一种鹿瓜多肽脂质体注射剂
技术领域
本发明涉及一种鹿瓜多肽的新制剂,具体涉及一种鹿瓜多肽脂质体注射剂及其制备方法,属于医药技术领域。
背景技术
鹿瓜多肽由鹿科动物梅花鹿的骨骼和葫芦科植物甜瓜的干燥成熟种子经分别提取后制成,主要含有骨诱导多肽类生物因子、甜瓜籽提取物、多种游离氨基酸和有机钙、磷等成分。
鹿瓜多肽中的骨诱导多肽类生物因子可有效促进机体内影响骨形成和吸收的骨源性生长因子的合成,包括骨形态发生蛋白(BMPs),β-转化生长因子(TGF-β),成纤维细胞生长因子(FGF)等,从而具有多种生物活性,其主要药理作用有:促进细胞有丝分裂、分化作用、趋化作用和溶骨活性。其中BMPs是一组酸性低分子量糖蛋白,作为一种高效骨诱导物质,BMPs是间充质细胞向骨系细胞分化的最初信号分子,能诱导血管周围游动的间充质细胞转化为不可逆性的骨系细胞,即软骨细胞和成骨细胞,从而促进骨痂形成,诱导新骨形成,促进骨折修复;此外,BMPs还可调节细胞外基质成份的改变,并通过与TGF-β和FGF相互之间的协调作用更好地诱导新骨形成,使骨组织更成熟。TGF-β则是一族具有多种功能的蛋白多肽,对成骨细胞及成软骨细胞有促进分化或降低分化的双重调节作用,与多种因子如细胞外基质和其他分化调节生长因子一起协同参与对细胞分化的调节;TGF-β可促进细胞外基质合成,可以直接刺激成纤维细胞外基质的合成,并对其新合成的基质降解有显著抑制作用;对于成骨细胞,TGF-β可促进其台成Ⅰ型胶原、骨粘连素和骨桥蛋白;同时,TGF-β对淋巴细胞和巨噬细胞的作用表明,它即能缓解炎性反应的破坏性,又能协助巨噬细胞来源的某些细胞因子在组织修复中发挥作用。FGF是一组肝素粘合多肽,可刺激细胞的趋向移动、增殖和分化,增加合成胶原的细胞的数量,促进骨胶原蛋白及非胶原蛋白的合成,增加骨钙素的合成。甜瓜籽提取物能降低骨折局部毛细血管通透性,减少炎性渗出,促进局部血运障碍的恢复;同时还能降低全血粘度及红细胞聚集程度,改善骨痂局部的血液循环,为骨细胞提供一个良好的血供环境;另外还能抑制前列腺素的释放,达到止痛效果;在促进骨折早期愈合中。甜瓜籽提取物与补充的骨诱导多肽类生物因子具有协同作用,促进骨源性生长因子的合成。本品还富含的多种游离氨基酸,为骨细胞合成BMPs、TGF-β,FGF等骨源性生物因子提供原料,促进骨源性生物因子的合成。此外有机钙、磷离子可参与钙磷代谢,维持骨容量。
鹿瓜多肽具有调节骨代谢、刺激成骨细胞增殖、促进新骨形成的作用,亦可调节钙鳞代谢,增加骨钙沉积,防止骨质疏松,并具有抗炎、镇痛、抗风湿等作用。临床上鹿瓜多肽用于治疗骨质疏松症、骨折不愈合、风湿类风湿性关节炎、腕舟状缺血性坏死、软组织损伤等。
专利CN1883536A公开了一种口服鹿瓜多肽组合物及其制备方法,口服鹿瓜多肽组合物按重量份数比的多肽和赋形剂组成,其制备方法包括:鹿骨多肽的提取、甜瓜子多肽的提取和口服多肽组合物的制备三个步骤;专利CN101461834A公开了一种鹿瓜多肽药物组合物口服制剂及其制备方法,该方法首先制备鹿骨提取液,接着制备甜瓜子提取液,最后将鹿骨提取液和甜瓜子提取液合并,得到所述的鹿瓜多肽药物组合物口服制剂。然而鹿瓜多肽口服的吸收量少,生物利用度差,导致疗效差,不适合临床应用。
