CN101439034A - 一种丹参酮ⅱa脂质复合物及其注射用胶束组合物 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种丹参酮IIA脂质复合物及其注射胶束用组合物。该丹参酮IIA脂质复合物由治疗量的丹参酮IIA、磷脂、胆固醇硫酸盐或/和类似胆固醇衍生物、附加剂与注射用水组成。通过将丹参酮IIA脂质化，从而解决了丹参酮IIA水中不溶，无法直接将其制成注射剂的问题。本发明提供的丹参酮IIA脂质复合物注射剂具有副作用小，血管刺激性低，载药量高，粒径分布窄、可滤过除菌，药物稳定性好等优点。

Description

一种丹参酮ⅡA脂质复合物及其注射用胶束组合物

技术领域

本发明属于药物制剂领域，涉及一种丹参酮IIA脂质复合物的制备及其注射用胶束组合物。

背景技术

丹参酮IIA(Tanshinone IIA)，CAS NO.：568-72-9，分子式：C₁₉H₁₈O₃分子量：294.33，结构式为：

The Structure of Tanshinon IIA The Structure of Sodium Tanshinon IIA 

为唇形科植物丹参(Salvia miltiorrhiza Bge)的干燥根及根茎的提取物。结晶粉末为红色熔点为209℃～210℃，易溶于乙醇，丙酮，乙醚等有机溶剂，微溶于水。本品能增加冠脉流量，改善缺血区心肌的侧枝循环及局部供血，改善缺氧心肌的代谢紊乱，提高心肌耐缺氧能力，抑制血小板聚集及抗血栓形成，缩小实验动物缺血心肌梗死面积，在一定剂量下亦能增强心肌收缩力。适应症：可用于冠心病、心绞痛、心肌梗死，也可用于室性早博。本品对各种类型的心绞痛有疗效，扩张冠状动脉，增加冠状动脉血流量，减慢心率，增加心肌收缩，抑制凝血，促进组织细胞修复，降低血脂，保护红细胞生长。适用于冠心病心绞痛和心肌梗赛、脑动脉和视网膜及外周静脉血栓抑制剂，可以治疗白塞氏综合症，结节性红斑。本品的衍生物丹参酮IIA磺酸钠可用于肌注、静注或静滴：每日1次40～80mg。推注用25％葡萄溏液20ml稀释。静滴用5％葡萄糖液250～500ml稀释。

丹参酮IIA的亲水/亲脂指数为74/401＝0.197，要将其直接制成水溶液十分困难，因此限制其临床使用。丹参酮IIA磺酸钠虽然增加了丹参酮IIA的水溶性，但使丹参酮IIA的脂溶性减弱，致使其不易进入组织，尤其不易透过血脑屏障进入脑组织，使其作用范围变窄。由于其在血液中的半衰期短，因此静滴时需用较大剂量。磺酸钠盐为离子型化合物，较难透过以脂质及蛋白为基础的生物膜结构系统。对结核杆菌的抑菌活性实验结果表明，丹参酮IIA的MIC为0.31μg/ml，而丹参酮IIA磺酸钠的MIC为5μg/ml(《中国药科大学学报》1998，4：258)。同时因为需要对丹参酮IIA进行磺化反应，增加了不必要的步骤。

发明内容

胆固醇硫酸钠

胆固醇是一种中性脂质，亦属于双亲分子，其结构与胆酸相似，但亲油性强于亲水性，经衍生化后的胆固醇酰硫酸钠亲水性增强。与胆盐相比亲脂性比亲水性强得多，因此对亲脂性药物的包容性更强。由于其与硫酸是以酯键形式结合，因此，进入体内后可以快速水解成胆固醇，而成为体的固有成分之一，毒性极小。胆固醇酰硫酸钠可以通过亲脂性部分的疏水力以及可能也通过亲水性部分的极性亲和力与丹参酮IIA形成按照一定分子摩尔数比的多分子复合物。这种复合物也可以和磷脂的亲水头部和两个疏水的尾部产生交连作用，增加复合物的物理化学稳定性。这种脂质复合物在水或以缓冲液为水化介的溶剂中可自发形成胶束。

将丹参酮IIA、磷脂和胆固醇硫酸钠溶解在有机相中，再将此有机相注入到缓冲液中时，有机相便开始在缓冲液中扩散，有机相浓度降低，药物、磷脂和胆固醇硫酸钠在有机相中的溶解度下降，不能溶解的药物和磷脂、胆固醇硫酸钠相互结合形成一种分子复合物以胶体的形式分散在缓冲液中，随有机相浓度的继续降低，剩下的丹参酮IIA和磷脂、胆固醇硫酸钠同样结合在一起以胶体形式分散在缓冲液中，如此反复，至全部的药物和磷脂、胆固醇硫酸钠形成复合物而分散。

