KR101768026B1 - 노니 발효액을 유효성분으로 함유하는 피부 주름 개선용 화장료 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 노니(Morinda citrifolia)를 효모(Saccharomyces cerevisiae), 유산균(Lactobacillus) 또는 바실러스균(Bacillus sp)등의 미생물과 함께 배양하는 방법으로 제조한 노니 발효액을 포함하는 피부 화장료 조성물 및 화장방법에 관한 것이다. 본 발명에 따른 노니 발효액은 진피 매트릭스를 구성하는 단백질인 콜라겐의 합성을 증진시키고 피부 주름 및 피부 탄력을 효과적으로 개선하여 피부 주름 개선에 유용하게 사용될 수 있다.

Description

노니 발효액을 유효성분으로 함유하는 피부 주름 개선용 화장료 조성물{Cosmetic Composition for Improving Skin Wrinkle Comprising the Fermented Extract of Morinda citrifolia as Active Ingredient}

본 발명은 노니 발효액을 포함하는 화장료 조성물에 관한 것으로서, 보다 상세하게는 노니를 효모균, 유산균 및/또는 바실러스균으로 배양하여 얻은 노니 발효액을 포함하는 피부 주름 개선용 화장료 조성물에 관한 것이다.

피부의 1차적 기능은 온도, 습도 및 자외선 등과 같은 외부 자극으로부터 인체를 보호하는 기능이다. 이러한 피부는 시간이 지날수록 노화가 진행되는데, 피부노화는 내인성 노화(intrinsic aging)와 광노화(photoaging) 두 가지로 나눌 수 있다. 외부로부터 강한 자외선, 스트레스 및 영양결핍 등과 같은 자극을 받으며 노화가 진행되면서 피부는 콜라겐, 엘라스틴 등 매트릭스 성분들이 분해되거나 생성이 감소되면서 피부 탄력이 떨어지게 되고 각질화 현상 등이 발생하게 된다.

피부의 구조 중에서 진피층에 존재하는 교원섬유(collagen)와 탄력섬유(elastin)는 주요 단백질로서 피부의 탄력을 주관한다. 교원섬유의 생합성은 피부의 내/외적인 영향을 받는데, 내적으로는 자연노화(에스트로겐의 감소)로 인해 세포 활성의 감소가 발생하여 세포 매트릭스의 생성이 떨어져 매트릭스의 견고성이 떨어지게 됨으로써 주름이 생성되게 된다. 외적인 요인으로는 자외선의 과량 조사 및 스트레스 등으로 인해 생성된 활성 산소(자유라디칼)가 단백질의 -SH기와 반응하여 효소의 활성을 저해시키거나, 콜라겐, 엘라스틴 등을 분해시키는 효소(Matrix Metalloproteinases : MMPS)인 콜라게나아제의 발현을 증가시켜 피부의 주름 및 탄력을 감소시키는 노화현상을 유발한다. 특히 자외선 등의 외부 자극에 의해 생성이 촉진되는 콜라겐 분해 효소는 광노화에 의해 발생하는 주름 생성의 가장 근본적인 원인 효소라 할 수 있다.

이 효소의 활성을 억제하는 방법으로는 다음과 같은 것이 있다. 먼저 자외선을 차단하여 줌으로써 근본적으로 효소의 생합성을 억제하는 방법이 있으며, 다음으로는 유전자 발현을 조절해 줌으로써 효소의 생성을 억제하는 방법이 있다. 또한 이미 생성된 효소의 활성을 억제하는 방법이 있다.

이러한 노화 현상은 시간이 지남에 따라 자연스럽게 일어나는 현상으로 현재 다양한 방법을 통해 노화 현상이 일어나는 것을 더디게 하거나 예방할 수 있으며 대부분의 화장품이 이러한 노화현상을 예방하는데 중점을 두고 있다.

한편, 최근에는 많은 화장품 회사들이 피부 유효 성분을 개발하기 위해 ASKG은 노력을 하고 있으며, 발효를 통해 얻은 유효성분을 제품에 적용하기도 한다. 예를 들면, 청국장 및 낫도(natto)라는 대표적인 발효 식품에 이용되는 고초균에 의한 발효 산물을 이용하여 생산한 발효액을 이용하여 화장료 조성물을 제공하는 경우가 있다. 이러한 발효액은 미생물에 의해 자극성분들이 분해되거나 다른 물질로 전환됨으로써 피부 자극이 저하되는 장점이 있으며, 미생물에 의한 발효 산물들 또한 화장료 조성물이 종종 이용되고 있는 실정이다.

이에, 본 발명자들은 피부노화를 억제시키거나 진행 속도를 완화시키기 위해 천연 식물성분들에 대한 다양한 피부 생리활성 연구를 수행한 결과, 천연 식물 추출물 중에서 노니를 효모균, 유산균 및/또는 바실러스균으로 배양하여 얻은 노니 발효액을 피부에 적용할 경우 섬유아세포의 콜라겐 합성을 증진시키고 인터그린 발현을 증진시킴으로써 피부주름 및 피부탄력을 개선하는데 탁월한 효과가 있으며, 이를 함유하는 화장료의 제형 안정성이 뛰어나고 피부자극도 유발하지 않음을 확인함으로써 본 발명을 완성하게 되었다.

