CN104546718B - 一种长循环雷贝拉唑脂质体组合物及其制备方法和应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及药物制剂领域，具体是涉及一种长循环雷贝拉唑脂质体组合物及其制备方法和应用，包括雷贝拉唑、卵磷脂、胆固醇、培化磷脂酰乙醇胺、抗氧剂、金属螯合和冻干保护剂。本发明提供的脂质体注射剂复溶性好，复溶后粒度均匀，稳定性佳，提高了制剂产品质量，延长了雷贝拉唑在血液循环系统中的半衰期，生物利用度更高。

Description

一种长循环雷贝拉唑脂质体组合物及其制备方法和应用

技术领域

本发明涉及药物制剂领域，具体是涉及一种长循环雷贝拉唑脂质体组合物及其制备方法和应用。

背景技术

雷贝拉唑（Rabeprazole），化学名称为：2-[[4-(3-甲氧基丙氧基)-3-甲基吡啶-2-基]甲基亚硫酰基]-1H-苯并咪唑，分子式：C₁₈H₂₀N₃O₃S，分子量：358.44，化学结构式为：

。

雷贝拉唑是苯并咪唑的衍生物，是一种新型质子泵抑制剂，无抗胆碱能及抗H2组胺特性，但可附在胃壁细胞通过抑制胃壁细胞的H+/Na+-ATP酶来降低胃酸分泌。此酶系统被看作是酸质子泵，故雷贝拉唑钠作为胃内的质子泵抑制剂阻滞胃酸的产生，此作用是剂量相关性的。动物试验证实雷贝拉唑钠在用药后不久即可从血浆和胃粘膜中排出。

临床上雷贝拉唑主要用于①胃食管反流病（GERD）的治疗；②消化性溃疡出血；③应激状态下引起的急性胃粘膜损伤和出血；④活动性十二指肠溃疡、胃溃疡；⑤已经治愈的胃食管反流患者防止复发的长期维持治疗；⑥胃食管反流性疾病（GERD）的症状控制，与适当的抗菌疗法联合用药根除幽门螺杆菌。

临床上雷贝拉唑具有以下特点：①强烈快速的抑制胃酸分泌，能迅速缓解疼痛并促进病灶愈合；②用药1小时内发挥药效，在2～4小时内血药浓度达峰值，在初次用雷贝拉唑23小时后可抑制基础胃酸量和由食物刺激产生的胃酸量，抑制率分别为69%和82%；③药物半衰期较长，持续时间长；④药物间相互作用少，服药更安全；⑤此药用于老年患者时，药物清除率有所降低，但安全性不降低，当老年患者用雷贝拉唑钠20mg，1次/日，连续7天，出现血药浓度的曲线下面积加倍，浓度峰值相对于年轻健康受试者升高60%，另外，此药在体内无累积现象。

临床上雷贝拉唑具有以下缺点：①雷贝拉唑钠在较强碱性条件下稳定，在制备过程中其pH值最高调整至12，超出了人体的耐受范围，存在一定的安全性风险；②雷贝拉唑遇光、热、氧化和酸等容易分解变质，有相当一部分生成磺酰化物（为无活性成分物质），导致其药效降低；③雷贝拉唑口服制剂在酸性条件下极不稳定，直接口服则会在胃酸中降解使得生物利用度较低显著降低；④雷贝拉唑普通注射剂与葡萄糖溶液配伍时，会出现酱黄色现象，证实雷贝拉唑已大量破坏，存在一定的注射风险。因此，本领域存在对雷贝拉唑制剂改进的需要，特别地需要能克服上述不足的新的制剂。

