KR101737940B1

KR101737940B1 - 발효 콩잎 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 외용제 조성물

Info

Publication number: KR101737940B1
Application number: KR1020100115609A
Authority: KR
Inventors: 심진섭; 박준성; 김동현; 김덕희; 김한곤
Original assignee: (주)아모레퍼시픽
Priority date: 2010-11-19
Filing date: 2010-11-19
Publication date: 2017-05-22
Also published as: KR20120054298A

Abstract

본 발명은 발효 콩잎 추출물을 유효 성분으로 함유하는 피부 외용제 조성물에 관한 것으로, 보다 상세하게는 발효 콩잎 추출물을 유효성분으로 함유함으로써 피부에서 콜라겐 생성을 촉진하며, MMP-1을 억제하고, 동시에 항산화 효과와 DNA 손상 보호 효과를 통한 피부 노화 억제 및 주름 개선 효과를 갖는 피부 외용제 조성물에 관한 것이다.

Description

발효 콩잎 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 외용제 조성물{Composition of skin external application containing fermented soybean leaves extract}

콩잎은 대두(Glycine max (L.) Merr)의 장미목 콩과에 속하는 한해살이 식물의 잎을 의미한다. 콩잎은 콩잎장아찌와 콩잎김치의 형태로 경상도 지역에서 주로 애용되고 있다. 또한 한방에서는 뱀에 물린 상처의 치료나 피가 섞인 오줌이 나오는 임질 등의 치료에 사용한다. 콩잎은 당뇨병의 예방 또는 치료, 통풍 예방, 지연 또는 치료, 및 항동맥경화 등의 약리적인 효과가 있다고 알려져 있으나, 지금까지 발효 콩잎 추출물을 이용하여 세포 재생 피부 외용제 조성물을 개발하기 위한 어떠한 내용도 교시되거나 기재된 바 없다.

이에 본 발명자들은 피부에 안전하면서도 세포 증식 및 세포 재생 효과가 우수하고, 제품으로서의 안정성도 우수한 피부 외용제를 제조하기 위하여 연구하던 중, 발효 콩잎 추출물이 세포 증식 및 세포 재생 효과가 매우 우수한 것을 발견하고 본 발명을 완성하게 되었다.

따라서, 본 발명의 목적은 세포 증식 및 세포 재생 효능이 우수한 피부 외용제 조성물을 제공하는 것이다.

상기한 목적을 달성하기 위하여, 본 발명에서는 발효 콩잎 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 외용제 조성물을 제공한다.

본 발명에 의한 피부 외용제 조성물은 발효 콩잎 추출물을 유효성분으로 함유함으로써 항산화 및 항노화 효과가 우수하였다.

본 발명은 발효 콩잎 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 외용제 조성물에 관한 것이다. 본 발명에 의한 피부 외용제 조성물은 발효 콩잎 추출물을 조성물 총 중량에 대하여 0.0001∼30 중량%로 함유하는 것이 바람직하다. 그 함량이 0.0001 중량% 미만인 경우에는 상기 추출물에 의한 세포 증식 및 세포 재생 효과 등을 얻을 수 없고, 함량이 30 중량%를 초과하는 경우에는 함량 증가에 비해 효과의 증가가 크지 않기 때문에 비효율적이다.

본 발명에서 유효성분으로 사용하는 발효 콩잎 추출물은 콩잎 추출물 내 유효성분의 함량을 높이기 위하여 콩잎 또는 그 추출물을 발효시켜 제조한 것이다.

본 발명의 일 실시예에서 상기 발효 콩잎 추출물은 콩잎을 자연발효, 균발효 또는 염장발효시킨 후 여기에 물 또는 에탄올, 또는 이들의 혼합물을 첨가하여 10∼90℃에서 4∼24시간 동안 추출하여 제조할 수 있다.

또한 본 발명의 일 실시예에서 상기 발효 콩잎 추출물은 콩잎을 당업계에 잘 알려진 방법으로 물 또는 에탄올, 또는 이들의 혼합물로 10∼90℃에서 4∼24시간 동안 추출한 다음 이 추출물을 자연발효, 균발효 또는 염장발효시켜 제조할 수 있다.

본 발명의 일 실시예에서는 상기 콩잎 또는 그 추출물을 옹기 등의 용기에 담아 음지에 두고 자연환경에서 인위적인 조작없이 1일 내지 1년, 바람직하게는 1일 내지 30일간 발효시키는 과정을 거쳐 자연발효시킬 수 있다.

또한 본 발명의 일 실시예에서는 상기 콩잎 또는 그 추출물에 효모균, 버섯균, 유산균, 누룩균 또는 바실러스속균(고초균) 등 당업계에 공지된 유용한 발효 균주를 접종하여 10∼60℃에서 18시간 내지 100일 정도 발효시키는 과정을 거쳐 균발효시킬 수 있다.

