CN114788524B - 一种抑菌微乳制剂及其制备方法和应用 - Google Patents

一种抑菌微乳制剂及其制备方法和应用 Download PDF

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Abstract

本发明涉及一种抑菌微乳制剂及其制备方法和应用，将乳化剂及其他添加剂分散于油相中，置磁力搅拌器加热至全部溶解，加柚皮素到油相中继续搅拌至药物完全溶解，构成油相。将甘油分散于适量水中，置磁力搅拌器中，加热至，并搅拌至全部溶解，构成水相。在恒温水浴高速搅拌下，将油相滴加入水相中，搅拌，制得初乳；将初乳用用水稀释至处方量，转移至高压均质机中，均质循环，制得微乳调节pH，灌装即可。通过上述方法制备得到的柚皮素微乳性质稳定，且具有良好的放置烟草黑胫病菌的功效。

Description

一种抑菌微乳制剂及其制备方法和应用
技术领域
本发明属于农药技术领域，具体为一种柚皮素微乳制剂及其制备方法和应用。
背景技术
柚皮素(Naringenin，CAS 480-41-1)是一类天然黄酮类化合物，具有重要的生物活性，取材便利，广泛存在于枳实、化橘红、桃叶、菝葜等天然植物中。
目前被广泛应用于医学、化学、食品科学、农药等方面。我国具有丰富的柚皮素资源，大力开发柚皮素的应用研究前景广阔。
发明内容
本发明针对目前农药行业的发展趋势，提供了一种低毒、高效、环保型农药及其制备方法和引用。
为了解决上述问题，实现本发明的发明目的，本发明提供以下技术方案：
一种柚皮素微乳的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
S1.将乳化剂及其他添加剂分散于油相中，置磁力搅拌器加热至高于60℃，搅拌至全部溶解，加柚皮素到油相中继续搅拌至药物完全溶解，构成油相，油相溶解过程保持60℃恒温；
S2.将甘油分散于适量水中，置磁力搅拌器中，加热至60℃，并搅拌至全部溶解，构成水相；
S3.在60℃恒温水浴高速搅拌下，将油相滴加入水相中，搅拌6min，制得初乳；
S4.将初乳用用水稀释至处方量，转移至高压均质机中，以700bar压力均质循环6次，制得微乳调节pH，灌装；
其中，所述乳化剂为solutol HS 15、cremophor；
其他添加剂包括：0.5％油酸为稳定剂、0.2％Vitamin E为抗氧化剂，2.5％甘油为等渗调节剂；
所述油相为大豆油和MCT/LCT。
进一步地，所述乳化剂中solutol HS 15：cremophor为2：1。
进一步地，所述油相中MCT：LCT为2:1。
进一步地，所述柚皮素微乳的浓度为20mg/mL。
本发明还提供了一种柚皮素微乳，根据上述制备方法制备得到。
本发明还提供了一种柚皮素微乳剂用于防治烟草黑胫病菌的用途。
相对于现有技术本申请具有如下优点：
大豆油在脂肪乳剂的制备中已使用了近四十年，中/长链脂肪乳液(LipofundinMCT/LCT)是一种常用的制备脂肪乳剂的油溶剂，添加后使得乳剂具有以下优点:可提供一种更加稳定的，均一的制剂；和大豆油混合作为油相制得乳剂较单纯以大豆油为油相制得的乳剂毒性小，且能够减小大量亚油酸的存在而维持体内脂肪酸的平衡；降低混合油相的黏度，有利于提高微乳的稳定性。
本发明制备得到发柚皮素微乳制剂对烟草黑胫病菌具有良好防治效果，且不会对烤烟田间发育指标和生物量积累产生不利影响。
附图说明：
图1不同柚皮素微乳剂施用量对黑胫病发病情况的影响
图2柚皮素微乳剂不同施用时间对黑胫病发病情况的影响
图3不同处理不同时间发病情况
图4不同处理不同时间发病情况
图5不同肥料防效差异
图6试验组和对照组对比
具体实施方式
1.柚皮素微乳的制备并确定最优配比
1.1基本工艺
将乳化剂及其他添加剂分散于油相中(大豆油、MCT/LCT组成)，置磁力搅拌器加热至略高于 60℃，搅拌至全部溶解，加柚皮素到油相中继续搅拌至药物完全溶解，构成油相(油相溶解过程保持60℃恒温)。将甘油分散于适量水中，置磁力搅拌器中，加热至60℃，并搅拌至全部溶解，构成水相。在恒温(60℃)水浴高速搅拌下，将油相滴加入水相中，搅拌6min，制得初乳；将初乳用用水稀释至处方量，转移至高压均质机中，以700bar压力均质循环6次，制得微乳调节 pH，灌装。
1.2单因素分析
本实验以20％柚皮素作为药物，以0.5％油酸和0.2％Vitamin E分别做为稳定剂及抗氧化剂；以 2.5％甘油做为等渗调节剂，以2％大豆油做为部分油相，其余为水，制得规格为20mg/mL柚皮素微乳。分别考察在一定的pH下(5～8)；一定比例MCT和LCT做为油相；一定比例solutol HS 15和cremophor做为乳化剂，结合单因素试验优选该微乳的最佳制备条件。
1.2.1油酸、Vitamin E对微乳稳定性的影响
油酸和VE分别在乳剂中做为稳定剂及抗氧化剂对乳剂的稳定性均有一定影响，因此，本实验考察了油酸和Vitamin E加和不加对本实验结果的相关影响，以2.5％甘油做为等渗调节剂，在 pH 7的环境中，以2％大豆油和一定比例MCT/LCT(2:1)做为油相；一定比例solutol HS 15和 cremophor(2:1)做为乳化剂，依照参考文献经验值油酸选用0.5％、Vitamin E 0.2％，并按照“1.1”项下操作制备质量浓度为20mg/mL柚皮素微乳。分别制备含0.5％油酸、Vitamin E与不含油酸、Vitamin E的样品进行40℃加速试验，加速2个月后含有油酸、Vitamin E的处方最稳定，所制的微乳没有分层﹑柚皮素量﹑微乳粒径和颜色几乎无变化；而不含油酸和Vitamin E的微乳有分层现象，并且颜色变黄。说明油酸对于微乳的稳定性起着重要作用。由于油酸属于油溶性成分，其加入有利于药物在油相中的溶解，并且处方在偏酸性条件下稳定，所以使用油酸作为稳定剂。而Vitamin E在本乳剂中可以防止空气对微乳的氧化作用，结果见表1。
表1油酸和Ve对微乳稳定性的影响(n＝3，x±s)
1.2.2 pH对微乳的稳定性影响
