CN102697720B - 盐酸伊立替康脂质纳米粒注射剂 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种盐酸伊立替康脂质纳米粒注射剂及其制法，以盐酸伊立替康和硬脂酸溶于有机溶剂和卵磷脂溶入缓冲盐溶液构成混合相，以溶有PEG400、甘油和海藻糖的水溶液为水相，采用搅拌乳化和高压乳匀相结合的方法，将盐酸伊立替康包载于脂质纳米粒中制得盐酸伊立替康脂质纳米粒制剂。本发明提供的脂质纳米粒制剂载药量高、粒径均匀、药物在血液循环中保留时间长，具有更好的缓释和控释效果，并且制备方法的设备简单，易于操作，提高了产品质量，减少了毒副作用，适合于工业化大生产。

Description

盐酸伊立替康脂质纳米粒注射剂

技术领域

本发明涉及一种盐酸伊立替康的新的注射剂，具体涉及一种盐酸伊立替康脂质纳米粒注射剂，属于医药技术领域。

背景技术

盐酸伊立替康，化学名称为：（+）-(4S)-4,11-二乙基-4-羟基-9[(4-哌啶基哌啶)羰基]-1H吡喃并[3,4,6,7]吲哚嗪[1,2b]喹啉-3，14-（4H-12H）-二酮盐酸盐三水合物，分子式：C₃₃H₃₈N₄O₆·HCl·3H₂O，分子量为677.19，结构式如下

伊立替康（Irinotecan，CPT-11）是从天然植物中分离得到的一种喜树碱衍生物，是水溶性抗肿瘤原料药，是国外新近上市的广谱肿瘤药物。用于治疗肿瘤、晚期结肠癌、直肠癌、小细胞肺癌、子宫颈癌、卵巢癌和非霍金森式淋巴癌等。与其他抗肿瘤药物联合使用时，可是抗肿瘤作用得到增强而毒性下降。伊立替康是喜树碱类中的新药之一，1966年Wall等人从中国植物喜树里提取出具抗肿瘤活性的物质喜树碱，但由于其水溶性差，以及难以预测的毒性，限制了喜树碱的进一步应用。直到20世纪80年代，人们发现喜树碱是DNA拓扑异构酶抑制剂，拓扑异构酶在肿瘤细胞中表现出不受其他因素影响的高水平表达，尤其是topoⅠ即使在静止期也能维持在比较高的水平。这些发现以及临床药理学研究的深入，激发了设计高效、水溶性好的喜树碱类似物的高潮，先后合成出了一系列水溶性好的衍生物，CPT-11就是其中之一。但由于喜树碱毒性大，溶解性不好，严重限制了其在临床上的应用，目前全世界都在研究开发毒性更低，抗癌活性更大，溶解性更好的新型喜树碱衍生物。喜树碱类衍生物是目前已经应用于临床的天然抗癌药物中最重要的处于先导地位的化合物之一，伊立替康是其中最具代表性的化合物之一。CPT-11首先由日本Seigo Sawada等人研究发现，1987年开始Ⅰ期临床实验，大规模的Ⅲ期临床实验表明，成品药对多种肿瘤如结肠癌、小细胞肺癌、白血病等都有明显的抑制作用，具有水溶性好，广谱抗癌等特点，而且对氟尿嘧啶耐药病例仍有效。

