WO2015173377A1 - Composition aqueuse comprenant au moins une proteine et un agent solubilisant, sa preparation et ses utilisations - Google Patents

Composition aqueuse comprenant au moins une proteine et un agent solubilisant, sa preparation et ses utilisations Download PDF

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WO2015173377A1
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solubilizing agent
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carbon atoms
composition
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Adocia
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Definitions

  • the present invention relates to an aqueous composition comprising one or more protein (s) and at least one particular solubilizing agent.
  • the invention also relates to the preparation of such a composition, and its uses in particular in the pharmaceutical and veterinary fields.
  • the invention finally relates to the use of particular compounds, in order to improve the solubilization of protein (s) in an aqueous composition.
  • the proteins may be poorly soluble in aqueous medium, or biological, and give rise to unsatisfactory solubility, and in particular to undesirable precipitation phenomena.
  • the solubility of a protein in water depends largely on its structure on the one hand, and the pH on the other hand. Indeed, depending on the pH, the protein may be in more or less ionized form, which is likely to vary its solubility in water.
  • the point at which the solubility of a protein in water is the lowest is the isoelectric point (pI) of this protein, i.e., the pH at which the overall charge of the protein is zero.
  • compositions comprising at least one protein are brought into contact with an aqueous medium, especially when the pH of this medium corresponds to the isoelectric point of the protein, there is a need to improve the solubility of this protein. This is particularly useful in the case of injection of the composition, especially subcutaneously.
  • a polymer chain can interact with different sites present on a protein principle but can also because of the length of the chain interact with several protein principles which can lead to a bridging phenomenon. This bridging phenomenon can for example lead to unwanted aggregation of proteins.
  • solubilizing agents of polymeric compounds is not always desirable, especially in the pharmaceutical field, since the removal of such compounds by the body can sometimes be long, or difficult.
  • the use of such polymeric compounds often has the effect of sometimes significantly increasing the viscosity of the aqueous composition, which can be particularly problematic especially in the case of solutions intended to be administered by injection, especially by injection subcutaneous.
  • the polymers have the disadvantage of not being easily traceable (by mass spectrometry for example) in biological media during pharmacokinetic or ADME experiments (administration, distribution, metabolism, elimination), and generally give a diffuse and noisy signal in mass spectrometry.
  • solubilizing agents can be expensive and / or require many synthetic steps, and possibly purification.
  • the present invention thus relates to a liquid composition
  • a liquid composition comprising, in an aqueous medium, one or more protein (s) and one or more agent (s) solubilizing (s), characterized in that said agent (s) (s) solubilizing agent (s) is (are) chosen from the group consisting of anionic compounds of non-saccharide structure, said structure of which contains at least one aromatic nucleus comprising at least 6 members (6 atoms) and at least one carboxylic acid group in salified form, which has in its acid form a molar mass of between 130 and 500 g / mol.
  • compositions according to the invention also relates to the use of said agent (s) solubilizer (s) to prepare compositions according to the invention.
  • It also relates to a method of solubilizing one or more protein (s) characterized in that at least one solubilizing agent selected from the group consisting of anionic compounds of non-saccharide structure, said structure contains at least one core aromatic compound comprising at least 6 members (6 atoms) and at least one carboxylic acid group in salified form, and which has in its acid form a molecular weight of between 130 and 500 g / mol, is added to an aqueous protein preparation to solubilize the protein.
  • at least one solubilizing agent selected from the group consisting of anionic compounds of non-saccharide structure said structure contains at least one core aromatic compound comprising at least 6 members (6 atoms) and at least one carboxylic acid group in salified form, and which has in its acid form a molecular weight of between 130 and 500 g / mol, is added to an aqueous protein preparation to solubilize the protein.
  • solubilizing agents interact with the proteins and increase particularly remarkably their solubilization in water, which allows the preparation of aqueous solutions containing proteins.
  • solutions can be clear, possibly including the isoelectric point, or "pi" of the considered proteins.
  • limpid devoid of any light scattering object, said objects resulting in a loss of recovery (measured by separation analytical techniques, for example electrophoretic or chromatographic, such as RP-HPLC) and / or causing an increase in intensities broadcast by DLS measurement.
  • the recovery by separative analytical techniques can be measured in the manner presented in the examples.
  • the scattered intensities can be measured as presented in the examples.
  • non-limpid is meant the presence of objects diffusing light and / or the presence of a macroscopic disorder evaluated in the eye. This can be measured by the loss of recovery by separative analytical techniques, said objects being separable either by centrifugation or by filtration. In the case of a non-clear liquid composition, the recovery by separation analytical techniques is less than 99% and / or the light intensity scattered at 173 ° and / or 12.8 ° increases more than 5%.
  • the considered proteins have a decrease in their maximum solubility at pl. This decrease in maximum solubility at pi can be measured using the methods presented in the examples.
  • the process according to the invention makes it possible to increase substantially the concentrations at which the proteins can be solubilized in water at their isoelectric point.
  • compositions obtained according to the invention are homogeneous with good solubilization of the protein active ingredients, and are stable over time.
  • solubilizing agents according to the invention are small compounds, which limits the increase in the viscosity of the aqueous composition.
  • the Applicant has demonstrated that it was not necessary to use compounds of polymeric structure, including saccharide, to improve the solubilization of proteins. Indeed, it was generally considered until now that polymeric structures were preferable, whereas small compounds might have a deficit of sites of interaction with protein active ingredients.
  • the present invention finds a particularly advantageous application in the pharmaceutical and veterinary fields since it provides solubilizing agents which allow the stabilization, administration and delivery of protein active principles in aqueous solution, by simple methods to be implemented. artwork.
  • solubilizing agents according to the invention may exhibit sufficiently rapid biodegradability and suitable for their use in the preparation of a broad category of pharmaceutical formulations, including drugs for chronic administration and / or high frequency. These compounds can also meet the constraints established by pharmaceutical regulations, especially in terms of stability under normal conditions of storage and storage, especially in solution.
  • the present invention also relates to the preparation of the composition above, and its use in the pharmaceutical or veterinary field.
  • Other objects, features, aspects and advantages of the invention will emerge even more clearly on reading the description and examples which follow.
  • the solubilizing agents employed in the invention are compounds of non-saccharide structure.
  • non-saccharide structure is meant that these compounds do not contain in their saccharide unit structure, whether in cyclic form or in open, reduced or oxidized form.
  • saccharide unit denotes pentoses, hexoses, uronic acids, and N-acetylhexosamines in cyclic form or in open, reduced or oxidized form.
  • anionic compound is meant a chemical compound containing only negative charges, and no positive charge. In particular, in the case where the compound comprises in its structure one or more nitrogen atoms, they do not carry a positive charge.
  • the solubilizing agents employed in the invention contain in their structure one or more aromatic ring (s) comprising at least 6 members, that is to say an aromatic ring or heterocycle comprising at least 6 chosen atoms. among carbon, nitrogen, sulfur or oxygen.
  • aromatic ring (s) may advantageously be chosen from optionally substituted benzene rings and optionally substituted indole rings, and preferably optionally substituted benzene rings.
  • the aromatic ring (s) may be substituted or unsubstituted.
  • the substituent (s) may be linear or branched, saturated or unsaturated, cyclic or non-cyclical. They may furthermore be condensed or polycyclic but must comprise at least one aromatic ring or heterocycle comprising at least 6 atoms chosen from carbon, nitrogen, sulfur or oxygen. . These rings comprising at least 6 atoms chosen from carbon, nitrogen, sulfur or oxygen are defined herein as aromatic rings comprising at least 6 members.
