CN102552182A

CN102552182A - 胶核脂质体冻干粉及其制备方法

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Publication number: CN102552182A
Application number: CN2012100224889A
Authority: CN
Inventors: 不公告发明人
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 2012-02-02
Filing date: 2012-02-02
Publication date: 2012-07-11

Abstract

本发明涉及一种胶核脂质体及其制备方法，该脂质体具有高分子亲水胶体为核心和脂质双分子层为壳膜的结构，水溶性药物分散于亲水胶体核心中，该脂质体采用微乳技术、超低温速冻技术等多种技术结合冷冻干燥工艺制备，该脂质体粒径大小可以控制，无需高压均质操作，该脂质体载药量大、磷脂用量小、药物包封率高，并且该脂质体粒径小且不聚集，药物释放缓慢。该脂质体适用包载水溶性药物，尤其适用于热稳定性差的药物和蛋白、多肽、多糖等大分子药物，可作为缓控释给药体系或靶向递送给药系统，也可以用于掩盖苦味或臭味、与其他组分隔离、减少药物刺激作用、液体药物转换为固体形式等制剂目的，应用于注射、口服、黏膜、皮肤、创面、腔道的局部或全身治疗的多种剂型。

Description

胶核脂质体冻干粉及其制备方法

技术领域

本发明属于药物制剂学领域，更具体地说，本发明涉及一种胶核脂质体及其制备方法。

背景技术

脂质体(1iposomes)是一种由排列有序的脂质双分子层组成的单层或多层微囊。脂质体属于胶体系统，具有类似细胞的结构，与细胞膜亲和力强，可以增加被包封药物透过细胞膜的能力。脂质体生物相容性好，可实现药物体内靶向递送，具有延长药物作用时间、增加药物的体内外稳定性、降低药物毒性，增强药理作用等诸多优点。

目前，脂质体按照结构分为三类：①单室脂质体（single unilamellar vesicles, SUV）：按照粒径大小又分为：小单室脂质体（小于200nm）和大单室脂质体（粒径在200～1000nm）。②多室脂质体的粒径（multilamellar vesicles, MLV）：粒径在1μm 至5μm 之间。③多囊脂质体的粒径（multivesicular liposomes, MVL）：粒径在5μm以上。

理想的脂质体需要达到以下要求：（1）脂质体形态圆整且不聚集，可以通过制备方法有效控制粒径范围，实现药物的缓控释作用和靶向递送的目的；（2）脂质体稳定性高，可以长期放置；（3）脂质体具有较高的包封率和载药量，尤其对于热稳定性差药物或水溶性生物大分子药物；（4）脂质体容易实现灭菌或无菌操作。

多室脂质体和多囊脂质体由于粒径大且粒径分布不均匀，很少作为药物微粒载体应用。目前，作为药物载体的脂质体以单室脂质体结构最为常用。但液体核心结构的单室脂质体容易聚集，稳定性差，且容纳药物的能力有限，对于水溶性药物，尤其是热稳定性差或生物大分子药物，传统的单室脂质体存在载药量低、包封率低和突释效应明显等缺点。

脂质体的制备方法有多种，如机械分散法、薄膜分散法、逆相蒸发法、复乳法、熔融法、注入法、冷冻干燥法、表面活性剂处理法、钙融合法、载体沉积法等。

载体沉积法又称为前体脂质体法，系将极细的水溶性支持剂(氯化钠、甘露醇、山梨醇、果糖、乳糖、葡萄糖)的微粉或药粉分散于脂质体膜材的有机溶媒中，采用改进的旋转蒸发器在减压和搅拌的条件下回收有机溶媒，将脂质吸附于水溶性载体上，即得粉体状态的前体脂质体。载体沉积法应用氯化钠、甘露醇等水溶性小分子化合物为核心骨架，但这些化合物需要预先微粉化处理，再利用脂质体膜材包裹这些微粉化的核心骨架。即使如此，在减压回收有机溶媒操作过程中，避免不了作为脂质体核心骨架的微粉粒子之间的不规则聚集，因此前体脂质体遇水转变为脂质体微粒时，粒径分布范围大，且形态极不圆整，可以形成包括单室脂质体、多室脂质体和多囊脂质体各种结构形式。此外，由于脂质体内部的小分子水溶性载体溶解后产生高渗透压，因此应用氯化钠、甘露醇等水溶性小分子化合物为核心骨架的前体脂质体存在水溶性药物快速渗漏、突释效应明显等问题。

冷冻干燥方法容易实现无菌化操作，得到的脂质体冻干粉稳定性好，但已有报道的冷冻干燥方法制备的脂质体冻干粉遇水形成脂质体溶液时，粒径通常增大数倍，形态不圆整且容易聚集，无法有效控制粒径范围，存在安全性问题。

发明专利“一种制备脂质体的新方法”（申请号03111470.9）公开了一种制备脂质体的新方法，其权利要求项1为：“一种制备脂质体的新方法，其特征在于: a. 制备一单相溶液，其溶质为：(1)用于形成脂质体的脂质、待包封的物质，或(2)用于形成脂质体的脂质、待包封的物质和水溶性载体，所述水溶性载体为蔗糖、乳糖或甘露醇;其溶剂由叔丁醇和水组成，叔丁醇和水的体积比大于1: 3。b. 冷冻单相溶液除去溶媒，得到冻干产物，将得到的冻干产物水化得到脂质体”。

发明专利“一种制备脂质体的新方法”（申请号03111470.9）虽然利用了叔丁醇为溶液的冷冻干燥工艺，但明确强调：(1)水溶性载体为蔗糖、乳糖或甘露醇；(2)冷冻干燥前必须得到单相溶液体系。该发明专利制备得到的脂质体冻干粉溶解于水中形成的脂质体粒径虽然小，但结构依然是传统的单室脂质体，因为蔗糖、乳糖或甘露醇等小分子水溶性物质容易透过脂质膜溶解到溶出介质中。此外该发明制备的脂质体由于内部的小分子水溶性载体溶解后产生高渗透压，因此存在水溶性药物快速渗漏的问题，并且该发明药物包封率较低（实施例5为21%，实施例6为40%），无法满足中国药典2010版对于脂质体包封率（大于85%）的要求。

虽然脂质体制备方法很多，但由于脂质体的表面电荷、双层膜流动性等特点，导致包载水溶性药物的脂质体存在诸多问题：（1）脂质体粒径无法有效控制，脂质体微粒易聚集；（2）药物载药量低、包封率低，容易渗漏，突释效应明显；（3）脂质体制备方法操作复杂，需要加热、除盐、高压均质等剧烈操作步骤，无法适用于热稳定性差药物；（4）无法有效的包载生物大分子药物；（5）无法实现无菌操作。

发明内容

本发明要解决的技术问题是针对现有的脂质体结构的不足之处，提供一种高分子亲水胶体为核心的脂质体---胶核脂质体，胶核脂质体具有高分子亲水胶体为核心和脂质双分子层为壳膜的结构，水溶性药物分散于高分子亲水胶体核心中，胶核脂质体的冻干粉溶解于水中形成的脂质体粒径小，分散均匀且不聚集、稳定性高、药物包封率高。

此外，发明人探索出一种胶核脂质体的制备方法。明胶等高分子亲水胶体溶液对于水溶性药物具有较好的吸纳能力，但很难长期保存；W/O型微乳溶液分散度大，但内水相载药量低；固体分散体具有很好的固态分散体系，但需要大量的载体，且存在老化现象；冷冻干燥工艺得到的胶核脂质体稳定性最高，但冷冻干燥后的胶核脂质体冻干品溶解于水后形成的胶核脂质体粒径增大且容易聚集。发明人经过大量实验，创新性地将“胶体技术”、“乳剂技术”、“微乳技术”、“固体分散体技术”、“冷冻干燥工艺”有机融合成一体，集成了胶体和乳剂的高载药量、微乳和固体分散体技术的高分散性、冷冻干燥工艺的高稳定性等特点，探索出胶核脂质体的制备方法，克服传统脂质体包载水溶性药物存在的载药量低、药物包封率低、突释效应明显等问题，并且提高了冷冻干燥效率，缩短了冷冻干燥周期。

本发明的胶核脂质体制备方法的关键技术组合为：①制备高分子亲水胶体溶液的水相，用于容纳水溶性药物；②制备含脂质材料、乳化剂和冻干支持剂的叔丁醇油相；③水相转入油相中形成W/O型乳剂（由于高分子亲水胶体溶液作为内水相，因此不可能与叔丁醇的外油相形成单相溶液体系）；④超声分散W/O型乳剂形成W/O型微乳溶液；⑤超低温速冻处理，使W/O型微乳溶液形成叔丁醇为分散基质的固体分散体；⑥固体分散体冷冻干燥形成冻干粉。