目前上市销售的鹿瓜多肽制剂主要为鹿瓜多肽注射液和鹿瓜多肽冻干粉针剂。专利CN1579542A公开了注射用鹿瓜多肽及其制备工艺,由多肽类物质和赋形剂制备成冻干粉针剂;专利CN1742778A公开了一种注射用鹿瓜多肽药物组合物及其制备方法,它含有鹿骨提取物、甜瓜子提取物和一种或多种赋形剂制成。然而鹿瓜多肽注射液中的肽类物质易聚合成大分子,其中的碱和鞣质可加速这种聚合反应,因此鹿瓜多肽注射液在保存过程中易聚合,导致临床过敏反应增加,同时不利于长期存放;鹿瓜多肽的冻干粉针剂在长期放置过程也存在稳定性差的问题,导致有效成分的含量降低,生物利用度降低,影响了临床应用。
脂质体(liposomes)最早是1965年被英国Banghan等作为研究生物膜的模型提出的。是指将药物包封于类脂质双分子形成的薄膜中间所制成的超微型球状定向药物载体制剂,属于靶向给药系统的一种新剂型。脂质体作为药物载体,具有诸多优点:如脂质体既能包封脂溶性药物,又能包封水溶性药物;减轻变态反应和免疫反应;延缓释放,降低体内消除速度;能有效地保护被包裹药物,提高生物利用度;改变药物在体内的分布,并能靶向性释药,能降低药物的毒副作用;适合多途径给药等。
人们通过研究发现,脂质体作为药物的载体能够控制药物的释放,提高药物靶向性,减少药物毒性和副作用,提高药物疗效。
为了提高鹿瓜多肽的稳定性,增强其靶向性,本发明人对鹿瓜多肽的脂质体注射剂进行研究,取得了预料不到的效果,克服现有的鹿瓜多肽制剂存在的一系列问题,提高药物的稳定性,延长药物在体内的保留时间,长久发挥药效,提高生物利用度,降低毒副作用,降低不良反应的发生率,改进治疗速度和治疗效果。
制备脂质体的挑战在于选择适当的脂质体组成成分和制法。由于脂质体的性质如稳定性、包封率、起效时间、在体内的循环时间、生物利用度和毒副作用等与脂质体的组成直接地密切相关,而脂质体的组成与所要包封的药物性质直接地密切相关,因此,选择什么样的成分形成具有良好品质的鹿瓜多肽脂质体是首要解决的问题。
发明内容
为了形成品质优良的鹿瓜多肽脂质体注射剂,重要的是寻找能与鹿瓜多肽良好相容从而将其良好包封且不渗漏的成膜材料,以及寻找能使脂质体形成稳定注射剂的赋形剂成分。
为了实现上述目的,本发明人进行的大量研究和试验,发现特定重量配比的鹿骨提取物鹿骨多肽、甜瓜子提取物甜瓜子多肽、二豆蔻酰磷脂酰胆碱、胆固醇、泊洛沙姆188、海藻糖或氯化钠能制成品质优异的鹿瓜多肽脂质体注射剂,其中,药物活性成分的包封率高,脂质体粒径小且分布均匀,与现有技术中的鹿瓜多肽注射剂相比,本发明制剂的药物活性成分在体循环中的保留时间显著延长,药物的生物相容性高,生物利用度明显提高,疗效明显提高。
一方面,本发明提供一种鹿瓜多肽脂质体冻干粉针注射剂,其主要由以下重量配比的成分制成:
其中,鹿瓜多肽由鹿骨提取物和甜瓜子提取物组成,两者的比例为1:3-3:1(以鹿骨多肽的重量:甜瓜子多肽的重量计)。
优选地,根据本发明的鹿瓜多肽脂质体冻干粉针注射剂主要由包括以下重量配比的成分制成:
其中,鹿瓜多肽由鹿骨提取物和甜瓜子提取物组成,两者的比例为1:3-3:1(以鹿骨多肽的重量:甜瓜子多肽的重量计)。
一方面,本发明提供一种鹿瓜多肽脂质体注射液,其主要由以下重量配比的成分制成:
其中,鹿瓜多肽由鹿骨提取物和甜瓜子提取物组成,两者的比例为1:3-3:1(以鹿骨多肽的重量:甜瓜子多肽的重量计)。