例如，中国专利申请CN101953781A公开了一种盐酸伊立替康溶液型注射剂及其制备方法，其特征在于，该注射剂含有缓冲盐乳酸及其盐，不含稳定剂山梨醇，将会导致该成品的后期稳定性不好，合格率下降；中国专利申请CN102271659A公开了一种伊立替康或盐酸伊立替康脂质体及其制备方法，制备的脂质体中含有伊立替康或盐酸伊立替康、中性磷脂以及胆固醇，胆固醇与中性磷脂的重量比例为1:3-5,其通过离子梯度法制备得到，但是通过离子梯度法制备过程过于复杂，不适合工业化大生产，该方法制备的脂质体包封率和稳定性都有待于提高；中国专利申请CN1994279A公开了一种注射用盐酸伊立替康脂质体及其制备方法，该方法通过将一定摩尔比的脂质混合物溶解于有机溶剂中，脂质溶液与缓冲盐溶液按照一定体积比混合，通过聚碳酸酯膜挤压统一粒径，并通过超滤除去有机溶剂，得到空白脂质体，加入盐酸伊立替康溶液，并用pH调节剂调节pH至碱性，制成载药脂质体；或者将一定摩尔比的磷脂、胆固醇等脂质及盐酸伊立替康溶解于有机溶剂中，通过喷雾干燥、真空干燥或其他方法除去有机溶剂，使脂质成膜，通过加入含药物的水和溶液水合形成载药脂质体。该脂质体制备方法过于复杂，工业化生产有难度，制备的成品稳定性不够好，生物度利用度不好。

上述盐酸伊立替康制剂都存在稳定性较差，生物利用度也相对较低，药物在体内的吸收和分布较慢，影响了药物的治疗速度和效果等问题。

在药物载体输送系统中，微乳、微球、纳米粒、脂质体、药质体等亚微粒的研究已经成为药物新剂型研究中非常活跃的领域。将药物包封于这些亚微粒中可以改变药物在体内的分布，增加药物在靶器官的分布量，从而提高疗效，减轻毒副作用。

在靶向给药系统中，脂质体的研究较为广泛，脂质体在体内具有良好的靶向性和生物相容性，但一般脂质体具有在体内外不稳定、药物易于渗漏等缺点。含药亚微乳则由于其物理稳定性、油相对药物的溶解度等问题限制了其进一步发展。

脂质纳米粒是经过不同方法制成的粒径在50-1000nm之间的胶粒给药系统，与脂质体和微乳相比，药物由于被包封于骨架中而实现了更好的控释和缓释效果，而且能提高难溶性药物的溶解度。此外，脂质纳米粒还在生物毒性、可降解性和长期稳定性等多个方面显示出优势，是一种极有发展前景的新型给药系统载体。

不过，制备脂质纳米粒的挑战在于选择适当的成分和制法。由于脂质纳米粒的性质如载药量、药物的溶解度、稳定性、溶出性、控释性、生物利用度和毒副作用等与脂质纳米粒的组成直接地密切相关，而脂质纳米粒的组成与所要承载的药物性质直接地密切相关，因此，选择什么样的成分形成具有良好品质的盐酸伊立替康脂质纳米粒是亟待解决的课题。

本发明人通过大量的研究和实验发现，采用特定成分和盐酸伊立替康制成的脂质纳米粒有效的抑制了盐酸伊立替康易水解、稳定性差的问题，同时提高了药物的溶出度，控释效果好。

发明内容

本发明人经过锐意研究发现，通过选用特定重量配比的盐酸伊立替康、卵磷脂、硬脂酸、PEG400和甘油，可以形成品质优异的盐酸伊立替康脂质纳米粒，即以盐酸伊立替康和硬脂酸溶入有机溶剂和难溶于水的脂质溶于缓冲盐溶液构成混合液，以亲水性表面活性剂的水溶液为水相，采用搅拌乳化和高压乳匀相结合的方法，将盐酸伊立替康包载于脂质纳米粒中制得盐酸伊立替康脂质纳米粒，再将脂质纳米粒以一般的制剂方法制成注射剂，从而完成本发明。本发明提高了盐酸伊立替康的溶解性，改善了控释效果，提高了药物的生物利用度，提高了制剂产品的质量，减少了毒副作用，增加了药物的靶器官中的浓度，药物在体循环中分布的时间较长，疗效明显提高。