以水蛭素为例，实验组：按照质量配比计算，将1份高分子亲水胶体材料溶解在10份水中，加入5份水蛭素，混匀形成水相；将5份磷脂材料、10份聚氧乙烯氢化蓖麻油和100份泊洛沙姆溶解在200份叔丁醇中，形成油相；将含有水溶性药物的水相分散到油相中，混匀，连续超声（60kHZ）处理2min形成W/O型乳液，采用液氮超低温速冻成固体，冷冻干燥周期为25h，形成水蛭素胶核脂质体冻干粉。

发明人设置了对照试验进行观察，对照试验组如下：

对照试验组1（不加高分子亲水胶体材料）：按照质量配比计算，将5份水蛭素溶解在10份水中形成水相；将5份磷脂材料、10份聚氧乙烯氢化蓖麻油和100份泊洛沙姆溶解在200份叔丁醇中，形成油相；将含有水溶性药物的水相分散到油相中，混匀，连续超声（60kHZ）处理2min形成W/O型乳液，采用液氮超低温速冻成固体，冷冻干燥周期为25h，形成水蛭素胶核脂质体冻干粉。

对照试验组2（不经超声处理）：按照质量配比计算，将1份高分子亲水胶体材料溶解在10份水中，加入5份水蛭素，混匀形成水相；将5份磷脂材料、10份聚氧乙烯氢化蓖麻油和100份泊洛沙姆溶解在200份叔丁醇中，形成油相；将含有水溶性药物的水相分散到油相中，混匀，采用液氮超低温速冻成固体，冷冻干燥周期为25h，形成水蛭素胶核脂质体冻干粉。

对照试验组3（不经过超低温速冻处理）：按照质量配比计算，将1份高分子亲水胶体材料溶解在10份水中，加入5份水蛭素，混匀形成水相；将5份磷脂材料、10份聚氧乙烯氢化蓖麻油和100份泊洛沙姆溶解在200份叔丁醇中，形成油相；将含有水溶性药物的水相分散到油相中，混匀，连续超声（60kHZ）处理2min形成W/O型乳液，放置于-20摄氏度冰箱中冷冻8小时形成固体，冷冻干燥周期为25h，形成水蛭素胶核脂质体冻干粉。

结果发现，按照质量配比计算，将1份实验组的水蛭素胶核脂质体冻干粉溶解于50份水中，形成的胶核脂质体粒径较小（<1μm），微观形态圆整，分散均匀，放置24小时没有明显变化。采用葡聚糖凝胶分离法结合HPLC测定包封率，实验组的水蛭素胶核脂质体包封率达到98.6%，并且放置30min后测定，水蛭素胶核脂质体没有突释效应。

对照试验组1（不加高分子亲水胶体材料），按照质量配比计算，将1份的水蛭素脂质体冻干粉溶解于50份水中，形成的脂质体初始粒径较小，但聚集速度快，容易形成大粒子（>2μm），初始包封率达到88.2%，但药物渗漏严重，存在明显突释效应。

对照试验组2（不经超声处理），按照质量配比计算，将1份的水蛭素脂质体冻干粉溶解于50份水中，形成的脂质体粒径较大（>2μm），形状不圆整，且分布不均匀，脂质体包封率为85.2%。

对照试验组3（不经过超低温速冻处理），按照质量配比计算，将1份的水蛭素脂质体冻干粉溶解于50份水中，形成的脂质体粒径大（>2μm），形状不圆整，脂质体包封率为82.6%。

实验结果表明，本发明的胶核脂质体制备方法的关键技术组合缺一不可。

此外，发明人重复以上“实验组”方法，但冷冻干燥周期缩短为16h，结果发现胶核脂质体冻干粉与实验组的胶核脂质体冻干粉疏松度一致，冻干粉中残余的微量水含量一致，胶核脂质体冻干粉溶解于水后胶核脂质体粒径、微观形态和包封率等结果与实验组完全一致。表明本发明的胶核脂质体制备方法可以有效提高冷冻干燥效率，缩短了冷冻干燥周期。

实验中还发现，传统脂质体需要大量磷脂材料才能包载一定的药物，药物：磷脂的质量比例最低不少于1:5，而本发明的胶核脂质体中药物：磷脂的质量比例可以达到1:1甚至更低，节约了磷脂的用量，显著提高脂质体的载药能力。此外，本发明制备工艺简便，不需要采用pH梯度或硫酸铵梯度法即可制备高包封率载药脂质体，省去除盐和高压均质等复杂的操作过程，容易实现无菌化操作。

因此，发明人通过大量实验，得到一种稳定的载药脂质体冻干粉，其组分包含高分子亲水胶体材料、水溶性药物、脂质材料、乳化剂和冻干支持剂，这些组分的选择要求如下。

高分子亲水胶体材料的要求：安全性高，体内可吸收或生物可降解，在水溶液中能够形成稳定的胶体网络骨架，可以吸纳不同类型的药物分子，保护药物分子结构和立体构象在成乳和冷冻干燥过程中不受影响。

水溶性药物的要求：量小效强，具有一定的水溶性，有确定的活性中心或特定的构象，但存在体内外的稳定性差、穿透生物膜能力差、体内缺乏靶向性、容易和制剂其他组分发生配伍反应、液体药物需要转变为固体状态等问题，需要利用微粒载体保护结构、提高穿透生物膜能力、提高靶向性、与其他组分隔离、改善性状等。

脂质材料的要求：同时具有亲水链和疏水链，具有很好的生物相容性，临界胶团浓度低，水溶液中能够形成脂质体或脂质囊泡结构。

乳化剂的要求：具有很好的生物相容性，安全性高，与药物之间无反应，有利于脂质体或脂质囊泡的成型。

冻干支持剂的要求：水中溶解度高，玻璃化转变温度（Tg）较低，冻干后含水量低（<3%），具有很好的溶出速率，形成的溶液澄清度好。

满足以上要求的各组分，可以通过“制备载药胶体—形成W/O型乳剂—形成W/O型微乳—形成叔丁醇为基质的固体分散体—冷冻干燥”创新组合的制备工艺，得到脂质体冻干粉。该脂质体冻干粉在水性介质中溶解后形成含有高分子亲水胶体为核心和脂质双分子层为壳膜结构的胶核脂质体的溶液，水溶性药物分散于高分子亲水胶体核心中。该胶核脂质体集成了胶体和乳剂的高载药量、微乳和固体分散体技术的高分散性、冷冻干燥工艺的高稳定性等特点，避免药物受热，实现了包载药物的脂质体的高度分散和粒径均匀性。

由此，一种胶核脂质体冻干粉，该脂质体冻干粉中各组分质量配比为：1份高分子亲水胶体材料，0.05-50份水溶性药物，0.5-50份脂质材料，2-100份乳化剂，10-1000份冻干支持剂，脂质体冻干粉中水分含量低于3%，临用前按照质量配比计算，1份脂质体冻干粉溶解于5-100份的水性介质中形成含有高分子亲水胶体为核心和脂质双分子层为壳膜结构的脂质体的溶液，水溶性药物分散于高分子亲水胶体核心中。

上述的脂质体冻干粉中各组分质量配比优选范围为：1份高分子亲水胶体材料，0.5-10份水溶性药物，1-10份脂质材料，10-60份乳化剂，100-400份冻干支持剂，脂质体冻干粉中水分含量低于3%，临用前按照质量配比计算，1份脂质体冻干粉溶解于20-50份的水性介质中形成含有高分子亲水胶体为核心和脂质双分子层为壳膜结构的脂质体的溶液，水溶性药物分散于高分子亲水胶体核心中。

上述的高分子亲水胶体材料是指药学公知的药用高分子亲水胶体材料，包括明胶、胶原、白蛋白、阿拉伯胶、西黄芪胶、瓜木耳胶、结冷胶、淀粉及其衍生物、环糊精及其衍生物、海藻糖、海藻酸及其钠盐、葡聚糖及其衍生物、壳聚糖及其衍生物、纤维素及其衍生物。

上述的高分子亲水胶体材料是指明胶、胶原或白蛋白。

上述的水溶性药物是指单独应用、配合增溶剂应用或在特定pH值范围内药物溶解度大于0.01mg/ml的生物大分子药物、化学药物或中药有效提取物。

上述的生物大分子药物是指蛋白质、多肽、多糖、酶、辅酶、核酸结构的药物及它们的生物降解或衍生产物，包括生长因子、激素、刺激因子、抗体、疫苗、干扰素、白介素、动植物来源的多糖。

