KR20130114808A

KR20130114808A - 콜라겐 천연 발효액을 포함하는 화장료 조성물

Info

Publication number: KR20130114808A
Application number: KR1020120037131A
Authority: KR
Inventors: 김정기
Original assignee: 김정기
Priority date: 2012-04-10
Filing date: 2012-04-10
Publication date: 2013-10-21

Abstract

본 발명은 콜라겐을 효모 또는 바실러스균으로 발효하여 얻은 발효액을 포함하는 화장료 조성물에 관한 것으로, 피부의 신진대사 산물과 유사하여 탁월한 보습효과를 나타내며, 피부노화 방지, 유해산소 제거, 미백효과가 탁월하여 항산화 효과 증대되고, 생체 유래 조절물질과 유사한 콜라겐 발효액을 이용함으로써 피지를 분해하고 각질을 유연화시켜 각질층의 세포 교체 주기를 증가시켜 피부를 부드럽게 하도록 하는 콜라겐 천연발효액을 포함하는 화장료 조성물에 관한 것이다.

Description

콜라겐 천연 발효액을 포함하는 화장료 조성물{Cosmetics composition including collagen natural fermented broth}

본 발명은 콜라겐 천연 발효액을 포함하는 화장료 조성물에 관한 것으로서, 보다 상세하게는 콜라겐을 효모 또는 바실러스균으로 발효하여 얻은 발효액을 포함하는 화장료 조성물에 관한 것이다.

세포 외 기질(extracellular matrix)의 주요 구성 성분인 콜라겐은 피부의 섬유아세포에서 생성되는 주요 기질 단백질로서 세포 외 간질에 존재한다. 또한, 생체 단백질 총 중량의 약 30%를 차지하는 중요한 단백질로서 견고한 3중 나선구조를 가지고 있다. 콜라겐은 피부, 혈관, 뼈, 치아, 근육 등의 유기 물질의 대부분을 형성하는데, 특히 뼈와 피부(진피)에 그 포함량이 높으며, 포유동물의 경우, 전체 단백질의 1/3이 콜라겐이라고 한다.

콜라겐분자는 분자량이 약 30만이며 분자량 10만의 폴리펩티드가 3가닥 묶여 헬릭스를 형성하고 길이 3000Å, 직경 15Å의 가늘고 길며 딱딱한 막대 상이다. 분자의 양 말단에는 헬릭스 구조를 하지 않는 텔로펩티드라고 불리는 부분이 조금 있다. 콜라겐은 본래 다른 단백질에 비해 항원성은 약하지만, 콜라겐이 가진 항원성의 대부분은 이 텔로펩티드에 존재한다는 것이 밝혀졌다.

콜라겐의 구성성분은 아미노산으로서 glycine, proline를 대단히 많이 함유하고 있다. 다른 단백질에는 비교적 적은 히드록시프롤린이나 히드록시리진(hydroxylysine)을 함유하고 있기 때문에, 이 2종의 아미노산 함량이 그 기관 내의 콜라겐 함량의 척도가 된다. 전체 아미노산 중 약 1/3이 glycine, 1/3은 proline과 히드록시프롤린이다. 콜라겐은 열 또는 화학약품 처리에 의해 변성하면 젤라틴이 된다. 콜라게나제 이외의 단백질 분해효소로는 분해되지 않는다.

콜라겐의 주된 기능으로는 피부의 기계적 견고성, 결합조직의 저항력과 조직의 결합력, 세포 접착의 지탱, 세포 분할과 분화(유기체의 성장 혹은 상처 치유시)의 유도 등이 알려져 있다(Van der Rest 등, Ann NY Acad Sci, 1990). 이러한 콜라겐은 연령 및 자외선 조사에 의한 광노화에 의해 감소하며, 이는 피부의 주름 형성과 밀접한 연관이 있다고 알려져 있다.(Arthur K. Balin et al., Aging and the skin, 1989). 또한 콜라겐은 상처 치유에 있어서 중요한 역할을 담당하며, 손상된 상피에서 콜라겐 합성을 촉진시켜서 상처를 신속하게 흉터없이 회복시킬 수 있다.

