CN100525758C - 藤黄酸脂质体及其冻干粉针剂与制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及药物制剂领域，具体涉及天然药物藤黄酸的脂质体及其冻干粉针，本发明的藤黄酸脂质体含藤黄酸、磷脂、胆固醇，三者的重量比为1∶5～40∶0～10，三者优选的重量比是1∶10～30∶2～8。本发明的藤黄酸脂质体包封率大于90%，粒径小于200nm。

Description

藤黄酸脂质体及其冻干粉针剂与制备方法

技术领域

本发明涉及药物制剂领域，具体涉及天然药物藤黄酸的脂质体及其冻干粉针，本发明还公开了它的制备方法。

背景技术

藤黄(Garcinia hanburryi)为藤黄科植物藤黄树分泌的干燥树脂，美国药典曾收载该品，其活性成份主要为藤黄酸等酸性有效部位，即总藤黄酸。1955年Amorosa通过制成吡啶盐结晶，首次获得纯的藤黄酸，1965年借助核磁共振仪确定了分子结构，以后对藤黄酸的研究工作不断深化。

已有研究表明，藤黄酸类化合物对于肿瘤有抑制作用，尤其是在肝癌、肺癌以及肠癌的治疗中有较好的效果。项守仁、程廷楷等人在“江西医学院学报”1982(1)，17；1982(1)，13中报道藤黄酸对肉瘤(S180)和艾氏腹水癌有抑制作用。孙周等人在“江西医学院学报”1982(3)，5中报道将藤黄酸用乙醇提取，得到的乙醇总提取物回收乙醇，用硼酸水溶解，并加吐温80助溶制成针剂，对此针剂进行有关毒性研究。潘得年等人在“天津医药肿瘤学附刊”1981，8：230中报道将藤黄酸制成注射液用于临床治疗50例恶性肿瘤。郝琨等人在“中国药科大学学报”2005，36(4)：338，“中国天然药物”2005，3(5)：312分别报道藤黄酸在大鼠、犬体内的药代动力学。据文献报道(《江西医药》1982年3期)：藤黄临床使用对血管有局部刺激作用，当滴注过速或浓度稍高或时间较长时，可致浅静脉炎，注射时药液漏至血管外，可引起局部肿胀与疼痛。

由于藤黄酸难溶于水，目前报道的藤黄酸注射剂主要是使用硼酸溶液配制的。CN1452960A公开了一种通过添加L-精氨酸、葡甲胺、赖氨酸等助溶剂制备注射用藤黄酸制剂的方法；CN1391892A也是通过添加L-精氨酸助溶制备藤黄酸的冻干制剂；CN1513448A通过添加聚氧乙烯蓖麻油、吐温等增溶剂制备藤黄酸的注射制剂，CN1718183A使用L-精氨酸、葡甲胺、赖氨酸等作为助溶剂以制备藤黄酸冻干制剂。长期使用这些增溶剂或助溶剂，可引起了一系列的不良反应如过敏、肾毒性、神经毒性、心血管毒性等，或者需要较大用量才能取得稳定的和有效剂量的增溶效果。

发明内容

本发明公开了一种临床适用的藤黄酸脂质体及其注射用冻干粉针，既能显著提高贮存稳定性，又能使藤黄酸脂质体冻干粉在加入注射用水后重新分散后，能以任意比例于输液稀释给药，使脂质体中的药物持续释放，延长在血液中的循环时间，以提高药物有效成份的利用率，降低毒副作用；降低药物对血管的刺激性，提高病人的顺应性。

本发明的藤黄酸脂质体含藤黄酸、磷脂、胆固醇，三者的重量比为1∶5～40∶0～10。三者优选的重量比是1∶10～30∶2～8。

研究发现，藤黄酸与磷脂的用量比例不同，导致制备的脂质体的质量也不同，另外，本发明优选含胆固醇，胆固醇的添加使脂质体制剂包封率显著提高，粒径显著降低同时可延缓脂质体中药物的释放。表1是藤黄酸与磷脂不同用量比的试验结果。

表1 藤黄酸脂质体磷脂用量筛选实验

由表1可见，当藤黄酸与磷脂重量比为1∶2.5时，即使添加了胆固醇，但脂质体的包封率低，并且粒径比较大。而当藤黄酸与磷脂的重量比为1∶5～1～40时，脂质体包封率高，粒径小，当藤黄酸与磷脂的重量比为1∶50时，包封率很高，达95％，但粒径偏大。另外，在最初的试验中发现，当藤黄酸重量比为1，磷脂重量小于2.5时，包封率小于75％；而当藤黄酸重量比为1，磷脂重量比大于50时，包封率不再提高，而粒径却还要增大。对于药物制剂来说，药用辅料增多不仅生产成本高，而且对人体也不利，因此本发明中藤黄酸和磷脂的重量比为1：5～1∶40。从表1中也可以看出，综合包封率、粒径、辅料用量等因素，当藤黄酸和磷脂的重量比为1∶10～1∶30时制备藤黄酸脂质体较佳。