上述的水溶性药物包括：胰岛素、水蛭素、血管内皮生长抑制因子、神经营养因子、细胞生长因子、干扰素、荧光蛋白、奥沙利铂，卡铂，奈达铂、阿柔比星、多柔比星、表柔比星、米托蒽醌、博莱霉素、平阳霉素、丝裂霉素、厄洛替尼、吉非替尼、伊马替尼、达沙替尼、阿立必利、阿扎司琼、昂丹司琼、氯磷酸、美司钠、利妥昔单抗、替伊莫单抗、西妥昔单抗、贝伐单抗、阿那曲唑，氨鲁米特，福美坦，依西美坦、替尼泊苷、依托泊苷，喷司他丁、伊立替康、白消安、氮芥、卡莫斯丁、罗莫司丁、高三尖杉酯碱、门冬酰胺酶、培门冬酶、阿糖胞苷、氟脲苷、吉西他滨、西地尼布、阿伦膦酸钠、瑞舒伐他汀、抗凝血酶、卡莫氟、多西他赛、长春地辛、长春新碱、紫杉醇、索拉菲尼、地西他滨、丙卡巴肼、尼莫地平、硝苯地平、尼群地平、非洛地平、双氯灭痛、埃索美拉唑、萘普生、非诺贝特、盐酸曲马多、吗啡、硝酸甘油、可乐定、单硝酸异山梨醇酯、盐酸噻氯匹啶、乙酰唑胺、对乙酰氨基酚、氨茶碱、阿米替林、氨苄西林、羟氨苄青霉素、阿司匹林、贝克拉胺、咖啡因、西咪替丁、苯巴比妥、樟脑、氯霉素、氯非那敏、盐酸氯丙嗪、氯贝特、氯唑西林、磷酸可待因、地西泮、右美沙芬、布洛芬、盐酸苯海拉明、盐酸多西环素、依普拉酮、芬氟拉明、柠檬酸亚铁、富马酸亚铁、硫酸亚铁、东莨菪碱、伪麻黄碱、小檗碱、黄连素、吲哚美辛、左旋多巴、碳酸锂、盐酸甲氯芬酯、甲喹酮、甲基安非太明、乙酰螺旋霉素、呋喃妥因、去甲替林、那可丁、盐酸帕努拉明、非那西丁、保泰松、盐酸苯福明、盐酸苯丙胺醇、泼尼松龙、普鲁卡因胺、溴丙胺太林、盐酸右丙氧芬、普萘洛尔、硫酸奎尼尔、硫利达嗪、氟喹啉、利福霉素、葡萄糖酸锌、磺胺托嘧啶、四环素、链霉素、庆大霉素、丁苯酞、三氟美嗪、阿利马嗪、维生素、核磁造影剂、同位素、Actos、Advair、AmbienCR、Arzerra、Aricept、Arimidex、Atryn、Avapro、Avastin、Brilinta、Bucindolol、Caduet、Campostar、Celevrex、CellCept、CoregCR、Coumadin、Combivir、Enzastaurin、EPO、Erbitux、Femara、Flomax、Gemzar、Gleevec、Herceptin、hGH、Iressa、Imitrex、Kalbitor、Keppra、Levaquin、Lipitor、Mirapex、NovoSeven、Plavix、Prevacid、Prozac、Protonix、Remicade、Removab、Rituxan、Seroquel、Simponi、Stelara、Suboxone、Tarceva、Tamoxifen、Tarceva、Taxotere、Telaprevir、Tegretol、Topamax、Tykerb、TPA、Valtrex、Xalatan、Xeloda、Ziagen、Zyprexa。

上述的脂质材料是指药学公知的磷脂和类脂材料，包括天然卵磷脂、氢化磷脂、合成磷脂及其聚乙二醇修饰衍生物、饱和脂肪酸甘油酯、硬脂酸、棕榈酸、甾体。

上述的冻干支持剂包括药学公知的冷冻干燥支持剂，包括甘露醇、山梨醇、木糖醇、聚乙二醇、聚维酮和泊洛沙姆。

上述的冻干支持剂是指聚乙二醇、泊洛沙姆，包括：聚乙二醇1500、聚乙二醇2000、聚乙二醇4000、泊洛沙姆188、泊洛沙姆407。

按照质量百分比计算，上述的冻干支持剂泊洛沙姆占冻干支持剂总量的5%-100%。

上述的乳化剂是指药学公认的非离子型乳化剂，包括聚氧乙烯氢化蓖麻油、吐温80、司盘80、苄泽、卖泽。

上述的乳化剂是指聚氧乙烯氢化蓖麻油、吐温80。

上述的胶核脂质体冻干粉中还包含0.01-10份质量配比计算的药学公认的助乳化剂，包括乙二醇、丙二醇、甘油、油酸、甘油酯。

上述的脂质体冻干粉中的助乳化剂质量配比为0.1-5份，助乳化剂为油酸、丙二醇。

上述的脂质体冻干粉中还包含0.01-10份质量配比计算的药学公认的抗氧化剂，包括维生素E、维生素C、亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、焦亚硫酸钠、硫代硫酸钠、二丁基苯酚、叔丁基对羟基茴香醚。

上述的脂质体冻干粉中的抗氧化剂的质量配比为0.1-5份，所述的抗氧化剂是指维生素E、维生素C、叔丁基对羟基茴香醚。

上述的脂质体冻干粉中还包含0.1-5份质量配比计算的药学公认的稳定剂，包括：人血清白蛋白、酒石酸、琥珀酸、胆酸、脱氧胆酸、富马酸、枸橼酸、棕榈酸、人体必需氨基酸。

上述的脂质体冻干粉中的稳定剂是指人血清白蛋白、酒石酸、琥珀酸、富马酸、枸橼酸、棕榈酸、精氨酸、甘氨酸。

上述的水性介质是指应用无菌蒸馏水为基础配制的溶液或输液。

上述脂质体冻干粉溶解于水性介质中形成的脂质体粒径在微米或纳米范围内。

上述脂质体冻干粉溶解于水性介质中形成的脂质体粒径在100nm-650nm范围内。

上述的脂质体冻干粉溶解于水性介质中形成的脂质体粒径在100 nm -450nm范围内。

上述的脂质体冻干粉是单独使用或组合到制剂处方中应用，通过注射、口服、黏膜、皮肤、创面、腔道途径给药，发挥治疗、诊断、预防、免疫、清洗、消毒、美容、保健的应用。

上述的脂质体冻干粉通过选用不同类型的磷脂或类脂材料组合，制成PEG修饰的长循环胶核脂质体冻干粉、pH敏感胶核脂质体冻干粉、温度敏感胶核脂质体冻干粉、表面带正电荷的胶核脂质体冻干粉，以优化胃肠道内定位释药或体内血循环靶向释药作用。

上述脂质体冻干粉的制备方法，按照质量配比计算，将1份高分子亲水胶体材料溶解在10-200份水中，加入0.05-50份水溶性药物，混匀形成水相；将0.5-50份脂质材料、2-100份乳化剂和10-1000份冻干支持剂溶解在50-4000份叔丁醇中，形成油相；将水相分散到油相中形成W/O型乳液，超声、高速搅拌或高压均质处理形成W/O型微乳溶液，采用超低温速冻工艺形成固体分散体，冷冻干燥除去叔丁醇，形成脂质体冻干粉，脂质体冻干粉中水分含量低于3%，临用前按照质量配比计算，1份脂质体冻干粉溶解于5-100份的水性介质中，形成含有高分子亲水胶体为核心和脂质双分子层为壳膜结构的脂质体的溶液。

上述的脂质体的制备方法中，按照质量配比计算，将1份高分子亲水胶体材料溶解在50-200份水中，加入0.5-10份水溶性药物，混匀形成水相；将1-10份脂质材料、10-60份乳化剂和100-400份冻干支持剂溶解在500-2000份叔丁醇中，形成油相；将水相分散到油相中形成W/O型乳液，超声处理形成W/O型微乳溶液，采用超低温速冻工艺形成固体分散体，冷冻干燥除去叔丁醇，形成脂质体冻干粉，脂质体冻干粉中水分含量低于3%，临用前按照质量配比计算，1份脂质体冻干粉溶解于5-100份的水性介质中，形成含有高分子亲水胶体为核心和脂质双分子层为壳膜结构的脂质体的溶液。

上述的水相或油相中还可以加入0.01-10份质量配比计算的药学公知的助乳化剂，用于减少乳化剂用量，所述助乳化剂包括乙二醇、丙二醇、甘油、油酸、甘油酯。

上述的助乳化剂质量配比范围为0.1-5份，所述助乳化剂是指丙二醇、油酸。

上述的水相或油相中还可以加入0.01-10份质量配比计算的药学公知的pH调节剂，用于提高药物在水相中的溶解度，所述pH调节剂包括有机酸、有机碱、无机酸、无机碱、强酸弱碱盐、强碱弱酸盐、多元酸的盐。

上述的水相或油相中还可以加入0.01-10份质量配比计算的药学公知的抗氧化剂，用于增加载药脂质体在储存过程中的稳定性，所述的抗氧化剂包括维生素E、维生素C、亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、焦亚硫酸钠、硫代硫酸钠、二丁基苯酚、叔丁基对羟基茴香醚。

上述的水相中还可以加入0.1-5份质量配比计算的药学公知的稳定剂，用于增加药物在制备和储存过程中的稳定性，所述的稳定剂包括人血清白蛋白、酒石酸、琥珀酸、胆酸、脱氧胆酸、富马酸、枸橼酸、棕榈酸、人体必需氨基酸。

