CN101879137B - 一种隐形脂质体的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种隐形脂质体的制备方法,本方法采用二次干冻法,将脂材、新藤黄酸或/和别藤黄酸等脂溶性药物、其他脂溶性辅料按一定比例溶于适量的溶剂中,超声使溶解,得到均一的单相溶液,预冻成固体后,放入冻干机冻干,得第一次冻干粉,然后向第一次干冻产物中加入适量蒸馏水、新藤黄酸或/和别藤黄酸等脂溶性药物的水溶性盐、冻干保护剂,搅拌均匀后进行第二次干冻,得二次冻干粉,再将二次冻干粉水和均匀即得脂质体混悬液。采用本发明制得的新藤黄酸隐形脂质体冻干产品外观均匀、再分散性良好、含水量低、包封率大于80%。
Description
技术领域
本发明涉及一种脂质体的制备方法,具体是一种新藤黄酸、别藤黄酸等脂溶性药物及其水溶性盐的隐形脂质体的制备方法。
背景技术
脂质体(liposome)的主要成分是磷脂,由于磷脂分子具有一个亲水的极性头部(head group)和疏水的非极性尾部(tail group),因此,脂质体作为药物或其它物质的载体,既可以包裹亲脂性物质,又可以包裹水溶性成分和两性物质。又因磷脂是生物膜的组成成分,生物体内存在有分解酶,很容易代谢,因而脂质体又具有生物降解性和生物相容性。最初脂质体是作为生物膜模型用于生物学基础研究,1976年Rahaman等人首先将脂质体作为药物载体应用。脂质体按形态分类包括小单室、大单室、多室脂质体,直径在20nm-5000nm之间。脂质体是磷脂双分子层结构,层与层之间被水相隔开,双分子层厚度约4nm。脂质体载药系统进入体内主要被网状内皮系统(RES)吞噬而激活机体的自身免疫功能,并改变被包封药物的体内分布、使药物主要在肝、脾、肺和骨髓等组织和器官中蓄积,从而提高药物治疗指数,减少用药剂量,降低毒性,尤其治疗癌症具有明显的优势。也正是由于脂质体膜结构类似生物膜,脂质体易被体内的单核巨噬细胞系统(MPS)和网状内皮系统(RES)清除。有研究发现,在磷脂分子上联接含多羟基团的物质,使脂质体表面暴露出一些亲水性的多糖或多羟基基团等方式,减少与血浆中调理成分的结合,可以增加其在血液中的稳定性。依据该原理制成的脂质体能更持久地延长药物在血流中的时间,不易被MPS和RES清除,所以这种脂质体被称为隐形脂质体(Stealth liposome),又叫空间稳定脂质体(sterically stabilized liposome)或长循环脂质体(Long-circulation liposome)。一般认为,立体位阻和提高膜表面的亲水性两个因素同时存在,共同作用,使隐形脂质体成为一种长效脂质体。
发明内容
本发明提供了一种制备新藤黄酸、别藤黄酸等脂溶性药物及其水溶性盐的的隐形脂质体的制备方法,其技术方案为:
一种新藤黄酸或/和别藤黄酸等脂溶性药物及其水溶性盐的隐形脂质体的制备方法,其特征在于包括如下制备步骤:
(1)将脂材、新藤黄酸或/和别藤黄酸等脂溶性药物、其他脂溶性辅料按一定比例溶于适量的溶剂中,超声使溶解,得到均一的单相溶液,预冻成固体后,放入冻干机冻干,得第一次冻干粉A;
(2)向第一次冻干粉A中加入适量的蒸馏水、新藤黄酸或/和别藤黄酸等脂溶性药物的水溶性盐、冻干保护剂,超声使溶解,得混悬液,预冻成固体后,放入冻干机冻干,得二次冻干粉B;