优选地,根据本发明的鹿瓜多肽脂质体注射液,主要由包括以下重量配比的药物和赋形剂成分制成:
其中,鹿瓜多肽由鹿骨提取物和甜瓜子提取物组成,两者的比例为1:3-3:1(以鹿骨多肽的重量:甜瓜子多肽的重量计)。
作为用于形成脂质体的磷脂,可以使用天然磷脂和合成磷脂。天然磷脂包括磷脂酰乙醇胺、蛋黄卵磷脂、氢化蛋黄卵磷脂、蛋黄磷脂酰甘油、蛋黄磷脂酰丝氨酸、蛋黄磷脂酰肌醇、大豆卵磷脂、氢化大豆卵磷脂、大豆磷脂酰甘油、大豆磷脂酰丝氨酸、和大豆磷脂酰肌醇等。合成磷脂为二油酰磷脂酰胆碱、二硬脂酸磷脂酰胆碱、二棕榈酰磷脂酰胆碱、二豆蔻酰磷脂酰胆碱、二月桂酰磷脂酰胆碱、二油酰磷脂酰甘油、二硬脂酰磷脂酰甘油、二棕榈酰磷脂酰甘油、二肉豆蔻酰磷脂酰甘油、二月桂酰磷脂酰甘油等。
本发明中,根据鹿瓜多肽的特点,发现二豆蔻酰磷脂酰胆碱特别适于作为基础磷脂成膜材料。二豆蔻酰磷脂酰胆碱作为一种合成磷脂,其含量非常高,容易获得,价格低廉。二豆蔻酰磷脂酰胆碱的相变温度较高,易于形成稳定的脂质体膜。
当使用其他磷脂时,难以形成品质优良的脂质体,脂质体的包封率、稳定性和渗漏率等性质差。
为了改善脂质体的稳定性,所用二豆蔻酰磷脂酰胆碱的纯度为98%以上,优选99%以上。
在本发明的鹿瓜多肽脂质体注射剂中,相对于4重量份的鹿瓜多肽而言,二豆蔻酰磷脂酰胆碱的用量为25-100重量份。如果二豆蔻酰磷脂酰胆碱的用量低于25重量份,则无法形成稳定的脂质体;反之,如果二豆蔻酰磷脂酰胆碱的用量的用量高于100重量份,则药物活性成分的包封率下降,注射剂的品质以及疗效降低。
在本发明的鹿瓜多肽脂质体注射剂中,胆固醇和泊洛沙姆188用于调节脂质体的膜稳定性。
胆固醇是一种双亲性分子,与二豆蔻酰磷脂酰胆碱相结合,阻止其凝聚成晶体结构。胆固醇掺入二豆蔻酰磷脂酰胆碱双层,类似于“缓冲剂”一样起到调节膜结构“流动性”的作用。当低于相变温度时,胆固醇可以使膜减少有序排列,增加流动性;当高于相变温度时,胆固醇可以增加膜的有序排列,从而降低膜的流动性。胆固醇能使脂质体双分子层膜固化,从而减少自由基的生成,降低氧化水平,使脂质体稳定性显著增强。
研究表明,脂质体的稳定性与生物利用度有密切的对应关系。稳定性越高,生物利用度越高。因此,本发明的鹿瓜多肽脂质体注射剂的稳定性高,是导致药物生物利用度高的因素之一。
另一方面,本发明人研究发现,在本发明的鹿瓜多肽脂质体注射剂中,相对于4重量份的鹿瓜多肽而言,二豆蔻酰磷脂酰胆碱的用量为25-100重量份,胆固醇为20-150重量份时,所形成的鹿瓜多肽脂质体注射剂的包封率高。
在本发明的鹿瓜多肽脂质体注射剂中,使用泊洛沙姆188来进一步改进脂质体膜的稳定性。泊洛沙姆188是一种新型的非离子表面活性剂,当用于二豆蔻酰磷脂酰胆碱双层膜中时,能提高该双层膜之间的化学能,从而提高脂质体在水性液体中的化学稳定性,进而提高鹿瓜多肽脂质体注射剂的稳定性。
在本发明的鹿瓜多肽脂质体注射剂中,相对于4重量份的鹿瓜多肽而言,泊洛沙姆188的用量为20-100重量份。如果泊洛沙姆188的用量低于20重量份,则由于其用量过低导致对鹿瓜多肽脂质体注射剂的稳定性改进不够,反之,如果泊洛沙姆188的用量高于100重量份,则用于其用量过高而导致脂质体膜易于泄露。
研究发现,当使用上述特定量的鹿瓜多肽、二豆蔻酰磷脂酰胆碱、胆固醇和泊洛沙姆188时,可以得到品质优良的鹿瓜多肽脂质体,其包封率和稳定性都很高,毒性低,生物利用度高。
