CN103040751A - 一种细辛脑脂质体注射剂 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种细辛脑脂质体注射剂及其制法。通过选用特定重量配比的细辛脑、大豆磷脂酰肌醇、胆固醇、司盘-60、海藻糖或氯化钠制成品质优异的细辛脑脂质体注射剂。与现有制剂相比，本发明的制剂大大提高了制剂的稳定性和生物利用度，释药平稳，提高了制剂产品的质量，减少了毒副作用，疗效更显著。

Description

一种细辛脑脂质体注射剂

技术领域

本发明涉及一种细辛脑的新剂型，具体涉及一种细辛脑的脂质体注射剂及其制法，属于医药技术领域。

背景技术

细辛脑又名α-细辛醚，是中药石菖蒲挥发油中的主要成分之一，其化学名称为：2,4,5-三甲基-1-丙烯基苯，分子式：C₁₂H₁₆O₃，分子量208.26，结构式为：

细辛脑具有很好的止咳、祛痰、平喘、镇静、解痉以及抗惊厥的作用；对肺炎双球菌、金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的生长也有不同程度的抑制作用。在临床应用于肺炎、哮喘和癫痫发作方面，有比较理想的效果。

目前上市销售的细辛脑制剂有片剂、胶囊剂和注射剂。由于细辛脑是脂溶性极强的化合物，熔点低，所以细辛脑片剂和胶囊剂的绝对生物利用度很低，要提高血药浓度，达到治疗疾病的效果，便需要增减用药剂量，这样毒副作用加强，给临床用药带来了安全隐患。

由于细辛脑难溶于水，临床上使用的注射液一般采用吐温、PEG400、乙醇等助溶剂助溶。专利CN1657071A细辛脑注射剂及其制备方法，专利CN1698590A一种注射用细辛脑制剂及制备方法，专利CN101647774A一种细辛脑注射剂及其制备方法，专利CN102232931A一种注射用细辛脑处方及制备方法，加入了大量的助溶剂来解决细辛脑的溶解性问题。目前上市的细辛脑注射液中也含有大量的吐温-80，在临床应用上会产生溶血、过敏等副作用，给细辛脑在临床上的应用带来了不安全因素。

专利CN1813689A公开了细辛脑脂肪乳及及其制备方法，通过高速匀浆机搅拌或超声波振荡形成初乳，经过高压匀质机制备成细辛脑脂肪乳剂，将细辛脑包裹在水包油微球油相中；专利CN1706370A公开了一种细辛脑脂微球制剂及其制备方法，它以细辛脑为活性成分，加上药学上常用的注射或口服用油、乳化剂、注射用水/制药用水制备而成的脂微球制剂；专利CN101011354A公开了细辛脑亚微乳制剂及其制备方法，将水不溶性的药物细辛脑溶于油相，加入乳化剂、助乳化剂及其他添加剂，制备水包油亚微乳。上述制剂虽然显著提高了细辛脑的溶解度，减少了毒副反应和刺激性，提高了生物利用度；但是主药的包封率不高，长期放置长期放置稳定性较差，含量下降，生物利用度低。

脂质体（liposomes）最早是1965年被英国Banghan等作为研究生物膜的模型提出的。是指将药物包封于类脂质双分子形成的薄膜中间所制成的超微型球状定向药物载体制剂，属于靶向给药系统的一种新剂型。脂质体作为药物载体，具有诸多优点：如脂质体既能包封脂溶性药物，又能包封水溶性药物；减轻变态反应和免疫反应；延缓释放，降低体内消除速度；能有效地保护被包裹药物，提高生物利用度；改变药物在体内的分布，并能靶向性释药，能降低药物的毒副作用；适合多途径给药等。

人们通过研究发现，脂质体作为药物的载体能够控制药物的释放，提高药物靶向性，减少药物毒性和副作用，提高药物疗效。

为了提高细辛脑的稳定性，增强其靶向性，本发明人对细辛脑的脂质体注射剂进行研究，取得了预料不到的效果，克服现有的细辛脑制剂存在的一系列问题，提高药物的溶解性和稳定性，延长药物在体内的保留时间，长久发挥药效，提高生物利用度，降低毒副作用，降低不良反应的发生率，改进治疗速度和治疗效果。