종래에는 콜라겐의 피부 보습 효과 및 상처 치유 효과를 이용하기 위하여 화장품 또는 연고 등과 같은 피부외용제 조성물에 콜라겐을 배합한 제품들이 출시되어 있으나, 이들 제품들은 콜라겐 자체를 피부 표면에 도포하는 것으로서 고분자 물질인 콜라겐의 경피흡수가 어려워 보습작용 또는 상처치유효과를 기대할 수 없으므로 본질적인 피부기능 개선 및 상처치유의 기능을 나타내는 것은 불가능하였다.

이러한 문제를 해결하기 위하여 콜라겐 합성 촉진 물질에 대한 관심이 높아졌으며, 종래에 알려진 콜라겐 합성촉진 물질로는 비타민 C, 레티노익산(retinoic acid), 발암증식인자(TGF: transforming growth factor)(Cardinale G. et al, Adv. Enzymol., 41, p. 425, 1974), 동물 태반 유래의 단백질(JP8-231370), 베툴린산(betulinic acid)(JP8-208424), 클로렐라 추출물(JP9-40523, JP10-36283, 섬유아세포 증식 촉진작용) 등이 있다.

불용성 콜라겐의 화장품에의 응용으로서는 불용성콜라겐의 분산액을 동결건조하여 스폰지상태로 해서, 페이셜마스크 등에 이용되고 있다. 그러나 대부분의 경우, 가용성 콜라겐을 크림, 유액, 화장수 등에 배합하여 주로 기초화장품에 이용하고 있다. 가용성 콜라겐은 어린 동물의 피부 등의 결합조직에서 산으로 추출할 수 있으나 양이 적고 고가이므로 불용성 콜라겐을 가용화하는 편이 이점이 많다.

화장품에 콜라겐을 배합하면 보습성이 좋아지며 특히 텍스쳐가 개선되어 사용감이 향상된다. 1% 콜라겐이 든 크림을 nude mouse에 16일간 발랐을 때, 표피의 두께가 증대되는 콜라겐효과가 나타났으나, 콜라겐분자량은 30만으로 커서 피부에 침투하기 어렵다는 문제점이 있다.

또한, 콜라겐 가수분해물도 화장품에 이용되며 가끔 콜라겐과 혼동되지만 이것은 분자량도 수천으로 작고 분자구조도 다르며 그 효과도 다르기 때문에 주의해야 한다는 문제점이 있다.

이와 같이, 콜라겐이 함유된 화장품 조성물은 피부적용시 자극과 발적 등의 안전성의 문제로 사용량의 제한이 있거나 효과가 미미하여 실질적으로 피부 기능 개선 또는 상처 치유의 효과를 기대할 수 없다. 따라서, 기존의 피부외용제 조성물보다 생체에 안전하고 효과가 높은 새로운 피부외용제 조성물의 개발이 절실히 요망되고 있다.

한편, 발효는 미생물이 가지고 있는 효소를 이용하여 유기물을 분해시켜서 인간 생활에 유용하게 사용되는 물질을 제조하는 과정으로서, 인체에 유용한 물질을 만들어내는 대표적인 발효 미생물로는 유산균, 효모 등이 있고, 다양한 식품들이 발효 과정에 의해서 생산된다.

또한, 발효는 유용 물질을 만들어 내는 것 이외에도 발효에 관여하는 유산균이 장내에서 면역 및 독소제거 (Detoxification)의 역할을 담당하기도 한다. 더 나아가, 장내 미생물에 의한 발효를 통해 섭취된 성분은 분해되어 인체 세포에 흡수가 용이한 저분자 물질로 전환되거나, 불안정하거나 불활성인 형태에서 활성 형태로 전환되어 흡수되기도 하며, 이러한 결과는 장내 미생물에 의한 생물전환의 중요성을 단적으로 보여주는 것이라 볼 수 있다.

