CN101548994A - 一种银杏酮酯口服前体脂质体及其制备方法 - Google Patents

Abstract

一种银杏酮酯口服前体脂质体及其制备方法，主要由银杏酮酯、磷脂、胆固醇、表面活性剂和冻干保护剂组成。本发明涉及一种多组分脂溶性中药被稳定包裹在磷脂双分子层的单室脂质体，采用逆向蒸发－二次冻融法制备的银杏酮酯前体脂质体，包峰率高，粒径小于350nm，该工艺能显著提高前体脂质体产品长期贮存的稳定性。制剂具有缓慢释放药物作用，口服能显著增加药物跨胃肠膜吸收的速度，使黄酮类有效活性成分通过淋巴旁路系统转运，体内生物利用度是普通片剂的3.3倍。

Description

一种银杏酮酯口服前体脂质体及其制备方法

技术领域

本发明属于口服缓控释制剂领域，具体涉及一种含中药多组分银杏酮酯前体脂质体组合物及制备方法，该冻干粉末可以灌装硬胶囊或制成颗粒剂供口服给药。本发明的前体脂质体可促进难溶性黄酮类药物口服吸收，体内生物利用度是普通片剂的3倍以上。

背景技术

银杏酮酯(GBE50)为新一代银杏叶提取物，含多种有效成分，银杏总黄酮≥44％，银杏黄酮醇苷≥24％，银杏总内酯≥6％，其中银杏黄酮醇苷含槲皮素、山奈酚和异鼠李素，具有改善人体血液循环、扩张冠状动脉和脑动脉作用；有效防止心肌和脑局部缺血，改善老年性痴呆和血管性痴呆高危人群的认知功能，临床上主要用于治疗冠心病、心绞痛、心肌梗塞、脑血栓和缺血性脑中风等疾病。

银杏酮酯中多组分黄酮醇苷难溶于水，结构中均含有多酚羟基，较易氧化、在强碱性条件下不稳定。银杏酮酯普通片剂(或胶囊剂)口服后银杏黄酮与萜内酯多种组分在胃肠吸收机制复杂，由于银杏黄酮醇苷的生物活性较弱，导致体内生物利用度低[张晓丹，马灵芝，银杏叶总黄酮的研究进展.中国心血管杂志，2006，11(5)：385-387]。Bombardelli研究发现，黄酮类化合物与天然磷脂载体有较好的亲和力，两者可结合形成复合物，磷脂黄酮复合物发挥协同治疗作用，能有效预防心脑血管类疾病的发生，增强银杏黄酮治疗心脑血管疾病的疗效。[White TC，Marr KA，Bowden RA.Clinical，cellular，and molecular factors that contribute toantifungal drug resistance.Clinical Microbiology Reviews，1998，11(2)：382-402.]。刘衍兴等研究证明磷脂脂质体对银杏叶乙醇提取物具有明显药理增效作用[刘衍兴，郭辉.磷脂脂质体对银杏叶乙醇提取物药理增效作用实验观察.基层中药杂志，1998，12(4)：35]。

银杏酮酯普通片剂或杏灵颗粒剂口服体内普遍存在黄酮类成分吸收无规律，导致制剂口服生物利用度偏低，为解决上述问题。CN 101019837A公开了银杏酮酯分散片的制备方法，测定总银杏黄酮醇苷的溶出量，由于银杏酮酯中含多种糖类，黏性大且易吸潮，中药分散片制备工艺复杂易产生黏冲、溶出迟缓等问题。CN 1651007A公开了一种杏灵滴丸的制备方法，滴丸剂虽然能适当增加药物释放，但体内血药浓度-时间曲线面积(AUC)与普通片无明显差异，由于峰浓度过高常存在潜在临床用药的安全隐患，专利中未标明测定总黄酮混合物的溶出度还是几种黄酮单一成分。CN 1679519A公开了一种稳定长效的银杏酮酯软胶囊及其制备方法，拟解决药物体内吸收，维持长效作用，发明未公开几种黄酮醇苷体内血药浓度测定方法和药动学。以上剂型仅改变了银杏酮酯的分散状态，并未解决中药黄酮类成分口服跨膜吸收困难的问题。