另一方面,本发明还提供一种鹿瓜多肽脂质体注射剂的制备方法,具体包括如下制备步骤:
(1)取鹿骨,加入2-5倍量的注射用水100℃-125℃热压提取三次,每次1小时,合并提取液,调节pH值至4.0,过滤,将滤液pH值调节至8.5,过滤,然后将滤液的pH值调节至7.0,超滤,收集分子量为小于5KD的超滤液滤液,减压浓缩,冷冻干燥,制得鹿骨提取物,经HPLC法和福林酚法测定鹿骨多肽的含量;
(2)取甜瓜子,加2-5倍的注射用水100℃-125℃热压提取三次,合并提取液,过滤去沉渣,超滤,收集分子量为小于5KD的超滤液滤液,减压浓缩,制得甜瓜子提取物,冷冻干燥,经紫外分光光度法和福林酚法测定甜瓜子多肽的含量;
(3)将二豆蔻酰磷脂酰胆碱、胆固醇和泊洛沙姆188溶于适量的有机溶剂中,然后将将其置于茄形瓶中旋转蒸发,直至形成均匀的薄膜;
(4)将鹿骨提取物、甜瓜子提取物溶于适量的缓冲盐溶液中,然后将缓冲盐溶液和适量玻璃珠加入上述茄形瓶中搅拌数分钟,再在30℃水浴中搅拌数小时即得到鹿瓜多肽脂质体;
(5)向上述制得的鹿瓜多肽脂质体中加入海藻糖,用探头超声10分钟,定容,过0.22um微孔滤膜过滤,分装,冷冻干燥,轧盖,制得鹿瓜多肽脂质体冻干粉针注射剂;
或者,向上述制得的鹿瓜多肽脂质体中加入氯化钠,用探头超声10分钟,定容,过0.22um微孔滤膜过滤,快速冷冻,然后恢复到室温,灌封,灭菌,制得鹿瓜多肽脂质体注射液。
上述所述的制备方法,其中所述的有机溶剂选自乙醇、甲醇、丙酮、氯仿、二氯甲烷、乙醚和乙酸乙酯中的一种或几种,优选为乙酸乙酯。
上述所述的制备方法,其中所述的缓冲盐溶液选自磷酸盐缓冲溶液、枸橼酸盐缓冲溶液、碳酸盐缓冲溶液、硼酸盐缓冲溶液、磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲溶液、Tris-盐酸缓冲溶液中的一种。
上述所述的制备方法,其中所述的缓冲盐溶液为pH为6.2的磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲溶液。
制备脂质体的挑战在于如何使脂质体膜形成适当大小、适当结构材料的包封率高的囊泡。而且这些材料在形成脂质体不漏出。
本发明人通过选择适当的材料成分、采用合适的制备工艺,获得了品质优良的鹿瓜多肽脂质体注射剂,脂质体粒径小,粒径分布均匀,包封率高,稳定性高。
研究发现,脂质体的大小是影响脂质体在体内分布和停留时间的主要因素,脂质体的粒径越小,体内停留时间越长。通过本发明方法制备的鹿瓜多肽脂质体颗粒小,粒径大小分布均匀,这是其在体内代谢率低、生物利用度高的因素之一。
附图说明
以下,结合附图来详细说明本发明的实施方案,图1是鹿瓜多肽注射剂的血药浓度-时间曲线。表示实施例1-3中制备的鹿瓜多肽脂质体注射剂、对比例1-3中制备的鹿瓜多肽脂质体注射剂和市售鹿瓜多肽注射剂的血药浓度与时间的关系曲线。
其中:
具体实施方式
以下实施例是对本发明的进一步说明,但绝不是对本发明范围的限制。下面参照实施例进一步详细阐述本发明,但是本领域技术人员应当理解,本发明并不限于这些实施例以及使用的制备方法。而且,本领域技术人员根据本发明的描述可以对本发明进行等同替换、组合、改良或修饰,但这些都将包括在本发明的范围内。
