CN111297971B - 一种用于治疗乳腺癌组合物及其制备方法和应用 - Google Patents

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Abstract

本发明属于中药技术领域，尤其涉及一种用于治疗乳腺癌组合物及其制备方法和应用。本发明在抗乳腺癌体外细胞筛选试验中发现乳痹消片处方中的药材的乙醇/乙酸乙酯提取物具有抗乳腺癌作用，为此，本发明通过醇/乙酸乙酯提取部分药材中的脂溶性成分，通过水提取其他部分药材中的水溶性成分，制备出了对乳腺癌具有良好抑制作用的提取物。

Description

一种用于治疗乳腺癌组合物及其制备方法和应用
技术领域
本发明属于中药技术领域，尤其涉及一种用于治疗乳腺癌组合物及其制备方法和应用。
背景技术
本发明背景技术中公开的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。
乳腺癌对女性的身心健康和生命均存在严重威胁，女性一生之中罹患乳腺癌的几率约为12.3％，且趋于年轻化。乳腺癌也是一种由多种因素一起作用导致的。我国传统医学中虽无“乳腺癌”这一疾病名称，但根据乳腺癌的临床症状，其当属于中医“乳岩”“乳石痈”“乳栗”等中医疾病范畴。中医医理认为，气滞血瘀引发瘀血阻滞为本病的主要病理表现，病因病机则涉及肝气郁结、气血亏虚、冲任失调等方面。
发明内容
本发明的目的在于提供一种具有治疗乳腺癌的组合物。本发明在抗乳腺癌体外细胞筛选试验中发现，本申请人的在售产品乳痹消片处方中大部分中药的乙醇/乙酸乙酯提取物具有抗乳腺癌作用。基于该发现，本发明提出了一种用于治疗乳腺癌组合物及其制备方法。
本发明的第一目的，是提供一种用于治疗乳腺癌组合物的制备方法。
本发明的第二目的，是提供一种用于治疗乳腺癌组合物。
本发明的第三目的，是提供所述用于治疗乳腺癌组合物的应用。
为实现上述发明目的，本发明公开了下述技术方案：
首先，本发明提供给一种用于治疗乳腺癌组合物的制备方法，步骤为：
醇/乙酸乙酯提取物的制备：将蒲公英、木香、鸡血藤、牡丹皮、红花、连翘、赤芍、玄参、三七采用乙醇/乙酸乙酯进行提取，将得到的提取液浓缩,得到的浓缩液制备成干膏，即得醇/乙酸乙酯提取物，备用；
超微粉的制备：将鹿角水提后制备成鹿角胶，备用；然后将鹿角水提后的药渣干燥得到鹿角霜，将鹿角霜粉碎后得到鹿角霜超微粉，备用；
水提取物的制备：将步骤(1)的药渣、昆布、海藻、夏枯草、天花粉、漏芦水提，得到水提液；将水提液浓缩后加入上述鹿角水提制得的鹿角胶，制备成干膏，得到水提取物，备用；
以上述的醇提取物、水提取物、超微粉为原料，采用合适的剂型制备组合物，即得。
进一步地，所述醇/乙酸乙酯提取物的制备中，所述乙醇的质量浓度为50-95％。经过试验，这几种中药的乙醇提取物/乙酸乙酯提取物对人乳腺癌MCF-7有明显的抑制作用。乙醇和乙酸乙酯提取物多为小极性成分，结合生产方便，优选为采用质量浓度为95％乙醇进行提取。
进一步地，所述醇/乙酸乙酯提取物的制备中，对各药材进行提取时，可以对单独每种药材进行提取后制成干膏，将各药材的干膏混合形成提取物；或者，对单独每种药材进行提取后将各提取液混合后制成干膏，得到提取物；或者，将各药材混合后进行提取，将提取液制成干膏，得到提取物。结合生产方便，优选为将各药材混合后进行提取，将提取液制成干膏以获得提取物的方法。