脂质体（liposomes）最初是由英国学者Bangham和Standish将磷脂分散进行电镜观察时发现的。脂质体作为一种药剂新技术，近年来的研究表明它具有如下优点：①水溶性及脂溶性两种类型药物都可包裹在同一脂质体中，药物包封率主要与药物本身的脂水相分配系数及膜材性状有关；②脂质体本身对人体无毒和免疫抑制作用；③脂质体在体内使药物具有定向分布的靶向性特性；④药物包裹在脂质体中是非共价键结合，而其他药物载体一般是以共价键与药物结合，进体内后与共价键结合的药物不易与载体脱落，影响疗效，而脂质体中的药物进入体内可在指定部位完全释放出来；⑤脂质体静脉给药时，离开血管进入细胞间质的机会很小，因为脂质体的粒径控制在50～200nm，正常内皮细胞间隙小于10nm，只有增生的肿瘤细胞间隙较大（＞200nm），200nm以下的脂质体容易通过发育不完善的血管壁进入癌组织，同时由于增生过快的肿瘤组织没有完善的淋巴体液回流系统，细胞外液的回流受限制，使得主药更容易储留于肿瘤组织，增加了在癌组织中的浓度，即癌组织血管的渗透储留效应（EPR效应），此现象存在于多种实体癌中，EPR效应促进了脂质体在肿瘤组织的选择性分布，可以增加药效并减少系统副作用；⑥药物被包封于脂质体中后，能够降低药物毒性作用，增强药理作用；⑦PEG化脂质体制剂能够降低药物的消除速度，延长药物作用时间。

为了提高雷贝拉唑的生物利用度，降低其毒副作用，增强其靶向性，发明人对雷贝拉唑脂质体注射剂进行相关研究，目的是为了更好地保障雷贝拉唑的安全有效、质量可控性。

脂质体的稳定性是限制脂质体制剂发展的重要问题，当冷冻干燥或喷雾干燥制得脂质体，脂质体复溶后其粒度一般成倍增大，因此在复溶过程中存在易凝聚、融合、沉降等现象，导致粒度及其分布明显增大，药物易从磷脂双分子渗漏。

发明内容

本发明的目的是提供一种稳定的长循环雷贝拉唑脂质体组合物，同时还要保证这种脂质体在应用于冻干制剂时，复溶性好，复溶后平均粒度在200nm以下，粒度分布（多相分散系数）在0.20以下，稳定性佳，包封率高。

本发明提供了一种长循环雷贝拉唑脂质体组合物，包含如下重量份的组分：

雷贝拉唑 1份

卵磷脂 4-8份

胆固醇 1-3份

培化磷脂酰乙醇胺 0.5-1份

抗氧剂 0.02-0.05份

金属螯合剂 0.02-0.05份

冻干保护剂 1-3份。

所述卵磷脂可以为天然磷脂、半合成磷脂或全合成磷脂；优选为半合成或全合成卵磷脂，更优选半合成磷脂为为氢化大豆磷脂酰胆碱（简称HSPC），全合成磷脂为二硬脂酰磷脂酰胆碱（简称DSPC）、棕榈酰磷脂酰胆碱（简称DPPC）或二棕榈酰磷脂酰甘油（简称DPPG）；最优选地，为氢化大豆磷脂酰胆碱（HSPC）、二硬脂酰磷脂酰胆碱（DSPC）。

所述抗氧剂优选为α-生育酚。

所述金属螯合剂优选为依地酸钙钠或依地酸二钠。

所述冻干保护剂可以为葡萄糖、蔗糖、海藻糖、乳糖、山梨醇、甘露醇或右旋糖酐中的一种或几种，优选为海藻糖或蔗糖。

所述培化磷脂酰乙醇胺，即为PEG化磷脂酰乙醇胺，可以为聚乙二醇1000、聚乙二醇2000或聚乙二醇5000化的培化磷脂酰乙醇胺；优选地，为聚乙二醇2000化磷脂酰乙醇胺，英文简称mPEG2000-DSPE。

本发明还提供了一种上述组合物的制备方法，包括将雷贝拉唑和辅料混合，通过高压均质机乳化，除菌过滤，制得雷贝拉唑脂质体，再通过冷冻干燥或喷雾干燥，制得所述雷贝拉唑脂质体注射剂。

