CN102048740B - 头孢曲松钠他唑巴坦钠药物组合物脂质体注射剂 - Google Patents

Abstract

本发明公布了一种头孢曲松钠他唑巴坦钠药物组合物脂质体注射剂，其是由以下重量份数计的组分制成：头孢曲松钠3份，他唑巴坦钠1份，脂质体膜材3-18份，附加剂1.2-10份，冻干支持剂6-25份，抗氧化剂0.1-4份。通过将头孢曲松钠他唑巴坦钠制成脂质体，极大提高了制剂的稳定性，提高了药品质量，减少了毒副作用，而且具有靶向性，提高了疗效。

Description

头孢曲松钠他唑巴坦钠药物组合物脂质体注射剂

技术领域

本发明涉及一种头孢曲松钠他唑巴坦钠药物组合物脂质体注射剂及其制法，属于医药制剂领域。

背景技术

头孢曲松钠(头孢三嗪，菌必治)，为半合成的第三代头孢菌素，对G⁺菌有中度的抗菌作用，对G^-菌的作用强，主要敏感菌有金黄色葡萄球菌、链球菌属、肺炎链球菌、嗜血杆菌、奈瑟菌属、大肠杆菌、肺炎克雷白杆菌、沙雷杆菌、各型变形杆菌、枸橼酸杆菌、伤寒杆菌、痢疾杆菌、消化球菌、消化链球菌、梭状芽孢杆菌等。

在临床上，头孢曲松钠对下呼吸道感染的疗效较为满意，临床有效率在75％-100％，细菌清除率一般在90％以上；在治疗败血症的临床疗效和细菌学治愈率上，因原发病灶的不同，从43％到91％不等，尿路感染、胃肠道感染、胆管感染引起的败血症治愈或改善多在90％以上，对腹膜炎引起的败血症有效率为50％，肺或肺腔脓肿引起的败血症有效率仅为33％；大肠杆菌和其他让杆菌科细菌所致的尿路感染经本品治疗后可获得满意疗效，效果优于庆大霉素，对庆大霉素耐药细菌所致的尿路感染也有一定疗效。由于产酶耐药菌的不断出现，从而导致头孢曲松钠的疗效不断下降。

他唑巴坦钠是继舒巴坦钠和克拉维酸之后的新型青霉烷砜类β-内酰胺酶抑制剂，其结构式在舒巴坦钠的基础上增加一个三氮唑环，以提高抑酶活性。他唑巴坦钠的抑酶作用强于舒巴坦，且稳定性由于克拉维酸，尤其对超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)有较强的抑制作用，是目前很有市场前景的β-内酰胺酶抑制剂，且具有毒性低、抑酶活性强、稳定性好等优点。

近年来，由于耐药菌株的增多和ESBLs的出现，致使第三代头孢菌素的疗效下降，因此目前三代头孢与他唑巴坦(钠)的复方研究较为活跃。头孢哌酮钠/他唑巴坦钠(4∶1)产品已上市，头孢哌酮钠/他唑巴坦钠(8∶1)，国内已申报临床。头孢他啶/他唑巴坦钠(4∶1)的复方制剂也有齐鲁制药公司研制成功，并获得临床批文。

头孢曲松钠在临床上的使用以注射剂为主，有很多的不良反应如：鼻出血、致精神障碍、致荨麻疹伴喉头水肿、致过敏性休克、肝酶升高等。

现有上市的本类产品头孢曲松钠他唑巴坦钠注射剂，普遍存在药物活性成分不稳定，长期存放有关物质生产较多，含量降低，这不仅降低了药效，而且带来用药风险，危害患者利益。

CN200910138402.7公开了一种头孢曲松钠他唑巴坦钠复合物的制备工艺，先采用液-液混合，再通过预冻、升华干燥、再干燥的过程制备。但是并没有从根本上解决头孢曲松钠的稳定性的问题，以后得到产品在冻干过程之前可能就出现不稳定了。

