CN102552137A

CN102552137A - 雷公藤内酯醇脂肪乳注射剂及其制备方法

Info

Publication number: CN102552137A
Application number: CN2012100411692A
Authority: CN
Inventors: 陈元仲; 邓艳平; 许建华
Original assignee: Fujian Medical University
Current assignee: Fujian Medical University
Priority date: 2012-02-22
Filing date: 2012-02-22
Publication date: 2012-07-11
Anticipated expiration: 2032-02-22
Also published as: CN102552137B

Abstract

本发明涉及一种雷公藤内酯醇的脂肪乳剂及其制备方法，脂肪乳注射剂，包括抗肿瘤有效剂量的雷公藤内酯醇和药学上可接受的辅料，其中油相为长链脂肪酸甘油三酯与中链脂肪酸甘油三酯按照4：1-1:1的质量比混合的混合物；制备方法是混合雷公藤内酯醇、乳化剂、脂肪油、等渗调节剂、抗氧化剂和稳定剂，加热，得油相；称取注射用水，加入等渗调节剂，加热得水相；将油相和水相在氮气保护下，加热混合，搅拌得初乳；将初乳经高压均质，形成均一的乳剂；调pH值至6-7，旋转灭菌，得产物雷公藤内酯醇脂肪乳剂，灭菌。脂肪乳剂平均粒径250.9±60.0nm，多分散系数为0.143，分布均一，体系稳定，靶向性强，血管刺激性小。

Description

雷公藤内酯醇脂肪乳注射剂及其制备方法

技术领域

本发明涉及药物制剂领域，具体涉及一种雷公藤内酯醇脂肪乳注射剂及其制备方法。

背景技术

雷公藤内酯醇(triptolide，TPL)，又称雷公藤内酯、雷公藤甲素，是从卫矛科雷公藤属植物雷公藤(Tripterygium wilfoidiiHook.F)，昆明山海棠[(T.Hy- poglaucum Levl.) Hukeda.]等植物中分离出来的一种含有3个环氧基的二萜内酯化合物。结构式如下：

Figure 2012100411692100002DEST_PATH_IMAGE002

雷公藤内酯醇生理活性强，具有显著的抗炎，抗肿瘤，抗生育及免疫调节作用，临床上常用于治疗白血病等肿瘤性疾病，并在多种自身免疫性疾病（如类风湿性关节炎等）及肾、心脏移植排斥反应中也发挥着重要的作用。专利申请号2007100088506公开了雷公藤内酯醇在治疗消化道肿瘤方面的用途。雷公藤内酯醇水溶性较差，需要用丙二醇等有机溶剂助溶，配制成雷公藤内酯醇的丙二醇水溶液。由于雷公藤内酯醇较强局部刺激性，在动物实验和临床应用中雷公藤内酯醇的丙二醇水溶液静脉注射可引起严重的血栓性浅静脉炎（林建峰等，雷公藤内酯醇的局部刺激作用，中国临床药理学与治疗学，2000，5（2）：131-134）。为了减轻雷公藤内酯醇的局部刺激性，提高制剂的稳定性，有必要将其制成适当的剂型。但目前雷公藤内酯醇的制剂类型仅有片剂、软膏、缓释胶囊、脂质体纳米颗粒（其中申请号为200610042364.1 名称为雷公藤内酯醇脂质体纳米颗粒的制备及检测、申请号为200610042367.5，名称为雷公藤内酯醇立体稳定脂质体纳米粒的制备均公开雷公藤内酯醇脂质体纳米颗粒），其中脂质体纳米属于微粒给药系统，工艺难以产业化。也有人通过采用环糊精包合的方式减小雷公藤内酯醇的刺激性和毒副作用，增加溶解度。

脂肪乳剂，性状为注射剂，主要成分是脂肪乳，给药方式是静脉注射，临床上适用于需要高热量的病人（如肿瘤及其它恶性病）、肾损害、禁用蛋白质的病人和由于某种原因不能经胃肠道摄取营养的病人，以补充适当热量和必需脂肪酸。乳剂中的乳滴可以转运到淋巴系统或被网状内皮细胞吞噬而在淋巴液及富含单核吞噬细胞系统的脏器组织浓集。因此具有靶向性，且对静脉血管刺激性小，不产生溶血、过敏现象，安全性较高，患者耐受性好。在现有公开的文献中，并没有将雷公藤内酯醇制成脂肪乳注射液的相关报道。