本发明提供一种所述雷贝拉唑脂质体组合物的制备方法的优选实施方案中，包括如下步骤：

（1） 将雷贝拉唑、卵磷脂、胆固醇和抗氧剂加入有机溶剂中，搅拌分散均匀，过滤得第一溶液；

（2） 将冻干保护剂、金属螯合剂加入缓冲溶液中，搅拌使其溶解，过滤得第二溶液；

（3） 将步骤（1）获得的第一溶液加入步骤（2）获得的第二溶液中，升温、搅拌得混合溶液；

（4） 将步骤（3）制得的混合溶液减压蒸发去除1/2～1/3体积的有机溶剂，得浓缩液；

（5）浓缩液经高压均质机乳化，乳化后所得乳化液经过滤，取滤液；

（6） 将培化磷脂酰乙醇胺水溶液加入步骤（5）所得滤液中，55℃孵化，然后冷冻干燥或喷雾干燥，即得所述长循环雷贝拉唑脂质体组合物。

进一步地，我们基于上述制备工艺进一步优选的工艺，包括如下步骤：

（1）将雷贝拉唑、卵磷脂、胆固醇和抗氧剂加入适量的有机溶剂中，加热搅拌至分散均匀，经0.22µm有机膜过滤，取滤液，即为第一溶液；

（2）将冻干保护剂、金属螯合剂加入适量缓冲溶液，振摇，搅拌使溶解，经0.22µm水膜过滤，取滤液，即为第二溶液，将第二溶液于45℃条件下保温存放备用；

（3）将步骤1制得第一溶液缓慢加入步骤（2）制得的第二溶液中，将混合溶液的温度升高至55℃，在55℃条件下，机械搅拌30～50min得混合溶液；

（4）将步骤（3）制得的混合溶液减压蒸发去除1/3～1/2体积的有机溶剂得到浓缩液，蒸发温度控制在45℃，真空度-0.08～-0.04MPa；这里的减压蒸发优选为利用旋蒸仪进行减压旋蒸；

（5）将浓缩液经高压均质机循环乳化4～8次，该溶液于55℃保温条件下经0.08µm或0.1µm聚碳酸酯膜过滤，取滤液；

（6）将培化磷脂酰乙醇胺水溶液加入上述步骤（5）所得滤液中，55℃孵化30min，然后冷冻干燥或喷雾干燥，即得长循环雷贝拉唑脂质体组合物。

更进一步地，我们还公开了另外一种制备工艺，具体包括如下步骤：

（1） 将雷贝拉唑、卵磷脂、胆固醇、培化磷脂酰乙醇胺和抗氧剂加入有机溶剂中，搅拌分散均匀，过滤，取滤液，备用，此步骤滤液称为第一溶液；

（2） 将冻干保护剂、金属螯合剂加入缓冲溶液中，搅拌使溶解，过滤，取滤液，备用，此步骤滤液称为第二溶液；

（3） 将步骤（1）制得第一溶液加入步骤（2）制得第二溶液中，升温、搅拌；

（4） 将步骤（3）制得溶液减压蒸发去除1/3～1/2体积的有机溶剂；得到浓缩液；

（5） 将上述步骤（4）所得浓缩液经高压均质机乳化，聚碳酸酯膜过滤得，取滤液；

（6） 将上述步骤（5）制得滤液冷冻干燥或喷雾干燥，即得所述长循环雷贝拉唑脂质体组合物。

本发明所述的制备方法中，有机溶剂可选自甲醇、乙醇、叔丁醇、异丙醇或二氯甲烷的一种或几种，优选乙醇、叔丁醇或其混合物。

本发明所述的制备方法中，缓冲溶液可选自磷酸盐缓冲溶液、枸橼酸盐缓冲溶液、碳酸盐缓冲溶液、醋酸盐缓冲溶液中的一种或几种，优选为pH为7.0的磷酸盐缓冲溶液或枸橼酸盐缓冲液。

本发明所述的制备方法中，可将均匀的最终溶液置于10至50ml的西林瓶中，冷冻干燥得到所述长循环雷贝拉唑脂质体组合物。冻干曲线为预冻温度-45～-40℃，优选-42℃，预冻时间为2～6h，优选为4h；-20～-15℃保温5h；0～5℃保温6～8h；18～22℃保温6～9h；24～26℃保温3～8h。冻干组合物的最终水分含量一般控制在4%～10%，优选6%～8%。

同时，我们还公开本发明所公开的长循环雷贝拉唑脂质体组合物在制备用于治疗胃食管反流病，消化性溃疡出血，应激状态下引起的急性胃粘膜损伤和出血，活动性十二指肠溃疡、胃溃疡药物中的应用，或者是在制备用于治愈后胃食管反流患者防复发的长期维持药物中的应用，或者是在制备用于胃食管反流性疾病控制药物中的应用。