  • the substituent or substituents (t) (t) (wind) may in particular be chosen from -OH, the groups -ORi with Rj denoting an alkyl or hydroxyalkyl radical containing from 1 to 6 carbon atoms.
  • the aromatic nucleus is not substituted.
  • the solubilizing agents employed in the invention also comprise in their structure one or more carboxylic acid group (s), in salt form, that is to say one or more groups of structure:
  • M n + representing a cation, preferably a pharmaceutically acceptable cation
  • n is an integer of 1 or 2.
  • n + denotes Na or K + .
  • the solubilizing agents employed in the invention have a molar mass of between 130 and 500 g / mol.
  • This molar mass corresponds to the acid form of the solubilizing agent, that is to say when the group (s) carboxylic acid is (are all) in acid form:
  • the molar mass of the agent (s) solubilizing (s) is between 130 and 450 g / mol, and preferably between 130 and 400 g / mol.
  • the solubilizing agents employed in the invention are soluble in water.
  • water-soluble is meant that these agents have in water at a pH of 7 and at 25 ° C a minimum solubility of 50 mmol / L, preferably a minimum solubility of 100 mmol / L, and more preferably 250 mmol / L.
  • the one or more solubilizing agents employed in the invention corresponds to the following general formula (I):
  • Ar denotes an aromatic ring comprising at least 6 members
  • X denotes a linear or branched, saturated or unsaturated divalent radical whose main chain consists of 1 to 4 carbon atoms and optionally 1 or 2 heteroatoms chosen from nitrogen and oxygen atoms, said main chain being able to option to carry one or more substituents;
  • Y1 and Y2 denote, independently of one another: a hydrogen atom; an -OH group; a group -OR 1 with R 1 denoting an alkyl radical containing from 1 to 6 carbon atoms or a hydroxyalkyl radical containing from 1 to 6 carbon atoms; and preferably Y1 and Y2 denote, independently of one another, a hydrogen atom or an -OH group; and
  • M denotes a cation such as in particular Na ⁇ or K + .
  • Ar denotes a benzene ring or an indole ring.
  • Ar denotes a benzene ring.
  • solubilizing agent (s) have the following formula (Ia):
  • Ar denotes an indole nucleus.
  • solubilizing agent (s) preferably corresponds to the following formula (Ib):
  • the divalent radical X comprises a main chain, consisting of 1 to 4 carbon atoms and optionally 1 or 2 heteroatoms chosen from nitrogen and oxygen.
  • the carbon atoms constituting the main chain can be independently of each other saturated or unsaturated.
  • the term "main chain” denotes a chain of atoms comprising from 1 to 4 carbon atoms and linearly connecting the aromatic group Ar to a carboxylate group -COOM.
  • this main chain may carry one or more substituents, that is to say one or more atoms or groups of atoms different from a hydrogen atom.
  • L denotes a single bond or a group selected from an amide group -NHCO-, a carbamate group -NHCOO- or a urea group -NHCONH-;
  • L denotes a single bond or an amide group.
  • solubilizing agent (s) correspond to the formula (la) above in which:
  • Y 1 and Y 2 both denote a hydrogen atom
  • X denotes a linear, saturated or unsaturated divalent radical whose main chain consists of 1 to 4 carbon atoms and optionally one or two heteroatoms selected from nitrogen and oxygen atoms, said chain bearing no substituent other than hydrogen atoms.
  • the main chain preferably consists of 1 or 2 carbon atoms and optionally a heteroatom chosen from nitrogen and oxygen atoms, and more preferably the main chain consists of 1 or 2 carbon atoms.
  • solubilizing agent or agents correspond to the formula (la) above in which;
  • Y 1 and Y 2 both denote a hydrogen atom
  • X denotes a branched, saturated or unsaturated divalent radical whose main chain consists of 1 to 4 carbon atoms and optionally one or two heteroatoms selected from nitrogen and oxygen atoms, said chain bearing one or more substituents -LZ as defined above.
  • the main chain preferably consists of 1 or 2 carbon atoms and optionally a heteroatom selected from nitrogen and oxygen atoms, and more preferably the main chain consists of 1 or 2 carbon atoms.
  • the main chain of the divalent radical X can then for example carry: one or more hydroxyl group (s) (-OH); or
  • hydroxyl groups (-OH) and one or more salified carboxylic acid groups (-COOM ') and preferably a hydroxyl group and a salified carboxylic acid group.
  • solubilizing agent (s) correspond to the formula (la) above in which:
  • Y 1 and Y 2 denotes a group -OH, and preferably Y 1 denotes a group -OH and Y 2 denotes a hydrogen atom;
  • X denotes a linear divalent radical, saturated or unsaturated, whose main chain consists of 1 to 4 carbon atoms and optionally one or two heteroatom (s) cholsi (s) among the nitrogen and oxygen atoms, said chain bearing no substituent other than hydrogen atoms.
  • the main chain preferably consists of 1 or 2 carbon atoms and optionally a heteroatom chosen from nitrogen and oxygen atoms, and more preferably the main chain consists of 1 or 2 carbon atoms.
  • solubilizing agent (s) correspond to the formula (la) above in which:
  • At least one of Y 1 and Y 2 is -OH, and preferably Y 1 is -OH and Y 2 is hydrogen;
  • X denotes a branched, saturated or unsaturated divalent radical whose main chain consists of 1 to 4 carbon atoms and optionally one or two heteroatoms selected from nitrogen and oxygen atoms, said chain bearing one or more substituents -LZ as defined above.
  • the main chain preferably consists of 1 or 2 carbon atoms and optionally a heteroatom chosen from nitrogen and oxygen atoms, and more preferably the main chain consists of 1 or 2 carbon atoms.
  • Z denotes a hydroxyl group (-OH) or a salified carboxylic acid group (-COOM 'with M' - Na + or K + ).
  • the main chain of the divalent radical X can then for example carry: one or more group (s) hydroxy (-OH); or
  • hydroxyl groups (-OH) and one or more salified carboxylic acid groups (-COOM ') and preferably a hydroxyl group and a salified carboxylic acid group.
  • the compound of formula (I) is derived from a natural or synthetic amino acid bearing an aromatic ring.
  • alpha-amino acids such as phenylalanine, tyrosine and tryptophan.
  • the compound of formula (I) is derived from phenylalanine.
  • the compound of formula (I) is derived from tryptophan.
  • the compound of formula (I) is derived from a synthetic amino amino acid and in one embodiment the synthetic amino acid is phenylglycine.
  • amino acids may be employed in the form of one or other of their optical isomers (L or D forms), or in the form of a mixture of such isomers and in particular in the form of a racemate.
  • the solubilizing agent according to the invention is derived from an amino acid whose amino group has been converted into a group chosen from an amide group, a carbamate group or a urea or substituted group.
  • Said amide, carbamate or urea group may be connected to a hydrogen atom or a hydrocarbon substituent containing from 1 to 6 carbon atoms and optionally one or more oxygen atoms.
  • the amine function When the amine function is substituted, it may be substituted by a substituent selected from the group consisting of C 2 to C 4 hydroxycarboxyl, in particular the hydroxyacetyl group.
  • the solubilizing agent and in particular the compound of formula (I) is derived from an amino acid whose amino group has been converted into an amide group.
  • said amide group is substituted with a hydrocarbon radical containing from 1 to 6, and preferably from 1 to 4 carbon atoms, and may optionally carry one or more hydroxyl groups (-OH).
