CN101439033A - 一种多烯紫杉醇脂质复合物及其注射用胶束组合物 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种多烯紫杉醇脂质复合物及其注射用胶束组合物，属于药物制剂。该多烯紫杉醇脂质复合物由治疗量的多紫杉醇、磷脂、胆固醇硫酸盐或/和类似胆固醇衍生物、附加剂与注射用水组成。通过将多烯紫杉醇脂质化，从而解决了注射剂的有机溶媒问题和表面活性剂过敏问题。本发明提供的多烯紫杉醇脂质复合物注射剂具有副作用小，血管刺激性低，载药量高，粒径分布窄、可滤过除菌，药物稳定性好等优点。

Description

一种多烯紫杉醇脂质复合物及其注射用胶束组合物

技术领域

本发明涉及一种多烯紫杉醇脂质复合物及其注射用胶束组合物，属于药物制剂领域。

背景技术

多西他赛(Docetaxel)，本品主要成份为多西份赛，其化学名称名{2Ar-[2aα，4β，4aβ，6β，9α(αR*，Bs*)，11α，12α，12aα，12bα]}-β-{[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]氨基}-α-羟基苯丙酸[12b-乙酰氧苯甲酰氧-2a，3，4，4a，5，6，9，10，11，12，12a，12b-十二氢-4，6，11-三羟基-4a，8，13，13-四甲基-5-氧代-7，11-亚甲基-1H-环癸五烯并[3，4]苯并[1，2-b]氧杂丁环-9-基]酯。其结构式为：

分子式：C43H53NO14，分子量：807.88

多西他赛为多紫杉醇类抗肿瘤药，通过干扰细胞有丝分裂和分裂间期细胞功能所必需的微管网络而起抗肿瘤作用。多西他赛可与游离的微管蛋白结合，促进微管蛋白装配成稳定的微管，同时抑制其解聚，导致丧失了正常功能的微管束的产生和微管的固定，从而抑制细胞的有丝分裂。多西他赛与微管的结合不改变原丝的数目。这一点与目前临床应用的大多数纺锤体毒性药物不同。

据文献报道，对癌症病人进行了剂量为20-115mg/m2，静脉滴注1-2小时时，其AUC呈剂量相关性。本品的药代特点符合三室药代动力学模型，α、β、γ半衰期分别为4分钟、36分钟11.1小时。初始阶段浓度迅速降低表明药物分布至周边室，后一时相部分原因是由于药物从周边室相对缓慢地消除。在1小时内静脉滴注给予多西他赛100mg/m2，平均峰浓度为3.7μg/ml·h，总体清除率和稳态分布为21L/h/m2，与113L。多西他赛及其代谢产物主要从粪便排泄。经粪便和尿排出的量分别约占所给剂量的75％和6％，仅有少部以原型排出。体外研究表明，多西他赛的血浆蛋白结合率超过约94-97％，地塞米松并不影响多西他赛与蛋白的结合。体外研究表明，多西他赛被CYP3A4同功酶所代谢，这种代谢可以被CYP3A4抑制剂所抑制。适应症为1、先期化疗失败的晚期或转移性非小细胞肺癌的治疗。除非属于临床禁忌，先期治疗应包括茵环类抗癌药。2、以顺铂为主的化疗失败的晚期或转移性非小细胞肺癌的治疗。

多西他赛属紫杉烷类化合物，其单独口服给的生物利用度公为8％，将其制成注射剂是提高其生物利用度的手段之一。多西他赛在水中的溶解度极低，仅为1μg/ml，严重限制了其临床使用。

目前临床上应用的多西他赛注射剂有冻干针和注射液，为两支西林瓶包装，其中一支为多西他赛的吐温溶液，另一支为乙醇水溶液。临床应用时，先将乙醇溶液注入多西他赛吐温溶液中，充分振摇5分钟后，观察澄明后才能给患者用药。由于多西他赛在水中的溶解度极低，稀释后的溶液不稳定，常常析晶。因制剂中含有乙醇，注射时一旦渗露到血管外，即会产生疼痛与红肿。部分病例可发生严重过敏反应，其特征为低血压与支气管痉挛，需要中断治疗。停止滴注并立即治疗后病人可恢复正常。部分病例也可发生轻度过敏反应。如脸红、伴有或不伴有骚痒的红斑、胸闷、背痛、呼吸困难、药物热或寒颤。