制备脂质体的挑战在于选择适当的脂质体组成成分和制法。由于脂质体的性质如稳定性、包封率、起效时间、在体内的循环时间、生物利用度和毒副作用等与脂质体的组成直接地密切相关，而脂质体的组成与所要包封的药物性质直接地密切相关，因此，选择什么样的成分形成具有良好品质的细辛脑脂质体是首要解决的问题。

发明内容

为了形成品质优良的细辛脑脂质体注射剂，重要的是寻找能与细辛脑良好相容从而将其良好包封且不渗漏的成膜材料，以及寻找能使脂质体形成稳定注射剂的赋形剂成分。

为了实现上述目的，本发明人进行的大量研究和试验，发现特定重量配比的细辛脑、大豆磷脂酰肌醇、胆固醇、司盘-60、海藻糖或氯化钠能制成品质优异的细辛脑脂质体注射剂，其中，作为药物活性成分的细辛脑的包封率高，脂质体粒径小且分布均匀，与现有技术中的细辛脑注射剂相比，本发明制剂的药物活性成分在体循环中的保留时间显著延长，药物的生物相容性高，生物利用度明显提高，疗效明显提高。

本发明中所述的细辛脑脂质体注射剂，其单位剂量的细辛脑的规格为8mg、16mg、24mg和2ml:8mg、5ml:16mg、10ml:24mg（注射液体积：细辛脑重量）。

一方面，本发明提供一种细辛脑脂质体冻干粉针注射剂，其主要由以下重量配比的成分制成：

进一步地，根据本发明的细辛脑脂质体冻干粉针注射剂主要由以下重量配比的成分制成：

一方面，本发明提供一种细辛脑脂质体注射液，其主要由以下重量配比的成分制成：

进一步地，根据本发明的细辛脑脂质体注射液，主要由以下重量配比的成分制成：

作为用于形成脂质体的磷脂，可以使用天然磷脂和合成磷脂。天然磷脂包括磷脂酰乙醇胺、蛋黄卵磷脂、氢化蛋黄磷脂、蛋黄磷脂酰甘油、蛋黄磷脂酰丝氨酸、蛋黄磷脂酰肌醇、大豆卵磷脂、氢化大豆磷脂、大豆磷脂酰甘油、大豆磷脂酰丝氨酸、和大豆磷脂酰肌醇等。合成磷脂为二油酰磷脂酰胆碱、二硬脂酸磷脂酰胆碱、二棕榈酰磷脂酰胆碱、二豆蔻酰磷脂酰胆碱、二月桂酰磷脂酰胆碱、二油酰磷脂酰甘油、二硬脂酰磷脂酰甘油、二棕榈酰磷脂酰甘油、二肉豆蔻酰磷脂酰甘油、二月桂酰磷脂酰甘油等。

本发明中，根据细辛脑的特点，发现大豆磷脂酰肌醇特别适于作为基础磷脂成膜材料。大豆磷脂酰肌醇作为一种天然磷脂，其含量非常高，容易获得，价格低廉。大豆磷脂酰肌醇的相变温度较高，易于形成稳定的脂质体膜。

当使用其他磷脂时，难以形成品质优良的脂质体，脂质体的包封率、稳定性和渗漏率等性质差。

为了改善脂质体的稳定性，所用大豆磷脂酰肌醇的纯度为98%以上，优选99%以上。

在本发明的细辛脑脂质体注射剂中，相对于8重量份的细辛脑而言，大豆磷脂酰肌醇的用量为20-50重量份。如果大豆磷脂酰肌醇的用量低于20重量份，则无法形成稳定的脂质体；反之，如果大豆磷脂酰肌醇的用量的用量高于50重量份，则作为药物活性成分的细辛脑的包封率下降，注射剂的品质以及疗效降低。

在本发明的细辛脑脂质体注射剂中，胆固醇和司盘-60用于调节脂质体的膜稳定性。

胆固醇是一种双亲性分子，与大豆磷脂酰肌醇相结合，阻止其凝聚成晶体结构。胆固醇掺入大豆磷脂酰肌醇双层，类似于“缓冲剂”一样起到调节膜结构“流动性”的作用。当低于相变温度时，胆固醇可以使膜减少有序排列，增加流动性；当高于相变温度时，胆固醇可以增加膜的有序排列，从而降低膜的流动性。胆固醇能使脂质体双分子层膜固化，从而减少自由基的生成，降低氧化水平，使脂质体稳定性显著增强。