大部分药物口服给药直接进入血液循环通过肝门系统吸收，脂溶性药物在外源性化合物刺激下与肠粘膜脂蛋白甘油三酯乳糜微粒相互作用，可经过肠淋巴系统途径转运吸收。磷脂、磷脂衍生物、胆固醇等类脂质载体能促进类脂蛋白的形成，使亲脂性药物与类脂蛋白的脂质核心结合，通过淋巴旁路系统转运吸收进入体循环，可避免首过效应、增加药物的口服吸收，延长药物转运进入体循环的时间，达到缓释作用[Caitriona.M.O，Driscoll，Lipid-basedformulations for intestinal lymphatic delivery.European Journal of Pharmaceutical Sciences 2002(15)405-415]

脂质体作为银杏酮酯口服的类脂质载体，可有效包裹黄酮类成分在脂质双分子层，防止酶水解或肝脏首过作用，增强其在胃肠道中的稳定性，易于被肠粘膜吸收。另外脂质体可以使药物被动靶向心肌缺血组织，尤其是梗塞的心肌，为携载银杏黄酮类药物治疗心血管疾病的理想载体。脂质体中亲水性药物组分在制备和储存过程易存在渗漏问题，药物分配在外水相增多，使包封率降低；将药物制成固体前体脂质体，可以提高制剂长期贮存过程药物的稳定性，有效解决普通脂质体的聚集、沉降、融合渗漏和灭菌磷脂的氧化等问题。为延缓药物释放，增强药物疗效，降低副作用，开发银杏酮酯口服固体前体脂质体十分必要，具有重要的理论价值和临床研究意义，其市场前景广阔。

发明内容

本发明提供一种增加银杏酮酯口服吸收的前体脂质体及制备方法，涉及一种能够有效抑制肠道酶对有效活性成分银杏黄酮和银杏内酯的降解。脂质体中的类脂成分磷脂和胆固醇能够促进类脂蛋白的形成，使药物通过淋巴系统旁路转运进入体循环吸收，口服后显著增加药物跨胃肠膜吸收的速度，防止胃肠酶降解，避免首过效应，提高中药制剂口服相对生物利用度；另通过淋巴转运可提高药物与组织的亲和性，被动靶向于病灶部位，提高心血管药物的药效。更进一步，本发明能延缓脂质体中药物持续缓慢释放，与普通片剂比较其平均驻留时间(MRT)延长，患者每天给药次数由2～3次减为1次，给药剂量降低，大大提高了病人顺应性，从而最大限度减少中药制剂临床用药的不安全因素。

本发明的银杏酮酯口服前体脂质体及其制备方法，需解决的关键技术在于：如何解决液体脂质体中磷脂和药物的氧化和降解问题？尤其如何解决脂质体在贮存过程有效活性成分泄漏和磷脂氧化的稳定性难题。本发明采用逆向蒸发-多次冻融法制备固体冻干粉末，提供一种脂溶性药物被稳定包裹在磷脂双分子层的单室脂质体，保持了单室脂质体膜结构的完整性，克服脂质体聚集、融合及药物渗漏等不稳定因素。本发明的银杏酮酯含银杏总黄酮≥44％，银杏黄酮醇苷≥24％，银杏总内酯≥6％，既可使前体脂质体达到高包峰率，又具有较高载药量，平均粒径为100～350nm，具有较窄粒径分布和低渗漏率。

为解决上述问题，本发明提供如下技术方案。

一种银杏酮酯口服前体脂质体，其特征在于：主要由银杏酮酯、磷脂、胆固醇、表面活性剂按重量份数计为：1∶2～35∶0.5～15∶0.08～3.0份；

其较好的银杏酮酯、磷脂、胆固醇、表面活性剂配比按重量份计为：1∶4～25∶2～10∶0.2～2.0份。

一种银杏酮酯口服前体脂质体，其特征在于：银杏酮酯源于天然银杏叶提取物，主要有效活性成分由银杏总黄酮、银杏萜内酯等组成，选自含银杏总黄酮≥44％，银杏黄酮醇苷≥24％，银杏总内酯≥6％。