본 발명에서 사용하는 효모균은 사카로마이세스(Saccharomyces sp .), 스키조사카로마이세스(Schizosaccharomyces sp .), 토룰로프시스(Torulopsis sp .), 로도토룰라(Rhodotorula sp .) 또는 칸디다(Candida sp .) 등을 들 수 있으며, 버섯균은 식용으로 가능한 버섯균이라면 어느 것이나 가능하나, 바람직하게는 차가버섯(Inonnotus - obliquus), 동충하초균류(Cordyceps sinensis , Paecilomyces japonica), 송이버섯(Tricholomamatsutake), 상황버섯(Phellinus linteus) 또는 영지버섯(Ganoderma lucidum) 등을 사용할 수 있다. 또한 유산균은 락토바실러스(Lactobacillus sp .), 스트렙토코쿠스(Streptococcus sp .), 류코노스톡(Leuconostoc sp .) 또는 비피도박테리아(Bifidobacteria sp .) 등을 들 수 있으며, 누룩균은 라이조푸스(Rhyzopus), 우사미(Usami) 및 오리재(Oryzae), 아스퍼질러스 오리재(Aspergillus oryzae) 또는 아스퍼질러스 소재(Aspergillus sojae) 등을 들 수 있고, 바실러스속균(고초균)은 바실러스 리체니포르미스(Bacillus licheniformis) F1017, 바실러스 리체니포르미스(Bacillus licheniformis) F1232, 바실러스 리체니포르미스(Bacillus licheniformis) F1267, 바실러스 리체니포르미스(Bacillus licheniformis) F1268, 바실러스 리체니포르미스(Bacillus licheniformis) F1200, 바실러스 푸미루스(Bacillus pumilus) F1337, 바실러스 소노렌시스(Bacillus sonorensis) F1005, 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis) F1236 또는 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis) F1279 등을 들 수 있으나, 이에만 한정되는 것은 아니다.

본 발명의 일 실시예에서 효모를 사용하여 발효시킬 경우, 콩잎 또는 그 추출물이 함유된 기본 배지에 일정한 농도(약 10⁵ 내지 10⁷ cell/mL)로 효모를 접종하여, pH 5.5∼6.5, 온도 25∼50℃, 통기량 0.05∼0.5 VVM의 조건을 유지하면서 배양한 후, 이 발효액을 원심분리하여 고분자 침전물과 효모균제를 제거함으로써 발효 콩잎 추출물을 수득할 수 있다. 배양 시간은 24 내지 120 시간 정도가 바람직하다.

또한, 본 발명의 일 실시예에서 버섯균을 사용하여 발효시킬 경우, 콩잎 또는 그 추출물에 버섯균을 접종하여, 온도 18∼25℃, 습도 60∼80%의 조건을 유지하면서 배양한 후, 물이나 탄소수 1∼4의 무수 또는 함수 저급 알코올(예를 들어, 메탄올, 에탄올, 프로판올 및 부탄올 등), 상기 저급 알코올과 물의 혼합 용매, 아세톤, 에틸아세테이트, 클로로포름, 1,3-부틸렌글리콜, 헥산 또는 디에틸에테르 중 1종 이상을 이용하고, 50∼100℃, 1∼5시간 동안 가열하여 감압 농축하여 발효 콩잎 추출물을 수득할 수 있다. 배양 시간은 1일 내지 100일 정도가 바람직하다.

또한, 본 발명의 일 실시예에서 유산균을 사용하여 발효시킬 경우, 콩잎 또는 그 추출물이 함유된 기본 배지에 일정한 농도(약 10⁵ 내지 10⁷ cell/mL)로 유산균을 접종하여, pH 6.5∼7.5, 온도 25∼50℃, 통기량 1VVM의 조건을 유지하면서 배양한 후, 이 발효액을 원심분리하여 고분자 침전물과 유산균제가 제거된 발효 콩잎 추출물을 수득할 수 있다. 배양 시간은 24 내지 120 시간 정도가 바람직하다.

또한, 본 발명의 일 실시예에서 누룩균을 사용하여 발효시킬 경우, 콩잎 또는 그 추출물에 누룩균을 접종하여, 온도 15∼45℃의 조건을 유지하면서 배양한 후, 이 발효액을 원심분리하여 고분자 침전물과 누룩균제가 제거된 발효 콩잎 추출물을 수득할 수 있다. 배양 시간은 18 내지 120 시간 정도가 바람직하다.

또한, 본 발명의 일 실시예에서 바실러스속균을 사용하여 발효시킬 경우, 콩잎 또는 그 추출물이 함유된 기본 배지에 일정한 농도(약 10⁵ 내지 10⁷ cell/mL)로 바실러스속균을 접종하여, 온도 10∼60℃의 조건을 유지하면서 배양한 후, 이 발효액을 원심분리하여 pH 5.5∼8.5, 고분자 침전물과 바실러스균제가 제거된 발효 콩잎 추출물을 수득할 수 있다. 배양 시간은 24 내지 96 시간 정도가 바람직하다.