CN201010140649.5公开了一种头孢曲松钠/他唑巴坦钠药物组合物微球注射剂，其由头孢曲松钠、他唑巴坦钠、PLA、甘氨胆酸钠、PEG600和海藻糖组成。微球注射剂由于含量大量的高分子聚合物，并不利于体内注射，尤其是通过冻干复溶之后，部分微球已经破例，丧失了活性成分的稳定性。

脂质体技术为一新型药物制剂，具有以下的优点：(1)增加药物的溶解性；(2)降低药物的毒性；(3)赋予药物器官靶向性，对肝、肺、脾、淋巴组织有较强的亲和力，使得脂质体所载的药物在这些脏器局部维持高浓度，从而起到药物器官靶向性作用；(4)增加药物的缓释作用；(5)提高对药物的保护作用。

为了提高头孢曲松钠的药效并降低不良反应的发生率，本发明将头孢曲松钠与他唑巴坦钠作为药物组合进行联合运用，其次对头孢曲松钠他唑巴坦钠药物组合物用脂质体进行包裹。

根据本发明人的进一步研究，发现已有的3∶1或5∶1的头孢曲松钠和他唑巴坦钠的组合虽然在临床运用非常广泛，但是采用目前现有技术的制备工艺放大生产之后，冻干粉复溶之后的溶液仍存在浑浊，可见异物不合格的现象，而且溶液稳定性很差，要求在短时间内用完，否则活性成分极易变质，导致药品质量下降，不适于注射。

发明内容

本发明旨在面对现有上市本品因制备技术手段的限制，参阅众多相关资料和大量实验总结，发现以特定赋形剂和制备工艺的脂质体制备技术对主药包裹后可以解决一系列的问题，现对本发明实现内容陈述如下：

本发明的目的是提供一种头孢哌酮钠他唑巴坦钠药物组合物脂质体注射剂，其是由以下重量份数计的组分制成：

        头孢曲松钠        3份

        他唑巴坦钠        1份

        脂质体膜材        3-18份

        附加剂            1.2-10份

        冻干支持剂        6-25份

        抗氧化剂          0.1-4份。

作为本发明一优选实施方案，以重量份数计的组分组成为：

        头孢曲松钠        3份

        他唑巴坦钠        1份

        脂质体膜材        4-9份

        附加剂            2.6-4份

        冻干支持剂        6-15份

        抗氧化剂          0.2-2份。

头孢曲松钠他唑巴坦钠药物组合物中头孢曲松钠与他唑巴坦钠的比例为3∶1，规格为1.0g(头孢曲松0.75g与他唑巴坦0.25g)和2.0g(头孢曲松1.5g和他唑巴坦0.5g)。

制备脂质体注射剂常用的膜材料为磷脂和附加剂，其中磷脂通常可选用天然磷脂和合成磷脂，所述天然磷脂为蛋黄卵磷脂、氢化蛋黄磷脂、蛋黄磷脂酰甘油、蛋黄磷脂酰丝氨酸、蛋黄磷脂酰肌醇、大豆卵磷脂、氢化大豆磷脂、大豆磷脂酰甘油、大豆磷脂酰丝氨酸、大豆磷脂酰肌醇中的一种或几种；所述合成磷脂为二油酰磷脂酰胆碱、二硬脂酸磷脂酰胆碱、二棕榈酰磷脂酰胆碱、二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱、二月桂酰磷脂酰胆碱、二油酰磷脂酰甘油、二硬脂酸磷脂酰甘油、二棕榈酰磷脂酰甘油、二肉豆蔻酰磷脂酰甘油、二月桂酰磷脂酰甘油中的一种或几种。

常用附加剂的膜材料有胆固醇、十八胺、磷脂酸、去氧胆酸钠和泊洛沙姆188。用于制备脂质体注射剂的膜材料还有磷脂酰乙醇胺、胆固醇乙酰脂、谷载醇、牛胆酸钠、磷脂酰丝胺酸、硬脂酰胺、单硬脂酰磷脂酸、单硬脂酰磷脂酰乙醇胺、二鲸蜡基磷酸盐(DCP)、二棕榈酰磷脂酰乙醇胺、单棕榈酰磷脂酰乙醇胺、二豆蔻酰磷脂酰乙醇胺。附加剂一般用来调节膜结构，改变荷电性质，如胆固醇能使脂质体双分子层膜固化，从而减少自由基的生成，降低了氧化水平，使脂质体稳定性显著增强。