따라서, 상기와 같은 본 발명의 목적은 노니를 미생물에 의해 발효시켜 얻은 노니 발효액을 유효성분으로 함유하는 피부 주름 개선용 화장료 조성물에 의해 달성된다

또한, 바람직하게는 상기 미생물은 효모균, 유산균, 바실러스균 및 이들의 혼합물로 이루어진 군에서 선택될 수 있다.

또한, 바람직하게는 상기 효모균은 사카로마이세스 세레비시애(Saccaromyces cerevisiae)일 수 있다.

또한, 바람직하게는 상기 유산균은 락토바실러스, 스트렙토코커스, 비피도박테리움, 류코노스톡, 페디오코커스, 락토코커스 및 이들의 혼합물로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있고, 상기 바실러스균은 바실러스 서브틸리스, 바실러스 푸밀리스, 바실러스 리케니포미스, 바실러스 메가테리움, 바실러스 폴리페멘티커스, 바실러스 메센테리커스 및 이들의 혼합물로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다.

또한, 바람직하게는 상기 노니 발효액은 상기 화장료 조성물의 전체 중량에 대하여 0.0001 ~ 15.0 중량% 함유되는 것을 특징으로 한다.

또한, 바람직하게는 상기 노니 발효액은 단백질 합성을 촉진하고, 콜라겐 합성을 촉진하며, 주름 개선 효과 및 탄력 개선 효과를 가지는 것을 특징으로 한다.

또한, 바람직하게는 상기 화장료 조성물은 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 클렌징, 오일, 분말파운데이션, 유탁액파운데이션, 왁스파운데이션, 팩, 마사지크림 및 스프레이로 구성된 군으로부터 선택되는 제형을 갖는 것을 특징으로 한다.

본 발명은 노니 발효액을 포함하는 피부 주름 개선용 화장료 조성물에 관한 것으로, 본 발명의 화장료 조성물에 포함된 유효성분인 노니 발효액은 노니를 효모균, 유산균 및/또는 바실러스균으로 배양하여 수득한 발효액으로서 담백질 합성 촉진 및 콜라겐 합성 촉진 효과가 뛰어나며, 본 발명의 노니 발효액을 함유하는 화장료 조성물은 피부 주름 개선 효과가 우수하다.

본 발명은 노니 발효액을 포함하는 피부 주름 개선용 화장료 조성물을 제공한다.

본 발명의 조성물에서 유효성분으로 이용되는 노니 발효액은 노니를 효모균, 유산균 또는 바실러스균으로 배양하여 얻은 발효추출물을 의미한다

노니(Morinda fitrifolia)는 쌍떡잎식물 용담목 꼭두서니과의 상록관목으로써, 이름은 하와이어에서 유래되었다. 높이 3 ~ 12m로 크기가 다양하고 잎은 달걀 모양으로 길이 30cm, 너비 15cm이다. 꽃은 작고 흰색인데, 무리를 이루어 잎겨드랑이에서 나오며 주로 여름에서 가을까지 여러 번 핀다. 열매는 크기 약 10cm로 감자처럼 생겼으며 표면이 울퉁불퉁하고 패인 자국이 있다, 열매에는 섬유질과 즙이 많이 포함되어 있으며 특히 열매가 익으면 황백색의 껍질이 얇아져 투명한 것처럼 보인다.

이러한 노니는 인도네시아 모로카 제도 원산의 약용식물로서, 약 6000여년전부터 열매 및 잎은 식용이나 약용으로 이용되고 뿌리 및 줄기는 염색에 이용되었으며, 약 2000년 전에 해양민족과 함께 태평양 연안으로 전파되었다. 인도네시아에서는 멘크드, 파체, 디바 등으로 불리며 만병에 효과가 있는 약으로서 지금도 쟈무라는 전통치료약으로 이용되고 있다. 실제로 안트라퀴논, 세로토닌 등의 성분이 들어 있어 소화작용을 돕고 통증을 줄여주며 고혈압과 암 등에도 효과가 있는 것으로 밝혀졌다.

본 발명의 노니 발효액은 노니의 다양한 기관 또는 부분(예: 잎, 꽃, 열매, 줄기, 뿌리, 가지 및 껍질 등)으로부터 얻은 것을 의미하고 바람직하게는 노니의 열매로부터 얻은 것을 의미한다.