따라서, 유산균 및 효모 등의 미생물 발효에 의해서 천연 동식물소재의 효능을 극대화시키거나, 안전성 문제를 해결하기 위한 시도는 다양한 식품, 화장품, 약품 등의 개발에 있어서 중요한 의미를 갖는다 하겠다.

종래 천연 동식물소재를 발효시켜 얻은 발효액을 함유하는 화장료 조성물로서는, 한국공개특허 10-2008-0069816에 보이차 추출물을 유효성분으로 포함하는 것을 특징으로 하는 피부 주름 및 탄력 개선용 화장료 조성물이 공지된 바 있다.

또한, 한국등록특허 10-0962587에 누룩을 이용한 당화 단계; 유산균 배양을 통한 발효 단계; 및 상기 배양 결과물로부터 상등액을 수득하는 단계를 포함하되, 상기 당화 단계는 천연 식물소재 및 한약재를 분쇄하는 단계, 누룩을 첨가하는 단계, 및 20 내지 40℃의 온도에서 18 내지 30시간 동안 침지시키는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 천연 식물소재 및 한약재의 발효액을 포함하는 화장품 조성물이 공지되어 있다.

또한, 한국공개특허 10-2011-0117471에 예덕나무를 효모(Saccharomyces cerevisiae), 유산균(lactobacillus) 또는 바실러스 균(Bacillus sp)등의 미생물과 함께 배양하는 방법으로 제조한 예덕나무 발효액을 포함하는, 피부 화장료 조성물이 공지되어 있으며, 한국공개특허 제2007-6960호에서는 녹두를 유산균으로 발효시킴으로써 제조되는 화장료 조성물을 개시하고 있다.

그러나, 상기 종래 기술들은 천연식물 또는 한약재를 발효한 것으로서, 일부 활성성분에 의한 간접적인 피부보호효과는 가지고 있으나, 피부의 신진대사 산물인 콜라겐에 직접 작용하는 것으로서 콜라겐 발효액을 포함하는 화장료 조성물은 현재까지 개발된 적은 없으므로, 이에 본 발명자들은 콜라겐 천연발효액을 포함하는 화장료 조성물이 피부의 신진대사 산물과 유사하여 탁월한 보습효과를 나타내며, 피부노화 방지, 유해산소 제거, 미백효과가 탁월하여 항산화 효과 증대되고, 생체 유래 조절물질과 유사한 콜라겐 발효액을 이용함으로써 피지를 분해하고 각질을 유연화시켜 각질층의 세포 교체 주기를 증가시켜 피부를 부드럽게함을 발견하고 본 발명을 완성하게 되었다.

본 발명은 피부의 신진대사 산물과 유사하여 탁월한 보습효과를 나타내며, 피부노화 방지, 유해산소 제거, 미백효과가 탁월하여 항산화 효과 증대되고, 생체 유래 조절물질과 유사한 콜라겐 발효액을 이용함으로써 피지를 분해하고 각질을 유연화시켜 각질층의 세포 교체 주기를 증가시켜 피부를 부드럽게 하도록 하는 콜라겐 천연발효액을 포함하는 화장료 조성물을 제공하는 것을 해결하고자 하는 과제로 한다.

상기 과제의 해결을 휘하여 본 발명은 콜라겐을 효모 또는 바실러스균으로 발효하여 얻은 발효액을 포함하는 콜라겐 천연 발효액을 포함하는 화장료 조성물을 과제의 해결수단으로 한다.

상기 효모균은 사카로마이세스 세레비시애(Saccharomyces cerevisiae)인 것을 과제의 해결수단으로 한다.

