CN104510704A - 一种雄性抗生育药物乳剂及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种雄性抗生育药物乳剂，其中，该乳剂含有雄性抗生育药、乳化剂、油和水，所述乳化剂为磷脂化合物。本发明还公开了一种雄性抗生育药物乳剂的制备方法，其中，该方法包括，将雄性抗生育药、乳化剂、油和水混合均匀，得到雄性抗生育药物乳剂；所述乳化剂为磷脂化合物。本发明提供的雄性抗生育药物乳剂即使在长时间的储存下也能够稳定地存在，并且分散性和给药时的流畅性均处于较好的状态，使得直接应用天然植物药物原药给药的剂量得到控制和保证。特别是，将叉子圆柏的球果粉和/或叉子圆柏的球果的乙醇提取物作为雄性抗生育药物乳剂的活性成分，分别制成的雄性抗生育药物乳剂，其可以抑制雄性生育，并停止用药后能够可逆地恢复生育，且未见明显副作用。

Description

一种雄性抗生育药物乳剂及其制备方法

技术领域

本发明涉及一种雄性抗生育药物乳剂及其制备方法。

背景技术

目前，世界上男性生育调控的有效方法仅有体外排精、避孕套和输精管绝育术，这些方法已经应用了一个多世纪，除了一些小的改良之外，至今没有什么创新。然而，国内外科学家一直在探讨通过药物达到对男性生育调控的目的。用于男性生育调控的药物研究主要有两个方面：甾体激素类男性避孕药和非甾体激素类天然植物药。

在研究阶段，为了便于对试验动物进行给药，通常需要将雄性抗生育药制备成混悬液的形式。但目前若按照已有的在标准条件下所制备的雄性抗生育药的方法，所制备出的雄性抗生育药混悬液稳定性较差，容易分层，有的药物甚至成为絮凝状，并且分散性和给药时的流畅性也较差。这均严重制约着雄性抗生育药的有效研究与发展。

发明内容

本发明的目的在于克服现有的雄性抗生育药物混悬液的稳定性、分散性以及流畅性较差的缺陷，提供一种稳定性、分散性以及流畅性较好的雄性抗生育药物乳剂，以及该雄性抗生育药物乳剂的制备方法。

为了实现上述目的，一方面，本发明提供了一种雄性抗生育药物乳剂，其中，该乳剂含有雄性抗生育药、乳化剂、油和水，所述乳化剂为磷脂化合物。

优选地，所述磷脂化合物为卵磷脂和/或大豆磷脂，更优选为卵磷脂；所述油为玉米油、花生油、大豆油、芝麻油、薄荷油、氢化植物油、氢化大豆油和橄榄油中的一种或多种，更优选为玉米油。

优选地，所述雄性抗生育药为叉子圆柏（Sabina vulgaris Ant）的球果粉、叉子圆柏的球果的乙醇提取物、棉酚和雷公藤中的一种或多种；更优选为叉子圆柏的球果粉和/或叉子圆柏的球果的乙醇提取物。

优选地，相对于100重量份的乳化剂，雄性抗生育药的含量为9-670重量份，水的含量为625-1000重量份，油的含量为400-900重量份。

另一方面，本发明提供了一种雄性抗生育药物乳剂的制备方法，其中，该方法包括，将雄性抗生育药、乳化剂、油和水混合均匀，得到雄性抗生育药物乳剂；所述乳化剂为磷脂化合物。

优选地，将雄性抗生育药、乳化剂、油和水混合均匀的方法包括：将乳化剂与水混合均匀，制备溶剂相；将雄性抗生育药与油混合均匀，制备溶质相：将溶质相和溶剂相混合均匀，制备雄性抗生育药物乳剂。

优选地，所述混合在研磨和/或搅拌的条件下进行。

本发明提供的雄性抗生育药物乳剂即使在长时间的储存下也能够稳定的存在，并且分散性和给药时的流畅性均处于较好的状态。特别是，将叉子圆柏的球果粉和/或叉子圆柏的球果的乙醇提取物作为雄性抗生育药物乳剂的活性成分制成雄性抗生育药物乳剂，不但能够使其活性成分稳定存在，分散性等性能好，其还可以抑制雄性生育，并能够可逆性地恢复生育功能，且未见明显副作用。