多西他赛只能用于静脉滴注。所有病人在接受多西他赛治疗期前均必须口服糖皮质激素类，如地塞米松，在多西他赛滴注一天前服用，每天16mg，持续至少3天，以预防过敏反应和体液潴留。多西他赛的推荐剂量为70-75mg/m2，静脉滴注一小时，每三周一次。根据计算病人所用药量，用注射器吸取所需剂量，稀释到5％葡萄糖注射液或0.9％氯化钠注射液中，轻轻摇动，混合均匀，最终浓度不超过0.74mg/ml。

为了解决注射剂的使用不便、疼痛和过敏问题，许多人都在研究改变溶媒、制成脂质体或制成乳剂等方式，以期得到不过敏，稳定或具有戎靶向性的制剂，但到目前为止还没有一个很好的解决方案。中国专利200510084055.6公开了一种含有多西他赛的脂肪乳剂及其制备方法，200610058758.6公开了多西他赛冻干粉针及其制备方法，200610154710.5公开了一种含有多西他赛的脂质微球、冻干脂质微球及制备方法，200710010637.9公开了多西他赛脂肪乳剂及其冻干剂与制备方法，200610012102.0公开了多西多紫杉醇静脉注射亚微乳剂及其制备方法，96112502.0公开了多紫杉醇水溶性粉针剂及其制备方法，200610082245.9公开了多烯多紫杉醇长循环脂质体剂型及其制备方法，200510029634.0公开了多烯多紫杉醇脂质体及其制备方法，200610135060.X公开了多烯多紫杉醇亚微乳注射剂及其制备方法。

发明内容

本发明提供了一种多烯紫杉醇脂质复合物及其注射用胶束组合物。该胶束使多紫杉醇具有更高的化学稳定性，不易降解；降低了多紫杉醇的局部刺激性，提高患者顺应性，加入长循环辅料还可避免体内网状内皮系统吞噬，延长药物有效时间。通过将多紫杉醇脂质化，从而解决了注射剂的有机溶媒问题和表面活性剂过敏问题。

本发明的又一个目的是提供一种制备本发明的多紫杉醇脂质复合物的方法。

为实现上述目的，本发明提供了一种多紫杉醇脂质复合物，其基本上由治疗有效量的多紫杉醇、磷脂、胆固醇硫酸盐或类似胆固醇衍生物、附加剂、长循环辅料和注射用水组成。在上述技术方案中，本发明提供的多紫杉醇脂质复合物及其注射用胶束组合物胶束含有以下成分：

多紫杉醇                                  0.000001～5wt％

磷脂                                      0.0001～20wt％

胆固醇硫酸盐或类似胆固醇衍生物            0.0001～20wt％

长循环辅料                                0～15wt％

附加剂                                    0～15wt％

注射用水                                  余量。

所述磷脂包括天然来源的磷脂与合成来源的磷脂，所述天然来源的磷脂为从植物或动物中通过物理加工方法提取出来的磷脂，如大豆卵磷脂、蛋黄卵磷脂、脑磷脂、磷脂酰肌醇、神经鞘磷脂、丝氨酸磷脂等；所述合成来源的磷脂为通过半合成或合成方法制得的磷脂，如氢化磷脂、多烯磷脂酰胆碱、DMPC、DPPC、DMPG、DPPG、DPPE、DSPE、DPPA、DSPA及其结构修饰物如PEG化衍生物DSPE-PEG2000等。优选的是，该磷脂为大豆卵磷脂。

所述胆固醇硫酸盐或/和类似胆固醇衍生物包括胆固醇硫酸钠、胆固醇硫酸钾、胆固醇磷酸钠、胆固醇磷酸钾、胆固醇磺酸钠、胆固醇磺酸钾和其它方式修饰的上述胆固醇衍生物及其任意组合。优选的是该胆固醇硫酸盐为胆固醇硫酸钠。