另外，胆固醇的用量对本发明的藤黄酸脂质体质量也有一定影响，表2是藤黄酸与胆固醇不同用量比的试验结果：

表2 胆固醇用量筛选实验

综合影响质量的各个因素，本发明藤黄酸与胆固醇的重量比是1∶0～1∶10，优选1∶2～1∶8。

本发明中所述磷脂优选大豆磷脂、卵磷脂、合成磷脂或聚乙二醇化磷脂中的一种或几种。

所述藤黄酸可以是藤黄酸纯品，也可以是藤黄酸原料药中含少量新藤黄酸和异藤黄酸(常用规格为干燥品中藤黄酸标示量90—105％含量范围，其余为新藤黄酸及相关成分)。

本发明的藤黄酸脂质体还可以通过添加冻干保护剂制备成脂质体冻干粉针剂，所述藤黄酸脂质体的冻干粉针剂，基本上由脂质体与右旋糖苷、单糖、双糖和/或多糖组成；右旋糖苷、单糖、双糖和/或多糖的量按磷脂重量比计算，1份磷脂加入0.2—4.0份右旋糖苷、单糖、双糖和/或多糖。优选的冻干保护剂的量：1份重量的磷脂加入0.5—1.0份的冻干保护剂。

试验发现，不同的冻干保护剂对脂质体冻干粉针剂最后的质量如外观有不同的影响，表3是不同冻干保护剂对藤黄酸脂质体冻干粉针剂的影响

表3 冻干保护剂的筛选结果

因此，本发明的冻干保护剂优选葡萄糖、甘露醇、蔗糖中的一种或几种。

本发明的脂质体可用旋转蒸发法、逆相蒸发法、高压匀化法、pH梯度法等方法制备。

本发明的藤黄酸脂质体制备方法包括：将藤黄酸、磷脂、胆固醇溶于有机溶剂中，减压蒸去有机溶剂，加入pH6—8的磷酸盐缓冲液形成混悬液，匀化，即得，所述有机溶剂选自氯仿、甲醇、乙醇、乙醚、丙酮、石油醚中的一种或几种。优选氯仿、甲醇、乙醇。如果要制备成冻干粉针剂，则将冻干保护剂溶解在脂质体中，冷冻干燥即可。

本发明的藤黄酸脂质体还可以用下列方法制备：将藤黄酸、磷脂、胆固醇溶于有机溶剂中，再与pH6—8的磷酸盐缓冲液混合，乳化，除去有机溶剂，即可。如果要制备成冻干粉针剂，则将冻干保护剂溶解在脂质体中，冷冻干燥即可。

本发明藤黄酸脂质体的配方与工艺既可使脂质体达到高的包封率，又有稳定的载药量。包封率在80％～95％，粒径为60nm～400nm。在优选处方的范围内本发明的藤黄酸脂质体包封率大于90％，粒径小于200nm。本发明的脂质体中药物持续释放，延长药物的在血液中的循环时间。本发明临床适用的藤黄酸脂质体注射用冻干粉针，既能显著提高贮存稳定性，又能使藤黄酸脂质体冻干粉在加入注射用水重新分散后，能以任意比例与等渗输液稀释给药，本发明藤黄酸脂质体注射用冻干粉针的生物利用度是普通注射液的3倍，从而可以减少剂量，降低毒性和血管刺激性。

具体实施方式

实施例1

将50mg藤黄酸、1.5g卵磷脂(纯度大于94％磷脂酰胆碱)、0.3g聚乙二醇化磷脂，200mg胆固醇溶于乙醚中，再将pH6.8的等渗磷酸盐缓冲液10ml加入乙醚溶液中，二者进行乳化，然后减压除去有机溶媒，探针式超声0.5min即可。将1.5g蔗糖溶解在脂质体中，无菌过滤后(膜滤器孔径0.2μm)，将最终分散物分装入西林瓶中，然后冷冻干燥。

将冷冻干燥的脂质体在40℃贮存3个月后，藤黄酸含量为97.5％，且加入2ml注射用水重组得到的脂质体包封率为90％，粒径为115nm，以5％葡萄糖或0.9％氯化钠注射液稀释后10小时无沉淀析出。

实施例2

在20mlpH6.8等渗磷酸盐缓冲液中通入氮气10分钟。通氮后将100mg藤黄酸、900mg大豆磷脂(纯度>94％磷脂酰胆碱)，100mg聚乙二醇化磷脂。使用高速搅拌机在65℃将混合物分散达10分钟。在补充蒸发水分后，将预分散物转移至高压匀化器(Avestin均质仪)中。在5000psi和65℃下匀化3次，将脂质体冷却至室温。将1.0g海藻糖溶于脂质体中，无菌过滤后(膜滤器孔径0.2μm)，将最终分散物分装于西林瓶中，然后冷冻干燥。

将冷冻干燥的脂质体在40℃贮存3个月后，藤黄酸含量为96.8％，且加入2ml注射用水重组得到的脂质体包封率为82％，粒径为220nm，以5％葡萄糖或0.9％氯化钠注射液稀释后10小时无沉淀析出。