进一步地，所述醇/乙酸乙酯提取物中，按生药量计算，蒲公英提取物和木香提取物的质量比为1～3：3～1；优选为1：1或2：1。试验显示：蒲公英提取物：木香提取物的配伍比例为上述比例时，对乳腺癌的抑制率更为显著。
进一步地，在水提取物的制备中，对步骤(1)的药渣进行水提，将得到的提取液浓缩后制备成干膏；对昆布、海藻、夏枯草、天花粉、漏芦水提，将得到的提取液浓缩后制备成干膏，两部分干膏共同构成水提取物。
进一步地，所述水提取物中，按生药量计算，夏枯草提取物、天花粉提取物的质量比为1～3：3～1；优选为2：1或3：1。试验显示：夏枯草提取物、天花粉提取物的配伍比例为上述比例时，对乳腺癌的抑制率更为显著。
进一步地，所述水提的具体方法可采用常规的煎煮工艺(常压加热)，或者在加热加压条件下进行煎煮，以增加提取效率。可选地，所述加压的压力为0.08-0.15MPa；更优选为0.10MPa。
进一步地，所述超微粉的制备中，取鹿角破碎成小段，经过加热加压提取过滤得到滤液，对滤液离心得到离心液，对离心液浓缩，制得鹿角胶；将鹿角提取后的药渣干燥，制得鹿角霜。
可选地，将鹿角胶加入到水提液的浓缩液中，干燥得水提取物；鹿角霜用粉碎机粉碎成粗粉，然后用振动式超微粉碎机粉碎，得到超微粉。可选地，所述用振动式超微粉碎机粉碎0.5-2h，即得。
进一步地，所述醇/乙酸乙酯提取物的制备中，还包括：采用高压微射流匀质技术将所述醇提取物浓缩液制备成提取物纳米乳(不再直接制备成干膏)，将纳米乳干燥后，用于和其他组分制备片剂。通过应用高压微射流均质技术对脂溶性提取物进行处理，能够有效增加脂溶性提取物的溶解性，这是因为醇提取后，浓缩过程会有不溶物(有效成分)析出，导致制备的干膏中有效成分分散不均匀，药效无法保证，通过制成纳米乳，避免了有效成分析出，不仅保留醇提取的成分，而且有效成分均匀分散。
进一步地，所述高压微射流匀质技术的工艺参数为：均质压力为400-800bar，均质次数为2-6次；优选为在800bar下均质4-6次；更优选为在800bar下均质4次。
进一步地，所述剂型包括片剂、胶囊等；可选地，所述片剂的制备方法为：取水提取组合物，超微粉组分作为底粉，将两者制成颗粒，将醇/乙酸乙酯提取物或者提取物纳米乳干燥后制成微丸，将所述颗粒、微丸整粒后压片，包衣，即得。
可选地，所述胶囊的制备方法为：取醇/乙酸乙酯提取物/提取物纳米乳、水提取物、超微粉，加入糊精、淀粉，混匀制粒，干燥，分装于胶囊中即得。
其次，本发明公开上述方法制备的用于治疗乳腺癌组合物。
最后，本发明公开所述用于治疗乳腺癌组合物在乳腺癌治疗中的应用。
与现有技术相比，本发明取得了以下有益效果：
(1)本发明在抗乳腺癌体外细胞筛选试验中发现，本申请人的在售产品乳痹消片处方中的药材的乙醇/乙酸乙酯提取物具有抗乳腺癌作用。再次基础上，本发明通过醇/乙酸乙酯提取部分药材中的脂溶性成分，通过水提取其他部分药材中的水溶性成分，制备出了对乳腺癌具有良好抑制作用的提取物。
(2)本发明对鹿角进行全药材充分利用：先用水提的方式得到具有补益气血的作用的鹿角胶，将药渣制备成对乳腺癌具有抑制作用的鹿角霜，不仅可以起到治疗乳腺癌的作用吧，又可以在治疗过程中对患者进行补益气血，提高治疗效果。
附图说明
构成本发明的一部分的说明书附图用来提供对本发明的进一步理解，本发明的示意性实施例及其说明用于解释本发明，并不构成对本发明的不当限定。
图1为本发明实施例4中对照组小鼠效果图。