  • Two particularly preferred compounds are N-hydroxyacetyl-phenylalanine and N-hydroxyacetyl-tryptophan, corresponding to the following formulas;
  • solubilizing agent and in particular the compound of formula (I) is derived from a phenol.
  • the composition according to the invention advantageously comprises the agent (s) solubilizing (s) as described above in a total concentration of between 1 g / L and 100 g / L.
  • the invention also relates to a process for solubilizing in water one or more protein (s) characterized in that at least one solubilizing agent chosen from the group consisting of anionic compounds of non-saccharide structure of which said structure contains at least one aromatic ring comprising at least 6 members (6 atoms) and at least one carboxylic acid group in salified form, and which has in its acid form a molar mass of between 130 and 500 g / mol, is added to a aqueous protein composition for solubilizing the protein.
  • the invention also relates to a use, in order to improve the solubilization of one or more protein (s) within an aqueous composition, of at least one solubilizing agent chosen from the group consisting of anionic compounds. of non-saccharide structure of which said structure contains at least one aromatic ring comprising at least 6 members (6 atoms) and at least one carboxylic acid group in salified form, and which has in its acid form a molecular weight of between 130 and 500 g / mol.
  • the following embodiments apply both to the method of solubilizing one or more protein (s) within an aqueous composition and / or to use.
  • the method or the use according to the invention is characterized in that at least one solubilizing agent corresponds to the following general formula (I):
  • Ar denotes an aromatic ring comprising at least 6 members
  • X denotes a divalent linear or branched, saturated or unsaturated radical, whose main chain consists of 1 to 4 carbon atom (s) and optionally 1 or 2 heteroatom (s) chosen (s) from nitrogen and hydrogen atoms; oxygen, said main chain being optionally capable of carrying one or more substituents;
  • Y1 and Y2 denoting, independently of each other: a hydrogen atom; an -OH group; a group -OR 1 with R 1 denoting an alkyl radical containing from 1 to 6 carbon atoms or a hydroxyalkyl radical containing from 1 to 6 carbon atoms; and preferably Y1 and Y2 denote, independently of one another, a hydrogen atom or an -OH group; and
  • M designating a cation such as in particular Na + or K +.
  • the method or the use according to the invention is characterized in that in the formula (I), Ar denotes a benzene ring or an indole ring. In one embodiment, the method or the use according to the invention is characterized in that the solubilizing agent (s) correspond to the following formula (la):
  • X denotes a divalent linear or branched, saturated or unsaturated radical, whose main chain consists of 1 to 4 carbon atom (s) and optionally 1 or 2 heteroatom (s) chosen (s) from nitrogen and hydrogen atoms; oxygen, said main chain being optionally capable of carrying one or more substituents;
  • Y1 and Y2 denoting, independently of one another: a hydrogen atom; an -OH group; a group -OR 1 with R 1 denoting an alkyl radical containing from 1 to 6 carbon atoms or a hydroxyalkyl radical containing from 1 to 6 carbon atoms; and preferably Y1 and Y2 denote, independently of one another, a hydrogen atom or an -OH group; and
  • M designating a cation such as in particular Na + or K +.
  • the method or the use according to the invention is
  • solubilizing agent (s) has the following formula (Ib):
  • X denotes a divalent linear or branched, saturated or unsaturated radical, whose main chain consists of 1 to 4 carbon atom (s) and optionally 1 or 2 heteroatom (s) chosen (s) from nitrogen and hydrogen atoms; oxygen, said main chain being optionally capable of carrying one or more substituents; Y1 and Y2 denoting, independently of each other: a hydrogen atom; an -OH group; a group -OR 1 with R 1 denoting an alkyl radical containing from 1 to 6 carbon atoms or a hydroxyalkyl radical containing from 1 to 6 carbon atoms; and preferably Y1 and Y2 denote, independently of one another, a hydrogen atom or a group -
  • M designating a cation such as in particular Na + or K +.
  • the method or the use according to the invention is characterized in that in the formulas (I), (la) or (Ib), the divalent radical X bears on its main chain one or more substituent corresponding to the general formula:
  • L denotes a single bond or a group selected from an amide group -NHCO-, a carbamate group -NHCOO- or a urea group -NHCONH-;
  • the method or the use according to the invention is characterized in that L denotes a single bond or an amide group.
  • the process or the use according to the invention is characterized in that the solubilizing agent is derived from a natural or synthetic amino acid carrying an aromatic ring, preferably chosen from phenylalanine, ty rosi ne and tryptophan, and more preferably phenylalanine or tryptophan.
  • the process or the use according to the invention is characterized in that the solubilizing agent is chosen from the group consisting of N-hydroxyacetylphenylalanine and N-hydroxyacetyltryptophan, to the following formulas:
  • the method or the use according to the invention is characterized in that the solubilizing agent is derived from a phenol.
  • the method or the use according to the invention is characterized in that the solubilising agent is chosen from the following compounds, used in the form of sodium or potassium salts:
  • the method or the use according to the invention is characterized in that the said aqueous composition comprises the agent (s) solubilizing (s) in a total concentration of between 1 g / L and 100 g / L.
  • the method or the use according to the invention is characterized in that the said aqueous composition contains a total protein concentration (s) of between 0.5 and 400 mg / ml, preferably between 50 and 350 mg / mL
  • the method or the use according to the invention is characterized in that the molar ratio between the total amount of solubilizing agent (s) and the total amount of protein (s). in the composition is greater than or equal to 20, preferably greater than or equal to 35, more preferably greater than or equal to 45, still more preferably greater than or equal to 100, more preferably greater than or equal to 150, and more preferably greater than or equal to 200.
  • the method or the use according to the invention is
  • aqueous composition is to be administered by intravenous injection, subcutaneous injection or intramuscular injection, and preferably by subcutaneous injection.
  • composition according to the invention also contains one or more protein (s).
  • protein in a manner known per se, is a macromolecule composed of one or more amino acid chains linked together by peptide bonds.
  • proteins used in the invention may be of natural or synthetic origin.
  • the invention is particularly suitable for solubilizing proteins containing at least 10, and preferably at least 50 amino acids.
  • the proteins involved in the present invention have an isoelectric point between 4 and 9, more preferably between 4.5 and 8.5, and more particularly between 5.5 and 8.
  • the invention is particularly applicable to proteins which have at their isoelectric point a decrease in their maximum solubility in water of at least 2%, preferably at least 5%, or even at least 10%.
  • proteins it is observed in particular by simple visual observation that an aqueous solution containing them goes from clear to cloudy, when the pH of the solution approaches the isoelectric point of the protein.
  • the protein or proteins are chosen from therapeutic proteins.
  • the protein or proteins are chosen from proteins containing at least one antibody fragment.
  • protein comprising at least one antibody fragment a protein selected from monoclonal antibodies (mAbs), polyclonal antibodies, fusion proteins, nanobodies, bispecific antibodies and antibodies coupled to principles.
  • mAbs monoclonal antibodies
  • ADC cytotoxic active agents
  • the protein comprising at least one antibody fragment is a monoclonal antibody.
  • monoclonal antibody means a complete antibody, an antibody fragment or an antibody derivative which has an identical and unique specificity that is to say which recognizes only one type of epitope on a given antigen.
  • a monoclonal antibody may also be called immunoglobulin (hereinafter Ig).
  • complete antibody means an antibody composed of two identical heavy chains (“CH”) and two identical light chains (“CL”) which are linked by a disulfide bridge.