本发明所述的口服前体脂质体，其中磷脂选自大豆磷脂、蛋黄卵磷脂、天然或合成心磷脂、二棕榈酰磷脂酰胆碱、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰肌醇、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰甘油或磷脂酰胆碱中的一种或几种。

所述表面活性剂选自聚山梨酯80、聚山梨酯85、泊洛沙姆188、聚氧乙烯蓖麻油(Cremolphor EL)、聚氧乙烯氢化蓖麻油(CremolphorRH40/RH60)、或辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯(Labrasol)的一种或几种。

一种银杏酮酯口服前体脂质体的制备方法，其特征在于，按如下方法制备：称取磷脂、胆固醇溶于有机溶剂(有机相)，另称取银杏酮酯与含表面活性剂的缓冲液分散溶解(水相)。将水相缓慢注入上述有机相，超声乳化形成O/W乳剂，于40℃旋转蒸发除去有机溶剂得乳胶液，将分散相置高压乳匀机(5000psi)50℃下匀化3～5次，即得脂质体混悬液。

上述有机溶剂选自氯仿、乙醚、甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯中的一种或者它们中任选的混合液。

上述缓冲液选自磷酸盐缓冲液、醋酸-醋酸铵缓冲液、醋酸-醋酸钾缓冲液、醋酸-醋酸钠缓冲液或硼砂-氯化钙缓冲液，pH5.0～7.0。

一种银杏酮酯口服前体脂质体冻干粉的制备方法，其特征在于，按如下步骤制备：

(1)称取磷脂、胆固醇溶于有机溶剂(有机相)，另称取银杏酮酯与含表面活性剂的缓冲液分散溶解(水相)。将水相缓慢注入上述有机相，超声乳化形成O/W乳剂，于40℃旋转蒸发除去有机溶剂得乳胶液，将分散相置高压乳匀机(5000psi)50℃下匀化3～5次，即得脂质体混悬液。

(2)将冻干保护剂溶于纯净水与上述脂质体混悬液混合均匀，分装于容器-70℃低温预冻2h，反复-解冻冷冻二次，再经冷冻干燥24h，即得前体脂质体冻干粉。

本发明所述冻干保护剂选自甘露醇、乳糖、山梨醇、海藻糖、葡萄糖、氯化钠、环糊精、麦芽糖、蔗糖、右旋糖苷或果糖的一种或几种。较好比例为1份药物加入2～25份冻干保护剂，优选1份药物加入4～15份冻干保护剂。

本发明的银杏酮酯前体脂质体的固体制剂，按照常规方法灌装硬胶囊剂或制成颗粒剂。其固体制剂辅料选自喷雾干燥乳糖(Flowlac100)、结块乳糖(Tablettose70，80，100)、复合物喷雾干燥乳糖(Microcelac80，100：75％Lactose Monohydrate，25％Microcrys Cellulose)筛分乳糖(Prismalac40，60，80，100)、微晶纤维素(Avicel PH101，PH102，PH301，PH302)、可压性淀粉、糊精、淀粉、羟丙甲纤维素、羟丙基纤维素、聚维酮、滑石粉、硬脂酸镁、微粉硅胶或微粉硅胶/微晶纤维素复合材料。