通过调节叔丁醇和冻干支持剂的质量配比可以控制最终制备得到的脂质体的粒径，叔丁醇和冻干支持剂的质量配比越高，制备得到的脂质体粒径越小。

上述的超低温速冻是指在-35℃以下的环境中迅速冷冻的工艺，包括在液氮、二氧化碳干冰、超低温乙醇或超低温冰箱的环境中迅速冷冻的处理工艺。

上述超声的频率范围为20~100 KHz，超声模式为连续超声模式或脉冲超声模式，超声时间30s-3min。

上述超声的频率范围为50~90 KHz，超声模式为连续超声模式或脉冲超声模式，超声时间30s-2min。

上述的高分子亲水胶体材料是指明胶、胶原或白蛋白。

上述的水溶性药物是指单独应用、配合增溶剂应用或在特定pH值范围内药物溶解度大于0.01mg/ml的化学药物、生物大分子药物或中药有效提取物。

上述的脂质材料可以是不同类型的磷脂或类脂材料的组合，最终制成PEG修饰的长循环脂质体冻干粉、pH敏感脂质体冻干粉、温度敏感脂质体冻干粉、表面带正电荷的脂质体冻干粉，以优化胃肠道内定位释药或体内血循环靶向释药作用。

上述的冻干支持剂按照质量百分比计算，泊洛沙姆占冻干支持剂总量的5%-100%。

上述的乳化剂是指聚氧乙烯氢化蓖麻油、吐温80。

上述的脂质体冻干粉临用前加入水性介质，形成的脂质体粒径在微米或纳米范围内。

上述的脂质体冻干粉临用前加入水性介质，形成的脂质体粒径在100nm-650nm范围内。

上述的脂质体冻干粉临用前加入水性介质，形成的脂质体粒径在100nm-450nm范围内。

本发明的胶核脂质体及其制备方法，具有下述优点：（1）该脂质体具有高分子亲水胶体为核心和脂质双分子层为壳膜的结构，水溶性药物分散于高分子亲水胶体核心中，具有载药量大、磷脂用量小、药物稳定性强、药物包封率高并具有长效释药作用特点；（2）该脂质体制备工艺创新性地将“胶体技术”、“乳剂技术”、“微乳技术”、“固体分散体技术”、“冷冻干燥工艺”有机融合成一体，集成了胶体和乳剂的高载药量、微乳和固体分散体技术的高分散性、冷冻干燥工艺的高稳定性等特点，避免药物受热，实现了包载药物的脂质体的高度分散和粒径均匀性；（3）该脂质体制备工艺有效提高了传统脂质体冷冻干燥制备工艺的效率，减少冻干操作时间。（4）该脂质体的药物：磷脂的质量比例可以达到1:1甚至更低，节约了磷脂的用量，显著提高脂质体的载药能力；（5）该脂质体制备工艺简便，不需要采用pH梯度或硫酸铵梯度法即可制备高包封率脂质体，省去透析除盐等复杂的操作过程，容易实现无菌化操作；（6）可以通过调节叔丁醇和泊洛沙姆的用量控制胶核脂质体粒径；（7）该脂质体的粒径在纳米范围内，并可以有效控制粒径，有利于药物穿透皮肤、黏膜或体内生物膜屏障，适用范围广，可应用于多种剂型，满足注射、口服、黏膜、皮肤、创面、腔道的局部或全身治疗的需要。（8）该脂质体可作为缓控释给药体系或靶向递送给药系统，也可以用于掩盖苦味或臭味、与其他组分隔离、减少药物刺激作用、液体药物转换为固体形式等制剂目的。

【注】：玻璃化转变温度（Tg）指的是当溶液浓度达到最大冻结浓缩状态发生玻璃化转变时的温度。“玻璃化”是指物质以非晶态形式存在的一种黏度极大且流动性差的状态。

【附图说明】

图1：本发明的脂质体结构示意图（A：胶核脂质体；B：长循环的胶核脂质体）

图2：本发明的脂质体制备流程示意图

图3：阿霉素脂质体体外释药曲线

图4：阿霉素温度敏感胶核脂质体体外释药曲线

【具体实施方式】

现结合下列实例来进一步描述本发明。

实施例1：水蛭素胶核脂质体

大部分蛋白和多肽类药物水溶性好，但不耐热，体内易降解。本实施例以水蛭素为对象，制备水蛭素胶核脂质体，水蛭素胶核脂质体组成如表1。

表1 水蛭素胶核脂质体组分配比

Figure 2012100224889100002DEST_PATH_IMAGE001

水蛭素胶核脂质体冻干粉制备方法：如图2所示，按照以上各组分的质量配比，分别称取组分，将高分子亲水胶体材料溶解在100mg水中，加入水蛭素，溶解，形成水相；将脂质材料、乳化剂和冻干支持剂溶解在规定质量的叔丁醇中，形成油相；将上述水相加入到油相中形成W/O型乳液，脉冲超声（60 KHz）处理2min形成W/O型微乳，于液氮中速冻成固体分散体，冷冻干燥20h形成冻干粉。

粒径分析：取50mg水蛭素胶核脂质体冻干粉加入1g水形成胶核脂质体溶液，应用库尔特粒径分析仪测定平均粒径。

结果：胶核脂质体结构如图1A所示，处方1的水蛭素胶核脂质体平均粒径为915nm，处方2的水蛭素胶核脂质体平均粒径为742nm，处方3的水蛭素胶核脂质体平均粒径为286nm，处方4的水蛭素胶核脂质体平均粒径为220nm，处方5的水蛭素胶核脂质体平均粒径为120nm，处方6 -11的水蛭素胶核脂质体粒径分别为：970nm，290 nm，950 nm，265nm，890 nm和280nm。结果表明调节叔丁醇和冻干支持剂的用量可以控制胶核脂质体粒径。叔丁醇和冻干支持剂的用量越大，胶核脂质体的粒径越小。

实施例2：生长激素胶核脂质体

本实施例制备生长激素胶核脂质体，生长激素胶核脂质体组成如表2。

表2 生长激素胶核脂质体组分配比

处方

生长激素

高分子亲水胶体材料

乳化剂

脂质材料

冻干支持剂

助乳化剂

抗氧化剂

处方1

2.5mg

明胶1mg

聚氧乙烯氢化蓖麻油100mg

氢化蛋黄磷脂 5mg

泊洛沙姆188 200mg

处方2

2.5mg

胶原1mg

聚氧乙烯氢化蓖麻油100mg

氢化蛋黄磷脂3mg， PEG化磷脂DSPE-PEG2000 1mg

聚乙二醇4000 100mg；泊洛沙姆188 100mg

处方3

2.5mg

明胶1mg

聚氧乙烯氢化蓖麻油100mg

高纯度大豆磷脂：十八胺(6:4)共12mg

泊洛沙姆188 200mg

处方4

2.5mg

羟乙基淀粉1mg

聚氧乙烯氢化蓖麻油100mg

高纯度蛋黄磷脂 10mg

泊洛沙姆407 200mg

处方5

5mg

阿拉伯胶10mg

聚氧乙烯氢化蓖麻油95mg

氢化蛋黄磷脂 5mg

聚乙二醇4000 180mg；泊洛沙姆188 20mg

油酸1mg

处方6

5mg

明胶10mg

聚氧乙烯氢化蓖麻油90mg

氢化蛋黄磷脂 5mg

聚乙二醇4000 180mg；泊洛沙姆188 20mg

丙二醇10mg

处方7

5mg

明胶1mg

聚氧乙烯氢化蓖麻油90mg

氢化蛋黄磷脂 5mg

泊洛沙姆188 200mg

甘油10mg

维生素E 0.01mg

处方8

5mg

明胶1mg

吐温80 100mg

氢化蛋黄磷脂 5mg

泊洛沙姆188 200mg

维生素C 0.5mg

处方9

5mg

明胶1mg

聚氧乙烯氢化蓖麻油100mg

氢化蛋黄磷脂 5mg

肝素-泊洛沙姆188结合物 200mg

处方10

5mg

明胶1mg

聚氧乙烯氢化蓖麻油100mg

硬脂酸甘油酯 5mg

泊洛沙姆407 200mg

处方11

5mg

白蛋白1mg

聚氧乙烯氢化蓖麻油100mg

氢化蛋黄磷脂 5mg

泊洛沙姆188 200mg

处方12

5mg

海藻酸钠 1mg

聚氧乙烯氢化蓖麻油100mg

氢化蛋黄磷脂 5mg

泊洛沙姆407 200mg

注：肝素-泊洛沙姆188结合物是参照文献【Tian JL, Zhao YZ, Jin Z, et al. Synthesis and characterization of Poloxamer 188 grafted heparin copolymer. Drug Dev Ind Pharm. 2010, 36(7):832-838】制备。

