CN101530391B - 一种磷酸肌酸钠脂质体冻干制剂 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种磷酸肌酸钠脂质体冻干制剂及其制备方法。本发明的磷酸肌酸钠脂质体冻干制剂，其特征在于各组分及重量份为：磷酸肌酸钠10-20份，磷脂10-40份，胆固醇0-10份，抗氧剂1-10份，冻干支持剂5-20份。

Description

一种磷酸肌酸钠脂质体冻干制剂

技术领域

本发明涉及一种脂质体制剂，尤其是涉及一种磷酸肌酸钠脂质体冻干制剂及其制备方法。 

背景技术

磷酸肌酸(creatine phosphate，CP)是人体内的一种重要生物活性物质，主要存在于心肌、骨骼肌、脑等器官或组织，为人体重要的能量供应源，参与细胞能量代谢，并且为ATP补充能量，而ATP是任何细胞代谢过程中最主要的能量源。 

目前，磷酸肌酸的钠盐化合物即磷酸肌酸钠(phosphate creatinesodium，PCS)作为一种有效的心肌保护药，已经广泛应用于临床，磷酸肌酸钠适用于治疗心肌缺血、心脏外科手术中保护心肌等心肌能量代谢异常的疾病，分子式为：C₄H₈N₃Na₂O₅P，分子量：255.08，分子结构式如下： 

磷酸肌酸钠在肌肉收缩的能量代谢中发挥重要作用，它是心肌和骨骼肌的化学能量储备，并用于ATP的再合成，ATP的水解为肌动球蛋白收缩过程提供能量。磷酸肌酸水平不足在肌收缩力和功能恢复能力的损伤中具有重要的临床意义。实际上，在心肌损伤中，细胞内高能磷酸化合物的数 量，与细胞的存活和收缩功能恢复能力之间存在紧密关系。所以保持高能磷酸化合物的水平成为各种限制心肌损伤方法的基本原则，同时也是心脏代谢保护的基础。临床上多采用注射用水、5％葡萄糖注射液、0.9％氯化钠注射液溶解后静脉注射，或在4℃停搏液中用于心脏手术，但是使用不当容易产生肌酸、肌酐等多种副产物，给患者带来严重的生命威胁。 

目前上市的注射用磷酸肌酸钠为无菌分装制剂，如CN 1729988A公开了一种磷酸肌酸钠和镁盐的组合药物，包括两种组合方式：一是将磷酸肌酸钠和镁盐制成复方制剂，二是将磷酸肌酸钠和镁盐分别制成单独的制剂，并且将两种单独的制剂包装在同一个药盒中。无菌原料粉的制备较为繁琐，成本较高，分装环境要求苛刻，而且长期贮存易结块，复溶后澄明度不稳定。 

有文献报道将磷酸肌酸钠制成冻干制剂，如CN 101288649A公开了一种磷酸肌酸钠粉针剂，工艺为：取处方量的磷酸肌酸钠1份，加入3-6份注射用水，搅拌使磷酸肌酸钠溶解，加入溶液量的0.1％的针用活性炭，过滤除碳、除菌后得澄明液体，补注射用水至足量，过0.22μm微孔滤膜，测定含量为90％-110％后，灌装；冷冻干燥，压盖。又例如，CN 101313910A公开了一种磷酸肌酸钠冻干粉针剂的制备工艺，包括：取磷酸肌酸钠1份，加到1-4份注射用水中，加入人血白蛋白或甘露醇或低分子右旋糖，搅拌使溶解均匀，加入针用活性炭，搅拌，以钦合金棒过滤脱炭，补加注射用水，用微孔滤膜滤过除菌，滤液分装于无菌玻璃瓶中，无菌玻璃瓶中，加 丁基胶塞，保留升华孔道，置冻干机中，抽真空，冷冻干燥得。磷酸肌酸钠在水溶液中很不稳定，短时间内很快水解，致使生产出来的冻干品经常不合格，严重影响了临床使用的安全性。 

所以，一种既可以将磷酸肌酸钠制成冻干制剂，又不会让它在水溶液中水解的制备方法非常值得研究，其可以解决以上存在的缺陷。 

脂质体(1iposomes)最初是由英国学者Bangham和Standish将磷脂分散在水中进行电镜观察时发现的。磷脂分散在水中自然形成多层泡囊，每层均为脂质的双分子层；囊泡中央和各层之间被水相隔开，双分子层厚度约4nm，后来将这种类似生物膜结构的双分子小囊成为脂质体。脂质体研究是当前一个十分活跃的领域，脂质体最早是指天然脂类化合物悬浮在水中形成的具有双层封闭结构的泡囊，现在也可以由人工合成的磷脂化合物来制备。20世纪60年代末Rahman等人首先将脂质体作为药物载体应用，近年来，随着生物技术的不断进展，脂质体制备工艺逐步完善，脂质体作用机制进一步阐明，加之脂质体适合体内降解、无毒性和无免疫原性，特别是大量试验数据证明脂质体作为药物载体可以提高药物治疗指数、降低药物毒性和减少药物副作用，并减少药物剂量等优点。 