研究表明，脂质体的稳定性与生物利用度有密切的对应关系。稳定性越高，生物利用度越高。因此，本发明的细辛脑脂质体注射剂的稳定性高，是导致药物生物利用度高的因素之一。

另一方面，本发明人研究发现，在本发明的细辛脑脂质体注射剂中，相对于8重量份的细辛脑而言，大豆磷脂酰肌醇的用量为20-50重量份，胆固醇为20-50重量份时，所形成的细辛脑脂质体注射剂的包封率高。

在本发明的细辛脑脂质体注射剂中，使用司盘-60来进一步改进脂质体膜的稳定性。司盘-60是一种新型的非离子表面活性剂，当用于大豆磷脂酰肌醇双层膜中时，能提高该双层膜之间的化学能，从而提高脂质体在水性液体中的化学稳定性，进而提高细辛脑脂质体注射剂的稳定性。

在本发明的细辛脑脂质体注射剂中，相对于8重量份的细辛脑而言，司盘-60的用量为15-40重量份。如果司盘-60的用量低于15重量份，则由于其用量过低导致对细辛脑脂质体注射剂的稳定性改进不够，反之，如果司盘-60的用量高于40重量份，则用于其用量过高而导致脂质体膜易于泄露。

研究发现，当使用上述特定量的细辛脑、大豆磷脂酰肌醇、胆固醇和司盘-60时，可以得到品质优良的细辛脑脂质体，其包封率和稳定性都很高，毒性低，生物利用度高。

本发明的细辛脑脂质体注射剂，其中单位剂量的细辛脑的规格为8mg、16mg、24mg和2ml:8mg、5ml:16mg、10ml:24mg（注射液体积：细辛脑重量）。

另一方面，本发明还提供一种细辛脑脂质体注射剂的制备方法，具体包括如下制备步骤：

（1）将处方量的细辛脑、大豆磷脂酰肌醇、胆固醇和司盘-60溶于适量的有机溶剂中，然后将将其置于茄形瓶中旋转蒸发，直至形成均匀的薄膜；

（2）向上述茄形瓶中加入适量的缓冲盐溶液和适量玻璃珠搅拌数分钟，再在30℃水浴中搅拌数小时即得到细辛脑脂质体；

（3）向上述制得的细辛脑脂质体中加入海藻糖，用探头超声10分钟，定容，过0.22um微孔滤膜过滤，分装，冷冻干燥，轧盖，制得细辛脑脂质体冻干粉针注射剂；

或者，向上述制得的细辛脑脂质体中加入氯化钠，用探头超声10分钟，定容，过0.22um微孔滤膜过滤，快速冷冻，然后恢复到室温，灌封，灭菌，制得细辛脑脂质体注射液。

上述所述的制备方法，其中所述的有机溶剂选自乙醇、甲醇、丙酮、氯仿、乙醚和乙酸乙酯中的一种或几种，优选为氯仿。

上述所述的制备方法，其中所述的缓冲盐溶液选自磷酸盐缓冲溶液、枸橼酸盐缓冲溶液、碳酸盐缓冲溶液、硼酸盐缓冲溶液中的一种。

上述所述的制备方法，其中所述的缓冲盐溶液为pH为6.8的磷酸盐缓冲溶液。

制备脂质体的挑战在于如何使脂质体膜形成适当大小、适当结构材料的包封率高的囊泡。而且这些材料在形成脂质体不漏出。

本发明人通过选择适当的材料成分、采用合适的制备工艺，获得了品质优良的细辛脑脂质体注射剂，脂质体粒径小，粒径分布均匀，包封率高，稳定性高。

研究发现，脂质体的大小是影响脂质体在体内分布和停留时间的主要因素，脂质体的粒径越小，体内停留时间越长。通过本发明方法制备的细辛脑脂质体颗粒小，粒径大小分布均匀，这是其在体内代谢率低、生物利用度高的因素之一。

上述所述的制备方法，其中步骤（4）中所述的冷冻的温度为-80℃。

附图说明

以下，结合附图来详细说明本发明的实施方案，图1是细辛脑注射剂的血药浓度-时间曲线。表示实施例1-3中制备的细辛脑脂质体注射剂、对比例1-3中制备的细辛脑脂质体注射剂和市售细辛脑注射剂的血药浓度与时间的关系曲线。

其中：

具体实施方式

以下实施例是对本发明的进一步说明，但绝不是对本发明范围的限制。下面参照实施例进一步详细阐述本发明，但是本领域技术人员应当理解，本发明并不限于这些实施例以及使用的制备方法。而且，本领域技术人员根据本发明的描述可以对本发明进行等同替换、组合、改良或修饰，但这些都将包括在本发明的范围内。

