人血清白蛋白与糖类物质一起作为冻干保护剂来控制药物含量，提高药物稳定性，但是由于人血清白蛋白为血液制品，属高风险药品，失重无法完全排除传染已知或未知致病因子或病毒的可能性，因此，使用其作为辅料存在潜在风险。中国专利CN101843594采用环糊精包合PGE1结合形成包合物的形式，增加PGE1的产品的稳定性，降低注射用PGE1冻干乳剂中游离PGE1的水平，进一步降低血管刺激性的。但目前对环糊精辅料及其包合物在体内的安全性了解尚不深入，其静脉制剂随用量增加存在一定的肾毒性和溶血性。文献报道，静脉注射羟丙基β－环糊精的不良反应主要集中表现为肾毒性和溶血性，主要与该辅料的已知杂质β－环糊精有关，此杂质首先引起肾小管远端空泡样病变，随后在表皮细胞内出现巨大的溶酶体和明显的针状结晶体，现推测该结晶体很有可能是环糊精与胆固醇或脂蛋白的复合物。进而出现细胞器的显著性变化，诸如线粒体肿胀变形、高尔基体和滑面内质网基底部的细胞出现细胞间紧密连接不可逆的断裂，这种结果直接导致肾功能的减退甚至丧失。所以对羟丙基β－环糊精应非常严格的限定环糊精的残留量。虽然使用环糊精及其衍生物制成的冻干制剂，在处方中没有添加乙醇、丙二醇等混合溶剂，对血管的刺激性有一定的改善，但由于我们对其溶解机理、体内外的存在形式以及药物和辅料的体内代谢行为尚不清楚，由此引发如下思考：环糊精包合在增加药物溶解度的同时会伴随着药物效用的降低而降低，无法准确预测其在体内的分布规律等。同时由于环糊精类辅料多为人工合成的药用辅料，在合成的过程中会有难以分离的副产物生成，增加了产生毒副作用的风险。

为了解决现有技术中对冻干制剂加入辅料过多，如白蛋白或环糊精及其衍生物或乳糖等有可能引起未知副作用，影响患者安全等问题。本发明人通过研究发现，采用精制蔗糖作为冻干保护剂，在处方中加入维生素E可以可很好的解决以上问题。在冻干过程中，水分升华去除，油滴分布在冻干保护剂的结晶间隙中，加水后，保护剂迅速溶解，油滴重新分布于水相中幸存均一的乳剂。该方法制备温度低，且可采用低温过膜除菌，因此适用于热敏感药物干乳的制备。而蔗糖和葡萄糖可以形成一种无定型基质，这种基质存在一个特殊的玻璃化转变温度（Tg），当低于这个温度时，基质以玻璃态存在，而当介于这个转变温度与熔点之间时，基质以橡胶态存在，它具有很高的粘度，未冻结的水分子围绕着冰晶存在于其中，在冻干过程中，这种高粘度的基质会降低水分子的流动性，减少冰晶的产生从而有利于乳剂的稳定。

发明内容

本发明的目的在于提供一种稳定的PGE1冻干乳及其制备方法，它提高了PGE1乳剂的化学稳定性，特殊比例的冻干保护剂的加入，可形成高粘度的基质溶液，会降低水分子的流动性，减少冰晶的产生从而形成一种稳定的PGE1冻干乳剂，同时降低了对生产、运输、贮存条件的要求，延长有效期，也能避免使用乳糖作为冻干保护剂引入的新的潜在的安全性风险。

为实现上述目的，本发明的技术方案如下：

一种稳定的PGE1冻干乳，该冻干乳中含有活性成分PGE1、油性溶剂、乳化剂、注射用水，还含有必需成分维生素E、精制蔗糖或葡萄糖和精制蔗糖组成的混合物。

其中，葡萄糖和精制蔗糖组成的混合物中两者按照重量份计的比例为1:1～1:5。

其中，油性溶剂选自大豆油或芝麻油中的任意一种或按照任意比例的混合物。

其中，乳化剂选自大豆磷脂、蛋黄磷脂、胆固醇中的任意一种或一种以上任意比例混合物。

按照冷冻干燥前或后复溶后，每1000ml药液中以质量体积百分比计算，其中维生素E的质量百分比为0.005～0.1%；葡萄糖或精制蔗糖或葡萄糖和精制蔗糖组成的混合物的质量百分比为5%～50%。