本发明的其他特征和优点将在随后的具体实施方式部分予以详细说明。

附图说明

图1为阴性对照组处理的雄鼠的睾丸经HE染色后放大100倍的显微镜图片。

图2为含有叉子圆柏的球果粉的乳剂A1的中剂量组处理的雄鼠的睾丸经HE染色后放大100倍的显微镜图片。

图3为含有叉子圆柏的球果的乙醇提取物的乳剂A2的中剂量组处理的雄鼠的睾丸经HE染色后放大100倍的显微镜图片。

图4为阴性对照组处理的雄鼠的附睾经HE染色后放大100倍的显微镜图片。

图5为含有叉子圆柏的球果粉的乳剂A1的中剂量组处理的雄鼠的附睾经HE染色后放大100倍的显微镜图片。

图6为含有叉子圆柏的球果的乙醇提取物的乳剂A2的中剂量组的处理的雄鼠附睾经HE染色后放大100倍的显微镜图片。

图7为雄性大鼠睾丸和附睾的超微结构的图片，其中，a为含有棉酚的乳剂A4处理的睾丸的超微结构图片，b为含有棉酚的乳剂A4处理的附睾的超微结构图片，c为含有叉子圆柏的球果粉的乳剂A1的中剂量组处理的睾丸超微结构图片，d为含有叉子圆柏的球果粉的乳剂A1的中剂量组处理的附睾超微结构图片。

具体实施方式

以下对本发明的具体实施方式进行详细说明。应当理解的是，此处所描述的具体实施方式仅用于说明和解释本发明，并不用于限制本发明。

一方面，本发明提供了一种雄性抗生育药物乳剂，其中，该乳剂含有雄性抗生育药、乳化剂、油和水，所述乳化剂为磷脂化合物。

本发明提供的乳剂主要在于雄性抗生育药、磷脂化合物、油和水的混合使用，也即，只要保证所述乳剂中含有上述成分即可实现本发明的目的。而本发明的发明人发现，当相对于100重量份的乳化剂，雄性抗生育药的含量为9-670重量份，水的含量为625-1000重量份，油的含量为400-900重量份时，并且在进一步优选的情况下，相对于100重量份的乳化剂，雄性抗生育药的含量为9-480重量份，水的含量为625-860重量份，油的含量为400-615重量份时，所述雄性抗生育药物乳剂的稳定性、分散性以及灌胃时的流畅性会得到进一步提高。

本发明中对磷脂化合物的具体种类没有特别的限制，只要其不与加入的其它物质相互反应，以及在给药后不会引起不良反应，其具有的亲水及亲油的两亲特性，能够使水相和油相形成均一的水包油（o/w）的或油包水（w/o）的乳液即可。优选情况下，所述磷脂化合物为卵磷脂和/或大豆磷脂，优选为卵磷脂，也即磷脂酰胆碱，是磷脂酸结构中的磷酸基团与胆碱相连接所成的酯，它的分子式为C₄₂H₈₄O₉PN，它可以商购得到，例如，可以由国药集团化学试剂有限公司购得。通常情况下，卵磷脂以混合物的形式存在，本发明中，对含有卵磷脂的混合物中卵磷脂的纯度没有特别的要求，综合考虑杂质的引入量，所述卵磷脂的纯度优选在55重量%以上，更优选在60重量%以上。

本发明中对所述油的种类也没有特别的限制，其可以为能够应用于口服制剂的任何种类的油，只要其不与加入的其它物质相互反应，以及在给药后不会引起不良反应，并能够使水相和油相形成均一、稳定的乳液即可。优选情况下，所述油为玉米油、花生油、大豆油、芝麻油、薄荷油、氢化植物油、氢化大豆油和橄榄油中的一种或多种，更优选为玉米油。

根据本发明，所述雄性抗生育药可以为本领域常规的各种用于抑制雄性生育的药物。优选地，所述雄性抗生育药为非甾体激素类天然植物药，例如，可以为叉子圆柏（Sabina vulgaris Ant）的球果粉、叉子圆柏的球果的乙醇提取物、棉酚和雷公藤中的一种或多种。优选将上述雄性抗生育药物制备成本发明所述的乳剂后即使在长时间的储存下也能够稳定地存在，并且分散性和给药时的流畅性均处于较好的状态，而且便于给药时的计量。

