CN103040722B

CN103040722B - 一种盐酸甲砜霉素甘氨酸酯脂质体注射剂

Info

Publication number: CN103040722B
Application number: CN201210549066.7A
Authority: CN
Inventors: 王平
Original assignee: HAINAN SHENGXIN MEDICAL TECHNOLOGY Co Ltd
Current assignee: HAINAN SHENGXIN MEDICAL TECHNOLOGY CO., LTD.
Priority date: 2012-12-17
Filing date: 2012-12-17
Publication date: 2014-07-02
Anticipated expiration: 2032-12-17
Also published as: CN103040722A

Abstract

本发明涉及一种盐酸甲砜霉素甘氨酸酯脂质体注射剂及其制法。该脂质体注射剂由特定重量配比的盐酸甲砜霉素甘氨酸酯、蛋黄卵磷脂、大豆磷脂酰肌醇、大豆甾醇和乳糖制成。本发明的脂质体注射剂具有良好的制剂稳定性，长期储存后，脂质体同样保持良好的包封率；提高了制剂产品的质量，增加了药物在体循环中的保留时间，提高了药物的生物利用度，减少了毒副作用，明显提高了疗效；并且制备方法简单，适合于工业化大生产。

Description

一种盐酸甲砜霉素甘氨酸酯脂质体注射剂

技术领域

本发明涉及一种脂质体注射剂及其制法，具体涉及一种盐酸甲砜霉素甘氨酸酯脂质体注射剂及其制法，属于药物制剂技术领域。

背景技术

盐酸甲砜霉素甘氨酸酯，白色或淡黄色结晶性粉末，易溶于水和乙醇等有机溶剂，其化学名称为：[R-(R＊，R＊)]N-[1-(羟基甲基)-2-羟基-2-[4-(甲基磺酰基)苯基]乙基]-2，2-二氯乙酰胺甘氨酸酯盐酸盐，分子式：C₁₄H₁₈Cl₂N₂O₆S·HCl，分子量：449.73，其结构式如下：

盐酸甲砜霉素甘氨酸酯是氯霉素的同类物，抗菌谱和抗菌作用与氯霉素相似，具广谱抗菌作用，包括需氧革兰阴性菌及革兰阳性菌、厌氧菌、立克次体属、螺旋体和衣原体属。甲砜霉素对下列细菌具杀菌作用：流感嗜血杆菌、肺炎链球菌和脑膜炎奈瑟菌。对以下细菌仅具抑菌作用：金黄色葡萄球菌、化脓性链球菌、草绿色链球菌、B组溶血性链球菌、大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、奇异变形杆菌、伤寒沙门菌、副伤寒沙门菌、志贺菌属、脆弱拟杆菌等厌氧菌。下列细菌通常对氯霉素耐药：铜绿假单胞菌、不动杆菌属、肠杆菌属、粘质沙雷菌、吲哚阳性变形杆菌属、甲氧西林耐药葡萄球菌和肠球菌属。其具有较好的药代动力学性质，与临床常用的其它抗生素也无交叉耐药性；目前国内已有药厂生产。

专利CN101904823A公开了一种盐酸甲砜霉素甘氨酸酯冻干粉剂及其制备方法。它通过对甲砜霉素甘氨酸酯处方工艺的研究，筛选出中间体溶液合适的PH值范围，以及合适的冻干条件，来制备盐酸甲砜霉素甘氨酸酯冻干粉剂。

专利CN101361729A公开了一种注射用盐酸甲砜霉素甘氨酸酯无菌冻干制剂及其制备方法。其特点是由盐酸甲砜霉素甘氨酸酯0.6-1.3kg、乳糖0-0.2kg、增溶剂0-1000ml，加适量水混匀后，补加注射用水至2000-10000ml配制成，所述增溶剂为丙二醇、聚乙二醇、吐温-80中的至少一种。

以上两个专利公开的制剂处方都经过了精心的筛选，制备工艺也都采用了冻干法，药物的稳定性得到了大的提升，但还是有很大的提升空间；生物利用度低、毒副作用大等问题都还是其弊端；当前亟需研制出更高质量的盐酸甲砜霉素甘氨酸酯制剂。