以及，本发明所公开的长循环雷贝拉唑脂质体组合物在制备雷贝拉唑肠溶片或注射剂中的应用。

本发明提供的长循环雷贝拉唑脂质体组合物，主要具有以下优点：

本发明制得的长循环雷贝拉唑脂质体组合物复溶性好，复溶后平均粒度在200nm以下，粒度分布（多相分散系数）在0.20以下，在复溶过程中，雷贝拉唑基本上不会渗漏出磷脂双分子层，包封率高；产品稳定性佳，制剂质量更可控，降低了副作用，生物利用度明显提高，疗效也更显著。

同时，本发明所公开的雷贝拉唑在体内维持疗效时间长；活性成分雷贝拉唑稳定性高，解决了雷贝拉唑遇热变色的问题；不仅如此，由于所述长循环雷贝拉唑组合物在贮藏过程中，有效成分雷贝拉唑不易受外界环境影响，进一步降低了药物的毒副作用，提高制剂产品的质量。

附图说明

图1是实施例1产品、对比例1产品和市售注射用雷贝拉唑制剂在Beagle犬体内的血浆总雷贝拉唑浓度-时间曲线图；

图2是实施例1产品、对比例1产品和市售注射用雷贝拉唑制剂在Beagle犬体内的血浆超滤雷贝拉唑浓度-时间曲线图。

具体实施方式

下面参照实施例进一步详细阐述本发明，但是本领域技术人员应当能够理解，本发明并不限于这些实施例以及使用的制备方法。而且，本领域技术人员根据本发明的描述可以对本发明进行对其等同的替换、组合、改进和修饰，但这些都将包括在本发明的范围内。

实施例1 长循环雷贝拉唑脂质体冻干粉针剂的制备

处方：（1000瓶）

组分 用量

雷贝拉唑 20g

氢化大豆磷脂酰胆碱 120g

胆固醇 60g

培化磷脂酰乙醇胺 10g

α-生育酚 0.4g

依地酸钙钠 0.4g

海藻糖 60g

制备工艺：

（1）将20g雷贝拉唑、120g氢化大豆磷脂酰胆碱、60g胆固醇和0.4g α-生育酚加入2000ml乙醇中，加热至45℃搅拌分散均匀，0.22µm有机膜过滤；

（2）将60g海藻糖、0.4g依地酸钙钠加入2000ml浓度为10mmol/L磷酸盐缓冲溶液（pH = 7.0），振摇，搅拌使溶解，0.22µm水膜滤过，于45℃条件下保温；

（3）将步骤（1）制得溶液缓慢加入步骤（2）制得溶液中，溶液温度升高至55℃，于机械搅拌器下搅拌40min；

（4）将上述步骤（3）制得溶液减压旋蒸去除有机溶剂，旋蒸温度控制在45℃，真空度-0.08～-0.04MPa；

（5）将上述步骤（4）制得溶液经高压均质机循环乳化8次，该溶液于55℃保温条件下过0.08µm聚碳酸酯膜；

（6）10g培化磷脂酰乙醇胺加入250ml 55℃水溶液中使溶解，加入上述步骤（5）制得溶液中，55℃孵化30min，然后冷冻干燥，分装，轧盖，即得长循环雷贝拉唑脂质体注射剂。

冻干曲线为预冻温度-42℃，预冻时间为4h；-20～-15℃保温5h；0～5℃保温6h；18～22℃保温9h；24～26℃保温6h。

实施例2 长循环雷贝拉唑脂质体冻干粉针剂的制备

处方：（1000瓶）

组分 用量

雷贝拉唑 20g

二硬脂酰磷脂酰胆碱 80g

胆固醇 20g

培化磷脂酰乙醇胺 20g

α-生育酚 0.6g

依地酸二钠 0.6g

海藻糖 50g

制备工艺：

（1）将20g雷贝拉唑、80g二硬脂酰磷脂酰胆碱、20g胆固醇和0.6g α-生育酚加入1600ml体积比为3:1乙醇和叔丁醇溶液中，加热至45℃搅拌分散均匀，0.22µm有机膜滤过；

（2）将50g海藻糖、0.6g依地酸二钠加入1600ml浓度为10mmol/L枸橼酸盐缓冲溶液（pH = 7.0），振摇，搅拌使溶解，0.22µm水膜滤过，于45℃条件下保温；