本发明采用逆相蒸发-多次冻融法制备银杏酮酯口服前体脂质体，银杏酮酯中有效活性成分黄酮醇苷和银杏内酯被有效稳定保护在双分子层，提高了多组分银杏黄酮和银杏内酯贮存过程的稳定性。前体脂质体的平均粒径为100～350nm，三种黄酮醇苷的包封率为50～90％，渗漏率明显降低。本发明提供的银杏酮酯前体脂质体经口服给药，由于加入了表面活性剂，可有效抑制P-糖蛋白对活性成分的外排代谢作用，黄酮成分跨胃肠膜吸收量显著增加；另外磷脂类载体促进了类脂蛋白形成，使黄酮类亲脂性成分通过肠淋巴转运吸收，故本发明前体脂质体制剂可提高口服生物利用度，减少临床用药剂量(由含银杏酮酯40mg/次减为15mg/次)，每天给药为一次，达到提高药物临床疗效和降低毒副作用的目的。

本发明采用快速、准确、灵敏的梯度洗脱HPLC法检测银杏酮酯中有效活性成分含量和释放度，采用渗透法研究前体脂质体包峰率、载药量和渗漏率，解决了定量测定多组分中药脂质体指标性成分质量问题。

银杏黄酮醇苷含槲皮素、山奈酚和异鼠李素等成分，以葡萄糖、鼠李糖等形式结合而成糖苷，通常黄酮醇苷采用强酸水解为黄酮苷元再进行HPLC分析，按转化因子计算总黄酮醇苷的含量。本发明的优势是采用梯度洗脱RP-HPLC法研究三种黄酮成分的包峰率和载药量，提供具体如下的质量研究内容：

1.银杏酮酯中黄酮成分的包峰率和载药量测定

(1)梯度洗脱RP-HPLC法色谱条件：色谱柱：Kromasil-C₁₈柱(150mm×4.6mm，5μm)；流动相：0.2％磷酸水溶液∶甲醇(A∶B)系统，梯度洗脱程序：0min，B保持41％；0→17min，B为41％→85％；17→17.1min，B为85％→41％；17.1→20min，B保持41％。检测波长：371nm；柱温：30℃；流速：1mL/min；进样量：20μL。

标曲曲线方程：槲皮素：C＝1.26×10^-4A+7.79×10^-2，γ＝0.9998(0.5～12.0μg·mL^-1)；

山奈酚：C＝1.33×10^-4A+1.48×10^-1，γ＝0.9998(0.5～12.0μg·mL^-1)

异鼠李素：C＝1.78×10^-4A+3.60×10^-2；γ＝0.9998(0.1～4.0μg·mL^-1)

(2)包峰率和载药量测定：称取银杏酮酯脂质体冻干粉适量，pH6.8的磷酸缓冲液水合分散为脂质体混悬液。吸1mL于透析袋中两端扎紧，置pH6.8的磷酸盐缓冲液20mL，37℃水浴透析，磁力搅拌速度为200r/min，于5h吸取透析液5mL置量瓶甲醇破膜稀释，梯度洗脱RP-HPLC法测定峰面积，代入标准曲线计算透析外液中游离药物总量。另吸上述脂质体混悬液1mL，加甲醇5mL和25％盐酸1mL，80℃水浴中水解60min。同法测定峰面积计算脂质体中药物总量，计算包峰率和载药量。

包封率(％)＝(1-透析外液药物总量/脂质体药物总量)×100％

载药量(％)＝(Wt-Wi)/Wc×100％

W_t为脂质体胶体溶液中药物总含量，W_i为游离药物量，W_c为磷脂用量。W_t＝(Wt_槲皮素+W_t山奈酚+W_{t异鼠李素})×2.519；W_i＝(W_i槲皮素+W_i山奈酚+W_{i异鼠李素})×2.52。

2.脂质体制备工艺的优化：采用薄膜蒸发法、逆向蒸发法和逆向蒸发-反复冻融法制备脂质体。以脂质体粒径、各黄酮醇苷的包封率和渗漏率为测定指标，结果见表1。

表1工艺条件对黄酮醇苷指标成分的影响

试验表明，薄膜蒸发法制备脂质体粒径较大、包封率较低；逆向蒸发-反复冻融法具有操作简单，能有效保护药物在外水相的稳定性，减少药物的渗漏性，提高包封率，逆向蒸发-二次冻融法参数较易控制，适于脂质体中试生产。