实施例1鹿瓜多肽脂质体冻干粉针剂
制备工艺:
(1)取鹿骨2kg,加入5L注射用水100℃-125℃热压提取三次,每次1小时,合并提取液,调节pH值至4.0,过滤,将滤液pH值调节至8.5,过滤,然后将滤液的pH值调节至7.0,超滤,收集分子量为小于5KD的超滤液滤液,减压浓缩,冷冻干燥,制得鹿骨提取物4.77g,经HPLC法和福林酚法测定鹿瓜多肽的含量为89.8%,鹿骨多肽总量4.28g;
(2)取1kg甜瓜子,加2L注射用水100℃-125℃热压提取三次,合并提取液,过滤去沉渣,超滤,收集分子量为小于5KD的超滤液滤液,减压浓缩,冷冻干燥,制得甜瓜子提取物1.87g,经紫外分光光度法和福林酚法测定甜瓜子多肽的含量85.6%,甜瓜子多肽总量1.6g;
(3)将100g二豆蔻酰磷脂酰胆碱、30g胆固醇和30g泊洛沙姆188溶于800ml乙酸乙酯中,然后将将其置于茄形瓶中旋转蒸发,直至形成均匀的薄膜;
(4)将3g鹿骨提取物(按鹿骨多肽计)、lg甜瓜子提取物(按甜瓜子多肽计)溶于800mlpH为6.2的磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲溶液,然后将缓冲盐溶液和适量玻璃珠加入上述茄形瓶中搅拌数分钟,再在30℃水浴中搅拌数小时即得到鹿瓜多肽脂质体;
(5)向上述制得的鹿瓜多肽脂质体中加入40g海藻糖,用探头超声10分钟,用pH为6.2的磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲溶液定容至1000ml,过0.22um微孔滤膜过滤,分装,冷冻干燥,轧盖,制得1000瓶鹿瓜多肽脂质体冻干粉针剂。
实施例2鹿瓜多肽脂质体冻干粉针剂
制备工艺:
(1)取鹿骨6kg,加入15L注射用水100℃-125℃热压提取三次,每次1小时,合并提取液,调节pH值至4.0,过滤,将滤液pH值调节至8.5,过滤,然后将滤液的pH值调节至7.0,超滤,收集分子量为小于5KD的超滤液滤液,减压浓缩,冷冻干燥,制得鹿骨提取物12.12g,经HPLC法和福林酚法测定鹿瓜多肽的含量为86.2%,鹿骨多肽总量10.45g;
(2)取10kg甜瓜子,加20L注射用水100℃-125℃热压提取三次,合并提取液,过滤去沉渣,超滤,收集分子量为小于5KD的超滤液滤液,减压浓缩,冷冻干燥,制得甜瓜子提取物10.83g,经紫外分光光度法和福林酚法测定甜瓜子多肽的含量90.3%,甜瓜子多肽总量9.78g;
(3)将100g二豆蔻酰磷脂酰胆碱、80g胆固醇和80g泊洛沙姆188溶于800ml乙酸乙酯中,然后将将其置于茄形瓶中旋转蒸发,直至形成均匀的薄膜;
(4)将8g鹿骨提取物(按鹿骨多肽计)、8g甜瓜子提取物(按甜瓜子多肽计)溶于800mlpH为6.2的磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲溶液,然后将缓冲盐溶液和适量玻璃珠加入上述茄形瓶中搅拌数分钟,再在30℃水浴中搅拌数小时即得到鹿瓜多肽脂质体;
(5)向上述制得的鹿瓜多肽脂质体中加入20g海藻糖,用探头超声10分钟,用pH为6.2的磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲溶液定容至1000ml,过0.22um微孔滤膜过滤,分装,冷冻干燥,轧盖,制得1000瓶鹿瓜多肽脂质体冻干粉针剂。