图2为本发明实施例4中低剂量组、实验中剂量组、实验高剂量组小鼠效果图。
具体实施方式
应该指出，以下详细说明都是例示性的，旨在对本申请提供进一步的说明。除非另有指明，本文使用的所有技术和科学术语具有与本申请所属技术领域的普通技术人员通常理解的相同含义。
需要注意的是，这里所使用的术语仅是为了描述具体实施方式，而非意图限制根据本申请的示例性实施方式。如在这里所使用的，除非上下文另外明确指出，否则单数形式也意图包括复数形式，此外，还应当理解的是，当在本说明书中使用术语“包含”和/或“包括”时，其指明存在特征、步骤、操作、器件、组件和/或它们的组合。
正如前文所述，本发明在本申请人在售的产品乳痹消片处方中大部分中药的乙醇/乙酸乙酯提取物具有抗乳腺癌作用。因此，本发明提出了一种用于治疗乳腺癌组合物及其制备方法；现结合具体实施方式对本发明进一步说明。
另外，下列实施例中，所述的治疗乳腺癌组合物处方量为：按质量百分比，蒲公英5.35％；木香5.34％；连翘2.37％；红花3.56％；鸡血藤5.94％；牡丹皮8.31％；赤芍1.78％；玄参5.94％；三七5.94％；夏枯草5.54％；天花粉2.77％；昆布23.15％；海藻11.57％；漏芦3.56％；鹿角8.90％。
实施例1
一种用于治疗乳腺癌组合物的制备，总工艺路线为：
醇/乙酸乙酯提取物的制备：将蒲公英、木香、鸡血藤、牡丹皮、红花、连翘、赤芍、玄参、三七采用乙醇/乙酸乙酯进行提取，将得到的提取液，浓缩后得浓缩液(浓缩液：投药量＝1:2)，即得醇/乙酸乙酯提取物，备用；
超微粉的制备：将鹿角水提后制备成鹿角胶，备用；然后将鹿角水提后的药渣干燥得到鹿角霜，将鹿角霜粉碎后得到鹿角霜超微粉，备用；
水提取物的制备：将步骤(1)的药渣、昆布、海藻、夏枯草、天花粉、漏芦水提，将得到的提取液浓缩后，加入上述鹿角水提制得的鹿角胶，制备成干膏，得到水提取物，备用；
以上述的醇提取物、水提取物、超微粉为原料，采用合适的剂型制备组合物，即得。
进一步地，本实施进行了对各药味不同提取物抗乳腺癌进行了筛选，并确定提取方法，对主要药进行配伍筛选，确定最佳配伍比例等试验；具体地，包括如下步骤：
一、抗乳腺癌中药提取物筛选
1、不同提取方式筛选
(1)将蒲公英、鸡血藤、木香、牡丹皮、红花、连翘、赤芍、玄参、三七、昆布、海藻、夏枯草、天花粉、漏芦分别进行水提取、50％乙醇提取、95％乙醇提取、乙酸乙酯提取，浓缩，减压干燥制得干膏，取各提取物相当生药量1g的干膏，精密称定，放入50mL容量瓶，加蒸馏水溶解并定容至刻度，超声溶解，在无菌的超净台上过0.22μm微孔有机滤膜，滤液用于后续体外抗乳腺癌筛选试验。
(2)取生长状态良好且处于对数生长期的人乳腺癌MCF-7细胞，用0.25％的胰酶约1mL消化，待细胞略微变圆，立刻停止消化，倒掉胰酶，加入培养液吹打细胞，制成细胞悬液。细胞计数板上计数，细胞浓度＝四大格细胞总数×104/4个·mL-1，加培养液稀释至浓度为5×104个·mL-1，接种于96孔培养板，每孔100μL，于培养箱中培养24h后，细胞贴壁完全，长至约80％。设加药试验孔、空白对照孔(只加细胞)和调零孔(只加培养基)，各组均设5个复孔。继续培养24h，每孔避光加20μL(5mg/mL)MTT，继续培养4h后弃上清液，每孔加入150μLDMSO，摇床10min，待紫色结晶充分溶解后。采用酶标仪检测，检测波长为570nm，测定吸光值(OD)；按公式及相关软件计算药物对细胞的抑制率，结果见下表1。
