CN102727793A - 一种益坤宁药物组合物固体脂质纳米粒制剂 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种益坤宁固体脂质纳米粒制剂及其制法。通过选用特定重量配比的二棕榈酰磷脂酰乙醇胺、泊洛沙姆188和吐温80，可以将益坤宁浸膏制成品质优异的益坤宁固体脂质纳米粒，再将脂质纳米粒以一般的制剂方法制成固体制剂。与现有制剂相比，本发明的制剂大大提高了制剂的稳定性和生物利用度，提高了制剂产品质量，减少了毒副作用，疗效更显著。

Description

一种益坤宁药物组合物固体脂质纳米粒制剂

技术领域

本发明涉及一种固体脂质纳米粒及其制剂和制法，具体涉及一种益坤宁固体脂质纳米粒及其制剂和制法，属于医药技术领域。

背景技术

中药益坤宁是一种中药复方新制剂，由白芍、熟地黄、当归、川芎、益母草、香附、延胡索、三棱、桂皮、橙皮等中药组成,其中白芍为君药，方中白芍的主要成分为芍药苷。具有滋肾养阴,补气养血、调经止痛等功效。适用于于妇女血虚气滞，月经不调，经前、经后腹痛腰痛，妇女更年期综合症等。

中药益坤宁方是在《金匮要略》桂枝加龙骨牡蛎汤的基础上加减而成。方中白芍养血柔肝，缓中止痛，敛阴收汗；熟地黄补血调经，滋阴补肾；当归补血活血，调经止痛，润肠通便；川芎活血祛瘀，行气开郁，祛风止痛；益母草活血调经，利水消肿，清热解毒；香附理气解郁，调经止痛；延胡索活血散瘀，行气止痛；三棱破血，行气，消积止痛；桂皮祛寒止痛；散瘀消肿；橙皮理气，化痰，健脾，导滞。现代药理研究表明，白芍扩张冠状动脉，降低血压，护肝，解痉，镇痛，抗菌；熟地黄延缓衰老，抗阴虚，补血，止血；当归调节子宫平滑肌收缩，解除痉挛；川芎镇静，抑制子宫收缩；益母草抗凝血，抗真菌；香附抑制子宫收缩，缓弛子宫张力，镇痛，抗菌；延胡索镇痛，镇静，松弛肌肉；三棱抗凝血；桂皮促进局部组织血运的改善；橙皮抑制胃、肠及子宫的运动。经过前期临床观察发现，益坤宁可明显降低围绝经期综合症的临床症状，治疗月经不调，缓解经前、经后腹痛腰痛，使用安全可靠，是临床上疗效确切的方剂。

目前上市的此类中药制剂有酊剂、片剂和颗粒剂。专利文献CN1548066A公开了一种益坤宁固体制剂及其制备方法，在制备过程中采用喷雾干燥及干式制粒的方法，有利于有效成分完全保留，并便于连续性GMP条件下大型生产制备益坤宁片剂和胶囊剂。

熊汝菊，益坤宁颗粒的药学研究，《南京中医药大学硕士学位论文》，于20080501日公开了以芍药苷、黄芪甲苷含量、醇提浸出物得率为指标，采用正交试验对白芍、黄芪等四味药的醇提工艺条件进行了正交优选以及最佳工艺的验证；以淫羊藿苷、多糖含量、水提浸出物得率为指标，对淫羊藿、枸杞子、熟地黄等五味药的水提工艺条件进行了正交优选以及最佳工艺的验证，同时对淫羊藿等五味药的水提醇沉工艺条件进行了考察。在浓缩与干燥工艺的优选中，以芍药苷、淫羊藿苷含量为指标，确定浓缩、干燥的条件。在制剂成型工艺研究中，确定了辅料的种类和用量。为了减少颗粒剂的服用剂量及便于颗粒剂成型，同时结合现有的生产条件，工艺过程中拟将处方药材提取液经浓缩、干燥成浸膏粉，供制粒用。

赵颖等，益坤宁颗粒的质量控制，《中国医院药学杂志》，2009年14期:1234-1236公开了采用薄层色谱法对处方中的白芍、黄芪进行定性鉴别，采用高效液相色谱法对样品中的芍药苷进行含量测定，可作为该颗粒的质量控制指标。