한편, 본 발명의 노니를 발효시키는데 사용되는 효모균은 진핵미생물(핵과 세포질이 핵막에 의하여 나누어져 있는 생물)에 속하며 세포벽, 세포막, 핵, 사립체, 과립 등 세포 소기관을 갖추고 있다. 성의 구별이 없는 이들은 주로 budding(출아법)으로 번식하는데, 분리된 많은 효모균들 중에는 발효능이 없는 것, budding 대신 분열(fission) 혹은 bud-fission 방법으로 증식하는 것, 자낭포자(ascospore)가 아닌 사출포자(ballistospore)를 형성하거나 포자(spore)형성이 관찰되지 않는 것 등 다양한 그룹의 효모도 존재한다. 크기는 보통 5-10㎛ x 5-12㎛로 세균의 5-10배 크기이고, pH 4.5~5.5나 1~10에서도 생존한다. pH 1에서 12시간 생존하는 효모는 박테리아보다 산에 강하므로 배지의 pH를 3.5~3.8 정도로 맞추면 박테리아의 오염을 어느 정도 억제할 수 있다.

효모는 균종에 따라서 조금씩 차이가 있으나 대부분 20~25℃에서 잘 자란다. 보통은 50℃이상에서는 사멸한다고 하지만 그 온도 이상에서 합성이 되지 않는 성장요소를 배지에 직접 첨가해 줌으로써 어느 정도는 극복이 가능하다. 사카로마이세스 세레비시애(Saccharomyces cerevisiae)의 경우 40℃이상에서 사멸하지만 배지에 올레산(oleic acid)과 에르고스테롤(ergosterol)을 첨가해 줌으로써 이를 방지할 수 있다. 효모균 자체는 단세포 식물로서 단백질과 미량광물질을 다량 함유하고 있다. 본 발명의 노니를 발효시키는데 사용하기에 가장 바람직한 효모균은 사카로마이세스 세레비시애이다.

또한 본 발명의 노니를 발효시키는데 사용되는 유산균은 인체에 유익한 미생물의 일종으로서, 포도당 또는 유당과 같은 탄수화물을 분해하여 유산(젖산)이나 초산과 같은 유기산을 생성하는 균이다. 유산균이 당으로부터 유산을 만드는 것을 유산균 발효라 한다. 본 발명에서 사용될 수 있는 유산균은 바람직하게는 락토바실러스, 스트렙토코커스, 비피도 박테리움, 류코노스톡, 페디오 코커스, 락토 코커스 및 이들의 혼합물을 포함하며, 더욱 바람직하게는 락토바실러스(Lactobacillus)이며, 가자 바람직하게는 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum)이다.

또한 본 발명의 노니를 발효시키는데 사용되는 바실러스(Bacillus)균은 포자 형성균으로, 토양이나 물속에 서식하며 대부분 유기물 분해와 관련되어 있다. 본 발명에서 사용될 수 있는 바실러스균은 바람직하게는 바실러스 서브틸리스, 바실러스 푸밀러스, 바실러스 리케니포미스, 바실러스 메가테리움, 바실러스 폴리퍼멘티커스, 바실러스 메센테리커스 및 이들의 혼합물을 포함하며, 가장 바람직하게는 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis)로서 이 균은 고초균으로도 알려져 있으며, 포도당과 같은 다양한 당류, 전 분 등을 혐기적으로 대사하여, 메주나 청국장 같은 발효 식품 제조에 이용되기도 하는 유기물 분해 미생물이다.

본 발명의 노니 발효액은 다음의 단계로 제조될 수 있다.

a) 노니 열매를 분말로 만드는 단계;

b) 상기 단계 a)에서 제조된 노니 열매 분말을 정제수에 희석한 후 효모균, 유산균, 바실러스균 또는 이의 혼합물을 이용하여 발효시키는 단계;

c) 상기 단계 b)의 발효에 의해 얻은 발효액을 여과하여 저온 숙성하고, 다시 여과하여 노니 발효액을 제조하는 단계.

상기 노니 발효액의 제조 단계에서, 상기 단계 a)의 노니 열매의 분말화는 100 내지 500 메쉬 크기 이하로 제조될 수 있으며, 이에 한정될 필요는 없다.

또한 상기 단계 b)의 발효는 노니 분말과 정제수를 1:10(중량비)으로 혼합한 후 121℃에서 멸균시킨 후 유산균(Lactobacillus sp), 효모균(Saccharomyces sp) 및/또는 바실러스균(Bacillus sp)을 접종하여 배양함으로써 달성된다. 발효 단계에서 사용된 노니 열매 분말은 총 배양액 1L를 기준으로, 1 내지 50g의 양으로 사용하는 것이 바람직하다.

또한, 발효단계에 사용된 효모 또는 유산균 및 바실러스 균은 총 배양액 1L 기준으로 1 × 10⁴ 내지 1 × 10⁵ 세포수의 양으로 접종되는 것이 바람직하며, 각 균주의 성상에 따라 통상적인 조건 및 호기적 또는 통상 혐기(anaerobic) 조건에서 배양될 수 있다. 또한, 발효균의 배양을 더욱 활성화시키기 위하여 추가적인 탄소원 및/또는 pH 조절제가 첨가될 수도 있다. 이때 적합한 배양조건은 30 ~ 37℃, pH 5 ~ 7의 호기 또는 통상 혐기 조건에서 바람직하게는 약 1 내지 15일간 배양되며, 더욱 바람직하게는 1 내지 7일간 배양된다.