在药物载体输送系统中，微乳、微球、纳米粒、脂质体、药质体等亚微粒的研究已经成为药物新剂型研究中非常活跃的领域。将药物包封于这些亚微粒中可以改变药物在体内的分布，增加药物在靶器官的分布量，从而提高疗效，减轻毒副作用。

在靶向给药系统中，脂质体的研究较为广泛，脂质体在体内具有良好的靶向性和生物相容性。

作为一种新型药物制剂，脂质体制剂具有以下优点：

（1）具有缓释作用：活性成分缓慢释放，延缓肾排泄和代谢，从而延长作用时间，提高质量效果；

（2）增加药物的溶解性，提高制剂质量；

（3）具有靶向性：脂质体所载的药物在肝、脾网状内皮系统脏器局部维持高浓度，从而起到药物器官靶向性作用；

（4）具有对活性药物成分的保护作用。

（5）降低了药物毒性；

脂质体（Liposome）最初是由英国学者Bangham和Standlish将磷脂分散在水中进行电镜观察时发现的。磷脂分散在水中自然形成多层囊泡，每层都是脂质的双分子层；囊泡中央和各层之间被水相隔开，双分子层厚度约为4nm。后来，将这种具有类似生物膜结构的双分子小囊称为脂质体。脂质体可分为多室脂质体和单室脂质体。单室脂质体又分为小单室脂质体和大单室脂质体。小单室脂质体为球形，尺寸一般为20-50纳米；大单室脂质体的尺寸为微米数量级。

1971年英国莱门等人开始将脂质体用于药物载体，主要作用机理是将药物粉末或溶液包裹在脂质体双层脂质膜所封闭的水相中或嵌入脂质体双层脂质膜中，这种微粒具有类细胞结构，进入人体内主药被网状内皮系统吞噬而激活机体的自身免疫功能，并改变被包封药物的体内分布，使药物主要在肝、脾、肺和骨髓等组织器官中积蓄，从而提高药物的治疗指数，减少药物的治疗剂量和降低药物的毒性。

近年来，随着生物技术的不断进展，脂质体制备工艺逐步完善，脂质体作用机制进一步阐明，加之脂质体适合体内降解、无毒性和无免疫原性，特别是大量试验数据证明脂质体作为药物载体可以提高药物治疗指数、降低药物毒性和减少药物副作用，并减少药物剂量等优点。

由于普通盐酸甲砜霉素甘氨酸酯注射剂的不足，目前对于盐酸甲砜霉素甘氨酸酯脂质体注射剂存在需求。

发明内容

为了形成品质优良的盐酸甲砜霉素甘氨酸酯脂质体注射剂，重要的是寻找能与盐酸甲砜霉素甘氨酸酯良好相容从而将其良好包封且不渗漏的成膜材料，以及寻找能使脂质体形成稳定注射剂的赋形剂成分。

为了实现上述目的，本发明人进行的大量研究和实现，发现特定重量配比的盐酸甲砜霉素甘氨酸酯、蛋黄卵磷脂、大豆磷脂酰肌醇、大豆甾醇和乳糖能制成盐酸甲砜霉素甘氨酸酯脂质体注射剂，从而完成本发明。其中，作为药物活性成分的盐酸甲砜霉素甘氨酸酯的包封率高，脂质体粒径小且分布均匀，本发明制剂的药物活性成分在体循环中的保留时间显著延长，药物的生物相容性高，生物利用度明显提高，疗效明显提高。