实施例1细辛脑脂质体冻干粉针剂

处方：

制备工艺：

（1）将8g细辛脑、50g大豆磷脂酰肌醇、30g胆固醇和40g司盘-60溶于1000ml氯仿中，然后将其置于茄形瓶中旋转蒸发，直至形成均匀的薄膜；

（2）向上述茄形瓶中加入1000ml pH为6.8的磷酸盐缓冲溶液和适量玻璃珠搅拌10分钟，再在30℃水浴中搅拌2小时即得到细辛脑脂质体；

（3）向上述制得的细辛脑脂质体中加入40g海藻糖，用探头超声10分钟，用注射用水定容至2000ml，过0.22um微孔滤膜过滤，分装，冷冻干燥，轧盖,制得1000瓶细辛脑脂质体冻干粉针剂。

实施例2细辛脑脂质体注射液

处方：

制备工艺：

（1）将16g细辛脑、80g大豆磷脂酰肌醇、40g胆固醇和60g司盘-60溶于1500ml氯仿中，然后将其置于茄形瓶中旋转蒸发，直至形成均匀的薄膜；

（2）向上述茄形瓶中加入1500ml pH为6.8的磷酸盐缓冲溶液和适量玻璃珠搅拌10分钟，再在30℃水浴中搅拌2小时即得到细辛脑脂质体；

（3）向上述制得的细辛脑脂质体中加入45g氯化钠，用探头超声10分钟，用注射用水定容至5000ml，过0.22um微孔滤膜过滤，快速冷冻，然后恢复到室温，灌封，灭菌，制得1000支细辛脑脂质体注射液。

实施例3细辛脑脂质体注射液

处方：

制备工艺：

（1）将24g细辛脑、60g大豆磷脂酰肌醇、150g胆固醇和100g司盘-60溶于4000ml氯仿中，然后将其置于茄形瓶中旋转蒸发，直至形成均匀的薄膜；

（2）向上述茄形瓶中加入4000ml pH为6.8的磷酸盐缓冲溶液和适量玻璃珠搅拌10分钟，再在30℃水浴中搅拌2小时即得到细辛脑脂质体；

（3）向上述制得的细辛脑脂质体中加入90g氯化钠，用探头超声10分钟，用注射用水定容至10000ml，过0.22um微孔滤膜过滤，快速冷冻，然后恢复到室温，灌封，灭菌，制得1000支细辛脑脂质体注射液。

对比例1-3细辛脑脂质体注射剂的制备

采用分别与实施例1-3相同的生产工艺，将如下表1-3中所示的对比例1-3中的成分分别制成细辛脑脂质体注射剂：

表1对比例1-3中所用成分

试验例1脂质体粒径的测定

室温条件下，取实施例和对比例的细辛脑脂质体注射剂，以生理盐水配成0.1%的溶液，置于Submicron Particle Sizer Model 370粒径检测仪的样品管中，测定粒径大小分布及平均粒径；用投射电子显微镜观察粒子形态。结果如表2：

表2粒径检测结果

实施例	平均粒径	外观
			实施例1	286.1nm	球状，均匀
实施例2	267.3nm	球状，均匀
			实施例3	258.7nm	球状，均匀
对比例1	727.9nm	不均匀，杂乱
			对比例2	735.6nm	不均匀，杂乱
对比例3	724.8nm	不均匀，杂乱

由以上结果可知，实施例1-3制得的细辛脑脂质体粒径均匀，显球形，大小均一；对比例1-3制得的细辛脑脂质体粒径不均匀，形状不定，大小不一。

试验例2包封率的测定

将实施例和对比例制备的细辛脑脂质体制剂加水溶解稀释成0.1%的溶液，高速离心，5000r/min，离心20分钟，取上清液，用乙醇溶解，HPLC法测定细辛脑含量，计算包封率，结果如表3：

表3包封率测定结果

由表3可知，实施例1-3制备的脂质体制剂的包封率显著的高于对比例1-3的脂质体制剂的包封率。说明当使用本发明所用成分以外的成分，或者当成分用量在本发明限定的成分用量范围外，所得脂质体的脂质体包封率低于本发明。

