CN102366411B - 一种地塞米松棕榈酸酯脂质体注射液 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种地塞米松棕榈酸酯脂质体注射液及其制法，该脂质体注射液由特定重量配比的地塞米松棕榈酸酯、二鲸蜡磷脂、胆固醇、吐温80、葡萄糖和右旋糖酐制成。本发明的脂质体注射液具有良好的制剂稳定性，冷冻过程中脂质体不会因融合、冰晶等发生破裂，长期储存后，脂质体同样保持良好的包封率；本发明提高了地塞米松棕榈酸酯的溶解度，提高了制剂产品的质量，减少了毒副作用，增加了药物在体循环中的保留时间，提高了药物的生物利用度，疗效明显提高；并且制备方法简单，适合于工业化大生产。

Description

一种地塞米松棕榈酸酯脂质体注射液

技术领域

本发明涉及一种地塞米松棕榈酸酯的新制剂，具体涉及一种地塞米松棕榈酸酯脂质体注射液及其制法，属于医药技术领域。

背景技术

地塞米松棕榈酸酯(Dexamethasone palmitate)，化学名称9-氟-11β，17，21-三羟基-16a-甲基孕-1，4-二烯-3，20-二酮-21-棕榈酸酯，分子式C₃₈H₅₉FO₆，分子量630.87，结构式：

地塞米松棕榈酸酯是非特异性甾体类抗炎药，用于慢性风湿性关节炎的治疗。该药于1988年上市。临床研究表明，该药具有高度脂溶性，是“靶向”治疗剂，与迄今的甾体药物不同，虽静脉给药而有局部治疗作用。

目前国内外上市的地塞米松棕榈酸酯剂型主要为注射液，普通工艺所制备的地塞米松棕榈酸酯注射液，物理和化学性质稳定性差，长期存放药品质量会下降而且还会生成一些杂质，带来毒副作用，给临床使用留下了隐患。

专利CN1596899A公开了一种地塞米松棕榈酸酯冻干乳剂，它是在冻干品中含有效剂量的地塞米松棕榈酸酯作为有效成分，并含有油相、乳化剂、稳定剂、PH调节剂、冻干保护剂等药用辅料。将药液通过加入保护剂冻干成固体，使用前，根据需要加入注射用水，经水合震荡，复原成乳剂。然而，乳剂的制备需要加入大量的有机助表面活性剂，增加制造成本；并且使用时稀释后自动分散均匀性差，影响使用效果。

在药物载体输送系统中，微乳、微球、纳米粒、脂质体、药质体等亚微粒的研究已经成为药物新剂型研究中非常活跃的领域。将药物包封于这些亚微粒中可以改变药物在体内的分布，增加药物在靶器官的分布量，从而提高疗效，减轻毒副作用。

在靶向给药系统中，脂质体的研究较为广泛，脂质体在体内具有良好的靶向性和生物相容性。

作为一种新型药物制剂，脂质体制剂具有以下优点：(1)具有缓释作用：活性成分缓慢释放，延缓肾排泄和代谢，从而延长作用时间，提高质量效果；(2)降低药物毒性；(3)增加药物的溶解性，提高制剂质量；(4)具有靶向性：脂质体所载的药物在肝、脾网状内皮系统脏器局部维持高浓度，从而起到药物器官靶向性作用；(5)具有对活性药物成分的保护作用。

脂质体(Liposome)最初是由英国学者Bangham和Standlish将磷脂分散在水中进行电镜观察时发现的。磷脂分散在水中自然形成多层囊泡，每层均未脂质的双分子层；囊泡中央和各层之间被水相隔开，双分子层厚度约为4nm。后来，将这种具有类以生物膜结构的双分子小囊称为脂质体。脂质体可分为多室脂质体和胆识脂质体。单室脂质体又分为小单室脂质体和大单室脂质体。小单室脂质体为球形，尺寸一般为20-50纳米；大单室脂质体的尺寸为微米数量级。