本发明的目的在于提供一种盐酸甲砜霉素甘氨酸酯脂质体注射剂，其由以下重量配比的原料制成：

其中，大豆磷脂酰肌醇与蛋黄卵磷脂之间的重量比为2∶7-3∶7，

大豆磷脂酰肌醇与蛋黄卵磷脂重量之和与大豆甾醇重量的比为7∶2-10∶2。

本发明的另一目的在于提供上述盐酸甲砜霉素甘氨酸酯脂质体注射剂的制备方法，该方法包括以下步骤：

（1）将蛋黄卵磷脂、大豆磷脂酰肌醇和大豆甾醇溶于缓冲盐溶液中，得类脂溶液；

（2）将盐酸甲砜霉素甘氨酸酯溶于注射用水中，加入上述类脂溶液中，于56-65℃恒温水浴中保温搅拌30min；

（3）加入乳糖，经流通蒸汽灭菌处理，超声20-30min，形成半透明胶体溶液；

（4）将上述的半透明胶体溶液用0.45μm的微孔滤膜过滤、分装，冻干，得盐酸甲砜霉素甘氨酸酯脂质体注射剂。

根据本发明提供的盐酸甲砜霉素甘氨酸酯脂质体注射剂通过选择适当的原料成分并采用合适的制备方法获得，其中脂质体粒径小，粒径分布均匀，包封率高，稳定性高，所得盐酸甲砜霉素甘氨酸酯脂质体注射剂的品质优良。

附图说明

图1示出盐酸甲砜霉素甘氨酸酯脂质体注射剂的血药浓度-时间曲线。其中：

具体实施方式

以下对本发明进行详细描述，本发明的特点和优点会随着这些描述而变得更为清楚。

根据本发明的一方面，提供一种盐酸甲砜霉素甘氨酸酯脂质体注射剂，其由以下重量配比的原料制成：

大豆甾醇与大豆磷脂酰肌醇之间的重量比为7∶2-10∶2。

优选地，提供一种盐酸甲砜霉素甘氨酸酯脂质体注射剂，其由以下重量配比的原料制成：

大豆甾醇与大豆磷脂酰肌醇之间的重量比为7∶2-10∶2。

更优选地，大豆磷脂酰肌醇与蛋黄卵磷脂之间的重量比为2∶7-2∶6，大豆甾醇与大豆磷脂酰肌醇之间的重量比为9∶2-10∶2。

在本发明中，针对活性成分盐酸甲砜霉素甘氨酸酯其水溶性差、脂溶性良好的特点，本发明人通过研究发现，蛋黄卵磷脂的组合适于作为脂质体的基础膜材，再结合大豆磷脂酰肌醇和大豆甾醇，能够得到包封率高、稳定性高的脂质体注射剂。当使用其他磷脂时，难以形成品质优良的脂质体，脂质体的包封率、稳定性、和渗漏率等性质劣化。

在本发明的甲磺酸多拉司琼脂质体注射剂中，相对于1重量份的盐酸甲砜霉素甘氨酸酯而言，蛋黄卵磷脂的用量为3.5-7.5重量份。如果蛋黄卵磷脂的用量低于3.5重量份，则无法形成稳定的脂质体；反之，如果蛋黄卵磷脂的用量高于7.5重量份，则作为药物活性成分的盐酸甲砜霉素甘氨酸酯的包封率下降，注射剂的品质以及疗效降低。

在本发明的盐酸甲砜霉素甘氨酸酯脂质体注射剂中，大豆磷脂酰肌醇和大豆甾醇用于调节脂质体的膜稳定性。

在本发明的甲磺酸多拉司琼脂质体注射剂中，相对于1重量份的盐酸甲砜霉素甘氨酸酯而言，大豆磷脂酰肌醇的用量为1.5-2重量份。如果大豆磷脂酰肌醇的用量低于1.5重量份，所得脂质体的稳定性明显降低；如果大豆磷脂酰肌醇的用量高于2重量份，则包封率会下降。

特别地，当大豆磷脂酰肌醇与蛋黄卵磷脂之间的重量比为2∶7-3∶7时，能形成稳定的盐酸甲砜霉素甘氨酸酯脂质体。如果大豆磷脂酰肌醇与蛋黄卵磷脂之间的重量比低于2∶7，则无法形成稳定的脂质体，反之如果大豆磷脂酰肌醇与蛋黄卵磷脂之间的重量比高于3∶7时，膜稳定性降低，盐酸甲砜霉素甘氨酸酯易于渗漏。特别地，当大豆磷脂酰肌醇与蛋黄卵磷脂之间的重量比为2∶7-2∶6时，所得脂质体的毒性最低。

在本发明的甲磺酸多拉司琼脂质体注射剂中，相对于1重量份的盐酸甲砜霉素甘氨酸酯而言，大豆甾醇的用量为1-1.5重量份。如果大豆甾醇的用量低于1重量份，所得脂质体的稳定性明显降低；如果大豆甾醇的用量高于1.5重量份，则包封率会下降。