또한 본 발명의 일 실시예에서는 1) 콩잎 또는 그 추출물에 일정량의 소금을 첨가하여 장기 숙성 발효시키는 단계; 및 2) 상기 염장 발효물을 물 또는 유기용매로 추출하여 발효 추출물을 수득하는 단계;를 거쳐 염장 발효시킬 수 있다.

상기 1) 단계에서, 염장에 사용되는 소금으로는 정제한 고순도 염화나트륨, 천일염, 암염 및 죽염 등이 바람직하며, 소금의 농도는 전체 발효물에 대하여 10∼30 중량%가 바람직하다. 소금의 함량이 10 중량% 미만에서는 기대하는 효과를 발휘하기가 어렵고, 30 중량%를 초과하면 효과의 변화가 미미하다.

상기 1)의 발효공정은 4 내지 40℃ 사이에서, 충분한 발효가 일어날 수 있도록 1일에서 1년 정도, 바람직하게는 1일 내지 30일 정도가 발효시키는 것이 좋다. 4℃ 미만에서는 유용 미생물의 성장이 잘 되지 않고 40℃를 초과할 경우 미생물의 성장이 너무 과하게 일어나 콩잎 또는 그 추출물의 성능에 영향을 미칠 수 있다.

상기 2) 단계에서 사용하는 추출 용매로는 정제수, 메탄올, 에탄올, 글리세린, 에틸아세테이트, 부틸렌글리콜, 프로필렌글리콜, 디클로로메탄 및 헥산으로 이루어진 그룹에서 선택된 1종을 단독으로 또는 2종 이상 혼합하여 사용할 수 있다. 이때, 추출온도는 10 내지 80℃가 바람직하며, 6시간 내지 24시간 동안 추출할 수 있다. 상기 추출온도 및 추출시간을 벗어나면 추출 효율이 떨어지거나 성분의 변화가 생길 수 있다.

본 발명에서는 상기 2) 단계 이후 당업계에 알려진 통상적인 방법으로 상온에서 냉침, 가열 및 여과하여 얻어진 액상물 또는 추가로 용매를 증발, 분무건조 또는 동결건조하여 콩잎의 염장 발효 추출물의 제조할 수 있다.

본 발명에 의한 발효 콩잎 추출물은 그 사용에 특별히 제한되지 않으며, 예를 들면, 피부 외용제 조성물 이외에도 약제 조성물 등에 사용될 수 있다.

또한 본 발명에 의한 피부 외용제 조성물은 당업계에서 통상적으로 사용하는 화장품학 또는 피부과학적으로 허용가능한 매질 또는 기제를 더 함유할 수 있다. 이는 당해 분야의 통상적인 방법에 따라 국소적용에 적합한 모든 제형으로, 예를 들면, 용액, 겔, 고체, 반죽 무수 생성물, 수상에 유상을 분산시켜 얻은 에멀젼, 현탁액, 마이크로에멀젼, 마이크로캡슐, 미세과립구 또는, 이온형(리포좀) 및 비이온형의 소낭 분산제의 형태로, 또는 크림, 스킨, 로션, 파우더, 연고, 스프레이 또는 콘실 스틱의 형태로 제조될 수 있다. 본 발명에 의한 피부 외용제 조성물은 또한 포말(foam)의 형태로 또는 압축된 추진제를 더 함유한 에어로졸 조성물의 형태로도 제조될 수 있다.

또한 본 발명에 의한 피부 외용제 조성물은 지방 물질, 유기용매, 용해제, 농축제, 겔화제, 연화제, 항산화제, 현탁화제, 안정화제, 발포제(foaming agent), 방향제, 계면활성제, 물, 이온형 또는 비이온형 유화제, 충전제, 금속이온봉쇄제, 킬레이트화제, 보존제, 비타민, 차단제, 습윤화제, 필수 오일, 염료, 안료, 친수성 또는 친유성 활성제, 지질 소낭 또는 화장품에 통상적으로 사용되는 임의의 다른 성분과 같은 화장품학 또는 피부과학 분야에서 통상적으로 사용되는 보조제를 더 함유할 수 있으며, 상기 보조제는 화장품학 또는 피부과학 분야에서 일반적으로 사용되는 양으로 도입될 수 있다.

또한 본 발명에 의한 피부 외용제 조성물은 그 제형에 있어서 특별히 한정되는 바가 없으며, 예를 들면, 유연화장수, 수렴화장수, 영양화장수, 영양크림, 마사지크림, 에센스, 아이크림, 아이에센스, 클렌징 크림, 클렌징 폼, 클렌징 워터, 팩, 파우더, 바디로션, 바디크림, 바디오일 또는 바디에센스 등의 화장료로 제형화될 수 있다.

이하, 본 발명의 내용을 실시예 및 시험예를 통하여 보다 구체적으로 설명한다. 이들 실시예는 본 발명의 내용을 이해하기 위해 제시되는 것일 뿐 본 발명의 권리범위가 이들 실시예 및 시험예로 한정되는 것은 아니고, 당업계에서 통상적으로 주지된 변형, 치환 및 삽입 등을 수행할 수 있으며, 이에 대한 것도 본 발명의 범위에 포함된다.

