CN104337851B - 鸦胆子油纳米结构脂质载体及其冻干粉的制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开鸦胆子油纳米结构脂质载体及其冻干粉的制备方法，包括如下步骤：(1)分别将油相和鸦胆子油在70℃下溶解，所述油相是指固态油脂或者固态油脂和液态油脂的混合，所述油相和鸦胆子油的质量比为：1:1‑2:1；(2)取乳化剂溶解于超纯水中，70℃预热，乳化剂与超纯水的质量比为：1:200‑1:800，乳化剂和鸦胆子油的质量比为：1:1.5‑1:12；(3)将步骤(2)获得的水溶液与步骤(1)获得的油脂混合，采用高速剪切机剪切制成初乳；(4)将步骤(3)获得的初乳倒入高压均质机中，在50‑70MPa压力下，循环5‑7次，得到鸦胆子油纳米结构脂质载体。本发明鸦胆子油纳米脂质体提高了其载药量，具有较好的稳定性，且提高鸦胆子油的疗效，降低毒副作用。

Description

鸦胆子油纳米结构脂质载体及其冻干粉的制备方法
技术领域
本发明属于医药领域，更具体地讲，涉及一种具有抗癌作用的鸦胆子油纳米结构脂质载体及其冻干粉的制备方法。
背景技术
鸦胆子，别名老鸦胆，味苦，有毒。为苦木科植物鸦胆子的干燥成熟果实，产于我国的广东、海南、广西、福建。鸦胆子从20世纪80年代初，继沈阳药科大学研究者发现鸦胆子具有显著地生物活性以来，现已被广泛用于治疗癌症和肿瘤，特别是对各期癌症例如食道癌、胃癌、肠癌和肝癌的疗效极佳。其主要活性成分为油酸和亚油酸，它们能强烈抑制癌细胞对氧的摄取，降低体内氧自由基活动水平和脂质过氧化反应，阻止其有毒代谢产物对细胞的损害，降低癌症患者血清铜——锌超氧化物歧化酶及丙二醛的含量。
纳米结构脂质载体(Nanostructured Lipid Carrier，NLC)被Müller等称为第二代脂质纳米粒(Lipidnanoparticles)载体系统，具有良好的生物相容性及生物利用度，常被用于药物负载。NLC采用固体-固体脂质或固体-液体脂质相混合的方式。因各脂质分子结晶结构形式的不同，可以形成非完美混合晶体结构，避免脂质因形成完美的结晶而将活性物质排挤出去。这种新型给药载体使用无生物毒性的脂质作为基质，同时具备纳米粒的物理稳定性高、可控制药物释放以及良好的靶向性等优势，又兼具了脂质体、乳剂的毒性低、能大规模生产的优点，是一种极有发展前景的新型给药载体，同时又具有生物相容性好、可控释药物、避免药物降解与泄漏等优点。
目前鸦胆子油的剂型有鸦胆子油静脉乳剂、脂质体、固体脂质纳米粒、胶囊和微囊等，其中以鸦胆子油静脉乳剂报道最多。
鸦胆子油口服乳生物利用度不高，并属于热力学不稳定体系，物理稳定性差，其有效成分易氧化分解，产生酸败气味；另外，鸦胆子油口服乳有腥臭味和油腻感，多数患者存在油腻、恶心、厌食、呕吐等消化道不良反应，患者依从性低。而鸦胆子油静脉乳剂生产工艺不稳定，温度、乳化时间和生产设备都对产品质量易产生影响而造成乳粒不均匀；产品质量不稳定，贮存中容易出现油分层、水分层、破裂、转相，絮凝和败坏等现象而无法使用；在临床使用上，由于乳剂颗粒较大，需加入生理盐水稀释才能静脉注射，稀释会明显削弱乳剂的脏器定向分布及淋巴指向性，从而减弱了鸦胆子油的抗癌作用。而对于胶囊，贮藏一段时间后崩解不合格，内容物发生迁移。