脂质纳米粒主要由脂质、乳化剂和药物三部分构成，通过根据要包载的药物选择合适的脂质和乳化剂。脂质纳米粒的载药量和释药性等性质与其组成密切相关。

为了改善脂质纳米的载药量，要选择合适的脂质和乳化剂，使得药物在脂质中具有高的溶解度，而且脂质不易形成规则结晶，以免由于脂质完整结晶导致药物溶解度急剧下降而致的药物突然释出。

为了实现本发明的目的，本发明人进行的大量研究和实现，发现特定重量配比的盐酸伊立替康、卵磷脂、硬脂酸、海藻糖、PEG400和甘油能形成品质优异的盐酸伊立替康脂质纳米粒注射剂，其中，作为药物活性成分的盐酸伊立替康的载药量高，释药性好。

在本文中，所用术语“释药性”和“药物释放性”是可互换的，它们的意思是指盐酸伊立替康脂质纳米粒释放活性药物成分盐酸伊立替康的性质

一方面，一种盐酸伊立替康脂质纳米粒注射剂，其由包括以下重量配比的成分制成：

优选地：卵磷脂和硬脂酸的重量比为1：1-2：1；PEG400和甘油的重量比为4：1；进一步冻干制备时，还可以加入1-10份的海藻糖。

优选地，一种盐酸伊立替康脂质纳米粒注射剂，其由包括以下重量配比的成分制成：

优选地：卵磷脂和硬脂酸的重量比为2：1；PEG400和甘油的重量比为4：1；

进一步冻干制备时，还可以加入2-10份的海藻糖。

作为用于形成脂质纳米粒的脂质，可以使用多种脂质物质，例如：脂类如卵磷脂、硬脂酸等；类固醇类如胆固醇等；其他如微晶石蜡、鲸蜡醇十六酸酯等。

本发明人经过研究发现，对于要包载的盐酸伊立替康而言，卵磷脂和硬脂酸以重量比1：1的组合脂质特别适于作为基础脂质形成脂质纳米粒的骨架，由此获得的脂质纳米粒载药量高，药物释出性优异，稳定性高。而当使用卵磷脂和硬脂酸以其他重量比的组合物时，或者使用其他单一或组合的脂质时，难以形成品质优良的脂质纳米粒，其载药量、释药性、和稳定性等性质差。

在本发明的盐酸伊立替康脂质纳米粒中，相对于1重量份的盐酸伊立替康而言，卵磷脂的用量为6-30重量份，硬脂酸的用量为3-15重量份，卵磷脂和硬脂酸的重量比为2：1。如果卵磷脂和硬脂酸的用量低于6重量份，由于纳米粒骨架量不足而会有大量游离的盐酸伊立替康未被包载；反之，如果卵磷脂和硬脂酸的用量高于45重量份，会导致纳米粒的载药量下降，释药性劣化。

在本发明的盐酸伊立替康脂质纳米粒中，PEG400和甘油作为乳化剂用于改善纳米粒的脂质和药物之间的相容性，以及改善纳米粒骨架结晶性能从而改进纳米粒的药物释放性能，还能改进纳米粒骨架膜的稳定性。

PEG400为液体、它具有与各种溶剂的广泛相容性，是很好的溶剂、乳化剂和增溶剂，被广泛用于液体制剂，当植物油不适合作活性物配料载体时，PEG则是首选助溶材料。这主要是由于PEG稳定、不易变质，含有PEG的针剂被加热到150摄氏度时是很安全、很稳定的。此外还可以同高分子量的（PEG）向混合而是七混合物具有很好的溶解性和良好的与药物相容性.当用于卵磷脂和硬脂酸脂质中时，不仅能改进盐酸伊立替康在脂质中的溶解度从而提高载药量，而且能提高脂质在低温和高温下的稳定性，进而提高盐酸伊立替康纳米粒的稳定性，此外，PEG400还有助于控制纳米粒的粒径大小和分布。