卫生部标准编号：WS3-B-2604-97，书页号：Z13-176，公开益坤宁酊的制备方法，将当归90g、香附60g、桂皮15g、熟地黄60g、白芍60g、川芎60g、益母草60g、延胡索30g、三棱15g、橙皮15g粉碎成粗粉，照流浸膏剂与浸膏剂项下的渗漉法（附录10），用45％乙醇作溶剂，浸渍48小时后，以每分钟1～3ml的速度缓缓渗漉，收集初漉液约750ml，继续渗漉至漉液接近无色，浓缩至稠膏状，加适量初漉液混匀,加适量防腐剂、柠檬香精及蔗糖100g，搅匀，慢慢加入初漉液，随加随搅拌，加水使成1000ml，混匀，用浓氨试液调节pH值至9，滤过,即得。

上述剂型虽然对辅料和制备方法进行了筛选，具有一定得优点；但依然存在各种不足，例如不利于制粒成型，药物的稳定性差，疗效不确切，不利于长期存放，生物利用度低，影响了临床应用。

固体脂质纳米粒(solid lipid nanoparticle，SLN)是近年来研究的一种新型纳米级给药系统，以天然或合成的类脂如磷脂、三酰甘油等为载体，将药物包裹于类脂核中制成粒径约10-1000nm的胶体给药体系。由于其纳米级的特性，因此SLN不同于普通的混悬性注射剂，且兼具下述脂质体、乳剂以及高分子聚合物纳米粒的优点：(1)SLN使用的脂质毒性低，生物相容性高，在体内可降解，不会产生蓄积；(2)固态或半固态的类脂核使SLN具有控释、避免药物降解及泄漏、和良好的靶向性等优点；另外，SLN可采用高压均质法或微乳法进行工业化生产；SLN的水分散系统可以经高压灭菌或辐射灭菌，具有长期的物理化学稳定性，也可通过冻干或喷雾干燥制成固体制剂。

如果能将益坤宁制成固体脂质纳米粒，则有望克服现有的益坤宁制剂存在的一系列问题，彻底改变其制粒方式，提高药物的溶解性和稳定性，延长药物在体内的保留时间，提高生物利用度，降低毒副作用，改进治疗速度和治疗效果。

不过，制备固体脂质纳米粒的挑战在于选择适当的成分和制法。由于固体脂质纳米粒的性质如载药量、药物的溶解度、稳定性、溶出性、控释性、生物利用度和毒副作用等与固体脂质纳米粒的组成直接地密切相关，而固体脂质纳米粒的组成与所要承载的药物性质直接地密切相关，因此，选择什么样的成分形成具有良好品质的益坤宁固体脂质纳米粒是亟待解决的课题。

本发明人通过大量的研究和实验发现，将中药原材料粉碎成细粉进行渗漉提取，可以节省乙醇用量和提取时间；同时采用特定赋形剂将益坤宁制成固体脂质纳米粒，有效克服了主药稳定性差的问题，同时提高了药物的生物利用度，增加了药物在体内的保留时间。

发明内容

本发明的目的是研制一种益坤宁的稳定的药物组合物新制剂。本发明人经过长期认真的研究，意想不到的发现应用特定重量配比的特定脂质材料、乳化剂和益坤宁浸膏，采用搅拌乳化和高压乳匀相结合的方法，可以制成品质优异的益坤宁固体脂质纳米粒，最后将固体脂质纳米粒以一般的制剂方法制成固体制剂，从而完成了本发明。本发明不仅可以提高制剂的药效和生物利用度，同时大大地提高了制剂中活性成分的稳定性，取到了预料不到的技术效果。

本发明的目的之一是提供一种益坤宁固体脂质纳米粒制剂，主要由白芍、熟地黄、当归、川芎、益母草、香附、延胡索、三棱、桂皮、橙皮等十味中药的浸膏，脂质材料和乳化剂制成。

一般而言，脂质材料可选自甘油脂(单硬脂酸甘油酯、双硬脂酸甘油酯、三硬脂酸甘油酯、三肉豆蔻酸甘油酯、单棕榈酸甘油酯、双棕榈酸甘油酯、三棕榈酸甘油酯、单山嵛酸甘油酯、双山嵛酸甘油酯、三山嵛酸甘油酯、三月桂酸甘油酯、三油酸甘油脂、三辛酸/癸酸甘油酯或其混合物)、脂肪酸(硬脂酸、豆蔻酸、棕榈酸、山嵛酸、辛酸、癸酸或其混合物)、磷脂(磷脂酰胆碱、磷脂酰肌醇、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰甘油、磷脂酸、二月桂酰磷脂酰胆碱、二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱、二棕榈酰磷脂酰胆碱、二硬脂酰磷脂酰胆碱、二硬脂酰磷脂酰甘油、二棕榈酰磷脂酰甘油、二棕榈酰磷脂酰丝氨酸、二棕榈酰磷脂酰乙醇胺、二棕榈酰磷脂酸、二油酰磷脂酰胆碱、二油酰磷脂酰乙醇胺、大豆磷脂、卵磷脂、氢化卵磷脂或其混合物)、类固醇(胆固醇)、蜡脂(鲸蜡醇棕榈酸酯、鲸蜡醇十六酸酯、微晶石蜡或其混合物)、十八醇及其混合物。