1971年英国莱门等人开始将脂质体用于药物载体，主要作用机理是将药物粉未或溶液包裹在脂质体双层脂质膜所封闭的水相中或嵌入脂质体双层脂质膜中，这种微粒具有类细胞结构，进入人体内主药被网状内皮系统吞噬而激活机体的自身免疫功能，并改变被包封药物的体内分布，使药物主要在肝、脾、肺和骨髓等组织器官中积蓄，从而提高药物的治疗指数，减少药物的治疗剂量和降低药物的毒性。

近年来，随着生物技术的不断进展，脂质体制备工艺逐步完善，脂质体作用机制进一步阐明，加之脂质体适合体内降解、无毒性和无免疫原性，特别是大量试验数据证明脂质体作为药物载体可以提高药物治疗指数、降低药物毒性和减少药物副作用，并减少药物剂量等优点。

鉴于现有技术中地塞米松棕榈酸酯注射液的不足，以及目前对于地塞米松棕榈酸酯脂质体注射液存在需求，本发明人通过创造性的研究获得地塞米松棕榈酸酯的脂质体注射液制剂。

发明内容

本发明人经过锐意研究发现，通过选用特定重量配比的地塞米松棕榈酸酯、二鲸蜡磷脂、胆固醇、吐温80、葡萄糖和右旋糖酐，可以形成品质优异的地塞米松棕榈酸酯脂质体注射液，提高其生物利用度，从而完成本发明。

为了形成品质优良的地塞米松棕榈酸酯脂质体注射液，重要的是寻找能与地塞米松棕榈酸酯良好相容从而将其良好包封且不渗漏的成膜材料，以及寻找能使脂质体形成稳定注射液的赋形剂成分。

为了实现上述目的，本发明人进行的大量研究和实现，发现特定重量配比的地塞米松棕榈酸酯、二鲸蜡磷脂、胆固醇、吐温80、葡萄糖和右旋糠酐能制成地塞米松棕榈酸酯脂质体注射液，其中，作为药物活性成分的地塞米松棕榈酸酯的包封率高，脂质体粒径小且分布均匀，与现有技术中的地塞米松棕榈酸酯注射液相比，本发明制剂的药物活性成分在体循环中的保留时间显著延长，药物的生物相容性高，生物利用度明显提高，疗效明显提高。

一方面，本发明提供一种地塞米松棕榈酸酯脂质体注射液，其主要由以下重量配比的组分制成：

优选地，本发明提供的地塞米松棕榈酸酯脂质体注射液，主要由以下重量配比的组分制成：

优选地，二鲸蜡磷脂与胆固醇的重量之比为1-2∶1，更优选，二鲸蜡磷脂与胆固醇的重量之比为1.3-1.7∶1。

作为用于形成脂质体的磷脂，可以使用天然磷脂和合成磷脂。在本发明中，作为药物活性成分的地塞米松棕榈酸酯，其水溶性差，脂溶性良好。针对地塞米松棕榈酸酯的特点，本发明人通过研究发现二鲸蜡磷脂特别适于作为基础磷脂成膜材料。

在本发明的地塞米松棕榈酸酯脂质体注射液中，相对于4重量份的地塞米松棕榈酸酯而言，二鲸蜡磷脂的用量为80-240重量份。如果二鲸蜡磷脂的用量低于80重量份，则无法形成稳定的脂质体；反之，如果二鲸蜡磷脂的用量的用量高于240重量份，则作为药物活性成分的地塞米松棕榈酸酯的包封率下降，注射液的品质以及疗效降低。

然而，二鲸蜡磷脂的相变温度较高，易于形成稳定的脂质体膜。当使用其他磷脂时，难以形成品质优良的脂质体，脂质体的包封率、稳定性、和渗漏率等性质差。本发明的地塞米松棕榈酸酯脂质体注射液中，必须加入胆固醇和吐温80用于调节脂质体的膜稳定性。