试验例3稳定性考察

将本发明实施例1-3和对比例1-3制备的样品和上市注射用细辛脑（批号：20110901，河北智同生物制药有限公司）分别置于高温40℃、相对湿度75%的条件下6个月，进行加速试验考察，试验结果示于下表4中。

表4加速试验结果

由以上结果可知，加速6月时，对比例和上市制剂含量降低，有关物质升高；而本发明的样品性状、含量和有关物质变化均不明显，说明本发明的产品稳定性好。

试验例4渗漏率试验

取试验例1-3和对比例1-3制备的样品，分别室温条件下，分别于0天、30天、60天、90天和180天，定期检查，测定包封率，与0天包封的药量比较，计算渗漏率，结果见表5：

表5渗漏率试验结果

时间	实施例1	实施例2	实施例3	对比例1	对比例2	对比例3
							0天	0.42	0.36	0.45	1.43	1.51	1.81
30天	0.48	0.50	0.53	2.75	2.98	2.95
							60天	0.59	0.67	0.66	5.51	5.76	5.93
90天	0.71	0.75	0.76	8.95	9.26	10.05
							180天	0.83	0.86	0.91	15.27	17.59	19.56

由以上试验结果可知，本发明实施例制备的样品在长期储存过长中渗漏率变化不大，而对比例的样品渗漏率逐渐增大，脂质体渗漏严重，这说明本发明制备的细辛脑脂质体注射剂具有较高的稳定性。

试验例5血药浓度的测定

将42只大鼠随机分成7组，每组分别静脉注射给药实施例1-3及对比例1-3中制备的注射剂，以及市售注射用细辛脑（批号：20110901，河北智同生物制药有限公司），注射量为1mg细辛脑。给药后分别于0.5h、1h、1.5h、2h、3h、6h、8h、12h和24h，采血，血样经处理后，以HPLC-MS法测定血药浓度。绘制实施例1-3中制备的细辛脑脂质体注射剂、对比例1-3中制备的细辛脑脂质体注射剂和市售注射用细辛脑的血药浓度与时间的关系曲线，示于附图1中。

由图1可知，与对比例1-3中制备的细辛脑脂质体注射剂和市售注射用细辛脑相比，本发明实施例1-3中制备的细辛脑脂质体注射剂具有以下优点：在体内的消除速度减缓，在体循环中分布时间延长，达到了改进的缓释效果，生物利用度增加。

Claims (8)

1.一种细辛脑脂质体注射剂，其特征在于由细辛脑、大豆磷脂酰肌醇、胆固醇、司盘-60、海藻糖或氯化钠制成。

2.根据权利要求1所述的细辛脑脂质体注射剂，其特征在于单位剂量的细辛脑的规格为8mg、16mg、24mg和2ml:8mg、5ml:16mg、10ml :24mg。

3.根据权利要求1或2任一所述的细辛脑脂质体注射剂，其特征在于由下列重量份数比的成分组成：

4.根据权利要求1或2任一所述的细辛脑脂质体注射剂，其特征在于由下列重量份数比的成分组成：

5.一种制备细辛脑脂质体注射剂的方法，其特征在于包括如下步骤：

（1）将处方量的细辛脑、大豆磷脂酰肌醇、胆固醇和司盘-60溶于适量的有机溶剂中，然后将将其置于茄形瓶中旋转蒸发，直至形成均匀的薄膜；

（2）向上述茄形瓶中加入适量的缓冲盐溶液和适量玻璃珠搅拌数分钟，再在30℃水浴中搅拌数小时即得到细辛脑脂质体；

（3）向上述制得的细辛脑脂质体中加入海藻糖，用探头超声10分钟，定容，过0.22um微孔滤膜过滤，分装，冷冻干燥，轧盖，制得细辛脑脂质体冻干粉针注射剂；

或者，向上述制得的细辛脑脂质体中加入氯化钠，用探头超声10分钟，定容，过0.22um微孔滤膜过滤，快速冷冻，然后恢复到室温，灌封，灭菌，制得细辛脑脂质体注射液。。

6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于所述的有机溶剂选自乙醇、甲醇、丙酮、氯仿、乙醚和乙酸乙酯中的一种或几种，优选为氯仿。

7.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于所述的缓冲盐溶液选自磷酸盐缓冲溶液、枸橼酸盐缓冲溶液、碳酸盐缓冲溶液、硼酸盐缓冲溶液中的一种。

8.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于所述的缓冲盐溶液为pH为6.8的磷酸盐缓冲溶液。

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