CN103735514A - 一种聚乙二醇维生素e琥珀酸酯和钙网蛋白修饰的纳米粒及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种聚乙二醇维生素E琥珀酸酯和钙网蛋白修饰的纳米粒及其制备方法，它是由以下重量份比例的原料所制成：1份活性药物、20-40份磷脂、2-4份槐糖脂、1-2份钙网蛋白、5-10份聚乙二醇维生素E琥珀酸酯。与现有技术相比，本发明所得的纳米粒，由于聚乙二醇维生素E琥珀酸酯、槐糖脂和钙网蛋白的修饰：(1)制备工艺简单可控；(2)使纳米粒的稳定性大大提高，在溶液中稳定时间可以达6个月；(3)冷冻干燥不需要添加冻干保护剂，所得冻干粉，再溶解后，与冷冻干燥前相比，粒径和多分散系数变化很小；(4)对于肿瘤细胞的靶向性增强。

Description

一种聚乙二醇维生素E琥珀酸酯和钙网蛋白修饰的纳米粒及其制备方法

技术领域

本发明涉及一种纳米粒及其制备方法，尤其涉及一种聚乙二醇维生素E琥珀酸酯和钙网蛋白修饰的纳米粒及其制备方法，属于药物制剂领域。 

背景技术

药剂学中，纳米制剂包括纳米囊、纳米球、脂质纳米粒、脂质体、纳米乳和聚合物胶束等，是现今药剂学研究的热点。由于癌症发病率的不断上升，且由于大多数抗肿瘤药物生物利用度低，副作用大，而纳米给药系统具有提高药物靶向性、降低毒副作用等优点，从而成为了抗肿瘤药物首选的研究对象。 

磷脂是纳米制剂的常用材料，是生物膜的组成成分，生物体内存在其相关分解酶，很容易代谢，因而磷脂具有生物降解性和生物兼容性，磷脂分子中的两条长脂肪酸链使之具有疏水性。然而，磷脂分子量较小，形成的纳米制剂稳定性不够，作为长循环、缓释、吸收和靶向材料的应用方面受到很大的限制。 

发明内容

本发明提供了一种聚乙二醇维生素E琥珀酸酯和钙网蛋白修饰的纳米粒，其特征在于，它是由以下重量份比例的原料所制成： 

1份活性药物、20-40份磷脂、2-4份槐糖脂、1-2份钙网蛋白、5-10份聚乙二醇维生素E琥珀酸酯。 

优选地，上述纳米粒是由以下重量份比例的原料所制成： 

1份活性药物、25-35份磷脂、2.5-3.5份槐糖脂、1.4-1.6份钙网蛋白、6-8份聚乙二醇维生素E琥珀酸酯。 

优选地，所述的活性药物为紫杉醇、桑色素、芹菜素、白桦脂酸中的一种。 

优选地，所述的磷脂为大豆磷脂、大豆卵磷脂、蛋黄卵磷脂中的一种。 

优选地，所述的聚乙二醇维生素E琥珀酸酯为TPGS200、238、400、600、1000、2000、3400、3500、4000、6000中的一种或几种的混合物。 

本发明还提供了上述纳米粒的制备方法，其特征在于，它是由如下方法所制成： 

(1)用乙醇溶解活性药物、磷脂和槐糖脂； 

(2)真空旋转蒸发除去乙醇，真空干燥4-8小时，得干燥膜； 

(3)将聚乙二醇维生素E琥珀酸酯和钙网蛋白溶于纯水，加入到干燥膜中，使膜充分溶解，过滤，即得。 

本发明所得纳米粒，平均粒径为100-150nm，多分散系数(简称PDI)在0.10-0.20之间，均符合纳米制剂的要求。 

相对于现有技术，本发明所得的纳米粒，由于聚乙二醇维生素E琥珀酸酯、槐糖脂和钙网蛋白的修饰：(1)制备工艺简单可控；(2)使纳米粒的稳定性大大提高，在溶液中稳定时间可以达6个月；(3)冷冻干燥不需要添加冻干保护剂，所得冻干粉，再溶解后，与冷冻干燥前相比，粒径和多分散系数变化很小；(4)对于肿瘤细胞的靶向性增强。 