所述长循环辅料为PEG分子量为PEG分子量为1000～10000的硬脂酸酯、PEG分子量为1000～10000维生素E琥珀酸酯、PEG硬脂酸酯与分子量为200～10000的PEG的混合物、Myrj类、Brij类、PEG—二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺、PEG—二棕榈酰磷脂酰胆碱、PEG—二棕榈酰磷脂酰乙醇胺、神经节苷脂、聚丙烯酰胺、壳聚糖、聚乙二醇聚十六烷基腈基丙酸酯、分子量为200～10000的PEG、PVP或PVA及其任意组合。优选的是神经节苷脂、PEG—二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺、PEG—二棕榈酰磷脂酰胆碱及其任意组合。

本发明提供的多紫杉醇脂质复合物进一步包括0～15wt％的附加剂，优选包括0～5wt％的附加剂。所述附加剂可起到增加制剂稳定性、调节渗透压、抗氧化等作用，选自渗透压调节剂，如丙三醇、丙二醇、甘露醇等；界面膜稳定剂，如油酸、油酸钠等；金属离子络合剂，如EDTA、乙二按四乙酸二钠盐、钙盐等；防腐剂，如苯扎溴胺、苯扎氯胺、对羟基苯甲酸酯类、山梨酸等；抗氧剂，如维生素C、维生素E等；分子量为200～10000的PEG、PVP或PVA及其任意组合。优选的是，该附加剂为丙三醇、甘露醇、油酸钠、EDTA、维生素C、维生素E、PEG及其任意组合。

本发明提供的多紫杉醇脂质复合物，具有以下优点：

1、与多紫杉醇的注射液相比，本发明的制剂使多紫杉醇包裹在脂质复合物中，减少药物与水的接触，且可滤过除菌，降低高温灭菌导致的多紫杉醇失活，使之稳定性增加且刺激性降低。

2、与多紫杉醇的乳剂、脂质体相比，本发明的制剂通过长循环辅料对脂质复合物表面进行修饰，有助于避免体内肝脾网状内皮系统的吞噬，延长药物在体内的循环时间。

3、本发明的制剂可用生理盐水或葡萄糖注射液进行稀释或分散，用于静脉注射给药，优选技术方案中脂质复合物粒度小(平均粒度小于100nm)，分布较窄，可滤过除菌，且药物包封率高，有助于提高注射安全性。

本发明还提供了一种本发明的多紫杉醇脂质复合物的制备方法，该方法包括以下步骤：

(1)将处方量的多紫杉醇、磷脂、胆固醇硫酸盐或类似胆固醇衍生物或、长循环辅料、附加剂分散于有机溶剂中，以构成有机相；

(2)将长循环辅料、附加剂溶于注射用水中，以构成水相；

(3)在0～60℃的温度下，在搅拌或/和高剪切条件下将所述有机相和水相混合，再采用减压蒸发等方法除去有机溶剂，从而制得多紫杉醇脂质复合物。

(4)将所得多紫杉醇脂质复合物用0.22μm的滤膜滤过除菌，分装，置于4℃下密封保存，即得注射液，其粒径在20-200nm之间。

(5)将上述所得胶束加入冻干保护剂进行冻干处理，即得粉针剂，加溶媒再分散后，其粒径在20-200nm之间。其中，对所得到的多紫杉醇脂质复合物进行冻干处理的工艺可为：将1～40wt％(重量比)的冻干保护剂溶于本发明的多紫杉醇脂质复合物的水分散体中，该冻干保护剂选自海藻糖、甘露醇、蔗糖、葡萄糖、氯化钠、乳糖、山梨醇、右旋糖苷、甘油或甘氨酸及其任意组合，然后分装于西林瓶中，并置于冷冻干燥机中-45℃预冻3h，然后以5℃/h升温至-50℃，维持10h，再以5℃/h升温至0℃，维持8h，最后升温至10℃保温10小时后出箱，加塞密封即可。

实施例1

取多紫杉醇500mg，蛋黄卵磷脂2.0g，胆固醇硫酸钠400mg，维生素E 10mg，溶解于30℃的甲醇中作为有机相；将PEG400 0.5g溶于90ml注射用水中，加热至30℃作为水相，在30℃搅拌下将有机相注入水相，持续搅拌5min，再减压旋转蒸去甲醇，得带蓝色乳光的多紫杉醇脂质复合物，测其平均粒径为65±15nm。加注射用水补至总体积为100ml，用0.22μm的微孔滤膜滤过除菌，分装4ml/支，121℃灭菌30min，即得注射液。