상기 단계 c)는 단계 b)에서 얻은 발효액을 1차 여과한 후 그 여과액을 저온숙성하는 단계로서, 이때 여과는 0.25 내지 0.45㎛ 크기의 여과막을 여과하여 여분의 노니 분말 알갱이 및 발효균을 제거할 수 있다. 1차 여과막으로 분리된 여과액은 저온 숙성하여 안정화시킬 수 있으며, 1차 여과막에 비해 더 세밀한 여과막으로 2차 여과한 후 농축하여 보관할 수 있으며, 이 농축물을 적절히 희석하여 사용한다. 이때 상기 여과-숙성-여과-농축의 과정은 보다 유효한 효과가 있는 노니 발효액을 얻기 위한 공정단계로서, 저온 숙성과정은 0-4℃의 온도 범위에서 5 내지 10일 동안 이루어지는 것이 바람직하며, 잔여 균의 확실한 제거를 위하여 2차 여과막의 크기는 0.25㎛ 이하인 것이 바람직하다.

보다 바람직한 구현예에 따르면, 노니 분말을 300 메쉬 크기 이하로 분말화한 뒤 배양액에 10 g/L 첨가하고 효모균, 유산균, 바실러스균 또는 이의 혼합물을 50,000 cuf/L로 첨가하여 각각 효모는 30℃, 유산균은 37℃, 바실러스균은 37℃, 혼합균의 경우 경우에 따라 30℃ 및 37℃에서 선택하여, pH 5-7, 바람직하게는 약 pH 5.5로 호기적 또는 통성 혐기적인 조건으로 발효조에서 약 1 내지 7일간 배양하여 발효시킨다. 배양 후 상기 발효액은 0.45㎛의 여과막을 이용하여 1차 여과한 다음 이 여과액에 10일간 저온 숙성시킨 후 0.25㎛ 막으로 2차 여과하여 농축한 뒤 본 발명의 노니 발효액을 제조한다. 사용하기 전에 최종 고형분의 농도를 10g/L가 되게 유지한다.

이렇게 제조된 본 발명의 노니 발효액은 피부 진피의 매트릭스를 구성하는 단백질인 콜라겐의 합성을 촉진하는 효과가 있으며, 피부 주름 및 피부 탄력을 개선한다.

본 발명의 가장 바람직한 구현예에 따르면, 본 발명의 화장료 조성물에서 유효 성분으로서의 노니 발효액의 함량은 화장료 조성물의 총 중량에 대하여 0.0001~15 중량%이며, 보다 바람직하게는 0.001~7.0 중량%이다. 만일, 함량이 0.0001 중량% 미만인 경우에는 그 효과가 나타나기 어렵고, 15 중량%를 초과하는 경우에는 함유량 증가에 대한 피부 개선 효과 증대 정도가 미미하고 피부 자극을 유발할 가능성이 높으며, 제형상의 안전 및 안정성에 문제가 있으며 경제적이지도 못하다.

본 발명의 화장료 조성물에 포함되는 성분은 유효 성분으로서 상기 유효 성분 이외에 화장료 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들을 포함할 수 있으며, 예컨대 항산화제, 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제, 그리고 담체를 포함한다.

본 발명의 화장료 조성물은 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 예를 들어, 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클렌징, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션, 팩, 마사지크림 및 스프레이 등으로 제형화될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 보다 상세하게는, 유연 화장수, 영양 화장수, 영양 크림, 마사지 크림, 에센스, 아이 크림, 클렌징 크림, 클렌징 폼, 클렌징 워터, 팩, 스프레이 또는 파우더의 제형으로 제조될 수 있다.

본 발명의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물성유, 식물성유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용해화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸글리콜, 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 있다.

본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소 결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.

본 발명의 제형이 계면활성제 함유 클렌징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 라놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물이 비누, 계면활성제 함유 클렌징 제형 또는 계면활성제 비함유 클렌징 제형일 경우, 피부에 도포한 후 닦아내거나 떼거나 물로 씻어낼 수도 있다. 구체적인 예로서, 상기 비누는 액상비누, 가루비누, 고형비누 및 오일비누이며, 상기 계면활성제 함유 클렌징 제형은 클렌징 폼, 클렌징 워터, 클렌징 수건 및 클렌징 팩이며, 상기 계면활성제 비 함유 클렌징 제형은 클렌징크림, 클렌징 로션, 클렌징 워터 및 클렌징 겔이며, 이에 한정되는 것은 아니다.

한편, 본 발명의 화장 방법은 본 발명의 화장료 조성물을 이용하는 모든 화장 방법을 일컫는다. 즉, 화장료 조성물을 이용하는 당업계에 공지된 모든 방법이 본 발명의 화장 방법에 속한다.