상기 바실러스균은 바실러스 서브틸리스, 바실러스 푸밀리스, 바실러스 리케니포미스, 바실러스 메가테리움, 바실러스 폴리퍼멘티커스, 바실러스 메센테리커스 및 이들의 혼합물로부터 선택되는 것을 과제의 해결수단으로 한다.

상기 발효액은 화장료 조성물 총 중량에 대하여 0.1 내지 50.0%(w/w)로 함유되는 것을 과제의 해결수단으로 한다.

상기 화장료 조성물은 용액, 오일, 왁스, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누 또는 스프레이로 구성된 군으로부터 선택되는 제형을 갖는 것을 과제의 해결수단으로 한다.

또한, 콜라겐 분말을 제조하는 단계; 상기 제조된 콜라겐 분말을 정제수에 희석한 배양액에 효모 또는 바실러스균을 접종하여 발효시켜 발효액을 얻는 단계; 상기 얻어진 발효액을 여과하는 단계;를 포함하여 구성되는 콜라겐 천연 발효액을 포함하는 화장료 조성물 제조방법을 과제의 해결수단으로 한다.

상기 발효액을 얻는 단계에서 사용되는 콜라겐 분말은 총 배양액 1L를 기준으로 1 내지 50g의 양으로 사용하며, 사용되는 효모 또는 바실러스균은 총 배양액 1L 기준으로 1 X 10⁴내지 1 X 10⁵세포수의 양으로 접종하는 것을 과제의 해결수단으로 한다.

본 발명의 콜라겐 천연발효액을 포함하는 화장료 조성물은 피부의 신진대사 산물과 유사하여 탁월한 보습효과를 나타내며, 피부노화 방지, 유해산소 제거, 미백효과가 탁월하여 항산화 효과 증대되고, 생체 유래 조절물질과 유사한 콜라겐 발효액을 이용함으로써 피지를 분해하고 각질을 유연화시켜 각질층의 세포 교체 주기를 증가시켜 피부를 부드럽게 하는 효과가 있다.

본 발명은 콜라겐을 효모 또는 바실러스균으로 발효하여 얻은 발효액을 포함하는 화장료 조성물을 기술구성의 특징으로 한다.

상기 효모균은 사카로마이세스 세레비시애(Saccharomyces cerevisiae)인 것을 기술구성의 특징으로 한다.

상기 바실러스균은 바실러스 서브틸리스, 바실러스 푸밀리스, 바실러스 리케니포미스, 바실러스 메가테리움, 바실러스 폴리퍼멘티커스, 바실러스 메센테리커스 및 이들의 혼합물로부터 선택되는 것을 기술구성의 특징으로 한다.

상기 발효액은 화장료 조성물 총 중량에 대하여 0.1 내지 50.0%(w/w)로 함유되는 것을 기술구성의 특징으로 한다.

상기 화장료 조성물은 용액, 오일, 왁스, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누 또는 스프레이로 구성된 군으로부터 선택되는 제형을 갖는 것을 기술구성의 특징으로 한다.

또한, 콜라겐 분말을 제조하는 단계; 상기 제조된 콜라겐 분말을 정제수에 희석한 배양액에 효모 또는 바실러스균을 접종하여 발효시켜 발효액을 얻는 단계; 상기 얻어진 발효액을 여과하는 단계;를 포함하여 구성되는 콜라겐 천연 발효액을 포함하는 화장료 조성물 제조방법을 기술구성의 특징으로 한다.

상기 발효액을 얻는 단계에서 사용되는 콜라겐 분말은 총 배양액 1L를 기준으로 1 내지 50g의 양으로 사용하며, 사용되는 효모 또는 바실러스균은 총 배양액 1L 기준으로 1 X 10⁴내지 1 X 10⁵세포수의 양으로 접종하는 것을 기술구성의 특징으로 한다.