甘油是一种非离子型助表面活性剂和乳化剂，能起到进一步促进盐酸伊立替康在脂质中的溶解度增加的作用，并且能改善盐酸伊立替康脂质纳米粒的物理性质如粒径大小及分布，使得纳米粒的粒径更小且分布更均匀。

海藻糖是由两个葡萄糖分子以α,α,1,1-糖苷键构成的非还原性糖，自身性质非常稳定，它最明显的性质是在无水的条件下有保护生物膜的能力，使脂质纳米粒即使在脱水的情况下也保持形态完整。

在本发明的盐酸伊立替康脂质纳米粒注射剂中，海藻糖能有效保护脂质体纳米粒的形态和稳定性，进一步提高脂质纳米粒注射剂的稳定性。

本发明人经过研究发现，对于要包载的盐酸伊立替康而言，PEG400和甘油以重量比4：1的组合乳化剂特别适于作为乳化剂，用于通过卵磷脂和硬脂酸以重量比2：1的组合脂质包载盐酸伊立替康而形成形成脂质纳米粒，由此获得的脂质纳米粒载药量高，药物释出性优异，且稳定性高。而当使用PEG400和甘油以其他重量比的组合物作为乳化剂时，或者使用其他单一或组合的乳化剂时，难以形成品质优良的脂质纳米粒，其载药量、释药性、和稳定性等性质差。

在本发明的盐酸伊立替康脂质纳米粒中，相对于1重量份的盐酸伊立替康而言，PEG400的用量为8-20重量份，甘油的用量为2-5重量份，PEG400和甘油的重量比为4：1。如果PEG400的用量低于8重量份，甘油的用量低于2重量份，则会由于乳化剂的用量不足导致对脂质的改善不足，从而使得脂质纳米粒的载药量、稳定性、释释药性等重要性质劣化；反之，如果PEG400的用量高于25重量份，甘油的用量高于5重量份，则会由于乳化剂量过高而影响脂质纳米粒的稳定性、释药性。

在本发明的盐酸伊立替康脂质纳米粒中，对于要包载的活性药物成分盐酸伊立替康，通过适量配比的PEG400和甘油对由卵磷脂和硬脂酸以适量配比的组合脂质的协同调节促进作用，能形成载药量、稳定性高、释药性优异的盐酸伊立替康脂质纳米粒，其溶出性优异、控释效果好、生物利用度高。

一方面，本发明提供盐酸伊立替康脂质纳米粒注射剂的制备方法，该方法包括以下步骤：

（a）在全程氮气保护的情况下，将卵磷脂加入到pH7.0缓冲盐溶液中，50℃恒温水浴加热，搅拌使其完全溶解，然后加入溶于有机溶剂的盐酸伊立替康和硬脂酸溶液，充分搅拌搅拌使其溶解、分散，构成混合相；

（b）将PEG400、甘油溶解于水中，50℃恒温水浴加热，搅拌使其溶解，形成水相；

（c）将混合相缓慢加入搅拌中的水相中，温度保持在50℃，继续磁力搅拌并超声处理1h；

（d）减压除掉有机溶剂，得到半透明初乳；

（e）将上述步骤中的初乳，高压匀质乳化5次，得盐酸伊立替康脂质纳米粒混悬液；

（f）0.45μm微孔滤膜过滤，灌装，灭菌，得盐酸伊立替康脂质纳米粒注射剂。

另一方面，本发明提供盐酸伊立替康脂质纳米粒注射剂的制备方法，该方法包括以下步骤：

（a）在全程氮气保护的情况下，将卵磷脂加入到pH7.0缓冲盐溶液中，50℃恒温水浴加热，搅拌使其完全溶解，然后加入溶于有机溶剂的盐酸伊立替康和硬脂酸溶液，充分搅拌搅拌使其溶解、分散，构成混合相；