具体实施方案：

实施例1 

处方：1mg白桦脂酸、20mg大豆磷脂、2mg槐糖脂、1mg钙网蛋白、5mg聚乙二醇维生素E琥珀酸酯。 

制备工艺： 

(1)用10ml乙醇溶解白桦脂酸、大豆磷脂和槐糖脂； 

(2)真空旋转蒸发除去乙醇，真空干燥4小时，得干燥膜； 

(3)将聚乙二醇维生素E琥珀酸酯和钙网蛋白溶于10ml纯水，加入到干燥膜中，使膜充分溶解； 

(4)0.22μm微孔滤膜过滤，即得。 

实施例2 

处方：1mg桑色素、40mg大豆卵磷脂、4mg槐糖脂、2mg钙网蛋白、10mg聚乙二醇维生素E琥珀酸酯。 

制备工艺： 

(1)用10ml乙醇溶解桑色素、大豆磷脂和槐糖脂； 

(2)真空旋转蒸发除去乙醇，真空干燥8小时，得干燥膜； 

(3)将聚乙二醇维生素E琥珀酸酯和钙网蛋白溶于10ml纯水，加入到干燥膜中，使膜充分溶解； 

(4)0.22μm微孔滤膜过滤，即得。 

实施例3 

处方：1mg紫杉醇、30mg蛋黄卵磷脂、3mg槐糖脂、1.5mg钙网蛋白、8mg聚乙二醇维生素E琥珀酸酯。 

制备工艺： 

(1)将紫杉醇、蛋黄卵磷脂和槐糖脂混合，加入10ml乙醇溶解； 

(2)真空旋转蒸发除去乙醇，真空干燥6小时，得干燥膜； 

(3)将聚乙二醇维生素E琥珀酸酯和钙网蛋白溶于10ml纯水，加入到干燥膜中，使膜充分溶解； 

(4)0.22μm微孔滤膜过滤，即得。 

实施例4 

处方：1mg芹菜素、25mg大豆磷脂、2.5mg槐糖脂、1.4mg钙网蛋白、6mg聚乙二醇维生素E琥珀酸酯。 

制备工艺： 

(1)将芹菜素、大豆磷脂和槐糖脂混合，加入10ml乙醇溶解； 

(2)真空旋转蒸发除去乙醇，真空干燥5小时，得干燥膜； 

(3)将聚乙二醇维生素E琥珀酸酯和钙网蛋白溶于10ml纯水，加入到干燥膜中，使膜充分溶解； 

(4)0.22μm微孔滤膜过滤，即得。 

实施例5 

处方：1mg紫杉醇、35mg蛋黄卵磷脂、3.5mg槐糖脂、1.6mg钙网蛋白、8mg聚乙二醇维生素E琥珀酸酯。 

制备工艺： 

(1)将紫杉醇、蛋黄卵磷脂和槐糖脂混合，加入10ml乙醇溶解； 

(2)真空旋转蒸发除去乙醇，真空干燥7小时，得干燥膜； 

(3)将聚乙二醇维生素E琥珀酸酯和钙网蛋白溶于10ml纯水，加入到干燥膜中，使膜充分溶解； 

(4)0.22μm微孔滤膜过滤，即得。 

实施例6 

处方：1mg多西他赛、30mg蛋黄卵磷脂、3mg槐糖脂、1.6mg钙网蛋白、8mg聚乙 二醇维生素E琥珀酸酯。 

制备工艺： 

(1)将多西他赛、蛋黄卵磷脂和槐糖脂混合，加入10ml乙醇溶解； 

(2)真空旋转蒸发除去乙醇，真空干燥7小时，得干燥膜； 

(3)将聚乙二醇维生素E琥珀酸酯和钙网蛋白溶于10ml纯水，加入到干燥膜中，使膜充分溶解； 

(4)0.22μm微孔滤膜过滤，即得。 

实验例 

按照本发明处方和制备方法制备不含有TPGS和钙网蛋白的纳米粒，即除不含有TPGS和钙网蛋白，所有处方和制备方法均按照本发明所记载，所得纳米粒设为对照组； 

1、稳定性比较结果见表1 

放置条件：4℃冷藏放置。 

表1本发明所得纳米粒稳定性考察 

由上表1可以得知，对照组，即没有经过TPGS修饰的纳米粒，放置10天后即出现悬浮颗粒，1个月以后颗粒沉淀，稳定性较差；而本发明各实施例所得的经过TPGS修饰的纳米粒，放置6个月仍然有纳米制剂的乳光现象，没有悬浮颗粒析出，也无沉淀，稳定性大大提高。 