본 발명의 화장료 조성물은 단독 또는 중복하여 사용하거나, 본 발명 이외의 다른 화장료 조성물과 중복하여 사용할 수 있다. 또한 본 발명에 따른 화장료 조성물은 통상적인 사용방법에 따라 사용될 수 있으며, 사용자의 피부 상태 또는 취향에 따라 그 사용횟수를 달리할 수 있다.

본 발명은 노니 발효액을 포함하는 화장료 조성물은 인간의 피부에 도포하는 화장방법을 수행하면 진피의 매트릭스를 구성하는 단백질, 특히 콜라겐의 합성을 증진하여 피부 주름을 개선하는 효과를 얻을 수 있다.

이하, 실시예 및 실험예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로, 본 발명의 요지에 따라 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되지 않는다는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에 있어서 자명할 것이다.

제조예 1 : 효모 균주를 이용한 노니 효모균 발효액 제조

정제수로 세척하고 건조시킨 노니열매를 분말화한 후 300 메시(mesh) 시브를 이용하여 미세하게 만들었다. 효모 배양액(Potato Dextrose Broth, 아큐메디아, 미합중국)에 노니열매 분말을 10g/L 비율로 첨가한 다음, 121℃에서 고압멸균시킨 후 효모균을 접종하였다. 이때 효모균은 사카로마이세스 세레비시애(Saccharomyces cerevisiae)를 사용하였으며, 배양액당 50,000 cfu/L로 접종하였다. 배양은 5L 발효조에서 30℃, pH 5 내지 pH 7 조건에서 7일간 배양하였다. 그런 다음 상기 배양액을 원심분리하여 배양균을 1차 제거 한 후 0.25μM 여과지를 이용하여 여과하였다. 이렇게 얻은 여과액을 다시 4℃의 저온 창고에서 약 10일간 숙성시킨 후 이 여과 숙성액을 다시 0.25μM의 여과지로 2차 여과하여 본 발명에 사용하였다. 이렇게 제조한 발효액은 ‘노니 효모균 발효액’이라 통칭하기로 하였다.

제조예 2 : 락토바실러스 속 균주를 이용한 노니 유산균 발효액 제조

정제수로 세척하고 건조한 노니열매를 분말한 후 300 메시 시브를 이용하여 미세하게 만들었다. 상기 노니열매 분말은 탄소원으로 글루코스, pH 조절제로 디포타슘 포스페이트(Dipotassium phosphate)를 첨가한 유산균 배양액에 10g/L 비율로 첨가한 다음, 121℃에서 고압멸균 시킨 후 유산균을 접종하였다. 이때 유산균으로는 비피도 박테리움을 사용하였으며, 배양액 당 50,000 cfu/L로 접종한 다음, 5L 발효조에서 37℃, pH 5 내지 pH 7조건으로 7일간 배양하였다. 상기 배양 후의 배양액은 원심분리하여 배양균을 1차 제거 한 후 0.25μM 여과지를 이용하여 여과하였다. 이렇게 얻은 여과액을 다시 4℃의 저온 창고에서 약 10일간 숙성시킨 후 이 여과 숙성액을 다시 0.25μM의 여과지를 이용하여 2차 여과하여 본 발명에 사용하였다. 이렇게 제조한 발효액을 ‘노니 유산균 발효액’이라 통칭하기로 하였다.

제조예 3 : 바실러스 속 균주를 이용한 노니 바실러스균 발효액 제조

정제수로 세척하고 건조한 노니열매를 분말한 후 300 메시 시브를 이용하여 미세하게 만들었다. 상기 노니열매 분말은 바실러스균 배양액(LB broth, Difco)에 10g/L 비율로 첨가한 다음, 121℃에서 고압멸균 시킨 후 바실러스균을 접종하였다. 이때 바실러스균은 바실러스 서브틸리스(초고균; Bacillus subtilis)를 사용하였으며, 배양액 당 50,000 cfu/L로 접종하였다. 배양은 5L 발효조를 이용하여 37℃, pH 5.5의 조건 하에서 3일간 배양하였다. 배양 후 배양액을 원심분리하여 배양균을 1차 제거 한 후 0.25μM 여과지를 이용하여 여과하였으며, 이렇게 얻은 여과액을 다시 4℃의 저온 창고에서 약 10일간 숙성시킨 후 이 여과 숙성액을 다시 0.25μM의 여과지를 이용하여 2차 여과하여 본 발명에 사용하였다. 이렇게 제조한 발효액을 ‘노니 바실러스균 발효액’이라 통칭하기로 하였다.

비교제조예 1 : 노니 추출물의 제조

정제수로 세척하고 건조한 노니 열매 100g을 하쇄한 후, 70% 에탄올 1.2L에 넣고 4-40℃에서 5일간 추출한 후 300 메시 여과포로 여과하고, 저온 3-5℃에서 5일간 방치하여 숙성시킨 후 번 여과지로 여과했다. 이 여액을 65℃에서 회전 감압 증발기로 건조하여, 건조 중량 24.2g의 노니 추출물을 얻었다.