먼저, 본 발명의 콜라겐 천연 발효액을 포함하는 화장료 조성물은 콜라겐을 효모 또는 바실러스균으로 발효하여 얻은 발효액을 포함한다. 콜라겐이 발효되면, 글리신(glycine) 및 프롤린(proline)이 생성되는데, 상기 글리신(glycine) 및 프롤린(proline)은 피부에 직접 작용하여 피부보습, 피부노화 방지, 항산화, 피지분해,피부유연화 작용을 하게 된다.

상기 글리신(glycine)은 일반적으로 식물성 단백질에는 거의 함유되어 있지 않지만 동물성 단백질에는 다량으로 함유되어 있다. 동물체 내에서는 세린과의 상호전환 반응에 의해 합성되는 외에 글리옥실산에 글루탐산 또는 글루타민이 아미노기(基) 공급원이 되어 글루신을 생성한다. 생체 내의 대사(代謝)에서도 중요한 역할을 하며 핵산(核酸)의 염기성분인 푸린, 에너지 대사에 관여하는 클레아틴을 비롯하여 혈색소 · 클로로필 · 비타민 Bl2의 포르피린 합성 등에도 관여한다. 또한, 생체 내에서 생긴 유독 불질을 물에 녹기 쉬운 성질로 바꾸어 소변이나 담즙에 배설하는 해독(解毒)기능을 한다.

또한, 상기 프롤린(proline)은 20가지 아미노산 중 지방족 아미노산의 하나로서 통상 화장품에는 향료, 모발컨디셔닝제, 피부컨디션닝제로 배합된다.

본 발명의 콜라겐 천연 발효에 사용되는 효모균은 진핵미생물(핵과 세포질이 핵막에 의하여 나누어져 있는 생물)에 속하며 세포벽, 세포막, 핵, 사립체, 과립 등 세포 소기관을 갖추고 있다. 성의 구별이 없는 이들은 주로 budding(출아법)으로 번식하는데, 분리된 많은 효모균들 중에는 발효능이 없는 것, budding 대신 fission(분열) 혹은 bud-fission 방법으로 증식하는 것, 자낭포자(ascospore)가 아닌 사출포자(ballistospore)를 형성하거나 포자(spore)형성이 관찰되지 않는 것 등 다양한 그룹의 효모도 존재한다. 크기는 보통 5-12㎛로 세균의 5-10배 크기이며, pH 4.5~5.5나 1~10에서도 생존한다. pH 1에서 12시간 생존하는 효모는 박테리아보다 산에 강하므로 배지의 pH를 3.5~3.8 정도로 맞추면 박테리아의 오염을 어느 정도 억제할 수 있다.

효모는 균종에 따라서 조금씩 차이가 있으나 대부분 20~25℃에서 잘 자란다. 보통은 50℃이상에서는 사멸한다고 하지만 그 온도 이상에서 합성이 되지 않는 성장요소를 배지에 직접 첨가해 줌으로써 어느 정도는 극복이 가능하다. 사카로마이세스 세레비시애(Saccharomyces cerevisiae)의 경우 40℃이상에서 사멸하지만 배지에 올레산(oleic acid)와 에르고스테롤(ergosterol)을 첨가해 줌으로써 이를 방지할 수 있다. 효모균 자체는 단세포 식물로서 단백질과 미량광물질을 다량 함유하고 있다. 본 발명의 콜라겐을 발효시키는데 사용하기에 가장 바람직한 효모균은 사카로마이세스 세레비시애이다.

본 발명의 콜라겐 천연 발효에 사용되는 바실러스(Bacillus)균은 포자 형성균으로, 토양이나 물속에 서식하며 대부분 유기물 분해와 관련되어 있다. 본 발명에서 사용될 수 있는 바실러스균은 바람직하게는 바실러스 서브틸리스, 바실러스 푸밀리스, 바실러스 리케니포미스, 바실러스 메가테리움, 바실러스 폴리퍼멘티커스, 바실러스 메센테리커스 및 이들의 혼합물을 포함하며, 가장 바람직하게는 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis)로서 이 균은 고초균으로도 알려져 있는데, 포도당과 같은 다양한 당류, 전분 등을 혐기적으로 대사하여, 메주나 청국장과 같은 발효 식품 제조에 이용되기도 하는 유기물 분해 미생물이다.

