CN101229130A

CN101229130A - 一种藤黄酸聚乳酸纳米粒制剂及其制备方法

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Publication number: CN101229130A
Application number: CNA2008100174900A
Authority: CN
Inventors: 欧阳五庆; 李树珍
Original assignee: Northwest A&F University
Current assignee: Northwest A&F University
Priority date: 2008-02-03
Filing date: 2008-02-03
Publication date: 2008-07-30
Anticipated expiration: 2028-02-03
Also published as: CN101229130B

Abstract

本发明公开了一种藤黄酸纳米粒制剂，由原料藤黄酸0.05％～1.5％、聚乳酸0.05％～1.5％、表面活性剂0.1％～1.5％、有机溶剂33％～50％余量为水按下列步骤制成：将聚乳酸溶于有机溶剂中，并将藤黄酸分散于其中，然后加入含有表面活性剂的水相中，磁力搅拌4h，减压蒸馏，蒸掉有机溶剂及一部分水，用0.22μm的微孔滤膜过滤即得。该药物体系澄清，粒径为在10～100nm之间，分散性及稳定性良好，能显著增溶药物，对网状内皮细胞具有靶向作用，能在病变部位浓集，提高了药物的治疗效果，减少了药物的毒副作用。另外，药物具有缓释效应，能长时间维持恒定的血药浓度或药理效应，提高了药物生物利用度。

Description

一种藤黄酸聚乳酸纳米粒制剂及其制备方法

技术领域

本发明属医药领域，涉及一种具有抗肿瘤作用的中药提取物藤黄酸的新剂型，特别涉及一种藤黄酸纳米级制剂及其制备方法。

背景技术

藤黄酸(Gambogic acid，GA)是藤黄科植物藤黄所分泌的干燥树脂。主要产于印度、柬埔寨、泰国和越南。在水中的溶解度较差，而在有机溶剂乙醇、甲醇、丙酮、乙酸乙酯、乙腈等中较易溶解。

藤黄酸具有消肿、化毒、止血、杀虫等功用，用于治疗痈疽肿毒等。其主要的药理作用有：①抗肿瘤作用，藤黄对小鼠腹水型肝癌ECA，ARS，S₁₈₀，S₃₇，MA₇₃₇，U₄，ARA₄，W₂₅₆抑制率为35％～38％，对体外培养的人癌细胞BEL-7402、Hela、SMMC-7721细胞株有程度不一的抑制或杀伤作用，并对小鼠肿瘤MA₇₃₇有显著的增敏效果。②抗微生物作用，藤黄酸具有较广谱的抗菌活性，并能抗原虫和真菌。③泻下作用，藤黄酸具有一定的泻下作用。④其他作用，藤黄酸具有抗炎、抗惊厥活性，对中枢神经系统也有兴奋或抑制作用。目前用于治疗的藤黄酸剂型主要为注射剂。但是，藤黄酸注射剂稳定性差，易发生降解，因此，寻找新型载体材料，提高藤黄酸的溶解性和稳定性以及提高药物的作用效果是对藤黄酸的剂型改进首要解决的问题。

发明内容

针对上述现有制剂存在的缺陷或不足，本发明的目的在于，提供一种藤黄酸聚乳酸纳米粒制剂。该药物体系澄清，粒径为在10～100nm之间，分散性及稳定性良好，能显著增溶药物。同时，对网状内皮细胞具有靶向作用，能在病变部位浓集，提高了药物的治疗效果，减少了药物的毒副作用。另外，药物具有缓释效应，能长时间维持恒定的血药浓度或药理效应，延长了作用时间，提高了药物生物利用度。