鸦胆子油脂质体静脉注射剂能解决以上的问题，但是脂质体本身存在一定的局限性：首先表现在其制备技术给工业化生产带来一定难度；此外药物易从脂质体中渗漏；稳定性差也是脂质体商品化过程急需解决的问题。同时脂质体的制备过程中会用到有机溶剂，有机溶剂的残留有可能增加毒性。
固体脂质纳米粒作为第一代脂质纳米粒也存在以下缺点：1)对于某些活性物质载药量很低；2)保存过程中活性物质的泄露，单一固体脂质基质会形成脂质晶体，限制了它的载体能力，并且会逐渐向完美晶体转变，从而导致贮存过程中药物，营养物等被排挤出晶格；；3)SLN分散液中水含量太高。
发明内容
本发明的目的在于为了提高鸦胆子油包封率及贮存稳定性，以及提高其生物利用度，降低毒副作用，提供一种鸦胆子油纳米结构脂质载体的制备方法。
本发明的第二个目的是提供一种鸦胆子油纳米结构脂质载体。
本发明的第三个目的是提供一种鸦胆子油纳米结构脂质载体冻干粉的制备方法。
本发明的第四个目的是提供一种鸦胆子油纳米结构脂质载体冻干粉。
为实现以上第一个目的，本发明公开以下技术方案：鸦胆子油纳米结构脂质载体的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)分别将油相和鸦胆子油在70℃下溶解，所述油相是指固态油脂或者固态油脂和液态油脂的混合，所述固态油脂选自三月桂酸甘油酯、三硬脂酸甘油酯、三肉豆蔻酸甘油酯、三棕榈酸甘油酯、二十二酸单、双、三甘油酯的混合物、单硬脂酸甘油酯、硬脂酸、棕榈酸、癸酸、二十二碳烷酸、胆固醇以及鲸蜡醇棕榈酸酯、鲸蜡醇十六酸酯中的一种或几种，所述液态油脂选自辛酸癸酸甘油三酯、油酸、维生素E、大豆油中的一种或几种，所述油相和鸦胆子油的质量比为：1:1-2:1；
(2)取乳化剂溶解于超纯水中，70℃预热，其中乳化剂选自聚氧乙烯蓖麻油、大豆磷脂、蛋黄磷脂、卵磷脂、poloxamer182、188、407，泰洛沙姆、聚山梨酯80、胆酸钠、甘胆酸钠、牛磺胆酸钠、去氧牛磺胆酸钠、丁醇、丁酸中的一种或几种，乳化剂与超纯水的质量比为：1:200-1:800，乳化剂和鸦胆子油的质量比为：1:1.5-1:12；
(3)将步骤(2)获得的水溶液与步骤(1)获得的油脂混合，采用高速剪切机剪切制成初乳；
(4)将步骤(3)获得的初乳倒入高压均质机中，在50-70MPa压力下，循环5-7次，得到鸦胆子油纳米结构脂质载体。
作为一个优选方案，步骤(1)中油相和鸦胆子油的质量比优选为：1.6:1。
作为一个优选方案，步骤(1)中油相为固态油脂和液态油脂的混合，所述固态油脂为单硬脂酸甘油酯和硬脂酸，所述液态油脂为辛酸癸酸甘油三酯，其中单硬脂酸甘油酯、硬脂酸和辛酸癸酸甘油三酯的质量比为：2:1:1-1:1:2，优选：2:1:1。
作为一个优选方案，步骤(2)中乳化剂、鸦胆子油和超纯水的质量比优选为：1:3:200。
作为一个优选方案，步骤(2)中乳化剂为聚氧乙烯蓖麻油、poloxamer 188，其中聚氧乙烯蓖麻油和poloxamer 188的质量比为：1:1-1:3，优选：1:1。
作为一个优选方案，步骤(3)中高速剪切时间2分钟，步骤(4)中高压均质压力为60MPa，循环6次。
为实现以上第二个目的，本发明公开以下技术方案：利用上述鸦胆子油纳米结构脂质载体的制备方法制备获得的鸦胆子油纳米结构脂质载体。