所制药物脂质复合物属于一种胶体分散体系，由于其粒径在100nm以下，所以丹参酮IIA脂质复合物的灭菌采用过滤过0.22μm滤膜灭菌法。从而解决了脂质体、乳剂等微粒制剂因无法灭菌或灭菌后粒径增大、药物降解等问题，为工业化生产铺平了道路

本发明要解决的技术问题是采用药剂手段，将丹参酮IIA制成适合注射给药的剂型，既能保留丹参酮IIA可顺利通过细胞膜的特性。又能分散在水性介质中，形成胶束，便于临床肌注射或静滴给药。加入长循环辅料还可避免体内网状内皮系统吞噬，延长药物有效时间。

本发明的又一个目的是提供一种制备本发明的丹参酮IIA脂质复合物及其注射用胶束组合物的方法。

为实现上述目的，本发明提供了一种丹参酮IIA脂质复合物及其注射用胶束组合物，由治疗有效量的丹参酮IIA、磷脂、胆固醇硫酸盐或类似胆固醇衍生物、附加剂、长循环辅料和注射用水组成。

在上述技术方案中，本发明提供的丹参酮IIA脂质复合物及其注射用胶束组合物含有以下成分：

丹参酮IIA                               1～20wt％

磷脂                                    0.0001～20wt％

胆固醇硫酸盐或类似胆固醇衍生物          0.0001～20wt％

长循环辅料                              0～15wt％

附加剂                                  0～15wt％

注射用水                                余量。

磷脂包括天然来源的磷脂与合成来源的磷脂，所述天然来源的磷脂为从植物或动物中通过物理加工方法提取出来的磷脂，如大豆卵磷脂、蛋黄卵磷脂、脑磷脂、磷脂酰肌醇、神经鞘磷脂、丝氨酸磷脂等；所述合成来源的磷脂为通过半合成或合成方法制得的磷脂，如氢化磷脂、多烯磷脂酰胆碱、DMPC、DPPC、DMPG、DPPG、DPPE、DSPE、DPPA、DSPA及其结构修饰物如PEG化衍生物DSPE-PEG2000等。优选的是，该磷脂为大豆卵磷脂。

胆固醇硫酸盐或/和类似胆固醇衍生物包括胆固醇硫酸钠、胆固醇硫酸钾、胆固醇磷酸钠、胆固醇磷酸钾、胆固醇磺酸钠、胆固醇磺酸钾和其它方式修饰的上述胆固醇衍生物及其任意组合。优选的是该胆固醇硫酸盐为胆固醇硫酸钠。

长循环辅料为PEG分子量为PEG分子量为1000～10000的硬脂酸酯、PEG分子量为1000～10000维生素E琥珀酸酯、PEG硬脂酸酯与分子量为200～10000的PEG的混合物、Myrj类、Brij类、PEG—二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺、PEG—二棕榈酰磷脂酰胆碱、PEG—二棕榈酰磷脂酰乙醇胺、神经节苷脂、聚丙烯酰胺、壳聚糖、聚乙二醇聚十六烷基腈基丙酸酯、分子量为200～10000的PEG、PVP或PVA及其任意组合。优选的是神经节苷脂、PEG—二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺、PEG—二棕榈酰磷脂酰胆碱及其任意组合。

本发明提供的丹参酮IIA脂质复合物进一步包括0～15wt％的附加剂，优选包括0～5wt％的附加剂。所述附加剂可起到增加制剂稳定性、调节渗透压、抗氧化等作用，选自渗透压调节剂，如丙三醇、丙二醇、甘露醇等；界面膜稳定剂，如油酸、油酸钠等；金属离子络合剂，如EDTA、乙二按四乙酸二钠盐、钙盐等；防腐剂，如苯扎溴胺、苯扎氯胺、对羟基苯甲酸酯类、山梨酸等；抗氧剂，如维生素C、维生素E等；分子量为200～10000的PEG、PVP或PVA及其任意组合。优选的是，该附加剂为丙三醇、甘露醇、油酸钠、EDTA、维生素C、维生素E、PEG及其任意组合。