棉酚是从棉籽油中提取的化合物，其避孕有效率可达到98.5%，但其产生的副作用也较为显著，例如，进行棉酚给药后可能会出现低血钾、肌无力、嗜睡和性欲减退等现象。并且，棉酚直接作用于睾丸生精上皮细胞，以精子细胞和精母细胞最为敏感，从而导致精子畸形、死亡，直至无精子。由于棉酚的作用部位在睾丸，并且会破坏生精上皮细胞，长期应用可能产生对睾丸功能的不可逆性影响。若长期服用雷公藤也存在对机体产生不可逆的副作用的风险。而对叉子圆柏球果的药理毒理初步研究结果表明：叉子圆柏球果的作用靶点实验显示为最具潜力的雄性生育调控的作用靶器官附睾，这将会克服因为药物干扰引起DNA改变而导致的遗传病。此外，作用于附睾的药物起效快，尚未对睾丸造成显著影响。将叉子圆柏球果应用于雄性大鼠，可获得较好的抗生育效果，并且还观察到了大鼠生育可逆性的现象，也未见明显的副作用。因此，优选情况下，所述雄性抗生育药为叉子圆柏的球果，通常情况下，为了便于给药并使其更好地发挥药效，可以将叉子圆柏球果制备为叉子圆柏球果粉或叉子圆柏球果粉的乙醇提取物。

根据本发明，当所述述雄性抗生育药为叉子圆柏球果粉和/或叉子圆柏球果粉的乙醇提取物时，优选情况下，相对于100重量份的乳化剂，雄性抗生育药的含量为415-480重量份，水的含量为625-860重量份，油的含量为400-615重量份。

按照本发明，优选情况下，所述叉子圆柏球果粉平均颗粒直径小于或等于100微米，进一步优选为小于或等于60微米。其中，将叉子圆柏球果制备成如上粒径的叉子圆柏球果粉的方法可以为本领域公知的各种方法，例如，研磨，或者可以采用粉碎机进行粉碎（例如：食品加工粉碎机、组织粉碎机、中药粉碎机、植物粉碎机、胶体磨、连续投料粉碎机粉碎等），其中，所述粉碎的方式可以为本领域常规的各种粉碎方式，如湿法粉碎或者干法粉碎以及连续投料低温冷冻粉碎等。

所述制备叉子圆柏球果粉的乙醇提取物的方法也为本领域技术人员所公知，例如，可以在索氏提取器中使叉子圆柏球果粉与乙醇接触进行浸提，接触的温度可以为5-80℃，接触的时间可以为4-15h。其中，对所述乙醇的浓度没有特别的限制，可以为本领域常规的用于从植物中浸提有效成分的乙醇的浓度，例如，可以为质量百分比浓度为95-100%的乙醇；所述索氏提取器的使用方法为本领域技术人员所公知，在此不再赘述。此外，本发明对乙醇的用量也没有特别的限制，本领域技术人员可以根据实际情况进行调整，只要能够实现对叉子圆柏球果粉的充分浸提即可。优选的情况下，相对于1kg的叉子圆柏球果粉，乙醇的用量为2.5-3L。

本发明中，所述叉子圆柏（中国树木学）的拉丁学名为Sabina vulgarisAnt，又名新疆圆柏、天山圆柏（中国树木学）、双子柏、沙地柏（中国树木学），爬柏（甘肃张掖）或臭柏（内蒙古乌审旗）。

所述叉子圆柏为松柏门、松柏纲、松柏目、柏科、圆柏属匍匐灌木，高不及1米，稀灌木或小乔木；产于新疆天山至阿尔泰山、宁夏贺兰山、内蒙古、青海东北部、甘肃祁连山北坡及古浪、景泰、靖远等地以及陕西北部榆林。生于海拔1100-2800米（青海可达3300米）地带的多石山坡，或生于针叶或针叶树阔叶树混交林内，或生于沙丘上。

所述叉子圆柏球果为叉子圆柏灌木植物的果实。所述叉子圆柏球果为叉子圆柏灌木植物的果实。为了进一步保证所述叉子圆柏球果的药效，储存时可以将其装入封闭容器或装袋抽真空并在-82℃至4℃冷冻或冷藏。