发明内容

本发明旨在提供一种雷公藤内酯醇脂肪乳剂注射剂，器官靶向性高，血管刺激性小，稳定性高，易于存储。

本发明另目的在于提供一种雷公藤内酯醇脂肪乳注射剂的制备方法。

雷公藤内酯醇脂肪乳注射剂，其特征在于包括抗肿瘤有效剂量的雷公藤内酯醇和药学上可接受的辅料，该脂肪乳注射剂平均粒径小于500 nm；所述辅料包括脂肪油、乳化剂、等渗调节剂、抗氧剂、稳定剂、注射用水；所述的脂肪油为长链脂肪酸甘油三酯与中链脂肪酸甘油三酯按照4：1-1:1的质量比混合的混合物，较佳是3：1-1：1，更佳是3：1，因为在该比例能获得粒径较小、载药量较大，且稳定性好的雷公藤内酯醇脂肪乳注射剂。且每100 ml脂肪乳剂包括以下重量份的原料：雷公藤内酯醇 0.002～0.02g、脂肪油1～45g、脂肪油较佳是1～30g、乳化剂1～10g、抗氧化剂 0.001～0.2g、等渗调节剂1～10g、稳定剂0.01～10g、注射用水余量，并用NaOH溶液调节pH至4-10，出于稳定性考虑，体系的pH较佳为6-7。

乳化剂选自卵磷脂或大豆磷脂、泊洛沙姆 188之任一种，优选大豆磷脂与波洛沙姆188或者卵磷脂和波洛沙姆188的混合物。

所述长链脂肪酸甘油三酯选自大豆油、玉米油、茶油、棉籽油、橄榄油，鱼油、亚麻子油、葵花子油、花生油的任一种或任意两者的混合物；所述中链脂肪酸甘油三酯的碳原子数为C₆～C₁₂。

所述抗氧化剂选自维生素 A、2,6-二叔丁基-4-甲基苯酚、丁基-4-羟基苯甲醚、维生素C 、维生素E中一种或任意的混合物。

所述稳定剂选自乙醇、丙二醇、甘油、油酸、油酸钠、脱氧胆酸钠、脱氧胆酸、聚乙二醇、聚乙烯吡咯烷酮中的一种或几种的组合。

等渗调节剂为选自于甘油、山梨醇、甘露醇和葡萄糖中的一种或几种的混合物。

雷公藤内酯醇脂肪乳剂的制备方法，其特征在于包括下列步骤：

（1）油相的制备：称取雷公藤内酯醇、乳化剂、脂肪油、抗氧化剂和稳定剂，混合均匀后在20～80℃ 加热，得油相；油相加热温度优选30～75℃；

（2）水相的制备：按配方量称取注射用水，加入等渗调节剂，加热得水相；

（3）雷公藤内酯醇初乳的制备：在氮气保护下，将油相和水相在20～80℃下混合，搅拌得初乳；步骤（3）油相和水相的混合温度优选30～75℃下；

（4）雷公藤内酯醇脂肪乳剂的制备：将初乳经20-100Mpa高压均质 1～6次，形成均一的乳剂；

（5）将步骤（4）得到的雷公藤内酯醇脂肪乳剂用碱溶液调pH 值至6-8，较佳是pH6－7，微孔滤膜过滤，得产物雷公藤内酯醇脂肪乳剂，旋转灭菌116℃,30 min。

脂肪乳剂主要是甘油三酯和磷脂组成的乳剂颗粒溶液，其中磷脂起乳化剂的作用，甘油三酯根据结合于甘油的脂肪酸分子结构中碳链的长度而不同，脂肪酸可分为短链脂肪酸、中链脂肪酸和长链脂肪酸。本方面制备的脂肪乳剂采用中、长链脂肪酸混合使用的方式，长链甘油三酸酯（LCT ）提供必需脂肪酸，而中链甘油三酸酯(MCT) 作为能源，在体内易水解,氧化迅速和代谢过程简单，更易被机体吸收。因此该组合能够更快地提供能量,更好地促进蛋白质合成,具有良好的肝脏耐受性和维持正常免疫功能的营养效果。但对于不同的药物，所采用的MCT和LCT的混合比例不同，一般而言，两者的用量是MCT≥LCT。脂肪乳剂属O/W型乳剂，在动力学分类上属于不稳定体系，脂肪乳剂在存储过程中易于产生游离脂肪酸，导致pH显著下降，而且中/长链脂肪乳注射液由于MCT的加入使得在整个体系中油相亲脂性相对降低，在匀质过程中易出现浮油，乳粒分布不均匀等现象，增加了制备难度，且本发明采用的脂肪油的组份用量，MCT≤LCT，制备难度更大。因此，一般而言，为了获得稳定的体系，需要体系的pH值为偏碱性，且需要严格控制均质过程的工艺参数。