(2)逆向蒸发温度的选择

表2逆向蒸发温度对三种银杏黄酮物理特性的影响(n＝3)

逆向蒸发温度选择40℃，制备的脂质体粒径较小、包封率高。

(3)超声乳化时间的选择

表3超声乳化时间对三种银杏黄酮物理特性的影响(n＝3)

超声乳化10min，乳剂形成不够均匀，当超声时间超过20min后，脂质体的粒径和包封率基本不变，故优选乳剂超声时间为20min。

(4)水合介质种类的影响：采用三种水合介质溶解药物及辅料制备脂质体混悬液，测定粒径、包封率等指标，结果见表4。

表4水合介质对脂质体中银杏黄酮特性的影响(n＝3)

由于药物为弱酸性在pH1.2的盐酸溶液中难分散溶解，包峰率降低，pH7.4缓冲液能增加药物的分散溶解，也会影响有效活性成分萜内酯如银杏内酯A、B、C和白果内酯的稳定性，故脂质体水合介质优选pH5.0～7.0。

(5)表面活性剂对银杏黄酮的增溶作用：配制含1.0％聚山梨酯-80、十二烷基硫酸钠、泊洛沙姆188、Cremopher RH40水溶液和纯净水各100mL，取银杏酮酯适量加入上述溶液，25℃振荡24h达药物平衡溶解，吸取5mL过滤，照“1.质量测定方法项下测定”，黄酮醇醇苷的平衡溶解度(S)见表5。

表5在几种表面活性剂溶液中的溶解度(n＝3)

结果表明，黄酮醇甙在水中溶解度较小，聚山梨酯-80、十二烷基硫酸钠、泊洛沙姆188和Cremopher RH40均对其有明显的增溶作用，其中聚山梨酯-80的增溶作用最强，聚山梨酯-80对银杏黄酮物理特性的影响见表6。

表6聚山梨酯-80对银杏黄酮物理特性的影响(n＝3)

表面活性剂比例增加，脂质体的粒径逐渐减小，包封率先增大后减小，表面活性剂易使脂质体双分子膜的流动性、渗透性增大，用量增大贮存过程随脂质体破裂导致药物渗漏。故药物与表面活性剂较好重量比例为1∶0.08～3.0份，优选比例为1∶0.1～2.0份。

3.冻干保护剂的选择：在脂质体冻干过程中，由于冰晶的形成、渗透压的改变、相分离及相转变等因素均可导致脂质体膜折叠、融合、破裂和药物渗漏。选用甘露醇、山梨醇、喷雾干燥乳糖和葡萄糖等为冻干保护剂，测定脂质体冻干粉复溶后的包封率，研究表明冻干保护剂优选甘露醇，较好为喷雾干燥乳糖和山梨醇，结果见表6。

表7甘露醇比例对脂质体包封率的影响(n＝3)

结果表明，药物与甘露醇重量比为1∶6，脂质体冻干粉末呈蓬松良好性状，随甘露醇用量增加，脂质体中各黄酮醇苷指标成分的包封率逐渐降低，故药物与冻干保护剂较好重量比为1∶2～25，优选1∶4～15。

附图说明

图1是本发明银杏酮酯前体脂质体体外渗透释放曲线(n＝6)

1-1 0.1mol/L盐酸溶液(pH1-2)，1-2 pH6.8磷酸盐缓冲液，1-3 pH7.4磷酸盐缓冲液

图2是本发明银杏酮酯前体脂质体的透射电镜照片

图3是本发明大鼠口服给予银杏酮酯脂质体制剂体内黄酮醇苷血药浓度曲线(n＝6)

前体脂质体(-■-)，普通片剂(-◆-)

具体实施方式

原料来源：银杏酮酯购于：上海杏灵科技股份有限公司，批号：060405，含总黄酮大于44％，银杏黄酮醇苷≥24％，银杏萜内酯≥6％；槲皮素(HS)、山奈酚(SN)和异鼠李素(YS)对照品购自中国药品检验所。