实施例3鹿瓜多肽脂质体注射液
制备工艺:
(1)取鹿骨1kg,加入3L注射用水100℃-125℃热压提取三次,每次1小时,合并提取液,调节pH值至4.0,过滤,将滤液pH值调节至8.5,过滤,然后将滤液的pH值调节至7.0,超滤,收集分子量为小于5KD的超滤液滤液,减压浓缩,冷冻干燥,制得鹿骨提取物1.43g,经HPLC法和福林酚法测定鹿瓜多肽的含量为92.3%,鹿骨多肽总量1.32g;
(2)取3kg甜瓜子,加10L注射用水100℃-125℃热压提取三次,合并提取液,过滤去沉渣,超滤,收集分子量为小于5KD的超滤液滤液,减压浓缩,冷冻干燥,制得甜瓜子提取物3.92g,经紫外分光光度法和福林酚法测定甜瓜子多肽的含量89.7%,甜瓜子多肽总量3.52g;
(3)将60g二豆蔻酰磷脂酰胆碱、150g胆固醇和100g泊洛沙姆188溶于1000ml乙酸乙酯中,然后将将其置于茄形瓶中旋转蒸发,直至形成均匀的薄膜;
(4)将8g鹿骨提取物(按鹿骨多肽计)、8g甜瓜子提取物(按甜瓜子多肽计)溶于1200mlpH为6.2的磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲溶液,然后将缓冲盐溶液和适量玻璃珠加入上述茄形瓶中搅拌数分钟,再在30℃水浴中搅拌数小时即得到鹿瓜多肽脂质体;
(5)向上述制得的鹿瓜多肽脂质体中加入18g氯化钠,用探头超声10分钟,用pH为6.2的磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲溶液定容至2000ml,过0.22um微孔滤膜过滤,快速冷冻,然后恢复到室温,灌封,灭菌,制得1000支鹿瓜多肽脂质体注射液。
对比例1-3鹿瓜多肽脂质体注射剂的制备
采用分别与实施例1-3相同的生产工艺,将如下表1-3中所示的对比例1-3中的成分分别制成鹿瓜多肽脂质体注射剂:
表1对比例1-3中所用成分
注:*CN101411690B;#CN1437931A。
试验例1脂质体粒径的测定
室温条件下,取实施例和对比例的鹿瓜多肽脂质体注射剂,以生理盐水配成0.1%的溶液,置于Submicron Particle Sizer Model 370粒径检测仪的样品管中,测定粒径大小分布及平均粒径;用投射电子显微镜观察粒子形态。结果如表2:
表2粒径检测结果
实施例 |
平均粒径 |
外观 |
实施例1 |
306.5nm |
球状,均匀 |
实施例2 |
317.4nm |
球状,均匀 |
实施例3 |
328.3nm |
球状,均匀 |
对比例1 |
697.5nm |
不均匀,杂乱 |
对比例2 |
706.6nm |
不均匀,杂乱 |
对比例3 |
711.8nm |
不均匀,杂乱 |
由以上结果可知,实施例1-3制得的鹿瓜多肽脂质体粒径均匀,显球形,大小均一;对比例1-3制得的鹿瓜多肽脂质体粒径不均匀,形状不定,大小不一。
试验例2包封率的测定
将实施例和对比例制备的鹿瓜多肽脂质体制剂加水溶解稀释成0.1%的溶液,高速离心,5000r/min,离心20分钟,取上清液,用乙醇溶解,HPLC法测定鹿骨多肽和甜瓜子多肽的总含量,计算包封率,结果如表3:
表3包封率测定结果
由表3可知,实施例1-3制备的脂质体制剂的包封率显著的高于对比例1-3的脂质体制剂的包封率。说明当使用本发明所用成分以外的成分,或者当成分用量在本发明限定的成分用量范围外,所得脂质体的脂质体包封率低于本发明。
试验例3稳定性考察
将本发明实施例1-3和对比例1-3制备的样品和上市注射用鹿瓜多肽(批号:20110701,黑龙江迪龙制药有限公司)分别置于高温40℃、相对湿度75%的条件下6个月,进行加速试验考察,试验结果示于下表4中。
表4加速试验结果
由以上结果可知,加速6月时,对比例和上市制剂含量降低;而本发明的样品性状、含量变化均不明显,说明本发明的产品稳定性好。
试验例4渗漏率试验
取试验例1-3和对比例1-3制备的样品,分别室温条件下,分别于0天、30天、60天、90天和180天,定期检查,测定鹿瓜多肽的包封率,与0天包封的药量比较,计算渗漏率,结果见表5:
表5渗漏率试验结果
时间 |
实施例1 |
实施例2 |
实施例3 |
对比例1 |
对比例2 |
对比例3 |
0天 |
0.62 |
0.56 |
0.55 |
1.47 |
1.51 |
1.77 |
30天 |
0.69 |
0.60 |
0.59 |
2.77 |
2.85 |
2.94 |
60天 |
0.79 |
0.74 |
0.76 |
5.81 |
5.77 |
5.87 |
90天 |
0.81 |
0.83 |
0.86 |
8.98 |
9.56 |
10.11 |
180天 |
0.93 |
0.96 |
0.91 |
14.29 |
16.66 |
19.68 |
由以上试验结果可知,本发明实施例制备的样品在长期储存过长中渗漏率变化不大,而对比例的样品渗漏率逐渐增大,脂质体渗漏严重,这说明本发明制备的鹿瓜多肽脂质体注射剂具有较高的稳定性。
试验例5血药浓度的测定
将42只大鼠随机分成7组,每组分别静脉注射给药实施例1-3及对比例1-3中制备的注射剂,以及市售注射用鹿瓜多肽(批号:20110701,黑龙江迪龙制药有限公司),注射量为1mg鹿瓜多肽。给药后分别于0.5h、1h、1.5h、2h、3h、6h、8h、12h和24h,采血,血样经处理后,以HPLC-MS法测定血药浓度。绘制实施例1-3中制备的鹿瓜多肽脂质体注射剂、对比例1-3中制备的鹿瓜多肽脂质体注射剂和市售鹿瓜多肽注射剂的血药浓度与时间的关系曲线,示于附图1中。
由图1可知,与对比例1-3中制备的鹿瓜多肽脂质体注射剂和市售鹿瓜多肽注射剂相比,本发明实施例1-3中制备的鹿瓜多肽脂质体注射剂具有以下优点:在体内的消除速度减缓,在体循环中分布时间延长,达到了改进的缓释效果,生物利用度增加。
工业实用性
由上述实施例以及实验例的结果可知,本发明的鹿瓜多肽脂质体具有良好的外观,颗粒小,粒径均匀,包封率高,稳定性高,渗漏率低,在体内的停留时间长,生物利用度高,具有良好的工业应用价值。
以上通过具体实施方式和实施例对本发明进行了详细说明,不过应理解,这些说明并不对本发明的范围构成任何限制,在不偏离本发明的精神和保护范围的情况下,可以对本发明的技术方案及其实施方式进行多种修饰、改进和替换,这些均因落入本发明的保护范围内。
本申请中提及或引用的各个参考文献,在此全文引入作为参考。