본 발명에서, 콜라겐 발효액의 함량은 전체 화장료 조성물에 대하여 0.1 ∼ 50.0 %(w/w)이며, 함량이 0.1 %(w/w) 미만일 경우에는 뚜렷한 피부 개선 효과를 기대할 수 없고, 함량이 50.0%를 초과하는 경우에는 함유량 증가에 따른 뚜렷한 효과의 증가가 나타나지 않으며, 불필요한 발효액의 소모 문제점이 있다.

본 발명의 콜라겐 발효액은 피부에 국소적으로 바르는 거나 뿌리는 것에 의해 그 효과를 달성할 수 있다. 따라서 본 발명의 바람직한 일 양태에 따르면, 본 발명의 콜라겐 발효액 조성물은 용액, 오일, 왁스, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누 또는 스프레이로 형태로 제조될 수 있으며, 이러한 제형의 제조는 통상적으로 알려진 방법에 의해 제조된다.

또한, 본 발명의 화장품 조성물에 포함되는 성분은 유효 성분으로서의 콜라겐 발효액 이외에 화장품 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들을 포함하며, 예컨대 항산화제, 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제, 그리고 담체를 포함한다.

한편, 본 발명의 콜라겐 발효액은 콜라겐 분말을 제조하는 단계; 상기 제조된 콜라겐 분말을 정제수에 희석한 배양액에 효모 또는 바실러스균을 접종하여 발효시켜 발효액을 얻는 단계; 상기 얻어진 발효액을 여과하는 단계;를 포함하여 구성되는 제조방법에 의해 제조된다.

상기 발효액을 얻는 단계에서 콜라겐 분말을 정제수에 희석하여 배양액을 만들고, 121℃에서 멸균시킨 후, 효모 또는 바실러스균을 접종하며, 사용되는 콜라겐 분말은 총 배양액 1L를 기준으로, 1 내지 50g의 양으로 사용하는 것이 바람직하며, 사용되는 효모 또는 바실러스균은 총 배양액 1L 기준으로, 1 X 10⁴내지 1 X 10⁵세포수의 양으로 접종되는 것이 바람직하다

배양조건은 호기적인 조건에서 배양되며, 30 ∼ 37℃, pH 5-7의 조건에서 1 내지 15일간 배양된다.

상기와 같이 제조된 본 발명의 콜라겐 발효액은 탁월한 보습효과를 나타내며, 피부노화 방지, 유해산소 제거 등 항산화효과가 탁월하고, 티로시나아제 활성 저해 효과 및 멜라닌 생합성을 억제하여 피부미백 효과가 탁월하며, 생체 유래 조절물질과 유사한 콜라겐 발효액을 이용함으로써 피지를 분해하고 각질을 유연화시켜 각질층의 세포 교체 주기를 증가시켜 피부를 부드럽게 하는 효과가 있고, 더 나아가, 상피세포 재생효과에 탁월하고, 발효과정에서 엽산, 리보플라빈, 나이아신, 티아민, 비오틴 같은 비타민 B 군 등의 새로운 대사산물을 생성하는 효과가 있다.

이하에서는 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자가 용이하게 실시할 수 있도록 본 발명의 바람직한 실시예를 통하여 상세히 설명한다. 그러나 본 발명은 여러 가지 상이한 형태로 구현될 수 있으며, 여기에서 설명하는 실시예에 한정되지 않는다.

