TW201705941A - 經磷脂塗覆的治療劑奈米粒子及其相關方法 - Google Patents

經磷脂塗覆的治療劑奈米粒子及其相關方法 Download PDF

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Abstract

一種含有治療劑之經磷脂-塗覆之奈米粒子，包括該奈米粒子之組成物，以及製造與使用該奈米粒子與組成物之方法。

Description

經磷脂塗覆的治療劑奈米粒子及其相關方法 【相關參考申請案】
本申請案申明補充於2015年6月1日提申之美國申請案號62/169,397、2015年12月4日提申之美國申請案號62/263,453，以及於2016年4月15日提申之美國申請案號62/323,335，每一者皆在此併入本案以作為參考資料。
本發明係有關於經磷脂塗覆的治療劑奈米粒子及其相關方法。
發明背景
疏水性治療劑之有效傳輸在製藥產業中一直是個大挑戰。這些挑戰與難以將這些治療劑配製於投藥用載劑中有關。以往，疏水性治療劑係以傳輸載劑投藥，但這些傳輸載體之傳輸特性，包括治療劑量與生物可利用性，較不佳。此外，偶爾會觀察到與載劑本身相關之嚴重副作用。
多年來，紫杉醇配方即為許多疏水性治療劑相關問題之一範例。
紫杉醇為最有效的化療藥物之一，主要用於治療乳癌、肺癌和卵巢癌。Taxol®為一種紫杉醇配方，其利用 溶劑聚氧乙烯蓖麻油(cremophor EL)溶解，並傳輸基本上不溶於水之紫杉醇。Taxol®的缺點和副作用與該溶劑直接相關。
紫杉醇亦已配製為奈米粒子配方。Abraxane®為一種奈米粒子紫杉醇配方，具增進之紫杉醇溶解度(0.35-0.7μg/mL)，與Taxol®相較，並可避免使用有害的溶劑。Abraxane®為一種人類血清白蛋白-塗覆之紫杉醇奈米粒子。Cynviloq®，一種聚合性微胞紫杉醇配方，其使用生物相容性化學聚合物，而非生物性聚合物，以穩定該奈米粒子，為新一代紫杉醇產品。
儘管在發展可克服與已知疏水性治療劑配方相關缺點的替代配方上有長足進步，目前仍需要一種具有增進性能的疏水性治療劑新配方。本發明目的在滿足這些需求並提供進一步相關的優點。
發明概要
本發明提供一種適用於注射投藥之經磷脂-塗覆的治療劑奈米粒子、包括該奈米粒子之醫藥組成物、可以該治療劑治療之疾病與症狀之治療方法，以及製備該奈米粒子之方法。
在一觀點中，本發明提供一種經磷脂-塗覆之治療劑奈米粒子。
在一觀點中，經磷脂-塗覆之治療劑奈米粒子，包含經一或多種磷脂塗覆之粒子治療劑，其中該奈米粒子 在投藥用水性傳輸載劑中呈穩定，並可在暴露於生理液體中時，實質上立即釋放該治療劑。
在另一實施例中，該經磷脂-塗覆的治療劑奈米粒子，包含經一或多種磷脂塗覆之粒子治療劑，其中該奈米粒子在投藥用水性傳輸載劑中，如含有治療劑之合成性聚合微胞(Genexol-PM®,Cynviloq®)，呈現穩定，並可在生理條件下有效釋放該治療劑，如經人類血清白蛋白-塗覆之治療劑(Abraxane®)。
在又一實施例中，該經磷脂-塗覆的治療劑奈米粒子，包含經一或多種磷脂塗覆之粒子治療劑，其中該磷脂為單醯基磷脂。
在另一實施例中，該經磷脂-塗覆的治療劑奈米粒子，包含經一或多種磷脂塗覆之粒子治療劑，其中該磷脂包含單-醯基磷脂與二醯基磷脂。
在又一實施例中，該經磷脂-塗覆的治療劑奈米粒子，包含經一或多種磷脂塗覆之粒子治療劑，其中該磷脂為二醯基磷脂，含有具10至16個碳原子之脂肪酸成分。
在另一實施例中，該經磷脂-塗覆的治療劑奈米粒子，包含經一或多種磷脂塗覆之粒子治療劑，其中該奈米粒子實質上呈電中性，以磷脂組成物為基準。
在又一實施例中，該經磷脂-塗覆的治療劑奈米粒子基本上由經一或多種磷脂塗覆之粒子治療劑組成。
在另一實施例中，該經磷脂-塗覆的治療劑奈米粒子，由經一或多種磷脂塗覆之粒子治療劑組成。
在本發明奈米粒子之某些實施例中，該磷脂為二醯基磷脂。適用之二醯基磷脂包括二醯基磷脂醯膽鹼、二醯基磷脂醯乙醇胺、二醯基磷脂醯甘油、二醯基磷脂醯絲胺酸、二醯基磷脂醯肌醇，以及二醯基磷脂酸，及其混合物。在某些實施例中，該磷脂為磷脂醯膽鹼。在某些實施例中，該磷脂為含有具10至22個碳原子的脂肪酸成分之磷脂醯膽鹼。在其他實施例中，該磷脂為含有具10至12個碳原子的脂肪酸成分之磷脂醯膽鹼。
在本發明奈米粒子之某些實施例中，該磷脂為單醯基磷脂。適用之單醯基磷脂包括溶磷脂醯膽鹼、溶磷脂醯乙醇胺、溶磷脂醯甘油、溶磷脂醯絲胺酸、溶磷脂酸肌醇與溶磷脂酸，與其混合物。在某些實施例中，該磷脂為溶磷脂醯膽鹼。在某些實施例中，該溶磷脂醯膽鹼含有具10至22個碳原子之脂肪酸成分。在其他實施例中，該磷脂為含有具10至12個碳原子之脂肪酸成分之溶磷脂醯膽鹼。
在本發明奈米粒子之某些實施例中，該磷脂為二醯基磷脂與單醯基磷脂之組合。在某些實施例中，該磷脂為磷脂醯膽鹼與溶磷脂醯膽鹼之組合。在包括二醯基磷脂與單醯基磷脂之組合之實施例中，二醯基磷脂比單醯基磷脂之比例為約90：10至約60：40重量/重量(w/w)百分比。在其他實施例中，二醯基磷脂比單醯基磷脂之比例為約80：20w/w百分比。
在某些實施例中，該奈米粒子包括具X log P大於2.0之治療劑。
適用之治療劑包括鎭痛劑/退熱劑、麻醉劑、平喘劑、抗生素、抗抑鬱劑、抗糖尿病劑、抗真菌劑、抗高血壓劑、抗發炎劑、抗腫瘤劑、抗焦慮劑、免疫抑制劑、抗偏頭痛劑、鎭靜劑/催眠劑、抗心絞痛劑、抗精神病劑、抗躁狂劑、抗心律失常劑、抗關節炎劑、抗痛風劑、抗凝血劑、血栓溶解劑、抗纖溶劑、血液流變劑、抗血小板劑、抗驚厥劑、抗帕金森氏症藥劑、抗組織胺劑/止癢劑、用於鈣調節之藥劑、抗菌劑、抗病毒劑、抗微生物劑、抗感染劑、支氣管擴張劑、激素、降血糖劑、降血脂劑、蛋白質、核酸、用於紅細胞生成刺激之試劑、抗潰瘍/抗逆流劑、止噁心劑/止吐劑，以及油溶性維生素。在某些實施例中，該治療劑為化療劑。代表性化療試劑包括紫杉烷類，如紫杉醇與其衍生物，以及多西他賽(docetaxel)與其衍生物。在某些實施例中，該治療劑為紫杉醇。
在某些實施例中，該治療劑為結晶形式。在其他實施例中，該治療劑為非晶體形式。
在某些實施例中，該奈米粒子具平均直徑約30-300nm。在其他實施例中，該奈米粒子具平均直徑約80-200nm。
在另一觀點中，本發明提供一種醫藥組成物，包含本發明之奈米粒子。
在某些實施例中，該奈米粒子為乾粉形式。
在某些實施例中，該組成物更包含一醫藥上可接受之載體。
在該組成物之某些實施例中，該奈米粒子可穩定懸浮於水性介質中。在這些實施例中，該組成物更包含一粒徑穩定劑。
在某些實施例中，該組成物為一種用於注射之醫藥組成物，包含本發明之奈米粒子，以及醫藥上可接受之載體。
在又一觀點中，本發明提供一種用於治療個體之單位劑量形式，包含本發明之奈米粒子，以及醫藥上可接受之載體。
在本發明之另一觀點中，係提供一種套組。在一實施例中，該套組包括包含本發明奈米粒子之容器，以及一包含可重製該奈米粒子之醫藥上可接受載體之容器。在另一實施例中，該套組包括一容器，其包含懸浮於醫藥上可接受載體中之奈米粒子。該套組任擇地包括使用該套組治療疾病或病況(condition)之使用說明。
在本發明之又一觀點中，係提供一種治療個體疾病或病況之方法。在某些實施例中，該方法包含投以有需要個體有效量之本發明奈米粒子。在某些實施例中，該疾病或病況為增生性疾病或病況。在某些實施例中，該治療劑為紫杉醇，以及該疾病為可藉由投予紫杉醇而治療之疾病。在某些實施例中，該治療劑為紫杉醇，以及該疾病為可藉由投予紫杉醇而治療之癌症。
在另一觀點中，係提供一種製備經磷脂-塗覆之治療劑奈米粒子之方法。在一實施例中，該奈米粒子係以 微流體化-溶劑移除法製備。在另一實施例中，該奈米粒子係以薄膜-水合法製備。
在某些實施例中，該用於製備經磷脂-塗覆的治療劑奈米粒子之方法，包含將含有治療劑分散於其中之有機相，以及含有磷脂之水相，置於高壓均質機之高剪力條件下，以提供均質化之經磷脂-塗覆治療劑奈米粒子混合物。在某些實施例中，該方法更包含除菌過濾該混合物。在一實施例中，將該有機相置於高剪力條件下，包含使用高壓均質機，於壓力範圍約3,000至至多30,000psi下進行。在某些實施例中，該方法包含自混合物中移出該有機相。在某些實施例中，該方法更包含自混合物中移出該水性介質。在某些實施例中，自混合物中移出該水性介質包含冷凍乾燥該混合物，以提供奈米粒子粉末。
在其他實施例中，製備經磷脂-塗覆的治療劑奈米粒子之方法，包含溶解治療劑與磷脂於有機相中，以提供一溶液，濃縮該溶液至乾燥，以提供一薄膜；以及以水水合該薄膜，以提供經磷脂-塗覆之治療劑奈米粒子之水性懸浮液。在某些實施例中，該有機相為乙醇。在某些實施例中，濃縮該溶液至乾燥包含迴旋濃縮。在某些實施例中，該水為去離子水。在某些實施例中，該方法更包含除菌過濾該水性懸浮液。
在某些實施例中，本發明方法可提供本發明之奈米粒子。
前述觀點與許多本發明附帶之優點，將經由下列詳細說明與後附圖示而更臻清楚。
圖1為紫杉醇療法配方之演進示意圖。
圖2為用於製備本發明代表性經磷脂-塗覆之治療劑奈米粒子之磷脂(磷脂醯膽鹼與溶-磷脂醯膽鹼)之化學結構示意圖。
圖3為本發明經微流體化-溶劑蒸發法製備之代表性經磷脂-塗覆治療劑奈米粒子之奈米粒子尺寸與尺寸分布之比較圖。
圖4比較磷脂與溶-磷脂比例，對於本發明代表性經磷脂-塗覆的治療劑(紫杉醇)奈米粒子之奈米粒子尺寸與治療劑捕捉效率之影響。
圖5比較擠出回數對於本發明經微流體化-溶劑蒸發法製備之代表性經磷脂-塗覆的治療劑(紫杉醇)奈米粒子之奈米粒子尺寸與治療劑捕捉效率之影響。
圖6比較本發明代表性之經磷脂-塗覆的治療劑(紫杉醇)奈米粒子之粒子尺寸，為時間函數。
圖7比較本發明以微流體化與薄膜蒸發法製備之代表性經磷脂-塗覆的治療劑(紫杉醇)奈米粒子之粒子尺寸(於t=0)與紫杉醇加入量(%)。
圖8比較本發明以微流體化與薄膜蒸發法製備之代表性經磷脂-塗覆的治療劑(紫杉醇)奈米粒子(PC 12：Lyso 12)之電化學反應(循環伏安法：電流(mA)v.施加電位(V))。
圖9比較本發明代表性經磷脂-塗覆之治療劑(紫杉醇)奈米粒子，於去離子水(DI)、磷酸鹽緩衝生理食鹽水(PBS)與人類血漿(50mg/mL人類血漿白蛋白/PBS)中，顯示出粒子尺寸(nm)為紫杉醇濃度(μg/mL)之函數。
圖10A、10B與10C比較Abraxane®奈米粒子(10A)、Genexol-PM®奈米粒子(10B)，與本發明代表性經磷脂-塗覆之治療劑(紫杉醇)奈米粒子(10C)，於去離子水(水)、磷酸鹽緩衝生理食鹽水(PBS)、血清(0.1X：5mg/mL HSA/PBS)、血清(1.0X：50mg/mL HSA/PBS)、模擬血漿(50mg/mL HSA/PBS)，以及血漿中之溶解度，顯示出粒子尺寸(nm)為紫杉醇濃度(μg/mL)之函數。