CN 101249074A公开了一种氨曲南脂质体冻干制剂，将氨曲南用含有抗氧剂的由中性磷脂、负电荷磷脂和胆固醇形成的质脂体包封得到的冻干制剂。采用氯仿-甲醇的溶剂体系，未能很好解决冻干过程的塌陷以及复溶之后的渗漏问题。 

CN 101283987A公开了一种氯喹脂质体冻干粉针，由1份氯喹脂或其与酸成盐的形式、2-100份磷脂、1-35份胆固醇、0.5-5.0份维生素E及冻干支持剂组成。，所得的水化之后的脂质体粒径明显增大，不利于静脉注射。 

以上脂质体制剂最终为液体制剂，制剂的稳定性常常无法解决，表现以下多个方面：例如，脂质体属于热力学不稳定的分散系，脂质体混悬于水相时，常常会出现聚集、融合等现象，导致粒径变大，严重时可能出现分层，并且由于粒径的变化，还可能导致用于静脉给药的制剂无法使用。由于磷脂本身的特性，磷脂存在于水相时，很容易出现水解、氧化等现象，并且磷脂水解后会形成溶血磷脂，一方面增加制剂的毒性，另一方面也容易使脂质体解体，造成被包封药物的渗漏。 

发明内容

针对目前的磷酸肌酸钠溶液稳定性差的缺陷，本发明的目的在于提供一种磷酸肌酸钠脂质体冻干制剂，通过制备成脂质体并冷冻干燥，以解决以上提出的问题，同时采用特定的脂质体包封材料、冻干支持剂，进一步克服了脂质体冻干粉针常见的冻干中脂质体发生渗漏、水化复溶性差，以及脂质体粒径变大等缺点。 

本发明解决的技术方案如下： 

一种磷酸肌酸钠脂质体冻干制剂，其特征在于主要是由磷酸肌酸钠、磷脂、胆固醇、抗氧剂、冻干支持剂经冷冻干燥制成。 

其中，磷脂选自蛋黄卵磷脂、大豆卵磷脂、双硬脂酸卵磷脂、双软脂酸 卵磷脂、双肉豆蔻酸卵磷脂、氢化蛋黄卵磷脂和氢化大豆卵磷脂中的一种或多种，优选氢化蛋黄卵磷脂时无需胆固醇也能制备包封良好的脂质体。 

抗氧剂选自亚硫酸氢钠、焦亚硫酸钠、L-半胱氨酸、硫脲、甲醛合亚硫酸氢钠、维生素E、抗坏血酸棕榈酸酯、叔丁基对羟基茴香醚的一种或多种。 

冻干支持剂选自甘露醇、海藻糖、乳糖、葡萄糖、蔗糖、山梨醇、氯化钠、甘氨酸的一种或多种，优选自甘氨酸和甘露醇重量比1∶1的混合物。 

本发明所述的磷酸肌酸钠脂质体冻干制剂，作为优选，所述的组分及重量份为：磷酸肌酸钠10-20份，磷脂10-40份，胆固醇0-10份，抗氧剂1-10份，冻干支持剂5-20份。 

本发明所述的磷酸肌酸钠脂质体冻干制剂，所述的组分还可包括缓冲溶液，缓冲溶液选自磷酸盐缓冲液、枸橼酸盐缓冲液、碳酸盐缓冲液、硼酸盐缓冲液、醋酸盐缓冲液中的一种或几种。 

本发明还提供了一种制备磷酸肌酸钠脂质体冻干制剂的方法，制备步骤包括： 

(1)将磷脂、胆固醇、抗氧剂溶于有机溶剂中，加入缓冲盐溶液，蒸除有机溶剂，转移至高速搅拌设备，搅拌10-30分钟，过滤，灭菌、超声； 

(2)在无菌条件下，加入无菌的磷酸肌酸钠，冻干支持剂并溶解，灌装于西林瓶中，冷冻干燥，得脂质体冻干制剂。 

上述所述的磷酸肌酸钠脂质体冻干制剂的制备方法，有机溶剂可以为丙 酮、异丙醇、叔丁醇，优选是叔丁醇和异丙醇体积比1∶1的混合物。 

本发明提供的磷酸肌酸钠脂质体冻干制剂，进行稳定性试验考察，在高温60℃、光照4500Lx条件下放置10天，各项检测指标均无明显变化；在高温40℃、相对湿度75％±5％条件下加速试验6个月，各项检测指标没有明显变化；在高温25℃、相对湿度60％±10％条件下长期试验18个月，各项检测指标没有明显变化。 