本发明还提供了一种本发明的丹参酮IIA脂质复合物及其注射用胶束组合物的制备方法，该方法包括以下步骤：

(1)将处方量的丹参酮IIA、磷脂、胆固醇硫酸盐或类似胆固醇衍生物或、长循环辅料、附加剂分散于有机溶剂中，以构成有机相；

(2)将长循环辅料、附加剂溶于注射用水中，以构成水相；

(3)在0～60℃的温度下，在搅拌或/和高剪切条件下将所述有机相和水相混合，再采用减压蒸发等方法除去有机溶剂，从而制得丹参酮IIA脂质复合物。

(4)将所得丹参酮IIA脂质复合物用0.22μm的滤膜滤过除菌，分装，置于4℃下密封保存，即得注射液，其粒径在20-200nm之间。

(5)将上述所得胶束加入冻干保护剂进行冻干处理，即得粉针剂，加溶媒再分散后，其粒径在20-200nm之间。其中，对所得到的丹参酮IIA脂质复合物进行冻干处理的工艺可为：将1～40wt％(重量比)的冻干保护剂溶于本发明的丹参酮IIA脂质复合物的水分散体中，该冻干保护剂选自海藻糖、甘露醇、蔗糖、葡萄糖、氯化钠、乳糖、山梨醇、右旋糖苷、甘油或甘氨酸及其任意组合，然后分装于西林瓶中，并置于冷冻干燥机中-45℃预冻3h，然后以5℃/h升温至-50℃，维持10h，再以5℃/h升温至0℃，维持8h，最后升温至10℃保温10小时后出箱，加塞密封即可。

具体实施方式

实施例1

取丹参酮IIA 500mg，蛋黄卵磷脂2.0g，胆固醇硫酸钠400mg，维生素E 10mg，溶解于30℃的甲醇中作为有机相；将PEG400 0.5g溶于90ml注射用水中，加热至30℃作为水相，在30℃搅拌下将有机相注入水相，持续搅拌5min，再减压旋转蒸去甲醇，得带蓝色乳光的丹参酮IIA脂质复合物，测其平均粒径为82±17nm。加注射用水补至总体积为100ml，用0.22μm的微孔滤膜滤过除菌，分装2ml/支，121℃灭菌30min，即得注射液。

在制得的脂质复合物加入海藻糖5g，注射用水至100ml，用0.22μm的微孔滤膜滤过除菌，分装2ml/支，无菌操作下冷冻干燥，即得。将冻干后的制剂用生理盐水稀释，测其平均粒径为93±20nm。

实施例2

取丹参酮IIA 1.0g，大豆卵磷脂3.0g，胆固醇硫酸钠500mg，溶解于35℃的无水乙醇中作为有机相；将PEG200 1.0g溶于90ml注射用水中，加热至35℃作为水相，在35℃搅拌下将有机相注入水相，持续搅拌10min，再减压旋转蒸去乙醇，得带蓝色乳光的丹参酮IIA脂质复合物，测其平均粒径为72±12nm。加注射用水补至总体积为100ml，用0.22μm的微孔滤膜滤过除菌，分装2ml/支，121℃灭菌30min，即得注射液。

在制得的脂质复合物加入海藻糖5g，注射用水至100ml，用0.22μm的微孔滤膜滤过除菌，分装4ml/支，无菌操作下冷冻干燥，即得。将冻干后的制剂用生理盐水稀释，测其平均粒径为82±17nm。

实施例3

取丹参酮IIA 2.0mg，大豆卵磷脂10g，胆固醇磺酸钠5g，溶解于35℃的四氢呋喃中作为有机相；将poloxamer 1885g溶于950ml注射用水中，加热至35℃作为水相，在35℃搅拌下将有机相注入水相，持续搅拌10min，再减压旋转蒸去四氢呋喃，得带蓝色乳光的丹参酮IIA脂质复合物，测其平均粒径为65±23nm加注射用水补至总体积为100ml，用0.22μm的微孔滤膜滤过除菌，分装2ml/支，121℃灭菌30min，即得注射液。

在制得的脂质复合物加入海藻糖5g，注射用水至100ml，用0.22μm的微孔滤膜滤过除菌，分装4ml/支，无菌操作下冷冻干燥，即得。将冻干后的制剂用生理盐水稀释，测其平均粒径为70±18nm。

实施例4

表1列举了几种丹参酮IIA脂质复合物及其注射用胶束组合物的处方及冻干针剂和注射剂的规格，但所用处方组成、各辅料配比及制剂规格不限于下表所列浓度。制备方法与工艺同实施例1-3。