[실시예 1] 발효 콩잎 추출물 제조

콩잎 1.5 kg을 물 2 ℓ에 넣고 중불(60∼80℃)에서 1시간 동안 삶았다. 삶은 콩잎을 건져낸 뒤 상온에서 1시간 동안 식혀주고 식은 콩잎을 옹기에 넣어 음지에서 상온조건으로 7일간 보관하였다. 이후 콩잎을 믹서기로 분쇄한 뒤 80% 에탄올 수용액 7 ℓ를 넣고, 3회 환류 추출한 다음, 15℃에서 1일간 침적시켰다. 그 후, 여과포 여과와 원심분리를 통해 잔사와 여액을 분리하고, 분리된 여액을 감압 농축하여 발효 콩잎 추출물 357 g을 얻었다.

[비교예 1] 콩잎 추출물 제조

콩잎 1.5 kg을 믹서기로 분쇄한 뒤 80% 에탄올 수용액 7 ℓ를 넣고, 3회 환류 추출한 다음, 15℃에서 1일간 침적시켰다. 그 후, 여과포 여과와 원심분리를 통해 잔사와 여액을 분리하고, 분리된 여액을 감압 농축하여 콩잎 추출물 357 g을 얻었다.

[실시예 2] 효모를 이용한 발효 콩잎 추출물

상기 비교예 1의 콩잎 추출물을 1.5 ℓ의 정제수에 5중량%가 되도록 첨가하여 탄소원, 질소원, 인산염, 무기염류 및 미량영양성분 등을 기본 조성으로 하고, 수산화나트륨을 이용하여 적절한 pH 5.5∼6.5로 맞추었다. 상기 콩잎 추출물이 함유된 배양 배지에 사카로마이세스(Saccharomyces sp .)를 10⁶ cell/mL로 접종하고, pH 5.5∼6.5, 온도 25∼35℃, 통기량 0.5 VVM의 조건을 유지하면서 72시간 동안 배양하였다.

상기 발효액을 1.000xg에서 30분간 원심분리하여 고분자 침전물과 효모균체가 제거된 최종 발효 콩잎 추출물을 얻었다.

[실시예 3] 버섯균을 이용한 발효 콩잎 추출물

상기 비교예 1의 콩잎 추출물에 동충하초균류(Paecilomyces japonica)를 5 중량%로 첨가하고, 18∼25℃, 습도 60∼70%에서 60일간 발효시킨 후 건조시킨 다음, 이를 분쇄하여 얻어진 분쇄물 100 g씩을 80% 메탄올 3 ℓ에 각각 넣고 냉각콘덴서가 달린 환류추출기에서 3시간 끓여 추출하였다. 그 다음 100 메쉬 여과포로 여과한 후 잔사를 같은 방법으로 1회 더 추출하였다. 각각의 추출액을 합하여 상온에서 와트만 2번 여과지로 여과하여 불용성 물질을 제거한 후, 냉각 콘덴서가 달린 증류장치에서 60℃로 감압농축한 후 동결건조하여 최종 발효 콩잎 추출물을 얻었다.

[실시예 4] 유산균을 이용한 발효 콩잎 추출물

상기 비교예 1의 콩잎 추출물을 1.5 ℓ의 정제수에 5 중량%가 되도록 첨가하여 탄소원, 질소원, 인산염, 무기염류, 미량영양성분 등을 기본 조성으로 하고, 수산화나트륨을 이용하여 적절한 pH 5.5∼6.5로 맞추었다. 상기 콩잎 추출물이 함유된 배양 배지에 락토바실러스(Lactobacillus sp .)를 10⁶ cell/mL로 접종하고, pH 6.5∼7.5, 온도 35∼38℃, 통기량 1 VVM의 조건을 유지하면서 72시간 동안 배양하였다.

상기 발효액을 1.000xg에서 30분간 원심분리하여 고분자 침전물과 유산균 균체가 제거된 최종 발효 콩잎 추출물을 얻었다.

[실시예 5] 누룩균을 이용한 발효 콩잎 추출물

상기 비교예 1의 콩잎 추출물에 아스퍼질러스 오리재(Aspergillus oryzae)를 5중량%로 첨가하고, 25℃에서 48시간 동안 발효시킨 후 건조시킨 다음, 이를 분쇄하여 얻어진 분쇄물 100 g씩을 80% 메탄올 3 ℓ에 각각 넣고 냉각콘덴서가 달린 환류추출기에서 3시간 끓여 추출하였다. 그 다음 100 메쉬 여과포로 여과한 후 잔사를 같은 방법으로 1회 더 추출하였다. 각각의 추출액을 합하여 상온에서 와트만 2번 여과지로 여과하여 불용성 물질을 제거한 후, 냉각 콘덴서가 달린 증류장치에서 60℃로 감압농축한 후 동결건조하여 최종 발효 콩잎 추출물을 얻었다.