콜라겐 분말을 정제수에 10g/L 비율로 첨가한 다음, 121℃에서 고압멸균 시킨 후 효모균을 접종하였다. 이때 효모균은 사카로마이세스 세레비시애(Saccharomyces cerevisiae)를 사용하였으며, 배양액당 50,000 cfu/L로 접종하였다. 배양은 5L 발효조에서, 30℃, pH 5 내지 pH 7 조건에서 7일간 배양하였다. 그런 다음, 상기 배양액을 원심분리하여 배양균을 1차 제거 한 후 0.25 μM 여과지를 이용하여 여과하였다. 이렇게 얻은 여과액을 다시 4℃의 저온 창고에서 약 10일간 숙성시킨 후 이 여과 숙성액을 다시 0.25μM의 여과지로 2차 여과하여 콜라겐 발효액을 제조하였다.

콜라겐 분말을 정제수에 10g/L 비율로 첨가한 다음, 121℃에서 고압멸균 시킨 후 바실러스균을 접종하였다. 이때, 바실러스균은 바실러스 서브틸리스(고초균; Bacillus subtilis)를 사용하였으며, 배양액 당 50,000 cfu/L로 접종하였다. 배양은 5L 발효조를 이용하여 37℃, pH 5.5의 조건 하에서 3일간 배양하였다. 배양 후 배양액을 원심분리하여 배양균을 1차 제거 한 후 0.25 μM 여과지를 이용하여 여과하였으며, 이렇게 얻은 여과액을 4℃의 저온 창고에서 약 10일간 숙성시킨 후 이 여과 숙성액을 다시 0.25μM의 여과지를 이용하여 2차 여과하여 콜라겐 발효액을 제조하였다.

[티로시나아제 활성 저해 효과시험]

콜라겐 발효액의 티로시나아제 활성 저해 정도를 보기 위하여 티로시나아제 활성 저해 실험을 실시하였다. 티로시나아제 활성 저해 기질로는 인산나트륨 완충액(pH 6.8)에 용해한 1.5 mmol/ℓ의 티로신(시그마사)을 사용하였다. 콜라겐 발효액은 0.05M 인산나트륨 완충용액(pH 6.8)을 이용하여 농도별로 희석하여 시료액을 제조하고 상기 농도별 시료액 240㎕에 티로신 40㎕를 각각 첨가하고, 티로시나아제(시그마사, 1500U/㎖) 20㎕을 첨가한 후 37℃에서 15분 동안 반응시킨 다음, 490 nm에서 흡광도를 측정하였다. 대조군으로는 콜라겐 발효액을 첨가하지 않은 것을 사용하였으며, 티로시나아에 활성 저해도(%)는 [1-(비교군흡광도/대조군흡광도)] X 100 에 따라 계산하고 그 결과를 하기 표 1에 기재하였다.

	콜라겐 발효액 농도(%)	티로시나아제 활성 저해도(%)
실시예 1	0.0	0.0
	0.5	26.3
	1.0	45.2
	5.0	78.8
	10.0	89.0
실시예 2	0.0	0.0
	0.5	33.0
	1.0	46.7
	5.0	80.4
	10.0	92.0

상기 표 1의 결과에 나타난 바와 같이, 본 발명의 콜라겐 발효액은 티로시나아제 활성 억제에서 탁월한 효과를 나타내었으며, 또한 상기 활성 저해도는 콜라겐 발효액 농도에 따라 증가함을 알 수 있다.

[멜라닌 생성 저해 실험]

생쥐 유래의 흑색종 세포 B-16 (쥐 흑색종 세포, 한국세포주은행)를 12-웰 플레이트(Falcon)에 1 X 10⁴cell/well이 되도록 접종한 후에 하루 동안 배양하여 세포를 안정화시킨 다음 각 웰당 0 내지 0.2%의 농도별로 콜라겐 발효액을 처리하여 3-4일 동안 배양하였다. 배양한 플레이트는 원심분리한 후 배양액을 제거하고, 디메틸설폭사이드(DMSO)에 용해한 1N NaOH 용액 500 ㎕로 세포를 용해한 후 90℃ 수조(water bath)에서 10분간 가열하였다. 이를 다시 원심분리한 후 그 상등액을 570 ㎚의 파장에서 흡광도를 측정하였다. 측정한 값을 이용하여 [1-(비교군흡광도/대조군흡광도)] X 100에 따라 멜라닌 생성 저해도(%)를 계산하고, 그 결과를 표 2에 기재하였다.