实施例1

称取11.2g大豆磷脂(含磷脂酰胆碱92％)和胆固醇5.6g溶于120mL甲醇和乙醚(1∶1)混合溶剂，超声20min；称取银杏酮酯1.6g和1.2g聚山梨酯85溶于100mLpH6.5磷酸盐缓冲液，再缓缓加入上述磷脂混合液中，超声20分钟形成O/W初乳，于40℃旋转蒸发除去有机溶剂，将分散相依次过0.8、0.45和0.22μm滤膜，即得脂质体混悬液。取10.8g乳糖溶于40mL纯净水与脂质体混合均匀，分装于容器-70℃低温预冻2h，解冻再预冻2h，经冷冻干燥24h，即得前体脂质体冻干粉。

取脂质体冻干粉适量用纯净水复溶稀释，测定脂质体平均粒径为202.6nm，梯度洗脱RP-HPLC法测定脂质体的载药量为5.4％，各黄酮醇苷槲皮素、山奈酚和异鼠李素的包封率分别为82.5％、77.5％和74.2％。

实施例2

称取10.8g大豆磷脂(含磷脂酰胆碱82％)和3.6g胆固醇溶于130mL乙醚与氯仿(3∶1)混合溶剂，超声20min；将1.8g银杏酮酯、0.6g聚山梨酯-80溶于100mLpH6.8磷酸盐缓冲液，再将其缓慢注入磷脂混合液中，超声20分钟形成O/W初乳，于40℃旋转蒸发除去有机溶剂，将分散相置高压乳匀机(5000psi)50℃下匀化3次，即得脂质体混悬液。取12.5g甘露醇溶于50mL纯净水与脂质体混悬液混合均匀，分装容器-70℃低温预冻2h，解冻二次再预冻2h，经冷冻干燥24h，即得前体脂质体冻干粉。

取脂质体冻干粉适量用纯净水复溶稀释，测定脂质体平均粒径为168.8nm，梯度洗脱RP-HPLC法测定载药量为5.6％，各黄酮醇苷槲皮素、山奈酚和异鼠李素的包封率分别为84.8％、75.4％和73.3％。

实施例3

称取15g蛋黄卵磷脂和4.8g胆固醇溶于110mL乙醚与氯仿(2∶1)混合溶剂，超声20min；称取2.1g银杏酮酯和1.2g聚氧乙烯氢化蓖麻油(Cremolphor RH40)超声溶于100mLpH7.0磷酸盐，将其缓慢注入磷脂混合液中，超声20分钟形成O/W乳剂，于40℃旋转蒸发挥去有机溶剂，即得脂质体混悬液。取10.6g山梨醇溶于50mL纯净水与上述脂质体混悬液混匀，将分散相置高压乳匀机(5000psi)50℃下匀化5次，在-70℃低温预冻2h反复解冻两次，再冷冻干燥得前体脂质体冻干粉。称取上述冻干粉10g，微晶纤维素PH1013.0g，加入微粉硅胶0.2g，混合均匀，直接填充1号硬胶囊。

测定脂质体的平均粒径为224.7nm，梯度洗脱RP-HPLC法测定载药量为4.8％，各黄酮醇苷槲皮素、山奈酚和异鼠李素的包封率分别为73.1％、69.0％和65.5％。

实施例4

称取16.8g大豆磷脂和3.2g胆固醇置梨形瓶，加100mL甲醇与氯仿(4∶1)混合溶剂溶解，称取1.5g银杏酮酯和1.0g聚山梨酯-85加100mL pH7.2的磷酸盐缓冲液超声溶解，将其缓慢注入类脂质混合液，超声30分钟形成O/W乳剂，除去有机溶剂，即得脂质体混悬液。称取12.0g甘露醇用40mLpH6.5磷酸盐溶解，与上述脂质体混悬液混匀，将分散相置高压乳匀机(5000psi)50℃下匀化4次。-70℃低温预冻2h反复解冻两次，经冷冻干燥即得前体脂质体冻干粉。称取10g脂质体冻干粉、2.0g喷雾干燥乳糖，过筛混匀，干法制颗粒，包装，每袋含银杏酮酯15mg。

