CN101229202A - 鸦胆子油脂质体及其冻干粉制剂与制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及药物制剂领域，具体涉及一种鸦胆子油的脂质体、其脂质体冻干粉制剂及相应的制备方法。

Description

鸦胆子油脂质体及其冻干粉制剂与制备方法

技术领域

本发明涉及药物制剂领域，具体涉及一种鸦胆子油的脂质体、其脂质体冻干粉制剂及相应的制备方法。

背景技术

根据世界卫生组织的统计报告，癌症是当今最常见的发病和死亡原因之一，全世界每年死于癌症的人数600多万，居各类死因第一位；全世界2000多万人确诊患有癌症，每年新增癌症患者近1000多万，可以说，癌症已成为威胁人类健康的第一杀手。在肿瘤治疗中，药物治疗是当今临床治疗的重要手段之一。但抗癌药物的细胞毒性对正常细胞和癌细胞缺乏选择性，导致了抗癌药物的严重毒副作用。因此，在天然植物中寻找低毒，有效的抗癌药物成为国内外药物化学工作者的研究热点。

鸦胆子是苦木科植物鸦胆子油的干燥成熟果实，产于我国的广东、海南、广西、福建。古代我国民间广范用于治阿米巴痢疾。从五十年代起，有人外用鸦胆子来治疗皮肤乳头状瘤和寻常疣等。1972年有报道应用鸦胆子油治疗宫颈癌获得成功，这对于肿瘤的治疗具有非常重要的意义，随后通过数十年的基础研究和临床应用，使医药界对鸦胆子有了进一步完整的认识。鸦胆子的成分可分为水溶性和脂溶性两部分，水溶性成份是一系列的四环三萜类化合物，有毒。脂溶性成分几无毒性，根据文献报道，鸦胆子油有中含有三油酸甘油酯约85％，其它类型的结合脂肪酸约5％，非酯化部分(包括油酸、亚油酸、亚麻酸等)10％，其中非酯化部分中油酸占61.55％。三油酸甘油脂体外抑癌实验没有活性，但其水解后的产物为油酸，具有显著的抗癌活性。多用于肺癌、肺癌脑转移、消化道肿瘤以及肝癌的辅助治疗。

鸦胆子油在抗肿瘤时，疗效确切，毒副作用小，与常用的化疗药物相比具有一定的优势。目前临床应用的主要是以鸦胆子油石油醚提取物为原料，采用精致大豆磷脂为乳化剂制成的水包油型鸦胆子油乳剂。但是，多年的生产和临床实践证明，已有的鸦胆子油剂型如静脉乳注射液和口服乳均存在着一定的缺陷：鸦胆子油口服乳生物利用度不高，并且属于热力学不稳定体系，物理稳定性差，其有效成分在放置过程中易氧化分解，产生特异的酸败气味；另外，因鸦胆子油口服乳特有的腥臭味和油腻感，多数患者存在油腻、恶心、厌食、呕吐等消化道不良反应，患者的依从性低。而静脉乳注射液的工艺不稳定，温度、乳化时间和生产设备都对产品质量产生影响，而造成乳粒不均匀，产品储存中容易出现油、水分层、破裂、转相，絮凝和败坏等现象而无法使用；在临床使用上，由于乳剂颗粒较大，需加入生理盐水中稀释后才能静脉滴注，这样使得临床使用不方便，并且经生理盐水稀释后，明显削弱了乳剂的脏器定向分布及淋巴指向性，使肺、肝、淋巴结等组织内药物浓度减少，从而减弱了鸦胆子油的抗癌作用。因此，研制鸦胆子油的新剂型为临床所必需。

发明内容

本发明公开了一种稳定、疗效高、毒副作用低、临床给药方便安全的鸦胆子油的脂质体及其冻干粉制剂及可工业化应用的制备方法。

本发明的鸦胆子油脂质体含有下列组分及重量比：

鸦胆子油    1

磷脂        10～50

胆固醇      0.5～10。

上述三组分优选的重量比是：

鸦胆子油    1

磷脂        10～30

胆固醇      0.5～5。

上述所述的磷脂优选自大豆磷脂、卵磷脂、二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱、二肉豆蔻酰磷脂酰甘油、二棕榈酰磷脂酰胆碱、二棕榈酰磷脂酰甘油、二硬脂酰磷脂酰胆碱、二硬脂酰磷脂酰甘油、琥珀酸胆固醇脂、磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺中的一种或一种以上的组合。更优选大豆磷脂和/或卵磷脂。

除了上述组分外，还可加入冻干保护剂，制成冻干粉制剂，既能显著提高药物的储存稳定性又能使鸦胆子油脂质体冻干粉在加入注射用水再分散后，能以任意比例与注射用水稀释给药而不产生沉淀，包封率稳定在85％以上，粒径在100nm以下。本发明所述的鸦胆子油脂质体及其冻干粉制剂可适用于静脉给药，口服给药或其他途经的给药，适合工业化生产。