根据本发明，所述雄性抗生育药物乳剂还可以含有本领域常规的用于制备雄性抗生育药物制剂的组分，例如，琼脂、淀粉、阿拉伯胶、甲基纤维素、海藻钠、果胶等助剂，其含量可以为本领域常规的含量，例如，相对于100重量份的乳化剂，所述助剂的含量可以为0.2-1重量份。

根据本发明，对所述雄性抗生育药物乳剂的保存温度没有特别的限制，例如，当配制后立即使用时，可以进行一般的保存，例如，4-40℃；当配制后需要放置一段时间后使用时，可以在-80℃至4℃进行保存。优选在-20℃至4℃下进行保存。

另一方面，本发明还提供了一种雄性抗生育药物乳剂的制备方法，其中，该方法包括，将雄性抗生育药、乳化剂、油和水混合均匀，得到雄性抗生育药物乳剂；所述乳化剂为磷脂化合物。

根据本发明，尽管将如上的雄性抗生育药、乳化剂、油和水进行常规的混合，使其呈现为均匀分散的乳剂，即可实现本发明的目的。但本发明的发明发现，根据以上各成分性质的不同，可以分别将其制备成溶剂相和溶质相，然后再将溶剂相和溶质相混合均匀制备所述雄性抗生育药物乳剂，能够进一步提高所得雄性抗生育药物乳剂的稳定性、分散性和给药时的流畅性。具体的，可以分别将乳化剂与水混合，使其充分溶解成为均匀的溶剂相；将雄性抗生育药与油混合，使其成为均匀分散的溶质相：然后再将溶质相和溶剂相混合均匀，从而得到本发明的雄性抗生育药物乳剂。

此外，本发明的方法在制备过程中还可以加入常规的助剂，所述助剂，例如，可以为琼脂、淀粉、阿拉伯胶、甲基纤维素、海藻钠和果胶中的一种或多种。当在制备的过程中加入所述助剂时，可以将所述乳化剂、助剂与水混合均匀从而制备溶剂相。然后再按照上述的方法进行乳剂的制备。

根据本发明，对于制备溶剂相和溶质相时各种物质的加入顺序没有特别的限制，只要能够制备出可均匀分散溶质的溶剂相和溶质相即可。但本发明的发明人发现，通过分多次将溶质相加入到溶剂相中，并且保证后一次加入油相时前一次加入的油相已经分散均匀的情况下，制备出的雄性抗生育药物乳剂稳定性、分散性以及给药时的流畅性更佳，储存时间也更长。

根据本发明，所述制备溶剂相、溶质相以及将溶剂相和溶质相混合的条件没有特别的限制，只要保证最终能够得到分散均匀的雄性抗生育药物乳剂即可。优选的情况下，所述混合制备溶剂相的条件包括：温度为10-60℃，混合制备溶质相的条件包括：温度为-15℃至60℃，优选为-10℃至25℃，将溶质相和溶剂相混合的条件包括：温度为-2℃至40℃，优选为10-30℃。

根据本发明，所述混合制备各相的方法可以为本领域公知的各种方法，例如，可以在研磨或搅拌的条件下进行。当制备的量较小时，可以采用研磨机（如：小型实验室用研磨机）或人工研磨的方法，当制备的量较大时，可以采用搅拌的方法。所述搅拌的速度没有特别的限制，本领域技术人员可以根据实际情况进行调节，优选的情况，所述搅拌的速度为200-300rpm。

根据本发明，在制备雄性抗生育药物乳剂过程中以上各组分的用量、种类以及具体的优选情况均可按照如上的描述进行，为了避免不必要的重复，在此不再详细描述。

以上详细描述了本发明的优选实施方式，但是，本发明并不限于上述实施方式中的具体细节，在本发明的技术构思范围内，可以对本发明的技术方案进行多种简单变型，这些简单变型均属于本发明的保护范围。

另外需要说明的是，在上述具体实施方式中所描述的各个具体技术特征，在不矛盾的情况下，可以通过任何合适的方式进行组合。为了避免不必要的重复，本发明对各种可能的组合方式不再另行说明。