所述的乳化剂选自胆酸盐、脱氧胆酸盐、短链醇、泊洛沙姆、聚山梨醇酯、聚氧乙烯脂肪醇醚、聚氧乙烯脂肪酸酯及其混合物。其中胆酸盐选自胆酸钠、甘胆酸钠、牛磺胆酸钠及其混合物；脱氧胆酸盐选自脱氧胆酸钠、脱氧牛磺胆酸钠及其混合物；短链醇选自甘油、丙二醇及其混合物；泊洛沙姆可选自Poloxamer-108、Poloxamer-188及其混合物；聚山梨醇酯可选吐温-80；聚氧乙烯脂肪醇醚可选自Brij78、Brij35、Brij30及其混合物；聚氧乙烯脂肪酸酯优选Myrj53、Myrj59及其混合物。

本发明人经过锐意研究发现，通过选用特定重量配比的二棕榈酰磷脂酰乙醇胺、泊洛沙姆188和吐温80，可以将益坤宁浸膏制成品质优异的益坤宁固体脂质纳米粒，再将固体脂质纳米粒以一般的制剂方法制成固体制剂，从而完成了本发明。本发明所述的固体脂质纳米粒的粒径小于1000nm，优选粒径小于500nm，更优选粒径小于200nm，包封率大于85％。

在本发明的益坤宁固体脂质纳米粒中，相对于一份益坤宁浸膏（一份益坤宁浸膏体积为1000ml，重量为1080g）而言，二棕榈酰磷脂酰乙醇胺的用量为40-160g。如果二棕榈酰磷脂酰乙醇胺的用量低于40g，会有大量游离的药物活性成分未被包封，脂质纳米粒的载药量低，稳定性也会下降；反之，如果二棕榈酰磷脂酰乙醇胺的用量高于160g，则药物活性成分的包封率下降。

在本发明的益坤宁固体脂质纳米粒中，泊洛沙姆188和吐温80作为亲水性表面活性剂和乳化剂用于改善固体纳米粒的脂质和药物之间的相容性，以及改善固体纳米粒骨架结晶性能从而改进纳米粒的药物释放性能，此外还能改进纳米粒骨架膜的稳定性。

泊洛沙姆188是一种双亲性分子，与二棕榈酰磷脂酰乙醇胺相结合，阻止其凝聚成晶体结构。泊洛沙姆188和吐温80用于二棕榈酰磷脂酰乙醇胺脂质中时，不仅能改进药物在脂质中的溶解度从而提高载药量，而且能提高脂质在低温和高温下的稳定性，进而提高益坤宁纳米粒的稳定性，此外，泊洛沙姆188和吐温80还有助于控制固体纳米粒的粒径大小和分布，而单独使用泊洛沙姆188或吐温80以及其它的表面活性剂和乳化剂均没有获得品质优良的固体脂质纳米粒。

本发明人经过研究发现，对于要包载的益坤宁而言，泊洛沙姆188和吐温80特别适于作为乳化剂，通过特定配比，可形成固体脂质纳米粒，由此获得的固体脂质纳米粒载药量高，药物释出性优异，且稳定性高。而当使用其他表面活性剂或乳化剂时，难以形成品质优良的固体脂质纳米粒，其载药量、释药性、和稳定性等性质差。

本发明人经过研究发现，相对于一份益坤宁浸膏而言，泊洛沙姆188的用量为40-80g能形成稳定的益坤宁固体脂质纳米粒。当泊洛沙姆188的用量低于40g时，膜稳定性降低，药物活性成分易于渗漏；当泊洛沙姆188的用量高于80g时，益坤宁固体脂质纳米粒膜流动性过高，被包裹在脂质纳米粒内的药物活性成分易于释放。

在本发明的益坤宁固体脂质纳米粒中，使用吐温80还可以进一步改变脂质纳米粒膜的稳定性和包封率。吐温80是一种非离子表面活性剂，当用于二棕榈酰磷脂酰乙醇胺双层膜中时，不仅能进一步提高药物活性成分的溶解性，从而提高包封率；而且能提高该双层膜之间的化学能，从而提高脂质纳米粒在水性液体中的化学稳定性，进而提高益坤宁的稳定性。