圖11比較經流體化-溶劑蒸發法製備(方法1)與薄膜水合蒸發法(方法2)製備之本發明代表性經磷脂-塗覆之治療劑(紫杉醇)奈米粒子、PC-塗覆紫杉醇奈米粒子之紫杉醇載入量(%)。
圖12比較經流體化-溶劑蒸發法製備(方法1)與薄膜水合蒸發法(方法2)製備之本發明代表性經磷脂-塗覆之治療劑(紫杉醇)奈米粒子、PC-塗覆紫杉醇奈米粒子之粒子尺寸(nm)。
圖13比較以薄膜水合法(方法2)製備之本發明代表性經磷脂-塗覆之治療劑(紫杉醇)奈米粒子之紫杉醇載入量(%)，為PC碳長度(6-22)之函數。
圖14比較以薄膜水合法(方法2)製備之本發明代表性經磷脂-塗覆之治療劑(紫杉醇)奈米粒子之紫杉醇載入 量(%)，為再水合水溫之函數。
圖15比較本發明代表性經磷脂-塗覆的治療劑(紫杉醇)奈米粒子、以薄膜水合法製備之PC-塗覆紫杉醇奈米粒子(LM-101)之粒子尺寸，為冷凍保護劑與冷凍保護劑含量之函數，在冷凍乾燥之前與重製之後。
圖16比較本發明代表性經磷脂-塗覆的治療劑(紫杉醇)奈米粒子、以薄膜水合法製備之PC-塗覆紫杉醇奈米粒子(LM-101)之粒子尺寸，為時間(t=0與4小時)之函數，在以3.2mM組胺酸緩衝液，pH 5.5重製後。
較佳實施例之詳細說明
本發明提供一種適用於注射投藥之經磷脂-塗覆的治療劑奈米粒子、包括該奈米粒子之醫藥組成物、可以該治療劑治療之疾病與症狀的治療方法，以及製備該奈米粒子之方法。
經磷脂-塗覆之治療劑奈米粒子
在一觀點中，本發明提供一種經磷脂-塗覆之治療劑奈米粒子。
在一實施例中，經磷脂-塗覆之治療劑奈米粒子，包含經一或多種磷脂塗覆之粒子治療劑，其中該奈米粒子在投藥用水性傳輸載劑(如用於注射之載劑)中呈穩定，並可在暴露或接觸於生理液體時，實質上立即釋放該治療劑。使用於此，術語"實質上立即"係指該治療劑在接觸生理性液體亦如血液、血清、血漿(如靜脈內注射)後約1 秒內、約2秒內、約5秒內、約10秒內，或約30秒內，由奈米粒子中釋放出。
在另一實施例中，該經磷脂-塗覆的治療劑奈米粒子，包含經一或多種磷脂塗覆之粒子治療劑，其中該奈米粒子在投藥用水性傳輸載劑中呈穩定，如含有治療劑之合成性聚合微胞(Genexol-PM®，Cynviloq®)，並可在生理條件下有效釋放該治療劑，如經人類血清白蛋白-塗覆之治療劑(Abraxane®)。
在又一實施例中，該經磷脂-塗覆的治療劑奈米粒子，包含經一或多種磷脂塗覆之顆粒治療劑，其中該磷脂為單醯基磷脂。在此時實施例中，就磷脂而言，該奈米粒子可僅包括單醯基磷脂，或可更包括二醯基磷脂。
在另一實施例中，該經磷脂-塗覆的治療劑奈米粒子，包含經一或多種磷脂塗覆之顆粒治療劑，其中該磷脂包含單醯基磷脂與二醯基磷脂。
在又一實施例中，該經磷脂-塗覆的治療劑奈米粒子，包含經一或多種磷脂塗覆之粒子治療劑，其中該磷脂為二醯基磷脂，含有具10至16個碳原子之脂肪酸成分。在此實施例中，就磷脂而言，該奈米粒子可更包括單醯基磷脂。
在另一實施例中，該經磷脂-塗覆的治療劑奈米粒子，包含經一或多種磷脂塗覆之粒子治療劑，其中該奈米粒子實質上呈電中性，以磷脂組成物為基準。
在又一實施例中，該經磷脂-塗覆的治療劑奈米 粒子基本上由經一或多種磷脂塗覆之粒子治療劑組成。
在另一實施例中，該經磷脂-塗覆的治療劑奈米粒子，由經一或多種磷脂塗覆之粒子治療劑組成。
如上所述，本發明提供一種經磷脂-塗覆的治療劑奈米粒子。使用於此，"經磷脂-塗覆的治療劑奈米粒子"係指包含治療劑之顆粒形式該奈米粒子，其經一或多種磷脂塗覆。在本發明奈米粒子中，該磷脂包覆該粒子治療劑，可有利於穩定該治療劑，並幫助有效投藥。
所提供之經磷脂-塗覆的治療劑奈米粒子的優點為，可有效配製與傳輸疏水性或實質上水不溶性治療劑。較佳配製為本發明奈米粒子之治療劑，包括疏水性或實質上水不溶性之醫藥活性試劑(即，任何在水性或親水性環境下具有限溶解度之生物活性試劑)。例如，這些試劑在20-25℃水中的溶解度小於約5、2、1、0.5、0.2、0.1、0.05、0.02或0.01mg/mL。
適用於可幫助配製為本發明奈米粒子之候選治療劑之治療劑特徵，包括治療劑如化學治療劑，由其辛醇/水分配係數X log P定義(Wang et al.Chem.Inf.Comput.Sci.1997,37,615-621)。例如，紫杉醇之係數為3.0。在實施本發明時，具X log P大於2.0之治療劑，為加入本發明奈米粒子之絕佳候選物。此特徵包括超過一半目前用於非經腸胃投藥之核准醫藥試劑。使用於此，術語"疏水性"與"實質上水不溶性"與"水溶性不佳"係指治療劑具辛醇/水分配係數X log P大於2.0，在某些實施例中大於3.0，以及在其他實 施例中大於4.0。
代表性治療劑包括鎮痛劑/退熱劑、麻醉劑、平喘劑、抗生素、抗抑鬱劑、抗糖尿病劑、抗真菌劑、抗高血壓劑、抗發炎劑、抗腫瘤劑、抗焦慮劑、免疫抑制劑、抗偏頭痛劑、鎭靜劑/催眠劑、抗心絞痛劑、抗精神病劑、抗躁狂劑、抗心律失常劑、抗關節炎劑、抗痛風劑、抗凝血劑、血栓溶解劑、抗纖溶劑、血液流變劑、抗血小板劑、抗驚厥劑、抗帕金森氏症藥劑、抗組織胺劑/止癢劑、用於鈣調節之藥劑、抗菌劑、抗病毒劑、抗微生物劑、抗感染劑、支氣管擴張劑、激素、降血糖劑、降血脂劑、蛋白質、核酸、用於紅細胞生成刺激之試劑、抗潰瘍/抗逆流劑、止噁心劑/止吐劑，以及油溶性維生素。
在某些實施例中，該治療劑為抗腫瘤劑，選自於阿黴素(adriamycin)、環磷醯胺(cyclophosphamide)、放線菌素(actinomycin)、博來黴素(bleomycin)、柔紅黴素(daunorubicin)、多柔比星(doxorubicin)、表阿黴素(epirubicin)、絲裂黴素(mitomycin)、甲氨蝶呤(methotrexate)、氟尿嘧啶(fluorouracil)、卡鉑(carboplatin)、卡莫司汀(carmustine)(BCNU)、甲基-CCNU、順鉑(cisplatin)、依托泊苷(etoposide)、干擾素、喜樹鹼(camptothecin)及其衍生物、苯芥膽固醇(phenesterine)、紫杉醇及其衍生物、多西他賽(docetaxel)及其衍生物、埃博黴素(epothilones)及其衍生物、長春鹼(vinblastine)、長春新鹼(vincristine)、他莫昔芬(tamoxifen)、依托泊苷(etoposide)， 或派伯舒凡(piposulfan)。代表性抗腫瘤試劑包括紫杉烷及其衍生物，如紫杉醇。
在某些實施例中，該治療劑為免疫抑制劑，選自於環孢菌素(cyclosporine)，硫唑嘌呤(azathioprine)，咪唑立賓(mizoribine)，或FK506(他克莫司(tacrolimus))。
本發明之治療劑奈米粒子包括一或多種磷脂塗覆該治療劑。使用於此，術語"磷脂"係指具疏水性尾端(如一或二個)與一磷酸頭端之脂質。親水性係指磷脂的磷酸鹽頭端基團，而疏水性係指磷脂的非極性基團，其包括長鏈飽和與不飽和脂肪族烴基，且此基團經一或多個芳香族、環脂族，或雜環基團(如脂肪酸醯基)取代。
使用於此，術語"磷脂"係指磷脂酸、磷酸甘油酯與鞘磷脂。磷脂酸包括一磷酸基團耦合至一甘油基團，其可為單-或二醯基化。磷酸甘油酯(或甘油磷脂)包括一磷酸鹽基團中間物、一有機基團(如膽鹼、乙醇胺、絲胺酸、肌醇)與一甘油基團，其可為單-或二醯基化。鞘磷脂(或神經鞘磷脂)一磷酸鹽基團中間物、一有機基團(如膽鹼、乙醇胺)與鞘胺醇(未醯基化)或神經醯胺(醯基化)基團。
應了解到，在某些實施例中，可用於本發明組成物與方法中之磷脂包括其鹽類(如鈉鹽、銨鹽)。就包括碳-碳雙鍵之磷脂而言，亦包括其個別之空間異構物(順式、反式)與異構物之混合物。
代表性磷脂包括磷脂醯膽鹼、磷脂醯乙醇胺、磷脂醯甘油、磷脂醯絲胺酸、磷脂酸肌醇與磷脂酸，以及其 溶磷脂基(如溶磷脂醯膽鹼與溶磷脂醯乙醇胺)，與二醯基磷脂(如二醯基磷脂醯膽鹼、二醯基磷脂醯乙醇胺、二醯基磷脂醯甘油、二醯基磷脂醯絲胺酸、二醯基磷脂酸肌醇與二醯基磷脂酸)對應體。
磷脂之醯基可為相同或不同。在某些實施例中，該醯基可衍生自具C10-C24碳鏈之脂肪酸(如醯基如癸醯基(C10)、十二醯基(也稱為月桂醯基)(C12)、十四醯基(也稱為肉荳蔻醯基)(C14)、十六醯基(也稱為棕櫚醯基)(C16)、十八醯基(也稱為硬脂醯基)(C18)、油醯基、亞油醯基、亞麻油醯基、花生四烯醯基)。
代表性二醯基磷脂醯膽鹼(即1,2-二醯基-sn-甘油-3-磷酸膽鹼)，包括二硬脂醯基磷脂醯膽鹼(DSPC)、二油醯基磷脂醯膽鹼(DOPC)、二棕櫚醯基磷脂醯膽鹼(DPPC)、二次亞麻油醯基磷脂醯膽鹼(DLPC)、棕櫚醯基油醯基磷脂醯膽鹼(POPC)、棕櫚醯基次亞麻油醯基磷脂醯膽鹼、硬脂醯基次亞麻油醯基磷脂醯膽鹼、硬脂醯基油醯基磷脂醯膽鹼、硬脂醯基花生四烯醯基磷脂醯膽鹼、二癸醯基磷脂醯膽鹼(DDPC)、二芥子醯基磷脂醯膽鹼(DEPC)、二次亞麻油醯基磷脂醯膽鹼(DLOPC)、二肉荳蔻醯基磷脂醯膽鹼(DMPC)、肉荳蔻醯基棕櫚醯基磷脂醯膽鹼(MPPC)、肉荳蔻醯基硬脂醯基磷脂醯膽鹼(MSPC)、硬脂醯基肉荳蔻醯基磷脂醯膽鹼(SMPC)、棕櫚醯基肉荳蔻醯基磷脂醯膽鹼(PMPC)、棕櫚醯基硬脂醯基磷脂醯膽鹼(PSPC)、硬脂醯基棕櫚醯基磷脂醯膽鹼(SPPC)、硬脂醯基油醯基磷脂醯膽鹼 (SOPC)。
代表性二醯基磷脂醯乙醇胺(即1,2-二醯基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺)包括二油醯基磷脂醯乙醇胺(DOPE)、二棕櫚醯基磷脂醯乙醇胺(DPPE)、二硬脂醯基磷脂醯乙醇胺(DSPE)、二月桂醯基磷脂醯乙醇胺(DLPE)、二肉荳蔻醯基磷脂醯乙醇胺(DMPE)、二芥子醯基磷脂醯乙醇胺(DEPE)、二癸醯基磷脂醯乙醇胺、複十二醯基磷脂醯乙醇胺，以及棕櫚醯基油醯基磷脂醯乙醇胺(POPE)。
代表性二醯基磷脂醯甘油(即1,2-二醯基-sn-甘油-3-磷酸甘油酯)，包括二油醯基磷脂醯甘油(DOPG)、二棕櫚醯基磷脂醯甘油(DPPG)、二芥子醯基磷脂醯甘油(DEPG)、二月桂醯基磷脂醯甘油(DLPG)、二肉荳蔻醯基磷脂醯甘油(DMPG)、二硬脂醯基磷脂醯甘油(DSPG)、二癸醯基磷脂醯甘油、複十二醯基磷脂醯甘油，以及棕櫚醯基油醯基磷脂醯甘油(POPG)。
代表性二醯基磷脂醯絲胺酸(即1,2-二醯基-sn-甘油-3-磷酸絲胺酸)，包括二月桂醯基磷脂醯絲胺酸(也稱為複十二醯基磷脂醯絲胺酸)(DLPS)、二油醯基磷脂醯絲胺酸(DOPS)、二棕櫚醯基磷脂醯絲胺酸(DPPS)、二癸醯基磷脂醯絲胺酸，以及二硬脂醯基磷脂醯絲胺酸(DSPS)。