[실시예 6] 바실러스균을 이용한 발효 콩잎 추출물

상기 비교예 1의 콩잎 추출물을 1.5 ℓ의 정제수에 5 중량%가 되도록 첨가하여 탄소원, 질소원, 인산염, 무기염류 및 미량영양성분 등을 기본 조성으로 하고, 수산화나트륨을 이용하여 적절한 pH 5.5∼6.5로 맞추었다. 상기 콩잎 추출물이 함유된 배양 배지에 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis) F1279를 접종하고, 45℃에서 72시간 동안 배양하였다.

상기 발효액을 1.000xg에서 30분간 원심분리하여 고분자 침전물과 바실러스 균체가 제거된 최종 발효 콩잎 추출물을 얻었다.

[실시예 7] 콩잎 염장 발효 추출물 제조

콩잎 1 kg을 깨끗한 물로 씻어 건조시킨 후 10 중량% 농도의 소금 용액에 혼합한 다음 옹기에 담아 준비하고 4℃에서 약 30일간 발효시킨 후 여기에 80% 에탄올 수용액 5 ℓ를 넣고, 3회 환류 추출한 다음, 15℃에서 1일간 침적시켰다. 그 후, 여과포 여과와 원심분리를 통해 잔사와 여액을 분리하고, 분리된 여액을 감압농축하여 얻은 추출물을 물에 현탁한 다음, 에테르 1ℓ로 5회 추출하여 색소를 제거하고, 수층을 1-부탄올 500 ㎖로 3회 추출하였다. 이로부터 얻은 총 1-부탄올층을 감압농축하여 1-부탄올 추출물을 얻고, 이를 소량의 메탄올에 녹인 후, 대량의 에틸아세테이트에 추가하여, 생성된 침전물을 건조함으로써, 콩잎의 염장 발효 추출물 50.3 g을 수득하였다.

[시험예 1] 항산화 효과: DPPH 테스트

상기 실시예 1∼7 및 비교예 1에서 제조한 추출물의 항산화 효과를 알아보기 위하여, 유기 라디칼인 DPPH(1,1-디페닐-2-피크릴하이드라질; 1,1-diphenyl-2-picryl hydrazyl)의 환원에 의해(항산화제는 산화됨) 발생되는 흡광도의 변화를 통해 DPPH 산화 억제 효능을 비교 측정함으로써 항산화능을 평가하는 방법으로 수행하였다. 즉, 상기 실시예 1∼7 및 비교예 1에서 제조한 추출물에 대해 DPPH의 산화가 억제되어 흡광도가 대조군에 비해 감소되는 정도를 측정하여, 대조군의 흡광도에 비해서 50％ 이하의 흡광도를 나타내는 농도를 유효 항산화 농도로 평가하였다.

100 μM(에탄올에 용해) DPPH 용액 190 ㎕와 상기에서 수득한 비교예 1, 실시예 1∼7 및 양성대조군을 각각 10 ㎕씩 넣어 반응액을 만들고 37℃에서 30분간 반응시킨 후 540 nm에서 흡광도를 측정하였다. 상기 양성대조군으로는 널리 사용하고 있는 합성 항산화제인 트롤록스(Trolox)를 사용하였다. 각 물질의 DPPH 분석 결과를 하기 표 1에 나타내었으며, IC₅₀은 첨가한 시료에 의해 흡광도가 50％ 감소했을 때의 시료 농도를 의미한다.

DPPH 분석 결과

시험물질	IC₅₀(ppm)
트롤록스(Trolox)	45
비교예 1	66
실시예 1	19
실시예 2	26
실시예 3	30
실시예 4	23
실시예 5	20
실시예 6	28
실시예 7	27

상기 표 1의 결과에서, 실시예 1∼7의 발효 콩잎 추출물의 항산화능은 생품 추출물(비교예 1) 보다 월등히 우수할 뿐만 아니라 양성대조군으로 사용한 합성 항산화제인 트롤록스와 비교하여도 그 효과가 월등히 우수한 것을 확인하였다.

따라서, 본 발명에 따른 발효 콩잎 추출물은 항산화 효과가 뛰어남을 알 수 있었다.

[시험예 2] 항노화 효과: 콜라게나제 발현 억제

상기 실시예 1∼7 및 비교예 1에서 제조한 추출물의 콜라게나제 생성 억제능을 측정하였다.

인간 정상 섬유아세포를 10⁵개의 농도로 12웰 평판배양기에서 배양한 다음 상기 비교예 1 및 실시예 1∼7의 추출물을 각각 1, 10 및 50 ppm의 농도로 포함하는 배지로 교체하였다. 양성대조군으로 TGF-β(Human Transforming Growth Factor-β1, Roche Co.)를 10 ng/㎖의 농도로 포함하는 것을 사용하였으며, 비교예 1, 실시예 1∼7 및 TGF-β를 모두 함유하지 않은 것을 음성 대조군으로 사용하였다. 배양 3일째 세포를 수확해서(harvest) ELISA 방법으로 생성된 I형 프로콜라겐(type I procollagen)의 양을 정량하였다. 상기 음성 대조군의 프로콜라겐의 양을 0, 양성 대조군의 프로콜라겐의 양을 100으로 설정하고 각 측정값과의 비교치를 산출하였다. 그 결과를 하기 표 2에 나타내었다.