（b）将PEG400、甘油和海藻糖溶解于水中，50℃恒温水浴加热，搅拌使其溶解，形成水相；

（c）将混合相缓慢加入搅拌中的水相中，温度保持在50℃，继续磁力搅拌并超声处理1h；

（d）减压除掉有机溶剂，得到半透明初乳；

（e）将上述步骤中的初乳，高压匀质乳化5次，得盐酸伊立替康脂质纳米粒混悬液；

（f）0.45μm微孔滤膜过滤，灌装，冷冻干燥，得盐酸伊立替康脂质纳米粒注射剂。

在本发明的盐酸伊立替康脂质纳米粒的制备方法的一个优选实施方案中，步骤（a）中所述有机溶剂选自乙醇、甲醇、叔丁醇、正丁醇、异丙醇、丙酮、乙腈、苯甲醇、正己烷和二氯甲烷中的一种或几种，优选乙醇。

步骤（a）中所述缓冲盐溶液是选自磷酸盐缓冲溶液、枸橼酸盐缓冲溶液、碳酸盐缓冲溶液、硼酸盐缓冲溶液中的一种，优选pH7.0磷酸盐缓冲溶液。

在本发明的盐酸伊立替康脂质纳米粒的制备方法的一个优选实施方案中，步骤（e）中进行高压匀质乳化的压力为100MPa。

本发明的盐酸伊立替康脂质纳米粒注射剂的制备方法，其特征在于步骤（f）中所述的冷冻干燥时预冻温度为-20~-75℃，预冻时间为2~24小时，升华时间为12~48小时，再干燥温度为0~35℃，再干燥时间为2~12小时；灭菌条件为121℃，30min。

在本发明的盐酸伊立替康脂质纳米粒的制备方法中，以硬脂酸和盐酸伊立替康溶于有机溶剂和卵磷脂溶入缓冲盐溶液构成混合相，以海藻糖、PEG400和甘油的水溶液为水相，采用搅拌乳化和高压乳匀相结合的方法，将盐酸伊立替康包载于脂质纳米粒中制得盐酸伊立替康脂质纳米粒制剂。

在本发明的盐酸伊立替康脂质纳米粒的制备方法中，通过选择适当的脂质和乳化剂，以及选择适当的工艺条件如温度和转速等，使得所制备的盐酸伊立替康脂质纳米粒不仅粒径分布均匀、平均粒径小，而且稳定性高、释药性好。

研究发现，脂质纳米粒的大小是影响其在体内分布、停留时间和稳定性的重要因素，脂质纳米粒的粒径越小，体内停留时间越长，稳定性越高。通过本发明方法制备的盐酸伊立替康脂质纳米粒颗粒小，粒径大小分布均匀，这是其在体内代谢率低、生物利用度高的因素之一。

本发明提供的盐酸伊立替康脂质纳米粒制剂是注射剂，包括注射液和冻干粉针。

在实践中，考虑到药物的有效剂量和用药的便利性，在本发明的盐酸伊立替康脂质纳米粒制剂的优选实施方案中，制剂的规格为每单位制剂盐酸伊立替康为40mg、100mg、5ml：100mg。

在本发明的方法中，还可以根据需要对脂质纳米粒制剂进行灭菌。灭菌方法没有特殊要求，可以使用制药领域中常用的灭菌方法，如加热灭菌、过滤除菌、辐射灭菌或无菌操作等。

本发明先通过活性成分盐酸伊立替康与卵磷脂、硬脂酸、海藻糖、PEG400和甘油特定重量的组合制备成脂质纳米粒注射剂，所得制剂产品质量高，粒径均匀，稳定性高，载药量高，溶出性好，释药性好，药物在血液循环中保留时间长，疗效显著，降低了毒副作用。