实现上述发明目的的技术方案是，一种藤黄酸纳米粒制剂，其粒径在10～100nm之间，由下列原料按质量百分比制成：

藤黄酸 0.05％～1.5％聚乳酸 0.05～1.5％

表面活性剂 0.1％～1.5％有机溶剂 33％～50％

余量为水，上述原料的质量百分比之和为100％；

所述的表面活性剂是泊洛沙姆F-68或土温-80；

所述的有机相为乙腈、丙酮、乙酸乙酯中的一种。

本发明的优选配比为：

藤黄酸 0.1％～1％聚乳酸 0.1～1％、

表面活性剂 0.5％有机溶剂 33％～50％

余量为水，上述原料的质量百分比之和为100％。

本发明还一个目的是提供上述藤黄酸纳米粒制剂的制备方法，具体包括下列步骤：

1)称取各原料：藤黄酸、聚乳酸、水、机溶剂、表面活性剂，备用；

2)将所述量的藤黄酸与聚乳酸用有机溶剂溶解；

2)将所述量的波洛沙姆F-68溶于水中；

3)将有机相，含有藤黄酸和聚乳酸的有机溶液逐滴加入含表面活性剂的水溶液中，磁力搅拌器搅拌4h；

4)减压蒸馏(温度：35～45℃)，除去一部分有机溶剂和水；

5)过滤即得乳黄色的藤黄酸聚乳酸纳米粒。

纳米材料的生物安全性是近年来备受关注的研究领域，良好的生物相容性是纳米医用材料的首要必备条件。本实验使用的PLA是美国FDA批准可用于临床试验的生物可降解的合成性高分子物，它在体内代谢的终产物是CO₂和H₂O，对人体无毒，生物相容性极佳。在体内无毒性及抗原反应，药物经纳米粒包封后在体内形成一种可控制的时间依赖性药物释放系统，可延长药物血浆半衰期，减少心、肾副毒作用。此外，纳米粒还具有对淋巴网状系统的靶向作用，对肝、肺和淋巴网状系统肿瘤可提高药物疗效。靶向给药系统(targeted drugs delivery system，TDDS)，也称靶向给药制剂，是指能将药物有目的的浓集于某些器官、组织或细胞的一类制剂。TDDS既最大限度地发挥了药物的疗效，降低对其他正常器官、组织及全身的毒副作用，还可增加药物的稳定性，减少药物的用量，使制剂具有缓释或控释特性。作为长循环药物的纳米粒，研究还发现，GA-PLA-NPs可能在血浆蛋白及吞噬细胞的增殖中发挥一定的作用。体内研究发现，有些蛋白在纳米粒载体的转运中起一定的作用。

本发明选用的藤黄酸(Gambogic acid，GA)是藤黄科植物藤黄所分泌出的干燥树脂。具有消肿、化毒、止血、杀虫等功用，用于治疗痈疽肿毒等。近二十年来发现药具有显著的抗肿瘤活性。引起了广大科学研究者的重视。但是由于藤黄酸的水溶性差，现阶段，市场上主要的剂型是注射剂，是利用藤黄酸可溶于碱性溶液中的性质制备的，藤黄酸的pKa为7.8，酸性很弱，只能溶于强碱性水溶液。因此在对藤黄酸进行制剂工艺研究时，首先尝试了以NaOH水溶液为溶剂的注射剂，但藤黄酸在碱性溶液中容易发生降解，制剂的稳定性差，藤黄酸易失活。因此寻找藤黄酸的新剂型是开发藤黄酸的新领域。

鉴于藤黄酸具有水溶性差而脂溶性好的特性，采用改良的自乳化溶剂挥发法制备藤黄酸聚乳酸纳米粒(Gambogic acid-1oaded polylacticacidnanoparticles，GA-PLA-NPs)，不但解决了藤黄酸水溶性差的缺点，而且制备的纳米粒具有靶向作用，提高了药效，毒副作用小，具有较好的应用前景。

本发明所述的药物可以制成粉针剂、片剂、针剂或口服液。

本发明的藤黄酸纳米粒乳液，与现有技术相比，具有以下优点：

1)热力学稳定性高，制备时操作比较简单，不分相、不沉淀，贮存稳定性提高；

2)一般情况下，抗肿瘤药物由于难溶于水相和油相，纳米粒载药量很低，本发明的纳米粒载药量可达13.3％。

3)本发明的藤黄酸聚乳酸纳米粒本身具有肝被动靶向性能。降低对其他正常器官、组织及全身的毒副作用，还可增加药物的稳定性，减少药物的用量，使制剂具有缓释或控释特性。

4)本实验使用的PLA是美国FDA批准可用于临床试验的生物可降解的合成性高分子物，它在体内代谢的终产物是CO₂和H₂O，对人体无毒，生物相容性极佳。在体内无毒性及抗原反应，

5)药物经纳米粒包封后在体内形成一种可控制的时间依赖性药物释放系统，可延长药物血浆半衰期，减少心、肾副毒作用。

6)具有良好的增溶作用，可以有效的提高难溶性药物的溶解度；

7)本发明的藤黄酸聚乳酸纳米粒可增大它的治疗效果，降低治疗剂量，增大对肝癌细胞的杀伤作用。

8)能提高藤黄酸的溶解度，延缓藤黄酸的消退时间，提高了藤黄酸的生物利用度；

9)方法工艺简单，适合规模化生产。

具体实施方式

本发明经透射电子显微镜和激光粒度分析仪检测，液滴直径90％以上分布在30～70nm之间，具体见图1、图2，外观为黄色液体，具有很好的稳定性：

1、经时稳定性

经时稳定性是指纳米粒乳液在室温自然变化条件下贮藏时，外观随时间延长而发生变化的程度。该藤黄酸纳米粒乳液持久透明，未发现浑浊或沉淀，则说明经时稳定性好。这是评价纳米乳液的一个重要指标。