表1各药味不同提取方式对乳腺癌MCF-7细胞的抑制率(％)
Figure BDA0002341163280000071
由表1数据可知，昆布、海藻、夏枯草、天花粉、漏芦水提取物对人乳腺癌MCF-7有明显的抑制作用；蒲公英、木香、鸡血藤、牡丹皮、红花、连翘、赤芍、玄参、三七95％乙醇提取物和乙酸乙酯提取物对人乳腺癌MCF-7有明显的抑制作用，95％乙醇和乙酸乙酯提取物多为小极性成分，结合生产方便，选择95％乙醇提取物。
2、抗乳腺癌提取物配伍筛选研究
(3)由表1的抗乳腺癌提取物筛选试验结果可知，各水提取中夏枯草、天花粉水提取物抗乳腺癌效果较好，醇提取物中蒲公英、木香醇提取物抗乳腺癌效果较好，对这两对不同提取物的比例进行体外抗乳腺癌筛选。
(4)取上述步骤(1)中制得的夏枯草提取物、天花粉95％乙醇提取物，按不同配比夏枯草提取物：天花粉提取物分别为1:1、1:2、2:1、1:3、3:1制得不同配比的混合提取物(均为相当生药量比例)；同法取上述步骤(1)中制得的蒲公英提取物、木香提取物，按不同配比蒲公英提取物：木香提取物分别为1:1、1:2、2:1、1:3、3:1制得不同配比的混合提取物(均为相当生药量比例)，取各提取物相当生药量1g的干膏，精密称定，放入50mL容量瓶，加蒸馏水溶解并定容至刻度，超声溶解，在无菌的超净台上过0.22μm微孔有机滤膜，滤液用于不同配伍提取物体外抗乳腺癌筛选，结果见下表2。
表2各不同配伍比例提取物的乳腺癌MCF-7细胞抑制率(％)
Figure BDA0002341163280000081
由表2数据可知，夏枯草提取物：天花粉提取物配伍比例为2:1、3：1的乳腺癌抑制率较高，选择夏枯草提取物：天花粉提取物配比为2:1。蒲公英提取物：木香提取物配伍比例为1:1、2:1的抑制率较高，选择蒲公英提取物：木香提取物配伍比例为1:1。
实施例2
一种用于治疗乳腺癌组合物的制备，包括如下步骤：
(1)乙醇提取组合物的制备：取蒲公英、木香、鸡血藤、牡丹皮、红花、连翘、赤芍、玄参、三七(按上述的治疗乳腺癌组合物处方量比例投料)加质量浓度为95％乙醇回流提取2次，第一次乙醇的添加量为8倍量，提取时间为1.5h，第二次乙醇的添加量为6倍量，提取时间为1h，过滤，合并两次滤液，浓缩后得浓缩液(浓缩液：投药量＝1:2)，即得到乙醇提取组合物，提取后的药渣备用。
(2)由于乙醇提取浓缩液，在浓缩过程中，随着浓缩乙醇量及乙醇浓度降低会有不溶物析出，溶性差，为了增加溶解性和提高吸收疗效，将本实施例步骤(1)的醇提取浓缩液先制得初乳液；将初乳液过高压微射流均质机匀质处理，制得该提取物纳米乳，干燥，制得乙醇提取组合物。高压微射流匀质条件考察，以压力和匀质次数为考察对象，以粒径为考察指标，优选最佳条件，结果如下表3。
表3
Figure BDA0002341163280000091
从表3可以看出：以粒径作为指标，实验5、6差异较小，考虑要该制备方法最后混合还会进行一步高压匀质处理并兼顾生产成本及粒径大小考虑，选用实验5的工艺，即启动高压微射流均质机后，投料，压力设置800bar，重复均质4次匀质即得。
(3)鹿角提取物制备：
(i)鹿角胶制备：取鹿角破碎成1-2cm的小段，加入3倍水在压力0.10MPa、温度为110℃的条件下用煎煮时间2小时，过滤，对滤液离心得到离心液，对离心液浓缩，制得鹿角胶，备用；鹿角提取后的药渣干燥后，制得鹿角霜(得到的鹿角胶与干燥后鹿角霜质量比例为1:3)。