代表性二醯基磷脂酸(即1,2-二醯基-sn-甘油-3-磷酸鹽)包括二芥子醯基磷脂酸(DEPA)、二月桂醯基磷脂酸(也稱為複十二醯基磷脂酸)(DLPA)、二肉荳蔻醯基磷脂酸(DMPA)、二油醯基磷脂酸(DOPA)、二棕櫚醯基磷脂酸 (DPPA)、二癸醯基磷脂酸，以及二硬脂醯基磷脂酸(DSPA)。
代表性磷脂包括磷酸鞘脂類，如神經醯胺磷脂、神經醯胺磷酸膽鹼，以及神經醯胺磷酸乙醇胺。
本發明奈米粒子包括二或多種不同之磷脂。在某些實施例中，該奈米粒子包括二種不同的磷脂。在其他實施例中，該奈米粒子包括三種不同的磷脂。在其他實施例中，該奈米粒子包括四種不同的磷脂。
在某些實施例中，本發明之奈米粒子更包括固醇(如膽固醇)。
如上所述，在某些實施例中，該磷脂為二醯基磷脂。代表性二醯基磷脂包括二醯基磷脂醯膽鹼、二醯基磷脂醯乙醇胺、二醯基磷脂醯甘油、二醯基磷脂醯絲胺酸、二醯基磷脂醯肌醇，以及二醯基磷脂酸。
在某些實施例中，該二醯基磷脂(如磷脂醯膽鹼)含有具10至22個碳原子(如10、12、14、16、18、20、22個碳原子)之脂肪酸成分(醯基)。在某些實施例中，該二醯基磷脂含有具10至20個碳原子(如10、12、14、16、18、20個碳原子)之脂肪酸成分。在其他實施例中，該二醯基磷脂含有具10至16個碳原子(如10、12、14、16個碳原子)之脂肪酸成分。在又一實施例中，該二醯基磷脂含有具10至14個碳原子(如10、12、14個碳原子)之脂肪酸成分。在又一實施例中，該二醯基磷脂含有具10至12個碳原子(如10、12個碳原子)之脂肪酸成分。在某些實施例中，該二醯基磷脂含有具10個碳原子之脂肪酸成分。應了解到，在上述某些實施 例中，二醯基磷脂之每一脂肪酸成分具有相同數目之碳原子(如10、12、14、16、18、20、22個碳原子)，如1,2-二癸醯基磷脂醯膽鹼，以及在上述其他實施例中，二醯基磷脂之每一脂肪酸成分具有不同數目之碳原子，如硬脂醯基油醯基磷脂醯膽鹼。
在某些實施例中，該磷脂為磷脂醯膽鹼。適當之磷脂醯膽鹼包括磷脂醯膽鹼，含有具10至22個碳原子(如10、12、14、16、18、20、22個碳原子)之脂肪酸成分(醯基)。在某些實施例中，該磷脂醯膽鹼含有具10至20個碳原子(如10、14、16、18、20個碳原子)之脂肪酸成分。在其他實施例中，該磷脂醯膽鹼含有具10至16個碳原子(如10、12、14、16個碳原子)之脂肪酸成分。在又一實施例中，該磷脂醯膽鹼含有具10至14個碳原子(如10、12、14個碳原子)之脂肪酸成分。在又一實施例中，該磷脂醯膽鹼含有具10至12個碳原子(如10、12個碳原子)之脂肪酸成分。在某些實施例中，該磷脂醯膽鹼含有具10個碳原子之脂肪酸成分。代表性磷脂醯膽鹼包括示於圖2者(如PC-12、PC-14、PC-16、PC-18、PC-20)與PC-10(未顯示)。應了解到粒子磷脂之脂肪酸成分未必相同(即為具不同醯基之二醯基)。
在某些實施例中，該磷脂為電中性磷脂，具有如，一個負電磷酸基與一個正電胺基(如磷脂醯膽鹼或磷脂醯乙醇胺)。在其他實施例中，該磷脂為負電性磷脂，具有一個負電磷酸基(如磷脂醯甘油)。
如上所述，在某些實施例中，該磷脂為溶磷脂。 在這些實施粒之某些中，該溶磷脂為單醯基磷脂。代表性溶磷脂包括溶磷脂醯膽鹼、溶磷脂醯乙醇胺、溶磷脂醯甘油、溶磷脂醯絲胺酸、溶磷脂醯基肌醇，以及溶磷脂酸(如單醯基磷脂醯基化合物)。
在某些實施例中，該單醯基磷脂(如溶磷脂醯膽鹼)含有具10至22個碳原子(如10、12、14、16、18、20、22個碳原子)之脂肪酸成分(醯基)。在某些實施例中，該單醯基磷脂含有具10至20個碳原子(如10、12、14、16、18、20個碳原子)之脂肪酸成分。在其他實施例中，該單醯基磷脂含有具10至16個碳原子(如10、12、14、16個碳原子)之脂肪酸成分。在其他實施例中，該單醯基磷脂含有具10至14個碳原子(如10、12、14個碳原子)之脂肪酸成分。在其他實施例中，該單醯基磷脂含有具10至12個碳原子(如10、12個碳原子)之脂肪酸成分。在某些實施例中，該單醯基磷脂含有具10個碳原子之脂肪酸成分。
在某些實施例中，該磷脂為溶磷脂醯膽鹼。適當之溶磷脂醯膽膽鹼包括溶磷脂醯膽鹼，含有具10至22個碳原子(如10、12、14、16、18、20、22個碳原子)之脂肪酸成分(醯基)。在某些實施例中，該磷脂醯膽鹼具10至20個碳原子(如10、14、16、18、20個碳原子)之脂肪酸成分。在其他實施例中，該溶磷脂醯膽鹼具10至16個碳原子(如10、12、14、16個碳原子)之脂肪酸成分。在其他實施例中，該溶磷脂醯膽鹼具10至14個碳原子(如10、12、14個碳原子)之脂肪酸成分。在又一實施例中，該溶磷脂醯膽鹼具10至 12個碳原子(如10、12個碳原子)之脂肪酸成分。在某些實施例中，該溶磷脂醯膽鹼具10個碳原子之脂肪酸成分。代表性溶磷脂醯膽鹼包括示於圖2(如溶-PC-12、溶-PC-14、溶-PC-16、溶-PC-20)者與溶-PC-10。
在某些實施例中，該溶磷脂為為電中性溶磷脂，具有如，一個負電磷酸基與一個正電胺基(如溶磷脂醯膽鹼或溶磷脂醯乙醇胺)。在其他實施例中，該磷脂為負電性磷脂，具有一個負電磷酸基(如溶磷脂醯甘油)。
在某些實施例中，本發明奈米粒子包括二醯基磷脂與單醯基磷脂。在這類實施例之某些中，本發明奈米粒子包括磷脂醯膽鹼與溶磷脂醯膽鹼。
二-比單-醯基磷脂之比例(如磷脂醯膽鹼比溶磷脂醯膽鹼)為約1：99 w/w百分比至約99：1 w/w百分比。在某些實施例中，二-比單-醯基磷脂(如磷脂醯膽鹼比溶磷脂醯膽鹼)之比例為約10：90至約90：10 w/w百分比。在其他實施例中，二-比單-醯基磷脂(如磷脂醯膽鹼比溶磷脂醯膽鹼)之比例為約20：80至約80：20 w/w百分比。在其他實施例中，二-比單-醯基磷脂(如磷脂醯膽鹼比溶磷脂醯膽鹼)之比例為約30：70至約70：30 w/w百分比。在其他實施例中，二-比單-醯基磷脂(如磷脂醯膽鹼比溶磷脂醯膽鹼)之比例為約40：60至約60：40 w/w百分比。在某些實施例中，二-比單-醯基磷脂(如磷脂醯膽鹼比溶磷脂醯膽鹼)之比例為約50：50 w/w百分比。在某些實施例中，二-比單-醯基磷脂(如磷脂醯膽鹼比溶磷脂醯膽鹼)之比例為約90：10至約60：40 w/w百分 比。在其他實施例中，二-比單-醯基磷脂(如磷脂醯膽鹼比溶磷脂醯膽鹼)之比例為約90：10至約70：30 w/w百分比。在其他實施例中二-比單-醯基磷脂(如磷脂醯膽鹼比溶磷脂醯膽鹼)之比例為約80：20 w/w百分比。
在本發明之某些實施例中，其中該奈米粒子包括二醯基磷脂(如磷脂醯膽鹼)與單醯基磷脂(如溶磷脂醯膽鹼)，該二與單醯基磷脂之脂肪酸成分相同。例如，該二與單醯基磷脂之每一者包括C10(癸醯基)脂肪酸成分、每一者包括C12(十二醯基)脂肪酸成分、每一者包括C14(十四醯基)脂肪酸成分、每一者包括C16(十六醯基)脂肪酸成分，或每一者包括C18(十八醯基)脂肪酸成分。此外，在其他實施例中，該二與單醯基磷脂之脂肪酸成分不同(如二醯基磷脂包括C10脂肪酸成分，而該單醯基磷脂包括C12脂肪酸成分)。
該組成物中之磷脂與治療劑可以各種方式結合。例如，在某些實施例中，該磷脂與治療劑形成混合物。在某些實施例中，該磷脂包覆或捕捉該治療劑。在某些實施例中，該磷脂結合(如非共價性-結合)至該治療劑上。
粒子尺寸 本發明之奈米粒子具有平均直徑不大於約1000、900、800、700、600、500、400、300、200或100nm之任一者。在些實施例中，粒子之平均直徑介於約30-300nm。在某些實施例中，粒子之平均直徑介於約20-200nm。在某些實施例中，粒子之平均直徑介於約80-200nm。在某些實施例中，粒子之平均直徑介於約30-180 nm。在某些實施例中，粒子之平均直徑介於約40-160nm。在某些實施例中，粒子之平均直徑介於約80-140nm。在其他實施例中，粒子之平均直徑介於約90-120nm。在某些實施例中，粒子可除菌過濾。
粒子電荷 取決於奈米粒子之磷脂組成，該奈米粒子可為電中性或帶電。在某些實施例中，當該奈米粒子僅包括電中性之磷脂(如二-及/或單醯基磷脂)(如磷脂醯膽鹼、溶磷脂醯膽鹼、磷脂醯乙醇胺，及/或溶磷脂醯乙醇胺，每一者皆帶有一負電磷酸基與一正電胺基)，奈米粒子便為電中性，至少就奈米粒子之磷脂成分而言。在其他實施例中，當該奈米粒子包括帶負電之磷脂(如二-及/或單-醯基磷脂)(如磷脂醯甘油，具一負電磷酸基且無對應之正電基團)，該奈米粒子便為負電性，至少就奈米粒子之磷脂成分而言。
在某些實施例中，該奈米粒子為電中性，就奈米粒子之磷脂成分而言。在其他實施例中，該奈米粒子為負電性(帶負電)，就奈米粒子之磷脂成分而言。
本發明之代表性奈米粒子呈現出與Abraxane®具藥物動力學生物相等性，具有大分布體積、低AUC與低Cmax，與溶劑系紫杉醇配方相較，如Taxol®或Tocosol®。Cynviloq®可提供希望之與Abraxane®具藥物動力學生物相等性，但會有不希望之賦形劑/聚合物之過敏性。此會促使在Cynviloq®中，以天然產生之磷脂取代mPEG-PDLLA。
經磷脂-塗覆的奈米粒子特性
在一觀點中，本發明提供一種經磷脂-塗覆的治療劑奈米粒子，其包括經一或多種磷脂塗覆之粒子治療劑。本發明之磷脂奈米粒子與包含該奈米粒子之配方，有數個理由可說明其優點。
本發明奈米粒子提供希望之穩定粒子尺寸與治療劑載入。本發明代表性粒子具平均直徑(Zav)介於約20-200nm至約90-120nm。圖3說明經二-與單醯基磷脂組合物塗覆之代表性紫杉醇粒子之尺寸與尺寸分布。這些粒子具平均直徑約100nm，具多分散性指數約0.1。如圖4所示，治療劑捕捉效率(藥物載入)與粒子尺寸相關，且具二-對單-醯基磷脂比例為約90：10至約70：30之粒子為最佳。粒子尺寸、治療劑(紫杉醇)含量(捕捉效率%)，以及本發明代表性奈米粒子之磷脂組成，摘錄於表2、表3與表4(圖7)。在某些實施例中，最佳化之治療劑捕捉效率在本發明奈米粒子中觀察到，其具平均直徑約90-120nm(如約100nm)、多分散性指數約0.1，並具二-與單-醯基磷脂以約90：10至約70：30(如約80：20複十二醯基磷脂醯膽鹼：複十二醯基溶磷脂醯膽鹼)比例結合之磷脂成分。
在實施本發明時，可有效提供最佳化奈米粒子之磷脂的選擇，係基於治療劑載入、粒子尺寸與尺寸穩定度，以及治療劑釋放分布[在生理條件(血漿)與在投藥條件下(PBS或DI)，有效釋放/粒子溶解之穩定性]。磷脂之選擇並非基於磷脂中治療劑之溶解度。治療劑(紫杉醇)載入為磷脂脂肪酸成分碳原子數目(C8-C20)之函數，示於圖13。最佳 化載入係於具脂肪酸成分碳原子數目(C10-C14)之磷脂(如二-與單醯基磷脂，含有具10至14個碳原子之脂肪酸成分，如磷脂醯膽鹼與溶磷脂醯膽鹼)觀察到。代表性奈米粒子之較佳尺寸與尺寸穩定性示於圖9與10C(請見DI與PBS痕跡)。