시험물질		Ⅰ형 프로콜라겐 생합성(%)
음성 대조군		0
실시예 1	1 ppm	33.7
	10 ppm	41.8
	50 ppm	42.5
실시예 2	1 ppm	36.8
	10 ppm	45.6
	50 ppm	49.3
실시예 3	1 ppm	40.8
	10 ppm	50.5
	50 ppm	54.6
실시예 4	1 ppm	43.1
	10 ppm	53.4
	50 ppm	57.6
실시예 5	1 ppm	39.1
	10 ppm	48.4
	50 ppm	52.3
실시예 6	1 ppm	42.0
	10 ppm	52.1
	50 ppm	56.2
실시예 7	1 ppm	41.4
	10 ppm	51.3
	50 ppm	55.4
비교예 1	1 ppm	25.9
	10 ppm	30.9
	50 ppm	35.7
TGF-β(10 ng/㎖)		100

상기 표 2의 결과에서, 인간 정상 섬유아세포 단층 배양 시스템(Normal human fibroblast monolayer culture system)에서 실시예 1∼7의 발효 콩잎 추출물은 음성 대조군과 비교하여 I형 프로콜라겐 생성을 농도 의존적으로 촉진시켰다. 또한, 본 발명에 따른 실시예 1∼7의 발효 콩잎 추출물은 상기 비교예 1의 일반 콩잎 추출물보다 I형 프로콜라겐 생성 효과가 우수하였다.

따라서, 본 발명의 발효 콩잎 추출물은 콜라겐 생성을 촉진함으로써 인체 피부의 노화에 의해 발생하는 콜라겐의 감소 현상을 완화시켜 우수한 항노화 효과를 제공할 수 있음을 확인하였다.

[시험예 3] 항노화 효과: MMP-1 발현 억제

인체 섬유아세포를 10⁵ 개의 농도로 12웰 평판배양기에서 배양한 다음 자외선 B를 40 mJ/㎠로 조사한 후, 실시예 1∼7 및 비교예 1에서 제조한 추출물을 1 및 10 ppm씩 포함한 배지로 교체하였다. 배양 2일째 세포를 수확해서(harvest) ELISA 방법으로 생성된 MMP-1(matrix metalloproteinase I)의 양을 정량하였다. 그 결과는 시험물질을 포함하지 않는 자외선 대조군을 100으로 하여 측정한 값과의 비교치로 산출하였고, 양성대조군은 레티노익산(Retinoic acid; RA, Sigma. 미국)을 사용하였다.

시험물질		MMP-1 발현량
대조군		100
레티노익산 10 μM		45
실시예 1	1 ppm	52
실시예 1	10 ppm	46
실시예 2	1 ppm	57
실시예 2	10 ppm	47
실시예 3	1 ppm	62
실시예 3	10 ppm	51
실시예 4	1 ppm	59
실시예 4	10 ppm	46
실시예 5	1 ppm	63
실시예 5	10 ppm	50
실시예 6	1 ppm	59
실시예 6	10 ppm	51
실시예 7	1 ppm	62
실시예 7	10 ppm	49
비교예 1	1 ppm	113
비교예 1	10 ppm	82

상기 표 3의 결과에서, 인간 정상 섬유아세포 단층 배양 시스템에서 본 발명에 의한 실시예 1∼7의 발효 콩잎 추출물은 UVB 40 mJ/㎠에 의해서 유도되는 MMP-1의 발현을 유의적으로 억제하였다. 따라서, 본 발명에 의한 실시예 1∼7의 발효 콩잎 추출물은 내적 노화 또는 외적 환경요인에 의하여 발생하는 피부조직 분해효소인 MMP-1의 생합성을 저해하여 피부노화를 억제하고 주름 개선에 효과가 있음을 확인하였다.

[시험예 3] 항노화 효과: 단 세포 겔 전기영동(SCGE: Single cell gel electrophoresis, Comet assay)에 의한 DNA 산화적 손상에 대한 억제 활성

사람의 정상 섬유아세포를 24시간 배양한 후 실시예 1∼7 및 비교예 1에서 제조한 추출물 및 비타민 E를 각각 농도별로 처리하고, 12시간 후에 양성대조군인 H₂O₂(최종농도 10^-3M)를 처리한 다음 전기영동법으로 염색한 결과를 형광현미경으로 관찰하였다. 이때 이미지분석기(image analyzer)인 KOMET 3.1(Kinetic Imaging, England)를 사용하여 각 세포에서 DNA 절단 결과로 나타난 테일(tail)의 길이(㎛)를 분석하였으며, 그 결과를 하기 표 4에 나타내었다.