(ii)超微粉制备：将鹿角提取后的鹿角霜，用粉碎机粉粹得到普通中药粉末；再将普通粉末分成3份，用振动式超微粉碎机粉碎0.5h、1h、2h，用Mastersizer 2000激光衍射法粒度仪测定其粒径分布，重复测量3次，统计不同粉碎时间得到的超微粉D50(中位粒径)、D90(90％粒径值)的均值，结果见表4。
表4
Figure BDA0002341163280000101
从表4可以看出，超微粉碎1小时和2小时得到的粉体的D50，D90均值差异较小，且粉体达到了超微粉的粒径要求，因此取鹿角霜用粉碎机粉碎，再用振动式超微粉碎机粉碎1小时作为更加优选的工艺。
(4)水提取组合物的制备：
(iii)在本实施例步骤(1)中药渣加8倍量水煎煮1.5h、过滤、浓缩，得到水提取浓缩液；
(iv)将昆布、海藻、夏枯草、天花粉、漏芦(按处方比例投料)加8倍量水煎煮1.5h；然后加6倍量水煎煮2h，过滤、合并两次滤液，浓缩，得到水提取浓缩液，加入鹿角胶，干燥，即为水提取组合物。
(v)片剂的制备：取本实施例制备的水提取组合物，超微粉组分作为底粉，用一步制粒机制成颗粒，乙醇提取纳米乳干燥后制成微丸，将颗粒、微丸整粒后压片，包衣，即得用于治疗乳腺癌组合物。
实施例3
一种用于治疗乳腺癌组合物的制备，同实施例2，区别在于：所述用于治疗乳腺癌组合物的剂型为胶囊，其制备方法为：取本实施例制备的乙醇提取纳米乳、水提取物、超微粉，加入糊精1份、淀粉1份，混匀制粒，干燥，分装于胶囊中即得。
实施例4：药理药效测试
1、体外抗乳腺癌药效学研究
1.1材料
1.1.1细胞及试液
细胞：人乳腺癌MCF-7细胞株；培养基为含10％胎牛血清(添加青霉素,链霉素各100kU/L)的RPMI1640培养液,置于37℃、5％CO2条件下的细胞培养箱中培养。
1.1.2主要试剂仪器
四甲基偶氮唑盐(MTT)；胰蛋白酶；二甲基亚砜(DMSO)；SUNRISE酶标仪(瑞士TECAN公司)；96孔无菌培养板(美国Costar公司)；CO2气体培养箱(贺立氏仪器公司)；AE31型倒置相差显微镜(Motic公司)
1.2方法
取生长状态良好且处于对数生长期的人乳腺癌MCF-7细胞，用0.25％的胰酶约1mL消化，待细胞略微变圆，立刻停止消化，倒掉胰酶，加入培养液吹打细胞，制成细胞悬液。细胞计数板上计数，细胞浓度＝四大格细胞总数×104/4个·mL-1，加培养液稀释至浓度为5×104个·mL-1，接种于96孔培养板，每孔100μL，于培养箱中培养24h后，细胞贴壁完全，长至约80％。设加药试验孔、空白对照孔(只加细胞)和调零孔(只加培养基)，各组均设5个复孔。继续培养24h，每孔避光加20μL(5mg·mL-1)MTT，继续培养4h后弃上清液，每孔加入150μLDMSO，摇床10min，待紫色结晶充分溶解后。采用酶标仪检测，检测波长为570nm，测定吸光值(OD)；按公式及相关软件计算药物对细胞的抑制率及IC50。
给药组、空白组的设定：将该组合物(浓度为相当生药量1g/mL)超净台内过0.22μm滤膜，加入待加药的96孔板中，分别加入20、40、60、80、100μL给药组，整个孔内体积不足200μL的加入相应培养液补足，空白对照孔加入100μL培养液，验结果如表5所示。
表5该组合物不同浓度对乳腺癌MCF-7细胞的抑制率