本發明代表性奈米粒子呈現治療劑釋放(粒子解離)分布，其結合臨床有效配方希望之特性：Abraxane®與Genexol-PM®(Cynviloq®)。相對於本發明之磷脂-塗覆奈米粒子，Abraxane®為經人類血漿白蛋白塗覆之奈米粒子，而Genexol-PM®為合成聚合物微胞形式之奈米粒子。Abraxane®提供希望之血漿不穩定性(藥物釋放)，但也出現不希望之傳輸載劑(如PBS)不穩定性(請見圖10A)。Genexol-PM®提供希望之傳輸載劑穩定性，以及希望之血漿中不穩定性(請見圖10B)。本發明代表性經磷脂-塗覆之奈米粒子，較佳呈現出在傳輸載劑(用於靜脈內、膀胱內，和腹膜內投藥之水性載劑，例如用於注射液之水性緩衝液(生理食鹽水)、葡萄糖溶液，和去離子水)中之穩定性，以及希望之血漿中不穩定性，以於血漿中釋放治療劑(請見圖10C)。
在上述之某些實施例中，本發明之奈米粒子不帶負電。
在上述之某些實施例中，不論是本發明之奈米粒子或是組成物中之奈米粒子，皆不包含PEG-系冷凍保護劑(如PEG-6000)。
上述代表性奈米粒子可立即配製於可有效治療 性投藥之傳輸載劑中。這些配方較佳呈現出粒子尺寸穩定性。粒子尺寸穩定性為奈米粒子治療性投藥之一重要因素。在本發明奈米粒子以冷凍乾燥粉末提供之實施例中，該奈米粒子之後可重新配製於傳輸載劑中，之後(如之後立即)投藥至個體中。若奈米粒子重新配製於水性載劑中，可任擇地進行過濾(0.2μm)，而提供可能產生粒子尺寸不穩定(如粒子凝集、粒子解離、治療劑釋放)之配方。如圖16所示，本發明代表性奈米粒子之粒子尺寸，可藉由加入適當之添加物而穩定(如粒子尺寸穩定劑，如海藻糖，如約5% w/w海藻糖)。因此，在某些實施例中，本發明之此等配方包括粒子尺寸穩定劑。代表性粒子尺寸穩定劑，包括控制pH值之緩衝劑、抑制蛋白質吸附至界面之界面活性劑、預防微生物生長之防腐劑、作為冷凍乾燥之增積劑的碳水化合物、增加溶液黏度之聚合物，以及穩定蛋白質與獲得生理性張力與滲透壓之鹽類或醣類。這些皆可用於配方中，濃度為約1-15% w/w，以配方總重量為基準。
應了解到，在某些實施例中，本發明之奈米粒子包含此述之成分。在某些其他實施例中，應了解到，本發明之奈米粒子基本上由此述之成分組成，且在這些實施例中，該奈米粒子不包括任何會在本質上影響奈米粒子特性之額外成分(如治療功能、作用或其他藥物動力學特性)。在某些其他實施例中，應了解到本發明之奈米粒子係由此述之成分組成，且在這些實施例中，該奈米粒子並不包括任何額外成分。
經磷脂-塗覆之治療劑奈米粒子組成物
在本發明之另一觀點中，係提供經磷脂-塗覆之治療劑奈米粒子組成物。代表性組成物包括乾燥與液體組成物。
在某些實施例中，該組成物包含乾燥(如冷凍乾燥)組成物。在其他實施例中，該組成物為液體(如水性)組成物，由重新配製或重新懸浮乾燥組成物而得。在其他實施例中，該組成物為可乾燥(如冷凍乾燥)之中間液體(如水性)組成物。
本發明之乾燥組成物可重新配製、再懸浮或再水合，以形成一般穩定之粒子水性懸浮液，包含治療劑與磷脂(如經磷脂-塗覆之治療劑)。疏水性治療劑為在水性懸浮液中經磷脂"穩定化"，若其維持懸浮於水性介質中(如無可見之沉澱或沉降現象)一段長時間，如至少約0.1、0.2、0.25、0.5、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、24、36、48、60或72小時之任一者。懸浮液一般，但並非必要，適用於投藥至個體(如人體)中。在某些實施例中，懸浮液之穩定性係於室溫下(如20-25℃)或冷藏條件下(如4℃)評估。穩定性亦可於加速測試條件下評估，如至少高於約40℃之溫度。
在其他實施例中，該組成物為液體(如水性)組成物，由重新配製或再懸浮乾燥組成物於生物可相容之介質中而得。適當之生物可相容介質包括，但不侷限於，水、緩衝水性介質、生理食鹽水、緩衝生理食鹽水、任擇性緩 衝之胺基酸溶液、任擇性緩衝之蛋白質溶液、任擇性緩衝之糖溶液、任擇性緩衝之維生素溶液、任擇性緩衝之合成聚合物溶液、含脂質乳劑，及其類似物。
此述組成物中之磷脂含量係依據組成物中之治療劑與其他成分而不同。在某些實施例中，該組成物包含磷脂，其量足以於水性懸浮液中穩定該治療性載體，例如，於膠體溶液懸浮液中為穩定之形式(如奈米粒子之穩定懸浮液)。在某些實施例中，該磷脂含量可降低治療劑於水性介質中之沉降速率。就含粒子組成物而言，磷脂之含量亦取決於治療劑粒子之尺寸與密度。
在某些實施例中，磷脂之存在量足以於水性懸浮液中，使治療劑穩定於某一濃度。例如，組成物中治療劑之濃度為約0.1至約100mg/ml，包括如約0.1至約50mg/ml、約0.1至約20mg/ml、約1至約10mg/ml、約2至約8mg/ml，以及約4至約6mg/ml之任一者。在些實施例中，治療劑之濃度至少約1.3mg/ml、1.5mg/ml、2mg/ml、3mg/ml、4mg/ml、5mg/ml、6mg/ml、7mg/ml、8mg/ml、9mg/ml、10mg/ml、15mg/ml、20mg/ml、25mg/ml、30mg/ml、40mg/ml，以及50mg/ml之任一者。在某些實施例中，該磷脂之存在量可避免使用界面活性劑(如Tween 80或Cremophor或其他生物可相容聚合物)。因此，在某些實施例中，本發明之組成物較佳不含或實質上不含界面活性劑(如Tween 80與Cremophor)，與其他生物可相容聚合物(如血清白蛋白，如人類血清白蛋白，與合成性聚合物如含聚(烯基氧化物 (alkylene oxide))之聚合物，描述於美國專利號6,322,805)。
在某些實施例中，該組成物，於液體形式中，包含約0.1%至約50%(w/v)(如約0.5%(w/v)、約5%(w/v)、約10%(w/v)、約15%(w/v)、約20%(w/v)、約30%(w/v)、約40%(w/v)、約50%(w/v))之磷脂。在某些實施例中，該組成物，於液體形式中，包含約0.5%至約5%(w/v)之磷脂。
在某些實施例中，磷脂比治療劑之重量比，為使治療劑足以結合至或傳輸至細胞上之量。就不同之磷脂與治療劑組合而言，磷脂比治療劑之重量比可最佳化，一般磷脂比治療劑(w/w)之重量比為約0.01：1至約100：1，包括如約0.02：1至約50：1、約0.05：1至約20：1、約0.1：1至約20：1、約1：1至約18：1、約2：1至約15：1、約3：1至約12：1、約4：1至約10：1、約5：1至約9：1，及約9：1之任一者。在某些實施例中，磷脂比治療劑之重量比為約18：1或更低，如約15：1或更低、14：1或更低、13：1或更低、12：1或更低、11：1或更低、10：1或更低、9：1或更低、8：1或更低、7：1或更低、6：1或更低、5：1或更低、4：1或更低，以及3：1或更低之任一者。
在某些實施例中，該磷脂可使組成物投至個體(如人體)，而不會有明顯副作用。在某些實施例中，該磷脂之含量足以降低將治療劑投至人體而造成之一或多個副作用。術語"降低投以治療劑造成之一或多個副作用"係指降低、減輕、消除或預防由治療劑引起之一或多種不希望的作用，以及由傳輸載劑，如用於傳輸至療劑之溶劑(如使該療法適用於注射之溶劑)，引起之副作用。此副作用包括如 骨髓抑制、神經毒性、過度敏感、發炎、靜脈刺激、靜脈炎、疼痛、皮膚刺激、周邊神經病變、中性粒細胞減少發熱、過敏性反應、靜脈血栓形成、外滲，及其組合。然而，這些副作用僅僅是示範性，其他與治療劑相關之副作用或副作用的組合，皆可被降低。
組成物中之其他成分 此述的組成物可包括其它試劑、賦形劑、或穩定劑，以增進組成物的特性。適用之賦形劑和稀釋劑範例包括，但不限於，乳糖、葡萄糖、蔗糖、山梨醇、甘露醇、澱粉、阿拉伯樹膠、磷酸鈣、藻酸鹽、黃蓍膠、明膠、矽酸鈣、微晶纖維素、聚乙烯吡咯烷酮、纖維素、水、生理食鹽水溶液、糖漿、甲基纖維素、羥基苯甲酸甲酯與丙酯、滑石、硬脂酸鎂和礦物油。該配方可額外包括潤滑劑、潤濕劑、乳化劑和懸浮劑、防腐劑、甜味劑或調味劑。乳化劑之範例包括生育酚酯，例如生育酚聚乙二醇琥珀酸酯和類似物、泊洛沙姆(Pluronic)、聚氧乙烯化合物系之乳化劑、Span 80和相關的化合物，以及本領域中已知並核准用於動物或人類劑型的其它乳化劑。該組成物可經配製，以提供快速、持續或延遲釋放活性成分，在以本領域熟知的方法投藥至患者後。
經由注射投藥之組成物包括含有治療劑作為活性成分，並與界面活性劑(或潤濕劑或界面活性劑)結合者，或為乳化物形式(如油包水或水包油乳化物)。可視需要加入其它成分，例如甘露糖醇或其它醫藥上可接受的載劑。
在某些實施例中，該組成物適用於投至人體。在 某些實施例中，該組成物適用於投至哺乳動物，如在獸醫背景下，包括居家寵物和農業動物。以下配方與方法僅為示範性，而非限制性。適合於口服投藥者係由：(a)液體溶液，例如有效量化合物溶於稀釋劑，如水、生理食鹽水，或柳橙汁中，(b)膠囊、囊劑或錠劑，每一者皆含有預定量的活性成分，為固體或顆粒，(c)在適當液體中之懸浮液，(d)適當之乳化物，以及(e)粉末。錠劑形式可包括乳糖、甘露醇、玉米澱粉、馬鈴薯澱粉、微晶纖維素、阿拉伯膠、明膠、膠體二氧化矽、交聯羧甲基鈉、滑石、硬脂酸鎂、硬脂酸，和其它賦形劑、著色劑、稀釋劑、緩衝劑、潤濕劑、防腐劑、調味劑，以及藥理學上可相容的賦形劑。菱形片劑形式可以包含有味道的活性成分，通常為蔗糖和阿拉伯膠或黃蓍膠，以及軟錠劑，包括在惰性基質，例如明膠和甘油，或蔗糖和阿拉伯膠、乳劑、凝膠及類似物中的活性成分，除了活性成分，可含有在本領域已知的賦形劑。
適用於非經腸胃投藥的配方包括水性與非水性、等張無菌注射液，其可含有抗氧化劑、緩衝劑、抑菌劑和溶質，其用於產生與預定接受者血液相容的配方，以及水性和非水性無菌懸浮液製劑，其可包括懸浮劑、溶解劑、增稠劑、穩定劑與防腐劑。該配方可在單位劑量或多劑量密封容器，如安瓿和小瓶中儲存，並可於冷凍乾燥(凍乾)條件下儲存，僅需要在使用前立即加入無菌液體賦形劑如水，而用於注射。臨時注射溶液和懸浮液可製備自前述之無菌粉末、顆粒與和錠劑。較佳為可注射配方。
在某些實施例中，該組成物可配製為具pH值範圍約4.5至約9.0，包括範例pH值範圍約5.0至約8.0、約6.5至約7.5，以及約6.5至約7.0之任一者。在某些實施例中，組成物pH值係配製為不小於約6，包括如不小於約6.5、7或8(如約7.5或約8)之任一者。該組成物亦可製備成與血液等張，藉由加入適當之張力修飾劑，如甘油。
應了解到，在某些實施例中，本發明組成物包含此述成分(如可包括下述之其他成分)。在某些實施例中，應了解到本發明組成物基本上由此述成分組成，且在這些實施例中，該組成物並不包含任一會本質性影響奈米粒子特性(如治療性功能、效用或其他藥物動力學特性)之額外成分。在某些其他實施例中，應了解到，本發明組成物係由此述成分組成，且在這些實施例中，該組成物並不包含任一額外成分。