将制备的微乳以0.08％柚皮素作为药物，以0.5％油酸和0.2％Vitamin E分别做为稳定剂及抗氧化剂；以2.5％甘油做为等渗调节剂，以2％大豆油和一定比例MCT/LCT(2:1)做为油相；一定比例solutol HS 15和cremophor(2:1)做为乳化剂]，分别调pH至5.0、6.0、7.0、 8.0，考察其粒径和柚皮素量变化。实验结果(见表2)表明，pH越低灭菌后药物含有量下降很少，粒径几乎无变化；pH越高灭菌后药物含有量下降较大，微乳粒径变化较大。微乳中药物含有量和粒径的变化分别代表微乳的化学稳定性和物理稳定性指标，由于药物在偏酸性条件下稳定，所以将处方的pH调至5.0，并在此pH条件下改善处方的物理稳定性。
表2不同pH对乳剂稳定性的影响(n＝3，x±s)
1.2.3 MCT/LCT对大豆油性能的优化及对微乳稳定性的影响
将MCT与LCT比例分别为1:2、1:1、2:1、3:1、4:1，以乳剂外观性状、粒径大小、柚皮素量为评价指标考察所制得的乳剂(该微乳，在pH 5的条件下，除改变MCT/LCT的比例外，其余同pH值考察条件下的组成)优劣。结果见表3，乳滴粒径随着MCT量的增加而减小，这可能是因为MCT量增加，油相体系黏度降低，减小了乳滴形成过程的阻力，有利于乳滴的减小，体系的稳定。因此选定MCT:LCT为4:1，结果见表3。
表3不同比例的MCT与LCT对柚皮素微乳稳定性的影响(n＝3，x±s)
1.2.4乳化剂对微乳稳定性的影响
制备静脉乳剂常用的乳化剂为磷脂，按照“1.1”项下操作制备柚皮素微乳(该微乳，在 MCT/LCT的比例为4:1的条件下，除改变solutol HS 15和cremophor的比例外，其余同MCT/LCT 考察条件下的组成)，结果以磷脂为主要乳化剂均未能制得符合要求的产品。因此本实验中选择 solutol HS 15为主要乳化剂，并配以助乳化剂cremophor ELP，分别加入二者的质量分数比例为 (1:1、2:1、3:1)，以乳剂外观性状、粒径大小、柚皮素量为评价指标，然后观察10d，实验结果表明，当二者比例为3:1时，微乳粒径比较稳定(330nm)。结果见表4。
表4不同比例乳化剂对柚皮素微乳稳定性的影响(n＝3，x±s)
根据上述单因素实验结果得出以下最有配比：0.5％油酸为稳定剂、0.2％VitaminE为抗氧化剂，2.5％甘油为等渗调节剂；乳化剂中solutol HS 15：cremophor为2：1；油相中MCT：LCT 为2:1；
柚皮素微乳的浓度为20mg/mL。
2应用实验
2.1柚皮素微乳剂防治烟草黑胫病菌效果研究
采用盆栽和大田试验相结合的方法，通过对柚皮素微乳剂施用量和使用时间对其抑菌效果差异比较，确定20％柚皮素微乳剂(通过最优配比制备得到)最适宜的施用量和使用时期。
试验处理
A施用量试验：
T1：亩施药剂量200mL，200倍液；
T2：亩施药剂量200mL，500倍液；
T3：亩施药剂量200mL，1000倍液；
T4：亩施药剂量300mL，500倍液；
T5：亩施药剂量400mL，500倍液；
T6：对照，喷施清水。
施药7d后接菌，每个处理50株，接菌后25～30d统计病情指数，分析不同施药量及施用浓度对黑胫病发病的抑制效果差异；另外对各处理设置不接菌处理，统计现蕾期农艺性状及生物量，分析不同施药量对烤烟发育的影响。
B施用时间试验
T1：亩施药剂量200mL，500倍液，施用3d后接菌；
T2：亩施药剂量200mL，500倍液，施用7d后接菌；
T3：亩施药剂量200mL，500倍液，施用15d后接菌；
T4：亩施药剂量200mL，500倍液，施用30d后接菌；
T5：对照，喷施清水，施用7d后接菌。
按照亩施药剂量200mL、500倍液浓度，分别于喷施后3d、7d、15d和30d接菌，接菌后25～30d统计病情指数，每个处理50株，分析不同使用时间对黑胫病发病情况的影响，进而根据产区发病情况进行使用。
C大田试验：
T1：亩施药剂量200mL，500倍液，移栽时施用；
T2：亩施药剂量200mL，500倍液，移栽10d施用；
T3：亩施药剂量200mL，500倍液，移栽20d施用；
T4：亩施药剂量200mL，500倍液，移栽40d施用；
T5：清水对照。
对筛选出的施用浓度和使用时间进行田间示范，每个处理3亩；各处理同步施用清水，移栽后 30d、50d、70d、90d统计病情指数，分析施用量和时间对黑胫病田间发病的抑制效果差异；统计各现蕾期未染病植株农艺性状及生物量，分析不同柚皮素微乳剂对烤烟发育的影响。
3.结果与分析
由图1可以看出，施用柚皮素微乳剂可显著降低黑胫病的发病率，不同处理之间病情指数存在差异，T1、T2、T3处理病情指数高于T4、T5处理；相同施药量条件下，T1、T2处理差异不显著，且病情指数低于T3处理。
表5不同柚皮素施用量对烤烟农艺性状的影响(cm)
表6同柚皮素施用量对烤烟生物量的影响(g)
不同处理农艺性状和生物量之间没有显著差异(表5和表6)施用柚皮素微乳剂没有对烤烟发育和生物量积累产生影响。
施用时间试验
由图2可以看出，施用柚皮素微乳剂可显著降低黑胫病的发病率，不同处理之间病情指数存在差异，T1、T5处理病情指数高于T2、T3、T4处理；在相同施药量条件下，T2处理病情指数最低。
大田试验
由图3可以看出，施用柚皮素微乳剂的处理中，T1处理不同时期发病情况略高于其他各处理，移栽后20d施用柚皮素微乳剂可有效降低田间黑胫病发病情况；与对照相比，施用柚皮素微乳剂可有效降低黑胫病发病情况。
表7不同处理烤烟农艺性状差异(cm)
表8不同处理烤烟生物量差异(g)
不同处理农艺性状和生物量之间没有显著差异(表7和表8)，施用柚皮素微乳剂没有对烤烟发育和生物量积累产生影响。
4.结论
柚皮素防治烟草黑胫病以亩施原药200ml、500倍液灌根施用效果较好；结合盆栽试验与大田试验情况，移栽后20d施用柚皮素对黑胫病防治效果最佳；施用柚皮素不会对烤烟田间发育指标和生物量积累产生不利影响。
以上所述，仅为本发明的较佳实施例，并不用以限制本发明，本发明的专利保护范围以权利要求书为准，凡是运用本发明的说明书内容所作的等同结构变化，同理均应包含在本发明的保护范围内。