冻干保护剂优选自单糖、双糖、多糖或右旋糖酐。其中单糖优选甘露醇或葡萄糖；双糖优选乳糖或蔗糖；多糖优选海藻糖。

冻干保护剂的重量优选磷脂的1～4倍

当胆固醇的量固定时，鸦胆子油与磷脂不同的重量配比影响脂质体的包封率和粒径，见表1：

表1药脂比对各项指标的影响

鸦胆子油∶磷脂	1∶10	1∶20	1∶30	1∶40	1∶50
						包封率(％)粒径(nm)	86.098.4	89.697.9	95.599.2	98.1103.7	99.7102.9

由表1可见，脂质体包封率随着药脂比的降低而提高，当药脂比降到1∶30时，包封率已升高至95.5％，再继续降低药脂比，包封率的提高已经很有限，反而使成本大大提高，而且所需冻干保护剂用量也需大大提高才能得到外观性状较好的冻干粉。而中国药典规定，脂质体的包封率要达到80％以上，所以药脂比更优选以选择1∶10～30为宜。

研究发现，鸦胆子油和磷脂以本发明范围的重量比配比时，加入一定量的胆固醇可使脂质体更稳定，包封率提高，平均粒径降低。表2是部分实验数据，是当鸦胆子油为1个重量份，磷脂20个重量份时，加入不同重量份的胆固醇对脂质体粒径和包封率的影响。

表2胆固醇用量对各项指标的影响

胆固醇	0	1	3	5	7	9	11	15	19
										包封率(％)粒径(nm)	76.4153.8	86.298.4	93.487.1	93.791.6	95.294.5	97.198.3	97.5128.2	96.9134.9	98.4146.4

由表2可知，随着类脂成分中胆固醇用量的增加，药物的包封率有提高的趋势。粒径随着类脂成分中胆固醇含量的增加，先减小后增大。这可能是由于当胆固醇含量较低时，匀化作用虽能明显减小脂质体的粒径，但其后由于不稳定，脂质体可能重新融合、聚集成较大粒径的脂质体；而胆固醇比例较大时，匀化过程对粒径的减小作用不明显的缘故。另外，胆固醇用量增多，会增大脂质膜的刚性，而本发明亦可用于肺癌脑转移，所以在得到较小粒径和较大包封率的同时，应尽量减少胆固醇的用量，增加脂质体的柔性，以免堵塞血管。所以胆固醇更优选以选择鸦胆子油∶磷脂∶胆固醇为1∶10～30∶0.5～5。

本发明的鸦胆子油脂质体无需添加表面活性剂，质量稳定，平均粒径小于100nm，包封率稳定在85％以上。

本发明的鸦胆子油脂质体的制备方法如下：

取的鸦胆子油、磷脂、胆固醇，溶于乙醇或乙醚中，通氮条件下，加入pH6-8的磷酸盐缓冲液或生理盐水或葡萄糖注射液中，乳化，除去有机溶剂，匀化得鸦胆子油脂质体。或者，取鸦胆子油、磷脂、胆固醇，溶于乙醇或乙醚中，除去溶剂，再加入pH6-8的磷酸盐缓冲液或生理盐水或葡萄糖注射液中，形成混悬液，匀化得鸦胆子油脂质体。

本发明的脂质体可以采用旋转蒸发法，乙醇注入法等方法制备。

当需要添加冻干保护剂制备脂质体冻干制剂时，则将上述方法制得的鸦胆子油脂质体冷却到室温，加冻干保护剂，过滤，冷冻干燥得鸦胆子油冻干粉。

本发明所得的鸦胆子油脂质体及其冻干粉制剂对比现有剂型的效果主要体现在：

1.将鸦胆子油做成脂质体后，可增加药物对淋巴细胞的指向性和在靶细胞的滞留，使药物在靶组织中维持较高的浓度，充分发挥鸦胆子油的抗癌作用，又癌细胞的转移主要发生在淋巴系统内，所以高的浓度还可以有效杀伤转移的癌细胞，防止癌症转移；同时还降低了血液中药物的浓度，减小了血液中药物浓度而减低药物的周身毒性。

2.所得的脂质体粒径在100nm以下，可直接静脉滴注，临床使用方便。并且将脂质体制备成冻干粉之后，既显著提高了制剂的稳定性，又能在加入药学上适用的注射用水后重新分散，能以任意比例与输液稀释给药而不产生沉淀，尤其是在给药剂量较大的情况下，从而减小临床用药的不安全因素。

本发明还解决了所述鸦胆子油脂质体及其冻干粉制剂的可工业化生产的制备方法。步骤如下：取处方量鸦胆子油、磷脂、胆固醇，溶于无水乙醇或乙醚中，得含药类脂液，通氮条件下，高速磁力搅拌下，将上述含药类脂液注入pH6-8的磷酸盐缓冲液或生理盐水或葡萄糖注射液中，挥干乙醇，补加损失的水分，得脂质混悬液；5-20000psi压力下，乳匀3～10次；加入冻干保护剂，充分溶解；过滤灭菌，分装，冷冻干燥。