  • CH heavy chains
  • CL light chains
  • Each chain is constituted, in the N-terminal position, of a variable region (or domain) (coded by the rearranged genes V-3 for the light chains and VDJ for the heavy chains) specific for the antigen against which the antibody is directed, and in the C-terminal position, of a constant region consisting of a single CL domain for the light chains or several domains for the heavy chains.
  • Each variable region comprises three segments called “complementarity determining regions"("CDRs") or "hypervariable regions", which are primarily responsible for binding to the epitope of an antigen.
  • the two heavy chains (H, Heavy) and the two light chains (L, Light) are identical to each other.
  • the light chain is composed of 2 domains, a variable domain V and a constant domain C, folded independently of each other in space. They are called VL and CL.
  • the heavy chain also comprises a V domain denoted VH and 3 or 4 C domains denoted from CH 1 to CH 4. Each domain comprises about 110 amino acids and is structurally comparable.
  • the 2 heavy chains are linked by disulfide bridges and each heavy chain is linked to a light chain by a disulfide bridge as well.
  • variable parts The region that determines the specificity of the antibody for the antigen is carried by the variable parts, whereas the constant parts can interact with the Fc receptors of the effector cells or molecules as complement to mediate different functional properties.
  • VH refers to the variable regions of an immunoglobulin heavy chain of an antibody, including the heavy chains of an Fv, scFv, dsFv, Fab, Fab 'or F (ab)' fragment.
  • VL refers to the variable regions of an immunoglobulin light chain of an antibody, including the light chains of a Fv, scFv, dsFv, Fab, Fab 'or F (ab)' fragment.
  • CDR or CDR regions is meant the hypervariable regions of immunoglobulin heavy and light chains as defined by Kabat et al. (Kabat et al., Sequences of proteins of immunological interest, ed., US Department of Health and Human Services, NIH, 1991, and later editions.) There are 3 heavy chain CDRs and 3 light chain CDRs.
  • the term CDR or CDRs is used herein to designate, as appropriate, one or more of these regions, or all, of these regions which contain the majority of the amino acid residues responsible for the affine binding of the antibody. for the antigen or epitope it recognizes
  • the most conserved regions of the variable domains are called FR regions or sequences for "framework" or "framework” regions of 4 (FR 1 to FR4).
  • the antibodies are subdivided into 5 classes or isotypes: IgG, IgA, IgM, IgE and IgD according to the structure of the constant domains of the heavy chains, i.e. respectively chains ⁇ , ⁇ , ⁇ , ⁇ and ⁇ .
  • the classes of IgG and IgA are further subdivided according to the size of the hinge regions as well as the number and position of disulfide bridges between heavy chains.
  • IgG The class of IgG is subdivided into 4 subclasses i.e. IgG1, IgG2, IgG3 and IgG4.
  • IgA The class of IgA is subdivided into 2 subclasses i.e. IgAl and IgA2.
  • the protein comprising at least one antibody fragment is a monoclonal antibody chosen from IgG, IgA, IgM, IgE and IgD.
  • IgA can be selected from IgA1 and IgA2
  • IgG can be selected from IgG1, IgG2, IgG3 and IgG4.
  • the monoclonal antibody is an IgG.
  • the monoclonal antibody is an IgA.
  • the monoclonal antibody is an IgM.
  • the monoclonal antibody is an IgE.
  • the monoclonal antibody is an IgD.
  • the monoclonal antibody is an IgG1.
  • the monoclonal antibody is an IgG2.
  • the monoclonal antibody is an IgG3.
  • the monoclonal antibody is an IgG4.
  • the monoclonal antibody is an IgAl.
  • the monoclonal antibody is an IgA2.
  • antibody fragment is intended to mean any functional fragment of antibodies such as Fab (Fragment antigen binding), Fv, scFv (single chain Fv), Fc (crystallizable fragment), F (ab ') 2, Fab' , scFv-Fc, synthetic polypeptides containing the sequences of one or more CDRs, which generally have the same binding specificity as the antibody from which they are derived.
  • the antibody fragments employed in the invention can be obtained from the antibodies by methods such as digestion with enzymes such as pepsin or papain and / or by cleavage of the disulfide bridges by chemical reduction.
  • the enzymatic digestion of the antibodies by papain generates 2 identical fragments, which is called the Fragment Antigen Binding (Fab) fragment, and an Fc fragment (crystallizable fragment).
  • the Fc fragment is the support of the effector functions of immunoglobulins.
  • pepsin an F (ab ') 2 fragment is generated, where the two Fab fragments remain linked by two disulfide bridges, and the Fc fragment is split into several peptides.
  • the F (ab ') 2 fragment is formed of two Fab' fragments, linked by interchain disulfide bridges to form an F (ab ') 2.
  • the monoclonal antibody (s) according to the invention may advantageously contain one or more of these fragments, and all the combinations between the aforementioned fragments may be used in the context of the present invention.
  • antibody derivative means any antibody, which antibody may comprise one or more mutations, substitutions, deletions and / or additions of one or more amino acid residues. Such an addition, substitution or deletion may be located at any position in the molecule. In the case where several amino acids have been added, substituted or deleted, any combination of addition, substitution or deletion can be considered, provided that the resulting antibody always has at least the advantageous properties of the antibody of the invention. 'invention.
  • the monoclonal antibody may advantageously be a chimeric antibody or a humanized antibody.
  • Chimeric antibody means an antibody whose light and heavy chain variable regions, or at least one domain or fragment of these regions, belong to a species different from the species to which the constant regions of the light chains and heavy chains.
  • humanized antibody is meant an antibody that contains mainly human immunoglobulin sequences. This term generally refers to a non-human immunoglobulin that has been modified by incorporation of human sequences or residues found in human sequences.
  • the antibodies described above can, for example, be obtained by using the standard techniques of recombinant DNA, which are well known to those skilled in the art, for example by using the antibody construction techniques.
  • the Muromonab-CD3 (marketed under the name ORTHOCLONE Okt3®), abciximab (marketed as ReoPro ®), Rituximab (marketed under the name MabThera ® and Rituxan®), Basiliximab (marketed under the name Simulect®), daclizumab (marketed under the name Zenapax®), the palivizumab (marketed under the name Synagis), the 'Infliximab (marketed as Remicade ®), Trastuzumab (marketed under the name Herceptin), the alemtuzumab (marketed under the names MabCampath®, Campath 1H®), the adalimumab (marketed under the name of Humira ®), tositumomab-1131 (marketed under the name Bexxar ®), efalizumab (available under the tradename Raptiva ®),
  • the protein comprising at least one antibody fragment is a polyclonal antibody.
  • polyclonal antibody is meant a mixture of complete antibodies, a mixture of antibody fragments or a mixture of antibody derivatives as described above, recognizing different types of epitopes on a given antigen.
  • the protein comprising at least one antibody fragment is a fusion protein.
  • Fusion protein means a construct that contains several proteins or polypeptides of different origin. This fusion protein is encoded by a nucleic acid obtained by recombinant DNA technologies well known to those skilled in the art. According to the present invention, the fusion protein consists of a monoclonal antibody fragment as described above and a fragment of a protein of interest.
  • fusion protein consisting of a monoclonal antibody fragment which is the Fc region of an IgG1 immunoglobulin and a fragment of a protein of interest which is the extracellular domain of the immunoglobulin.
  • CTLA-4 protein receptor Cytotoxic T Lymphocyte Antigen-4
  • this fusion protein ie abatacept, being marketed under the name of Orencia ®.