本发明提供的静脉注射用雷公藤内酯醇脂肪乳剂，具有以下特点：

（1）采用的脂肪油为MCT与LCT的混合物，且MCT用量小于等于LCT，获得的雷公藤内酯醇脂肪乳剂平均粒径小于500 nm，载药量可达到200微克/ml；

（2）体系pH= 6-7，体系稳定，贮藏期可达2年；

（3）可直接用于静脉注射，使用方便，具有良好的器官靶向性；主药主要分布于油相或油水界面，外层水相的药物含量低，可降低雷公藤内酯醇对血管内皮细胞的刺激作用，极大的减少了病人输液时的疼痛，易为患者接受；器官靶向性高。

（4）制备工艺简单易行，适于工业化大生产。

附图说明

图1是本发明实施例3所获得的脂肪乳注射剂的粒径分布图，从图中可知，该制剂的平均粒径171.3±54.0 nm，多分散系数为0.102分布均一。

图2是实施例1制备获得雷公藤脂肪乳注射液的给药2小时后对血管的刺激性实验所得红细胞的显微镜放大图（放大200倍），从图中可见红细胞大部分保持完整。

具体实施方式

本发明以下实施例1所采用的原料均经市售获得，具体如下：雷公藤内酯醇、大豆油（供注射用）、中链脂肪酸甘油三酯、蛋黄卵磷脂、油酸均购自Lopoid、维生素 E购自Sigma、甘油购自浙江遂昌惠康药业有限公司、泊洛沙姆188（供注射用）购自德国 Basf。其他实施例中所采用的与实施例中发挥相同功能的组分购于同一企业。

实施例1

雷公藤内酯醇脂肪乳剂，处方如下：雷公藤内酯醇：200 mg、注射用大豆油: 240g、中链甘油三酸酯：60g、蛋黄卵磷脂: 12g、油酸:2g、维生素 E: 0.5g、甘油:25g、泊洛沙姆188 ：20g、注射用水加至1000 mL。

制备方法：

（1）将雷公藤内酯醇加入到大豆油、中链甘油三酸酯、蛋黄卵磷脂、维生素E和油酸中，加热至60℃，搅拌使溶解；

（2）用少量注射用水，加热至60℃，加入甘油和泊洛沙姆188，用高速搅拌机搅拌分散。

（3）在氮气保护下，缓慢将水相加入到油相中，搅拌，得初乳液，调节pH值至8；

（4）将初乳液转入高压均质机均质，调整均质压力为20MPa，均质并控温，循环乳化5次，冷却乳液至室温。调节pH值至7，过滤、灌装，灭菌，即得。平均粒径339.1nm，多分散系数为0.171，分布均一，载药量150微克/ml。

实施例2

雷公藤内酯醇脂肪乳剂，处方如下：雷公藤内酯醇：100 mg、注射用大豆油: 50g、中链甘油三酸酯：50 g、蛋黄卵磷脂: 24g、油酸:1.5g、维生素 E: 1g、甘油:22.5g、泊洛沙姆188 ：10g、注射用水至1000 mL。

制备方法：

（1）将雷公藤内酯醇加入到大豆油、中链甘油三酸酯、蛋黄卵磷脂、维生素E和油酸中，加热至80℃，搅拌使溶解；

（2）用适量注射用水，加热至80℃，加入甘油和泊洛沙姆188，用高速搅拌机搅拌分散；

（3）将水相缓慢加入到油相中，继续搅拌，得初乳液，调节pH值至7.5（全程氮气保护）；

（1）将初乳液转入高压均质机均质，调整均质压力为100MPa，均质并控温，循环乳化3次，冷却乳液至室温。调节pH值至6.5，过滤、灌装，灭菌，即得。平均粒径219.6 nm，多分散系数为0.155，分布均一。