其中，复溶后的平均粒径在100nm-300nm之间。

一种制备如权利要求1所述一种稳定的PGE1冻干乳，方法包括如下步骤：

（1）将处方量的活性成分PGE1和维生素E常温均匀分散于油性溶剂中作为油相；

（2）将处方量的乳化剂、等渗调节剂等溶于注射用水中作为水相；

（3）将油相在搅拌的条件下加入水相中，或水相在搅拌的条件下加入油相中；

（4）在60-70℃的恒温水浴条件下初乳化，并加入pH调节剂调pH在6-10之间，得到初乳；

（5）将初乳通过均质机均质，得到均匀的乳状液A；

（6）将葡萄糖或精制蔗糖或葡萄糖和精制蔗糖组成的混合物用注射用水溶解得到保护剂溶液B；

（7）将溶液A与溶液B混合，加入pH调节剂调pH在6-8之间，定容，经冷冻干燥去除水分，制得。

其中，冻干乳的冷冻干燥参数为：预冻温度为-25℃--50℃；一次干燥温度为0℃--30℃，真空度为0.1-0.5mbar；二次干燥温度为20℃-60℃，真空度为0.001-0.1mbar。

冷冻干燥的具体参数进一步优选为预冻温度为-25℃--40℃；一次干燥温度为-10℃--25℃，真空度为0.1-0.3mbar；二次干燥温度为20℃-40℃，真空度为0.005-0.1mbar。

附图说明

图1.实施例1冻干乳复溶前的粒径图。

图2.实施例1冻干乳复溶后的粒径图。

具体实施方案：

比较例1：采用中国专利CN101843594中公开的发明方案制备。

实施例1

将10g大豆磷脂、20g甘油称入烧杯中，加入400ml纯化水，15000rpm剪切搅拌5min形成水相；将60g大豆油称入烧杯中，60℃水域中一边加热溶解一边搅拌加入5mgPGE1和50mg维生素E，搅拌分散均匀，形成油相。在低速搅拌下将水相缓慢滴入油相中，完全加入后，10000rpm剪切搅拌5min制得初乳，氢氧化钠调pH为8；将初乳溶液经高压乳匀机均质，在低压100bar，高压1000bar下均质8圈，制得精乳化乳液；将50g精制蔗糖称入到烧杯中，加入300ml纯化水，搅拌，溶解，溶解完全后定容至400ml；将上述配制的精乳化后的乳液和精制蔗糖制得的溶液混合，定容至1L，调pH为6；将混合溶液置于冻干机中，设置预冻温度为-25℃、一次干燥温度为-10℃，真空度为0.1mbar，二次干燥温度为30℃，真空度为0.05mbar，冻结干燥后制得。

实施例2

将15g蛋黄磷脂、25g甘油称入烧杯中，加入400ml纯化水，15000rpm剪切搅拌5min形成水相；将80g大豆油称入烧杯中，60℃水域中一边加热溶解一边搅拌加入5mgPGE1和200mg维生素E，搅拌分散均匀，形成油相。在低速搅拌下将水相缓慢滴入油相中，完全加入后，10000rpm剪切搅拌5min制得初乳，氢氧化钠调pH为8；将初乳溶液经高压乳匀机均质，在低压100bar，高压1000bar下均质8圈，制得精乳化乳液；将150g精制蔗糖称入到烧杯中，加入300ml纯化水，搅拌，溶解，溶解完全后定容至400ml；将上述配制的精乳化后的乳液和精制蔗糖制得的溶液混合，定容至1L，调pH为6；将混合溶液置于冻干机中，设置预冻温度为-25℃、一次干燥温度为-10℃，真空度为0.1mbar，二次干燥温度为30℃，真空度为0.05mbar，冻结干燥后制得。

实施例3

将20g大豆磷脂、40g甘油称入烧杯中，加入400ml纯化水，15000rpm剪切搅拌5min形成水相；将70g大豆油称入烧杯中，60℃水域中一边加热溶解一边搅拌加入5mgPGE1和300mg维生素E，搅拌分散均匀，形成油相。在低速搅拌下将水相缓慢滴入油相中，完全加入后，10000rpm剪切搅拌5min制得初乳，氢氧化钠调pH为8；将初乳溶液经高压乳匀机均质，在低压100bar，高压1000bar下均质8圈，制得精乳化乳液；将100g葡萄糖和100g精制蔗糖称入到烧杯中，加入300ml纯化水，搅拌，溶解，溶解完全后定容至400ml；将上述配制的精乳化后的乳液和精制蔗糖制得的溶液混合，定容至1L，调pH为6；将混合溶液置于冻干机中，设置预冻温度为-25℃、一次干燥温度为-10℃，真空度为0.1mbar，二次干燥温度为30℃，真空度为0.05mbar，冻结干燥后制得。