Figure BDA0002341163280000121
从表5可以看出，该组合物在0.1-0.4g/mL浓度范围内对乳腺癌细胞MCF-7增殖均有抑制作用，随着剂量的增加抑制率增大，IC50为0.339g/mL。
2.体内抗乳腺癌药效学研究
2.1材料
2.1.1实验材料：同1.1.1，及SPF级昆明种小鼠，体重18-22g，雌性；手术器械：手术剪、手术刀、镊子、1mL无菌注射器、5mL无菌注射器、50mL灭菌锥形瓶、75％酒精、碘酒；动物饲料及饮水均经过紫外线灭菌处理。
2.1.2仪器：同1.1.2。
2.2实验方法
2.2.1裸鼠乳腺癌模型建立
根据相关文献记载，将稳定生长传代的MCF-7细胞株浓度调整为1×104/μl，每日取50μl细胞悬液注射于裸鼠右腋下皮下组织，待肉眼可见成瘤后，用卡尺测量移植瘤长、短径，并记录。当瘤体生长至100mm3时，停止接种，小鼠一般情况良好，为建模成功。接种后第14天，从中选取已成瘤小鼠24只，瘤体体积在100mm3以上，高出身体皮肤表面，活动度差，质地硬，血管丰富。随机编号，分4组，每组6只，分别对照组(参见图1)与实验低剂量组、实验中剂量组、实验高剂量组(参见图2)。
2.2.2给药方法
对照组每日1mL纯化水(安慰剂)灌胃，低剂量实验组每日给予该组合物1ml(相当生药量0.25g/20g小鼠)灌胃，中剂量实验组每日给予该组合物1ml(相当生药量0.5g/20g小鼠)灌胃，高剂量实验组每日给予该组合物1ml(相当生药量0.75g/20g小鼠)灌胃。
2.2.3观察指标
荷瘤体积：分别于第1天，以后每隔3-4d，卡尺测量荷瘤体长(L)、短(S)径各一次，计算荷瘤体积TV。计算公式＝1/2×L×S2。抑瘤率:于第14天，处死所有小鼠，仔细剥离瘤体，称重所有瘤体质量(g)，计算各治疗组抑瘤率，计算公式＝(1－Tweight/Cweight)×100％，Tweight为治疗组第14日平均肿瘤质量(g)，Cweight为对照组第14日平均肿瘤质量(g)。
2.2.4统计学处理
应用SPSS 20.0软件，组间比较采用t检验、方差分析，以P＜0.05为差异有统计学意义。
2.3实验结果
2.3.1小鼠荷瘤体积的变化
对照组肿瘤生长快速，体积逐渐增大，从喂养第7天，荷瘤体积已增大到接近初始的2.5倍，第14天时，平均肿瘤体积达(872±81)mm3。该组合物低、中、高剂量组，肿瘤体积增加速度缓慢，尤其是中、高剂量组显著放缓，实验结束时，中剂量组小鼠荷瘤体积平均值为(380±51)mm3。数据经方差分析统计学处理，实验组(低、中、高剂量)相比对照组可显著抑制肿瘤的生长速度，差异均具有显著性(P＜0.05)。见表6。
表6不同时间段肿瘤体积变化(mm3)
Figure BDA0002341163280000141
小鼠移植瘤重量变化及抑瘤率情况对照组及实验组同时处理14d后，处死小鼠，仔细剥取瘤体，称重。经t检验分析处理，实验组(低、中、高剂量)瘤体重量显著小于对照组(P＜0.05)，尤其是中、高剂量组，组抑瘤率分别达50.17％、51.85％，见表7。
表7各组小鼠移植瘤重量及抑瘤率
Figure BDA0002341163280000151
表7注：*P＜0.05；植瘤重量/g。
3.结论：该组合物的体外体内药效实验结果显示该组合物具有良好的抗乳腺癌作用。