Claims (4)

1.一种柚皮素微乳的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
S1.将乳化剂及其他添加剂分散于油相中，置磁力搅拌器加热至高于60℃，搅拌至全部溶解，加柚皮素到油相中继续搅拌至药物完全溶解，构成油相，油相溶解过程保持60℃恒温；
S2.将甘油分散于适量水中，置磁力搅拌器中，加热至60℃，并搅拌至全部溶解，构成水相；
S3.在60℃恒温水浴高速搅拌下，将油相滴加入水相中，搅拌6min，制得初乳；
S4.将初乳用用水稀释至处方量，转移至高压均质机中，以700bar压力均质循环6次，制得微乳调节pH，灌装；
其中，所述乳化剂为solutol HS15、cremophor；
其他添加剂包括：0.5％油酸为稳定剂、0.2％Vitamin E为抗氧化剂，2.5％甘油为等渗调节剂；所述油相为大豆油和MCT/LCT；
所述乳化剂中solutol HS15：cremophor为2：1；所述油相中MCT：LCT为2:1。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述柚皮素微乳剂的浓度为20mg/mL。
3.一种柚皮素微乳，其特征在于，根据权利要求1或2所述的制备方法制备得到。
4.根据权利要求3所述的柚皮素微乳用于防治烟草黑胫病菌的用途。
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