本发明提供的盐酸伊立替康脂质纳米粒制剂的制备方法提高了产品质量，工艺简单，设备简易，易于操作，适合于工业化大生产。

在本文中，如果没有特别地说明，含量或用量都以重量计。

有益效果

本发明的脂质纳米粒注射剂减少了毒副作用，提高了制剂产品质量，具有良好的制剂稳定性，冷冻过程中脂质纳米粒不会因脱水、融合、冰晶等发生破裂，长期储存后，脂质纳米粒同样保持良好的包封率。

通过本发明方法制得的盐酸伊力替康脂质纳米粒注射剂，提高了盐酸托泊替康的溶解度，提高了制剂产品的质量，减少了毒副作用，增加了药物在体循环中的保留时间，提高了药物的生物利用度，疗效明显提高；并且制备方法简单，适合于工业化大生产。

附图说明

图1是盐酸托泊替康脂质体注射剂的血药浓度-时间曲线。

其中：

具体实施方式

以下通过具体优选的实施例对本发明进行进一步说明。这些实施例仅是说明性的，并不应理解为对本发明的限制。

实施例1盐酸伊立替康脂质纳米粒注射剂的制备

所用成分如下：

采用以下生产工艺制备盐酸伊立替康脂质纳米粒片：

（1）将240g卵磷脂加入于800ml pH7.0磷酸盐缓冲溶液中，50℃恒温水浴加热，搅拌使其完全溶解，然后加入溶有50g盐酸伊立替康和120g硬脂酸的200ml乙醇溶液，充分搅拌搅拌使其溶解，构成混合相；

（2）将320gPEG400和80g甘油溶解于1000ml水中，50℃恒温水浴加热，搅拌使其溶解，形成水相；

（3）将有机相缓慢加入搅拌中的水相中，温度保持在50℃，继续搅拌1h；

（4）减压除掉有机溶剂，得到半透明初乳；

（5）将上述步骤中的初乳，在2500转/分钟的搅拌条件下，快速加入到500ml冷水中，100MPa高压匀质乳化5次，得盐酸伊立替康脂质纳米粒混悬液；

（6）0.45μm微孔滤膜过滤，灌装，冷冻干燥，得1000支盐酸伊立替康脂质纳米粒注射剂。

实施例2盐酸伊立替康脂质纳米粒注射剂的制备

所用成分如下：

采用以下生产工艺制备盐酸伊立替康脂质纳米粒胶囊：

（1）将600g卵磷脂加入于1000ml pH7.0磷酸盐缓冲溶液中，50℃恒温水浴加热，搅拌使其完全溶解，然后加入溶有100g盐酸伊立替康和300g硬脂酸的300ml乙醇溶液，充分搅拌搅拌使其溶解，构成混合相；

（2）将800gPEG400和200g甘油溶解于1000ml水中，50℃恒温水浴加热，搅拌使其溶解，形成水相；

（3）将有机相缓慢加入搅拌中的水相中，温度保持在50℃，继续搅拌1h；

（4）减压除掉有机溶剂，得到半透明初乳；

（5）将上述步骤中的初乳，在2500转/分钟的搅拌条件下，快速加入到800ml冷水中，100MPa高压匀质乳化5次，得盐酸伊立替康脂质纳米粒混悬液；

（6）0.45μm微孔滤膜过滤，灌装，冷冻干燥，得1000支盐酸伊立替康脂质纳米粒注射剂。

实施例3盐酸伊立替康脂质纳米粒注射剂的制备

所用成分如下：

采用以下生产工艺制备盐酸伊立替康脂质纳米粒颗粒：

（1）将600g卵磷脂加入于1500ml pH7.0磷酸盐缓冲溶液中，50℃恒温水浴加热，搅拌使其完全溶解，然后加入溶有100g盐酸伊立替康和300g硬脂酸的300ml乙醇溶液，充分搅拌搅拌使其溶解，构成混合相；