胆固醇是一种双亲性分子，与二鲸蜡磷脂相结合，阻止其凝聚成晶体结构。胆固醇掺入二鲸蜡磷脂双层，类似于“缓冲剂”一样起到调节膜结构“流动性”的作用。当低于相变温度时，胆固醇可以使膜减少有序排列，增加流动性；当高于相变温度时，胆固醇可以增加膜的有序排列，从而降低膜的流动性。胆固醇能使脂质体双分子层膜固化，从而减少自由基的生成，降低氧化水平，使脂质体稳定性显著增强。

本发明人经过研究发现，当二鲸蜡磷脂与胆固醇的重量比为1-2∶1时，能形成稳定的地塞米松棕榈酸酯脂质体。当二鲸蜡磷脂与胆固醇的重量比高于2∶1时，膜稳定性降低，地塞米松棕榈酸酯易于渗漏；当二鲸蜡磷脂与胆固醇的重量比低于1∶1时，地塞米松棕榈酸酯脂质体膜流动性过高，被包裹在脂质体内的地塞米松棕榈酸酯易于释放。此外，研究发现，当二鲸蜡磷脂与胆固醇的重量比为1-2∶1时，所形成的脂质体毒性低。

研究表明，脂质体的稳定性与生物利用度有密切的对应关系。稳定性越高，生物利用度越高。因此，本发明的地塞米松棕榈酸酯脂质体注射液的稳定性高，是导致药物生物利用度高的因素之一。

另一方面，本发明人研究发现，在本发明的地塞米松棕榈酸酯脂质体注射液中，相对于4重量份的地塞米松棕榈酸酯而言，二鲸蜡磷脂的用量为80-240重量份，胆固醇为80-120重量份，且二鲸蜡磷脂与胆固醇的重量比为1-2∶1，所形成的地塞米松棕榈酸酯脂质体注射液的包封率高。

在本发明的地塞米松棕榈酸酯脂质体注射液中，使用吐温80来进一步改进脂质体膜的稳定性。吐温80(聚山梨醇80)是一种非离子表面活性剂，当用于磷脂酰乙醇胺双层膜中时，能提高该双层膜之间的化学能，从而提高脂质体在水性液体中的化学稳定性，进而提高地塞米松棕榈酸酯脂质体注射液的稳定性。

在本发明的地塞米松棕榈酸酯脂质体注射液中，相对于4重量份的地塞米松棕榈酸酯而言，吐温80的用量为30-100重量份。如果吐温80的用量低于30重量份，则由于其用量过低导致对地塞米松棕榈酸酯脂质体注射液的稳定性改进不够，反之，如果吐温80的用量高于100重量份，则用于其用量过高而导致脂质体膜易于泄露。

研究发现，当使用上述特定量的地塞米松棕榈酸酯、二鲸蜡磷脂、胆固醇和吐温80时，可以得到品质优良的地塞米松棕榈酸酯脂质体，其包封率和稳定性都很高，毒性低，生物利用度高。