製造包含經磷脂-塗覆之治療劑奈米粒子之物件
在其他觀點中，本發明提供包含此述組成物之製造物件於適當包裝中。此述組成物之適當包裝為技術上已知，且包括如小瓶(例如密封小瓶)、小管(例如密封小管)、安瓿、瓶、罐、彈性包裝(例如Mylar或塑料袋)和類似物。這些製造物件可進一步滅菌及/或密封。
亦提供了包含此述組成物的單位劑型。這些單位劑型可儲存於單一或多個單位劑量之適當包裝中，並可進一步滅菌並密封。
本發明亦提供包含此述組成物(或單位劑量形式 及/或製造物件)之套組，並可更包含組成物使用方法的說明，如本文中進一步描述。在某些實施例中，本發明套組包含上述包裝。在其他實施方案中，本發明套組包含上述包裝，以及包含緩衝劑之第二包裝。其可更包含其它產業與用戶端需要的材料，包括其它緩衝液、稀釋劑、過濾器、針頭、注射器和附有說明書的包裝插頁，用於實施此述的任何方法。
亦提供含有足夠劑量之此述治療劑之套組，以提供個體有效治療一段長時間，如1週、2週、3週、4週、6週、8週、3個月、4個月、5個月、6個月、7個月、8個月、9個月或更多。套組亦可包括多個單位劑量之治療劑與醫藥組成物，以及使用說明書及包裝，其數量足以儲存，並可於藥局如醫院藥局和複合藥局使用。
經磷脂-塗覆的治療劑奈米粒子之使用方法
在另一觀點中，本發明提供使用經磷脂-塗覆之治療劑奈米粒子之方法。
在某些實施例中，本發明提供一種治療疾病或病症，其對於治療劑有反應，之方法，包含投以一組成物，其內含有效量之經磷脂-塗覆之治療劑奈米粒子。例如，在某些實施例中，係提供一種治療個體(如人體)的癌症之方法，包含投以該個體一組成物，其包含有效量之抗腫瘤治療劑(如紫杉醇)，以及一磷脂蛋白。
術語"有效量"使用於此，係指化合物或組成物之量，足以治療一特定病症、症狀或疾病，如改善、緩和、 減輕，及/或延緩其一或多個症狀。就癌症或其他不希望之細胞增生而言，有效量包含足以引起腫瘤縮小及/或降低腫瘤生長速率(如抑制腫瘤生長)之量。在某些實施例中，有效量為足以延遲進展之量。在某些實施例中，有效量為足以預防發生及/或復發之量。有效量可以在一或更多次投藥中被投藥。
本發明組成物(如當治療劑為抗增生試劑，如紫杉醇)可有效治療增生疾病，包括癌症、再狹窄，和纖維化，在其他病症中。當該治療劑為紫杉醇，該組成物可有效治療可藉由投以紫杉醇而治療之疾病與症狀。
可以此述組成物治療之癌症包括，但不限於，癌症、淋巴瘤、母細胞瘤、肉瘤和白血病。可以此述組成物治療之癌症範例包括，但不限於，鱗狀細胞癌、肺癌(包括小細胞肺癌、非小細胞肺癌、肺腺癌、和肺鱗狀癌)、腹膜癌、肝細胞癌、胃或胃部癌(包括胃腸癌)、胰臟癌、神經膠母細胞瘤、子宮頸癌、卵巢癌、肝癌、膀胱癌、肝細胞瘤、乳癌、結腸癌、黑素瘤、子宮內膜或子宮癌、唾液腺癌、腎癌或腎臟癌、肝癌、前列腺癌、外陰癌、甲狀腺癌、肝癌、頭頸癌、結腸直腸癌、直腸癌、軟組織肉瘤、卡波西氏肉瘤、B細胞淋巴瘤(包括輕度/濾泡性非何傑金氏淋巴瘤(NHL)、小淋巴細胞(SL)NHL、中度/濾泡NHL、中度瀰漫型NHL、重度免疫母細胞NHL、重度淋巴母細胞NHL、重度小無裂細胞NHL、巨瘤症NHL、套細胞淋巴瘤、AIDS相關淋巴瘤，和華氏巨球蛋白血症(Waldenstrom's macroglobulinemia))、慢性淋巴細胞白血病(CLL)、急性淋巴細胞白血病(ALL)、骨髓瘤、毛細胞白血病、慢性髓母細胞性白血病，和移植後淋巴增生症(PTLD)，以及與斑痣性錯構瘤病相關之異常血管增生、水腫(如與腦瘤相關者)，以及梅格斯症候群。在某些實施例中，係提供一種治療轉移性癌症(即癌症已從原發腫瘤轉移)之方法。在某些實施例中，係提供一種降低細胞增生及/或細胞轉移之方法。在某些實施例中，係提供一種治療增生之方法。
在某些實施例中，係提供一種治療晚期癌症之方法。在某些實施例中，係提供一種治療乳癌(可為HER2陽性或HER2陰性)之方法，包括如晚期乳癌、第IV期乳癌、局部晚期乳癌，以及轉移性乳癌。在某些實施例中，該癌症為肺癌，包括如非小細胞肺癌(NSCLC，如晚期NSCLC)、小細胞肺癌(SCLC，如晚期SCLC)，以及肺部晚期惡性實體瘤。在某些實施例中，該癌症為卵巢癌、頭頸癌、胃癌、黑色素瘤(包括轉移性黑色素瘤)、結腸直腸癌、胰臟癌，和實體瘤(如晚期實體瘤)。在某些實施例中，該癌症為(在某些實施例中選自於由下列組成之族群)乳癌、結腸癌、直腸癌、非小細胞肺癌、非何傑金氏淋巴瘤(NHL)、腎細胞癌、前列腺癌、肝癌、胰腺癌、軟組織肉瘤、卡波西氏肉瘤、類癌腫瘤、頭頸癌、黑色素瘤、卵巢癌、間皮瘤、神經膠質瘤、神經膠母細胞瘤、神經母細胞瘤和多發性骨髓瘤之任一者。在某些實施例中，該癌症為實體瘤。在某些實施例中，該癌症為(在某些實施例中選自於由下列組成之族群) 前列腺癌、結腸癌、乳癌、頭頸癌、胰臟癌、肺癌，以及卵巢癌之任一者。
適合接受這些組成物之個體，取決於治療劑的性質，以及待治療及/或預防之疾病/症狀/病症。因此，術語“個體”和“受試者”包括脊椎動物、哺乳動物和人類之任一者，取決於預期適當之使用。在某些實施例中，該個體為哺乳動物。在某些實施例中，該個體為人類、牛、馬、貓、犬、囓齒動物或靈長類動物之一或多者。在某些實施例中，該個體為人類。
在其他實施例中，本發明提供一種治療個體癌症(carcinoma)(如直腸癌)之方法，其中該方法包含投以個體一組成物，其包含有效量之經磷脂-塗覆之治療劑奈米粒子。
此述之組成物可單獨投藥或與其他醫藥試劑組合，包括水難溶性醫藥試劑。例如，當組成物包含紫杉烷(如紫杉醇)時，其可與一或多種其他化療劑共投藥，該化療劑包括，但不限於，卡鉑(carboplatin)、諾維本(Navelbine)(長春瑞濱(vinorelbine))、蒽環類(anthracycline)(Doxil)、拉帕替尼(lapatinib)(GW57016)、赫賽汀(Herceptin)、吉西他濱(gemcitabine)(健擇(Gemzar))、卡培他濱(capecitabine)(希羅達(Xeloda))、阿利馬他(alimta)、順鉑(cisplatin)、5-氟尿嘧啶、表柔比星(epirubicin)、環磷醯胺(cyclophosphamide)、阿瓦斯丁(avastin)、萬坷(Velcade)。在某些實施例中，該紫杉烷組成物可與化療劑共投藥，該化療劑選自於由抗代謝物(包括核苷類似物)、鉑系試劑、烷化劑、酪胺酸激酶抑製 劑、蒽環類抗生素、長春花生物鹼、蛋白酶體抑製劑、大環內酯，和拓撲異構酶抑制劑組成之族群。這些其他醫藥試劑可存在於同一組成物中，作為藥物(如紫杉烷)，或在各組成物中，其可與含藥物(如紫杉烷)組成物同時或依序投藥。
本發明組成物投至個體之劑量，會依據特定組成物、投藥方法與待治療之特定疾病而不同。該劑量足以對特定疾病或病況產生希望之反應，如治療性或預防性反應。例如，代表性治療劑(如紫杉醇)之投藥劑量可為約1至約300mg/m2，包括如約10至約300mg/m2、約30至約200mg/m2，以及約70至約150mg/m2。一般而言，組成物中治療劑(如紫杉醇)之劑量範圍，當使用3周行程時，可為約50至約200mg/m2，當使用每周行程時，約10至約100mg/m2。此外，若提供規律處方(如每日一次或每周數次)，該劑量範圍可為約1-50mg/m2。
本發明組成物之投藥頻率包括，但不限於，至少約每三周一次、每二周一次、每周一次、每周二次、每周三次、每周四次、每周五次、每周六次，或每日一次。在某些實施例中，每次投藥間隔為小於約一周，如小於約6、5、4、3、2或1天之任一者。在某些實施例中，每次投藥間隔固定。例如，該投藥可每日、每二日、每三日、每四日、每五日或每周執行一次。在某些實施例中，該投藥可每日二次、每日三次或更頻繁地執行。
本發明組成物之投藥可延長一段長時間，如約一 個月至至多約三年。例如，該投藥可延長約2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、18、24、30與36個月之任一者。在某些實施例中，在投藥行程中無間斷。在某些實施例中，每次投藥之間隔不大於約一周。
此述之組成物可經由各種路徑投藥至個體中，包括如靜脈內、動脈內、腹膜內、肺內、口服、吸入、囊內、肌肉內、氣管內、皮下、眼內、鞘內、經粘膜與經皮投藥。在某些實施例中，該組成物可以任何可接受之路徑投藥，包括但不限於，口服、肌肉內、經皮，和靜脈內投藥。
當製備注射用組成物時，特別是用於靜脈內傳輸時，該連續相較佳包含等張性修飾劑之水溶液，緩衝至pH範圍為約5至約8.5。pH值亦可低於7或低於6。在某些實施例中，組成物之pH值不小於約6，包括如不小於約6.5、7或8(如約7.5或8)之任一者。
本發明之奈米粒子可包於硬或軟膠囊中，可壓製為錠劑，或可加入飲料或食物中，或加入飲食中。膠囊可藉由將奈米粒子與惰性醫藥稀釋劑混合而配製，之後將混合物置入適當尺寸之硬明膠膠囊中。若希望使用軟膠囊，奈米粒子與可接受之植物油、輕石油或其它惰性油，可經由機械包成明膠膠囊。
在實施使用方法時，本發明提供降低與治療劑投藥至人體相關的副作用之方法，包含投以人體一醫藥組成物，其包含該經磷脂-塗覆之治療劑奈米粒子。例如，本發 明提供降低各種與治療劑投藥相關之副作用，包括，但不限於骨髓抑制、神經毒性、過敏、發炎、靜脈刺激、靜脈炎、疼痛、皮膚刺激、周邊神經病變、中性粒細胞減少發熱、過敏性反應、血液學毒性，以及腦或神經毒性，及其組合。在某些實施例中，係提供一種降低與治療劑投藥相關之過敏反應之方法，包括如嚴重的皮疹、蕁麻疹、潮紅、呼吸困難、心動過速與其他反應。
製備經磷脂-塗覆的治療劑奈米粒子之方法
在另一觀點中，本發明提供製備經磷脂-塗覆之治療劑奈米粒子之方法。
在某些實施例中，本發明形成奈米粒子之方法，包括在高剪力條件下製備(如超音波、高壓均質化或類似方法)。在高剪力條件下形成奈米粒子之代表性方法，描述於美國專利號5,916,596；6,506,405；以及6,537,579，在此併入本案以作為參考資料。
簡言之，在某些實施例中，該治療劑係溶於有機溶劑中，以提供一溶液，其與磷脂水溶液結合，以提供一混合物。該混合物進行高壓均質化。均質至希望程度後，該有機溶劑蒸發移除，以提供水性分散液。所得之分散液可更進一步冷凍乾燥，以提供希望之顆粒固體。
適當之有機溶劑包括其中該治療劑為可溶性之溶劑，其可與水溶液混溶，且可在合理溫度與壓力下蒸發移除。可使用之代表性溶劑包括酮、酯、醚、氯化溶劑，以及其他技術上已知之溶劑。例如，該有機溶劑可為二氯 甲烷或氯仿/乙醇(如比例為1：9、1：8、1：7、1：6、1：5、1：4、1：3、1：2、1：1、2：1、3：1、4：1、5：1、6：1、7：1、8：1或9：1)。
醫藥上可接受之賦形劑也可以加至組成物中。適用之醫藥上可接受的賦形劑包括溶液、乳化物，或懸浮液。