(3)将二次冻干粉B水合均匀即得脂质体混悬液。
所述的隐形脂质体的制备方法,其特征在于:步骤(2)所述的新藤黄酸或/和别藤黄酸等脂溶性药物的水溶性盐是指其水溶性钠盐、钾盐、L-精氨酸盐、赖氨酸盐、谷氨酸盐、葡甲胺盐中的一种或几种,但不限于此。
所述的隐形脂质体的制备方法,其特征在于:所述的脂材、新藤黄酸或/和别藤黄酸等脂溶性药物、其他脂溶性辅料的重量比例可以为1-20∶1∶1-20、1-30∶2∶1-15或1-50∶3∶1-40;所述的新藤黄酸或/和别藤黄酸等脂溶性药物的水溶性盐与第一次冻干中的脂材、其他脂溶性辅料的重量比例为1∶1-25∶1-20、2∶1-30∶1-40或3∶1-40∶1-30;所述蒸馏水与冻干保护剂的比例为1-20∶1、1-30∶2或1-60∶3;
所述的隐形脂质体的制备方法,其特征在于:步骤(1)所述的脂材选自蛋黄卵磷脂、氢化蛋黄卵磷脂、大豆磷脂、氢化大豆磷脂、二月桂酰卵磷脂、二肉豆蔻酰卵磷脂、二棕榈酰卵磷脂、二硬脂酰卵磷脂、1-肉豆蔻酰-2-棕榈酰卵磷脂、1-棕榈酰-2-肉豆蔻酰卵磷脂、1-棕榈酰-2-硬脂酰卵磷脂、1-硬脂酰-2-棕榈酰卵磷脂、二油酰基卵磷脂、二肉豆蔻酰磷脂酸、二棕榈酰磷脂酸、二肉豆蔻酰磷脂酞乙醇胺、二棕榈酰磷脂酞乙醇胺、脑磷脂酰丝氨酸、脑神经鞘磷脂、二棕搁酞神经鞘磷脂、二硬脂酰神经鞘磷脂、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺、胆固醇中的一种或几种,但不限于此;所述的其他脂溶性辅料选自聚乙烯醇、聚乙二醇、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇-磷脂酰甘油、聚乙二醇-磷脂酰乙醇胺、聚乙二醇-二硬酯酰磷脂酰乙醇胺、聚乙二醇-聚己内酯、聚乙二醇-聚乙交酯丙交酯、聚乙二醇-聚乳酸、聚乙二醇-聚十六烷基氰基丙烯酸酯、伯洛沙姆、聚氧乙烯脂肪酸酯类、聚氧乙烯脂肪酸醚、聚氧乙烯甲基蓖麻油醚、神经节苷酯、聚丙烯酰胺、壳聚糖中的一种或几种,但不限于此;所述的溶剂选自甲醇、乙醇、碳酸二甲酯、丙酮、异丙醇、叔丁醇、三氯叔丁醇、乙酸乙酯、丙二醇、二甲基亚砜、二甲基砜、四氢呋喃、石油醚中的一种或几种,但不限于此;步骤(2)所述的冻干保护剂选自乳糖、葡萄糖、蔗糖、山梨醇、甘露醇、木糖醇、海藻糖、葡聚糖、聚乙二醇、聚乙烯吡咯烷酮中的一种或几种,但不限于此。
所述的隐形脂质体的制备方法,其特征在于:步骤(1)所述脂材、新藤黄酸或/和别藤黄酸等脂溶性药物、其他脂溶性辅料、溶剂、步骤(2)所述的新藤黄酸或/和别藤黄酸等脂溶性药物的水溶性盐、冻干保护剂的优选组合如下,但不限于此;
(1)步骤(1)所述脂材为蛋黄卵磷脂和胆固醇、新藤黄酸或/和别藤黄酸等脂溶性药物为新藤黄酸、其他脂溶性辅料为聚乙烯醇6000、溶剂为氯仿、步骤(2)所述的新藤黄酸或/和别藤黄酸等脂溶性药物的水溶性盐为新藤黄酸的钠盐、冻干保护剂为乳糖;
(2)步骤(1)所述脂材为氢化蛋黄卵磷脂和胆固醇、新藤黄酸或/和别藤黄酸等脂溶性药物为新藤黄酸、其他脂溶性辅料为聚乙二醇2000-磷脂酰甘油、溶剂为异乙醇、步骤(2)所述的新藤黄酸或/和别藤黄酸等脂溶性药物的水溶性盐为新藤黄酸的钾盐、冻干保护剂为蔗糖;