在本发明的地塞米松棕榈酸酯脂质体注射液中，使用葡萄糖和右旋糠酐作为赋形剂，用于形成稳定的注射液。

本发明的地塞米松棕榈酸酯脂质体注射液，其地塞米松棕榈酸酯的规格可以为lml∶4mg(注射液体积∶地塞米松棕榈酸酯重量)。

另一方面，本发明还提供一种地塞米松棕榈酸酯脂质体注射液的制备方法，具体包括如下制备步骤：

(1)将二鲸蜡磷脂、胆固醇、吐温80溶于适量的缓冲盐溶液中，制成空白脂质体；

(2)将上述制备的空白脂质体经流通蒸汽灭菌处理，然后超声处理两次，每次15分钟；

(3)无菌条件下，向熔融状态的脂质体中加入地塞米松棕榈酸酯，不断搅拌下加入葡萄糖和右旋糖酐；

(4)0.45μm微孔滤膜过滤，快速冷冻，然后恢复到室温，灌装，即得地塞米松棕榈酸酯脂质体注射液。

上述所述的制备方法，其中所述的缓冲盐溶液选自磷酸盐缓冲溶液、枸橼酸盐缓冲溶液、碳酸盐缓冲溶液、硼酸盐缓冲溶液中的一种，优选为pH为6.5的枸橼酸盐缓冲溶液。

上述所述的制备方法，其中步骤(3)中所述的熔融状态脂质体的温度优选为65℃。

上述所述的制备方法，其中步骤(4)中所述的快速冷冻的温度优选为-80℃。

制备脂质体的挑战在于如何使脂质体膜形成适当大小、适当结构材料的包封率高的囊泡。而且这些材料在形成脂质体不漏出。

本发明人通过选择适当的材料成分、采用合适的制备工艺，获得了品质优良的地塞米松棕榈酸酯脂质体注射液，脂质体粒径小，粒径分布均匀，包封率高，稳定性高。

研究发现，脂质体的大小是影响脂质在体内分布和停留时间的主要因素，脂质体的粒径越小，体内停留时间越长。通过本发明方法制备的的地塞米松棕榈酸酯脂质体颗粒小，粒径大小分布均匀，这是其在体内代谢率低、生物利用度高的因素之一。

有益效果

本发明的脂质体注射液减少了毒副作用，提高了制剂产品质量，具有良好的制剂稳定性，冷冻过程中脂质体不会因脱水、融合、冰晶等发生破裂，长期储存后，脂质体同样保持良好的包封率。

通过本发明方法制得的地塞米松棕榈酸酯脂质体注射液，提高了地塞米松棕榈酸酯的溶解度，提高了制剂产品的质量，减少了毒副作用，增加了药物在体循环中的保留时间，提高了药物的生物利用度，疗效明显提高；并且制备方法简单，适合于工业化大生产。