本发明提供的磷酸肌酸钠脂质体冻干制剂，进行急性毒性试验、异常毒性试验和热源检查，均符合规定，安全性得到证明。 

本发明提供的磷酸肌酸钠脂质体冻干制剂，与现有技术相比，具有意想不到的效果，主要优点如下： 

(1)磷酸肌酸钠被包裹于脂质体内，大大提高了稳定性，保证了产品质量； 

(2)药物载体脂质体体内降解、无毒性和无免疫原性，而且可以提高药物治疗指数、降低药物毒性和减少药物副作用； 

(3)采用常规的工艺设备，可工业规模、高效率生产，产品质量稳定，是一种独特和普遍适用的，低成本的工业化制备方法。 

具体实施方式

以下通过实施例进一步说明本发明，但不应理解为对本发明的限制。 

实施例1磷酸肌酸钠脂质体冻干制剂的制备 

处方(100瓶)：磷酸肌酸钠    50g 

             大豆卵磷脂    75g 

             胆固醇        20g 

             维生素E       10g 

             甘露醇        40g 

制备工艺 

(1)称取75g大豆卵磷脂、20g胆固醇和10g维生素E溶于800ml丙酮中，加热熔融，加入pH值7.8磷酸盐缓冲溶液，加热蒸除丙酮，转移至组织捣碎机中，高速搅拌10分钟，过滤，灭菌，超声10分钟； 

(2)在无菌室内，100级条件下，加入灭菌的磷酸肌酸钠50g和甘露醇40g并溶解，过滤，灌装于西林瓶中，冷冻干燥，得磷酸肌酸钠脂质体冻干粉针剂。 

实施例2磷酸肌酸钠脂质体冻干制剂的制备 

处方(100瓶)：磷酸肌酸钠    100g 

             蛋黄卵磷脂    150g 

             胆固醇        25g 

             亚硫酸氢钠    37.5g 

             甘氨酸        100g 

             甘露醇        100g 

制备工艺 

(1)称取150g蛋黄卵磷脂和25g胆固醇溶于1000ml体积比1∶1的叔丁醇和异丙醇混合物中，加热熔融，加入pH值7.8磷酸盐缓冲溶液，加热蒸 除叔丁醇和异丙醇，转移至组织捣碎机中，高速搅拌30分钟，过滤，灭菌，超声20分钟； 

(2)在无菌室内，100级条件下，加入灭菌的磷酸肌酸钠100g、亚硫酸氢钠37.5g以及冻干支持剂甘氨酸100g和甘露醇100g并溶解，过滤，灌装于西林瓶中，冷冻干燥，得磷酸肌酸钠脂质体冻干粉针剂。 

实施例3磷酸肌酸钠脂质体冻干制剂的制备 

处方(100瓶)：磷酸肌酸钠          50g 

             氢化蛋黄卵磷脂      25g 

             抗坏血酸棕榈酸酯    37.5g 

             甘氨酸              31g 

             甘露醇              31g 

制备工艺 

(1)称取25g氢化蛋黄卵磷脂和37.5g抗坏血酸棕榈酸酯溶于500ml体积比1∶1的叔丁醇和异丙醇混合物中，加热熔融，加入pH值7.8磷酸盐缓冲溶液，加热蒸除叔丁醇和异丙醇，转移至组织捣碎机中，高速搅拌20分钟，过滤，灭菌，超声10分钟； 

(2)在无菌室内，100级条件下，加入灭菌的磷酸肌酸钠50g以及冻干支持剂甘氨酸31g和甘露醇31g并溶解，过滤，灌装于西林瓶中，冷冻干燥，得磷酸肌酸钠脂质体冻干粉针剂。 

实施例4磷酸肌酸钠脂质体冻干制剂的制备 

处方(100瓶)：磷酸肌酸钠          100g 

             双硬脂酸卵磷脂      150g 

             胆固醇              13g 

             甲醛合亚硫酸氢钠    20g 

             甘氨酸              65g 

             甘露醇              65g 

制备工艺 

(1)称取150g双硬脂酸卵磷脂、13g胆固醇和20g甲醛合亚硫酸氢钠溶于1000ml体积比1∶1的叔丁醇和异丙醇混合物中，加热熔融，加入pH值7.8磷酸盐缓冲溶液，加热蒸除叔丁醇和异丙醇，转移至组织捣碎机中，高速搅拌10分钟，过滤，灭菌，超声10分钟； 