常用的冻干支持剂有甘露醇、甘氨酸、山梨醇、木糖醇、葡萄糖、乳糖、海藻糖，冻干支持剂用来支持冻干后的成形性，起到骨架的作用。

常用的抗氧剂有亚硫酸氢钠、亚硫酸钠、焦亚硫酸钠、维生素E、抗坏血酸、谷胱甘肽、没食子酸丙酯，抗氧剂用来起到保护活性成分免受氧化的作用，对稳定性的提高起到很大的作用。

根据上面所述的头孢曲松钠他唑巴坦钠药物组合物脂质体注射剂，其中脂质体膜材优选为二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱和大豆磷脂酰肌醇的组合，最优选是优选2∶1的组合。

根据上面所述的头孢曲松钠他唑巴坦钠药物组合物脂质体注射剂，其特征在于附加剂优选为磷脂酰丝胺酸和十八胺的组合，最优选是1∶1的组合。

根据上面所述的头孢曲松钠他唑巴坦钠药物组合物脂质体注射剂，其在于冻干支持剂优选为甘露醇和海藻糖的组合，最优选是1∶2的组合。

根据上面所述的头孢曲松钠他唑巴坦钠药物组合物脂质体注射剂，其中抗氧化剂优选为焦亚硫酸钠和维生素C的组合，最优选是2∶1的组合。

虽然，脂质体的制备工艺早已成为常规技术，但是不同的制备工艺和赋形剂的选择并非显而易见的，本发明人通过长期的创造性劳动获得采用以上特定成分和含量配比的赋形剂制备的脂质体制剂具有预料不到的技术效果，提高了包封率和复溶之后的溶解性和可注射性。