表1 丹参酮IIA脂质复合物处方

 

制剂规格(以丹参酮IIA计)	磷脂	胆固醇硫酸盐或/和类似胆固醇衍生物	长循环辅料	冻干保护剂	附加剂	注射用水
							10mg/支	大豆磷脂(1％)	胆固醇硫酸钠(0.4％)	—	海藻糖(5％)	—	补至足量(最后以冷冻干燥除去)
40mg/支	蛋黄磷脂(2％)	胆固醇硫酸钾(0.6％)	PEG4000维生素E琥珀酸酯(0.1％)	乳糖/甘露醇(6％)	维生素C(0.01％)	补至足量(最后以冷冻干燥除去)
							100mg/支	神经鞘磷脂/大豆磷脂(3％)	胆固醇磺酸钠(2％)	PEG-10000维生素E琥珀酸酯(0.05％)	蔗糖/甘露醇(6％)	油酸钠(0.2％)	补至足量(最后以冷冻干燥除去)
200mg/	氢化磷	胆固醇磺酸	—	蔗糖	—	补至足量(最

 

支	脂(2.5％)	钾(1.5％)		(5％)		后以冷冻干燥除去)
							500mg/支	多烯磷脂酰胆碱(2％)	胆固醇磷酸钠(1.5％)	PEG4000—DSPE(0.5％)	海藻糖/右旋糖苷(15％)	维生素E(0.01％)	补至足量(最后以冷冻干燥除去)
10mg/m1	DMPC/DPPC/大豆磷脂(0.8％)	胆固醇磷酸钾(0.2％)	PEG2000—DPPP(0.2％)	—	—	补至足量
							20mg/m1	DMPG/DPPG(1.2％)	胆固醇硫酸钠/胆固醇磺酸钾(0.4％)	PEG10000—DPPP(0.2％)	—	—	补至足量
50mg/m1	DPPE/DSPE/氢化磷脂(2％)	胆固醇硫酸钾(0.7％)	壳聚糖(0.5％)	—	—	补至足量
							100mg/	DPPA/DS	胆固醇磺酸	聚乙二	—	—	补至足量

 

ml	PA/卵磷脂(2.2％)	钠(1％)	醇聚十六烷基腈基丙酸酯(0.2％)
							200mg/ml	DSPE-PEG2000/蛋黄磷脂(2.5％)	胆固醇磺酸钾(1％)	神经节苷脂(0.6％)	—	—	补至足量

实施例5

(1)刺激性试验

取健康家兔6只分别固定于兔箱内，随机分成2组，每组3只家兔，左右耳缘静脉分别滴注生理盐水和丹参酮IIA注射液、丹参酮IIA脂质复合物注射液。即左耳给生理盐水，右耳给丹参酮IIA注射液或丹参酮IIA脂质复合物注射液(用0.9％的氯化钠注射液稀释)。丹参酮IIA注射液和丹参酮IIA脂质复合物注射液给药剂量相同，均为10mg/只，溶液总体积均为12ml/只/次。左耳耳缘静脉滴注生理盐水，滴注量及滴注速度同检品组。每日各滴注1次，连续3天，观察兔耳缘静脉刺激反应。于末次给药24h后将兔子放血处死，取下两耳进行组织切片检查(切片位置距进针位置2.6cm)，根据病变程度，记为“-”，“+”，“++”，“+++”，“++++”。切片病理学检查结果表明：

1)左耳阴性对照(氯化钠注射液)的各取材点耳缘静脉管壁完整，血管无明显扩张。内皮细胞清晰、无肿胀、坏死，管壁及管周无明显炎症细胞浸润，管壁内未见血栓形成等病变。

2)右耳阳性对照(丹参酮IIA注射液)组的各取材点血管明显扩张为“++”，内皮细胞肿胀、坏死为“++”，见血栓形成为“++”，管壁及管周见出血及炎症细胞浸润为“+++”。

3)右耳丹参酮IIA脂质复合物注射液组的各取材点耳缘静脉管壁完整，血管无明显扩张。管腔内未见血栓形成等病变。丹参酮IIA脂质复合物组形态学明显好于市售丹参酮IIA注射液组，无明显刺激性。

试验结果表明，丹参酮IIA脂质复合物注射液对家兔耳静脉血管未见明显刺激作用。

(2)溶血性试验

取家兔血10mL，置于涂有肝素的离心试管中，4000rpm离心5min，弃去上层血浆，将血细胞用生理盐水10mL冲洗多次，每次冲洗后离心除去上清液，直至上清液不呈红色为止，然后吸取一定量红细胞，按体积比稀释制备2％的红细胞混悬液，4℃冰箱中冷藏备用。