实施例3

雷公藤内酯醇脂肪乳剂，处方如下：雷公藤内酯醇：20mg、注射用大豆油: 75g、中链甘油三酸酯：25g、大豆卵磷脂: 120g、油酸:3g、维生素 E: 3g、甘油:25g、泊洛沙姆188 ：200g、注射用水至1000 mL。制备方法如例2。平均粒径232.1nm，多分散系数为0.171，分布均一。

制备方法：

（2）将雷公藤内酯醇加入到大豆油、中链甘油三酸酯、蛋黄卵磷脂、维生素E和油酸中，80℃搅拌使溶解；

（3）用适量注射用水，加热至80℃，加入甘油和泊洛沙姆188，用高速搅拌机搅拌分散；

（4）将水相缓慢加入到油相中，继续搅拌，得初乳液，调节pH值至9（全程氮气保护）；

（5）将初乳液转入高压均质机均质，调整均质压力为100MPa，均质并控温，循环乳化3次，冷却乳液至室温。调节pH值至6，过滤、灌装，灭菌，即得。平均粒径186.5 nm，多分散系数为0.115，分布均一，载药量200微克/ml。

实施例4雷公藤内酯醇脂肪乳注射给药后2小时对血管的刺激性实验

实验组设置：

取体重2.1～2.5 kg 健康家兔18只，由福建医科大学动物中心提供，雌雄兼用，随机分为三组，分别第一组给予生理盐水组(1 mL/kg)；第二组给雷公藤内酯醇注射液（1 mL/kg），注射液的制备过程是称取干燥至恒重的雷公藤内酯醇对照品1.5 mg，加入1.0mL1,2-丙二醇溶解，混匀，水浴加热，用少量注射用水稀释后转移定量至25 mL量瓶中，即得雷公藤内酯醇注射剂；第三组为实施例3制备的雷公藤内酯醇静脂肪乳(1 mL/kg)。

实验过程：将家兔置于固定器内，经耳缘静脉给药，1mL/min恒速推入，给药后两小时处死动物，取注射部位，取材部位为进针部位的向心端距进针部位1～4 cm ，分1～2.5 cm 和2.5～ 4 cm 二段取材，10%福尔马林液固定，石蜡包埋，H.E.染色，普通显微镜下观察注射部位血管，毛细血管对药物的反应。

表1 雷公藤内酯醇脂肪乳注射给药后2小时对血管的刺激作用

注：-阴、 ± 极轻病变、＋轻病变、＋＋重度病变

由表1可见，雷公藤内酯醇脂肪乳剂6例中有1例嗜中性白细胞粘着及浸润，红细胞大部分保持完整。而雷公藤内酯醇注射液6例中有4例嗜中性白细胞粘着及浸润。

实施例5雷公藤内酯醇脂肪乳注射给药7d后对血管的刺激性实验

实验组设置、实验动物的取材部位、考察制剂的样本同实施例4。

实验过程：与实施例4不同之处在于将家兔置于固定器内，每日经耳缘静脉给药一次，1mL/min恒速推入，连续给药一周，第七天给药后2小时处死动物，实验结果见表2。

表2 雷公藤内酯醇脂肪乳连续给药对血管的刺激作用

注：-阴、 ± 极轻病变、＋轻病变、＋＋重度病变

由表2可见，雷公藤内酯醇注射液6例中有5例都存在混合血栓。雷公藤内酯醇脂肪乳6例中只有1例较轻透明血栓。二者均有不同程度的静脉内皮肿胀、毛细管周围炎性反应，但脂肪乳注射液显著轻于注射液。

实施例6稳定性试验

利用加速实验来测定本发明的脂肪乳剂的药物稳定性；将实施例3制得的脂肪乳剂于25分别于0月，1月，2月和3月测定药物含量和平均粒径，实施例2的测定结果见表。

表3脂肪乳剂药物稳定性加速实验结果

	0月	1月	2月	3月
					含量（μg/mL）	200	198	199	195
粒径（nm）	231.3	232.4	231.6	231.9

从表3可知，本发明制备的脂肪乳剂为稳定体系，在加速实验进行的3个月时间，未发生颗粒聚集和药物含量减少的现象，根据加速实验的规则，本发明的脂肪乳剂保持稳定的时间为2年。