本发明的另一个目的是提供头孢曲松钠他唑巴坦钠药物组合物脂质体注射剂，其中制备步骤为：

(1)首先制备了空白脂质体，将活性成分溶于空白脂质体中，产生包裹，有技术手段形成较好的包封率。

(2)将以及被脂质体膜材包裹的主药和冻干支持剂和抗氧化剂配成无菌溶液，按装量分装于西林瓶中，进行常规冻干。

根据上面所述的头孢曲松钠他唑巴坦钠药物组合物脂质体注射剂，其所述的脂质体制备可以选择为以下多种方法：

薄膜法：由旋转蒸发仪将脂质体膜材溶液用于有机溶剂后制备脂质体薄膜，然后将主药、冻干支持剂、抗氧化剂溶于薄膜溶液中制备药物脂质体溶液；

乙醇注入法：将脂质体膜材溶于乙醇中，用微量输液器缓慢将溶于含主药、冻干支持剂、抗氧化剂的缓冲盐注入，制备药物脂质体溶液；

冷冻干燥法：直接配置脂质体膜材溶液和药物溶液混合，保温超声处理，后由高速组织捣碎机剧烈振摇获得药物脂质体溶液。

本发明优选的制备头孢曲松钠他唑巴坦钠药物组合物脂质体注射剂的方法，包括以下步骤：

(1)将脂质体膜材和附加剂溶解于有机溶剂中，于旋转薄膜蒸发器上减压除去有机溶剂，获得了磷脂薄膜；

(2)在磷脂薄膜中加入pH值5.8的磷酸二氢钠-磷酸氢二钠缓冲溶液，振摇，搅拌使磷脂薄膜完全水化，用高质均质器制备空白脂质体；

(3)将头孢曲松钠、他唑巴坦钠、抗氧剂溶于注射用水中经微孔滤膜过滤，加入空白脂质体混合，55℃超声处理30min；再和溶有冻干支持剂的水溶液混合均匀；

(4)按规定装量分装于西林瓶中，置于冷冻干燥机内进行冻干，检测合格后包装入库。

进一步的，冻干工艺为：

a、预冻：将分装好的药液按1～3℃/分钟速度降温至-50～-35℃，保温冷冻3小时；

b、升华：将预冻好的药物抽真空，至15Pa，然后在7～9小时内匀速缓慢升温至-22～-18℃，保温1～2小时，再在4～6小时内匀速升温至10～15℃；

c、干燥：将升华完毕阶段结束后的药物在4小时内匀速升温至30℃，保温干燥3小时，检测合格后包装入库。

优选地：

a、预冻：将分装好的药液按2℃/分钟速度降温至-40℃，保温冷冻3小时；

b、升华：将预冻好的药物抽真空，至15Pa，然后在8小时内匀速缓慢升温至-20℃，保温2小时，再在5小时内匀速升温至10℃；

c、干燥：将升华完毕阶段结束后的药物在4小时内匀速升温至30℃，保温干燥3小时，检测合格后包装入库。

上述所述的制备方法中，所述的有机溶剂可以是甲醇、乙醇、乙醚、丙酮、异丙醇、乙腈、三氯甲烷、N，N-二甲基甲酰胺中的一种或几种，优选体积比为1∶1的异丙醇和三氯甲烷的混合溶剂。

本发明提供的头孢曲松钠他唑巴坦钠脂质体注射剂及其制备方法，具有以下优点：

(1)活性成分头孢曲松钠和他唑巴坦钠通过脂质体技术进行包裹，极大提高了稳定性，长期放置含量和有关物质几乎没有明显变化，保障了药品的质量

(2)制备工艺简单有效，涉及设备及操作相对简单，能耗低无污染。

(3)所涉及辅料对人体毒副作用小，价格低廉。

(4)主药被包裹在脂质体内，能够降低药物毒性，增强药理作用，降低药物消除速率，延长作用时间，增加了体内外的稳定性。

(5)脂质体作为载体，使得药物具有了靶向性，极大的提高了疗效。

(6)提高了制剂的产品质量，减少了毒副作用。

具体实施方式

以下会根据本发明的优选方案给出具体实施方案和实施例的对比例，并进行实验考查来说明本发明的制备效果。所用的实施例、对比例、试验例都是对本发明的进一步解释说明，不可作为是对发明的进一步限制。

实施例1  头孢曲松钠他唑巴坦钠药物混合物脂质体的制备

处方(100瓶)：

        头孢曲松钠            75g

        他唑巴坦钠            25g

        二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱  66.7g

        大豆磷脂酰肌醇        33.3g

        磷脂酰丝胺酸          32.5g

        十八胺                32.5g

        甘露醇                50g

        海藻糖                100g

        焦亚硫酸钠            3.33g

        维生素C               1.67g

制备过程：

(1)将66.7g二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱、33.3g大豆磷脂酰肌醇、32.5g磷脂酰丝胺酸、32.5g十八胺溶解于1200ml体积比为1∶1的异丙醇和三氯甲烷的混合溶剂中，于旋转薄膜蒸发器上减压除去有机溶剂，获得了磷脂薄膜；

(2)在磷脂薄膜中加入pH值5.8的磷酸二氢钠-磷酸氢二钠缓冲溶液600ml，振摇10min，搅拌使磷脂薄膜完全水化，用高质均质器制备空白脂质体；

(3)将75g头孢曲松钠、25g他唑巴坦钠、3.33g焦亚硫酸钠、1.67g维生素C溶于800ml注射用水中经0.45μm微孔滤膜过滤，加入空白脂质体混合，55℃超声处理30min；再和50g甘露醇、100g海藻糖的水溶液800ml混合均匀；