(2)在无菌室内，100级条件下，加入灭菌的磷酸肌酸钠100g以及冻干支持剂甘氨酸65g和甘露醇65g并溶解，过滤，灌装于西林瓶中，冷冻干燥，得磷酸肌酸钠脂质体冻干粉针剂。 

实施例5质量研究 

将以上各实施例制备的样品与上市的磷酸肌酸钠冻干制剂(哈尔滨博莱制药有限公司生产，批号20081106)在高温60℃、光照4500Lx条件下放置10天进行影响因素试验考察，结果见表1；在高温40℃、相对湿度75％±5％条件下6个月，进行加速试验考察，结果见表2；在高温25℃、相对湿度60％±10％条件下18个月，进行长期试验考察，检测各项质量指标的 变化，结果见表3。 

表1影响因素结果 

表2加速试验结果 

表3长期试验结果 

由以上结果发现加速3月、6月，长期12月、18月时上市的磷酸肌酸钠粉针澄明度不符合规定，pH值下降较大，含量降低明显，有关物质升高； 

而本发明制备的样品外观性状没有明显变化，为白色块状物，复溶良好，澄明度、pH值、含量和有关物质也没有明显的变化。说明本发明制备的样品长期贮存质量稳定性更好。 

同时，经过常规检验可知，水化复溶之后，注射液中无肌酸、肌酐等降解产物，活性成分的量高度保持。 

实施例6安全性试验 

异常毒性检查依据2005年版药典附录XI C异常毒性检查法，将本发明制备的样品用氯化钠溶液稀释成一定浓度的供试品溶液，注入符合试验要求的小鼠体内，结果小鼠在48小时内均没有死亡现象，说明本品异常毒性符合规定。 

热源检查依据2005版药典附录XI D热源法进行检查，结果符合规定。 

Claims (5)

1.一种磷酸肌酸钠脂质体冻干制剂，其特征在于主要是由磷酸肌酸钠、磷脂、胆固醇、抗氧剂和冻干支持剂经冷冻干燥制备而成；

其中各组分及重量份为：磷酸肌酸钠10-20份，磷脂10-40份，胆固醇0-10份，抗氧剂1-10份，冻干支持剂5-20份；

其中所述的磷脂选自蛋黄卵磷脂、大豆卵磷脂、双硬脂酸卵磷脂、双软脂酸卵磷脂、双肉豆蔻酸卵磷脂、氢化蛋黄卵磷脂和氢化大豆卵磷脂中的一种或多种；

其中所述的抗氧剂选自亚硫酸氢钠、焦亚硫酸钠、L-半胱氨酸、硫脲、甲醛合亚硫酸氢钠、维生素E、抗坏血酸棕榈酸酯、叔丁基对羟基茴香醚中的一种或多种；

其中所述的冻干支持剂选自甘露醇、海藻糖、乳糖、葡萄糖、蔗糖、山梨醇、氯化钠、甘氨酸的一种或多种。

2.根据权利要求1所述的磷酸肌酸钠脂质体冻干制剂，其特征在于所述的冻干支持剂选自重量比1∶1的甘氨酸和甘露醇混合物。

3.一种权利要求1-2所述的磷酸肌酸钠脂质体冻干制剂的制备方法，制备步骤包括：

(1)将磷脂、胆固醇、抗氧剂溶于有机溶剂中，加入缓冲盐溶液，蒸除有机溶剂，转移至高速搅拌设备，搅拌10-30分钟，过滤，灭菌、超声；

(2)在无菌条件下，加入无菌的磷酸肌酸钠，冻干支持剂并溶解，灌装于西林瓶中，冷冻干燥，得脂质体冻干粉针剂；

其中有机溶剂选自丙酮、异丙醇、叔丁醇；

其中缓冲溶液选自磷酸盐缓冲液、枸橼酸盐缓冲液、碳酸盐缓冲液、硼酸盐缓冲液、醋酸盐缓冲液中的一种或几种。

4.根据权利要求3所述的磷酸肌酸钠脂质体冻干制剂的制备方法，其特征在于有机溶剂是体积比1∶1的叔丁醇和异丙醇的混合物。

5.根据权利要求1-2任一项所述的磷酸肌酸钠脂质体冻干制剂在制备心肌保护药中的用途。