（2）将800gPEG400和200g甘油溶解于2000ml水中，50℃恒温水浴加热，搅拌使其溶解，形成水相；

（3）将有机相缓慢加入搅拌中的水相中，温度保持在50℃，继续搅拌1h；

（4）减压除掉有机溶剂，得到半透明初乳；

（5）将上述步骤中的初乳，在2500转/分钟的搅拌条件下，快速加入到1500ml冷水中，100MPa高压匀质乳化5次，得盐酸伊立替康脂质纳米粒混悬液；

（6）0.45μm微孔滤膜过滤，灌装，灭菌，得1000支盐酸伊立替康脂质纳米粒注射剂。

对比例1-3盐酸伊立替康脂质纳米粒颗粒剂的制备

采用与分别与实施例1-3中相同的生产工艺，将如下表1中所示的对比例1-3中的成分分别制成盐酸伊立替康脂质纳米粒注射剂：

表1 对比例1-3中所用成分

其中，“/”表示未使用。

试验例1 盐酸伊立替康脂质纳米粒粒径的检测

在室温条件下，取实施例1-3和对比例1-3的步骤（5）中所得的纳米粒混悬液1ml，以生理盐水稀释100倍后，置于Submicron Particle Sizer Model 370粒径检测仪的样品管中，测定粒径大小分布及平均粒径；用投射电子显微镜观察粒子形态。结果示于下表2中。

表2 粒径检测结果

由表2可知，本发明实施例1-3中所得盐酸伊立替康脂质纳米粒的平均粒径比对比例1-3中所得脂质纳米粒的平均粒径小很多，而且粒径大小均一，外观更好。

通过比较实施例1-3与对比例1-3可知，本发明的脂质纳米粒具有更小的平均粒径，粒径分布更均匀，外观更好。这表明，盐酸伊立替康脂质纳米粒的粒径与用于形成纳米粒的成分种类直接相关。当使用本发明所用成分以外的成分时，所得盐酸伊立替康脂质纳米粒的平均粒径、粒径分布和外观等性质明显劣于本发明；此外，盐酸伊立替康脂质纳米粒的粒径不仅与用于形成纳米粒的成分种类有关，还与各成分的用量直接相关。当成分用量在本发明限定的成分用量范围外时，所得盐酸伊立替康脂质纳米粒的平均粒径、粒径分布和外观等性质明显劣于本发明。

本发明的盐酸伊立替康脂质纳米粒平均粒径小、粒径分布均匀是进一步促进其载药量高、稳定性高、控释型好、在体内的保留时间时间长、生物利用度等性能优异的一个重要因素。

试验例2 载药量的测定

精密吸取实施例1-3和对比例1-3的步骤（5）中所得的纳米粒混悬液3ml，加于Sephadex G-50凝胶柱顶部，以生理盐水溶液洗脱，流速为1ml/min，收集游离药物部分洗脱液，加甲醇定容，摇匀；另外，吸取3ml盐酸伊立替康脂质纳米粒混悬液加乙腈破乳，甲醇定容。HPLC法测定盐酸伊立替康含量，计算载药率。结果示于下表3中。

表3 载药量检测结果

试验例3 稳定性和溶出度测定

将以上实施例1-3制备的样品与上市的注射用盐酸伊立替康（江苏恒瑞医药股份有限公司，批号20111006）在高温40℃，相对湿度75%±5%条件下6个月，进行加速试验考察，结果见表4。

表4 稳定性和溶出度测定结果

由表4可知，上市和对比例的盐酸伊立替康片溶出度低，加速6月时含量降低明显，有关物质升高；而本发明实施例1-3中制备的样品溶出度高，加速6个月后含量和有关物质均无显著变化。充分说明了本发明在提高稳定性和溶出度方面的优越性。

试验例4 大鼠体内血药浓度的测定

将42只大鼠随机分成7组，每组分别注射给药实施例1-3和对比例1-3以及市售注射用盐酸伊立替康（江苏恒瑞医药股份有限公司，批号20111006）。给药后分别于0.5h、1h、1.5h、2h、3h、6h、8h、12h和24h，采血，血样经处理后，以HPLC-MS法测定血药浓度。做出本发明的盐酸伊立替康脂质纳米粒注射剂和市售的注射用盐酸伊立替康的平均血药浓度与时间的关系曲线，如附图1中所示。