特别地，当大豆甾醇与大豆磷脂酰肌醇之间的重量比为7∶2-10∶2，能形成稳定的盐酸甲砜霉素甘氨酸酯脂质体。如果大豆甾醇与大豆磷脂酰肌醇之间的重量比低于7∶2，则无法形成稳定的脂质体，反之如果大豆甾醇与大豆磷脂酰肌醇之间的重量比高于10∶2，膜稳定性降低，盐酸甲砜霉素甘氨酸酯易于渗漏。

在本发明的盐酸甲砜霉素甘氨酸酯脂质体注射剂中，乳糖作为赋形剂，其能有效保护脂质体颗粒的形态和稳定性，进一步提高脂质体注射剂的稳定性。

本发明的盐酸甲砜霉素甘氨酸酯脂质体注射剂，其注射剂规格为每支0.5g或1.0g。

在本发明中，当使用上述特定量的甲砜霉素甘氨酸酯、蛋黄卵磷脂、大豆磷脂酰肌醇、大豆甾醇和乳糖时，可以得到品质优良的甲磺酸多拉司琼脂质体，其包封率和稳定性都很高，粒径均一，毒性低，生物利用度高。

根据本发明的另一方面，提供上述盐酸甲砜霉素甘氨酸酯脂质体注射剂的制备方法，该方便包括以下步骤：

在根据本发明的盐酸甲砜霉素甘氨酸酯脂质体注射剂的制备方法中，在步骤（1）中，缓冲盐溶液选自磷酸盐缓冲溶液、枸橼酸盐缓冲溶液、碳酸盐缓冲溶液、硼酸盐缓冲溶液中的一种，优选pH6.8的磷酸盐缓冲溶液，更优选pH6.8的磷酸二氢钾和氢氧化钠的缓冲溶液。

在根据本发明的盐酸甲砜霉素甘氨酸酯脂质体注射剂的制备方法中，在步骤（4）中，快速冻干进行的温度优选为-40℃。

在本发明中，通过选择合适原料成分、采用合适的制备工艺，所得盐酸甲砜霉素甘氨酸酯脂质体注射剂品质优良，其中脂质体粒径小，粒径分布均匀，包封率高，稳定性高，毒性低，生物利用度高。