附图说明

以下，结合附图来详细说明本发明的实施方案，其中：

图1是地塞米松棕榈酸酯脂质体注射液的血药浓度-时间曲线。

曲线1表示上市例血药浓度-时间曲线。

曲线2表示实旋例1血药浓度-时间曲线。

曲线3表示实施例2血药浓度-时间曲线

曲线4表示实施例3血药浓度-时间曲线

曲线5表示对比例1血药浓度-时间曲线

曲线6表示对比例2血药浓度-时间曲线

曲线7表示对比例3血药浓度-时间曲线

具体实施方式

以下通过具体优选的实施例对本发明进行进一步说明。这些实施例仅是说明性的，并不应理解为对本发明的限制。

实施例1地塞米松棕榈酸酯脂质体注射液的制备

所用成分及其重量如下：

采用如下制备工艺制备地塞米松棕榈酸酯脂质体注射液：

(1)将80g二鲸蜡磷脂、80g胆固醇、100g吐温80溶于800ml缓冲盐溶液中，制成空白脂质体；

(2)将上述制备的空白脂质体经流通蒸汽灭菌处理，然后超声处理两次，每次15分钟；

(3)无菌条件下，向60℃熔融状态的脂质体中加入4g地塞米松棕榈酸酯，不断搅拌下加入30g葡萄糖和120g右旋糖酐；

(4)0.45μm微孔滤膜过滤，-80℃快速冷冻，然后恢复到室温，补充无菌水至1000ml，灌装，制得地塞米松棕榈酸酯脂质体注射液1000瓶。

实施例2地塞米松棕榈酸酯脂质体注射液的制备

所用成分及其重量如下：

采用如下制备工艺制备地塞米松棕榈酸酯脂质体注射液：

(1)将200g二鲸蜡磷脂、120g胆固醇、100g吐温80溶于800ml缓冲盐溶液中，制成空白脂质体；

(2)将上述制备的空白脂质体经流通蒸汽灭菌处理，然后超声处理两次，每次15分钟；

(3)无菌条件下，向60℃熔融状态的脂质体中加入4g地塞米松棕榈酸脂，不断觉拌下加入60g葡萄糖和60g右旋糖酐；

(4)0.45μm微孔滤膜过滤，-80℃快速冷冻，然后恢复到室温，补充无菌水至1000ml，灌装，制得地塞米松棕榈酸酯脂质体注射液1000瓶。

实施例3地塞米松棕榈酸酯脂质体注射液的制备

所用成分及其重量如下：

采用如下制备工艺制备地塞米松棕榈酸酯脂质体注射液：

(1)将150g二鲸蜡磷脂、100g胆固醇、50g吐温80溶于800ml缓冲盐溶液中，制成空白脂质体；

(2)将上述备的空白脂质体经流通蒸汽灭菌处理，然后超声处理两次，每次15分钟；

(3)无菌条件下，向60℃熔融状态的脂质体中加入4g地塞米松棕榈酸酯，不断搅拌下加入40g葡萄糖和80g右旋糖酐；

(4)0.45μm微孔滤膜过滤，-80℃快速冷冻，然后恢复到室温，补充无菌水至1000ml，灌装，制得地塞米松棕榈酸酯脂质体注射液1000瓶。

对比例1-3地塞米松棕榈酸酯脂质体注射液的制备

将如下表1中所示的对比例1-3中的成分分别采用与实施例1-3中相同的生产工艺，制成地塞米松棕榈酸酯脂质体注射液：

表1对比例1-3中所用成分

其中，“/”表示未使用。

试验例1脂质体粒径的测定

室温条件下，取实施例1-3和对比例1-3中的地塞米松棕榈酸酯脂质体注射液，置于Submicron Particle Sizer Model 370粒径检测仪的样品管中，测定粒径大小分布及平均粒径；用投射电子显微镜观察粒子形态。结果示于下表2中。

表2脂质体粒径检测结果

从表2可知，实施例1-3制得的固体脂质纳米粒粒径均匀，显球形，大小均一；对比例1-3制得的固体脂质纳米粒粒径不均匀，形状不定，大小不一。

具体而言，即使在采用同样的生产工艺时，实施例1-3中所得地塞米松棕榈酸酯脂质体的颗粒外观及其平均粒径明显优于对比例1-3中所得的地塞米松棕榈酸酯脂质体。说明当使用本发明所用成分以外的成分时，或者当成分用量在本发明限定的成分用量范围外时，所得地塞米松棕榈酸酯脂质体的外观劣于本发明，平均粒径明显大出很多。

试验例2包封率的测定

将实施例1-3和对比例1-3中制备的地塞米松棕榈酸脂质体注射液以5000r/min的转速高速离心，离心20分钟，取上清液，用甲醇溶解，HPLC法测地塞米松棕榈酸酯含量，计算包封率，结果示于下表3中。

表3包封率测定结果

由表3可知，实施例1-3制备的脂质体制剂的包封率显著的高于对比例1-3的脂质体制剂的包封率。说明当使用本发明所用成分以外的成分时，或者当成分用量在本发明限定的成分用量范围外时，所得脂质体的脂质体包封率低于本发明。

试验例3稳定性考察

将本发明实施例1-3、对比例1-3制备的样品和上市地塞米松棕榈酸酯注射液(批号：H200103464，北京托毕西药业有限公司)分别置于高温40℃、相对湿度75％的条件下6个月，进行加速试验考察，实验结果示于下表4中。

表4加速试验结果

由表4可知，加速6月时，上市和对比例制剂含量降低，有关物质升高；而本发明的样品性状、含量和有关物质变化均不明显，说明本发明的产品稳定性好。

试验例4渗漏率试验

取试验例1-3和对比例1-3制备的样品，在室温条件下，分别于0天、30天、60天、90天和180天，定期检查，测定包封率，与0天包封的药量比较，计算渗漏率，结果示于下表5中。

表5渗漏率试验结果

由表5可知，长期储存时，本发明实施例1-3中制备的地塞米松棕榈酸酯脂质体注射液渗漏率变化不大，而对比例1-3中制备的注射液渗漏率逐渐增大，脂质体渗漏严重，这说明本发明制备的地塞米松棕榈酸酯脂质体注射液具有更高的稳定性。