实施例4

将20g胆固醇、30g甘油称入烧杯中，加入400ml纯化水，15000rpm剪切搅拌5min形成水相；将80g大豆油称入烧杯中，60℃水域中一边加热溶解一边搅拌加入5mgPGE1和800mg维生素E，搅拌分散均匀，形成油相。在低速搅拌下将水相缓慢滴入油相中，完全加入后，10000rpm剪切搅拌5min制得初乳，氢氧化钠调pH为8；将初乳溶液经高压乳匀机均质，在低压100bar，高压1000bar下均质8圈，制得精乳化乳液；将100g葡萄糖和400g精制蔗糖称入到烧杯中，加入300ml纯化水，搅拌，溶解，溶解完全后定容至400ml；将上述配制的精乳化后的乳液和精制蔗糖制得的溶液混合，定容至1L，调pH为6；将混合溶液置于冻干机中，设置预冻温度为-25℃、一次干燥温度为-10℃，真空度为0.1mbar，二次干燥温度为30℃，真空度为0.05mbar，冻结干燥后制得。

实施例5

将30g大豆磷脂、40g甘油称入烧杯中，加入400ml纯化水，15000rpm剪切搅拌5min形成水相；将100g芝麻油称入烧杯中，60℃水域中一边加热溶解一边搅拌加入5mgPGE1和500mg维生素E，搅拌分散均匀，形成油相。在低速搅拌下将水相缓慢滴入油相中，完全加入后，10000rpm剪切搅拌5min制得初乳，氢氧化钠调pH为8；将初乳溶液经高压乳匀机均质，在低压100bar，高压1000bar下均质8圈，制得精乳化乳液；将100g葡萄糖和300g精制蔗糖称入到烧杯中，加入300ml纯化水，搅拌，溶解，溶解完全后定容至400ml；将上述配制的精乳化后的乳液和精制蔗糖制得的溶液混合，定容至1L，调pH为6；将混合溶液置于冻干机中，设置预冻温度为-25℃、一次干燥温度为-10℃，真空度为0.1mbar，二次干燥温度为30℃，真空度为0.05mbar，冻结干燥后制得。

实施例6

将15g蛋黄磷脂、30g甘油称入烧杯中，加入400ml纯化水，15000rpm剪切搅拌5min形成水相；将60g芝麻油称入烧杯中，60℃水域中一边加热溶解一边搅拌加入5mgPGE1和600mg维生素E，搅拌分散均匀，形成油相。在低速搅拌下将水相缓慢滴入油相中，完全加入后，10000rpm剪切搅拌5min制得初乳，氢氧化钠调pH为8；将初乳溶液经高压乳匀机均质，在低压100bar，高压1000bar下均质8圈，制得精乳化乳液；将500g精制蔗糖称入到烧杯中，加入300ml纯化水，搅拌，溶解，溶解完全后定容至400ml；将上述配制的精乳化后的乳液和精制蔗糖制得的溶液混合，定容至1L，调pH为6；将混合溶液置于冻干机中，设置预冻温度为-25℃、一次干燥温度为-10℃，真空度为0.1mbar，二次干燥温度为30℃，真空度为0.05mbar，冻结干燥后制得。

试验例1：

表1PGE1冻干乳冻干前后粒径和澄清度变化情况

试验例2：PGE1冻干乳稳定性试验

采用恒温加速试验法，分别在25℃、40℃下进行加速试验，测定实施例和比较例在加速条件下的稳定性。降解率结果如表2和3所示：

表2本发明制备的实施例和比较例在25℃加速的稳定性（%为主药的降解百分率）

时间（天）	实施例1	实施例2	实施例3	实施例4	实施例5	实施例6	比较例1
								3	0.5%	0.76%	0.58%	0.71%	0.95%	0.53%	1.51%
5	1.61%	2.12%	0.96%	1.01%	1.72%	1.5%	2.29%
								7	1.84%	2.44%	1.7%	1.98%	2.25%	2.35%	2.89%
10	2.92%	3.1%	2.34%	2.42%	3.03%	2.66%	4.52%

表3本发明制备的实施例和比较例在40℃加速的稳定性（%为主药的降解百分率）

时间（天）	实施例1	实施例2	实施例3	实施例4	实施例5	实施例6	比较例1
								10	1.09%	1.56%	1.07%	0.92%	2.01%	1.21%	3.73%
20	2.21%	1.96%	1.33%	1.78%	2.97%	2.11%	4.05%
								30	2.45%	2.7%	2.68%	2.92%	2.99%	2.13%	4.68%
40	3.36%	3.34%	2.89%	3.34%	3.67%	3.01%	5.23%
								50	4.21%	3.55%	3.99%	4.22%	4.01%	4.85%	6.73%