DNA 산화적 손상에 대한 억제작용

시험물질		테일 길이(㎛)	저해율(%)
H₂O₂		115.6	-
H₂O₂ + 실시예 1	10 ppm	71.3	38.3
	50 ppm	64.5	44.2
	100 ppm	58.5	49.4
H₂O₂ + 실시예 2	10 ppm	72.8	37.0
	50 ppm	72.0	37.7
	100 ppm	45.6	60.6
H₂O₂ + 실시예 3	10 ppm	70.6	38.9
	50 ppm	61.8	46.6
	100 ppm	54.6	52.7
H₂O₂ + 실시예 4	10 ppm	76.4	33.9
	50 ppm	71.4	38.2
	100 ppm	42.9	62.9
H₂O₂ + 실시예 5	10 ppm	80.6	30.2
	50 ppm	77.7	32.8
	100 ppm	51.9	55.1
H₂O₂ + 실시예 6	10 ppm	74.7	35.3
	50 ppm	73.1	36.7
	100 ppm	64.7	44.0
H₂O₂ + 실시예 7	10 ppm	72.9	36.9
	50 ppm	62.9	45.6
	100 ppm	53.5	53.7
H₂O₂ + 비교예 1	10 ppm	105.6	8.6
	50 ppm	103.4	10.5
	100 ppm	89.9	22.3
H₂O₂ + 비타민 E	10 ppm	70.6	38.9

상기 표 4의 결과에서, 실시예 1∼7의 발효 콩잎 추출물은 유의성 있는 산화적 DNA 손상억제 활성을 나타내었으며, 이로 인해 본 발명에 의한 발효 콩잎 추출물이 히드록실 라디칼(.OH)에 의한 DNA 싱글 스트랜드 브레이크(single strand break)를 억제하는 DNA 산화적 손상억제제로서 작용함을 확인할 수 있었다.