  • fusion protein consisting of a monoclonal antibody fragment! which is the Fc region of an IgG1 and a fragment of a protein of interest which is the P75 fraction of the soluble receptor of TNF-alpha, this i.e. etanercept fusion protein being commercialized under the name Enbrel®.
  • fusion protein consisting of a monoclonal antibody fragment which is the Fc region of an IgG1 and a fragment of a protein of interest which are the extracellular portions of the IL-1 1 (interleukin-1 receptor component) and IL-lRAcP (IL-1 receptor accessory protein), this fusion protein ie rilonacept being marketed under the name of Arcalyst ®.
  • fusion protein consisting of a monoclonal antibody fragment which are the hinge IgG1, C (H) 2 and C (H) 3 regions, and a fragment of a interest which is the extracellular domain of LFA-3, this alefacept fusion protein being marketed under the name of Amevive ® .
  • the protein comprising at least one antibody fragment is a nanobody.
  • nanobody means any single variable domain of immunoglobulin heavy chains. Nanobodies are more widely described in D. Saerens and S. Muyldermans (eds.) Single Domain Antibodies: Methods and Protocols, Methods in Molecular Biology, Vol. 911; and Med Microbiol Immunol (2009). According to one embodiment of the present invention, the protein comprising at least one antibody fragment is a bispecific antibody.
  • bispecific antibody also called bifunctional antibody or "diabody” any immunoglobulin fragment comprising 2 antigen presentation sites.
  • bifunctional antibodies are more widely described in Hollinger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90: 6444-6448 (1993).
  • the protein comprising at least one antibody fragment is an antibody coupled to a cytotoxic active principle.
  • antibody coupled to a cytotoxic active principle means a monoclonal antibody as described above coupled to a cytotoxic active principle.
  • cytotoxic active principle mention may be made in particular of vedotin.
  • an antibody coupled to a cytotoxic active ingredient is the brentuximab antibody coupled to the active cytotoxic drug vedotin. This antibody coupled to this cytotoxic active ingredient is marketed under the name of Adcetris ® .
  • the protein (s) are chosen from among the hormones.
  • insulin can be mentioned; growth factors such as BMP (Bone Morphogenetic Protein), PDGF (Platelet-Derived Growth Factor), coagulation factors, parathyroid hormones.
  • BMP Bisphogenetic Protein
  • PDGF Plate-Derived Growth Factor
  • coagulation factors parathyroid hormones.
  • the protein (s) are present in the composition according to the invention in solubilized form.
  • composition according to the invention contains a total protein concentration (s) of between 0.5 and 400 mg / ml.
  • the total concentration of protein (s) is between 50 and 350 mg / mL, in particular between 80 and 250 mg / mL, preferably between 80 and 200 mg / mL, more preferably between 100 and 200. mg / mL, better between 120 and 200 mg / mL, and more preferably between 120 and 180 mg / mL.
  • the concentration of the protein in the composition is greater than the maximum concentration of the same protein in aqueous solution at its isoelectric point, at a temperature of 25 ° C.
  • the protein is present in the composition an osmolality less than or equal to 700 mosmol / L, in particular less than or equal to 500 mosmol / L, or even less than or equal to 350 mosmol / L.
  • the protein is present in the composition an osmolality greater than or equal to 50 mosmol / L, in particular greater than or equal to 200 mosmol / L, or even greater than or equal to 250 mosmol / L.
  • the protein is present in the composition an osmolality of between 150 and 700 mosmol / L, in particular between 200 and 500 mosmol / L, or even between 250 and 350 mosmol / L.
  • the osmolality can be measured by a Foske Micro-Osmometer - Model 210 apparatus.
  • the molar ratio between the total amount of solubilizing agent (s) and the total amount of protein (s) in the composition is advantageously greater than or equal to 20, preferably greater than or equal to 35. and more preferably greater than or equal to 45.
  • the molar ratio between the total amount of solubilizing agent (s) and the total amount of protein (s) in the composition is greater than or equal to 100, preferably greater than or equal to 150, and more preferably greater than or equal to 200.
  • composition according to the invention comprises an aqueous medium, that is to say that it comprises water as the main component.
  • the composition comprises more than 50% by weight of water, preferably at least 70% by weight of water, more preferably at least 80% by weight of water and better still at least 90% by weight of water. , in relation to its total weight.
  • the water used in the composition may in particular be a sterile water for injection or a bacteriostatic water for injection.
  • the pH of the composition according to the invention can range from 4 to 8.
  • the pH of the composition is between 5 and 6.5.
  • the pH is between 5 and 8, preferably between 6 and 7.5, and more preferably between 6 and 7.
  • the pH of the composition can be adjusted in a manner known per se by adding acids, bases and / or buffer systems, preferably pharmaceutically acceptable.
  • composition according to the invention advantageously has a viscosity, measured at 25 ° C and at atmospheric pressure, less than or equal to 20 cP.
  • composition according to the invention comprises one or more pharmaceutically acceptable acid (s).
  • acids may in particular be chosen from hydrochloric acid, phosphoric acid, citric acid, acetic acid, acid and the like.
  • ascorbic acid ethylene diamine tetraacetic acid (also called EDTA), tartaric acid.
  • composition according to the invention comprises one or more pharmaceutically acceptable base (s).
  • bases may in particular be chosen from inorganic bases formed from metals such as sodium, potassium, calcium and magnesium, and in particular from the group consisting of sodium hydroxide (NaOH) and potassium hydroxide (KOH). ), magnesium hydroxide (Mg (OH) 2 ).
  • pharmaceutically acceptable acids and / or bases include those derived from amino acids such as histidine, arginine or glycine.
  • the composition according to the invention comprises a pharmaceutically acceptable buffer system.
  • pharmaceutically acceptable buffer systems include those derived from the salts of the aforementioned acids and bases or the combination thereof.
  • the buffer system may especially be chosen from the following combinations: monobasic sodium phosphate (also called monosodium phosphate) / dibasic sodium phosphate (also called disodium phosphate), monobasic potassium phosphate (also called monopotassium phosphate) / phosphate sodium dibasic (also known as disodium phosphate) / sodium salt, acetic acid / sodium acetate, citric acid / sodium citrate, L-histidine / histidine hydrochlorate, glycine hydrochloride / glycine.
  • monobasic sodium phosphate also called monosodium phosphate
  • dibasic sodium phosphate also called disodium phosphate
  • monobasic potassium phosphate also called monopotassium phosphate
  • phosphate sodium dibasic also known as disodium phosphate
  • composition according to the invention may further comprise one or more inorganic salt (s), preferably chosen from the pharmaceutically acceptable inorganic salt (s).
  • Such salts may in particular be chosen from sodium chloride, potassium chloride and tin (II) chloride.
  • composition according to the invention may comprise the protein (s) as sole therapeutic active agent. It may also comprise, in addition to the protein (s), other therapeutic active agents.
  • composition according to the invention may further comprise any additive, adjuvant or excipient, preferably pharmaceutically acceptable.
  • Such additives may be generally present in an amount for each of them between 0 and 10% by weight relative to the total weight of the composition.
  • composition according to the invention may further comprise at least one preservative agent.
  • the preservative agent (s) may in particular be chosen from benzyl alcohol, phenol, m-cresol and povidone.
  • composition according to the invention may further comprise at least one surfactant.
  • the surfactant (s) may be, for example, chosen from polysorbate 20 (also called PS20 or Tween20), polysorbate 80 (also called PS80 Tween80), Pluronic F-68, "Brij” and alkylglucosides. such as n-dodecyl- ⁇ -D-maltoglucoside (DDM).