（3）将步骤（1）制得溶液项缓慢加入步骤（2）制得溶液项中，溶液温度升高至55℃，于机械搅拌器下搅拌30min；

（4）将上述步骤（3）制得溶液减压旋蒸去除有机溶剂，旋蒸温度控制在45℃，真空度-0.08～-0.04MPa；

（5）将上述步骤（4）制得溶液经高压均质机循环乳化6次，该溶液于55℃保温条件下过0.1µm聚碳酸酯膜；

（6）20g培化磷脂酰乙醇胺加入500ml 55℃水溶液中使溶解，加入上述步骤（5）制得溶液中，55℃孵化30min，然后冷冻干燥，分装，轧盖，即得长循环雷贝拉唑脂质体注射剂。

冻干曲线为预冻温度-40℃，预冻时间为6h；-20～-15℃保温5h；0～5℃保温8h；18～22℃保温9h；24～26℃保温8h。

实施例3 长循环雷贝拉唑脂质体冻干粉针剂的制备

处方：（1000瓶）

组分 用量

雷贝拉唑 20g

二棕榈酰磷脂酰胆碱 160g

胆固醇 50g

培化磷脂酰乙醇胺 20g

α-生育酚 1.0g

依地酸钙钠 1g

蔗糖 20g

制备工艺：

（1）将20g雷贝拉唑、160g二棕榈酰磷脂酰胆碱 、50g胆固醇、20g培化磷脂酰乙醇胺和1.0g α-生育酚加入2000ml乙醇中，加热至45℃搅拌分散均匀，0.22µm有机膜滤过；

（2）将20g蔗糖、1g依地酸钙钠加入2000ml浓度为10mmol/L磷酸盐缓冲溶液（pH =7.0），振摇，搅拌使溶解，0.22µm水膜滤过，于45℃条件下保温；

（3）将步骤（1） 制得溶液项缓慢加入步骤（2）制得溶液项中，溶液温度升高至55℃，于机械搅拌器下搅拌50min；

（4）将上述步骤（3）制得溶液减压旋蒸去除有机溶剂，旋蒸温度控制在45℃，真空度-0.08～-0.04MPa；

（5）将上述步骤（4）制得溶液经高压均质机循环乳化8次，该溶液于55℃保温条件下过0.08µm聚碳酸酯膜2次；

（6）上述步骤（5）制得溶液冷冻干燥，分装，轧盖，即得长循环雷贝拉唑脂质体注射剂。

冻干曲线为预冻温度-45℃，预冻时间为2h；-20～-15℃保温5h；0～5℃保温6h；18～22℃保温6h；24～26℃保温3h。

实施例4 制备对比例1～3

参照实施例1的工艺完成表1对比例组方的雷贝拉唑脂质体冻干粉针剂的制备。

表1：

组成	实施例1	对比例1	对比例2	对比例3
					雷贝拉唑	20g	20g	20g	20g
氢化大豆磷脂酰胆碱	120g	/	120g	/
					大豆磷脂酰胆碱	/	120g	/	120g
胆固醇	60g	60g	/	60g
					十八胺	/	/	60g	/
培化磷脂酰乙醇胺	10g	10g	10g	10g
					α-生育酚	0.4g	/	0.4g	/
亚硫酸钠	/	0.4g	/	0.4g
					依地酸钙钠	0.4g	/	/	/
依地酸二钠	/	/	0.4g	0.4g
					海藻糖	60g	/	60g	/
葡萄糖	/	60g	/	60g

试验例1 粒度及其分布的测定

25℃条件下，取实施例和对比例的长循环雷贝拉唑脂质体冻干粉针剂，以纯化水配成冻干前体积溶液，测定前继续对样品进行稀释（稀释倍数为20倍至100倍），置于Nano-ZS （Marlvern）粒度测定仪的样品管中，测定粒度及其分布，结果见表2。

磷钨酸负染法是透射电镜（TEM）观察制剂粒度分布和形态结构的常用方法之一。具体操作方法：取实施例和对比例的长循环雷贝拉唑脂质体冻干粉针剂，以纯化水配成冻干前体积溶液，测定前继续对样品进行稀释（稀释倍数为20倍至100倍），滴加在火棉胶作为支持膜的铜网上，用滤纸吸去多余样品，然后浸泡于2%磷钨酸溶液（用0.1M氢氧化钠调节pH到7.0）中染色3min。染色后的铜网自然晾干，用透射电镜观察脂质体的结构和粒度分布。脂质体粒子形态结果见表2。