实施例7药效试验抗癌静脉注射

模型的建立(釆用实体瘤接种，用套管针），观察裸鼠生长状态，待裸鼠瘤体积约0.5×0.5×0.5 cm³时，将裸鼠按瘤的体积大小随机分成二组,并做好标记。次日开始给药，正常组给予空白溶剂，给药组剂量为0.4mg/kg，按0.1ml/10g，隔天给药，每隔三天称重一次并测量肿瘤体积大小，给药10次，将祼鼠处死取瘤,称重,并计算抑瘤率。结果显示0.4mg/kg实施例3制备的雷公藤内酯醇脂肪注射剂能明显抑制HT-29细胞裸鼠移植瘤的生长,其抑瘤率为79.54%（p<0.05）。

实施例7-10所采用的原料以及组分见表4所示，其余内容同实施例3。且表4的所有原料以1L脂肪乳剂所包含的化学组份计量：

表4

Figure 2012100411692100002DEST_PATH_IMAGE003

Claims

1.雷公藤内酯醇脂肪乳注射剂，其特征在于包括抗肿瘤有效剂量的雷公藤内酯醇和药学上可接受的辅料，该脂肪乳注射剂平均粒径小于500 nm；所述辅料包括脂肪油、乳化剂、等渗调节剂、抗氧剂、稳定剂、注射用水；所述的脂肪油为长链脂肪酸甘油三酯与中链脂肪酸甘油三酯按照4：1-1：1的质量比混合的混合物。

2.根据权利要求1所述的雷公藤内酯醇脂肪乳注射剂，其特征在于，所述乳化剂选自卵磷脂或大豆磷脂、泊洛沙姆之任意一种或者混合物；

所述长链脂肪酸甘油三酯选自大豆油、玉米油、茶油、棉籽油、橄榄油，鱼油、亚麻子油、葵花子油、花生油的任一种或任意两者的混合物；

所述中链脂肪酸甘油三酯的碳原子数为C₈～C₁₂ ；所述抗氧化剂选自维生素 A、2,6-二叔丁基-4-甲基苯酚、丁基-4-羟基苯甲醚、维生素C、维生素E中一种或任意的混合物；

所述稳定剂选自乙醇、丙二醇、甘油、油酸、油酸钠、脱氧胆酸钠、脱氧胆酸、聚乙二醇、聚乙烯吡咯烷酮中的一种或几种的组合；

3.根据权利要求1所述的雷公藤内酯醇脂肪乳注射剂，其特征在于每100 ml脂肪乳剂包括以下量的组份：雷公藤内酯醇 0.002～0.02g、脂肪油1～45g、乳化剂1～10g、等渗剂 0.5～10g、抗氧化剂 0.001～0.2g、等渗调节剂1～10g、稳定剂0.01～10g、注射用水余量，并调节pH至4-10，且长链脂肪酸甘油三酯：中链脂肪酸甘油三酯优选3：1-1：1。

4.根据权利要求1所述的雷公藤内酯醇脂肪乳注射剂，其特征在于每100 ml脂肪乳剂包括以下量的组份：雷公藤内酯醇0.002～0.02g、脂肪油1～30g 、乳化剂1～10g、抗氧化剂 0.001～0.2g、等渗调节剂0.5～10g、稳定剂0.01～10g，注射用水余量，并调节pH为6-7，且长链脂肪酸甘油三酯：中链脂肪酸甘油三酯优选3：1。

5.根据权利要求1所述的雷公藤内酯醇脂肪乳注射剂，其特征在于乳化剂优选大豆磷脂与波洛沙姆188或者卵磷脂和波洛沙姆188的混合物。

6.基于权利要求1所述的雷公藤内酯醇脂肪乳剂的制备方法，其特征在于包括下列步骤：

（1）油相的制备：称取雷公藤内酯醇、乳化剂、脂肪油、抗氧化剂和稳定剂，混合均匀后在20～80℃ 加热，得油相；

（3）雷公藤内酯醇初乳的制备：在氮气保护下，将油相和水相在20～80℃下混合，搅拌得初乳；

（5）将步骤（4）得到的雷公藤内酯醇脂肪乳剂用碱溶液调pH 值至6-8，微孔滤膜过滤，得产物雷公藤内酯醇脂肪乳剂，灭菌。

7.基于权利要求6所述的雷公藤内酯醇脂肪乳剂的制备方法，其特征在于步骤（1）的油相加热温度优选30～75℃；步骤（3）油相和水相的混合温度优选30～75℃下；步骤（4）的条件是：旋转灭菌116℃,30 min，体系pH值调节至6－7。