测定脂质体用纯净水复溶后的平均粒径为190.9nm，梯度洗脱RP-HPLC法测定载药量为4.5％，各黄酮成分槲皮素、山奈酚和异鼠李素的包封率分别为78.5％、75.3％和70.2％。

实施例5

取冻干粉水合后脂质体混悬液1mL置透析袋，两端扎紧分别置锥形瓶中，释放介质为0.1mol/L盐酸溶液(pH1-2)、pH6.8和pH7.4的磷酸盐缓冲液，于0.5、1、2、4、6、8、12、24h取样5mL，置带塞试管中，同时补充相应介质5mL。另取水合后脂质体混悬液1mL置带塞试管，加入25％盐酸1mL和甲醇适量，80℃水浴水解60min，冷却，用甲醇稀释，吸20μL注入HPLC分析，代入标准曲线，计算各时间点脂质体的释放度。计算渗透释放的游离药物总量，释放度(％)＝(透析外液药物总量/脂质体药物总量)×100％；三种黄酮醇苷：槲皮素(HS)、山奈酚(SN)和异鼠李素(YS)体外释放曲线见图1(1-1、1-2和1-3)。

实施例6

稳定性试验：将银杏酮酯前体脂质体胶囊，按双铝塑密闭避光包装，25℃室温(RH，60％)长期稳定性试验，分别于0、1、2、3和6个月取样研究，测定脂质体的粒径和包封率结果见表8，

表8前体脂质体胶囊长期稳定性试验(n＝6)

经6个月初步稳定性研究表明，前体脂质体制剂的外观不变，胶囊内粉末疏松、均匀，粒径和包封率均无变化，故脂质体胶囊具有良好的稳定性。

实施例7

动物体内药动学：(1)体内给药方案：大鼠12只，体重220～260g，随机分成两组，每组6只，禁食24小时。大鼠分别口服给予银杏酮酯普通片(上海杏灵制药股份有限公司)，剂量600mg/kg(含黄酮醇苷19.9mg/kg)和银杏酮酯前体脂质体(按照实施例2制备)，剂量1200mg/kg(含黄酮醇苷19.2mg/kg)，温开水送服。于0.083、0.25、0.5、1、2、4、6、8、10、12和24h于眼眶静脉丛取血0.5mL，肝素化处理，3500r·min^-1离心20min，取血浆于-29℃冻箱保存。

(2)色谱条件：仪器：LC-10AD型高效液相色谱仪、SPD-10A检测器(日本岛津公司)；色谱柱：Kromasil C18柱(150mm×4.6mm，5μm)；流动相：0.5％磷酸水溶液∶甲醇(A∶B)系统，按梯度洗脱程序设置条件；柱温：30℃，检测波长：371nm，流速：1mL/min，进样量：20μL。

(3)血浆样品的提取：吸血浆250μL置离心管，加内标液25μL和3mol/L的盐酸溶液0.3mL，涡旋1min，在80℃水浴中加热水解30min，冷却，加乙醚5mL，涡旋1min，3500r/min离心20min，取上层液于40℃N₂流挥干。残渣用甲醇100μL涡旋溶解，吸20μL注入HPLC梯度洗脱法分析。

(4)药动学和统计学处理：采用Kinetica 4.4.1药动学软件，按非房室模型处理血药浓度-时间数据，两制剂中总黄酮醇苷的药动学参数，采用t检验进行统计分析，药动学参数见表9，血药浓度-时间曲线见图3。

表9两种制剂体内总黄酮醇苷的药动学参数(n＝6)