  • polysorbate 20 also called PS20 or Tween20
  • polysorbate 80 also called PS80 Tween80
  • Pluronic F-68 Pluronic F-68
  • “Brij” alkylglucosides.
  • DDM n-dodecyl- ⁇ -D-maltoglucoside
  • composition according to the invention may further comprise a lyoprotective agent and / or a pharmaceutically acceptable sugar.
  • the lyoprotective agent and the pharmaceutically acceptable sugar may for example be chosen from ⁇ -trehalose, sucrose (also called sucrose), maltose, mannitol, sorbitol, dextran.
  • the lyoprotective agent may also include amino acids such as histidine.
  • composition according to the invention is intended for therapeutic use, for human or animal use.
  • composition according to the invention is then a pharmaceutical or veterinary composition, preferably a pharmaceutical composition.
  • the composition according to the invention is preferably intended for systemic administration. It is in particular an injectable composition, intended to be administered for example by intravenous injection, by subcutaneous injection or by intramuscular injection, and more preferably by subcutaneous injection.
  • composition according to the invention is intended for therapeutic use in humans.
  • the present invention also relates to the composition as described above for its use as a medicament.
  • the subject of the invention is the composition as described above, for its use for preventing and / or treating one or more pathologies in humans or animals.
  • composition is particularly useful for treating all human pathologies involving the administration to the patient of one or more therapeutic proteins.
  • the composition according to the invention can be used to treat various forms of cancer, diabetes, autoimmune diseases, Alzheimer's disease, Crohn's disease, cardiovascular diseases, anemia, graft rejection, sclerosis, rheumatoid arthritis.
  • composition according to the invention may be prepared by simple mixing in water of its ingredients, with stirring.
  • it may be prepared by mixing the solubilizing agent (s) and the protein (s) in water at a pH that is preferably different from the isoelectric point of the protein (s). s) considered. The pH can then be adjusted if necessary.
  • the invention finally relates to the use, in order to improve the solubilization of proteins within an aqueous composition, of a solubilizing agent consisting of an anionic compound of non-saccharide structure, which contains at least one nucleus aromatic compound comprising at least 6 members and at least one carboxylic acid group in salified form, and which has in its acid form a molecular weight of between 130 and 500 g / mol.
  • a solubilizing agent consisting of an anionic compound of non-saccharide structure, which contains at least one nucleus aromatic compound comprising at least 6 members and at least one carboxylic acid group in salified form, and which has in its acid form a molecular weight of between 130 and 500 g / mol.
  • Al or N- (2-hydroxyacetyl-) - L-phenylalanine molecule is obtained from the methyl ester of L-phenylalanine, hydrochloride salt (Bachem) and glycolic acid (Alfa Aesar) according to US Pat. process described in Pratt RF et al. Biochemistry, 2006, 45, 13074-13082.
  • the A2 or N- (2-hydroxyacetyl-) - L-tryptophan molecule is obtained from the methyl ester of L-phenylalanine, hydrochloride salt (Bachem) and glycolic acid (Alfa Aesar) according to US Pat. process described in Pratt RF et al. Biochemistry, 2006, 45, 13074-13082.
  • Example B1 Preparation of a solution of the A1 molecule at 315 mg / mL
  • the solid form of the Al molecule is solubilized in sodium hydroxide at 1 mol / L, then adding sodium hydroxide at 10 mol / L, so as to obtain a 315 mg / mL solution. at pH 5.1.
  • Example B2 Preparation of a sucrose solution at 800 mM.
  • Sucrose (CAS 57-50-1, Sigma S3929 Ref) is solubilized in water at a concentration of 800 mM.
  • Example B3 Preparation of a solution of L-histidine at 200 mM.
  • L-Histidine (CAS 71-00-1, Ref Sigma H6034) is solubilized in water at the concentration of 200 mM.
  • the resulting solution has a pH of 6.5.
  • Example B4 Preparation of the mandelic acid solution at 1000 mM
  • Acetic acid (CAS 64-19-7, Ref Roth 3738.1) is diluted in water to 1000 mM.
  • Example B6 Preparation of the phenylacetic acid solution at 900 mM
  • Phenylacetic acid (CAS 103-82-2, Aldrich Ref P16621) is solubilized in sodium hydroxide at 1 mol / L so as to obtain a 900 mM solution at pH 5.9.
  • the solid form of the A2 molecule is solubilized in sodium hydroxide at 1 mol / l, then adding sodium hydroxide at 10 mol / l, so as to obtain a 315 mg / ml solution. at pH 5, 1.
  • Part C Solubilization of proteins at their Isoelectric points
  • Human insulin has an isoelectric point (pI) of 5.3. At pH 5.3 the human insulin precipitates at a concentration greater than or equal to 10 IU / ml. A solubility assay with human insulin pi with different compounds is performed. [000218] A solution of human insulin at 500 IU / ml is prepared. Solutions of compounds at different concentrations in water are prepared as described in Examples B1-B4. A mixture between a human insulin solution and the compound solution is made to obtain a solution containing 100 IU / mL of human insulin and the desired concentration of compound. The pH of the various solutions is adjusted to pH 5.3 by addition of hydrochloric acid or sodium hydroxide as a function of the pH reached as a result of the mixture between the compound and the human insulin solution.
  • pH 5.3 by addition of hydrochloric acid or sodium hydroxide as a function of the pH reached as a result of the mixture between the compound and the human insulin solution.
  • the soluble fractions thus obtained are then assayed by RP-HPLC (Column: Sunfire C18, Waters ref: 186003417, Mobile phase: sodium phosphate / acetonitrile gradient, Detection: UV at 276 nm) with a range of external insulin in order to quantify the percentage of insulin soluble in pl.
  • RP-HPLC Column: Sunfire C18, Waters ref: 186003417, Mobile phase: sodium phosphate / acetonitrile gradient, Detection: UV at 276 nm
  • the Nanogam formulation is a formulation of human immunoglobulins at 50 mg / ml and at pH 4.3 containing different IgG subclasses (IgG1: 54-70%, IgG2: 29-45%, IgG3: 1- 4%, IgG4: 0-0.5%, IgA: at most 6 mg / ml).
  • the isoelectric point of this composition is about 8.5.
  • immunoglobulins tend to aggregate. A test with different compounds is therefore performed at the isoelectric point in order to identify the compounds used to reduce this phenomenon of aggregation.
  • a commercial solution of Nanogam at 50 mg / mL is used. Solutions of compounds at different concentrations are prepared as described in Examples B1-2 and B3-B7. A mixture of the Nanogam solution and one of the compound solutions is made to obtain a solution containing 40 mg / ml of human immunoglobulins and the desired concentration of compound. The pH of the various solutions is adjusted to pH 8.5 by addition of hydrochloric acid or sodium hydroxide depending on the pH reached as a result of the mixture between the compound of interest and the human immunoglobulin solution.
  • the diffused intensities are measured at 12.8 °. This measurement angle is selected because it is sensitive to the largest nanoparticles / microparticles in suspension such as fibrils that appear at the isoelectric point of Nanogam.