由表2和表3的结果可知，本发明案中的实施例1-6在25℃和40℃的加速稳定性考察试验中，主药降解率较低，从此结果可知，本发明案中的冻干制剂可常温稳定保存2年，稳定性明显优于比较例1。

试验例3：PGE1冻干乳制剂对家兔血管刺激性试验

本试验观察了PGE1冻干乳采用注射用水复溶后耳缘静脉注射对家兔的血管刺激性反应，试验共设2组，分别为单次给药组和多次给药组，每组各6只动物，单次给药组每只动物给药1次，多次给药组每天给药1次，连续给药10天。两组均采用同体自身对照，PGE1冻干乳制剂复溶解药液右耳注射给药，0.5ml/只/次，对照侧(左耳)给予等容量生理盐水。

结果显示：给药和观察期间以及取材时观察，给药局部未见明显充血、红肿、溃疡和硬结等异常现象。病理组织学检查给药局部血管未见与药物相关的异常改变。在本试验条件下，PGE1冻干乳制剂浓度为5μg/ml，容量0.5ml/kg时，对血管组织无刺激性损伤作用。

试验例4：PGE1冻干乳制剂对家兔红细胞的体外溶血试验

取洁净试管12只编号，1～5号管为供试品溶液管，6号管为阴性对照管，7号管为阳性对照管。按下表所示依次加入2%兔红细胞悬液和5％葡萄糖注射液，混匀后，放置于37℃±0.5℃恒温箱放置半小时；然后分别加入不同量的复溶解后的依前列醇稳定化制剂或蒸馏水，摇匀，置37℃±0.5℃恒温箱中温育。开始时每隔15分钟观察一次，1小时后，每隔1小时观察一次，观察3小时。溶液澄明红色，管底无红细胞残留时为完全溶血；溶液澄明红色或棕色，管底有少量红细胞残留为部分溶血；红细胞全部下沉，上层液体无色澄明为无溶血；虽不溶血，溶液中有棕红色或红棕色絮状沉淀，振摇后不分散，表明有红细胞凝聚。由结果可知，在本试验条件下，浓度为5μg/mlPGE1冻干乳稳定化制剂复溶解后药液在体外对兔红细胞无溶血作用，不引起红细胞凝聚，可供静脉注射使用。

Claims (6)

1.一种稳定的PGE1冻干乳，该冻干乳中含有活性成分PGE1、油性溶剂、乳化剂，其特征在于其中还含有必需成分维生素E、精制蔗糖或葡萄糖和精制蔗糖组成的混合物，按照冷冻干燥前或后复溶后，每1000ml药液中以质量体积百分比计算，其中维生素E的质量百分比为0.005~0.1%；精制蔗糖或葡萄糖和精制蔗糖组成的混合物的质量百分比为5%~50%，葡萄糖和精制蔗糖组成的混合物中两者按照重量份计的比例1:1~1:5。

2.根据权利要求1所述的一种稳定的PGE1冻干乳，其特征在于所述油性溶剂选自大豆油或芝麻油中的任意一种或按照任意比例的混合物。

3.根据权利要求1所述的一种稳定的PGE1冻干乳，其特征在于乳化剂选自大豆磷脂、蛋黄磷脂、胆固醇中的任意一种或一种以上任意比例混合物。

4.根据权利要求1所述的一种稳定的PGE1冻干乳，其制备方法包括如下步骤：

（1）将处方量的活性成分PGE1和维生素E常温均匀分散于油性溶剂中作为油相；

（2）将处方量的乳化剂、等渗调节剂溶于注射用水中作为水相；

（3）将油相在搅拌的条件下加入水相中，或水相在搅拌的条件下加入油相中，在60-70℃的恒温水浴条件下初乳化，并加入pH调节剂调pH在6-10之间，得到初乳；

（4）将初乳通过均质机均质，得到均匀的乳状液A；

（5）将精制蔗糖或葡萄糖和精制蔗糖组成的混合物用注射用水溶解得到保护剂溶液B；

将溶液A与溶液B混合，加入pH调节剂调pH在6-8之间，定容，经冷冻干燥去除水分，制得。

5.根据权利要求4所述的一种稳定的PGE1冻干乳的制备方法，其特征在于：冷冻干燥的具体参数为预冻温度为-25℃--50℃；一次干燥温度为0℃--30℃，真空度为0.1-0.5mbar；二次干燥温度为20℃-60℃，真空度为0.001-0.1mbar。

6.根据权利要求4所述的一种稳定的PGE1冻干乳的制备方法，其特征在于：冷冻干燥的具体参数为预冻温度为-25℃--40℃；一次干燥温度为-10℃--25℃，真空度为0.1-0.3mbar；二次干燥温度为20℃-40℃，真空度为0.005-0.1mbar。