为实现以上第三个目的，本发明公开以下技术方案：鸦胆子油纳米结构脂质载体冻干粉的制备方法，将按照上述制备方法制备获得的鸦胆子油纳米结构脂质载体与冻干保护剂溶液混合均匀，预冻后冷冻干燥制成鸦胆子油纳米结构脂质载体冻干粉，其中冻干保护剂选自单糖、双糖、多糖或左旋糖酐中的一种或几种，其中单糖优选甘露醇或葡萄糖，双糖优选乳糖或蔗糖，多糖优选海藻糖。
作为一个优选方案，纳米结构脂质载体和冻干保护剂溶液的体积比是0.5:1-2:1，优选1:1。
作为一个优选方案，预冻时间为24小时，预冻温度-20℃，冷冻干燥时间48小时。
为实现以上第四个目的，本发明公开以下技术方案：利用上述鸦胆子油纳米结构脂质载体冻干粉的制备方法制备获得的鸦胆子油纳米结构脂质载体冻干粉。
本发明的优点在于：(1)制备成鸦胆子油纳米结构脂质载体提高了其载药量，具有较好的稳定性，且提高鸦胆子油的疗效，降低毒副作用；(2)使用了高压均质机，得到的纳米结构脂质载体粒径分布均一；(3)制备工艺简单，制备过程中没有加入有机溶剂(如甲醇，四氯甲烷)，药物载体无毒性，降低了对人体的毒副作用；(4)加入冻干保护剂，制成冻干粉制剂，使纳米载体以固态形式贮存，只需在临用前加入分散介质即可再分散形成液态纳米粒。这种方法不但能显著提高药物的长期储存稳定性，且便于运输使用，也适用于工业生产。
附图说明
图1为鸦胆子油纳米结构脂质载体粒径分布图。
图2为鸦胆子油以及鸦胆子油纳米结构脂质载体的体外释放曲线。
具体实施方式
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。
实施例1.
1、取单硬酯酸甘油酯0.6g，硬脂酸0.6g，辛酸癸酸甘油三酯0.6g，在70℃水浴中至其溶解，待油脂冷却至室温，加入0.6g鸦胆子油，使其在70℃水浴中与油脂混溶。
2、取0.0625g poloxamer 188，0.0625g聚氧乙烯蓖麻油使其充分溶解于100ml超纯水中，在70℃水浴中预热。
3、将步骤2中水溶液与步骤1中的油脂混合，采用高速剪切机剪切2分钟，制成初乳。
4、将步骤3制得的初乳倒入高压均质机料杯中，在60MPa压力下，循环6次。将最终得到的鸦胆子油纳米结构脂质载体放置过夜。
5、取鸦胆子油纳米结构脂质载体与甘露醇水溶液以1:1体积比混合均匀，冷冻干燥48h。
6、取冻干成品，加入适量重蒸水，将纳米结构脂质载体冻干粉分散其中，其分散性性良好，放置12h无沉淀产生。鸦胆子油纳米结构脂质载体的平均粒径为156nm，包封率为97.6％.
实施例2.
1、取单硬酯酸甘油酯1.2g，硬脂酸0.6g，辛酸癸酸甘油三酯0.6g，在70℃水浴中至其溶解，待油脂冷却至室温，加入1.5g鸦胆子油，使其在70℃水浴中与油脂混溶。
2、取0.25g poloxamer 188，0.25g聚氧乙烯蓖麻油使其充分溶解于100ml超纯水中，在70℃水浴中预热。
3、将步骤2中水溶液与步骤1中的油脂混合，采用高速剪切机剪切2分钟，制成初乳。
4、将步骤3制得的初乳倒入高压均质机料杯中，在70MPa压力下，循环5次。将最终得到的鸦胆子油纳米结构脂质载体放置过夜。
5、取鸦胆子油纳米结构脂质载体与海藻糖水溶液以1:1体积比混合均匀，冷冻干燥48h。
6、取冻干成品，加入适量重蒸水，将纳米结构脂质载体冻干粉分散其中，其分散性性良好，放置12h无沉淀产生。鸦胆子油纳米结构脂质载体的平均粒径为174nm，包封率为99.8％。
实施例3.