本发明人经过研究发现，相对于一份益坤宁浸膏而言，吐温80的用量为20-80g能形成稳定的益坤宁固体脂质纳米粒。当吐温80的用量低于20g时，则会由于乳化剂的用量不足导致对脂质的改善不足，从而使得固体脂质纳米粒的载药量、稳定性、释释药性等重要性质劣化；当吐温80的用量高于80g时，则会由于乳化剂量过高而影响固体脂质纳米粒的稳定性、释药性。

研究表明，脂质纳米粒的稳定性与生物利用度有密切的对应关系。稳定性越高，生物利用度越高。因此，本发明的益坤宁固体脂质纳米粒的稳定性高，是导致药物生物利用度高的因素之一。

此外，本发明人研究发现，在本发明的益坤宁固体脂质纳米粒中，相对于一份益坤宁浸膏（1080g）而言，二棕榈酰磷脂酰乙醇胺的用量为40-160g，泊洛沙姆188为40-80g，吐温80为20-80g时，能形成载药量、稳定性高、释药性优异的益坤宁固体脂质纳米粒，其溶出性优异、控释效果好、生物利用度高。

在本发明的益坤宁固体脂质纳米粒中，不受理论限制，通过适量配比的泊洛沙姆188和吐温80对二棕榈酰磷脂酰乙醇胺膜结构的协同调节促进作用，能形成包封率高、稳定性好的益坤宁固体脂质纳米粒，其缓释效果好，生物利用度高。

本发明人经过长期认真的研究，经过大量的筛选试验，发现采用一般的脂质材料和乳化剂制备的固体脂质纳米粒在高温40℃、相对湿度75%±5%的加速试验下，稳定性和包封率不佳。本发明人出乎意料的发现二棕榈酰磷脂酰乙醇胺、泊洛沙姆188和吐温80三种材料的组合，解决了固体脂质纳米粒的稳定性和包封率不佳的问题，获得了意想不到的制剂效果，从而提供了质量优良的固体脂质纳米粒。

具体地，本发明提供一种益坤宁固体脂质纳米粒，主要是由基于g计的以下成分制成：

一份益坤宁浸膏（一份益坤宁浸膏体积为1000ml，重量为1080g）、二棕榈酰磷脂酰乙醇胺40-160g、泊洛沙姆18840-80g和吐温8020-80g；

其中一份益坤宁浸膏由白芍60g、熟地黄60g、当归90g、川芎60g、益母草60g、香附60g、延胡索30g、三棱15g、桂皮15g、橙皮15g制备而成。

本发明的另一目的是提供一种益坤宁固体脂质纳米粒的制备方法，该方法包括以下步骤：

（a）将二棕榈酰磷脂酰乙醇胺溶于一份益坤宁浸膏（一份益坤宁浸膏体积为1000ml，重量为1080g）中，加入适量乙醇，搅拌使其溶解均匀，形成有机相；

（b）将泊洛沙姆188和吐温80溶解于水中，60℃恒温水浴加热，搅拌使其溶解，形成水相；搅拌中将有机相缓慢加入水相中，温度保持在60℃，继续搅拌30分钟；

（c）减压除掉有机溶剂，得到半透明初乳；将得到的初乳，在1500转/分钟的搅拌条件下，快速加入到适量的冷水中，70MPa高压下匀质乳化8次，得到益坤宁脂质纳米粒混悬液；

（d）将上述混悬液用0.45μm微孔滤膜过滤，冷冻干燥，制得益坤宁固体脂质纳米粒。

优选地步骤（a）中一份益坤宁浸膏的制备方法如下：

将处方量的药材粉碎成细粉（所述细粉符合《中国药典》的规定），按照流浸膏剂与浸膏剂项下的渗漉法（中国药典2010年版一部附录IO），用50％乙醇作溶剂，浸渍24小时后，以每分钟0.5～2ml的速度缓缓渗漉，收集初漉液约750ml，继续渗漉至漉液接近无色，收集后续漉液并浓缩漉液至约250ml，加入初漉液约750ml混匀，制得一份益坤宁浸膏约1000ml，重量约为1080g。即一份益坤宁浸膏为含有：白芍60g、熟地黄60g、当归90g、川芎60g、益母草60g、香附60g、延胡索30g、三棱15g、桂皮15g、橙皮15g的1000ml乙醇溶液。其中以芍药苷为考察指标，发现白芍药材中的渗漉提取率高达90％，远远高于熊汝菊在《南京中医药大学硕士学位论文》中所述的64.43％，芍药苷含量也大于CN1548066A公开的芍药苷含量，为0.92mg/ml，相当于2.3mg/片（粒），表明将药材粉碎成细粉可以提高渗漉提取率并节约提取时间和溶剂，取得了显著的技术效果，并保留了益坤宁传统的提取有效部位。在本发明益坤宁固体脂质纳米粒制备方法的一个优选的实施方案中，在步骤（b）中，加入泊洛沙姆188和吐温80总重量10-20倍的水(W/W)。