试验例5血药浓度的测定

将35只大鼠随机分成7组，每组分别注射给药实施例1-3及对比例1-3中制备的注射液，以及市售地塞米松棕榈酸酯注射液(批号：H20103464，北京托毕西药业有限公司)，注射量为0.4mg地塞米松棕榈酸酯。给药后分别于0.5h、1h、1.5h、2h、3h、6h、8h、12h和24h，采血，血样经处理后，以HPLC-MS法测定血药浓度。绘制实施例1-3中制备的地塞米松棕榈酸酯脂质体注射液、对比例1-3中制备的地塞米松棕榈酸酯脂质体注射液和市售地塞米松棕榈酸酯注射液的血药浓度与时间的关系曲线，示于附图1中。

由图1可知，与对比例1-3中制备的地塞米松棕榈酸酯脂质体注射液和市售地塞米松棕榈酸酯脂质体注射液相比，本发明实施例1-3中制备的地塞米松棕榈酸酯脂质体注射液具有以下优点：在体内的消除速度减缓，在体循环中分布时间延长，达到了改进的缓释效果，生物利用度增加。

工业实用性

由上述实旋例以及实验例的结果可知，本发明的地塞米松棕榈酸酯脂质体具有良好的外观，颗粒小，粒径均匀，包封率高，稳定性高，渗漏率低，在体内的停留时间长，生物利用度高，具有良好的工业应用价值。

以上通过具体实旋方式和实施例对本发明进行了详细说明，不过应理解，这些说明并不对本发明的范围构成任何限制，在不偏离本发明的精神和保护范围的情况下，可以对本发明的技术方案及其实施方式进行多种修饰、改进和替换，这些均因落入本发明的保护范围内。

本申请中提及或引用的各个参考文献，在此全文引入作为参考。

Claims (9)

1.一种地塞米松棕榈酸酯脂质体注射液，其主要由以下重量配比的组分成分制成：

其中，二鲸蜡磷脂与胆固醇的重量之比为1-2∶1。

2.根据权利要求1所述的地塞米松棕榈酸酯脂质体注射液，其主要由以下重量配比的组分制成：

其中，二鲸蜡磷脂与胆固醇的重量之比为1-2∶1。

3.根据权利要求1-2中任一项所述的地塞米松棕榈酸酯脂质体注射液，其中地塞米松棕榈酸酯的规格为1ml注射液体积∶4mg地塞米松棕榈酸酯重量。

4.一种制备权利要求1所述的地塞米松棕榈酸酯脂质体注射液的方法，其特征在于包括如下步骤：

(1)将二鲸蜡磷脂、胆固醇、吐温80溶于适量的缓冲盐溶液中，制成空白脂质体；

(2)将上述制备的空白脂质体经流通蒸汽灭菌处理，然后超声处理两次，每次15分钟；

(3)无菌条件下，向熔融状态的脂质体中加入地塞米松棕榈酸酯，不断搅拌下加入葡萄糖和右旋糠酐；

(4)0.45μm微孔滤膜过滤，快速冷冻，然后恢复到室温，灌装，即得地塞米松棕榈酸酯脂质体注射液。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于所述的缓冲盐溶液是选自磷酸盐缓冲溶液、枸橼酸盐缓冲溶液、碳酸盐缓冲溶液、硼酸盐缓冲溶液中的一种。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于所述的缓冲盐溶液为pH为6.5的枸橼酸盐缓冲溶液。

7.根据权利要求4所述的方法，其特征在于步骤(3)中所述的熔融状态脂质体的温度为65℃。

8.根据权利要求4所述的方法，其特征在于步骤(4)中所述的快速冷冻的温度为-80℃。

9.根据权利要求1所述的地塞米松棕榈酸酯脂质体注射液在制备用于治疗慢性风湿性关节炎的药物中的用途。

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