(4)按规定装量分装于西林瓶中，置于冷冻干燥机内进行冻干：

a、预冻：将分装好的药液按2℃/分钟速度降温至-40℃，保温冷冻3小时；

b、升华：将预冻好的药液抽真空，至15Pa，然后在8小时内匀速缓慢升温至-20℃，保温2小时，再在5小时内匀速升温至10℃；

c、干燥：将升华完毕阶段结束后的药液在4小时内匀速升温至30℃，保温干燥3小时，制得头孢曲松钠他唑巴坦钠药物组合物脂质体注射剂。

对比例1  头孢曲松钠他唑巴坦钠药物混合物脂质体的制备

处方(100瓶)：

        头孢曲松钠                75g

        他唑巴坦钠                25g

        二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱      66.7g

        大豆磷脂酰肌醇            33.3g

        磷脂酰丝胺酸              32.5g

        十八胺                    32.5g

        甘露醇                    50g

        海藻糖                    100g

        焦亚硫酸钠                3.33g

        维生素C                   1.67g

制备过程：

(1)将66.7g二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱、33.3g大豆磷脂酰肌醇、32.5g磷脂酰丝胺酸、32.5g十八胺溶解于1200ml体积比为1∶1的异丙醇和三氯甲烷的混合溶剂中，于旋转薄膜蒸发器上减压除去有机溶剂，获得了磷脂薄膜；

(2)在磷脂薄膜中加入pH值5.8的磷酸二氢钠-磷酸氢二钠缓冲溶液600ml，振摇10min，搅拌使磷脂薄膜完全水化，用高质均质器制备空白脂质体；

(3)将75g头孢曲松钠、25g他唑巴坦钠、3.33g焦亚硫酸钠、1.67g维生素C溶于800ml注射用水中经0.45μm微孔滤膜过滤，加入空白脂质体混合，55℃超声处理30min；再和50g甘露醇、100g海藻糖的水溶液800ml混合均匀；

(4)按规定装量分装于西林瓶中，置于冷冻干燥机内进行普通冻干：将分装好的药液按4℃/分钟速度降温至-32℃，再在3小时内匀速升温至30℃，保温干燥2小时，制得头孢曲松钠他唑巴坦钠药物组合物脂质体注射剂。

实施例和对比例比较  本发明优选的辅料配比和冻干工艺的比较

以下表格中以本发明所筛选的辅料和用量以及制备工艺为实验因素设计了以下的各实施例和对比例，其中实施例1-4采用本发明的制备工艺进行，所用辅料和用量在本发明的优选范围之内，对比例1-4中所用辅料或辅料用量在本发明优选范围之外，或者有的采用普通冻干工艺进行，在试验例中考察结果对本发明的优势进行对比说明。

表1  实施例和对比例的比较

试验例1  包封率的测定

取实施例1-4和对比例1-4制得的脂质体混悬液10ml置于已处理的透析袋中，将透析袋浸入透析液(即制备脂质体的水化介质)100ml中，置磁力搅拌器上搅拌，定时更换透析液，12h后将透析液中内容物取出置100ml量瓶中，加入5％乳化剂OP的乙醇溶液10ml破乳，用水定容至刻度。分别取述的实施例1-2和对比例1-3的溶液各20μl，进样分析，计算出脂质体中包裹头孢曲松钠和他唑巴坦钠的量W_包，根据公式：包封率＝(W_包/W_总)×100％计算包封率。

表2  包封率测定结果

由以上结果可知，本发明制得的脂质体包封率很高，基本符合实际生产要求；而本发明范围外的对比例处方配比制得的脂质体包封率很低，和实施例相比有明显的差距，不适合生产要求。

试验例2  稳定性研究

将以上实施例1-4和对比例1-4制备的样品与上市制剂注射用头孢他啶他唑巴坦钠(海口奇力制药有限公司，批号2010301)，在高温40℃、相对湿度75％±5％条件下6个月，进行加速试验考察，比较溶出度和稳定性，结果如下：

表3  加速试验考察

由以上结果可知，加速试验6个月后，本发明实施例1-4的样品溶酸度、含量和有关物质没有明显变化，而对比例1-4制备的样品和上市制剂含量下降较大，有关物质升高明显，酸度大幅降低，说明本发明制得的头孢曲松钠他唑巴坦钠脂质体注射剂的稳定性有所提高。

试验例3  溶血和红细胞凝集试验

试验方法：取家兔一只，心脏取血10ml，玻璃棒搅除显微蛋白原，使成脱纤血液，加入100ml生理盐水摇匀，离心，除去上清液，沉淀的红细胞再用生理盐水洗涤4次至上清液不显红色，将所得红细胞3ml，加生理盐水150ml，制备成2％红细胞混悬液待用。