生长激素胶核脂质体冻干粉制备方法：按照以上各组分的质量配比，分别称取组分，将高分子亲水胶体材料溶解在100mg水中，加入生长激素，溶解，形成水相；将脂质材料、乳化剂和冻干支持剂溶解在2g叔丁醇中，形成油相；将上述水相加入到油相中形成W/O型乳液，连续超声（20 KHz）处理3min形成W/O型微乳，于液氮中速冻成固体分散体，冷冻干燥20h形成冻干粉。部分处方中含助乳化剂，适量助乳化剂的加入可以减少乳化剂用量，但助乳化剂用量过多，会降低冷冻干燥的效率。抗氧化剂可以保护药物在储存过程中不发生氧化反应。制备时将水溶性抗氧化剂（如：维生素C）加入到上述水相中，脂溶性抗氧化剂（如：维生素E）和助乳化剂加入到上述油相中，其余步骤同上即可。

实施例3：生长激素胶核脂质体的质量评价

本实施例利用实施例2制备的生长激素胶核脂质体进行质量评价。

微观形态和粒径分析：取100mg生长激素胶核脂质体冻干粉加入0.5g水形成胶核脂质体溶液，分别吸取一定量的胶核脂质体混悬液并用1%磷钨酸染色，置于扫描电镜下观察胶核脂质体的形态特征，应用库尔特粒径分析仪测定胶核脂质体粒径。

包封率测定：取0.5g上述的生长激素胶核脂质体溶液，上样于Sephadex G-50凝胶柱，以蒸馏水为洗脱液，接取不同体积的洗脱部分，分离接收游离的生长激素洗脱部分，利用HPLC法分析含量，采用“包封率（%）=[（生长激素总量-游离的生长激素量）/生长激素总量]′100”公式计算生长激素胶核脂质体的包封率。

实验结果见表3，可见本发明制备的生长激素胶核脂质体具有较好的粒径分布和微观形态，包封率高（均超过90%），且无突释效应。此外，处方3制备的生长激素胶核脂质体表面带明显的正电荷（表面电位约+38mv），其它处方的胶核脂质体表面带微弱的负电荷（表面电位约-12mv）。

表3 生长激素胶核脂质体的质量评价

处方	微观形态	粒径分布	包封率（%）	突释效应
					处方1	颗粒圆整，分布均匀，无聚团	粒径分布500-900 nm，分布较窄	96.1	无
处方2	颗粒圆整，分布均匀，无聚团	粒径分布500-900 nm，分布较窄	97.4	无
					处方3	颗粒圆整，分布均匀，无聚团	粒径分布500-900 nm，分布较窄	94.6	无
处方4	颗粒圆整，分布均匀，无聚团	粒径分布500-900 nm，分布较窄	92.8	无
					处方5	颗粒圆整，分布均匀，无聚团	粒径分布500-900 nm，分布较窄	94.4	无
处方6	颗粒圆整，分布均匀，无聚团	粒径分布500-900 nm，分布较窄	93.8	无
					处方7	颗粒圆整，分布均匀，无聚团	粒径分布500-900 nm，分布较窄	93.3	无
处方8	颗粒圆整，分布均匀，无聚团	粒径分布500-950 nm，分布较窄	94.5	无
					处方9	颗粒圆整，分布均匀，无聚团	粒径分布500-900 nm，分布较窄	94.2	无
处方10	颗粒圆整，分布均匀，无聚团	粒径分布500-950 nm，分布较窄	92.6	无
					处方11	颗粒圆整，分布均匀，无聚团	粒径分布400-850 nm，分布较窄	93.6	无
处方12	颗粒圆整，分布均匀，无聚团	粒径分布500-1000 nm，分布较窄	91.6	无

注：根据中华人民共和国药典（2010版）规定，脂质体、微球等微粒在开始0.5h内的释放量大于40％，则存在突释效应。

实施例4: 阿霉素胶核脂质体的制备

抗肿瘤的化学药物很多，包括阿霉素、长春新碱、拓扑替康等，虽然抑制肿瘤作用确切，但体内缺乏靶向性，因此毒副作用强，需要靶向递送载体。本实施例以阿霉素为对象，制备阿霉素胶核脂质体，阿霉素胶核脂质体组成如表4。

表4阿霉素胶核脂质体组分配比

处方

阿霉素

高分子亲水胶体材料

乳化剂

脂质材料

冻干支持剂

pH调节剂

助乳化剂

处方1

2.5mg

明胶2mg

聚氧乙烯氢化蓖麻油100mg

DSPE-PEG2000 5mg

泊洛沙姆188 200mg

盐酸0.02mg

丙二醇0.1mg

处方2

2.5mg

明胶2mg

聚氧乙烯氢化蓖麻油100mg

DSPE-PEG4000 1mg

泊洛沙姆407 195mg；甘露醇 5mg

盐酸0.1mg

丙二醇0.1mg

处方3

2.5mg

明胶2mg

聚氧乙烯氢化蓖麻油100mg

DPPC:DSPE-PEG2000 (40:60) 共2.5mg

聚乙二醇4000 380mg；泊洛沙姆188 20mg

盐酸0.2mg

丙二醇0.1mg

处方4

2.5mg

明胶2mg

聚氧乙烯氢化蓖麻油100mg

DPPC:DSPC(80:8) 共3mg

泊洛沙姆188 200mg

盐酸0.4mg

丙二醇0.1mg

处方5

2.5mg

明胶2mg

聚氧乙烯氢化蓖麻油80mg；吐温80 5mg

DPPC:MSPC:DSPG(80:8:2) 共3mg

泊洛沙姆188 200mg

醋酸2 mg

丙二醇0.1mg

处方6

2.5mg

壳聚糖2 mg

吐温80 6mg

高纯度蛋黄磷脂 5mg

泊洛沙姆407 200mg

醋酸10mg

油酸0.02mg

处方7

2.5mg

壳聚糖3 mg

吐温80 6mg

高纯度蛋黄磷脂 5mg

聚乙二醇4000 100mg；泊洛沙姆188 100mg

醋酸30mg

乙二醇0.5mg

注：DPPC 为二棕榈酰磷脂酰胆碱；DSPC为磷酯二硬脂酰磷脂酰胆碱；MSPC为肉豆蔻酰硬脂酰卵磷脂；DSPE-PEG2000为PEG2000接枝的磷酯二硬脂酰磷脂酰胆碱；DSPE-PEG4000为PEG4000接枝的磷酯二硬脂酰磷脂酰胆碱。

阿霉素胶核脂质体冻干粉制备方法：按照以上各组分的质量配比，分别称取组分，将高分子亲水胶体材料溶解在100mg水中，加入阿霉素和增加阿霉素在水相中溶解度的pH调节剂，溶解，形成水相；将脂质材料、乳化剂、助乳化剂和冻干支持剂溶解在2g叔丁醇中，形成油相；将上述水相加入到油相中形成W/O型乳液，连续超声（90 KHz）处理0.5min形成W/O型微乳，于二氧化碳干冰中速冻成固体分散体，冷冻干燥20h形成冻干粉。处方2和3制备的是长循环胶核脂质体，处方4和5制备的是温敏胶核脂质体。

对照组1--薄膜分散法制备阿霉素脂质体：称取氢化蛋黄磷脂400 mg，胆固醇100 mg，用20 ml乙醚溶解转移至梨形瓶中，旋转蒸发成膜，并继续减压旋转蒸发15 min至乙醚除尽，加入1 mg/ml阿霉素溶液10 ml，水化1 h后，于探头超声下超声15 min，过0. 22μm滤膜4次，整粒，得到阿霉素脂质体溶液，加入甘露醇1g，冷冻干燥，得到阿霉素脂质体冻干粉。

对照组2--硫酸铵梯度法制备阿霉素脂质体冻干粉：称取氢化蛋黄磷脂400 mg，胆固醇100 mg，用20 ml乙醚溶解转移至梨形瓶中，加入250 mmol/L 的硫酸铵溶液10 ml，超声3 min成初乳，减压旋转蒸发20 min至乙醚除尽，于探头超声下超声15 min，过0. 22μm滤膜4次,整粒，得空白脂质体液10ml，除去此空白脂质体外水相中的盐，再向其中加入阿霉素药物粉末10 mg，搅拌2 min后，静置20 min，得到阿霉素脂质体溶液，加入甘露醇1g，冷冻干燥，得到阿霉素脂质体冻干粉。

对照组3--逆相蒸发法制备阿霉素脂质体冻干粉：称取氢化蛋黄磷脂400 mg，胆固醇100 mg，用20 ml乙醚溶解转移至梨形瓶中，加入1 mg/ml阿霉素水溶液10 ml，超声3 min成初乳，减压旋转蒸发20 min至乙醚除尽，于探头超声下超声15 min，挤压通过0. 22μm滤膜4次，得到阿霉素脂质体溶液，加入甘露醇1g，冷冻干燥，得到阿霉素脂质体冻干粉。

实施例5: 阿霉素胶核脂质体的质量评价

本实施例利用实施例4的处方和对照组制备的阿霉素脂质体进行质量对比。

微观形态和粒径分析：取100mg阿霉素脂质体冻干粉加入1g水形成阿霉素脂质体溶液，分别吸取一定量的脂质体混悬液并用1%磷钨酸染色，置于扫描电镜下观察脂质体的形态特征，应用库尔特粒径分析仪测定脂质体粒径。