亦可製備其他乳化物或奈米粒子配方。乳劑可以在高壓與高剪力下均質化而形成。此均質化可方便地於高壓均質機中進行，一般係於壓力範圍為約3,000至至多30,000psi下操作。較佳為，此過程係於壓力範圍約6,000至至多25,000psi下進行。所得乳化物包含非常小之含可溶性治療劑之非水性溶劑的奈米滴液，以及非常小之磷脂奈米滴液。可接受之均質化方法包括可提供高剪力和空化，例如，高壓均質化、高剪力混合器、超音波、高剪力葉輪，及類似製程。
依據本發明製備的膠體系統，可進一步轉化成粉末形式，於適當溫度-時間分佈下除去水份(例如，冷凍乾燥)。冷凍乾燥產品(如粒子粉末)可立即地經由加入水、生理食鹽水或緩衝液重製，而不需要使用一般的冷凍保護劑，如甘露糖醇、蔗糖、甘胺酸及類似物。雖然非必要，但應當理解，一般的冷凍保護劑可加至該醫藥組成物，若有需要的話。
在一實施例中，該奈米粒子係以微流體-溶劑蒸發製備，如範例1所述。
在另一實施例中，奈米粒子以薄膜水合法製備，描述於範例2。簡言之，在此方法中，磷脂與紫杉醇溶於乙 醇中，並進行迴旋濃縮，直至薄膜形成且所有溶劑蒸發。之後薄膜使用去離子水(DI)水合，以製備紫杉醇-載入之磷脂奈米粒子。
本發明方法包括製備醫藥組成物之方法，包含組合此述任一組成物，與一醫藥上可接受之賦形劑。
在另一觀點中，本發明提供此述組成物用於製造藥物之用途。特別是，製造用於此述治療之藥物。此外，此述之醫藥組成物，亦可用於製造藥物，其可依據本發明方法治療該症狀。
代表性奈米粒子：經磷脂-塗覆之紫杉醇奈米粒子
下列為本發明代表性奈米粒子，一種經磷脂-塗覆的紫杉醇奈米粒子之描述。
在一實施例中，本發明提供一種經磷脂-塗覆之紫杉醇奈米粒子配方，其利用磷脂而非天然聚合物(Abraxane®)，或化學性聚合物(Cynviloq®)，為新一代Abraxane®。請見圖1。
係評估液體組成物與製備方法，對於紫杉醇載入液體-塗覆奈米粒配方之藥物載入與物理穩定性之影響。
該奈米粒子以兩種方式製備：微流體-溶劑蒸發法與薄膜水合法。配方參數包括磷脂種類、磷脂的脂肪酸鏈長度、磷脂與溶磷脂之組合、飽和-不飽和磷脂比例，以及藥物-磷脂比例。研究加工參數如微流體化壓力、微流體化回數，以及水合過程之水溫，以及其對於藥物載入、粒子尺寸，以及物理穩定度之影響，皆紀錄下。
以不同磷脂比例製備之奈米粒子的短期穩定性評估發現，4：1為最佳磷脂-溶磷脂比例，可達到大於60%紫杉醇之載入，具粒子尺寸約200nm。奈米粒子尺寸隨著脂肪酸之碳鏈長度增加而增加，但藥物載入並未隨著微流體壓力或回數改變而有明顯變化。磷脂組成物之最佳化，磷脂種類與加工參數會產生物理性穩定之紫杉醇-載入之經磷脂-塗覆奈米粒子配方，其可在儲存時維持尺寸、電荷與完整性。
經磷脂-塗覆之紫杉醇(PTX)奈米粒子(NPs)包括生物可分解與生物可相容成分，如磷脂(PL)、溶-磷脂(溶-PL)與膽固醇。經磷脂-塗覆NPs中之PTX載入量與此類NPs之穩定性，取決於磷脂之特性、種類與濃度；製備方法；以及藥物-脂質交互作用，其由藥物-脂質比例決定。
係決定影響磷脂-塗覆PTX NPs之粒子尺寸、藥物載入與物理穩定性之因素。
經微流體化溶劑蒸發法(方法1)與薄膜水合法(方法2)製備之PLs與溶-PLs組合配方
具有不同鏈長度，以及在組合物之脂質間有明顯相轉移溫度差之兩種不同PLs與溶-PLs，係用於製備經PLs穩定之PTX-NPs。用於研究之脂質分子結構示於圖2。PLs與溶-PLs之物理特性示於表1。PTX與溶-PLs之一系列組合物係經研究，以發展出穩定之經脂質-塗覆的NP配方，用於PTX。
觀察：磷脂醯膽鹼(PC)之轉換溫度隨著PC之碳鏈長度增加而增加；PC與溶-PC之CMC隨著碳鏈長度增加而降低；然而，溶-PC之CMC高出(相同鏈長度之)PC許多。
如表2所示，一般而言，微流體化溶劑蒸發法可製造較小尺寸之粒子，與薄膜水合法相較。僅單獨使用PLs或溶-PLs，無法製造出較小粒子尺寸約200nm，不論在何種方法中。
觀察：一般而言，微流體化溶劑蒸發法會製造較小尺寸之粒子，與薄膜水合法相較； PL與溶-PL組合可產生較小尺寸粒子200-300nm，使用微流體化溶劑蒸發法；僅單獨使用PLs或溶-PLs，無法製造出較小粒子尺寸約200nm，不論在何種方法中。
PC與溶-PC之碳鏈長度對於PTX載入之影響
使用方法1製備之PC與溶-PC組合物中之粒子尺寸與捕捉效應，示於表3。PC-12與溶-PC-12之組合可產生最小尺寸粒子，具最高PTX載入。磷脂醯膽鹼與膽固醇之組合具非常不良之PTX捕捉效應。
觀察：PC-12與溶-PC-12之組合可產生最小之尺寸粒子與最高之PTX載入；磷膽鹼與膽固醇之組合，具有非常差之PTX捕捉效應。
圖3為經PC-12與溶-PC-12組合物穩定之PTX-NP最佳化配方之粒子尺寸分布圖，使用動態雷射光散射偵測。請參照圖3，僅有非常少數的大粒子在未經過濾之配方中。該配方可容易地經0.2μm過濾器過濾，經過濾的PTX NP配方具單頂尺寸分布，具多分散度指數0.1。最佳化配方之Zav為約100nm。
擠出回數對於粒子尺寸與藥物載入之影響
用於製備經-塗覆之PTX-NPs之擠出回數會影響藥物載入，取決於擠出回數。擠出回數對於粒子尺寸與捕捉效應之影響示於圖4。結果顯示，藥物-脂質比例為1：5，以及PC-12-溶-PC-12比例為80：20。NP之尺寸不會隨著擠出回數增加而改變。PTX捕捉有明顯增加，至至多12個擠出回數。
PC-12與溶-PC-12比例之最佳化
在類似製備條件下，PC與溶-PC比例對於PTX載入之影響，係示於圖5。PTX之最大捕捉係於PC-12：溶-PC-12為4：1時獲得。粒子尺寸會隨著溶-PC-12含量增加而減小。溶-PC-12濃度較高時，可得到較小尺寸之粒子，可能由於無PTX載入之溶-PC-12之微胞粒子造成。
PC-12與溶-PC-12組合可製造最小尺寸之PTX-NP。最大捕捉效率45%係於12回合之配方達到。於配方中加入膽固醇並未增進PTX載入。PC-12：溶-PC-12比例為80：20時，可達奈米粒子尺寸、藥物加入與穩定性之最佳化。最佳化配方具粒子尺寸約100nm。最佳化配方可於4℃ 穩定24小時
載入紫杉醇之可注射經磷脂-塗覆之奈米粒子：組成物、製備方法、電化學特徵，以及溶解情況
成功的紫杉醇奈米粒子配方包括Abraxane(白蛋白結合之奈米粒子紫杉醇)與Genexol-PM®(聚合物結合之奈米粒子紫杉醇)。Genexol-PM®之發展為一大進步，可利用一鍋合成法技術，使用生物可分解二嵌段共聚物，由甲氧基-聚(乙二醇)-聚(乳酸交酯)組成，以形成具含紫杉醇疏水性核心與親水性外殼之奈米粒子(請見圖1)。然而，臨床上的過敏性與在血清/血漿中之不穩定性，仍然是個大問題。本發明提供紫杉醇奈米粒子配方之一鍋合成法，使用磷脂，其可保留希望的Abraxane之血漿中不穩定性，以及Genexol-PM®之磷酸緩衝生理食鹽水(PBS)穩定性。由於使用天然發生之磷脂於本發明紫杉醇奈米粒子中，應不會發生過敏的問題。
奈米粒子之合成可使用兩種方法導入：方法1，微流體化-溶劑蒸發法(類似於Abraxane®之方法)；以及方法2，薄膜水合法(類似於Genexol-PM®之一鍋法)。簡言之，在方法2中，磷脂與紫杉醇溶於乙醇中，並進行迴旋濃縮，直至薄膜形成，且所有溶劑蒸發。之後薄膜使用去離子(DI)水進行水合，以產生紫杉醇-載入之磷脂奈米粒子。使用Malvern ZS DLS系統測量奈米粒子尺寸與zeta電位。該配方進行一系列過濾，使用1.2μm,0.8μm,0.45μm與0.2μm注射筒過濾器。將藥物加入/載入磷脂奈米粒子，係使用ELISA 測量。該配方之電化學特性，係使用奈米碳管修飾網版印刷電極測量，來自DropSens與PGSTAT204 Autolab站，得自Metrohm。人類血漿中奈米粒子溶解度之測試中，50mg/mL人類血清白蛋白(HSA)溶液、PBS與DI水，係用於測量奈米粒子尺寸，使用動態光線散射法。
係測試一系列之磷脂與溶-磷脂，以找出紫杉醇奈米粒子之組合。
圖7比較以微流體化與薄膜蒸發法製備之本發明代表性經磷脂-塗覆的治療劑(紫杉醇)奈米粒子之粒子尺寸(於t=0)與整合入之紫杉醇(%)。
結果如下：短鏈脂質如PC 10(1,2-二癸醯基-sn-甘油基-3-磷酸膽鹼)、PC 12(1,2-二月桂醯基-sn-甘油基-3-磷酸膽鹼)、溶PC 10(1-癸醯基-2-羥基-sn-甘油基-3-磷酸膽鹼)與溶PC 12(1-月桂醯基-2-羥基-sn-甘油基-3-磷酸膽鹼)，可製造出具良好藥物載入、最佳尺寸與穩定度之粒子。方法2製造之奈米粒子具較高之藥物載入與較高之穩定性，與方法1相較。使用方法1與方法2合成的配方，其電化學特性相異，其中一個帶弱負電性，另一個帶弱正電性，可能是由於PC與溶-PC之中性特性所致。每一配方具有獨特的循環電壓(CV)掃描圖(圖8)。以兩種方法製造之粒子，其上電荷不同，表示以方法1與2製造之粒子周圍環繞的脂質排列不同。
圖8比較以微流體化與薄膜蒸發法製備之本發明代表性經磷脂-塗覆之治療劑(紫杉醇)奈米粒子(PC 12：溶 12)之電化學反應(循環電壓：電流(mA)v.施加電壓(V))。
使用方法2製造之磷脂奈米粒子(LM-101)可在人類血漿中快速分解，顯示這些奈米粒子(圖10C)具有類似於Abraxane®(圖10A)與Genexol-PM®(圖10C)之溶解特性。類似於Genexol-PM®，該奈米粒子可在去離子水與磷酸緩衝生理食鹽水(PBS)溶液中維持完整，即使是在非常低的紫杉醇濃度下(1-10ug/ml)。此特性使LM-101可以PBS-稀釋溶液形式投藥至腹腔，以治療卵巢癌，或灌入膀胱以治療膀胱癌。結果顯示，Genexol-PM®之高血漿/血清不穩定性被消除，且LM-101獲得類似於Abraxane®在血清/血漿中之特性。此使得LM-101可靜脈內投藥，具有與Abraxane®類似之藥物動力學特性，用於治療乳癌、肺癌、胰臟癌與黑色素癌。
圖9比較本發明代表性經磷脂-塗覆之治療劑(紫杉醇)奈米粒子在去離子水(DI)、磷酸緩衝生理食鹽水(PBS)，以及人類血漿(50mg/mL人類血清白蛋白/PBS)中之溶解度，顯示出粒子尺寸(nm)為紫杉醇濃度(μg/mL)之函數。
圖10A、10B與10C比較Abraxane®奈米粒子(10A)、Genexol-PM®奈米粒子(10B)，與本發明代表性經磷脂-塗覆之治療劑(紫杉醇)奈米粒子(10C)，於去離子水(水)、磷酸緩衝生理食鹽水(PBS)、血清(0.1X：5mg/mL HSA/PBS)、血清(1.0X：50mg/mL HSA/PBS)、模擬血漿(50mg/mL HSA/PBS)與血漿中之溶解度，顯示出粒子尺寸(nm) 為紫杉醇濃度(μg/mL)之函數。
載入紫杉醇之可注射磷脂奈米粒之穩定性：液體組成物、藥物濃度、儲存溫度、冷凍乾燥與添加物之影響