1、取单硬酯酸甘油酯1.2g，硬脂酸1.2g，辛酸癸酸甘油三酯0.6g，在70℃水浴中至其溶解，待油脂冷却至室温，加入2.0g鸦胆子油，使其在70℃水浴中与油脂混溶。
2、取0.125g poloxamer 188，0.125g聚氧乙烯蓖麻油使其充分溶解于100ml超纯水中，在70℃水浴中预热。
3、将步骤2中水溶液与步骤1中的油脂混合，采用高速剪切机剪切2分钟，制成初乳。
4、将步骤3制得的初乳倒入高压均质机料杯中，在70MPa压力下，循环5次。将最终得到的鸦胆子油纳米结构脂质载体放置过夜。
5、取鸦胆子油纳米结构脂质载体与葡萄糖水溶液以1:1体积比混合均匀，冷冻干燥48h。
6、取冻干成品，加入适量重蒸水，将纳米结构脂质载体冻干粉分散其中，其分散性性良好，放置12h无沉淀产生。鸦胆子油纳米结构脂质载体的平均粒径为181nm，包封率为99.3％。
实施例4.
1、取单硬酯酸甘油酯0.75g，硬脂酸0.75g，辛酸癸酸甘油三酯1.2g，在70℃水浴中至其溶解，待油脂冷却至室温，加入1.5g鸦胆子油，使其在70℃水浴中与油脂混溶。
2、取0.25g poloxamer 188，0.25g聚氧乙烯蓖麻油使其充分溶解于100ml超纯水中，在70℃水浴中预热。
3、将步骤2中水溶液与步骤1中的油脂混合，采用高速剪切机剪切2分钟，制成初乳。
4、将步骤3制得的初乳倒入高压均质机料杯中，在60MPa压力下，循环5次。将最终得到的鸦胆子油纳米结构脂质载体放置过夜。
5、取鸦胆子油纳米结构脂质载体与蔗糖水溶液以1:1体积比混合均匀，冷冻干燥48h。
6、取冻干成品，加入适量重蒸水，将纳米结构脂质载体冻干粉分散其中，其分散性性良好，放置12h无沉淀产生。鸦胆子油纳米结构脂质载体的平均粒径为167nm，包封率为98.8％。
实施例5.
1、取单硬酯酸甘油酯0.6g，棕榈酸0.6g，油酸1.2g，在70℃水浴中至其溶解，待油脂冷却至室温，加入1.2g鸦胆子油，使其在70℃水浴中与油脂混溶。
2、取0.2g poloxamer 188,0.2g大豆磷脂使其充分溶解于100ml超纯水中，在70℃水浴中预热。
3、将步骤2中水溶液与步骤1中的油脂混合，采用高速剪切机剪切2分钟，制成初乳。
4、将步骤3制得的初乳倒入高压均质机料杯中，在70MPa压力下，循环5次。将最终得到的鸦胆子油纳米结构脂质载体放置过夜。
5、取鸦胆子油纳米结构脂质载体与葡萄糖水溶液以0.5:1体积比混合均匀，冷冻干燥48h。
6、取冻干成品，加入适量重蒸水，将纳米结构脂质载体冻干粉分散其中，其分散性性良好，放置12h无沉淀产生。鸦胆子油纳米结构脂质载体的平均粒径为198nm，包封率为93.4％。
实施例6.