包封率测定：取500mg上述的阿霉素脂质体溶液，上样于Sephadex G-50凝胶柱，以蒸馏水为洗脱液，接取不同体积的洗脱部分，分离接收包载阿霉素的脂质体洗脱部分，加入Triton-100破坏阿霉素脂质体，提取阿霉素制成阿霉素溶液，利用HPLC方法检测阿霉素含量（色谱条件：Venusil MP C18柱( 416mm×250mm, 5μm)，流动相为乙腈-甲醇-10 mmol·L^- 1磷酸盐缓冲液(36∶32∶32)，UV检测波长为230nm，流速为1.0 mL/min）。采用“包封率（%）=[（包载的阿霉素量）/阿霉素总量]′100”公式计算阿霉素脂质体的包封率。

释药行为测定：取100mg阿霉素脂质体冻干粉加入1g水形成脂质体溶液，装入截留分子量3500的透析袋内，两端扎牢，应用溶出仪按照2010版药典规定的方法测定释放度。溶出介质为0.25%十二烷基硫酸钠和10%的乙醇溶液800ml，温度为37±0.5℃，搅拌速度为100r/min，定时取样5ml，并及时补充等温等体积空白介质，样品0.22μm微孔滤膜过滤后HPLC测定峰面积。计算样品各时间点阿霉素脂质体累积释放量。处方4和5为温度敏感脂质体，释药行为测定方法同上，但是溶出介质温度设定为37℃、40℃和43℃三个水平。

实验结果见表5：三个对照组分别采用薄膜分散法、硫酸铵梯度法或逆相蒸发法制备阿霉素脂质体冻干粉，其水溶液中的脂质体微观形态不十分圆整，有明显聚团无聚团现象，包封率不能达到药典规定的85%。对比三个对照组，本发明的7个处方制备的阿霉素胶核脂质体形态圆整，无聚团现象，平均粒径小且粒径分布较窄，包封率达到90%以上，处方1-3所制备的长循环胶核脂质体结构如图1B所示，动物实验表明其体内滞留时间可达到12h以上。处方4和5为温度敏感胶核脂质体。药物释放实验表明，处方1、2、3、6和7具有较好的缓释作用（图3），处方4和5的温度敏感胶核脂质体在37℃时24h累积释放量在30%-40%之间，当温度提高到43℃释放速率明显加快，6h时释放量接近90%（图4），因此处方4和处方5制备得到的温度敏感胶核脂质体具有良好的热敏性能，适用于结合热疗的肿瘤靶向给药。

表5 阿霉素脂质体的质量评价

处方	微观形态	粒径分布	包封率（%）
				处方1	形态圆整，分布均匀，无聚团	平均粒径812nm，粒径分布较窄	95.4
处方2	形态圆整，分布均匀，无聚团	平均粒径855nm，粒径分布较窄	98.2
				处方3	形态圆整，分布均匀，无聚团	平均粒径860nm，粒径分布较窄	97.2
处方4	形态圆整，分布均匀，无聚团	平均粒径830nm，粒径分布较窄	97.4
				处方5	形态圆整，分布均匀，无聚团	平均粒径826nm，粒径分布较窄	98.0
处方6	形态圆整，分布均匀，无聚团	平均粒径886nm，粒径分布较窄	91.5
				处方7	形态圆整，分布均匀，无聚团	平均粒径880nm，粒径分布较窄	90.8
对照组1	形态不十分圆整，有明显聚团	平均粒径1575nm，粒径分布很宽	54.2
				对照组2	形态不十分圆整，有明显聚团	平均粒径1562nm，粒径分布很宽	68.4
对照组3	形态不十分圆整，有明显聚团	平均粒径1538nm，粒径分布很宽	57.6

实施例6: 盐酸拓扑替康胶核脂质体的制备和释药行为测定

盐酸拓扑替康胶核脂质体冻干粉制备方法：盐酸拓扑替康胶核脂质体的处方组成和制备方法同实施例4的处方2，只是将包载的药物阿霉素换为盐酸拓扑替康。

释药行为测定：同实施例5。

实验结果：盐酸拓扑替康胶核脂质体形态圆整，无聚团现象，平均粒径为950nm，粒径分布窄，包封率达到97.6%。药物释放实验表明，盐酸拓扑替康胶核脂质体具有和实施例5处方2的阿霉素胶核脂质体相似的释药行为，具有较好的缓释作用。

实施例7: 灵芝多糖胶核脂质体

从动植物中提取分离的各类多糖、糖酞类成分具有免疫增强的功效，本实施例以灵芝多糖为对象，制备灵芝多糖胶核脂质体，灵芝多糖胶核脂质体组成如表6。

表6灵芝多糖胶核脂质体组分配比

处方

灵芝多糖

高分子亲水胶体材料

乳化剂

脂质材料

冻干支持剂

助乳化剂

抗氧化剂

处方1

2mg

明胶0.1mg

聚氧乙烯氢化蓖麻油1mg

氢化蛋黄磷脂 5mg

泊洛沙姆188 20mg

处方2

5mg

明胶0.1mg

聚氧乙烯氢化蓖麻油2mg

DSPE-PEG 2000 5mg

聚乙二醇4000 35mg；泊洛沙姆188 5mg

维生素C 0.1mg

处方3

5mg

羟丙基β环糊精0.1mg

吐温80 1mg

三油酸甘油酯4mg

泊洛沙姆188 20mg

乙二醇0.01mg

维生素C 0.5mg

灵芝多糖胶核脂质体冻干粉制备方法：按照以上各组分的质量配比，分别称取组分，将高分子亲水胶体材料溶解在20mg水中，加入灵芝多糖溶解，形成水相；将脂质材料、乳化剂和冻干支持剂溶解在50mg叔丁醇中（处方3还需加入助乳化剂和抗氧化剂）形成油相；将上述水相加入到油相中形成W/O型乳液，脉冲超声（80 KHz）处理1min形成W/O型微乳，于液氮中速冻成固体分散体，冷冻干燥20h形成冻干粉。

微观形态和粒径分析：取25mg灵芝多糖胶核脂质体冻干粉加入1g水形成胶核脂质体溶液，分别吸取一定量的胶核脂质体混悬液并用1%磷钨酸染色，置于扫描电镜下观察胶核脂质体的形态特征，应用库尔特粒径分析仪测定胶核脂质体粒径。

包封率测定：取0.5g上述的灵芝多糖胶核脂质体溶液，上样于Sephadex G-50凝胶柱，以蒸馏水为洗脱液，接取不同体积的洗脱部分，分离接收游离的灵芝多糖洗脱部分，利用硫酸蒽酮比色法测定游离的灵芝多糖含量，采用“包封率（%）=[（灵芝多糖总量-游离的灵芝多糖量）/灵芝多糖总量]′100”公式计算灵芝多糖胶核脂质体的包封率。

结果：三个处方制备的灵芝多糖胶核脂质体具有较好的粒径，平均粒径小于860nm，无聚团现象，三个处方制备的灵芝多糖胶核脂质体的包封率均超过90%。

实施例8: 胸腺五肽胶核脂质体

短肽分子量虽然相对较小，但仍然存在不耐热，稳定性低的缺点。本实施例以胸腺五肽为对象，制备胸腺五肽胶核脂质体，胸腺五肽胶核脂质体组成如表7。

表7 胸腺五肽胶核脂质体组分配比

处方

胸腺五肽

高分子亲水胶体材料

乳化剂

脂质材料

冻干支持剂

助乳化剂

抗氧化剂

处方1

0.1mg

明胶0.1mg

聚氧乙烯氢化蓖麻油5mg

氢化蛋黄磷脂 5mg

聚乙二醇4000 10mg；泊洛沙姆188 10mg

处方2

0.1mg

明胶0.1mg

聚氧乙烯氢化蓖麻油5mg

DPPC 1mg

泊洛沙姆188 10mg

处方3

0.1mg

胶原0.5mg

聚氧乙烯氢化蓖麻油5mg

DPPC 5mg

泊洛沙姆188 20mg

处方4

0.1mg

羟乙基淀粉0.5mg

聚氧乙烯氢化蓖麻油5mg

DPPC:DSPC(80:8) 5mg

泊洛沙姆407 10mg

处方5

0.1mg

明胶0.1mg

聚氧乙烯氢化蓖麻油2mg

氢化蛋黄磷脂 5mg

泊洛沙姆188 20mg

油酸0.1mg

叔丁基对羟基茴香醚 0.01mg

处方6

0.1mg

明胶0.1mg

聚氧乙烯氢化蓖麻油2mg

DSPE-PEG2000 4mg

泊洛沙姆188 20mg

丙二醇0.01mg

叔丁基对羟基茴香醚 0.5mg

处方7

0.1mg

明胶0.1mg

聚氧乙烯氢化蓖麻油2mg

氢化蛋黄磷脂 5mg

泊洛沙姆188 20mg

维生素E 0.2mg

处方8

0.1mg

明胶0.1mg

吐温80 2mg

氢化蛋黄磷脂：十八胺（7:3）共5mg

泊洛沙姆188 20mg

乙二醇0.05mg

维生素E 0.5mg

胸腺五肽胶核脂质体冻干粉制备方法：按照以上各组分的质量配比，分别称取组分，将高分子亲水胶体材料溶解在20mg水中，加入胸腺五肽溶解，形成水相；将脂质材料、乳化剂和冻干支持剂溶解在50mg叔丁醇中，形成油相；将上述水相加入到油相中形成W/O型乳液，连续超声（60 KHz）处理3min形成W/O型微乳，于二氧化碳干冰中速冻成固体分散体，冷冻干燥20h，形成冻干粉。部分处方中含助乳化剂和抗氧化剂，制备时将所需量的助乳化剂和抗氧化剂加入到上述油相中即可。