以上所述仅为本申请的优选实施例，并不用于限制本申请，对于本领域的技术人员来说，本申请可以有各种更改和变化。凡在本申请的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本申请的保护范围之内。

Claims (25)

1.一种用于治疗乳腺癌组合物的制备方法，其特征在于，步骤为：
95%乙醇或乙酸乙酯提取物的制备：将蒲公英、木香、鸡血藤、牡丹皮、红花、连翘、赤芍、玄参、三七采用95%乙醇或乙酸乙酯进行提取，将得到的提取液浓缩后制备成干膏，即得95%乙醇或乙酸乙酯提取物，备用；
超微粉的制备：将鹿角水提后制备成鹿角胶，备用；然后将鹿角水提后的药渣干燥得到鹿角霜，将鹿角霜粉碎后得到鹿角霜超微粉，备用；
水提取物的制备：将步骤（1）的药渣、昆布、海藻、夏枯草、天花粉、漏芦水提，得到水提液；将得到的提取液浓缩后，加入上述鹿角胶，制备成干膏，得到水提取物，备用；
以上述的95%乙醇或乙酸乙酯提取物、水提取物、超微粉为原料，采用合适的剂型制备组合物，即得。
2.如权利要求1中所述的用于治疗乳腺癌组合物的制备方法，其特征在于，所述95%乙醇或乙酸乙酯提取物的制备中，对各药材进行提取时，对单独每种药材进行提取后制成干膏，将各药材的干膏混合形成提取物。
3.如权利要求1中所述的用于治疗乳腺癌组合物的制备方法，其特征在于，对单独每种药材进行提取后将各提取液混合后制成干膏，得到提取物。
4.如权利要求1中所述的用于治疗乳腺癌组合物的制备方法，其特征在于，将各药材混合后进行提取，将提取液制成干膏，得到提取物。
5.如权利要求1中所述的用于治疗乳腺癌组合物的制备方法，其特征在于，在水提取物的制备中，对步骤（1）的药渣进行水提，将得到的提取液浓缩后制备成干膏；对昆布、海藻、夏枯草、天花粉、漏芦水提，将得到的提取液浓缩后制备成干膏，两部分干膏共同构成水提取物。
6.如权利要求1中所述的用于治疗乳腺癌组合物的制备方法，其特征在于，所述超微粉的制备中，取鹿角破碎成小段，经过加热加压提取过滤得到滤液，对滤液离心得到离心液，对离心液浓缩，制得鹿角胶；将鹿角提取后的药渣干燥，制得鹿角霜。
7.如权利要求6中所述的用于治疗乳腺癌组合物的制备方法，其特征在于，将鹿角霜用粉碎机粉碎成粗粉，然后用振动式超微粉碎机粉碎，得到超微粉。
8.如权利要求7中所述的用于治疗乳腺癌组合物的制备方法，其特征在于，所述用振动式超微粉碎机粉碎0.5-2h，即得。
9.如权利要求1中所述的用于治疗乳腺癌组合物的制备方法，其特征在于，所述95%乙醇或乙酸乙酯提取物的制备中，还包括：采用高压微射流匀质技术将浓缩液制备成提取物纳米乳，将纳米乳干燥后，备用。
10.如权利要求9中所述的用于治疗乳腺癌组合物的制备方法，其特征在于，所述高压微射流匀质技术的工艺参数为：均质压力为400-800bar，均质次数为2-6次。
11.如权利要求10中所述的用于治疗乳腺癌组合物的制备方法，其特征在于，在800bar下均质4-6次。
12.如权利要求11中所述的用于治疗乳腺癌组合物的制备方法，其特征在于，在800bar下均质4次。
13.如权利要求5中所述的用于治疗乳腺癌组合物的制备方法，其特征在于，所述水提的具体方法采用常压加热煎煮工艺；或者在加热加压条件下进行煎煮，以增加提取效率。
14.如权利要求13中所述的用于治疗乳腺癌组合物的制备方法，其特征在于，所述加压的压力为0.08-0.15MPa。