2、热贮稳定性

将该藤黄酸纳米粒乳液置于试管，密封，置于37℃恒温水浴箱中贮存1个月，该液热贮后外观透明。

3、光稳定性

将该藤黄酸纳米粒乳液置于试管，密封置于日光下，室温光照30d，定期取样。结果表明，藤黄酸纳米粒乳液在光照条件下，各项指标无明显变化，长时间保持澄清态，颜色无变化。

4、抗冷冻稳定性

将该藤黄酸纳米粒乳液在冰箱中-4℃保存一个月后。恢复至室温。如果纳米乳口服液在-4℃成固体，恢复至室温，恢复至透明，且放置一周后继续透明，则认为抗冷冻性好。

5、加速稳定性

将该藤黄酸纳米乳液置于试管，密封，在13 000r·min^-1的转速下离心20分钟，没有分层，仍澄清透明。

制备的该制剂平均粒径为51.36nm，其中90％以上粒径分布于30～70nm之间，粒径分布较窄，可以注射、口服，能增强藤黄酸的吸收，维持恒定的血药浓度或药理效应，延长作用时间，降低药物的用量，降低副作用，提高药物生物利用度。同时具有靶向作用，使药物在病变部位聚集，达到更好的治疗效果。

实施例1：

1)称取藤黄酸20mg、聚乳酸75mg，溶于20mL乙腈，制成有机相；

2)称取一定量波洛沙姆F-68 0.2g溶于20mL水中，制成水相；

3)将有机相逐滴加入水相中，磁力搅拌4h；减压蒸馏，除去有机溶剂及一部分水；用0.22μm的微孔滤膜过滤，即得乳黄色的藤黄酸聚乳酸纳米粒溶液。测得的平均粒径为52.6nm。

实施例2：

1)精密称取藤黄酸20mg、聚乳酸50mg，溶于20mL丙酮。

2)称取波洛沙姆F-68 0.4g，溶于40mL水中。

3)方法同实施例1.3)，得乳黄色的藤黄酸聚乳酸纳米粒。经测量得平均粒径为51.2nm。超速冷冻离心(4℃，50 000r·min-1)1.5h。得藤黄酸聚乳酸纳米粒粉剂。

实施例3：

1)精密称取藤黄酸20mg、聚乳酸75mg，溶于20mL丙酮。

2)称取波洛沙姆F-68 0.2g，溶于40mL乙醇水溶液(乙醇∶水＝1∶1)中。

3)方法同实施例1.3)，得乳黄色的藤黄酸聚乳酸纳米粒。经测量得平均粒径为50.6nm。

实施例4：

1)精密称取藤黄酸25mg、聚乳酸90mg，溶于20mL乙酸乙酯中。

3)方法同实施例1.3)，得乳黄色的藤黄酸聚乳酸纳米粒。经测量得平均粒径为50.3nm。超速冷冻离心(4℃，50 000r·min-1)1.5h。得藤黄酸聚乳酸纳米粒粉剂。