1、取三硬酯酸甘油酯0.6g，癸酸0.6g，大豆油0.6g，油酸0.6g在70℃水浴中至其溶解，待油脂冷却至室温，加入1.5g鸦胆子油，使其在70℃水浴中与油脂混溶。
2、取0.25g poloxamer 188,0.25g蛋黄磷脂使其充分溶解于100ml超纯水中，在70℃水浴中预热。
3、将步骤2中水溶液与步骤1中的油脂混合，采用高速剪切机剪切2分钟，制成初乳。
4、将步骤3制得的初乳倒入高压均质机料杯中，在60MPa压力下，循环6次。将最终得到的鸦胆子油纳米结构脂质载体放置过夜。
5、取鸦胆子油纳米结构脂质载体与甘露醇水溶液以1:1体积比混合均匀，冷冻干燥48h。
6、取冻干成品，加入适量重蒸水，将纳米结构脂质载体冻干粉分散其中，其分散性性良好，放置12h无沉淀产生。鸦胆子油纳米结构脂质载体的平均粒径为187nm，包封率为95.4％。
实施例7.
1、取三月桂酸甘油酯1.2g，胆固醇1.2g，维生素E 0.3g，油酸0.3g在70℃水浴中至其溶解，待油脂冷却至室温，加入2g鸦胆子油，使其在70℃水浴中与油脂混溶。
2、取0.125g poloxamer 182,0.125g聚山梨酸钾80使其充分溶解于100ml超纯水中，在70℃水浴中预热。
3、将步骤2中水溶液与步骤1中的油脂混合，采用高速剪切机剪切2分钟，制成初乳。
4、将步骤3制得的初乳倒入高压均质机料杯中，在50MPa压力下，循环7次。将最终得到的鸦胆子油纳米结构脂质载体放置过夜。
5、取鸦胆子油纳米结构脂质载体与乳糖水溶液以2:1体积比混合均匀，冷冻干燥48h。
6、取冻干成品，加入适量重蒸水，将纳米结构脂质载体冻干粉分散其中，其分散性性良好，放置12h无沉淀产生。鸦胆子油纳米结构脂质载体的平均粒径为166nm，包封率为95.6％。
实施例8.
1、取三肉豆蔻酸甘油酯0.75g，鲸蜡醇棕榈酸酯0.75g，油酸0.6g，辛酸癸酸甘油三酯0.6g在70℃水浴中至其溶解，待油脂冷却至室温，加入1.5g鸦胆子油，使其在70℃水浴中与油脂混溶。
2、取0.125g poloxamer 407，0.125g泰洛沙姆使其充分溶解于100ml超纯水中，在70℃水浴中预热。
3、将步骤2中水溶液与步骤1中的油脂混合，采用高速剪切机剪切2分钟，制成初乳。
4、将步骤3制得的初乳倒入高压均质机料杯中，在70MPa压力下，循环5次。将最终得到的鸦胆子油纳米结构脂质载体放置过夜。
5、取鸦胆子油纳米结构脂质载体与蔗糖水溶液以0.5:1体积比混合均匀，冷冻干燥48h。
6、取冻干成品，加入适量重蒸水，将纳米结构脂质载体冻干粉分散其中，其分散性性良好，放置12h无沉淀产生。鸦胆子油纳米结构脂质载体的平均粒径为158nm，包封率为97.5％。
实施例9.
1、取三棕榈酸甘油酯1.2g，鲸蜡醇十六酸酯0.6g，油酸0.6g，在70℃水浴中至其溶解，待油脂冷却至室温，加入1.5g鸦胆子油，使其在70℃水浴中与油脂混溶。
2、取0.2g胆酸钠，0.2g丁酸使其充分溶解于100ml超纯水中，在70℃水浴中预热。
3、将步骤2中水溶液与步骤1中的油脂混合，采用高速剪切机剪切2分钟，制成初乳。
4、将步骤3制得的初乳倒入高压均质机料杯中，在60MPa压力下，循6次。将最终得到的鸦胆子油纳米结构脂质载体放置过夜。
5、取鸦胆子油纳米结构脂质载体与海藻糖水溶液以1:1体积比混合均匀，冷冻干燥48h。
6、取冻干成品，加入适量重蒸水，将纳米结构脂质载体冻干粉分散其中，其分散性性良好，放置12h无沉淀产生。鸦胆子油纳米结构脂质载体的平均粒径为154nm，包封率为96.3％。
实施例10.