  • f f

Abstract

La présente invention a pour objet une composition liquide qui comprend, dans un milieu aqueux une ou plusieurs protéine(s) et un ou plusieurs agent(s) solubilisant(s) choisi(s) dans le groupe constitué par les composés anioniques de structure non saccharidique dont ladite structure contient au moins un noyau aromatique comprenant au moins 6 chaînons (6 atomes) et au moins un groupement acide carboxylique sous forme salifiée, et qui présente sous sa forme acide une masse molaire compris entre 130 et 500 g/mol. Elle concerne également l'utilisation dudit ou desdits agent(s) solubilisant(s) pour préparer des compositions selon l'invention. Elle concerne également un procédé de solubilisation d'une ou plusieurs protéine(s) caractérisé en ce qu'au moins un agent solubilisant choisi dans le groupe constitué par les composés anioniques de structure non saccharidique dont ladite structure contient au moins un noyau aromatique comprenant au moins 6 chaînons (6 atomes) et au moins un groupement acide carboxylique sous forme salifiée, et qui présente sous sa forme acide une masse molaire compris entre 130 et 500 g/mol, est additionné à une préparation aqueuse de protéine pour solubiliser la protéine.

Description

COMPOSITION AQUEUSE COMPRENANT AU MOINS UNE PROTEINE ET UN AGENT SOLUBILISANT, SA PREPARATION ET SES UTILISATIONS [0001] La présente invention a pour objet une composition aqueuse comprenant une ou plusieurs protéine(s) et au moins un agent solubilisant particulier. L'invention concerne également la préparation d'une telle composition, et ses utilisations notamment dans les domaines pharmaceutique et vétérinaire.
[0002] L'invention concerne enfin l'utilisation de composés particuliers, afin d'améliorer la solubilisation de protéine(s) au sein d'une composition aqueuse.
[0003] L'emploi de protéines d'origine naturelle ou synthétique sous forme de solutions dans un milieu liquide est courant, notamment dans les domaines pharmaceutiques et vétérinaire où il est nécessaire de pouvoir disposer de compositions liquides contenant des principes actifs protéiques, destinés à être administrés aux hommes ou aux animaux dans un but thérapeutique et/ou prophylactique. Ces compositions liquides doivent autant que possible pouvoir être formulées en utilisant l'eau comme solvant.
[0004] Toutefois, les protéines peuvent être peu solubles en milieu aqueux, ou biologiques, et donner lieu à une solubilité insatisfaisante, et notamment à des phénomènes de précipitations indésirables.
[0005] La solubilité d'une protéine dans l'eau dépend en grande partie de sa structure d'une part, et du pH d'autre part. En effet selon le pH, la protéine peut se trouver sous forme plus ou moins ionisée, ce qui est susceptible de faire varier sa solubilité dans l'eau. Le point où la solubilité d'une protéine dans l'eau est la plus faible est le point isoélectrique (pi) de cette protéine, c'est-à-dire le pH auquel la charge globale de la protéine est nulle.
[0006] Ainsi, lorsque des compositions comprenant au moins une protéine sont mises en contact d'un milieu aqueux, notamment lorsque le pH de ce milieu correspond au point isoélectrique de la protéine, il existe un besoin d'améliorer la solubilité de celle-ci, notamment afin de limiter ou d'éviter la précipitation de celle-ci Ceci est particulièrement utile dans le cas d'injection de la composition, notamment par voie sous-cutanée.
[0007] Tout particulièrement il existe un besoin d'améliorer la solubilité de protéines qui ont un point isoélectrique autour du pH physiologique (environ 7,4) et qui ont des problèmes de solubilité dans les fluides biologiques, comme le sérum, le sang, l'espace sous-cutané...
[0008] Par ailleurs, il existe encore un besoin de pouvoir formuler des compositions aqueuses stables contenant des protéines, qui ne donnent pas lieu à des phénomènes de précipitation, quel que soit le pH de la composition, y compris au point isoélectrique des protéines considérées. Pour cela, il a été proposé dans l'art antérieur de solubiliser les protéines dans l'eau au moyen de polymères hydrosolubles tels qu'en particulier des polysaccharides, qui ont pour effet d 'interagir avec la protéine et favoriser la solubilisation de celles-ci dans l'eau.
[0009] Ainsi les demandes de brevet WO2008/038111 et WO2010/041119, déposées au nom d'Adocia, décrivent des polysaccharides et/ou des oligosaccharides qui présentent la propriété de créer des interactions avec des principes actifs, notamment protéiques.
[00010] Ces polymères sont constitués de chaînes dont les longueurs sont statistiquement variables, et qui présentent une grande richesse de sites d'interaction possibles avec des principes actifs protéiques. Ce potentiel d'interactions multiples pourrait toutefois induire un manque de spécificité en termes d'interaction alors qu'une molécule plus petite et mieux définie pourrait permettre d'être davantage spécifique à ce sujet.
[00011] Par ailleurs, une chaîne de polymère peut interagir avec différents sites présents sur un principe protéique mais peut aussi du fait de la longueur de la chaîne interagir avec plusieurs principes protéiques ce qui peut entraîner un phénomène de pontage. Ce phénomène de pontage peut par exemple conduire à une agrégation non souhaitée des protéines.
[00012] De plus, l'emploi comme agents solubilisants de composés polymériques n'est pas toujours souhaitable, notamment dans le domaine pharmaceutique, car l'élimination de tels composés par l'organisme peut s'avérer parfois longue, ou difficile. En outre, l'emploi de tels composés polymériques a souvent pour effet d'augmenter de manière parfois importante la viscosité de la composition aqueuse, ce qui peut être particulièrement problématique notamment dans le cas de solutions destinées à être administrées par injection, notamment par injection sous cutanée.
[00013] En outre, les polymères présentent l'inconvénient de ne pas être facilement traçables (par spectrométrie de masse par exemple) dans les milieux biologiques lors d'expériences de pharmacocinétique ou d'ADME (administration, distribution, métabolisme, élimination), et donnent généralement un signal diffus et bruité en spectrométrie de masse.
[00014] Par ailleurs, certains agents solubilisants peuvent être onéreux et/ou nécessiter de nombreuses étapes de synthèse, et éventuellement de purification.
[00015] Poursuivant ses recherches dans le domaine de la formulation de compositions aqueuses contenant des protéines, et plus particulièrement pour l'administration de principes actifs protéiques, la Demanderesse a maintenant mis en évidence que, de manière surprenante, l'emploi de certains composés non polymériques de structure particulière permettait d'améliorer de manière importante la solubilité de protéines en milieu aqueux, tout en remédiant en tout ou partie aux inconvénients des composés et méthodes de l'art antérieur.
[00016] La présente invention a ainsi pour objet une composition liquide comprenant, dans un milieu aqueux, une ou plusieurs protéine(s) et un ou plusieurs agent(s) solubilisant(s), caractérisée en ce que ledit ou lesdits agent(s) solubilisant(s) est (sont) choisis(s) dans le groupe constitué par les composés anioniques de structure non saccharidique dont ladite structure contient au moins un noyau aromatique comprenant au moins 6 chaînons (6 atomes) et au moins un groupement acide carboxylique sous forme salifiée, et qui présente sous sa forme acide une masse molaire compris entre 130 et 500 g/mol.
[00017] Elle concerne également l'utilisation dudit ou desdits agent(s) solubilisant(s) pour préparer des compositions selon l'invention.
[00018] Elle concerne également un procédé de solubilisation d'une ou plusieurs protéine(s) caractérisé en ce qu'au moins un agent solubilisant choisi dans le groupe constitué par les composés anioniques de structure non saccharidique dont ladite structure contient au moins un noyau aromatique comprenant au moins 6 chaînons (6 atomes) et au moins un groupement acide carboxylique sous forme salifiée, et qui présente sous sa forme acide une masse molaire compris entre 130 et 500 g/mol, est additionné à une préparation aqueuse de protéine pour solubiliser la protéine.