实施例5：

1)精密称取藤黄酸18mg、聚乳酸75mg，溶于20mL丙酮。

2)称取土温-80 0.2g，溶于40mL乙醇水溶液(乙醇∶水＝1∶1)中。

3)方法同实施例1.3)，得乳黄色的藤黄酸聚乳酸纳米粒。经测量得平均粒径为51.6nm。

实施例6：

1)精密称取藤黄酸15mg、聚乳酸75mg，溶于20mL乙酸乙酯。

2)称取土温-80 0.2g，溶于40mL乙醇水溶液(乙醇∶水＝1∶1)中。

3)方法同实施例1.3)，得乳黄色的藤黄酸聚乳酸纳米粒。

实施例7：

1)精密称取藤黄酸18mg、聚乳酸75mg，溶于20mL乙腈。

2)称取土温-80 0.2g，溶于20mL水中。

3)方法同实施例1.3)，得乳黄色的藤黄酸聚乳酸纳米粒。超速冷冻离心(4℃，50 000r·min-1)1.5h。得藤黄酸聚乳酸纳米粒粉剂。

实施例8：

1)精密称取藤黄酸23mg、聚乳酸100mg，溶于20mL乙腈。

2)称取F68 0.2g，溶于20mL乙醇水溶液(乙醇∶水＝1∶1)中。

3)方法同实施例1.3)，得乳黄色的藤黄酸聚乳酸纳米粒。

实施例9：

1)精密称取藤黄酸25mg、聚乳酸125mg，溶于20mL丙酮。

2)称取土温-80 0.25g，溶于50mL水溶液中。

实施例10：

1)精密称取藤黄酸20mg、聚乳酸125mg，溶于20mL乙酸乙酯。

2)称取F68 0.25g，溶于50mL水溶液中。

3)方法同实施例1.3)，得乳黄色的藤黄酸聚乳酸纳米粒。

实施例11：

1)精密称取藤黄酸25mg、聚乳酸125mg，溶于20mL乙腈。

2)称取F68 0.20g，溶于40mL水溶液中。

3)方法同实施例1.3)，得乳黄色的藤黄酸聚乳酸纳米粒。

以下通过试验例来进一步阐述本发明所述的藤黄酸聚乳酸纳米粒的良好品质和有益效果，这些试验例包括了药物对动物急性毒性试验、对肝癌细胞HepG2活性试验。

试验例1：急性毒性试验

昆明小鼠50只，4～5周龄，体重18～22g，雌雄各半。余随机分为5组，每组10只。试验前禁食12h，不禁水。取藤黄酸纳米粒溶液按照0.16mL/20g、0.21mL/20g、0.26mL/20g、0.32mL/20g和0.40mL/20g的剂量腹腔注射，连续7d，自由饮水和进食，记录各组动物给药后的症状、体征、死亡数目和时间，用Bliss法计算LD50。

用Bliss法计算LD50软件程序(华西医科大学编制)进行处理。结果表明：制备出的藤黄酸纳米粒溶液的LD50＝26.3mg/Kg。比资料显示的藤黄酸无纳米粒包封时LD50(20mg/kg)大。

试验例2：MTT法检测藤黄酸聚乳酸纳米粒对肝癌细胞HepG2增殖的影响。

取对数生长期的HepG2细胞，胰蛋白酶消化，培养基重悬为5×104/ml，细胞悬液接种于96孔培养板中，每孔加180μL。细胞贴壁后加入不同浓度藤黄酸聚乳酸纳米粒20μL，使其终浓度分别为0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、8.0、10.0μg/mL，每个浓度设6个平行孔，同时设置空白对照组、溶剂对照组和调零孔。培养48h后，加入20μL/孔MTT，孵育4h后，吸去培养液后，加入150μL/孔DMSO。震荡5min，使结晶充分溶解，自动酶标仪测570nm波长处吸光度(D)值，计算藤黄酸聚乳酸纳米粒的中效浓度(IC50)。经实验，藤黄酸聚乳酸纳米粒能明显抑制细胞的增殖，细胞数目明显减少。经计算，藤黄酸聚乳酸纳米粒的中效浓度IC50为4.0μg/mL。

Claims

1.一种藤黄酸纳米粒制剂，其粒径在10～100nm之间，由下列原料按质量百分比制成：

藤黄酸 0.05％～1.5％聚乳酸 0.05％～1.5％

表面活性剂 0.1％～1.5％有机溶剂 33％～50％

余量为水，上述原料的质量百分比之和为100％；

所述的表面活性剂是泊洛沙姆F-68或土温-80。

2.根据权利要求1所述的藤黄酸聚乳酸纳米粒制剂，其特征在于，由下列原料按质量百分比制成：

藤黄酸 0.1％～1％聚乳酸 0.1％～1％

表面活性剂 0.5％有机溶剂 38％～45％

余量为水，上述原料的质量百分比之和为100％。

3.根据权利要求1所述的藤黄酸聚乳酸纳米粒制剂，其特征在于，所述的有机相为乙腈、丙酮、乙酸乙酯中的一种。

4.根据权利要求1所述的藤黄酸聚乳酸纳米粒制剂，其特征在于，包括下列步骤：

1)称取各原料藤黄酸、聚乳酸、水、有机溶剂、表面活性剂，备用；

2)将所述量的藤黄酸与聚乳酸用有机溶剂溶解；

3)将所述量的表面活性剂溶于水中；

4)将含有藤黄酸和聚乳酸的有机溶液滴加入含表面活性剂的水溶液中，磁力搅拌器搅拌4h；

5)在35～45℃减压蒸馏除去一部分有机溶剂和水，过滤即得乳黄色的藤黄酸聚乳酸纳米粒。