实施例3

称取藤黄酸10mg、500mg大豆磷脂(纯度>94％磷脂酰胆碱)和100mg胆固醇溶解于氯仿/甲醇(1∶1)混合溶剂中，将该溶液置磨口圆底烧瓶中，于25-30℃恒温水浴上旋转蒸发仪在100rpm并减压的条件下蒸去有机溶剂，使磷脂以及药物在烧瓶底部形成一均匀类脂膜，置于真空干燥中，室温条件下放置4小时备用。另将2mlpH7.4等渗磷酸盐缓冲液加入到上述圆底烧瓶中，在35℃下用旋转蒸发仪转动洗膜，直至类脂薄膜水合变成淡黄色脂质体悬液，高压匀化，减小粒径(5000psi，3次)，即得。将300mg甘露醇溶解在脂质体中，无菌过滤后(膜滤器孔径0.2μm)，将最终分散物分装于西林瓶中，然后冷冻干燥。

将冷冻干燥的脂质体在40℃贮存3个月后，藤黄酸含量为96.5％，且加入2ml注射用水重组得到的脂质体包封率为93％，粒径为120nm，以5％葡萄糖或0.9％氯化钠注射液稀释后10小时无沉淀析出。

实施例4

称取1.2g合成磷脂(DMPC，纯度>93％磷脂酰胆碱)、150mg胆固醇溶于50ml乙醚中，再将5mlpH8.0等渗磷酸盐缓冲液加至磷脂乙醚溶液中，二者混合进行乳化，然后减压除去有机溶媒，探针式超声0.5min，备用，作为空白脂质体。另将30mg藤黄酸和25mg精氨酸加到5mlpH8.0等渗磷酸盐缓冲液中溶解，再与空白脂质体混合，用0.1MHCL调节pH至7.0，之后在37℃水浴中平衡30min(15-60min)。脂质体冷却至室温后，将750mg乳糖溶解于脂质体中，无菌过滤后(膜滤器孔径0.2μm)，将最终分散物分装于西林瓶中，然后冷冻干燥。

将冷冻干燥的脂质体在40℃贮存3个月后，藤黄酸含量为97.2％，且加入2ml注射用水重组得到的脂质体包封率为91％，粒径为100nm，以5％葡萄糖或0.9％氯化钠注射液稀释后10小时无沉淀析出。

实施例5

称取藤黄酸10mg、300mg大豆磷脂(纯度>94％磷脂酰胆碱)和70mg胆固醇溶解于氯仿/甲醇(1∶1)混合溶剂中，加入300mg蔗糖/甘露糖(2∶1)粉末，将该悬浮液置磨口圆底烧瓶中，于25-30℃恒温水浴上旋转蒸发仪在100rpm并减压的条件下蒸去有机溶剂，使磷脂附着在甘露醇粉末上并包含药物在烧瓶底部形成薄膜，置于真空干燥中，室温条件下放置6小时备用。另将2mlpH7.4等渗磷酸盐缓冲液加入到上述圆底烧瓶中，在35℃下用旋转蒸发仪转动洗膜，直至薄膜水合变成淡黄色脂质体悬液，高压匀化，减小粒径(5000psi，3次)，即得，无菌过滤后(膜滤器孔径0.2μm)，将最终分散物分装于西林瓶中，然后冷冻干燥。

将冷冻干燥的脂质体在40℃贮存3个月后，藤黄酸含量为97.5％，且加入2ml注射用水重组得到的脂质体包封率为93％，粒径为110nm，以5％葡萄糖或0.9％氯化钠注射液稀释后10小时无沉淀析出。

Claims (9)

1、一种藤黄酸脂质体，其特征是含藤黄酸、磷脂、胆固醇，三者的重量比为1：5～40：2～8。

2、权利要求1的藤黄酸脂质体，其特征是藤黄酸、磷脂、胆固醇三者的重量比为1：10～30：2～8。

3、权利要求1的藤黄酸脂质体，其中磷脂选自大豆磷脂、卵磷脂、合成磷脂或聚乙二醇化磷脂中的一种或几种。

4、权利要求1的藤黄酸脂质体，其中还含冻干保护剂。

5、权利要求4的藤黄酸脂质体，其中冻干保护剂选自葡萄糖、甘露醇、蔗糖中的一种或几种。

6、权利要求4的藤黄酸脂质体，其中冻干保护剂与磷脂重量比为0.2：1～4：1。

7、权利要求4的藤黄酸脂质体，其中冻干保护剂与磷脂重量比为0.5：1～1：1。

8、权利要求1至7中任一项的藤黄酸脂质体的制备方法，包括：将藤黄酸、磷脂、胆固醇溶于有机溶剂中，减压蒸去有机溶剂，加入pH6—8的磷酸盐缓冲液形成混悬液，匀化，即得，所述有机溶剂选自氯仿、甲醇、乙醇、乙醚、丙酮、石油醚中的一种或几种。

9、权利要求8的制备方法，还包括将冻干保护剂溶解在制得的藤黄酸脂质体中，冻干，即得藤黄酸脂质体冻干粉针。