表2：粒度及其分布、形态检测结果

实施例	平均粒径	多相分散系数（PdI）	外观形态
				实施例1	180.9nm	0.106	呈大单室脂质体，粒度均匀
对比例1	416.2nm	0.227	有微米级大颗粒存在，粒度不均匀
				实施例2	190.6nm	0.122	呈大单室脂质体，粒度均匀
对比例2	246.7nm	0.204	呈大单室脂质体，粒度不均匀
				实施例3	185.3nm	0.113	呈大单室脂质体，粒度均匀
对比例3	403.7nm	0.215	有微米级大颗粒存在，粒度不均匀

由以上结果可知，实施例1～3制得的固体脂质纳米粒经溶媒复溶后粒度均匀，呈球形，粒度分布均匀；对比例1、对比例3制得的固体纳米粒经溶媒复溶后粒径不均匀，有可见的不溶物存在，在电镜下观察有大颗粒存在；对比例2脂质体纳米粒经溶媒复溶后虽然平均粒径基本符合要求，但其在电镜下观察仍发现有少量的微米级大颗粒，且所制得的粒径不均匀，多项分散系数较大。

试验例2 包封率的测定

将实施例和对比例制备的雷贝拉唑脂质体制剂加纯化水溶解到冻干前体积。首先，取脂质体溶液0.2ml于锥形离心管中，加pH为7.0磷酸盐缓冲溶液至2.0ml，混匀，1000r·min^-1离心10min，尽可能沉淀未被包封的雷贝拉唑结晶聚集体。然后全部取出脂质体上清液约1.9ml，经磷酸盐缓冲液稀释后离心，离心速度为6000r·min^-1，离心温度为10℃，离心时间为30min。取出上清液，将沉淀物用pH为7.5磷酸盐缓冲液清洗2次。在最后离心所得到的脂质体沉淀中加入甲醇溶解，并定容至100ml；另取雷贝拉唑脂质体溶液0.2ml，加甲醇溶液使溶解并定容至100ml。HPLC法测定雷贝拉唑脂质体注射剂未包封的药物含量与总药物含量。包封率的测定采用下面的公式计算：

包封率（%）=脂质体所包封的雷贝拉唑的量（mg）/脂质体溶液中雷贝拉唑的总量（mg）×100%

雷贝拉唑脂质体注射剂含量测定方法采用HPLC法：Shimadzu C18柱（150mm×4.6mm，5.0μm），流动相为磷酸盐缓冲液（取磷酸氢二钠1.119g和磷酸二氢钠0.179g，加水1000ml溶解）-乙腈（60：40），检测波长为292nm，流速1.0ml/min。

表3 包封率测定结果

实施例	实施例1	对比例1	实施例2	对比例2	实施例3	对比例3
							包封率	91.8%	74.3%	90.9%	85.4%	91.2%	76.1%

表3结果显示，实施例1～3和对比例1～3相比，实施例脂质体包封率明显高于对比例包封率，该制备方法可以制备出高包封率的样品。

游离的雷贝拉唑在水性溶液中由于溶解度为不溶，且非常容易发生粒子团聚，从而析出结晶。在测定脂质体包封率时，上述方法通过低速离心法使未包封的雷贝拉唑重新分散在pH为7.5的磷酸盐缓冲液中，pH值为弱碱性雷贝拉唑更容易重新分散，避免了直接采用高速离心法导致结晶的未包封雷贝拉唑（未包裹）被沉淀，从而避免了包封率测定结果虚高。

试验例3 稳定性考察

将本发明实施例1～3和对比例1～3制备的样品和在国外上市的注射用雷贝拉唑（Eisai公司生产，印度）分别置于高温40±2℃、相对湿度75%±5%的条件下放置3个月，进行加速试验考察，分别于1，2，3个月取样，进行相关项目检测，结果见表4。表中0D代表刚制备得到时取样，1M、2M、3M分别代表1月、2月、3月取样。