通过上述方法，能制备颗粒小且粒径分布均匀的益坤宁固体脂质纳米粒，其包封率高，稳定性高，不易泄漏，生物利用度高。

研究发现，脂质纳米粒的大小是影响其在体内分布和停留时间的主要因素，脂质纳米粒的粒径越小，体内停留时间越长。通过本发明方法制备的益坤宁固体脂质纳米粒颗粒小，粒径大小分布均匀，这是其在体内代谢率低、生物利用度高的因素之一。本发明的目的之一是提供一种益坤宁固体脂质纳米粒的固体制剂，同样具有良好的生物利用度。

本发明所述的益坤宁固体脂质纳米粒的固体制剂，由上述的益坤宁固体脂质纳米粒和药学上可接受的其他赋形剂组成。

本发明上述的益坤宁固体制剂，其中所述的赋形剂没有特别限制，可以为药剂学中常用的固体制剂的药用赋形剂。

各种药用赋形剂的用量可以由本领域技术人员根据各赋形剂在固体制剂中的一般用量进行选择，这在本领域技术人员的能力范围内。

作为具体的实施，相对于一份益坤宁浸膏（一份益坤宁浸膏体积为1000ml，重量为1080g）而言，具体由按g的下列组分制成：

填充剂40-120g、崩解剂8-20g、矫味剂2-6g或润滑剂1-5g。

在本发明益坤宁固体脂质纳米粒制剂的一个优选的实施方案中，所述填充剂选自淀粉、糖粉、乳糖、甘露醇、微晶纤维素、山梨醇、糊精和蔗糖中的一种或几种，优选为蔗糖和微晶纤维素。

在本发明益坤宁固体脂质纳米粒制剂的一个优选的实施方案中，所述崩解剂选自低取代羟丙纤维素、羧甲淀粉钠、交联羧甲基纤维素钠、碳酸氢钠、碳酸氢钾、枸橼酸、交联聚维酮的一种或几种，优选交联羧甲基纤维素钠。

在本发明益坤宁固体脂质纳米粒制剂的一个优选的实施方案中，所述润滑剂选自硬脂酸镁、硬脂酸锌、滑石粉、聚乙二醇4000、硬脂酸中的一种或几种，优选为聚乙二醇4000。

在本发明益坤宁固体脂质纳米粒制剂的一个优选的实施方案中，矫味剂选自橘子香精、安赛蜜、糖精钠、阿斯巴甜中的一种，优选为阿斯巴甜。

在本发明益坤宁固体脂质纳米粒制剂的一个优选的实施方案中，其特征在于相对于一份益坤宁浸膏而言，药学上可接受的其他赋形剂为：填充剂40-120g、崩解剂8-20g、矫味剂2-6g或润滑剂1-5g，其中填充剂为蔗糖或微晶纤维素、崩解剂为交联羧甲基纤维素钠、润滑剂为聚乙二醇4000、或矫味剂为阿斯巴甜。

在本发明益坤宁固体脂质纳米粒制剂的一个优选的实施方案中，粘合剂溶液为50%的乙醇溶液。

本发明提供的益坤宁固体脂质纳米粒制剂是口服制剂，包括片剂和颗粒剂。

本发明的再一目的是提供一种上述益坤宁固体脂质纳米粒制剂的制备方法，该方法包括以下步骤：

（e）将益坤宁固体脂质纳米粒与稀释剂、崩解剂、矫味剂混合均匀，加入润湿剂制备软材，过筛制粒，干燥；

（f）将干颗粒和润滑剂混合均匀，过筛整粒；

（g）压片或装袋，制得益坤宁固体脂质纳米粒制剂。

与现有制剂技术相比，本发明提供的益坤宁固体脂质纳米粒制剂大大提高了制剂的稳定性和生物利用度；减少了毒副作用，提高了制剂产品质量，提高了治疗效果。

本发明先通过一份益坤宁浸膏与特定重量的二棕榈酰磷脂酰乙醇胺、泊洛沙姆188和吐温80组合制备成脂质纳米粒，再和其它药用辅料混合制成固体制剂。所得固体制剂产品质量高，粒径均匀，稳定性高，包封率高，药物在血液循环中保留时间长，疗效显著；所用辅料简单廉价，污染小。