在制得的脂质复合物加入海藻糖5g，注射用水至100ml，用0.22μm的微孔滤膜滤过除菌，分装4ml/支，无菌操作下冷冻干燥，即得。将冻干后的制剂用生理盐水稀释，测其平均粒径为73±16nm。

实施例2

取多紫杉醇1.0g，大豆卵磷脂3.0g，胆固醇硫酸钠500mg，溶解于35℃的无水乙醇中作为有机相；将PEG200 1.0g溶于90ml注射用水中，加热至35℃作为水相，在35℃搅拌下将有机相注入水相，持续搅拌10min，再减压旋转蒸去乙醇，得带蓝色乳光的多紫杉醇脂质复合物，测其平均粒径为72±120nm。加注射用水补至总体积为100ml，用0.22μm的微孔滤膜滤过除菌，分装4ml/支，121℃灭菌30min，即得注射液。

在制得的脂质复合物加入海藻糖5g，注射用水至100ml，用0.22μm的微孔滤膜滤过除菌，分装4ml/支，无菌操作下冷冻干燥，即得。将冻干后的制剂用生理盐水稀释，测其平均粒径为76±16nm。

实施例3

取多紫杉醇500mg，大豆卵磷脂10g，胆固醇磺酸钠5g，溶解于35℃的四氢呋喃中作为有机相；将poloxamer 188 5g溶于950ml注射用水中，加热至35℃作为水相，在35℃搅拌下将有机相注入水相，持续搅拌10min，再减压旋转蒸去四氢呋喃，得带蓝色乳光的多紫杉醇脂质复合物，测其平均粒径为70±19nm加注射用水补至总体积为100ml，用0.22μm的微孔滤膜滤过除菌，分装4ml/支，121℃灭菌30min，即得注射液。

在制得的脂质复合物加入海藻糖5g，注射用水至100ml，用0.22μm的微孔滤膜滤过除菌，分装4ml/支，无菌操作下冷冻干燥，即得。将冻干后的制剂用生理盐水稀释，测其平均粒径为74±18nm。

实施例4

表1列举了几种多紫杉醇脂质复合物的处方(表中所列辅料为权利要求1-11所述)及冻干针剂和注射剂的规格(以多紫杉醇计)，但所用处方组成、各辅料配比及制剂规格不限于下表所列浓度。制备方法与工艺同实施例1-3。

表1  多紫杉醇脂质复合物处方

 

制剂规格(以多紫杉醇计)	磷脂	胆固醇硫酸盐或/和类似胆固醇衍生物	长循环辅料	冻干保护剂	附加剂	注射用水
							10mg/支	大豆磷脂(1％)	胆固醇硫酸钠(0.4％)	—	海藻糖(5％)	—	补至足量(最后以冷冻干燥除去)
40mg/支	蛋黄磷脂(2％)	胆固醇硫酸钾(0.6％)	PEG4000维生素E琥珀酸酯(0.1％)	乳糖/甘露醇(6％)	维生素C(0.01％)	补至足量(最后以冷冻干燥除去)
							100mg/支	神经鞘磷脂/大豆磷脂(3％)	胆固醇磺酸钠(2％)	PEG-10000维生素E琥珀酸酯(0.05％)	蔗糖/甘露醇(6％)	油酸钠(0.2％)	补至足量(最后以冷冻干燥除去)

 

200mg/支	氢化磷脂(2.5％)	胆固醇磺酸钾(1.5％)	—	蔗糖(5％)	—	补至足量(最后以冷冻干燥除去)
							500mg/支	多烯磷脂酰胆碱(2％)	胆固醇磷酸钠(1.5％)	PEG4000—DSPE(0.5％)	海藻糖/右旋糖苷(15％)	维生素E(0.01％)	补至足量(最后以冷冻干燥除去)
10mg/m1	DMPC/DPPC/大豆磷脂(0.8％)	胆固醇磷酸钾(0.2％)	PEG2000—DPPP(0.2％)	—	—	补至足量
							20mg/m	DMPG/DPPG(1.2％)	胆固醇硫酸钠/胆固醇磺酸钾(0.4％)	PEG10000—DPPP(0.2％)	—	—	补至足量
50mg/m1	DPPE/DSPE/氢化磷脂(2％)	胆固醇硫酸钾(0.7％)	壳聚糖(0.5％)	—	—	补至足量