(3)步骤(1)所述脂材为蛋黄卵磷脂和胆固醇、新藤黄酸或/和别藤黄酸等脂溶性药物为别藤黄酸、其他脂溶性辅料为聚乙二醇2000-聚十六烷基氰基丙烯酸酯、溶剂为二甲基亚砜、步骤(2)所述的新藤黄酸或/和别藤黄酸等脂溶性药物的水溶性盐为别藤黄酸的赖氨酸盐、冻干保护剂为葡萄糖。
所述的隐形脂质体的制备方法,其特征在于:所述的优选组合(1)中,蛋黄卵磷脂8-12mg、胆固醇3-7mg、新藤黄酸3-7mg、聚乙烯醇60008-12mg,氯仿5-15ml,蒸馏水3-7ml、乳糖30-80mg;
所述的优选组合(2)中,氢化蛋黄卵磷脂8-12mg、胆固醇1-5mg、聚乙二醇2000-磷脂酰甘油3-8mg,乙醇15-25ml,蒸馏水3-10ml、新藤黄酸的钠盐3-8mg、蔗糖80-120mg;
所述的优选组合(3)中,蛋黄卵磷脂20-40mg、胆固醇8-15mg、新藤黄酸3-8mg、聚乙二醇2000-聚十六烷基氰基丙烯酸酯8-15mg,二甲基亚砜10-20ml,蒸馏水5-15ml、新藤黄酸的钾盐3-8mg、甘露醇80-130mg。
本发明处方工艺稳定可靠;制备过程温度较低,适合热敏性材料和对热不稳定的药物;操作简便,易于放大,对于脂溶性和水溶性药物均适用;采用本发明制得的新藤黄酸隐形脂质体冻干产品外观均匀、再分散性良好、含水量低、包封率大于80%。
图1为新藤黄酸紫外扫描图谱。
图2为空白脂质体紫外扫描图谱。
图3为体外释放曲线。
具体实施方式
实施例1:
(1)将脂材、脂溶性药物新藤黄酸、其他脂溶性辅料按重量比例为5-10g∶0.6-0.8g∶1-3g;溶于5-10ml的溶剂中,超声使溶解,得到均一的单相溶液,预冻成固体后,放入冻干机冻干,得第一次冻干粉A;
(2)向第一次冻干粉A中加入7-9ml蒸馏水、0.5-1g新藤黄酸水溶性盐、0.5-2g冻干保护剂,超声使溶解,得混悬液,预冻成固体后,放入冻干机冻干,得二次冻干粉B;
(3)将二次冻干粉B水合均匀即得脂质体混悬液。
实施例2:
(1)将脂材、脂溶性药物别藤黄酸、其他脂溶性辅料按重量比例为4-12g∶0.4-0.8g∶2-4g;溶于5-10ml的溶剂中,超声使溶解,得到均一的单相溶液,预冻成固体后,放入冻干机冻干,得第一次冻干粉A;
(2)向第一次冻干粉A中加入6-9ml蒸馏水、0.5-2g别藤黄酸水溶性盐、0.5-2.5g冻干保护剂,超声使溶解,得混悬液,预冻成固体后,放入冻干机冻干,得二次冻干粉B;
(3)将二次冻干粉B水合均匀即得脂质体混悬液。
实施例3:
取蛋黄卵磷脂10mg、胆固醇5mg、新藤黄酸5mg、聚乙烯醇600010mg,加入10ml氯仿,超声使溶解,得到均一的单相溶液,预冻成固体后,放入冻干机冻干,得冻干粉A。向冻干粉A中加入5ml蒸馏水、乳糖50mg,超声得混悬液,预冻成固体后,放入冻干机冻干,得冻干粉B。冻干粉B水合均匀即得新藤黄酸隐形脂质体混悬液。
实施例4
取氢化蛋黄卵磷脂10mg、胆固醇1mg、聚乙二醇2000-磷脂酰甘油5mg,加入20ml乙醇,超声使溶解,得到均一的单相溶液,预冻成固体后,放入冻干机冻干,得冻干粉A。向冻干粉A中加入5ml蒸馏水、新藤黄酸的钠盐5mg、蔗糖100mg,超声得混悬液,预冻成固体后,放入冻干机冻干,得冻干粉B。冻干粉B水合均匀即得新藤黄酸水溶性盐隐形脂质体混悬液。
实施例5