1、取二十二酸单、双、三甘油酯1.2g，辛酸癸酸甘油三酯1.2g，在70℃水浴中至其溶解，待油脂冷却至室温，加入2.4g鸦胆子油，使其在70℃水浴中与油脂混溶。
2、取0.25g甘胆酸钠，0.125g丁醇，0.125g牛磺酸钠使其充分溶解于100ml超纯水中，在70℃水浴中预热。
3、将步骤2中水溶液与步骤1中的油脂混合，采用高速剪切机剪切2分钟，制成初乳。
4、将步骤3制得的初乳倒入高压均质机料杯中，在50MPa压力下，循环7次。将最终得到的鸦胆子油纳米结构脂质载体放置过夜。
5、取鸦胆子油纳米结构脂质载体与乳糖水溶液以2:1体积比混合均匀，冷冻干燥48h。
6、取冻干成品，加入适量重蒸水，将纳米结构脂质载体冻干粉分散其中，其分散性性良好，放置12h无沉淀产生。鸦胆子油纳米结构脂质载体的平均粒径为178nm，包封率为98.4％。
实施例11.
1、取二十二酸单、双、三甘油酯的混合物1.2g，大豆油0.6g，油酸0.6g，在70℃水浴中至其溶解，待油脂冷却至室温，加入1.6g鸦胆子油，使其在70℃水浴中与油脂混溶。
2、取0.125g去氧牛磺酸钠使其充分溶解于100ml超纯水中，在70℃水浴中预热。
3、将步骤2中水溶液与步骤1中的油脂混合，采用高速剪切机剪切2分钟，制成初乳。
4、将步骤3制得的初乳倒入高压均质机料杯中，在70MPa压力下，循环5次。将最终得到的鸦胆子油纳米结构脂质载体放置过夜。
5、取鸦胆子油纳米结构脂质载体与蔗糖水溶液以1:1体积比混合均匀，冷冻干燥48h。
6、取冻干成品，加入适量重蒸水，将纳米结构脂质载体冻干粉分散其中，其分散性性良好，放置12h无沉淀产生。鸦胆子油纳米结构脂质载体的平均粒径为189nm，包封率为92.4％。
以上实施例制备得到的纳米结构脂质载体冻干粉在4℃条件下储存6个月，粒径均没有发生变化。
包封率的测定:
精密量取鸦胆子油纳米结构脂质载体于量瓶中，加入适量甲醇，摇晃，过0.45μm的滤膜，取清液用紫外风光光度计测定其中药物含量，即为未包封的游离药物量。
按以下公式计算包封率：EE(％)＝(Wl-W2)/W1×100％注：(EE为纳米结构脂质载体的包封率,Wl为系统中总药量,W2为未包封的游离药物量)。
体外释放曲线
按照实施例二制备鸦胆子油纳米结构脂质载体冻干粉,并研究该鸦胆子油纳米结构脂质载体和鸦胆子油在磷酸盐缓冲液(pH＝7.4)中药物释放。取冻干成品，加入适量重蒸水复溶。将含有相同药物浓度的鸦胆子油纳米结构脂质载体溶液和鸦胆子油溶液分别放入透析袋中，37℃在100ml磷酸盐缓冲液中(pH＝7.4)透析。在不同时间点，用紫外分光光度计测定透析外液的浓度。
体外细胞毒性试验(MTT)
1.按照实施例2制备鸦胆子油纳米结构脂质载体冻干粉，取冻干成品，加入适量PBS缓冲液复溶，配成一定药物浓度的溶液。
2.剂量依赖性一：将A549人肺腺癌细胞接种在96板，每个孔中有100μl培养基，细胞浓度8×103。向孔中分别予以30mg/L、60mg/L、90mg/L、120mg/L浓度鸦胆子油纳米结构脂质载体冻干粉复溶液，恒温37℃，培养24小时后直接添加MTT溶液，恒温37℃，4小时后吸去上清液，加入DMSO 150μl，混合均匀后测值。酶联免疫分析仪测量各组吸光度值，吸收波长570nM，校正波长630nm。正常组是未处理的细胞。计算其对细胞增殖的抑制率：(1-实验组/正常组)*100％，共重复3次。