 

100mg/ml	DPPA/DSPA/卵磷脂(2.2％)	胆固醇磺酸钠(1％)	聚乙二醇聚十六烷基腈基丙酸酯(0.2％)	—	—	补至足量
							200mg/ml	DSPE-PEG2000/蛋黄磷脂(2.5％)	胆固醇磺酸钾(1％)	神经节苷脂(0.6％)	—	—	补至足量

实施例5

(1)刺激性试验

取健康家兔6只分别固定于兔箱内，随机分成2组，每组3只家兔，左右耳缘静脉分别滴注生理盐水和多紫杉醇注射液、多紫杉醇脂质复合物注射液。即左耳给生理盐水，右耳给多紫杉醇注射液或多紫杉醇脂质复合物注射液(用0.9％的氯化钠注射液稀释)。多紫杉醇注射液和多紫杉醇脂质复合物注射液给药剂量相同，均为10mg/只，溶液总体积均为12ml/只/次。左耳耳缘静脉滴注生理盐水，滴注量及滴注速度同检品组。每日各滴注1次，连续3天，观察兔耳缘静脉刺激反应。于末次给药24h后将兔子放血处死，取下两耳进行组织切片检查(切片位置距进针位置2.6cm)，根据病变程度，记为“-”，“+”，“++”，“+++”，“++++”。切片病理学检查结果表明：

1)左耳阴性对照(氯化钠注射液)的各取材点耳缘静脉管壁完整，血管无明显扩张。内皮细胞清晰、无肿胀、坏死，管壁及管周无明显炎症细胞浸润，管壁内未见血栓形成等病变。

2)右耳阳性对照(多紫杉醇注射液)组的各取材点血管明显扩张为“++”，内皮细胞肿胀、坏死为“++”，见血栓形成为“++”，管壁及管周见出血及炎症细胞浸润为“+++”。

3)右耳多紫杉醇脂质复合物注射液组的各取材点耳缘静脉管壁完整，血管无明显扩张。管腔内未见血栓形成等病变。多紫杉醇脂质复合物组形态学明显好于市售多紫杉醇注射液组，无明显刺激性。

试验结果表明，多紫杉醇脂质复合物注射液对家兔耳静脉血管未见明显刺激作用。

(2)溶血性试验

取家兔血10mL，置于涂有肝素的离心试管中，4000rpm离心5min，弃去上层血浆，将血细胞用生理盐水10mL冲洗多次，每次冲洗后离心除去上清液，直至上清液不呈红色为止，然后吸取一定量红细胞，按体积比稀释制备2％的红细胞混悬液，4℃冰箱中冷藏备用。记录方式：

“--”凝集：不溶血，但出现红细胞凝聚成团，摇晃后能重新分开。

“-”不溶血：红细胞全部下沉，上层为淡黄色略微混浊的溶液。

“+”部分溶血：溶液呈淡黄色或浅红色，试管底部有少量红细胞残留。

“++”溶血：溶液呈红色，试管底部无红细胞残留。

表2  溶血性试验结果

结果显示，所制的多紫杉醇脂质复合物溶液未引起红细胞的溶血反应，符合静脉注射的标准。

(3)过敏性试验

将实施例1所制的多紫杉醇脂质复合物注射液加用0.9％氯化钠注射液稀释，制成供试品溶液。采用临床推荐剂量1mg/ml/kg，给豚鼠腹腔注射该供试品溶液0.5ml，隔日一次，共三次，给药后第14天及第21天分别股静脉注射该供试品溶液1.0ml，结果均未见豚鼠有过敏反应。给予2％新鲜蛋清的豚鼠在给予蛋清后第14天及第21天分别经股静脉注射蛋清后均出现过敏反应，且皆于15min内死亡。

结果显示，所制多紫杉醇脂质复合物溶液不引起豚鼠过敏反应，符合静脉注射的标准。

Claims (10)

1、一种多烯紫杉醇脂质复合物，由治疗有效量的多烯紫杉醇、磷脂、胆固醇硫酸盐或/和类似胆固醇衍生物组成。

2、一种由权利要求1所述的多烯紫杉醇脂质复合物组成的注射用胶束组合物，其含有以下成分：

多紫杉醇                              0.000001～20wt％

磷脂                                  0.0001～20wt％

胆固醇硫酸盐或/和类似胆固醇衍生物      0.0001～20wt％

长循环辅

                            0～15wt％

附加剂                                0～15wt％

注射用水                              余量。

3、根据权利要求1所述多烯紫杉醇脂质复合物，其特征在于：多紫杉醇脂质复合物颗粒悬浮于水性介质中，粒径在20-200nm之间.