脂质体的稳定性与生物利用度有密切的对应关系；稳定性越高，生物利用度越高。脂质体的粒径越小，粒径大小分布均匀，体内停留时间越长，也是生物利用度高的因素之一。

实施例

以下通过示例性具体实例进一步描述本发明。不过，这些示例性实例仅是说明性的，并不对本发明的范围构成限制。

实施例1盐酸甲砜霉素甘氨酸酯脂质体注射剂的制备

所用原料如下：

制备过程如下：

（1）将蛋黄卵磷脂300g、大豆磷脂酰肌醇90g和大豆甾醇60g溶于700ml的pH为6.8的磷酸二氢钾和氢氧化钠的缓冲溶液中，得类脂溶液；

（2）将盐酸甲砜霉素甘氨酸酯50g溶于200ml注射用水中，加入上述类脂溶液中，于56-65℃恒温水浴中保温搅拌30min；

（3）加入乳糖70g，补注射用水至1000ml，再经流通蒸汽灭菌处理，超声20-30min，形成半透明胶体溶液；

（4）将上述的半透明胶体溶液用0.45μm的微孔滤膜过滤、分装10ml/瓶，-40℃冻干，得盐酸甲砜霉素甘氨酸酯脂质体注射剂。

实施例2盐酸甲砜霉素甘氨酸酯脂质体注射剂的制备

所用原料如下：

制备过程如下：

（1）将蛋黄卵磷脂350g、大豆磷脂酰肌醇100g、大豆甾醇75g溶于700ml的pH为6.8的磷酸二氢钾和氢氧化钠的缓冲溶液中，得类脂溶液；

（3）加入乳糖100g，补注射用水至1000ml，再经流通蒸汽灭菌处理，超声20-30min，形成半透明胶体溶液；

实施例3盐酸甲砜霉素甘氨酸酯脂质体注射剂的制备

所用原料如下：

制备过程如下：

（1）将蛋黄卵磷脂450g、大豆磷脂酰肌醇150g和大豆甾醇100g溶于1300ml的pH为6.8的磷酸二氢钾和氢氧化钠的混合缓冲溶液中，得类脂溶液；

（2）将盐酸甲砜霉素甘氨酸酯100g溶于500ml注射用水中，加入上述类脂溶液中，于56-65℃恒温水浴中保温搅拌30min；

（3）加入乳糖100g，补注射用水至2000ml，再经流通蒸汽灭菌处理，超声20-30min，形成半透明胶体溶液；

（4）将上述的半透明胶体溶液用0.45μm的微孔滤膜过滤、分装20ml/瓶，-40℃冻干，得盐酸甲砜霉素甘氨酸酯脂质体注射剂。

对比例1-3

采用分别与实施例1-3中相同的生产工艺，将如下表1中所示的对比例1-3中的成分分别制成盐酸甲砜霉素甘氨酸酯脂质体注射剂：

表1对比例1-3中所用成分

成份	对比例1	对比例2	对比例3
				盐酸甲砜霉素甘氨酸酯	50g	50g	100g
大豆磷脂酰肌醇	90g	/	300g
				蛋黄卵磷脂	250g	/	300g
大豆甾醇	/	100g	100g
				氢化蛋黄卵磷脂	50g	350g	/
乳糖	75g	/	300g
				甘露醇	/	100g	/

其中，“/”表示未使用。

试验例1脂质体粒径的测定

室温条件下，取实施例1-3和对比例1-3中的盐酸甲砜霉素甘氨酸酯脂质体注射剂，置于Submicron Particle Sizer Model 370粒径检测仪的样品管中，测定粒径大小分布及平均粒径；用投射电子显微镜观察粒子形态。结果示于下表2中。

表2脂质体粒径检测结果

编号	脂质体形态	平均粒径（nm）	渗漏率（%）
				实施例1	球形或椭圆形实体	380.5	0.54
实施例2	球形或椭圆形实体	368.7	0.62
				实施例3	球形或椭圆形实体	325.9	0.63
对比例1	形状不规则	886.1	1.37
				对比例2	形状不规则	887.2	1.29
对比例3	形状不规则	903.4	1.65

从表2可知，实施例1-3制得的脂质体粒径均匀，显球形，大小均一；对比例1-3制得的脂质体粒径不均匀，形状不定，大小不一。

具体而言，即使在采用同样的生产工艺时，实施例1-3中所得盐酸甲砜霉素甘氨酸酯脂质体的颗粒外观及其平均粒径明显优于对比例1-3中所得的盐酸甲砜霉素甘氨酸酯脂质体。说明当使用本发明所用成分以外的成分时，或者当成分用量在本发明限定的成分用量范围外时，所得盐酸甲砜霉素甘氨酸酯脂质体的外观劣于本发明，平均粒径大出很多。

试验例2包封率的测定

将实施例1-3和对比例1-3中制备的盐酸甲砜霉素甘氨酸酯脂质体注射剂以5000r/min的转速高速离心，离心20分钟，取上清液，用甲醇溶解，HPLC法测盐酸甲砜霉素甘氨酸酯含量，计算包封率，结果示于下表3中。

表3包封率测定结果

由表3可知，实施例1-3制备的脂质体制剂的包封率显著的高于对比例1-3的脂质体制剂的包封率。说明当使用本发明所用成分以外的成分时，或者当成分用量在本发明限定的成分用量范围外时，所得脂质体的脂质体包封率低于本发明。

试验例3稳定性考察

将本发明实施例1-3、对比例1-3制备的样品和市售盐酸甲砜霉素甘氨酸酯注射剂（批号：20110102，海口奇力制药股份有限公司，生产地址：海口市秀英区向荣路9号）分别置于高温40℃、相对湿度75％的条件下6个月，进行加速试验考察，结果示于下表4中。

表4加速试验结果

由表4可知，加速6月时，上市制剂含量降低，有关物质升高；而本发明的样品性状、含量和有关物质变化均不明显，说明本发明的产品稳定性好。

试验例4渗漏率试验

取试验例1-3和对比例1-3制备的样品，在室温条件下，分别于0天、30天、60天、90天和180天，定期检查，测定包封率，与0天包封的药量比较，计算渗漏率，结果示于下表5中。