紫杉醇為治療實體腫瘤，包括乳癌、肺癌與卵巢癌，最有效之化療藥物之一。紫杉醇已配製為奈米粒子配方，Abraxane®，以增進其溶解度(0.35-0.7μg/mL)，並防止使用有害之溶劑，如聚氧乙烯蓖麻油(cremophor)EL。目前已報導下一代之Abraxane：Cynviloq®，一種聚合物性微胞紫杉配方，使用化學聚合物，而非生物性聚合物，以穩定奈米粒子。本發明提供使用磷脂，而非Cynviloq®化學聚合物，以產生下一代Abraxane®。
係評估液體組成物對於紫杉醇-載入之經液體-塗覆之奈米粒子配方，其藥物載入與物理穩定性，在冷凍乾燥之前與後。該奈米粒子係以微流體化-溶劑蒸發法與薄膜水合法製備。配方參數包括磷脂種類、磷脂的脂肪酸鏈長度、磷脂與溶磷脂組合比例，與藥物-磷脂比例。研究加工參數如微流體化壓力與微流體化回數，以及其對於藥物載入、粒子尺寸與物理穩定性之影響。
以不同磷脂比例製備的奈米粒子之短期穩定性評顯示，4：1為最佳之磷脂-溶磷脂比例，可達到大於80%紫杉醇載入，具粒子尺寸約200nm。奈米粒子尺寸會隨著磷脂的脂肪酸碳鏈長度增加而增加，但藥物載入並未有明顯趨勢隨微流體化壓力或回數而改變。係於不同溫度下評估配方之穩定性，在冷凍乾燥前與後。在冷凍乾燥時，磷脂 組成物、藥物-脂質比例、加工參數，以及添加物之最佳化，會產生物理性穩定之紫杉醇-載入之經磷脂-塗覆奈米顆粒配方，其可在儲存時維持尺寸、電荷與顆粒完整性。
經磷脂-塗覆之紫杉醇載入奈米粒子，係由生物可分解與生物可相容成分組成，如磷脂、溶-磷脂與膽固醇。係測定經磷脂-塗覆之奈米粒子中，紫杉醇之載入量與奈米粒子之穩定性，取決於(i)磷脂之特性、種類與濃度、(ii)製備方法，以及(iii)藥物-脂質交互作用，其由藥物-脂質比例決定。
以下將描述影響經磷脂-塗覆之PTX-載入之NP粒子尺寸、藥物載入與物理穩定性之最佳化因素，在冷凍乾燥前與後。
以兩種方法製備紫杉醇-磷脂奈米粒子(PTX-NPs)：微流體化-溶劑蒸發法與薄膜水合法。
方法1：微流體化-溶劑蒸發法 紫杉醇-磷脂奈米粒子(PTX-NPs)以LV1低體積Microfluidizer®加工器進行微流體化而製備。含紫杉醇與磷脂之有機溶劑加至水相中，乳化物通過微流體器，以獲得奈米乳化物。來自奈米乳化物之溶劑，係以迴旋濃縮法移除，得紫杉醇之奈米懸浮液。
方法2：薄膜水合法 磷脂薄膜係以溶解紫杉醇與磷脂於乙醇中而製備。乾燥薄膜係以水進行水合，以進行目視、顯微、尺寸與載入效率測量所得之未經過濾配方。
NP尺寸測量 粒子尺寸與粒子尺寸測量係使用 Zetasizer Nano-ZS進行，並測量樣本之Zav流體動力學直徑，使用累計分析。係測量粒子尺寸與粒子尺寸分布密度，使用光子相關圖譜(PCS))，使用動態雷射光散射法(4mW He-Ne雷射，具固定波長633nm，173°反向散射，於25℃)，於10mm直徑小格中。
磷脂(PLs)與溶磷脂(溶-PLs)之組合配方，以微流體化-溶劑蒸發法(方法1)與薄膜水合法(方法2)製備 具有不同鏈長度，以及有明顯相轉移溫度差之兩種不同PLs與溶-PLs，係用於製備經磷脂穩定之紫杉醇奈米粒子(PTX-NPs)。用於研究之脂質之分子結構示於圖2。PLs(PC-12-PC-20)與溶-PLs(溶-PC-12-溶-PC-20)之物理特性示於上表1。
係研究PLs與溶-PLs之一系列組合，以發展出穩定之紫杉醇經液體-塗覆奈米粒子。
如圖11所示，薄膜水合法一般可製造較高載入之粒子(至多90%)，與微流體化-溶劑蒸發法相較。僅單獨使用PLs或溶-PLs，無法製造出較小粒子尺寸約200nm，不論使用何種方法。
圖11比較本發明代表性經磷脂-塗覆之治療劑(紫杉醇)奈米粒子、經PC-塗覆之紫杉醇奈米粒子(LM-101)之紫杉醇載入(%)，以經微流體化溶劑蒸發法(方法1)與薄膜水合法(方法2)製備。
PL與溶-PL組合可製造出較小尺寸粒子約200nm，不論何種方法(圖12)。
圖12比較本發明代表性經磷脂-塗覆之治療劑(紫杉醇)奈米粒子、經PC-塗覆之紫杉醇奈米粒子(LM-101)之粒子尺寸(nm)，以經微流體化溶劑蒸發法(方法1)與薄膜水合法(方法2)製備。
篩選出PC與溶-PC之碳鏈長度與PTX載入之再水合溫度 PC中紫杉醇之捕捉效率：以方法2製備之溶PC組合物示於圖13。PC-10與溶-PC-10之組合物可產生最高紫杉醇載入，一般而言。
圖13比較以薄膜水合蒸發法(方法2)製備之本發明代表性經磷脂-塗覆之治療劑(紫杉醇)奈米粒子之紫杉醇載入量(%)，為PC碳長度(6-22)之函數。
紫杉醇最高捕捉效率為約90%，以水於40℃進行再水合而得(圖14)。
圖14比較以薄膜水合蒸發法(方法2)製備之本發明代表性經磷脂-塗覆之治療劑(紫杉醇)奈米粒子，其紫杉醇載入量(%)為再水合水溫之函數。
篩選在冷凍乾燥時，用於穩定奈米粒子之冷凍保護劑種類與含量 係評估不同量之蔗糖、甘露糖醇、PVP，和海藻糖，作為單一冷凍保護劑之保護能力。發現在冷凍乾燥時，含量5-20%之海藻糖可最佳穩定該粒子，示於圖15。海藻糖可作為冷凍保護劑之最佳賦形劑，可抑制粒子在冷凍乾燥時成長。
圖15比較本發明代表性經磷脂-塗覆的治療劑(紫杉醇)奈米粒子、以薄膜水合法製備之PC-塗覆紫杉醇奈 米粒子(LM-101)之粒子尺寸，為冷凍保護劑與冷凍保護劑含量之函數，在冷凍乾燥之前與重製之後。
具5-10%海藻糖之配方可於室溫下穩定4小時，在重製之後(圖16)。
圖16比較本發明代表性經磷脂-塗覆的治療劑(紫杉醇)奈米粒子、以薄膜水合法製備之PC-塗覆紫杉醇奈米粒子(LM-101)之粒子尺寸，為時間(t=0與4小時)之函數，在以3.2mM組胺酸緩衝液，pH 5.5重製後。
使用於此，術語"約"與"實質上"係指與該術語主體偏差小於10%。
下列範例僅用於說明目的，而非限制本發明。
範例 範例1 以流體化-溶劑蒸發法製備代表性紫杉醇奈米粒子
PTX-磷脂NP係以LV1低體積Microfluidizer®加工器(Microfluidics,Massachusetts,US)進行微流體化而製備。含PTX與磷脂之有機溶劑(乙醇：氯仿(9：1))加至水相中(去離子水，DI)，乳化物通過微流體器，以獲得奈米乳化物。來自奈米乳化物之溶劑，係以迴旋濃縮法移除，得經磷脂-塗覆之PTX奈米粒子於水相中之奈米懸浮液。
奈米粒子係以將有機與水相混合而製備。有機相係由40mg之12：0 PC(DLPC)1,2-二月桂醯基-sn-甘油基-3-磷酸膽鹼(Avanti Polar Lipids,Inc.,Alabama,US)、10mg之12：0溶PC 1-月桂醯基-2-羥基-sn-甘油基-3-磷酸膽鹼 (Avanti Polar Lipids,Inc.,Alabama,US)，以及10mg之紫杉醇(紫杉醇得自Tecoland Corporation,Irvine,CA(DMF No.11909))，溶於0.16ml乙醇：氯仿(9：1)溶劑中。水相係由1.84ml之DI水組成。有機相與水相初始係使用均質機(VWR® 200 Homogenizer)混合一分鐘，以得微米尺寸之粒子或微乳化物。該微米尺寸之粒子可進一步破碎，以形成奈米粒子，使用LV1微流體機。該配方可推進通過微流體化機12次，於加工壓力20,000psi下。之後該配方立即進行旋轉濃縮，於下列條件下(水浴溫度=40℃，冷卻機溫度=5℃，真空=25mm Hg，旋轉=280rpm，反應瓶尺寸=250ml)。蒸發持續進行直至所有溶劑移除，且反應瓶中未觀察到更多的氣泡。該配方稀釋至最終體積10ml，使用DI水。
所有使用之磷脂皆為研究等級：1,2-複十二醯基-sn-甘油基-3-磷酸膽鹼(DLPC)；1,2-二肉荳蔻基-sn-甘油基-3-磷酸膽鹼(DMPC)；1,2-二棕櫚醯基-sn-甘油基-3-磷酸膽鹼(DPPC)；1,2-二油醯基-sn-甘油基-3-磷酸膽鹼(DOPC)；1,2-二花生四烯醯基-sn-甘油基-3-磷酸膽鹼(DAPC)；1-十二醯基-sn-甘油基-3-磷酸膽鹼(溶-LPC)；1-荳蔻醯基-2-羥基-sn-甘油基-3-磷-膽鹼(溶-MPC)；1-棕櫚醯基-2-羥基-sn-甘油基-3-磷酸膽鹼(LPC)、1-二十醯基-sn-甘油基-3-磷酸膽鹼(溶-EPC)，係購自Avanti Polar Lipids,Inc.(Alabama,US)。膽固醇係得自Sigma(St.Louis,MO)。HPLC級水與乙醇係得自Fisher Scientific(Fair Lawn,NJ)。HPLC級氯仿購自Acros Organics(Morris Plains,NJ)。所有其他化學品與試劑 皆為分析等級，可直接使用，不需進一步純化或鑑定。
範例2 以薄膜水合法製備代表性紫杉醇奈米粒子
磷脂薄膜係以溶解PTX與磷脂於乙醇中製備。乾燥薄膜以水進行水合，以進行所得未經過濾配方之目視、顯微鏡、尺寸與載入效率測量。
由40mg之12：0 PC(DLPC)1,2-二月桂醯基-sn-甘油基-3-磷酸膽鹼(Avanti Polar Lipids,Inc.,Alabama,US)、10mg之12：0溶PC 1-月桂醯基-2-羥基-sn-甘油基-3-磷酸膽鹼(Avanti Polar Lipids,Inc.,Alabama,US)與10mg之紫杉醇(紫杉醇得自Tecoland Corporation,Irvine,CA(DMF No.11909))組成之有機相，係溶於10ml乙醇中。水相係由10ml DI水組成。該二相係於250ml蒸發瓶中混合。溶液使用迴旋濃縮儀完全蒸發，於下列條件下：水浴溫度=28℃，壓力<2mm Hg，冷卻器溫度=5℃，旋轉速度=280rpm，直至薄膜於反應瓶上形成。之後水浴溫度增加至60℃，殘餘乙醇繼續蒸發移除1小時。之後10ml DI水加熱至60℃，之後加至反應瓶中，薄膜持續攪拌再水合，使用磁性攪拌子攪拌30分鐘。
範例3 代表性紫杉醇奈米粒子之尺寸與Zeta電位測量
粒子尺寸與粒子尺寸測量係使用Zetasizer Nano-ZS(Malvern Instruments Ltd,Worcestershire,UK)進行，樣本之Zav流體動力學直徑係以累計分析決定。係測量 粒子尺寸與粒子尺寸分布密度，使用光子相關圖譜(PCS))，使用動態雷射光散射法(4mW He-Ne雷射，具固定波長633nm，173°反向散射，於25℃)，於10mm直徑小格中。粒子尺寸之Zav，亦稱之為累計平均，係定義為諧波強度平均粒子直徑。所有測量皆進行6次。水中NPs之Zeta電位(表面電荷)測定，基於粒子之電泳移動性，採用折疊毛細管單元，在自動模式測量持續期間，使用Zetasizer Nano-ZS測量。測量係以雷射散射法，使用Smoluchowski模式(雷射都卜勒微電泳，He-Ne雷射633nm，於25℃)進行。所有測量皆進行6次。