실험예 1 : 노니 발효액의 단백질 합성 촉진 효과

인간 정상 섬유아세포(한국 세포주 은행)를 48-웰 마이크로 플레이트의 각 웰에 1 x 10⁶ 세포가 되도록 접종하고, DMEM 배지에서 37℃에서 24시간 동안 배양하였다. 그 다음, 상기 배지를 버린 후 제조예 1의 노니 효모균 발효액을 최종 농도가 하기 표 1과 같이 되도록 무혈청 DMEM 배지를 혼합하여 제조한 배지(실험군), 제조예 2의 노니 유산균 발효액을 최종 농도가 하기 표 1과 같이 되도록 무혈청 DMEM 배지를 혼합하여 제조한 배지(실험군), 제조예 3의 노니 바실러스 발효액을 최종 농도가 하기 표 1과 같이 되도록 무혈청 DMEM 배지를 혼합하여 제조한 배지(실험군), 비교제조예의 노니 추출물을 최종 농도가 하기 표 1과 같이 되도록 무혈청 DMEM 배지를 혼합하여 제조한 배지(실험군) 및 대조군으로 노니 추출물을 포함하지 않은 무혈청 DMEM 배지로 교체하여 24시간 동안 추가로 배양하였다. 배양 후, 각 웰의 상층액을 모아 단백질 분석 키트(Proteinassay kit, 바이오랜드사, 미합중국)를 이용하여 새로 합성된 단백질의 양을 측정한 뒤 대조군 대비 단백질 생성량(대조군 대비 %)을 계산하였다. 그 결과를 하기 표 1에 나타내었다.

농도(㎍/㎖)	제조예 1 단백질생성량 (대조군 대비%)	제조예 2 단백질생성량 (대조군 대비%)	제조예 3 단백질생성량 (대조군 대비%)	비교제조예 1 단백질생성량 (대조군 대비%)
대조군	100.0
100	147.2	144.8	145.5	125.3
200	160.7	159.3	159.1	136.6
500	194.3	192.4	192.7	166.2

상기 표 1에 나타낸 바와 같이, 본 발명의 노니 효모균 발효액(제조예 1), 노니 유산균 발효액(제조예 2), 노니 바실러스균 발효액(제조예 3)은 노니 추출물(비교제조예)에 비하여 섬유아세포의 단백질 합성을 촉진함을 알 수 있었다.

실험예 2 : 노니 발효액의 콜라겐 합성 효과

인간 정상 상피 세포인 섬유아세포를 48-웰 마이크로 플레이트의 각 웰에 1 x 10⁶ 세포가 되도록 접종하고, DMEM 배지에서 37℃에서 24시간 동안 배양하였다. 이어서, 상기 배지를 버린 후 제조예 1의 노니 효모균 발효액의 최종농도를 0~1000ppm으로 하여 무혈청 DMEM 배지로 교체한 실험군, 제조예 2의 노니 유산균 발효액의 최종농도를 10~1000ppm으로 하여 무혈청 DMEM 배지로 교체한 실험군, 제조예 3의 노니 바실러스 발효액의 최종농도를 10~1000ppm으로 하여 무혈청 DMEM 배지로 교체한 실험군, 비교제조예의 노니 추출물의 최종농도를 10~1000ppm으로 하여 무혈청 DMEM 배지로 교체한 실험군 및 시료가 처리되지 않은 무혈청 DMEM 배지로 교체하여 24시간 동안 추가로 배양하였다.

배양 후, 각 웰의 상층액을 모아 콜라겐 키트(Takara, 일본)를 이용하여 프로콜라겐 (procollagen) 타입 I C-펩타이드 (PICP) 양을 측정하여 ng/㎖ 환산하였으며, 이에 의해 합성된 콜라겐 양을 측정하였다. 그 결과를 대조군 대비 증가량(타입 I 콜라겐의 상대량(%))으로 계산하여 하기 표 2에 나타내었다.

처리농도	제조예 1 대조군에 대한 타입I 콜라겐의 상태량(%)	제조예 2 대조군에 대한 타입I 콜라겐의 상태량(%)	제조예 3 대조군에 대한 타입I 콜라겐의 상태량(%)	비교제조예 1 단백질생성량 (대조군 대비%)
무처리(대조군)	100.0	100.0	100.0	100.0
10ng/㎖ TGF-β1	253.2	253.2	253.2	253.2
10㎍/㎖	135.3	134.5	134.7	114.8
50㎍/㎖	168.4	166.8	167.1	143.5
200㎍/㎖	296.9	294.4	293.8	262.6
1000㎍/㎖	254.3	253.6	252.9	220.7

상기 표 2에 나타낸 바와 같이, 본 발명의 노니 효모균 발효액(제조예 1), 노니 유산균 발효액(제조예 2), 노니 바실러스균 발효액(제조예 3)은 노니 추출물(비교제조예 1)에 비하여 섬유아세포의 콜라겐 합성을 촉진함을 알 수 있었다.