	콜라겐 발효액 농도(%)	멜라닌 생성 저해도(%)
실시예 1	0.0	0.0
	0.5	3.0
	1.0	13.0
	5.0	45.7
	10.0	77.7
실시예 2	0.0	0.0
	0.5	5.3
	1.0	23.2
	5.0	50.7
	10.0	78.6

상기 표 2의 결과에 나타난 바와 같이, 본 발명의 콜라겐 발효액은 멜라닌 세포에서 멜라닌 생성을 크게 저해하는 것을 알 수 있으며, 역시 멜라닌 생성 저해도는 콜라겐 발효액의 농도에 따라 증가함을 알 수 있다.

이상의 설명은 본 발명의 기술사상을 예시적으로 설명한 것에 불과한 것으로서, 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자라면 본 발명의 본질적인 특성에서 벗어나지 않는 범위에서 다양한 수정 및 변형이 가능할 것이다. 따라서, 본 발명에 개시된 실시예들은 본 발명의 기술 사상을 한정하기 위한 것이 아니라 설명하기 위한 것이고, 이러한 실시예에 의하여 본 발명의 기술 사상의 범위가 한정되는 것은 아니다. 본 발명의 보호 범위는 아래의 청구범위에 의하여 해석되어야 하며, 그와 동등한 범위 내에 있는 모든 기술 사상은 본 발명의 권리범위에 포함되는 것으로 해석되어야 할 것이다.

Claims

콜라겐을 효모 또는 바실러스균으로 발효하여 얻는 것을 특징으로 하는 콜라겐 천연 발효액을 포함하는 화장료 조성물
제1항에 있어서,
상기 효모균은 사카로마이세스 세레비시애(Saccharomyces cerevisiae)인 것을 특징으로 하는 콜라겐 천연 발효액을 포함하는 화장료 조성물
제1항에 있어서,
상기 바실러스균은 바실러스 서브틸리스, 바실러스 푸밀리스, 바실러스 리케니포미스, 바실러스 메가테리움, 바실러스 폴리퍼멘티커스, 바실러스 메센테리커스 및 이들의 혼합물로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 콜라겐 천연 발효액을 포함하는 화장료 조성물
제1항에 있어서,
상기 발효액은 화장료 조성물 총 중량에 대하여 0.1 내지 50.0%(w/w)로 함유되는 것을 특징으로 하는 콜라겐 천연 발효액을 포함하는 화장료 조성물
제1항에 있어서,
상기 화장료 조성물은 용액, 오일, 왁스, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누 또는 스프레이로 구성된 군으로부터 선택되는 제형을 갖는 것을 특징으로 하는 콜라겐 천연 발효액을 포함하는 화장료 조성물
콜라겐 분말을 제조하는 단계; 상기 제조된 콜라겐 분말을 정제수에 희석한 배양액에 효모 또는 바실러스균을 접종하여 발효시켜 발효액을 얻는 단계; 상기 얻어진 발효액을 여과하는 단계;를 포함하여 구성되는 것을 특징으로 하는 콜라겐 천연 발효액을 포함하는 화장료 조성물 제조방법
제6항에 있어서,
상기 발효액을 얻는 단계에서 사용되는 콜라겐 분말은 총 배양액 1L를 기준으로 1 내지 50g의 양으로 사용하며, 사용되는 효모 또는 바실러스균은 총 배양액 1L 기준으로 1 X 10⁴내지 1 X 10⁵세포수의 양으로 접종하는 것을 특징으로 하는 콜라겐 천연 발효액을 포함하는 화장료 조성물 제조방법