本发明提供的益坤宁固体脂质纳米粒制剂的制备方法提高了产品质量，设备简单，易于操作，极有利于工业化大生产。

在本文中，如果没有特别地说明，含量或用量都以重量计。

附图说明

以下，结合附图来详细说明本发明的实施方案，其中：

图1是实施例1-2和对比例1-4中所制备的益坤宁固体脂质纳米粒制剂的释放曲线。其中，曲线1表示实施例1芍药苷释放曲线；曲线2表示实施例2芍药苷释放曲线；曲线3表示对比例1芍药苷释放曲线；曲线4表示对比例2芍药苷释放曲线；曲线5表示对比例3芍药苷释放曲线；曲线6表示对比例4芍药苷释放曲线。

其中：

曲线1曲线2

曲线3曲线4

曲线5

曲线6

具体实施方式

以下通过具体优选的实施例对本发明进行进一步说明。这些实施例仅是说明性的，并不应理解为对本发明的限制。

固体脂质纳米粒主要由脂质、乳化剂和药物三部分构成，通过根据要包载的药物选择合适的脂质和乳化剂。固体脂质纳米粒的载药量和释药性等性质与其组成密切相关。

为了改善固体脂质纳米的载药量，要选择合适的脂质和乳化剂，使得药物在脂质中具有高的溶解度，而且脂质不易形成规则结晶，以免由于脂质完整结晶导致药物溶解度急剧下降而致的药物突然释出。

为了实现本发明的目的，本发明人进行的大量研究和实现，发现通过选用特定重量配比的二棕榈酰磷脂酰乙醇胺、泊洛沙姆188和吐温80，可以形成品质优异的益坤宁固体脂质纳米粒，取得了意想不到的效果。

实施例1益坤宁固体脂质纳米粒片的制备

处方（400片）：

白芍60g、熟地黄60g、当归90g、川芎60g、益母草60g、香附60g、延胡索30g、三棱15g、桂皮15g、橙皮15g、二棕榈酰磷脂酰乙醇胺80g、泊洛沙姆18860g、吐温8020g、微晶纤维素40g、交联羧甲基纤维素钠20g、聚乙二醇40002g

制备工艺：

（1）将白芍60g、熟地黄60g、当归90g、川芎60g、益母草60g、香附60g、延胡索30g、三棱15g、桂皮15g、橙皮15g粉碎成细粉，按照流浸膏剂与浸膏剂项下的渗漉法（中国药典2010年版一部附录IO），用50％乙醇作溶剂，浸渍24小时后，以每分钟0.5～2ml的速度缓缓渗漉，收集初漉液约750ml，继续渗漉至漉液接近无色，收集后续漉液并浓缩漉液至约250ml，加入初漉液约750ml混匀，总共约1000ml，制得一份益坤宁浸膏1080g；其中以芍药苷为考察指标，发现白芍药材中的渗漉提取率为90.8％，芍药苷含量为0.92mg/ml，相当于2.3mg/片；

（2）将80g二棕榈酰磷脂酰乙醇胺溶于上述一份益坤宁浸膏中，再加入200ml乙醇，搅拌使其溶解均匀，形成有机相；

（3）将60g泊洛沙姆188和20g吐温80溶于1600g水中，60℃恒温水浴加热，搅拌使其溶解，形成水相；搅拌中将有机相缓慢加入水相中，温度保持在60℃，继续搅拌30分钟；

（4）减压除掉有乙醇，得到半透明初乳；将得到的初乳，在1500转/分钟的搅拌条件下，快速加入到1500g的冷水中，70MPa高压下匀质乳化10次，得到益坤宁脂质纳米粒混悬液；

（5）将上述混悬液用0.45μm微孔滤膜过滤，冷冻干燥，制得益坤宁固体脂质纳米粒；

（6）将益坤宁固体脂质纳米粒与40g微晶纤维素、20g交联羧甲基纤维素钠混合均匀，加入适量50%的乙醇溶液制备软材，过20目筛制粒，干燥；

（7）将干颗粒和2g聚乙二醇4000混合均匀，过18目筛整粒；

（8）压片，制得400片益坤宁固体脂质纳米粒片。

实施例2益坤宁固体脂质纳米粒颗粒的制备

处方（400袋）：

白芍60g、熟地黄60g、当归90g、川芎60g、益母草60g、香附60g、延胡索30g、三棱15g、桂皮15g、橙皮15g、二棕榈酰磷脂酰乙醇胺160g、泊洛沙姆18880g、吐温8060g、蔗糖80g、阿斯巴甜4g、交联羧甲基纤维素钠10g、聚乙二醇40005g