4、根据权利要求1和2所述的一种多烯紫杉醇脂质复合物及其注射用胶束组合物，其中所述磷脂选自所有天然来源和合成来源的磷脂及其任意组合。

5、根据权利要求4所述的一种多烯紫杉醇脂质复合物及其注射用胶束组合物，所述天然来源的磷脂为从植物或动物中通过各种加工方法提取出来的磷脂，如大豆磷脂、蛋黄磷脂、脑磷脂、磷脂酰肌醇、神经鞘磷脂、丝氨酸磷脂等；所述合成来源的磷脂为通过半合成或合成方法制得的磷脂，如氢化磷脂、多烯磷脂酰胆碱、DMPC、DPPC、DMPG、DPPG、DPPE、DSPE、DPPA、DSPA及其结构修饰物如PEG化衍生物DSPE-PEG2000等。

6、根据权利要求1和2所述的一种多烯紫杉醇脂质复合物及其注射用胶束组合物，其中所述胆固醇硫酸盐或/和类似胆固醇衍生物包括胆固醇硫酸钠、胆固醇硫酸钾、胆固醇磷酸钠、胆固醇磷酸钾、胆固醇磺酸钠、胆固醇磺酸钾和其它方式修饰的上述胆固醇衍生物及其任意组合。

7、根据权利要求2所述的一种多烯紫杉醇脂质复合物及其注射用胶束组合物，其中所述长循环辅料为PEG分子量为1000～10000的硬脂酸酯、PEG分子量为1000～10000维生素E琥珀酸酯、PEG硬脂酸酯与分子量为200～10000的PEG的混合物、Myrj类、Brij类、PEG—二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺、PEG—二棕榈酰磷脂酰胆碱、PEG—二棕榈酰磷脂酰乙醇胺、神经节苷脂、聚丙烯酰胺、壳聚糖、聚乙二醇聚十六烷基腈基丙酸酯、分子量为200～10000的PEG、PVP或PVA及其任意组合；其中所述附加剂选自渗透压调节剂、界面膜稳定剂、金属离子络合剂、防腐剂、抗氧剂、分子量为200～10000的PEG、PVP或PVA及其任意组合。

8、一种制备如权利要求1～7所述的一种多烯紫杉醇脂质复合物及其注射用胶束组合物的方法，该方法包括以下步骤：

(1)将处方量的多紫杉醇、磷脂、胆固醇硫酸盐或类似胆固醇衍生物或、长循环辅料、附加剂分散于有机溶剂中，以构成有机相；

(2)将长循环辅料、附加剂溶于注射用水中，以构成水相；

(3)在0～60℃的温度下，在搅拌或/和高剪切条件下将所述有机相和水相混合，再采用减压蒸发等方法除去有机溶剂，从而制得多紫杉醇脂质复合物。

(4)将所得多紫杉醇脂质复合物用0.22μm的滤膜滤过除菌，分装即注射液，粒径为20-200nm。

9、根据权利要求8所述的一种多烯紫杉醇脂质复合物及其注射用胶束组合物的方法，其中所述有机溶剂选自二氯甲烷、氯仿、丙酮、甲醇、乙醇、乙醚、四氢呋喃或异丙醇及其任意组合。

10、根据权利要求8所述的一种多烯紫杉醇脂质复合物及其注射用胶束组合物的方法，其中向所述制得的多紫杉醇脂质复合物进一步加入冻干保护剂以制成冻干制剂，临用前加无菌注射用水或生理盐水重建后静脉注射或肌注给药，粒径为20-200nm；上述冻干保护剂选自海藻糖、甘露醇、蔗糖、葡萄糖、氯化钠、乳糖、山梨醇、右旋糖苷、甘氨酸及其任意组合。