3.剂量依赖性二：根据上实验结果，将A549人肺腺癌细胞接种在96板，每个孔中有100μl培养基，细胞浓度8×103。向孔中添加60mg/L、浓度鸦胆子油纳米结构脂质载体冻干粉复溶液，恒温37℃，分别培养48、72小时后直接添加MTT溶液，恒温37℃，4小时后吸去上清液，加入DMSO 150ul，混合均匀后测值。酶联免疫分析仪测量各组吸光度值，吸收波长570nM，校正波长630nm。正常组是未处理的细胞。计算其对细胞增殖的抑制率：(1-实验组/正常组)*100％，共重复3次。
4.结果：不同浓度鸦胆子油纳米结构脂质载体(30mg/L、60mg/L、90mg/L、120mg/L)干预A549人肺腺癌细胞24小时后，可见细胞增殖抑制率在一定剂量范围内随浓度的增加而增加，具有剂量依赖性，60mg/L、90mg/L、120mg/L抑制率有升高趋势(表1)。用相同浓度鸦胆子油纳米结构脂质载体(60mg/L)干预A549人肺腺癌细胞24、48、72h，抑制率在一定时间范围内随时间的延长而增加，表示鸦胆子油纳米结构脂质载体具有缓释性(表2)。
表1.不同浓度鸦胆子脂质体A549细胞24h增殖的抑制作用
鸦胆子脂质体浓度 重复次数 抑制率
30mg/L 3 26.50±5.72*
60mg/L 3 52.47±1.96
90mg/L 3 53.73±1.17
120mg/L 3 56.00±1.25
注：*与60mg/L比较，P＜0.05。
表2.浓度60mg/L鸦胆子脂质体不同时间对A549细胞增殖的抑制作用
鸦胆子脂质体浓度 重复次数 抑制率
24h后 3 52.47±1.96
48h后 3 66.80±2.86#
72h后 3 71,57±1.99#**
注：#与24h比较，P＜0.05；；**与48h比较P＜0.05。
目前临床应用的主要采用大豆磷脂为乳化剂制成的水包油型鸦胆子油乳剂。但鸦胆子油口服乳剂生物利用度低，物理稳定性差；而静脉乳注射液工艺不稳定，储存过程中容易出现油水分层、絮凝和败坏等现象而无法使用。本发明将鸦胆子油制成纳米结构脂质载体(NLCs)来提高鸦胆子油的生物利用度以及药顺性。将鸦胆子油纳米结构脂质载体冷冻干燥制备成冻干粉能提高储存稳定性。本发明同时引入了高压均质，使制备出的鸦胆子油纳米结构脂质载体粒径更小，分布更均匀。
综上，本发明具有以下有益效果：1、纳米结构脂质载体具有能增加与癌细胞的亲和力，克服耐药性，增加药物被癌细胞的摄取量，降低用药剂量，提高疗效,降低毒副作用的特点。2、制备操作简单，储存稳定性高。3、制备出来的纳米结构脂质载体粒径均在200nm以内，医学应用性强。4、加入冷冻保护剂，并冷冻干燥将其制备成冻干粉，使纳米结构脂质载体稳定性提高，便于运输和贮藏，6个月内粒径几乎没有任何明显的改变。5、制备出的鸦胆子油纳米结构脂质载体在pH为7.4的释放介质中较鸦胆子油有明显的缓释效果，能减小毒副作用，延长药物在体内的作用时间。提高了鸦胆子油的药顺性以及生物利用度，更好发挥鸦胆子油的抗癌作用。6、MTT结果显示鸦胆子油纳米结构脂质载体对进行试验的两种肿瘤细胞均有具有明显的抑制作用。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (12)