微观形态和粒径分析：方法同实施例7，各处方制备的胸腺五肽胶核脂质体具有较好的粒径，平均粒径小于850nm，无聚团现象。此外，处方8制备的胸腺五肽胶核脂质体表面带明显的正电荷（表面电位约+35mv），其它处方的胶核脂质体表面带微弱的负电荷（表面电位约-10mv）。现代研究已证实，脂质体表面电荷与机体脏器摄取量具有很强的相关性，其中心、脾、肾、骨髓等器官对于表面负电荷的脂质体具有较好的摄取能力，肺和胃肠道对于表面正电荷的脂质体具有较好的摄取能力，而肝和脑对于电荷近中性的脂质体具有较好的摄取能力。因此处方8制备的表面带明显正电荷的脂质体有利于将包载的药物释放到肺或胃肠道，而其他处方制备的表面带微弱负电荷或近中性的脂质体有利于将包载的药物释放到心、肝、脾、脑等器官。根据疾病的病变位置选择制备特定表面电荷的载药胶核脂质体，可以更好地发挥靶向治疗作用。

实施例9: 重组人血管内皮抑制素胶核脂质体

本实施例制备重组人血管内皮抑制素胶核脂质体，重组人血管内皮抑制素胶核脂质体组成如表8。

表8 重组人血管内皮抑制素胶核脂质体组分配比

处方

重组人血管内皮抑制素

高分子亲水胶体材料

乳化剂

脂质材料

冻干支持剂

助乳化剂

处方1

0.05mg

明胶1mg

聚氧乙烯氢化蓖麻油5mg

氢化蛋黄磷脂 5mg

泊洛沙姆188 20mg

处方2

0.05mg

胶原1mg

聚氧乙烯氢化蓖麻油5mg

氢化蛋黄磷脂 5mg

泊洛沙姆188 20mg

处方3

0.1mg

阿拉伯胶1mg

聚氧乙烯氢化蓖麻油5mg

高纯度大豆磷脂 5mg

聚乙二醇4000 35mg；泊洛沙姆188 5mg

处方4

0.1mg

明胶1mg

聚氧乙烯氢化蓖麻油4mg

DPPC 2mg

泊洛沙姆407 20mg

处方5

0.1mg

海藻酸钠1mg

聚氧乙烯氢化蓖麻油2mg

氢化蛋黄磷脂 5mg

泊洛沙姆188 20mg

甘油三酯0.1mg

处方6

0.1mg

海藻糖1mg

聚氧乙烯氢化蓖麻油2mg

氢化蛋黄磷脂 5mg

泊洛沙姆188 10mg

丙二醇0.01mg

处方7

0.1mg

海藻糖1mg

聚氧乙烯氢化蓖麻油2mg

氢化蛋黄磷脂 5mg

泊洛沙姆188 20mg

丙二醇0.01mg

重组人血管内皮抑制素胶核脂质体冻干粉制备方法：按照以上各组分的质量配比，分别称取组分，将高分子亲水胶体材料溶解在20mg水中，加入重组人血管内皮抑制素溶解，形成水相；将脂质材料、聚氧乙烯氢化蓖麻油和冻干支持剂溶解在50mg叔丁醇中，形成油相；将上述水相加入到油相中形成W/O型乳液，脉冲超声（50 KHz）处理2min形成W/O型微乳，于液氮中速冻成固体分散体，冷冻干燥20h形成冻干粉。部分处方中含助乳化剂，制备时将所需量的助乳化剂加入到上述油相中即可。

微观形态和粒径分析：取25mg重组人血管内皮抑制素胶核脂质体冻干粉加入2.5g水形成胶核脂质体溶液，分别吸取一定量的胶核脂质体混悬液并用1%磷钨酸染色，置于扫描电镜下观察胶核脂质体的形态特征，应用库尔特粒径分析仪测定胶核脂质体粒径。

实验结果，各处方制备的重组人血管内皮抑制素胶核脂质体具有较好的粒径，平均粒径小于910nm，无聚团现象。

实施例10: 转化生长因子β（TGF-β）胶核脂质体

生长因子包括各类细胞生长因子、神经生长因子、骨生长因子等，本实施例以转化生长因子β（TGF-β）为对象，制备转化生长因子β（TGF-β）胶核脂质体，TGF-β胶核脂质体组成如表9。

表9 TGF-β胶核脂质体组分配比

处方

TGF-β

高分子亲水胶体材料

乳化剂

脂质材料

冻干支持剂

助乳化剂

抗氧化剂

处方1

0.1mg

明胶0.1mg

聚氧乙烯氢化蓖麻油0.8mg

氢化蛋黄磷脂 2mg

泊洛沙姆188 20mg

甘油1mg

处方2

0.1mg

胶原0.1mg

聚氧乙烯氢化蓖麻油0.8mg

DPPC 2mg

泊洛沙姆188 20mg

油酸0.2mg

维生素E 0.5mg

处方3

0.1mg

胶原0.1mg

聚氧乙烯氢化蓖麻油0.8mg

氢化大豆磷脂 2mg

聚乙二醇4000 40mg；泊洛沙姆188 10mg

油酸0.2mg

维生素E 1mg

TGF-β胶核脂质体冻干粉制备方法：按照以上各组分的质量配比，分别称取组分，将高分子亲水胶体材料溶解在20mg水中，加入TGF-β溶解，形成水相；将脂质材料、聚氧乙烯氢化蓖麻油和冻干支持剂溶解在50mg叔丁醇中，加入乳化剂和抗氧化剂，形成油相；将上述水相加入到油相中形成W/O型乳液，脉冲超声（50 KHz）处理2min形成W/O型微乳，于液氮中速冻成固体分散体，冷冻干燥20h形成冻干粉。

微观形态和粒径分析：方法同实施例8，各处方制备的TGF-β胶核脂质体具有较好的粒径，无聚团现象，处方1和处方2制备的TGF-β胶核脂质体平均粒径为450nm，处方3制备的TGF-β胶核脂质体平均粒径350nm。。

实施例11: 人干扰素α2b胶核脂质体

胶核微囊作为干扰素的载体，可以发挥较好的控释能力，并具有很好的生物相容性。本实施例制备人干扰素α2b胶核脂质体，人干扰素α2b胶核脂质体组成如表10。

表10 人干扰素α2b胶核脂质体组分配比

处方

人干扰素α2b

高分子亲水胶体材料

乳化剂

脂质材料

冻干支持剂

稳定剂

处方1

1mg

明胶2mg

聚氧乙烯氢化蓖麻油100mg

氢化蛋黄磷脂 5mg

泊洛沙姆188 200mg

酒石酸 0.2 mg

处方2

1mg

白蛋白2mg

聚氧乙烯氢化蓖麻油100mg

DPPC 5mg

泊洛沙姆188 200mg

富马酸0.2 mg

处方3

1mg

白蛋白2mg

聚氧乙烯氢化蓖麻油100mg

氢化蛋黄磷脂 5mg

泊洛沙姆188 800mg

精氨酸4mg

处方4

1mg

白蛋白2mg

聚氧乙烯氢化蓖麻油100mg

氢化蛋黄磷脂 5mg

聚乙二醇4000 200mg；泊洛沙姆188 400mg

甘氨酸10 mg

人干扰素α2b胶核脂质体冻干粉制备方法：按照以上各组分的质量配比，分别称取组分，将高分子亲水胶体材料溶解在100mg水中，加入稳定剂和人干扰素α2b溶解，形成水相；将脂质材料、乳化剂和冻干支持剂溶解在2g叔丁醇中，形成油相；将上述水相加入到油相中形成W/O型乳液，连续超声（80 KHz）处理0.5min形成W/O型微乳，于液氮中速冻成固体分散体，冷冻干燥20h形成冻干粉。

微观形态和粒径分析：方法同实施例6，各处方制备的人干扰素α2b胶核脂质体具有较好的粒径，无聚团现象，处方1和处方2制备的人干扰素α2b胶核脂质体平均粒径为680nm，处方3制备的人干扰素α2b胶核脂质体平均粒径240nm，处方4制备的人干扰素α2b胶核脂质体平均粒径100nm。