取蛋黄卵磷脂30mg、胆固醇10mg、新藤黄酸5mg、聚乙二醇2000-聚十六烷基氰基丙烯酸酯12mg,加入15ml二甲基亚砜,超声使溶解,得到均一的单相溶液,预冻成固体后,放入冻干机冻干,得冻干粉A。向冻干粉A中加入10ml蒸馏水、新藤黄酸的钾盐5mg、甘露醇100ml,超声得混悬液,预冻成固体后,放入冻干机冻干,得冻干粉B。冻干粉B水合均匀即得新藤黄酸及其水溶性盐隐形脂质体混悬液。
以下试验考察了实施例3制备的新藤黄酸隐形脂质体体外释放度:
1体外释放度考察方法
本试验以新藤黄酸原料药和新藤黄酸脂质体为对照,按二次冻干法制备新藤黄酸隐形脂质体,考察三者的体外释放行为。采用透析法,将截留相对分子质量为8000-14000的透析袋预处理,先用50%乙醇煮沸1h,再依次用50%乙醇、0.01mol/L碳酸氢钠溶液和0.001mol/L的EDTA溶液洗涤,最后用蒸馏水冲洗3次。精密移取各待测液3ml(含新藤黄酸15mg),分别装于透析袋内,用透析袋夹将其两端夹紧,放于装有搅拌桨的溶出杯中。释放条件如下:释放介质为400ml pH7.4的磷酸盐缓冲液(含1%十二烷基硫酸钠),温度37℃±0.5℃,转速100r·min-1,按照2005年版《中国药典》附录中规定的释放度测定法测定释放度,分别在1h、2h、4h、8h、12h、24h、36h、48h、60h、72h、84h、96h、108h、120h、132h、144h、156h、168h时取样3ml,经0.45μm滤膜过滤后,即得释放液,同时向溶出杯中补充等温的相同体积空白释放介质,所得释放液拟采用紫外分光光度法测定释放度。
2体外释放度含量测定方法
(1)检测波长的选择
取适量新藤黄酸对照品,用释放介质溶解配成溶液,以释放介质为空白,绘制紫外吸收光谱。新藤黄酸在359nm处有较强吸收波长,故选择359nm为新藤黄酸的检测波长。扫描图谱见图1。
(2)供试品溶液制备
取新藤黄酸隐形脂质体冻干粉适量,精密称定,加入适量溶出介质,超声溶解20分钟,过滤,定容即得。
(3)对照品溶液制备
取新藤黄酸对照品适量,精密称定,置10ml容量瓶中,加入溶出介质溶解并稀释至刻度,摇匀,即得。
(4)线性关系
分别精密吸取新藤黄酸对照品溶液0.1、0.2、0.4、0.6、0.6ml置10ml量瓶中,加溶出介质至刻度。以溶出介质为空白,在359nm波长处测定吸收度A,对吸收度A与浓度C进行线性拟合,得回归方程:
A=0.0187C-0.0078(r=0.9991)
结果表明:新藤黄酸的浓度在6.01-48.10μg/ml之间有良好的线性关系。
(5)加样回收率
精密取新藤黄酸供试液适量,分别精密加入供试液新藤黄酸含量80%,100%,120%的新藤黄酸对照品,按“供试品溶液制备”项下方法制备,测定新藤黄酸的含量,与加入量比较,计算相应的回收率(n=6),结果见表1。
表1加样回收率实验结果(n=6)
(6)精密度考察
取新藤黄酸对照液适量,制成低、中、高三种浓度,分别重复测定吸收度5次,考察方法的精密度,结果RSD分别为0.2320%、0.0124%、0.1387%。结果表明本品精密度较好。
(7)重复性
取同一批样品,按含量测定方法平行测定6次,计算样品中新藤黄酸含量,结果RSD为1.2931%。结果表明,本法的重复性较好。
(8)辅料干扰实验