1.鸦胆子油纳米结构脂质载体的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)分别将油相和鸦胆子油在70℃下溶解，所述油相是指固态油脂和液态油脂的混合，所述固态油脂为单硬脂酸甘油酯和硬脂酸，所述液态油脂为辛酸癸酸甘油三酯，其中单硬脂酸甘油酯、硬脂酸和辛酸癸酸甘油三酯的质量比为：2:1:1-1:1:2，所述油相和鸦胆子油的质量比为：1:1-2:1；
(2)取乳化剂溶解于超纯水中，70℃预热，其中乳化剂为聚氧乙烯蓖麻油、poloxamer188，其中聚氧乙烯蓖麻油和poloxamer 188的质量比为：1:1-1:3，乳化剂与超纯水的质量比为：1:200-1:800，乳化剂和鸦胆子油的质量比为：1:1.5-1:12；
(3)将步骤(2)获得的水溶液与步骤(1)获得的油脂混合，采用高速剪切机剪切制成初乳；
(4)将步骤(3)获得的初乳倒入高压均质机中，在50-70MPa压力下，循环5-7次，得到鸦胆子油纳米结构脂质载体。
2.根据权利要求1所述的鸦胆子油纳米结构脂质载体的制备方法，其特征在于，步骤(1)中油相和鸦胆子油的质量比为：1.6:1。
3.根据权利要求1所述的鸦胆子油纳米结构脂质载体的制备方法，其特征在于，单硬脂酸甘油酯、硬脂酸和辛酸癸酸甘油三酯的质量比为：2:1:1。
4.根据权利要求1所述的鸦胆子油纳米结构脂质载体的制备方法，其特征在于，步骤(2)中乳化剂、鸦胆子油和超纯水的质量比为：1:3:200。
5.根据权利要求1所述的鸦胆子油纳米结构脂质载体的制备方法，其特征在于，聚氧乙烯蓖麻油和poloxamer 188的质量比为：1:1。
6.根据权利要求1所述的鸦胆子油纳米结构脂质载体的制备方法，其特征在于，步骤(3)中高速剪切时间2分钟，步骤(4)中高压均质压力为60MPa，循环6次。
7.利用权利要求1—6任一所述的鸦胆子油纳米结构脂质载体的制备方法制备获得的鸦胆子油纳米结构脂质载体。
8.鸦胆子油纳米结构脂质载体冻干粉的制备方法，其特征在于，将权利要求1—6任一获得的鸦胆子油纳米结构脂质载体与冻干保护剂溶液混合均匀，预冻后冷冻干燥制成鸦胆子油纳米结构脂质载体冻干粉，其中冻干保护剂选自单糖、双糖、多糖或左旋糖酐中的一种或几种。
9.根据权利要求8所述的鸦胆子油纳米结构脂质载体冻干粉的制备方法，其特征在于，所述单糖为甘露醇或葡萄糖，所述双糖为乳糖或蔗糖，所述多糖为海藻糖。
10.根据权利要求8所述的鸦胆子油纳米结构脂质载体冻干粉的制备方法，其特征在于，纳米结构脂质载体和冻干保护剂溶液的体积比是0.5:1-2:1。
11.根据权利要求10所述的鸦胆子油纳米结构脂质载体冻干粉的制备方法，其特征在于，纳米结构脂质载体和冻干保护剂溶液的体积比是1:1。
12.利用权利要求8-11任一所述鸦胆子油纳米结构脂质载体冻干粉的制备方法制备获得的鸦胆子油纳米结构脂质载体冻干粉。
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