此外，本发明的各种不同的实施方式之间也可以进行任意组合，只要其不违背本发明的思想，其同样应当视为本发明所公开的内容。

以下将通过实施例对本发明进行详细描述。

以下实施例和对比例中，棉酚购自陕西三元西北化工厂。

下述实施例中所用的叉子圆柏（Sabina vulgaris Ant）球果是由新疆北部阿勒泰地区地处东经82°28′-85°20′、北纬44°58′-46°24′之间（海拔1400-1500米）的植物自然生长区采摘、汇集得到，经初期除杂、淋水除尘、风干表层水分，并将其分装、装袋抽真空并在-28℃冷藏。经干燥、粉碎后的叉子圆柏球果颗粒直径范围分布通过在北京理化分析测试中心采用日本产OLYMPUS BH-2光学生物显微镜（透射法）进行颗粒直径检测。

制备例1

本制备例用于说明叉子圆柏球果粉的制备。

将叉子圆柏（Sabina vulgaris Ant）球果在-20℃下（相对湿度10%）冷冻干燥240小时，使其干燥后的含水量小于10重量%。并将干燥后的叉子圆柏球果用连续投料粉碎机（LT-100，北京兴实利和科技发展有限公司），粉碎至平均颗粒直径分布范围为小于或等于60微米，得到雄性抗生育药叉子圆柏球果干粉。

制备例2

本制备例用于说明叉子圆柏球果粉的乙醇提取物的制备。

在烧瓶内放入几粒沸石，然后将装好的叉子圆柏球果粉末的滤纸袋置于索氏提取器中，自冷凝管将乙醇加入烧瓶内，电加热包加热，温度为80℃。溶剂受热蒸发，遇冷后变为液体回滴入提取器中，与叉子圆柏球果粉接触开始浸提，待溶剂液面高于虹吸管上端时，在虹吸作用下，浸出液体流入烧瓶，溶剂在烧瓶内因受热继续气化蒸发，如此不断循环7h，至有效成分充分被浸出，经过旋转蒸发（温度在50-75℃）得到叉子圆柏球果粉的乙醇提取物，并进行真空冷冻干燥（LGJ-12厂家：北京松源华兴科技发展有限公司）。其中，乙醇为100%的分析纯试剂，最终所得产物中叉子圆柏的球果的质量百分比浓度经减重计量为27%。

实施例1-7和对比例1-3

用于说明本发明的雄性抗生育药物乳剂以及参照的雄性抗生育药物乳剂以及阴性对照的制备方法以及得到的乳剂。

表1

按照表1中各物质的种类及用量制备雄性抗生育药物乳剂，其中，

实施例1-5和对比例1-3的制备方法为：

（1）按照上表1的配方，在50℃的温度下，将乳化剂和/或羧甲基纤维素钠加入到水中，在250rpm的条件下搅拌80分钟，得到充分均匀溶解的溶剂相。其中，实施例1-5和对比例3为将乳化剂加入到水中；对比例1不含有乳化剂，直接将水搅拌即为溶剂相；对比例2为将羧甲基纤维素钠加入到水中溶胀溶解。

（2）在10℃的温度下，将雄性抗生育药加入到油中，在200rpm的条件下搅拌70分钟，使雄性抗生育药均匀分散在油中，得到溶质相。其中，对比例2不含有油，直接将其含有的雄性抗生育药搅拌后作为溶质相；对比例3不含有雄性抗生育药，直接将其含有的油搅拌后作为溶质相。

（3）在15℃的条件下，将溶质相平均分35次加入到溶剂相中，并在300rpm的条件下搅拌90分钟，使溶质相和溶剂相分散均匀，分别得到雄性抗生育药物乳剂A1-A6和D1-D2以及阴性对照D3。

实施例6的制备方法为：

按照实施例1-5的方法制备雄性抗生育药物乳剂A6，不同的是，步骤（3）中将溶质相一次性加入到溶剂相中。

实施例7的制备方法为：

将实施例7中的各物质按照其用量在20℃，250rpm的搅拌条件下直接进行混合，搅拌120分钟直至得到均匀分散的雄性抗生育药物乳剂A7。

测试例1

测试例1.1分散性的测试

将上述得到的乳剂A1-A7以及D1-D3在25℃下静置80分钟，观察分散性和稳定性，结果见表2。

测试例1.2稳定性的测试

将上述得到的乳剂A1-A7以及D1-D3分别在-20℃（放置一个月）、4℃（分别放置一个星期和一个月）、25℃（放置一个月）和40℃（放置2天）下放置观察其稳定性。结果见表2。