실시예 및 비교예

상기 제조예 1,2,3에서 제조한 노니 발효액을 함유한 크림 제형을 다음 표 3의 실시예 1,2,3과 같이 제조하였다. 이때 비교예 1로서 노니 추출물을 함유한 제형과 대조군으로서 유효성분을 함유하지 않는 제형을 제조하였다.

성분	실시예 1	실시예2	실시예3	비교예1	대조군
	함량(중량%)
노니 효모균 발효액 노니 유산균 발효액 노니 바실러스균 발효액 노니 추출물 친유형 모노스테아린산글리세린 세테아릴 알코올 스테아린산 밀납 폴리소르베이트60 소르비탄 스테아레이트 경화식물유 스쿠알란 광물유 트리옥타노인 디메치콘 소듐마그네슘실리케이트 글리세린 베타인 트리에탄올아민 소듐하이알루로네이트 방부제, 향, 색소 증류수	5.0 - - - 2.0 2.2 1.5 1.0 1.5 0.6 1.0 3.0 5.0 5.0 1.0 0.1 5.0 3.0 1.0 4.0 미량 잔량	- 5.0 - - 2.0 2.2 1.5 1.0 1.5 0.6 1.0 3.0 5.0 5.0 1.0 0.1 5.0 3.0 1.0 4.0 미량 잔량	- - 5.0 - 2.0 2.2 1.5 1.0 1.5 0.6 1.0 3.0 5.0 5.0 1.0 0.1 5.0 3.0 1.0 4.0 미량 잔량	- - - 5.0 2.0 2.2 1.5 1.0 1.5 0.6 1.0 3.0 5.0 5.0 1.0 0.1 5.0 3.0 1.0 4.0 미량 잔량	- - - - 2.0 2.2 1.5 1.0 1.5 0.6 1.0 3.0 5.0 5.0 1.0 0.1 5.0 3.0 1.0 4.0 미량 잔량
합계	100	100	100	100	100

실험예 3 : 피부 주름 개선 효과

본 발명의 노니 발효액을 함유하는 화장료의 주름 개선 효과를 알아보기 위하여 다음과 같이 실험을 실시하였으며 임상실험은 각 화장료의 실제 사용 테스트를 통하여 평가하였다.

실험을 위해 노니 효모균 발효액을 함유하는 화장료(실시예 1), 노니 유산균 발효액을 함유하는 화장료(실시예 2), 노니 바실러스균 발효액을 함유하는 화장료(실시예 3)를 상기 표 3의 처방으로 각각 제조하였다. 이때, 대조군으로 노니 발효액을 함유하지 않는 화장료(대조군)를 사용하였고, 노니 추출물을 함유하는 화장료(비교예 1)를 비교군으로 설정하여 주름 개선 효과 실험을 실시하였다.

30~50대의 여성 60명을 선정한 후 무작위로 3개 군으로 나누어 첫 번째군에는 실시예1과 대조예 화장료를 20명의 피검자의 얼굴 양쪽 면에 각각 매일 아침 저녁 2회씩 세안 후 적당량을 눈가를 중심으로 8주간 연속적으로 바르게 하였으며, 두 번째군에는 실시예 2와 비교예 화장료를, 나머지군에는 실시예3의 화장료를 한쪽얼굴에 동일한 방법으로 바르도록 하였다. 각 피검자의 주름 개선 효과를 육안 관찰을 통하여 평가한 뒤 그 결과를 하기 표 4에 나타내었다.

주름 개선 효과 (육안평가)

	주름 개선 효과			유효율(%)
	우수	약간	없음
실시예 1	10	7	3	85.0
실시예 2	9	9	2	90.0
실시예 3	8	9	3	85.0
비교예 1	8	8	4	80.0
대조군	1	3	16	20.0

상기 표 4에 나타낸 바와 같이, 본 발명의 노니 발효액을 함유하는 화장료(실시예 1 내지 실시예 3)는 노니 추출물을 함유하는 화장료(비교예 1)나, 노니 발효액을 함유하지 않는 화장료(대조군)에 비해 주름 개선 효과가 높음을 알 수 있었다.

실험예 4 : 피부 탄력 개선 효과

30~50대의 여성 60명을 선정한 후 무작위로 3개군으로 나누어 첫번째군에는 실시예1과 대조예 화장료를 20명의 피검자의 얼굴 양쪽 면에 각각 매일 아침 저녁 2회씩 세안 후 적당량을 눈가를 중심으로 4주간 연속적으로 바르게 하였으며, 두 번째군에는 실시예 2와 비교예 화장료를, 나머지군에는 실시예3의 화장료를 한쪽얼굴에 동일한 방법으로 바르도록 하였다. 그 후 피부탄력측정기 (Cutometer SEM 575, C+KElectronic Co., 독일연방국)를 이용하여 각 군의 피부 탄력을 측정하고 그 결과를 하기 표 5에 나타내었다.