实施例12: 伪麻黄碱胶核脂质体的制备

中药有效成分如盐酸伪麻黄碱、丁苯酞、小檗碱、氨茶碱、东莨菪碱、黄芩素、咖啡因等，具有明确的心血管功效。本实施例以中药有效成分伪麻黄碱为对象，制备伪麻黄碱胶核脂质体，制剂组成如表11。

表11伪麻黄碱胶核脂质体组分配比

处方

伪麻黄碱

高分子亲水胶体材料

乳化剂

脂质材料

冻干支持剂

pH调节剂

助乳化剂

处方1

2.5mg

明胶2mg

聚氧乙烯氢化蓖麻油100mg

氢化蛋黄磷脂 5mg

泊洛沙姆188 400mg

盐酸 0.5 mg

甘油酯0.05mg

处方2

2.5mg

胶原2mg

聚氧乙烯氢化蓖麻油100mg

DPPC 0.5mg，氢化蛋黄磷脂 2mg

泊洛沙姆188 400mg

盐酸1 mg

乙二醇0.05mg

处方3

2.5mg

胶原2mg

聚氧乙烯氢化蓖麻油100mg

DPPC 2mg

聚乙二醇1500 300mg；泊洛沙姆188 100mg

醋酸20 mg

乙二醇0.02mg

处方1的伪麻黄碱胶核脂质体冻干粉制备方法：按照以上各组分的质量配比，分别称取各组分，将高分子亲水胶体材料溶解在100mg水中，加入pH调节剂盐酸和伪麻黄碱，溶解，形成水相；将脂质材料、乳化剂、助乳化剂和冻干支持剂溶解在2g叔丁醇中，形成油相；将上述水相加入到油相中形成W/O型乳液，高压均质处理，循环2次形成W/O型微乳，于液氮中速冻成固体分散体，冷冻干燥20h形成伪麻黄碱胶核脂质体冻干粉。

处方2的伪麻黄碱胶核脂质体冻干粉制备方法：按照以上各组分的质量配比，分别称取各组分，将高分子亲水胶体材料溶解在100mg水中，加入pH调节剂盐酸和伪麻黄碱，溶解，形成水相；将脂质材料、乳化剂、助乳化剂和冻干支持剂溶解在2g叔丁醇中，形成油相；将上述水相加入到油相中形成W/O型乳液，连续超声（90kHZ）处理2min，W/O型乳液于液氮中速冻成固体分散体，冷冻干燥20h形成伪麻黄碱胶核脂质体冻干粉。处方3的伪麻黄碱胶核脂质体冻干粉制备方法：按照以上各组分的质量配比，分别称取各组分，将高分子亲水胶体材料溶解在100mg水中，加入pH调节剂盐酸和伪麻黄碱，溶解，形成水相；将脂质材料、乳化剂、助乳化剂和冻干支持剂溶解在2g叔丁醇中，形成油相；将上述水相加入到油相中形成W/O型乳液，10000rpm高速搅拌处理2min形成W/O型微乳，于液氮中速冻成固体分散体，冷冻干燥20h形成伪麻黄碱胶核脂质体冻干粉。

微观形态和粒径分析：方法同实施例5，各处方制备的伪麻黄碱胶核脂质体具有较好的粒径，无聚团现象，处方1制备的伪麻黄碱胶核脂质体平均粒径为220nm，处方2制备的伪麻黄碱胶核脂质体平均粒径为186nm，处方3制备的伪麻黄碱胶核脂质体平均粒径195nm。

实施例13: Herceptin胶核脂质体的制备

抗体类药物具有量小效强的优势，但是体内容易降解，持续时间短。本实施例以Herceptin为对象，制备Herceptin胶核脂质体，制剂组成如表12。

表12 Herceptin胶核脂质体组分配比

处方

Herceptin

高分子亲水胶体材料

乳化剂

脂质材料

冻干支持剂

稳定剂

处方1

10mg

明胶1mg

聚氧乙烯氢化蓖麻油100mg

DPPC 5mg

泊洛沙姆188 400mg

人血清白蛋白 0.1 mg

处方2

50mg

胶原1mg

聚氧乙烯氢化蓖麻油100mg

DPPC：DSPE-PEG2000 （1:1）5mg

泊洛沙姆188 400mg

精氨酸 1 mg

处方3

50mg

胶原1mg

聚氧乙烯氢化蓖麻油100mg

DSPE-PEG2000 5mg

聚乙二醇1500 400mg；泊洛沙姆188 100mg

人血清白蛋白5 mg

Herceptin胶核脂质体冻干粉制备方法：按照以上各组分的质量配比，分别称取各组分，将高分子亲水胶体材料溶解在100mg水中，加入稳定剂和Herceptin，溶解，形成水相；将脂质材料、乳化剂、助乳化剂和冻干支持剂溶解在2g叔丁醇中，形成油相；将上述水相加入到油相中形成W/O型乳液，脉冲超声（60 KHz）处理2min形成W/O型微乳，于液氮中速冻成固体分散体，冷冻干燥20h形成Herceptin胶核脂质体冻干粉。

微观形态和粒径分析：方法同实施例6，各处方制备的Herceptin胶核脂质体具有较好的粒径，平均粒径小于450 nm，无聚团现象。

在上述实施例中，仅对本发明进行了示范性描述，但是本领域技术人员在阅读本专利申请后可以在不脱离本发明的精神和范围的情况下对本发明进行各种修改。

Claims

1.一种胶核脂质体冻干粉，其特征在于：该脂质体冻干粉中各组分质量配比为：1份高分子亲水胶体材料，0.05-50份水溶性药物，0.5-50份脂质材料，2-100份乳化剂，10-1000份冻干支持剂，脂质体冻干粉中水分含量低于3%。

2.如权利要求1所述的胶核脂质体冻干粉，其特征在于：所述的高分子亲水胶体材料是指药学公知的药用高分子亲水胶体材料，包括明胶、胶原、白蛋白、阿拉伯胶、西黄芪胶、瓜木耳胶、结冷胶、淀粉及其衍生物、环糊精及其衍生物、海藻糖、海藻酸及其钠盐、葡聚糖及其衍生物、壳聚糖及其衍生物、纤维素及其衍生物。

3.如权利要求1所述的胶核脂质体冻干粉，其特征在于：所述的水溶性药物是指单独应用、配合增溶剂应用或在特定pH值范围内药物溶解度大于0.01mg/ml的生物大分子药物、化学药物或中药有效提取物。

4.如权利要求1所述的胶核脂质体冻干粉，其特征在于：所述的脂质材料是指药学公知的磷脂和类脂材料，包括天然卵磷脂、氢化磷脂、合成磷脂及其聚乙二醇修饰衍生物、饱和脂肪酸甘油酯、硬脂酸、棕榈酸、甾体。

5.如权利要求1所述的胶核脂质体冻干粉，其特征在于：所述的冻干支持剂包括药学公知的冷冻干燥支持剂，包括甘露醇、山梨醇、木糖醇、聚乙二醇、聚维酮和泊洛沙姆。

6.如权利要求5所述的胶核脂质体冻干粉，其特征在于：所述的冻干支持剂按照质量百分比计算，泊洛沙姆占冻干支持剂总量的5%-100%。

7.如权利要求1所述的胶核脂质体冻干粉，其特征在于：所述的乳化剂是指药学公认的非离子型乳化剂，包括聚氧乙烯氢化蓖麻油、吐温80、司盘80、苄泽、卖泽。

8.如权利要求1所述的胶核脂质体冻干粉，其特征在于：所述的脂质体冻干粉中还包含0.01-10份质量配比计算的药学公认的助乳化剂，包括乙二醇、丙二醇、甘油、油酸、甘油酯。

9.如权利要求1所述的胶核脂质体冻干粉，其特征在于：所述的脂质体冻干粉中还包含0.01-10份质量配比计算的药学公认的抗氧化剂，包括维生素E、维生素C、亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、焦亚硫酸钠、硫代硫酸钠、二丁基苯酚、叔丁基对羟基茴香醚。

10.一种如权利要求1~9所述的胶核脂质体冻干粉的制备方法，其特征在于：按照质量配比计算，将1份高分子亲水胶体材料溶解在10-200份水中，加入0.05-50份水溶性药物，混匀形成水相；将0.5-50份脂质材料、2-100份乳化剂和10-1000份冻干支持剂溶解在50-4000份叔丁醇中，形成油相；将水相分散到油相中形成W/O型乳液，超声、高速搅拌或高压均质处理形成W/O型微乳溶液，采用超低温速冻工艺形成固体分散体，冷冻干燥除去叔丁醇，形成脂质体冻干粉，该脂质体冻干粉中水分含量低于3%，临用前按照质量配比计算，1份脂质体冻干粉溶解于5-100份的水性介质中，形成含有高分子亲水胶体为核心和脂质双分子层为壳膜结构的脂质体的溶液。