儘管本發明之較佳實施例已示範與描述，應了解到，可在不脫離本發明精神與範疇下，進行各種變化。
獨占性或特權被請求之本發明具體例係被定義如下。

Claims (63)

  1. 一種經磷脂-塗覆的治療劑奈米粒子，包含經一或多種磷脂塗覆之粒子治療劑，其中該奈米粒子在投藥用水性傳輸載劑中呈穩定，並可在暴露於生理液體中時，實質上立即釋放該治療劑。
  2. 一種經磷脂-塗覆的治療劑奈米粒子，包含經一或多種磷脂塗覆之粒子治療劑，其中該奈米粒子在投藥用水性傳輸載劑中呈現穩定，如同含有治療劑之合成性聚合微胞(Genexol-PM®)，並可在生理條件下有效釋放該治療劑，如同經人類血清白蛋白-塗覆之治療劑(Abraxane®)。
  3. 一種經磷脂-塗覆的治療劑奈米粒子，包含經一或多種磷脂塗覆之粒子治療劑，其中該磷脂包含單-醯基磷脂與二醯基磷脂。
  4. 一種經磷脂-塗覆的治療劑奈米粒子，包含經一或多種磷脂塗覆之粒子治療劑，其中該奈米粒子實質上呈電中性，以磷脂組成物為基準。
  5. 一種經磷脂-塗覆的治療劑奈米粒子，基本上由經一或多種磷脂塗覆之粒子治療劑組成。
  6. 一種經磷脂-塗覆的治療劑奈米粒子，由經一或多種磷脂塗覆之粒子治療劑組成。
  7. 一種經磷脂-塗覆的治療劑奈米粒子，包含經一或多種 磷脂塗覆之粒子治療劑，其中該磷脂為單醯基磷脂。
  8. 一種經磷脂-塗覆的治療劑奈米粒子，包含經一或多種磷脂塗覆之粒子治療劑，其中該磷脂為二醯基磷脂，其含有具10至16個碳原子之脂肪酸成分。
  9. 如請求項1、2與4-6任一項之奈米粒子，其中該磷脂為二醯基磷脂。
  10. 如請求項1-6與8任一項之奈米粒子，其中該磷脂為二醯基磷脂，其選自於由二醯基磷脂醯膽鹼、二醯基磷脂醯乙醇胺、二醯基磷脂醯甘油、二醯基磷脂醯絲胺酸、二醯基磷脂醯肌醇，以及二醯基磷脂酸，及其混合物組成之族群。
  11. 如請求項1-6與8任一項之奈米粒子，其中該磷脂選自於由磷脂醯膽鹼、磷脂醯乙醇胺、磷脂醯甘油、磷脂醯絲胺酸、磷脂醯肌醇與磷脂酸，及其溶磷脂醯基與二醯基磷脂對應體(counterparts)。
  12. 如請求項1-6與8任一項之奈米粒子，其中該磷脂為磷脂醯膽鹼。
  13. 如請求項1-6任一項之奈米粒子，其中該磷脂為含有具10至22個碳原子的脂肪酸成分之磷脂醯膽鹼。
  14. 如請求項1-6與8任一項之奈米粒子，其中該磷脂為含有具10至12個碳原子的脂肪酸成分之磷脂醯膽鹼。
  15. 如請求項1-6與8任一項之奈米粒子，其中該磷脂為二醯 基磷脂醯膽鹼，其選自於由二硬脂醯基磷脂醯膽鹼(DSPC)、二油醯基磷脂醯膽鹼(DOPC)、二棕櫚醯基磷脂醯膽鹼(DPPC)、二次亞麻油醯基磷脂醯膽鹼(DLPC)、棕櫚醯基油醯基磷脂醯膽鹼(POPC)、棕櫚醯基次亞麻油醯基磷脂醯膽鹼、硬脂醯基次亞麻油醯基磷脂醯膽鹼、硬脂醯基油醯基磷脂醯膽鹼、硬脂醯基花生四烯醯基磷脂醯膽鹼、二癸醯基磷脂醯膽鹼(DDPC)、二芥子醯基磷脂醯膽鹼(DEPC)、二次亞麻油醯基磷脂醯膽鹼(DLOPC)、二肉荳蔻醯基磷脂醯膽鹼(DMPC)、肉荳蔻醯基棕櫚醯基磷脂醯膽鹼(MPPC)、肉荳蔻醯基硬脂醯基磷脂醯膽鹼(MSPC)、硬脂醯基肉荳蔻醯基磷脂醯膽鹼(SMPC)、棕櫚醯基肉荳蔻醯基磷脂醯膽鹼(PMPC)、棕櫚醯基硬脂醯基磷脂醯膽鹼(PSPC)、硬脂醯基棕櫚醯基磷脂醯膽鹼(SPPC)、硬脂醯基油醯基磷脂醯膽鹼(SOPC)，及其二醯基溶-磷脂醯膽鹼對應體組成之族群。
  16. 如請求項1、2與4-6任一項之奈米粒子，其中該磷脂為單醯基磷脂。
  17. 如請求項1-7任一項之奈米粒子，其中該磷脂為單醯基磷脂，其選自於由溶磷脂醯膽鹼、溶磷脂醯乙醇胺、溶磷脂醯甘油、溶磷脂醯絲胺酸、溶磷脂酸肌醇與溶磷脂酸，及其混合物組成之族群。
  18. 如請求項1-7任一項之奈米粒子，其中該磷脂為溶磷脂醯膽鹼。
  19. 如請求項1-7任一項之奈米粒子，其中該磷脂為含有具10至22個碳原子之脂肪酸成分之溶磷脂醯膽鹼。
  20. 如請求項1-7任一項之奈米粒子，其中該磷脂為含有具10至12個碳原子之脂肪酸成分之溶磷脂醯膽鹼。
  21. 如請求項1、2與4-8任一項之奈米粒子，其中該磷脂為二醯基磷脂與單醯基磷脂之組合。
  22. 如請求項1-8任一項之奈米粒子，其中該磷脂為磷脂醯膽鹼與溶磷脂醯膽鹼之組合。
  23. 如請求項3、21與22之奈米粒子，其中該二醯基磷脂比單醯基磷脂之比例為約90：10至60：40 w/w百分比。
  24. 如請求項3、21與22之奈米粒子，其中該二醯基磷脂比單醯基磷脂之比例為約80：20 w/w百分比。
  25. 如請求項1-8任一項之奈米粒子，其中該治療劑為具X log P大於2.0之治療劑。
  26. 如請求項1-8任一項之奈米粒子，其中該治療劑選自於由鎮痛劑/退熱劑、麻醉劑、平喘劑、抗生素、抗抑鬱劑、抗糖尿病劑、抗真菌劑、抗高血壓劑、抗發炎劑、抗腫瘤劑、抗焦慮劑、免疫抑制劑、抗偏頭痛劑、鎭靜劑/催眠劑、抗心絞痛劑、抗精神病劑、抗躁狂劑、抗心律失常劑、抗關節炎劑、抗痛風劑、抗凝血劑、血栓溶解劑、抗纖溶劑、血液流變劑、抗血小板劑、抗驚厥劑、抗帕金森氏症藥劑、抗組織胺劑/止癢劑、用於鈣調節之藥劑、抗菌劑、抗病毒劑、抗微生物劑、抗感染劑、支氣管擴張劑、激素、降血糖劑、降血脂劑、蛋白 質、核酸、用於紅細胞生成刺激之試劑、抗潰瘍/抗逆流劑、止噁心劑/止吐劑，以及油溶性維生素組成之族群。
  27. 如請求項1-8任一項之奈米粒子，其中該治療劑為抗腫瘤劑，選自於阿黴素(adriamycin)、環磷醯胺(cyclophosphamide)、放線菌素(actinomycin)、博來黴素(bleomycin)、柔紅黴素(daunorubicin)、多柔比星(doxorubicin)、表阿黴素(epirubicin)、絲裂黴素(mitomycin)、甲氨蝶呤(methotrexate)、氟尿嘧啶(fluorouracil)、卡鉑(carboplatin)、卡莫司汀(carmustine)(BCNU)、甲基-CCNU、順鉑(cisplatin)、依托泊苷(etoposide)、干擾素、喜樹鹼(camptothecin)及其衍生物、苯芥膽固醇(phenesterine)、紫杉醇及其衍生物、多西他賽(docetaxel)及其衍生物、埃博黴素(epothilones)及其衍生物、長春鹼(vinblastine)、長春新鹼(vincristine)、他莫昔芬(tamoxifen)、依托泊苷(etoposide)，或派伯舒凡(piposulfan)。
  28. 如請求項1-8任一項之奈米粒子，其中該治療劑為紫杉醇或其衍生物。
  29. 如請求項1-8任一項之奈米粒子，其中該治療劑為結晶形式。
  30. 如請求項1-8任一項之奈米粒子，其中該治療劑為非晶體形式。
  31. 如請求項1-8任一項之奈米粒子，具平均直徑約30-300 nm。
  32. 如請求項1-8任一項之奈米粒子，具平均直徑約80-200nm。
  33. 一種醫藥組成物，包含如請求項1-32任一項之奈米粒子。
  34. 如請求項33之醫藥組成物，其中該奈米粒子為乾粉形式。
  35. 一種醫藥組成物，包含如請求項1-32任一項之奈米粒子，以及醫藥上可接受之載體。
  36. 如求項35之醫藥組成物，其中該奈米粒子可穩定懸浮於水性介質中。
  37. 如求項35之醫藥組成物，其中該組成物更包含一粒徑穩定劑。
  38. 一種用於注射之醫藥組成物，包含如請求項1-32任一項之奈米粒子，以及醫藥上可接受之載體。
  39. 一種用於治療個體之單位劑量形式，包含如請求項1-32任一項之奈米粒子，以及醫藥上可接受之載體。
  40. 一種套組，包括一包含如請求項1-32任一項之奈米粒子之容器、一包含可用於重新配製該奈米粒子之醫藥上可接受載體之容器，以及使用該套組治療疾病或病況之使用說明。
  41. 一種套組，包含一容器，其包含懸浮於醫藥上可接受載體中之如請求項1-32任一項之奈米粒子，以及使用該套組治療疾病或病況之使用說明。
  42. 一種治療個體疾病或病況之方法，包含投以有需要個體有效量之如請求項1-32任一項之奈米粒子。
  43. 如請求項42之方法，其中該疾病或病況為增生性疾病或病況。
  44. 如請求項42之方法，其中該治療劑為紫杉醇，以及該疾病為可藉由投予紫杉醇而治療之疾病。
  45. 如請求項42之方法，其中該治療劑為紫杉醇，以及該疾病為可藉由投予紫杉醇而治療之癌症。
  46. 一種製備經磷脂-塗覆之治療劑奈米粒子之方法，包含：將含有治療劑分散於其中之有機相，以及含有磷脂之水相，置於高壓均質機之高剪力條件下，以提供均質化之經磷脂-塗覆治療劑奈米粒子混合物。
  47. 如請求項46之方法，其中置於高剪力條件下，包含使用高壓均質機，於壓力範圍約3,000至至多30,000psi下進行。
  48. 如請求項46之方法，更包含自混合物中移出該有機相。
  49. 如請求項46之方法，更包含自混合物中移出該水性介質。
  50. 如請求項46之方法，其中該有機相包含實質上水不混溶性有機溶劑，以及水可溶性有機溶劑之混合物。
  51. 如請求項46之方法，其中該水性介質選自於水、緩衝水性介質、生理食鹽水、緩衝生理食鹽水、胺基酸溶液、糖類溶液、維生素溶液、碳水化合物溶液，或其組合。
  52. 如請求項46之方法，其中該粒子具平均直徑約30nm至 約300nm。
  53. 如請求項46之方法，更包含除菌過濾該混合物。
  54. 如請求項46之方法，其中該奈米粒子為如請求項1-32任一項之奈米粒子。
  55. 如請求項49之方法，其中自混合物中移出該水性介質，包含冷凍乾燥該混合物，以提供奈米粒子粉末。
  56. 如請求項55之方法，其中該奈米粒子為如請求項1-32任一項之奈米粒子。
  57. 一種製備經磷脂-塗覆之治療劑奈米粒子之方法，包含：溶解治療劑與磷脂於有機相中，以提供一溶液，濃縮該溶液至乾燥，以提供一薄膜；以及以水水合該薄膜，以提供經磷脂-塗覆之治療劑奈米粒子之水性懸浮液。
  58. 如請求項57之方法，其中該有機相包含乙醇。
  59. 如請求項57之方法，其中濃縮該溶液至乾燥包含迴旋濃縮。
  60. 如請求項57之方法，其中該水為去離子水。
  61. 如請求項57之方法，其中該粒子具平均直徑約30nm至約300nm。
  62. 如請求項57之方法，更包含除菌過濾該水性懸浮液。
  63. 如請求項57之方法，其中該奈米粒子為如請求項1-32任一項之奈米粒子。
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