测试例1.3流畅性的测试

用5ml注射器吸取分别吸取实施例和对比例制备的A1-A8和D1-D3，并吸取至注射器的最大刻度处，然后从注射器（不含灌胃针）中推出，采用数显侧摇式测试台HCS500，测量制剂从注射器中推注需要的压力，从而评价制剂推出的流畅性，当压力值远远大于7KN时无法保障实施有效给药，而压力越小表明流畅性越好。结果见表2。

表2

由上表2的结果可以看出，通过将实施例1-7制备得到的乳剂A1-A7与对比例1-2制备得到的D1-D2以及阴性对照D3相比，本发明提供的乳剂A1-A7的分散性、稳定性以及流畅性均要优于参比的乳剂D1-D2，并且优于或基本上达到了阴性对照D3的水平。通过将实施例1与实施例5-7相比可以看出，将各物质的含量以及制备的方法控制在本发明优选的范围内，所得雄性抗生育药物的以上特性能够得到进一步提高。

测试例2

以下测试例中，以实施例1制备的乳剂A1（含有叉子圆柏球果粉；分为高、中、低三个剂量组）和实施例2制备的乳剂A2（含有叉子圆柏球果粉的乙醇提取物；分为高、中、低三个剂量组）制备的乳剂作为实验组，以实施例5制备的乳剂A4（含有棉酚）作为阳性对照组，以对比例3制备的乳剂D3作为阴性对照组（不含有抗生育药）。

下述测试例中，所用的实验用鼠为SD大鼠，雄性，体重200±20g左右，128只。由上海市西普尔比凯有限公司提供，许可证号：SCXK（沪）2008-0016。

将受试动物根据性别，雄性大鼠随机分为8组，每组8只，雌性大鼠随机分为16组，每组8只。

测试例2.1

阴性对照组的8只大鼠每天灌服2ml/kg体重的乳剂D3。实验组1（灌服乳剂A1）分为高、中、低三个剂量组；每个剂量组的8只大鼠灌服剂量分别为2g/kg体重/天、1.25g/kg体重/天和0.8g/kg体重/天（以叉子圆柏球果粉计），实验组2（灌服乳剂A2）分为高、中、低三个剂量组；每个剂量组的8只大鼠灌服剂量分别为0.625g/kg体重/天、0.3125g/kg体重/天和0.150g/kg体重/天（以叉子圆柏球果粉的乙醇提取物计）。阳性对照组的8只大鼠每天灌服30mg/kg体重的乳剂A4（以棉酚计）。连续灌胃给药8周（56天）。给药的大鼠均为雄鼠。

给药的第8周将经过给药的雄鼠与雌性大鼠按雌雄比例1:1合笼交配一周，停止交配后，继续饲养雌性大鼠，至开始合笼起的第20天。

实验结果

生育力和抗生育率：表3中显示了阴性对照组、实验组1和2各剂量组以及阳性对照组中雄性大鼠的生育力以及抗生育率。其中，雄性大鼠生育力按照如下的方法计算，抗生育率（%）=1-雄性大鼠生育率。

雄性大鼠生育力（%）=[受孕大鼠只数/（受孕+未受孕大鼠只数）]×100%。

表3

组织学检查：如图1-6所示，HE染色观察发现，灌服乳剂A1的中剂量组（以叉子圆柏球果粉计）和灌服乳剂A2的中剂量组（以叉子圆柏的乙醇提取物）对大鼠睾丸和附睾形态结构未见明显异常。其中，

图1为阴性对照组（睾丸）；图2为乳剂A1的中剂量组（睾丸）；

图3为乳剂A2的中剂量组（睾丸）；图4为阴性对照组（附睾）

图5为乳剂A1的中剂量组（附睾）；图6为乳剂A2的中剂量组（附睾），

上述组织学检查的染色片子显示：使用含有叉子圆柏的球果粉的乳剂A1和含有叉子圆柏的球果的乙醇提取物的乳剂A2处理的大鼠的睾丸和附睾形态结构均未见明显异常，部分典型详细描述见以下超微结构的影响。