表5渗漏率试验结果

由表5可知，长期储存时，本发明实施例1-3中制备的盐酸甲砜霉素甘氨酸酯脂质体注射剂渗漏率变化不大，而对比例1-3中制备的注射剂渗漏率逐渐增大，脂质体渗漏严重，这说明本发明制备的盐酸甲砜霉素甘氨酸酯脂质体注射剂具有更高的稳定性。

试验例5血药浓度的测定

将42只大鼠随机分成7组，每组分别注射给药实施例1-3及对比例1-3中制备的注射剂，以及市售品（批号：20110102，海口奇力制药股份有限公司，生产地址：海口市秀英区向荣路9号），规格为0.125g盐酸甲砜霉素甘氨酸酯注射剂。给药后分别于0.5h、1h、1.5h、2h、3h、6h、8h、12h和24h，采血，血样经处理后，以HPLC-MS法测定血药浓度。绘制实施例1-3中制备的盐酸甲砜霉素甘氨酸酯脂质体注射剂、对比例1-3中制备的盐酸甲砜霉素甘氨酸酯脂质体注射剂和市售盐酸甲砜霉素甘氨酸酯注射剂的血药浓度与时间的关系曲线，示于附图1中。

由图1可知，与对比例1-3中制备的盐酸甲砜霉素甘氨酸酯脂质体注射剂和市售盐酸甲砜霉素甘氨酸酯注射剂相比，本发明实施例1-3中制备的盐酸甲砜霉素甘氨酸酯脂质体注射剂具有以下优点：在体内的消除速度慢，在体循环中分布时间延长，达到了缓释效果，生物利用度提高了。

工业实用性

本发明提供的盐酸甲砜霉素甘氨酸酯脂质体具有良好的外观，颗粒小，粒径均匀，包封率高，稳定性高，渗漏率低，在体内的停留时间长，生物利用度高，具有良好的工业应用价值。

以上通过具体实施方式和实施例对本发明进行了详细说明，不过应理解，这些说明并不对本发明的范围构成任何限制，在不偏离本发明的精神和保护范围的情况下，可以对本发明的技术方案及其实施方式进行多种修饰、改进和替换，因这些均落入本发明的保护范围内。

本申请中提及或引用的各个参考文献，在此全文引入作为参考。

Claims

1.一种盐酸甲砜霉素甘氨酸酯脂质体注射剂，其由以下重量配比的原料制成：

其中，大豆磷脂酰肌醇与蛋黄卵磷脂之间的重量比为2:7-3:7，

大豆甾醇与大豆磷脂酰肌醇之间的重量比为7:2-10:2。

2.根据权利要求1所述的盐酸甲砜霉素甘氨酸酯脂质体注射剂，其由以下重量配比的原料制成：

其中，大豆磷脂酰肌醇与蛋黄卵磷脂之间的重量比为2:7-3:7，

大豆甾醇与大豆磷脂酰肌醇之间的重量比为7:2-10:2。

3.根据权利要求1或2所述的盐酸甲砜霉素甘氨酸酯脂质体注射剂，其中，大豆磷脂酰肌醇与蛋黄卵磷脂之间的重量比为2:7-2:6。

4.根据权利要求1或2所述的盐酸甲砜霉素甘氨酸酯脂质体注射剂，其中，大豆甾醇与大豆磷脂酰肌醇之间的重量比为9:2-10:2。

5.一种制备根据权利要求1-4中任一项所述的盐酸甲砜霉素甘氨酸酯脂质体注射剂的方法，该方法包括以下步骤：

6.根据权利要求5所述的方法，在步骤（1）中，缓冲盐溶液选自磷酸盐缓冲溶液、枸橼酸盐缓冲溶液、碳酸盐缓冲溶液、硼酸盐缓冲溶液中的一种。

7.根据权利要求6所述的方法，在步骤（1）中，缓冲盐溶液为pH6.8的磷酸盐缓冲溶液。

8.根据权利要求7所述的方法，其中pH6.8的磷酸盐缓冲溶液为pH6.8的磷酸二氢钾和氢氧化钠的缓冲溶液。

9.根据权利要求5所述的方法，在步骤（4）中，快速冻干进行的温度为-40℃。