Claims

발효 콩잎 추출물을 유효성분으로 함유하는, 항산화용 화장료 조성물로서,
상기 발효 콩잎 추출물은 콩잎 또는 그 추출물을 자연발효, 균발효 또는 염장발효시킨 다음, 추출을 통해 수득된 것이고,
상기 균발효는 사카로마이세스(Saccharomyces sp.), 동충하초균류(Paecilomyces japonica), 락토바실러스(Lactobacillus sp.), 아스퍼질러스 오리재(Aspergillus oryzae), 및 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis) F1279로 이루어지는 군에서 선택된 1종의 발효균주를 사용하여 발효하는 것을 특징으로 하는, 화장료 조성물.
발효 콩잎 추출물을 유효성분으로 함유하는, 항노화용 화장료 조성물로서,
상기 발효 콩잎 추출물은 콩잎 또는 그 추출물을 자연발효, 균발효 또는 염장발효시킨 다음, 추출하여 수득된 것이고,
상기 균발효는 사카로마이세스(Saccharomyces sp.), 동충하초균류(Paecilomyces japonica), 락토바실러스(Lactobacillus sp.), 아스퍼질러스 오리재(Aspergillus oryzae), 및 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis) F1279로 이루어지는 군에서 선택된 1종의 발효균주를 사용하여 발효하는 것을 특징으로 하는, 화장료 조성물.
제 1항 또는 제 2항에 있어서, 상기 발효 콩잎 추출물의 함량은 조성물 총 중량에 대하여 0.0001 내지 30 중량%인, 화장료 조성물.
제 1항 또는 제 2항에 있어서, 상기 콩잎 추출물은 콩잎에 물 또는 에탄올, 또는 이들의 혼합물을 첨가하여 10 내지 90℃에서 4 내지 24시간 동안 추출하여 수득되는 것을 특징으로 하는, 화장료 조성물.
제 1항 또는 제 2항에 있어서, 상기 자연발효 콩잎 추출물은
1) 발효원료인 콩잎 또는 그 추출물을 용기에 담아 음지에 두는 단계;
2) 상기 1)의 용기에 담긴 콩잎 또는 그 추출물을 상온에서 1일 내지 1년 동안 발효시켜 발효물을 얻는 단계; 및
3) 상기 2)의 발효물에 물, 에탄올, 또는 이들의 혼합물을 첨가하여, 10 내지 90℃에서 4 내지 24시간 동안 추출하는 단계;
를 포함하는 발효 공정을 거쳐 수득되는 것을 특징으로 하는, 화장료 조성물.
제 1항 또는 제 2항에 있어서, 상기 균발효 콩잎 추출물은
1) 발효원료인 콩잎 또는 그 추출물이 함유된 배지에 사카로마이세스종(Saccharomyces sp.)인 효모 발효균주를 접종하는 단계;
2) 상기 1)의 발효균주를 pH 5.5 내지 6.5, 온도 25 내지 50℃, 통기량 0.05 내지 0.5 VVM에서, 24 내지 120 시간 동안 배양하여 발효액을 얻는 단계; 및
3) 상기 2)의 발효액을 원심분리하여 침전물과 발효균주를 제거하는 단계;
를 포함하는 발효 공정을 거쳐 수득되는 것을 특징으로 하는, 화장료 조성물.
제 6항에 있어서, 상기 효모 발효균주의 접종 농도는 10⁵ 내지 10⁷cell/mL인, 화장료 조성물.
제 1항 또는 제 2항에 있어서, 상기 균발효 콩잎 추출물은
1) 발효원료인 콩잎 또는 그 추출물이 함유된 배지에 동충하초균류(Paecilomyces japonica)인 버섯균 발효균주를 첨가하고 발효시킨 후, 건조하여 발효물을 얻는 단계;
2) 상기 1)의 발효물을 분쇄한 다음, 이 분쇄물에 용매를 첨가하여 환류 조건 하에서 가열하여 추출액을 얻는 단계; 및
3) 상기 2)의 추출액을 상온에서 여과하여 불용성 물질을 제거한 다음, 감압농축한 후 동결건조하는 단계;
를 포함하는 발효 공정을 거쳐 수득되는 것을 특징으로 하는, 화장료 조성물.
제 8항에 있어서, 상기 버섯균 발효균주는 발효원료 총 중량에 대하여 5 중량%로 첨가되는 것을 특징으로 하는, 화장료 조성물.
제 1항 또는 제 2항에 있어서, 상기 균발효 콩잎 추출물은
1) 발효원료인 콩잎 또는 그 추출물이 함유된 배지에 락토바실러스종(Lactobacillus sp.)인 유산균 발효균주를 접종하는 단계;
2) 상기 1)의 발효균주를 pH 6.5 내지 7.5, 온도 25 내지 50℃, 통기량 1 VVM에서, 24 내지 120 시간 동안 배양하여 발효액을 얻는 단계; 및
3) 상기 2)의 발효액을 원심분리하여 침전물과 발효균주를 제거하는 단계;
를 포함하는 발효 공정을 거쳐 수득되는 것을 특징으로 하는, 화장료 조성물.
제 10항에 있어서, 상기 유산균 발효균주의 접종 농도는 10⁵ 내지 10⁷cell/mL인, 화장료 조성물.
제 1항 또는 제2항에 있어서, 상기 균발효 콩잎 추출물은
1) 발효원료인 콩잎 또는 그 추출물에 아스퍼질러스 오리재(Aspergillus oryzae)인 누룩균 발효균주를 첨가하고 발효시킨 후, 건조하여 발효물을 얻는 단계;
2) 상기 1)의 발효물을 분쇄한 다음, 이 분쇄물에 용매를 첨가하여 환류 조건 하에서 가열하여 추출액을 얻는 단계; 및
3) 상기 2)의 추출액을 상온에서 여과하여 불용성 물질을 제거한 다음, 감압 농축한 후 동결 건조하는 단계;
를 포함하는 발효 공정을 거쳐 수득되는 것을 특징으로 하는, 화장료 조성물.
제 12항에 있어서, 상기 누룩균 발효균주는 발효원료 총 중량에 대하여 5 중량%로 첨가되는 것을 특징으로 하는, 화장료 조성물.
제 1항 또는 제 2항에 있어서, 상기 균발효 콩잎 추출물은
1) 발효원료인 콩잎 또는 그 추출물이 함유된 배지에 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis) F1279인 바실러스균 발효균주를 접종하는 단계;
2) 상기 1)의 발효균주를 pH 5.5 내지 8.5, 온도 10 내지 60℃에서, 24 내지 96 시간 동안 배양하여 발효액을 얻는 단계; 및
3) 상기 2)의 발효액을 원심분리하여 침전물과 발효균주를 제거하는 단계;
를 포함하는 발효 공정을 거쳐 수득되는 것을 특징으로 하는, 화장료 조성물.
제 14항에 있어서, 상기 바실러스균 발효균주의 접종 농도는 10⁵ 내지 10⁷cell/mL인, 화장료 조성물.
제 1항 또는 제 2항에 있어서, 상기 염장발효 콩잎 추출물은
1) 발효원료인 콩잎 또는 그 추출물에 염화나트륨, 천일염, 암염 및 죽염으로 이루어진 군에서 선택되는 1종 이상의 소금을 발효원료 총 중량에 대하여 10 내지 30 중량% 첨가하고, 4 내지 40℃에서, 1일 내지 1년 동안 염장발효시켜 염장 발효물을 얻는 단계; 및
2) 정제수, 에탄올, 글리세린, 에틸아세테이트, 부틸렌글리콜, 프로필렌글리콜, 디클로로메탄 및 헥산으로 이루어진 그룹에서 선택된 1종 또는 2종 이상의 혼합용매를 추출용매로 사용하여 상기 단계 1)의 염장 발효물을 추출함으로써 발효 추출물을 수득하는 단계;
를 포함하는 발효 공정을 거쳐 수득되는 것을 특징으로 하는, 화장료 조성물.
제 16항에 있어서, 상기 추출시의 추출온도는 10 내지 80℃이고, 추출시간은 6시간 내지 24시간인 것을 특징으로 하는, 화장료 조성물.