其余剂量组的效果与此类似。

雄性大鼠睾丸和附睾超微结构的影响

采用电镜（日立公司H7650）对雄性大鼠的睾丸和附睾的超微结构进行分析，

棉酚组（阳性对照组）睾丸：如图7a所示，未见各级精细胞，间质细胞脂滴较多，线粒体未见明显肿胀。

棉酚组（阳性对照组）附睾：如图7b所示，附睾管内未见精子，可见大量脂滴，附睾上皮连接未见异常，部分上皮细胞空泡样变，内质网扩张。

乳剂A1的中剂量组睾丸：如图7c所示，精原细胞正常，生精小管内可见各级精细胞。

乳剂A1的中剂量组附睾：如图7d所示，生精小管可见大量精子，部分有胞浆小滴残留，上皮细胞连接紧密，其余未见明显异常。

其余剂量组的效果与此类似。

测试例2.2

停止对雄性大鼠给药2-4周后，将停止给药的雄鼠与雌性大鼠按雌雄比例1:1合笼交配一周，停止交配后，继续饲养雌性大鼠，至开始合笼起的第20天，牺牲雌性大鼠，观察受孕抑制率，也即抗妊娠率情况，以平均抗妊娠率表示同一组雄鼠的生育力。

叉子圆柏的球果的生育可逆性研究：其中，受孕率（%）=[受孕大鼠只数/（受孕+未受孕大鼠只数）]×100%，结果如表4，结果表明各用药大鼠经一定恢复期后，生育力得到一定提高和恢复，提示其可能具有抗生育可逆性。

表4

剂量（g/kg体重）	交配指数%	受孕率%	备注
				空白对照（0）	100	100	停药4周后
乳剂A4（0.03）	100	25	停药4周后
				乳剂A1（0.8）	100	67	停药2周后
乳剂A1（1.25）	100	57	停药2周后
				乳剂A1（2）	100	50	停药2周后
乳剂A2（0.15）	100	100	停药2周后
				乳剂A2（0.3125）	100	100	停药2周后
乳剂A2（0.625）	100	100	停药2周后

其中，交配指数指：在大鼠雌雄合笼后，每天观察每笼阴栓情况，一旦发现阴栓说明交配成功。

对胎仔的影响：空白对照组、灌服乳剂A1的高剂量组（以叉子圆柏的球果粉计）和灌服乳剂A2的高剂量组（以叉子圆柏的乙醇提取物计）随机选取3只雄鼠交配后的受孕雌鼠，待其产仔第一日，对所产胎仔重量、顶臀长、尾长和性别比进行检测分析，结果与空白对照组相比，叉子圆柏的球果粉组及其球果的提取物组的组雌鼠所产胎仔的重量、顶臀长和尾长未见明显差异，具体见下表5。其余剂量组的结果与此类似。

表5

剂量（g/kg体重）	动物数	重量(g)	顶臂长(mm)	尾长(mm)	性别比（雌：雄）
						空白对照	3	7.03±0.35	51.24±0.35	18.35±1.69	1.27
乳剂A1的高剂量	3	6.92±0.56	52.12±4.95	17.84±2.11	1.16
						乳剂A2的高剂量	3	7.05±0.52	50.56±6.23	18.02±2.58	1.11

注：各组雌鼠所产胎仔的重量、顶臂长和尾长未见明显差异。

（阳性对照组棉酚抑制生育后是不可逆的，因此，即使在停药后经一定的恢复进行交配也无法实现继续生育。）

本申请是以叉子圆柏的整个球果的粉末或是乙醇的提取物作为活性成分，而并不是如棉酚一样的目标化合物，因此，由以上测试例可以看出，本发明优选的含有叉子圆柏球果粉的乳剂A1以及含有叉子圆柏球果粉的乙醇提取物的乳剂A2的雄性抗生育效果虽然略低于含有棉酚的乳剂A4的雄性抗生育效果，但从实际天然药物原料来说，显示其具有较强的抗雄性生育作用效果。另外，乳剂A1和A2能够抑制雄性生育，停药还具有恢复生育的可逆性，并且观察未见作用于睾丸，而是作用于附睾，同时没有明显的副作用发生。因此，将叉子圆柏的球果粉或其乙醇提取物作为活性成分制备成乳剂作为雄性抗生育药物具有较强的医药应用开发价值。