结果表明，大鼠口服体内给予银杏酮酯脂质体吸收较快，血药浓度出现明显的双峰现象，T_max，1、T_max，2为0.5h和8h，银杏酮酯前体脂质体与普通片比较，MRT有所延长，脂质体的T_1/2延长，表明制剂具有缓释作用。而C_max和AUC_0→∞有显著性差异(P＜0.01)，前体脂质体峰浓度和AUC_0→∞明显大于普通片剂，前体脂质体的AUC是普通片剂的3.3倍，说明脂质体显著增加了银杏黄酮口服跨膜吸收，提高了口服多组分银杏黄酮的生物利用度。

Claims (8)

1、一种银杏酮酯口服前体脂质体，其特征在于：主要由银杏酮酯、磷脂、胆固醇、表面活性剂按重量份数计为：1∶2～35∶0.5～15∶0.08～3.0份组成。

2、根据权利要求1所述银杏酮酯口服前体脂质体，其特征在于：银杏酮酯、磷脂、胆固醇、表面活性剂按重量份计为：1∶4～25∶2～10∶0.2～2.0份；银杏杏酮酯主要由有效活性成分银杏总黄酮、银杏萜内酯等组成，含银杏总黄酮≥44％，银杏黄酮醇苷≥24％，银杏总内酯≥6％。

3、权利要求1或2的口服前体脂质体，其特征在于：

磷脂选自大豆磷脂、蛋黄卵磷脂、天然或合成心磷脂、二棕榈酰磷脂酰胆碱、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰肌醇、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰甘油或磷脂酰胆碱中的一种或几种。

表面活性剂选自聚山梨酯80、聚山梨酯85、泊洛沙姆188、聚氧乙烯蓖麻油、聚氧乙烯氢化蓖麻油、或辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯的一种或几种。

4、权利要求1至3之一项的银杏酮酯口服前体脂质体制备方法，其特征在于：按以下方法制备：称取磷脂、胆固醇溶于有机溶剂(有机相)，另称取银杏酮酯与含表面活性剂的缓冲液分散溶解(水相)。将水相缓慢注入上述有机相，超声乳化形成O/W乳剂，于40℃旋转蒸发除去有机溶剂，将分散相置高压乳匀机50℃下匀化3～5次，即得脂质体混悬液。

5、权利要求4的银杏酮酯口服前体脂质体制备方法，其特征在于：所述有机溶剂选自氯仿、乙醚、甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯中的一种或者它们中任选的混合液。

所述缓冲液选自磷酸盐缓冲液、醋酸-醋酸铵缓冲液、醋酸-醋酸钾缓冲液、醋酸-醋酸钠缓冲液或硼砂-氯化钙缓冲液，pH5.0～7.0。

6、权利要求1至3之一项的银杏酮酯口服前体脂质体冻干粉，其特征在于：按重量份计，1份药物加入2～25份的冻干保护剂，优选1份药物加入4～15份的冻干保护剂。冻干保护剂选自甘露醇、乳糖、山梨醇、海藻糖、葡萄糖、氯化钠、环糊精、麦芽糖、蔗糖、右旋糖苷或果糖的一种或它们的混合物。

7、权利要求6银杏酮酯口服前体脂质体冻干粉的制备方法，包括如下步骤：

(1)称取磷脂、胆固醇溶于有机溶剂(有机相)，另称取银杏酮酯与含表面活性剂的缓冲液分散溶解(水相)。将水相缓慢注入上述有机相，超声乳化形成O/W乳剂，于40℃旋转蒸发除去有机溶剂，将分散相置高压乳匀机50℃下匀化3～5次，即得脂质体混悬液。

(2)将冻干保护剂溶于纯净水与上述脂质体混悬液混合均匀，分装于容器-70℃低温预冻2h，反复-解冻冷冻二次，再经冷冻干燥24h，即得前体脂质体冻干粉。

8、权利要求7的银杏酮酯口服前体脂质体冻干粉的制备方法，脂质体冻干粉经水合介质复溶可形成脂质体混悬液，脂质体平均粒径为100～350nm，三种黄酮醇苷的包封率为50％～90％，其固体前体脂质体制剂口服能显著增加药物吸收。

Images