2、冷冻干燥后再溶解 

经冷冻干燥后，将冻干粉再溶解，粒径及PDI对比结果见表2 

表2冷冻干燥后再溶解粒径及PDI对比 

由上表2可以得知，对照组，即没有经过TPGS修饰的纳米粒，经冷冻干燥后，粒径增大231nm，PDI增大0.191，再溶解后的粒径和PDI均较差；而本发明各实施例所得的经过TPGS修饰的纳米粒，粒径最多的增大22nm，PDI最多增大0.016，变化很小，基本可以忽略。 

3、肿瘤靶向性 

选用荷瘤小鼠，进行活体成像实验，小鼠尾静脉注射对照组纳米粒和本发明实施例所得纳米粒，荧光结果显示，注射对照组纳米粒的小鼠，荧光主要集中在肝脏部位，而注射本发明实施例所得纳米粒，荧光均集中在肿瘤部位，因此本发明所得纳米粒对于肿瘤的靶向性明显增强。 

4、抗肿瘤药效试验 

4.1方法 

取Hepg2细胞置于37℃，5％CO₂细胞培养箱培养3天，用培养液调整细胞浓度为1×10⁷mL^-1，取0.2mL注入小鼠腹腔内。7天后将小鼠颈椎脱臼处死，于75％乙醇浸泡1～2min后抽取腹水，用生理盐水稀释，混合均匀，1000r/min离心5min，取上清液，加生理盐水稀释成1×10⁷mL^-1的腹水瘤细胞液，置冰水浴中存放。 

取小鼠50只，皮下接种0.2mL上述腹水瘤细胞液(2×10⁶个细胞)。随机分为5组，每组10只，分别设为空白组、对照组和实验组，实验组包括低、中、高剂量组。 

空白组腹腔注射生理盐水； 

对照组腹腔注射紫杉醇注射制剂，是以聚氧乙烯蓖麻油和无水乙醇(体积比为50∶50)作为混合溶媒所制成的制剂；给药剂量为以紫杉醇量计0.2mg/20g(小鼠体重)。 

实验组腹腔注射本发明实施例3所得纳米制剂，低、中、高剂量组的剂量(以纳米粒制剂中紫杉醇量计)分别为0.1mg/20g(小鼠体重)、0.2mg/20g(小鼠体重)、0.3mg/20g(小鼠体重)。 

每组每日给药1次，共给药7天，7天后处死各组小鼠，完整剥离肿瘤并称重，计算对照组和实验组抑瘤率： 

抑瘤率(％)＝[1-(平均瘤重/空白组平均瘤重)]×100 

4.2结果见表3 

表3本发明纳米粒对荷瘤小鼠的抑瘤作用 

与空白组相比较，*P＜0.05。 

由上表可知，实验组随着给药剂量增加，抑瘤率增加；相比较空白组，对照组和实验组的平均瘤重均显著降低，实验组低、中、高剂量组的抑瘤率分别达到25.14％、42.28％和54.86％，证明本发明所得的纳米粒制剂对于肿瘤生长具有明显的抑制作用。 

Claims (6)

1.一种聚乙二醇维生素E琥珀酸酯修饰的纳米粒，其特征在于，它是由以下重量份比例的原料所制成：

1份活性药物、20-40份磷脂、2-4份槐糖脂、1-2份钙网蛋白、5-10份聚乙二醇维生素E琥珀酸酯。

2.根据权利要求1所述的纳米粒，其特征在于，它是由以下重量份比例的原料所制成：

1份活性药物、25-35份磷脂、2.5-3.5份槐糖脂、1.4-1.6份钙网蛋白、6-8份聚乙二醇维生素E琥珀酸酯。

3.根据权利要求1所述的纳米粒，其特征在于，所述的活性药物为多西他赛、紫杉醇、桑色素、芹菜素、白桦脂酸中的一种。

4.根据权利要求1所述的纳米粒，其特征在于，所述的磷脂为大豆磷脂、大豆卵磷脂、蛋黄卵磷脂中的一种。

5.根据权利要求1所述的纳米粒，其特征在于，所述的聚乙二醇维生素E琥珀酸酯为TPGS200、238、400、600、1000、2000、3400、3500、4000、6000中的一种或几种的混合物。

6.权利要求1-5任一项所述纳米粒的制备方法，其特征在于，它是由如下方法所制成：

(1)用乙醇溶解活性药物、磷脂和槐糖脂；

(2)真空旋转蒸发除去乙醇，真空干燥4-8小时，得干燥膜；

(3)将聚乙二醇维生素E琥珀酸酯和钙网蛋白溶于纯水，加入到干燥膜中，使膜充分溶解，过滤，即得。