记录方式：

“——”凝集：不溶血，但出现红细胞凝聚成团，摇晃后能重新分开。

“—”不溶血：红细胞全部下沉，上层为淡黄色略微混浊的溶液。

“+”部分溶血：溶液呈淡黄色或浅红色，试管底部有少量红细胞残留。

“++”溶血：溶液呈红色，试管底部无红细胞残留。

表2　溶血性试验结果

结果显示，所制的丹参酮IIA脂质复合物溶液未引起红细胞的溶血反应，符合静脉注射的标准。

Claims (10)

1、一种丹参酮IIA脂质复合物，由治疗有效量的丹参酮IIA、磷脂、胆固醇硫酸盐或/和类似胆固醇衍生物组成。

2、一种由权利要求1所述的丹参酮IIA脂质复合物组成的注射用胶束组合物，其含有以下成分：

丹参酮IIA                                   0.000001～20wt％

磷脂                                        0.0001～20wt％

胆固醇硫酸盐或/和类似胆固醇衍生物            0.0001～20wt％

附加剂                                      0～15wt％

注射用水                                    余量。

3、根据权利要求1所述丹参酮IIA脂质复合物，其特征在于：丹参酮IIA脂质复合物颗粒悬浮于水性介质中粒径在20-200nm之间。

4、根据权利要求1～2任一项所述的丹参酮IIA脂质复合物，其特征在于：其中所述磷脂选自所有天然来源和合成来源的磷脂及其任意组合。

5、根据权利要求4所述的丹参酮IIA脂质复合物，其特征在于：所述天然来源的磷脂为从植物或动物中通过各种加工方法提取出来的磷脂，如大豆磷脂、蛋黄磷脂、脑磷脂、磷脂酰肌醇、神经鞘磷脂、丝氨酸磷脂；所述合成来源的磷脂为通过半合成或合成方法制得的磷脂，如氢化磷脂、多烯磷脂酰胆碱、DMPC、DPPC、DMPG、DPPG、DPPE、DSPE、DPPA、DSPA及其结构修饰物如PEG化衍生物DSPE-PEG2000。

6、根据权利要求1～2任一项所述的丹参酮IIA脂质复合物，其特征在于：其中所述胆固醇硫酸盐或/和类似胆固醇衍生物包括胆固醇硫酸钠、胆固醇硫酸钾、胆固醇磷酸钠、胆固醇磷酸钾、胆固醇磺酸钠、胆固醇磺酸钾和其它方式修饰的上述胆固醇衍生物及其任意组合；所述附加剂选自渗透压调节剂、界面膜稳定剂、金属离子络合剂、防腐剂、抗氧剂、分子量为200～10000的PEG、PVP或PVA及其任意组合。

7、一种制备权利要求1～6所述的丹参酮IIA脂质复合物的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：

(1)将处方量的丹参酮IIA、磷脂、胆固醇硫酸盐或类似胆固醇衍生物或、长循环辅料、附加剂分散于有机溶剂中，以构成有机相；

(2)将长循环辅料、附加剂溶于注射用水中，以构成水相；

(3)在0～60℃的温度下，在搅拌或/和高剪切条件下将所述有机相和水相混合，再采用减压蒸发等方法除去有机溶剂，从而制得丹参酮IIA脂质复合物。

(4)将所得丹参酮IIA脂质复合物用0.22μm的滤膜滤过除菌，分装即注射液，粒径为20-200nm。

8、根据权利要求7所述的制备丹参酮IIA脂质复合物的方法，其特征在于：所述有机溶剂选自二氯甲烷、氯仿、丙酮、甲醇、乙醇、乙醚、四氢呋喃或异丙醇及其任意组合。

9、根据权利要求7所述制备丹参酮IIA脂质复合物的方法，其特征在于：向所述制得的丹参酮IIA脂质复合物进一步加入冻干保护剂以制成冻干制剂，临用前加无菌注射用水或生理盐水重建后静脉注射或肌注给药，粒径为20-200nm。

10、根据权利要求7或9所述的制备丹参酮IIA脂质复合物的方法，其特征在于：所述冻干保护剂选自海藻糖、甘露醇、蔗糖、葡萄糖、氯化钠、乳糖、山梨醇、右旋糖苷、甘氨酸及其任意组合。