表4 加速试验结果

由上述结果发现，加速试验初期，上市制剂有关物质含量最少，实施例和对比例产品有关物质无明显差异，但试验过程中上市制剂有关物质增加速度明显较快。

由上述结果可知，本发明实施例制备的样品在长期储存过程中比较稳定，产品有关物质和含量基本稳定，无明显变化；渗漏率也基本未发生变化，而对比例的样品渗漏率逐渐增大，脂质体包封率明显降低，这说明了本发明制备的长循环雷贝拉唑脂质体注射剂具有较高的稳定性。

实验例4 生物利用度试验

将18只Beagle犬（体重在9～11kg）随机分为3组，静脉给予实施例1、对比例1和市售的注射用雷贝拉唑20mg（以有效成分雷贝拉唑计）。Beagle犬采用静脉滴注给药方式，1h内滴注完毕。于滴注前以及滴注30min、1h（拔针点），滴注后5min、0.5h、1h、4h、8h、12h、24h、36h、48h、60h、72h、96h采血1ml于肝素抗凝管中，分离血浆，-80℃保存备用。

取备测血浆样品0.5ml，用甲醇沉淀蛋白并分离蛋白后稀释20、50、100、400、4000倍等（一般给药前和给药时的前两个点、代谢中的最后一个点稀释20或50倍，中间部分时间点一般稀释100或400倍，对于脂质体的中间代谢点有个别稀释至4000倍），然后依据注射用雷贝拉唑体内代谢大致规律，血样中雷贝拉唑浓度由低至高的顺序进样测试。

取备测血浆样品0.5ml，加入至MICROCON Centrifugal Filter Devices超滤离心管中，在大容量冷冻离心机中离心30min（14000g、20℃），取滤过液、稀释待测。

将上述样品进HPLC-MS分析，试验结果分别见附图1和2。

由上述试验所得数据可知，本发明实施例1与对比例1制备的长循环雷贝拉唑脂质体注射剂在雷贝拉唑血浆总浓度和超滤后的游离雷贝拉唑浓度上均高于普通制剂，实施例1产品相对于对比例1产品又明显提升高于对比例1产品。说明实施例1与对比例1制备的长循环雷贝拉唑脂质体注射剂的生物利用度和半衰期均大大高于市售普通制剂，实施例1产品相对于对比例1产品又有明显提升。说明本发明制得的长循环雷贝拉唑脂质体可以显著延长活性成分在体内代谢时间，使得活性成分在人体循环系统中缓慢而持续释放，增强疗效。

Claims (11)

1.一种长循环雷贝拉唑脂质体组合物，其特征是包含如下重量份的组分：

雷贝拉唑 1份

卵磷脂 4-8份

胆固醇 1-3份

培化磷脂酰乙醇胺 0.5-1份

抗氧剂 0.02-0.05份

金属螯合剂 0.02-0.05份

冻干保护剂 1-3份

所述卵磷脂为半合成磷脂氢化大豆磷脂酰胆碱，或全合成磷脂二硬脂酰磷脂酰胆碱、二棕榈酰磷脂酰胆碱或二棕榈酰磷脂酰甘油。

2.根据权利要求1所述的长循环雷贝拉唑脂质体组合物，其特征是，还任意地优选以下任一条件：

所述金属螯合剂为依地酸钙钠或依地酸二钠；

所述冻干保护剂选自葡萄糖、蔗糖、海藻糖、乳糖、山梨醇、甘露醇和右旋糖酐中的一种或几种；

所述抗氧剂为α-生育酚；

所述培化磷脂酰乙醇胺，为聚乙二醇1000化磷脂酰乙醇胺、聚乙二醇2000化磷脂酰乙醇胺或聚乙二醇5000化磷脂酰乙醇胺。

3.根据权利要求1所述的长循环雷贝拉唑脂质体组合物，其特征是，所述培化磷脂酰乙醇胺为聚乙二醇2000化磷脂酰乙醇胺，所述卵磷脂为氢化大豆磷脂酰胆碱或二硬脂酰磷脂酰胆碱，所述冻干保护剂为海藻糖或蔗糖。

4.根据权利要求1-3中任意一项所述的长循环雷贝拉唑脂质体组合物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