制备工艺：

（1）将白芍60g、熟地黄60g、当归90g、川芎60g、益母草60g、香附60g、延胡索30g、三棱15g、桂皮15g、橙皮15g粉碎成细粉，按照流浸膏剂与浸膏剂项下的渗漉法（中国药典2010年版一部附录IO），用50％乙醇作溶剂，浸渍24小时后，以每分钟0.5～2ml的速度缓缓渗漉，收集初漉液约750ml，继续渗漉至漉液接近无色，收集后续漉液并浓缩漉液至约250ml，加入初漉液约750ml混匀，制得总共约1000ml的一份益坤宁浸膏1080g；其中以芍药苷为考察指标，发现白芍药材中的渗漉提取率为90.7％，芍药苷含量为0.92mg/ml；

（2）将160g二棕榈酰磷脂酰乙醇胺溶于上述一份益坤宁浸膏中，再加入500ml乙醇，搅拌使其溶解均匀，形成有机相；

（3）将80g泊洛沙姆188和60g吐温80溶于2000g水中，60℃恒温水浴加热，搅拌使其溶解，形成水相；搅拌中将有机相缓慢加入水相中，温度保持在60℃，继续搅拌30分钟；

（4）减压除掉有乙醇，得到半透明初乳；将得到的初乳，在1500转/分钟的搅拌条件下，快速加入到1500g的冷水中，70MPa高压下匀质乳化10次，得到益坤宁脂质纳米粒混悬液；

（5）将上述混悬液用0.45μm微孔滤膜过滤，冷冻干燥，制得益坤宁固体脂质纳米粒；

（6）将益坤宁固体脂质纳米粒与80g蔗糖、4g阿斯巴甜、10g交联羧甲基纤维素钠混合均匀，加入适量50%的乙醇溶液制备软材，过20目筛制粒，干燥；

（7）将干颗粒和5g聚乙二醇4000混合均匀，过18目筛整粒；

（8）装袋，制得400袋益坤宁固体脂质纳米粒颗粒。

对比例1-4

采用与分别与实施例1-2中相同的生产工艺，将如下表1中所示的对比例1-4中的成分分别制成益坤宁固体脂质纳米粒片剂或颗粒剂：

表1对比例1-4中所用成分

其中，“/”表示未使用。

试验例1脂质纳米粒的考察

将实施例1-2和对比例1-4中步骤（5）所制备的益坤宁固体脂质纳米粒1g，以生理盐水稀释100倍后，置于Submicron Particle Sizer Model 370粒径检测仪的样品管中，测定粒径大小分布及粒径，并用statistica5.0统计软件求约1000粒的平均值；用投射电子显微镜观察粒子形态，以芍药苷为考察指标，以HPLC法检测芍药苷的含量计算出包封率，结果示于下表2中。

表2脂质纳米粒考察结果

由表2可知，本发明实施例1-2中所得益坤宁固体脂质纳米粒形态规则，粒径大小均一，平均粒径小，包封率高；而对比例1-4中所得益坤宁固体脂质纳米粒形态不规则，平均粒径大，包封率低。

具体而言，即使在采用同样的生产工艺时，与实施例1-2相比，表明，当使用本发明所用成分以外的成分时，所得益坤宁固体脂质纳米粒的品质明显劣于本发明；当成分用量在本发明限定的成分用量范围外时，所得益坤宁固体脂质纳米粒的品质也明显劣于本发明。

试验例2稳定性的考察

将实施例1-2与对比例1、3以及上市制剂（江苏康缘药业股份有限公司，批号：110401）在高温40℃、相对湿度75%的条件下6个月，进行加速试验考察，以芍药苷为考察指标，以0个月时各自样品中芍药苷的含量为100%，其他各时间芍药苷的含量与之各自作比较，结果示于下表3中。

表3加速试验结果

由表3可知，对比例和上市制剂的样品，加速6月时含量降低明显；而本发明实施例制备的样品加速6月后含量无明显变化。充分说明本发明在提高稳定性方面的优越性。

试验例3释放度试验考察

将实施例1-2和对比例1-4中所制备的益坤宁固体脂质纳米粒制剂样品进行了释放度考察。该试验按照中国药典2010版附录XD释放度测定样品中的第一法进行，并对统计的各样品试验结果制作了释放曲线。