取不含新藤黄酸的空白样品,按“供试品溶液制备”项下方法制备,以释放介质为空白,绘制紫外吸收光谱。结果表明,在359nm处辅料不干扰本法的测定。扫描图谱见图2。
3体外释放曲线
以上确定的释放度含量测定方法,可直接测定释放液中新藤黄酸浓度,以新藤黄酸原料药和新藤黄酸脂质体为对照,考察二次冻干法制备的新藤黄酸隐形脂质体,对新藤黄酸体外释放行为的影响,绘制体外释放曲线如图3。
由体外释放结果可知,与新藤黄酸原料药和新藤黄酸脂质体相比,新藤黄酸隐形脂质体24h累积释放率为14%,而原料药和新藤黄酸脂质体24h累积释放率分别为68%和58%;新藤黄酸隐形脂质体168h累积释放率为75%,而原料药和新藤黄酸脂质体168h累积释放率分别为99%和96%。说明新藤黄酸隐形脂质体中新藤黄酸释放缓慢,具有明显的缓释效应。
4释药模型的拟合
分别用零级方程、一级方程和Higuchi方程对原料药、新藤黄酸脂质体和二次冻干法制备的藤黄酸隐形脂质体的体外释药数据(Q)进行拟合,所得回归方程见表2。
表2体外释放方程拟合结果
体外释药方程拟合结果表明,原料药拟合方程中一级方程的相关系数(r)较高,新藤黄酸脂质体拟合方程中Higuchi方程的相关系数(r)较高。新藤黄酸隐形脂质体体外释药规律更符合一级方程;而且,新藤黄酸隐形脂质体的缓释方程相关系数(r)高于原料药和新藤黄酸脂质体,说明前者更符合缓释制剂要求。
Claims (5)
1.一种新藤黄酸或/和别藤黄酸脂溶性药物及其水溶性盐的隐形脂质体的制备方法,其特征在于包括如下制备步骤:
(1)将脂材、新藤黄酸或/和别藤黄酸脂溶性药物、其他脂溶性辅料按一定比例溶于适量的溶剂中,超声使溶解,得到均一的单相溶液,预冻成固体后,放入冻干机冻干,得第一次冻干粉A,所述的脂材选自蛋黄卵磷脂、氢化蛋黄卵磷脂、胆固醇中的一种或几种;所述的其他脂溶性辅料选自聚乙烯醇、聚乙二醇2000-磷脂酰甘油和聚乙二醇2000-聚十六烷基氰基丙烯酸酯中的一种或几种;
(2)向第一次冻干粉A中加入适量的蒸馏水、新藤黄酸或/和别藤黄酸脂溶性药物的水溶性盐、冻干保护剂,超声使溶解,得混悬液,预冻成固体后,放入冻干机冻干,得二次冻干粉B;
(3)将二次冻干粉B水合均匀即得脂质体混悬液;
所述的脂材、新藤黄酸或/和别藤黄酸脂溶性药物、其他脂溶性辅料的重量比例为1-20∶1∶1-20、1-30∶2∶1-15或1-50∶3∶1-40;所述的新藤黄酸或/和别藤黄酸脂溶性药物的水溶性盐与第一次冻干中的脂材、其他脂溶性辅料的重量比例为1∶1-25∶1-20、2∶1-30∶1-40或3∶1-40∶1-30;所述蒸馏水与冻干保护剂的比例为1-50∶1、50-100∶1或100-150∶1。
2.根据权利要求1所述的隐形脂质体的制备方法,其特征在于:步骤(2)所述的新藤黄酸或/和别藤黄酸脂溶性药物的水溶性盐是指其水溶性钠盐、钾盐、L-精氨酸盐、赖氨酸盐、谷氨酸盐、葡甲胺盐中的一种或几种。
3.根据权利要求1所述的隐形脂质体的制备方法,其特征在于:步骤(1)所述的溶剂选自甲醇、乙醇、碳酸二甲酯、丙酮、异丙醇、叔丁醇、三氯叔丁醇、乙酸乙酯、丙二醇、二甲基亚砜、二甲基砜、四氢呋喃、石油醚中的一种或几种;步骤(2)所述的冻干保护剂选自乳糖、葡萄糖、蔗糖、山梨醇、甘露醇、木糖醇、海藻糖、葡聚糖、聚乙二醇、聚乙烯吡咯烷酮中的一种或几种。