15.如权利要求14中所述的用于治疗乳腺癌组合物的制备方法，其特征在于，加压的压力为0.10 MPa。
16.如权利要求1-15任一项中所述的用于治疗乳腺癌组合物的制备方法，其特征在于，所述95%乙醇或乙酸乙酯提取物中，按生药量计算，蒲公英提取物和木香提取物的质量比为1~3：3~1。
17.如权利要求16所述的用于治疗乳腺癌组合物的制备方法，其特征在于，蒲公英提取物和木香提取物的质量比为1：1或2：1。
18.如权利要求16所述的用于治疗乳腺癌组合物的制备方法，其特征在于，水提取物中，按生药量计算，夏枯草提取物、天花粉提取物的质量比为1~3：3~1。
19.如权利要求18所述的用于治疗乳腺癌组合物的制备方法，其特征在于，夏枯草提取物、天花粉提取物的质量比为2：1或3：1。
20.如权利要求16所述的用于治疗乳腺癌组合物的制备方法，其特征在于，按质量百分比，所述组合物处方量为：蒲公英5.35%；木香5.34%；连翘2.37%；红花3.56%；鸡血藤5.94%；牡丹皮8.31%；赤芍1.78%；玄参5.94%；三七5.94%；夏枯草5.54%；天花粉2.77%；昆布23.15%；海藻11.57%；漏芦3.56%；鹿角8.90%。
21.如权利要求1-15任一项中所述的用于治疗乳腺癌组合物的制备方法，其特征在于，所述剂型包括片剂、胶囊。
22.如权利要求21所述的用于治疗乳腺癌组合物的制备方法，其特征在于，所述片剂的制备方法为：取水提取组合物，超微粉组分作为底粉，将两者制成颗粒，将95%乙醇或乙酸乙酯提取物或者提取物纳米乳干燥后制成微丸，将所述颗粒、微丸整粒后压片，包衣，即得。
23.如权利要求21所述的用于治疗乳腺癌组合物的制备方法，其特征在于，所述胶囊的制备方法为：取95%乙醇或乙酸乙酯提取物或提取物纳米乳、水提取物、超微粉，加入糊精、淀粉，混匀制粒，干燥，分装于胶囊中，即得。
24.如权利要求1-15任一项所述的方法制备得到的用于治疗乳腺癌的组合物。
25.如权利要求24所述用于治疗乳腺癌组合物在制备乳腺癌治疗药物中的应用。
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Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1709326A (zh) * 2005-06-23 2005-12-21 修涞贵 一种治疗乳腺增生疾病的浓缩丸制备方法
CN1824021A (zh) * 2005-12-29 2006-08-30 辽宁好护士药业（集团）有限责任公司 乳癖消软胶囊及其制备方法
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Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1709326A (zh) * 2005-06-23 2005-12-21 修涞贵 一种治疗乳腺增生疾病的浓缩丸制备方法
CN1824021A (zh) * 2005-12-29 2006-08-30 辽宁好护士药业（集团）有限责任公司 乳癖消软胶囊及其制备方法
CN108295147A (zh) * 2018-03-08 2018-07-20 安徽金马药业有限公司 一种乳癖消贴膏浸膏的制备工艺方法

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