피부탄력 증진효과

구분	평균			증가율%
	0주	2주	4주	2주	4주
제조예 1	0.6902	0.7493	0.7708	8.56	11.68
제조예 2	0.7235	0.7824	0.8065	8.14	11.47
제조예 3	0.7023	0.7563	0.7784	7.69	10.84
비교예 1	0.6877	0.7331	0.7511	6.61	9.22
대조군	0.7129	0.7315	0.7427	2.61	4.18

상기 표 5에 나타낸 바와 같이, 본 발명의 노니 발효액을 함유하는 화장료(실시예 1 내지 실시예 3)는 노니 추출물을 함유하는 화장료(비교예 1)나, 노니 발효액을 함유하지 않는 화장료(대조군)에 비해 탄력 증진 효과가 높음을 알 수 있었다.

본 발명을 적용하기에 적합한 화장료 조성물의 처방을 예를 들어 제시하기로 한다.

처방예 1 : 화장수

노니 발효액을 함유한 화장료 중 화장수의 처방예는 다음 표 6과 같다.

성분	함량(단위:중량%)
노니 발효액 글리세린 1,3-부틸렌글라이콜 피이지1500 알란토인 DL-판테놀 EDTA-2Na 벤조페논-9 소듐하이알루로네이트 에탄올 폴리소르베이트20 방부제, 향, 색소 증류수	5.0 6.0 3.0 1.0 0.1 0.3 0.02 0.04 5.0 10.0 0.2 미량 잔량
합계	100

처방예 2 : 로션

노니 발효액을 함유한 화장료 중 로션의 처방예는 다음 표 7과 같다.

성분	함량(단위:중량%)
노니 발효액 프로필렌글리콜 글리세린 트리에탄올아민 토코페릴아세테이트 유동 파라핀 스쿠알란 마카다미너트오일 폴리소르베이트 60 소르비탄세스퀴올레이트 카르복시비닐폴리머 방부제, 향, 색소 증류수	3.0 6.0 4.0 1.2 3.0 5.0 3.0 2.0 1.5 1.0 1.0 미량 잔량
합계	100

처방예 3 : 마사지크림

노니 발효액을 함유한 화장료 중 마사지크림의 처방예는 다음 표 8과 같다.

성분	함량(단위:중량%)
노니 발효액 친유형 모노스테아린산글리세린 세테아릴 알코올 스테아린산 폴리소르베이트60 소르비탄 스테아레이트 이소스테아릴이소스테아레이트 스쿠알란 광물유 디메치콘 하이드록시에칠셀룰로오스 글리세린 트리에탄올아민 방부제, 향, 색소 증류수	1.0 1.5 1.5 1.0 1.5 0.6 5.0 5.0 35.0 0.5 0.12 6.0 0.7 미량 잔량
합계	100

처방예 4 : 에센스

노니 발효액을 함유한 화장료 중 에센스의 처방예는 다음 표 9와 같다.

성분	함량(단위:중량%)
노니 발효액 글리세린 베타인 PEG 1500 알란토인 DL-판테놀 DETA-2Na 벤조페논-9 하이드록시에칠셀룰로오스 소듐하이알루로네이트 카르복시비닐폴리머 트리에탄올아민 옥틸도데칸올 옥틸도데세스-16 에탄올 방부제, 향, 색소 증류수	1.5 10.0 5.0 2.0 0.1 0.3 0.02 0.04 0.1 8.0 0.2 0.18 0.3 0.4 6.0 미량 잔량
합계	100

처방예 5 : 팩

노니 발효액을 함유한 화장료 중 팩의 처방예는 다음 표 10과 같다.

성분	함량(단위:중량%)
노니 발효액 폴리비닐알코올 셀룰로오스 검 글리세린 PEG 1500 사이크로데스트린 DL-판테놀 알란토인 글리시리진산모노암모늄 니코틴아마이드 에탄올 PEG 40 경화피마자유 방부제, 향, 색소 증류수	1.0 15.0 0.15 3.0 2.0 0.15 0.4 0.1 0.3 0.5 6.0 0.3 미량 잔량
합계	100

이상으로 본 발명의 특정한 부분을 상세히 기술하였는바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 이러한 구체적인 기술은 단지 바람직한 구현 예일 뿐이며, 이에 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백하다. 따라서 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항과 그의 등가물에 의하여 정의된다고 할 것이다.

Claims (6)

1. 노니를 사카로마이세스 세레비시애, 비피도박테리움 또는 바실러스 서브틸리스로 발효시켜 얻은 노니 발효액을 유효성분으로 함유하고, 상기 노니 발효액은 화장료 조성물 총 중량에 대하여 0.001-7.0 중량%인, 피부 주름 개선용 화장료 조성물.
   
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