（1） 将雷贝拉唑、卵磷脂、胆固醇和抗氧剂加入有机溶剂中，搅拌分散均匀，过滤得第一溶液；

（2） 将冻干保护剂、金属螯合剂加入缓冲溶液中，搅拌使其溶解，过滤得第二溶液；

（3） 将步骤（1）获得的第一溶液加入步骤（2）获得的第二溶液中，升温、搅拌得混合溶液；

（4） 将步骤（3）制得的混合溶液减压蒸发去除1/3～1/2体积的有机溶剂得浓缩液后；

（5） 将步骤（4）所得的浓缩液溶液经高压均质机乳化，乳化后所得乳化液过滤，取滤液；

（6） 将培化磷脂酰乙醇胺水溶液加入步骤（5）所得滤液中，55℃孵化，然后冷冻干燥或喷雾干燥，即得所述长循环雷贝拉唑脂质体组合物。

5.根据权利要求4所述的长循环雷贝拉唑脂质体组合物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

（1）将雷贝拉唑、卵磷脂、胆固醇和抗氧剂加入适量的有机溶剂中，加热搅拌至分散均匀，经0.22µm有机膜过滤，取滤液，即为第一溶液；

（2）将冻干保护剂、金属螯合剂加入适量缓冲溶液，振摇，搅拌使溶解，经0.22µm水膜过滤，取滤液，即为第二溶液，将第二溶液于45℃条件下保温存放备用；

（3）将步骤1制得第一溶液缓慢加入步骤（2）制得的第二溶液中，将混合溶液的温度升高至55℃，在55℃条件下，机械搅拌30～50min得混合溶液；

（4）将步骤（3）制得的混合溶液减压蒸发去除1/3～1/2体积的有机溶剂得到浓缩液，减压蒸发温度控制在45℃，真空度-0.08～-0.04MPa；

（5）将浓缩液经高压均质机循环乳化4～8次，该溶液于55℃保温条件下经0.08µm或0.1µm聚碳酸酯膜过滤，取滤液；

（6）将培化磷脂酰乙醇胺水溶液加入上述步骤（5）所得滤液中，55℃孵化30min，然后冷冻干燥或喷雾干燥，即得长循环雷贝拉唑脂质体组合物。

6.根据权利要求1-3任意一项所述的长循环雷贝拉唑脂质体组合物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

（1）将雷贝拉唑、卵磷脂、胆固醇、培化磷脂酰乙醇胺和抗氧剂加入有机溶剂中，搅拌分散均匀，过滤，取滤液，备用，此步骤滤液称为第一溶液；

（2）将冻干保护剂、金属螯合剂加入缓冲溶液中，搅拌使溶解，过滤，取滤液，备用，此步骤滤液称为第二溶液；

（3）将步骤（1）制得第一溶液加入步骤（2）制得第二溶液中，升温、搅拌；

（4）将步骤（3）制得溶液减压蒸发去除1/3～1/2体积的有机溶剂，得到浓缩液；

（5）将上述步骤（4）所得浓缩液经高压均质机乳化，乳化液经聚碳酸酯膜过滤，取滤液；

（6）将上述步骤（5）制得滤液冷冻干燥或喷雾干燥，即得所述长循环雷贝拉唑脂质体组合物。

7.根据权利要求4 -6任一项所述的制备方法，其特征在于：

所述有机溶剂选自甲醇、乙醇、叔丁醇、异丙醇或二氯甲烷的一种或几种，

所述缓冲溶液选自磷酸盐缓冲溶液、枸橼酸盐缓冲溶液、碳酸盐缓冲溶液、醋酸盐缓冲溶液中的一种或几种。

8.根据权利要求4 -6任一项所述的制备方法，其特征在于：所述有机溶剂选自叔丁醇、乙醇或其混合物。

9.根据权利要求4 -6任一项所述的制备方法，其特征在于：所述缓冲溶液选自pH为7.0的磷酸盐缓冲溶液或枸橼酸盐缓冲液。

10.根据权利要求4 -6任一项所述的制备方法，其特征在于，所述冷冻干燥步骤的冻干曲线为预冻温度-45～-40℃，预冻时间为2～6h；-20～-15℃保温5h；0～5℃保温6～8h；18～22℃保温6～9h；24～26℃保温3～8h。

11.根据权利要求1-3中任意一项所述的长循环雷贝拉唑脂质体组合物在制备雷贝拉唑肠溶片或冻干粉针剂中的应用。