4.根据权利要求1、2或3所述的隐形脂质体的制备方法,其特征在于:步骤(1)所述脂材、新藤黄酸或/和别藤黄酸脂溶性药物、其他脂溶性辅料、溶剂,步骤(2)所述的新藤黄酸或/和别藤黄酸脂溶性药物的水溶性盐、冻干保护剂的优选组合如下,
(1)步骤(1)所述脂材为蛋黄卵磷脂和胆固醇、新藤黄酸或/和别藤黄酸脂溶性药物为新藤黄酸、其他脂溶性辅料为聚乙烯醇6000、溶剂为氯仿、步骤(2)所述的冻干保护剂为乳糖;
(2)步骤(1)所述脂材为氢化蛋黄卵磷脂和胆固醇、其他脂溶性辅料为聚乙二醇2000-磷脂酰甘油、溶剂为乙醇、步骤(2)所述的新藤黄酸或/和别藤黄酸脂溶性药物的水溶性盐为新藤黄酸的钠盐、冻干保护剂为蔗糖;
(3)步骤(1)所述脂材为蛋黄卵磷脂和胆固醇、新藤黄酸或/和别藤黄酸脂溶性药物为别藤黄酸、其他脂溶性辅料为聚乙二醇2000-聚十六烷基氰基丙烯酸酯、溶剂为二甲基亚砜、步骤(2)所述的新藤黄酸或/和别藤黄酸脂溶性药物的水溶性盐为别藤黄酸的赖氨酸盐、冻干保护剂为葡萄糖。
5.根据权利要求4所述的隐形脂质体的制备方法,其特征在于:所述的优选组合(1)中,蛋黄卵磷脂8-12mg、胆固醇3-7mg、新藤黄酸3-7mg、聚乙烯醇6000 8-12mg,氯仿5-15ml,蒸馏水3-7ml、乳糖450-550mg;
所述的优选组合(2)中,氢化蛋黄卵磷脂8-12mg、胆固醇1-5mg、聚乙二醇2000-磷脂酰甘油3-8mg,乙醇15-25ml,蒸馏水3-10ml、新藤黄酸的钠盐3-8mg、蔗糖80-120mg;
所述的优选组合(3)中,蛋黄卵磷脂20-40mg、胆固醇8-15mg、别藤黄酸3-8mg、聚乙二醇2000-聚十六烷基氰基丙烯酸酯8-15mg,二甲基亚砜10-20ml,蒸馏水5-15ml、别藤黄酸的赖氨酸盐3-8mg、葡萄糖80-130mg。
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- 2010-06-11 CN CN2010102032526A patent/CN101879137B/zh not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN101028250A (zh) * | 2007-04-03 | 2007-09-05 | 中国药科大学 | 藤黄酸脂质体及其冻干粉针剂与制备方法 |
Non-Patent Citations (1)
Title |
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方玲等.新藤黄酸脂质体冻干粉的制备及其包封率测定.《安徽医药》.2009,第13卷(第6期),第596-598页. * |
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Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
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CN101879137A (zh) | 2010-11-10 |
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