Claims (14)

1.一种雄性抗生育药物乳剂，其特征在于，该乳剂含有雄性抗生育药、乳化剂、油和水，所述乳化剂为磷脂化合物。

2.根据权利要求1所述的雄性抗生育药物乳剂，其中，相对于100重量份的乳化剂，雄性抗生育药的含量为9-670重量份，水的含量为625-1000重量份，油的含量为400-900重量份；优选地，相对于100重量份的乳化剂，雄性抗生育药的含量为9-480重量份，水的含量为625-860重量份，油的含量为400-615重量份。

3.根据权利要求1或2所述的雄性抗生育药物乳剂，其中，所述磷脂化合物为卵磷脂和/或大豆磷脂，优选为卵磷脂。

4.根据权利要求1或2所述的雄性抗生育药物乳剂，其中，所述油为玉米油、花生油、大豆油、芝麻油、薄荷油、氢化植物油、氢化大豆油和橄榄油中的一种或多种，优选为玉米油。

5.根据权利要求1或2所述的雄性抗生育药物乳剂，其中，所述雄性抗生育药为叉子圆柏（Sabina vulgaris Ant.）的球果粉、叉子圆柏的球果的乙醇提取物、棉酚和雷公藤中的一种或多种。

6.根据权利要求2或5所述的雄性抗生育药物乳剂，其中，所述雄性抗生育药为叉子圆柏的球果粉和/或叉子圆柏的球果的乙醇提取物；相对于100重量份的乳化剂，雄性抗生育药的含量为415-480重量份，水的含量为625-860重量份，油的含量为400-615重量份。

7.根据权利要求5所述的雄性抗生育药物乳剂，其中，所述叉子圆柏的球果粉的平均颗粒直径小于或等于100微米，优选小于或等于60微米。

8.根据权利要求5所述的雄性抗生育药物乳剂，其中，所述叉子圆柏的球果的乙醇提取物的制备方法包括：使叉子圆柏球果粉与乙醇接触进行浸提；接触的温度为5-80℃，接触的时间为4-15h。

9.一种雄性抗生育药物乳剂的制备方法，其特征在于，该方法包括，将雄性抗生育药、乳化剂、油和水混合均匀，得到雄性抗生育药物乳剂；所述乳化剂为磷脂化合物。

10.根据权利要求9所述的方法，其中，将雄性抗生育药、乳化剂、油和水混合均匀的方法包括：

（1）将乳化剂与水混合均匀，制备溶剂相；

（2）将雄性抗生育药与油混合均匀，制备溶质相：

（3）将溶质相和溶剂相混合均匀，制备雄性抗生育药物乳剂。

11.根据权利要求10所述的方法，其中，将水与乳化剂混合的条件包括：温度为2-60℃；将雄性抗生育药与油混合的条件包括：温度为-15℃至60℃，将溶质相与溶剂相混合的条件包括：温度为-2℃至40℃，优选，溶剂相和溶质相的制备以及溶剂相和溶质相的混合在研磨或搅拌的条件下进行。

12.根据权利要求9或10所述的方法，其中，相对于100重量份的乳化剂，雄性抗生育药的用量为9-670重量份，水的用量为625-1000重量份，油的用量为400-900重量份；优选地，相对于100重量份的乳化剂，雄性抗生育药的用量为9-480重量份，水的用量为625-860重量份，油的用量为400-615重量份。

13.根据权利要求9或10所述的方法，其中，所述磷脂化合物为卵磷脂和/或大豆磷脂，优选为卵磷脂；所述油为玉米油、花生油、大豆油、芝麻油、薄荷油、氢化植物油、氢化大豆油和橄榄油中的一种或多种。

14.根据权利要求9或10所述的方法，其中，所述雄性抗生育药为叉子圆柏的球果粉、叉子圆柏的球果的乙醇提取物、棉酚和雷公藤中的一种或多种。