由大鼠血液中血药浓度-时间曲线可知，与上市例药物药物相比，服用本发明的盐酸伊立替康脂质纳米粒制剂具以下特点：在体内的消除速度减缓，生物利用度增加，在体循环中分布时间较长，达到了控释和缓释效果。

Claims (4)

1.一种盐酸伊立替康脂质纳米粒注射剂，其由以下重量配比的成分制成：

其中：卵磷脂和硬脂酸的重量比为1：1-2：1；PEG400和甘油的重量比为4：1

其制备方法包括以下步骤：

（a）在全程氮气保护的情况下，将卵磷脂和硬脂酸加入缓冲盐溶液中，50℃恒温水浴加热，搅拌使其完全溶解，然后加入溶于有机溶剂的盐酸伊立替康溶液，充分搅拌搅拌使其溶解、分散，构成混合相；

（b）将PEG400、甘油溶解于水中，50℃恒温水浴加热，搅拌使其溶解，形成水相；

（c）将混合相缓慢加入搅拌中的水相中，温度保持在50℃，继续磁力搅拌并超声处理1h；

（d）减压除掉有机溶剂，得到半透明初乳；

（e）将上述步骤中的初乳，高压匀质乳化5次，得盐酸伊立替康脂质纳米粒混悬液；

（f）0.45μm微孔滤膜过滤，灌装，灭菌。

2.根据权利要求1的盐酸伊立替康脂质纳米粒注射剂，其由包括以下重量配比的成分制成：

条件是：卵磷脂和硬脂酸的重量比为2：1；PEG400和甘油的重量比为4：1。

3.根据权利要求1的盐酸伊立替康脂质纳米粒注射剂，其加入1-10份的海藻糖制成冻干粉针；其制备方法，包括以下步骤：

（a）在全程氮气保护的情况下，将卵磷脂和硬脂酸加入缓冲盐溶液中，50℃恒温水浴加热，搅拌使其完全溶解，然后加入溶于有机溶剂的盐酸伊立替康溶液，充分搅拌搅拌使其溶解、分散，构成混合相；

（b）将PEG400、甘油和海藻糖溶解于水中，50℃恒温水浴加热，搅拌使其溶解，形成水相；

（c）将混合相缓慢加入搅拌中的水相中，温度保持在50℃，继续磁力搅拌并超声处理1h；

（d）减压除掉有机溶剂，得到半透明初乳；

（e）将上述步骤中的初乳，高压匀质乳化5次，得盐酸伊立替康脂质纳米粒混悬液；

（f）0.45μm微孔滤膜过滤，灌装，冷冻干燥。

4.根据权利要求2的盐酸伊立替康脂质纳米粒注射剂，其加入2-10份的海藻糖制成冻干粉针；其制备方法，包括以下步骤：

（a）在全程氮气保护的情况下，将卵磷脂和硬脂酸加入缓冲盐溶液中，50℃恒温水浴加热，搅拌使其完全溶解，然后加入溶于有机溶剂的盐酸伊立替康溶液，充分搅拌搅拌使其溶解、分散，构成混合相；

（b）将PEG400、甘油和海藻糖溶解于水中，50℃恒温水浴加热，搅拌使其溶解，形成水相；

（c）将混合相缓慢加入搅拌中的水相中，温度保持在50℃，继续磁力搅拌并超声处理1h；

（d）减压除掉有机溶剂，得到半透明初乳；

（e）将上述步骤中的初乳，高压匀质乳化5次，得盐酸伊立替康脂质纳米粒混悬液；

（f）0.45μm微孔滤膜过滤，灌装，冷冻干燥。

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