本试验中取样时间点为：2、4、8、12、16小时，结果见附图1。其中，曲线1表示实施例1芍药苷释放曲线；曲线2表示实施例2芍药苷释放曲线；曲线3表示对比例1芍药苷释放曲线；曲线4表示对比例2芍药苷释放曲线；曲线5表示对比例3芍药苷释放曲线；曲线6表示对比例4芍药苷释放曲线。

由图1可知，本发明样品的芍药苷释放效果优于对比例。这表明，本发明的益坤宁固体脂质纳米粒制剂的稳定性和体外释放度优于对比例，改进了稳定性和释放效果。

工业实用性

由上述实施例以及实验例的结果可知，本发明的益坤宁固体脂质纳米粒制剂具有良好的外观，颗粒小，粒径均匀，包封率高，稳定性高，在体内的停留时间长，生物利用度高，具有良好的工业应用价值。

以上通过具体实施方式和实施例对本发明进行了详细说明，不过应理解，这些说明并不对本发明的范围构成任何限制，在不偏离本发明的精神和保护范围的情况下，可以对本发明的技术方案及其实施方式进行多种修饰、改进和替换，这些均因落入本发明的保护范围内。

本申请中提及或引用的各个参考文献，在此全文引入作为参考。

Claims (10)

1.一种益坤宁固体脂质纳米粒，其特征在于主要由基于g计的以下成分制成：

2.根据权利要求1的益坤宁固体脂质纳米粒，其特征在于一份益坤宁浸膏由基于g计的以下成分制成：

3.一种制备权利要求1或2的益坤宁固体脂质纳米粒的方法，其特征在于包括以下步骤：

（a）将二棕榈酰磷脂酰乙醇胺溶于一份益坤宁浸膏中，加入适量乙醇，搅拌使其溶解均匀，形成有机相；

（b）将泊洛沙姆188和吐温80溶解于水中，60℃恒温水浴加热，搅拌使其溶解，形成水相；搅拌中将有机相缓慢加入水相中，温度保持在60℃，继续搅拌30分钟；

（c）减压除掉有机溶剂，得到半透明初乳；将得到的初乳，在1500转/分钟的搅拌条件下，快速加入到适量的冷水中，70MPa高压下匀质乳化8次，得到益坤宁脂质纳米粒混悬液；

（d）将上述混悬液用0.45μm微孔滤膜过滤，冷冻干燥，制得益坤宁固体脂质纳米粒。

4.一种制备权利要求1-3任一所述的一份益坤宁浸膏的方法，其特征在于：

将处方量的药材粉碎成细粉，按照流浸膏剂与浸膏剂项下的渗漉法（中国药典2010年版一部附录IO），用50％乙醇作溶剂，浸渍24小时后，以每分钟0.5～2ml的速度缓缓渗漉，收集初漉液约750ml，继续渗漉至漉液接近无色，收集后续漉液并浓缩漉液至约250ml，加入初漉液约750ml混匀，制得一份益坤宁浸膏约1000ml，重量约为1080g，其中芍药苷的含量为0.92mg/ml。

5.根据权利要求3的方法，其特征在于，优选地在步骤（b）中，加入泊洛沙姆188和吐温80总重量10-20倍的水(W/W)。

6.一种益坤宁固体脂质纳米粒的固体制剂，其特征在于由权利要求1或2所述的益坤宁固体脂质纳米粒和药学上可接受的其他赋形剂组成。

7.根据权利要求6所述的固体制剂，其特征在于选自片剂或颗粒剂。

8.根据权利要求6或7的固体制剂，其特征在于药学上可接受的其他赋形剂选自填充剂、崩解剂、矫味剂和润滑剂。

9.根据权利要求8所述的固体制剂，其特征在于相对于一份益坤宁浸膏而言，药学上可接受的其他赋形剂为：填充剂40-120g、崩解剂8-20g、矫味剂2-6g或润滑剂1-5g。

10.一种制备益坤宁固体脂质纳米粒制剂的方法，其特征在于所述方法包括以下步骤：

（e）将益坤宁固体脂质纳米粒与稀释剂、崩解剂、矫味剂混合均匀，加入润湿剂制备软材，过筛制粒，干燥；

（f）将干颗粒和润滑剂混合均匀，过筛整粒；

（g）压片或装袋，制得益坤宁固体脂质纳米粒制剂。

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