取试管7支，标明1-7号，按下表排比，依次加入2％红细胞混悬液和生理盐水，置37℃恒温箱内30min，然后加入本发明实施例1不同量的头孢曲松钠他唑巴坦钠药物组合物脂质体注射剂，第6管为阴性对照管，第7管为阳性溶血样本。摇匀后，置37℃恒温箱内约隔20分钟观察依次，观察至6h，1-5管与6管相比，上清液的澄清度相同，均未出现透明红色和红棕色絮状沉淀物，7管血细胞完全溶血，1-5管与7管相比，现象完全相反。试验结果见表4：

表4  溶血、凝集试验

结果判断：1-5管在2-6小时内，其上清液与6管相比基本相同，均未出现透明红色和棕色絮状沉淀物。1-5管在2-6小时内，与7管相比，则现象完全相反，7管出现了全部的红色溶血现象。

结论：头孢曲松钠他唑巴坦钠脂质体注射剂无凝血、无红细胞凝集作用，注射剂安全可靠，可供临床注射用药。

Claims (3)

1.一种头孢曲松钠他唑巴坦钠药物组合物脂质体注射剂，其特征在于主要由以下重量份数计的组分制成：

头孢曲松钠    3份

他唑巴坦钠    1份

脂质体膜材    3-18份

附加剂        1.2-10份

冻干支持剂    6-25份

抗氧化剂      0.1-4份；

其中，脂质体膜材为二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱和大豆磷脂酰肌醇的2∶1的重量比的组合；

附加剂为磷脂酰丝氨酸和十八醇的1∶1的重量比的组合；

冻干支持剂为甘露醇和海藻糖的1∶2的重量比的组合；

抗氧化剂为焦亚硫酸钠和维生素C的2∶1的重量比的组合；

所述脂质体注射剂的制备方法包括以下步骤：

(1)将脂质体膜材和附加剂溶解于有机溶剂中，于旋转薄膜蒸发器上减压除去有机溶剂，获得了磷脂薄膜，所述的有机溶剂选自体积比为1∶1的异丙醇和三氯甲烷的混合溶剂；

(2)在磷脂薄膜中加入pH值5.8的磷酸二氢钠-磷酸氢二钠缓冲溶液，振摇，搅拌使磷脂薄膜完全水化，用高质均质器制备空白脂质体；

(3)将头孢曲松钠、他唑巴坦钠、抗氧剂溶于注射用水中经微孔滤膜过滤，加入空白脂质体混合，55℃超声处理30min；再和溶有冻干支持剂的水溶液混合均匀；

(4)按规定装量分装于西林瓶中，置于冷冻干燥机内进行冻干，检测合格后包装入库；

其中，步骤(4)中的冻干工艺为：

a、预冻：将分装好的药液按1～3℃/分钟速度降温至-50～-35℃，保温冷冻3小时；

b、升华：将预冻好的药物抽真空，至15Pa，然后在7～9小时内匀速缓慢升温至-22～-18℃，保温1～2小时，再在4～6小时内匀速升温至10～15℃；

c、干燥：将升华完毕阶段结束后的药物在4小时内匀速升温至30℃，保温干燥3小时。

2.根据权利要求1的头孢曲松钠他唑巴坦钠药物组合物脂质体注射剂，其特征在于主要由以下重量份数计的组分制成；

头孢曲松钠     3份

他唑巴坦钠    1份

脂质体膜材    4-9份

附加剂        2.6-4份

冻干支持剂    6-15份

抗氧化剂      0.2-2份。

3.根据权利要求1所述的制备头孢曲松钠他唑巴坦钠药物组合物脂质体注射剂，其特征在于步骤(4)中的冻干工艺为：

a、预冻：将分装好的药液按2℃/分钟速度降温至-40℃，保温冷冻3小时；

b、升华：将预冻好的药物抽真空，至15Pa，然后在8小时内匀速缓慢升温至-20℃，保温2小时，再在5小时内匀速升温至10℃；

c、干燥：将升华完毕阶段结束后的药物在4小时内匀速升温至30℃，保温干燥3小时。