本发明的鸦胆子油脂质体的粒径、Zeta电位见图1、图2。

附图说明

图1本发明鸦胆子油脂质体的粒度分布。

图2本发明鸦胆子油脂质体混悬液的ζ电位。

具体实施方式

实施例1

取鸦胆子油1g，10g大豆磷脂和0.5g胆固醇，置于茄形瓶中，用200ml无水乙醇溶解，于50℃恒温水浴用旋转蒸发仪减压除去有机溶剂，使其在玻璃瓶壁上形成一均匀类脂膜，置于真空干燥器中，37℃条件下放置过夜备用；取pH7.2磷酸盐缓冲液，将其加入到上述玻璃瓶中，用旋转蒸发仪转动洗膜，直至类脂膜水合变成乳白色脂质体混悬液，通氮气条件下，高压乳匀5次，即得。将30g甘露醇溶解在脂质体中，过滤后(滤膜器孔径0.15μm)，将最终分散物分装在西林瓶中，冷冻干燥。

取冻干成品，加入适量注射用水，脂质体再分散性良好，鸦胆子油脂质体的平均粒径为98.4nm，包封率为86.03％。以0.5％葡萄糖或生理盐水稀释，放置10h内无沉淀产生。

实施例2

取鸦胆子油1g，25g大豆磷脂和3g胆固醇，置于茄形瓶中，用200ml无水乙醇溶解，于50℃恒温水浴用旋转蒸发仪减压除去有机溶剂，使其在玻璃瓶壁上形成一均匀类脂膜，置于真空干燥器中，37℃条件下放置过夜备用；取生理盐水，将其加入到上述玻璃瓶中，用旋转蒸发仪转动洗膜，直至类脂膜水合变成乳白色脂质体混悬液，通氮气条件下，高压乳匀10次，即得。将50g蔗糖溶解在脂质体中，过滤后(滤膜器孔径0.15μm)，将最终分散物分装在西林瓶中，冷冻干燥。

取冻干成品，加入适量注射用水，脂质体再分散性良好，鸦胆子油脂质体的平均粒径为88.2nm，包封率为92.50％。以0.5％葡萄糖或生理盐水稀释，放置10h内无沉淀产生。

实施例3

取鸦胆子油1g，大豆磷脂20g，胆固醇2g溶于50ml无水乙醇中，形成有机相，通氮条件下，将有机相缓缓注入60℃恒温水浴、1000r/min恒速搅拌的生理盐水中，滴完后继续磁力搅拌一小时，挥干乙醇，至于水浴式超声仪中超声，即得。将20g乳糖溶解在脂质体中，过滤后(滤膜器孔径0.15μm)，将最终分散物分装在西林瓶中，冷冻干燥。

取冻干成品，加入适量注射用水，脂质体再分散性良好，鸦胆子油脂质体的平均粒径为97.9nm，包封率为89.61％。以0.5％葡萄糖或生理盐水稀释，放置10h内无沉淀产生。

实施例4

取鸦胆子油1g，大豆磷脂15g，胆固醇1g溶于50ml无水乙醇中，形成有机相，通氮条件下，将有机相缓缓注入60℃恒温水浴、1000r/min恒速搅拌的pH7.2的磷酸盐缓冲溶液中，滴完后继续磁力搅拌一小时，挥干乙醇，至于水浴式超声仪中超声，即得。将15g右旋糖酐溶解在脂质体中，过滤后(滤膜器孔径0.15μm)，将最终分散物分装在西林瓶中，冷冻干燥。

取冻干成品，加入适量注射用水，脂质体再分散性良好，鸦胆子油脂质体的平均粒径为87.0nm，包封率为87.94％。以0.5％葡萄糖或生理盐水稀释，放置10h内无沉淀产生。

Claims (9)

1.一种鸦胆子油脂质体，其特征是含有下列组分及重量比：

鸦胆子油    1

磷脂        10～50

胆固醇      0.5～10。

2.权利要求1的鸦胆子油脂质体，其中各组分的重量比：

鸦胆子油    1

磷脂        10～30

胆固醇      0.5～5。

3.权利要求1或2的鸦胆子油脂质体，其中磷脂选自大豆磷脂、卵磷脂、二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱、二肉豆蔻酰磷脂酰甘油、二棕榈酰磷脂酰胆碱、二棕榈酰磷脂酰甘油、二硬脂酰磷脂酰胆碱、二硬脂酰磷脂酰甘油、琥珀酸胆固醇脂、磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺中的一种或一种以上的组合。

4.权利要求3的鸦胆子油脂质体，其中磷脂选自大豆磷脂和/或卵磷脂。

5.权利要求1或2的鸦胆子油脂质体，还含有冻干保护剂。

6.权利要求5的鸦胆子油脂质体，其中冻干保护剂选自单糖、双糖、多糖或右旋糖酐。

7.权利要求6的鸦胆子油脂质体，其中单糖是甘露醇或葡萄糖；双糖是乳糖或蔗糖；多糖是海藻糖。

8.权利要求5的鸦胆子油脂质体，其中冻干保护剂的重量是磷脂的1～4倍。

9.权利要求1或2的鸦胆子油脂质体，其平均粒径小于100nm。

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