[00019] De par leur structure particulière, lesdits agents solubilisants interagissent avec les protéines et augmentent de manière particulièrement remarquable leur solubilisation dans l'eau, ce qui permet la préparation de solutions aqueuses contenant des protéines. Ces solutions peuvent être limpides, éventuellement y compris au point isoélectrique, ou « pi » des protéines considérées.
[00020] Par « limpide » on entend dépourvue de tout objet diffusant la lumière, lesdits objets entraînant une perte de recouvrement (mesuré par techniques analytiques séparatives, par exemple électrophorétiques ou chromatographiques, comme la RP-HPLC) et/ou entraînant une augmentation des intensités diffusées par mesure DLS.
[00021] Le recouvrement par techniques analytiques séparatives peut être mesuré de la manière présentée dans les exemples.
[00022] Les intensités diffusées peuvent être mesurées de la manière présentée dans les exemples.
[00023] Par « non-limpide » on entend la présence d'objets diffusant la lumière et/ou la présence d'un trouble macroscopique évalué à l'œil. Ceci peut être mesuré par la perte de recouvrement par techniques analytiques séparatives, lesdits objets étant séparables soit par centrifugation, soit par filtration. [00024] Dans le cas d'une composition liquide non-limpide, le recouvrement par techniques analytiques séparatives est inférieur à 99 % et/ou l'intensité de lumière diffusée à 173° et/ou à 12,8° augmente de plus de 5%.
[00025] Les protéines considérées présentent une diminution de leur solubilité maximale au pl. Cette diminution de solubilité maximale au pi peut être mesurée grâce aux méthodes présentées dans les exemples.
[00026] En particulier, le procédé selon l'invention permet d'augmenter de manière substantielle les concentrations auxquelles les protéines peuvent être solubilisées dans l'eau à leur point isoélectrique.
[00027] En particulier, les compositions obtenues selon l'invention sont homogènes avec une bonne solubilisation des actifs protéiques, et sont stables dans le temps.
[00028] En outre, les agents solubilisants selon l'invention sont des composés de petite taille, ce qui permet de limiter l'augmentation de la viscosité de la composition aqueuse. En particulier, et cela constitue un aspect particulièrement surprenant de l'invention, la Demanderesse a mis en évidence qu'il n'était pas nécessaire d'employer des composés de structure polymérique, notamment saccharidique, pour améliorer la solubilisation des protéines. En effet, il était généralement considéré jusqu'à présent que des structures polymériques étaient préférables, alors que des composés de petite taille risquaient de présenter un déficit de sites d'interaction avec des principes actifs protéiques.
[00029] La présente invention trouve une application particulièrement intéressante dans les domaines pharmaceutique et vétérinaire puisqu'elle propose des agents solubilisants qui permettent la stabilisation, l'administration et la délivrance de principes actifs protéiques en solution aqueuse, par des méthodes simples à mettre en œuvre.
[00030] Les agents solubilisants selon l'invention peuvent présenter une biodégradabilité suffisamment rapide et appropriée à leur utilisation dans la préparation d'une large catégorie de formulations pharmaceutiques, y compris pour des médicaments destinés à une administration chronique et/ou de fréquence élevée. Ces composés peuvent également répondre aux contraintes établies par la réglementation pharmaceutique, notamment en terme de stabilité dans les conditions normales de conservation et de stockage, notamment en solution.
[00031] La présente invention a également pour objet la préparation de la composition ci-avant, et son utilisation dans le domaine pharmaceutique ou vétérinaire. [00032] D'autres objets, caractéristiques, aspects et avantages de l'invention apparaîtront encore plus clairement à la lecture de la description et des exemples qui suivent.
[00033] Dans ce qui va suivre, et à moins d'une autre indication, les bornes d'un domaine de valeurs sont comprises dans ce domaine, notamment dans l'expression «compris(e(s)) entre ».
[00034] Par ailleurs, l'expression « au moins un » utilisée dans la présente description est équivalente à l'expression « un ou plusieurs ».
[00035] Les agents solubilisants employés dans l'invention sont des composés de structure non saccharidique.
[00036] Par « structure non saccharidique », on entend que ces composés ne contiennent pas dans leur structure d'unité saccharidique, que ce soit sous forme cyclique ou sous forme ouverte, réduite ou oxydée.
[00037] Par « unité saccharidique », on désigne les pentoses, les hexoses, les acides uroniques, et les N-acétylhexosamines sous forme cyclique ou sous forme ouverte, réduite ou oxydée.
[00038] Les agents solubilisants employés dans l'invention sont des composés anioniques. Par « composé anionique » on désigne un composé chimique ne contenant que des charges négatives, et aucune charge positive. En particulier, au cas où le composé comprendrait dans sa structure un ou plusieurs atomes d'azote, ceux-ci ne portent pas de charge positive.
[00039] Les agents solubilisants employés dans l'invention contiennent dans leur structure un ou plusieurs noyau(x) aromatique(s) comprenant au moins 6 chaînons, c'est-à-dire un cycle ou hétérocycle aromatique comprenant au moins 6 atomes choisis parmi le carbone, l'azote, le soufre ou l'oxygène. Ce ou ces noyau(x) aromatique(s) peuvent être avantageusement choisis parmi les noyaux benzéniques éventuellement substitués et les noyaux indole éventuellement substitués, et de préférence les noyaux benzéniques éventuellement substitués.
[00040] Le ou les noyau(x) aromatique(s) peu(t)(vent) être substitué(s) ou non substitué(s). Le ou les substituant(s) peu(t)(vent) être linéaire(s) ou ramifié(s), saturé(s) ou insaturé(s), cyclique(s) ou non. Ils peu(t)(vent) en outre être condensé(s) ou polycyclique(s) mais doivent comprendre au moins un cycle ou hétérocycle aromatique comprenant au moins 6 atomes choisis parmi le carbone, l'azote, le soufre ou l'oxygène. Ces cycles comprenant au moins 6 atomes choisis parmi le carbone, l'azote, le soufre ou l'oxygène sont définis dans la présente demande comme des noyaux aromatiques comprenant au moins 6 chaînons. [00041] Le ou les substituant(s) peu(t)(vent) être en particulier choisi(s) parmi - OH, les groupements -ORi avec Rj désignant un radical alkyle ou hydroxyalkyle contenant de 1 à 6 atomes de carbone.
[00042] De préférence, le noyau aromatique n'est pas substitué.
[00043] Les agents solubilisants employés dans l'invention comprennent également dans leur structure un ou plusieurs groupement(s) acide carboxylique, sous forme de sel, c'est-à-dire un ou plusieurs groupements de structure :
Figure imgf000007_0001
- avec Mjn+ représentant un cation, de préférence un cation pharmaceutiquement acceptable, et
n est un nombre entier valant 1 ou 2.
[00044] Selon un mode de réalisation préféré, désigne un cation choisi parmi Ca2+, Mg2+, Na+ ou K+ et plus préférentiellement M,n+ désigne Na ou K+.
[00045] Les agents solubilisants employés dans l'invention présentent une masse molaire comprise entre 130 et 500 g / mol.
[00046] Cette masse molaire correspond à la forme acide de l'agent solubilisant, c'est-à-dire lorsque le ou les groupement(s) acide carboxylique est (sont tous) sous forme acide :
Figure imgf000007_0002
OH
[00047] De préférence, la masse molaire du ou des agent(s) solubilisant(s) est comprise entre 130 et 450 g/mol, et préférentiellement entre 130 et 400 g / mol.
[00048] Selon un mode de réalisation préféré, les agents solubilisants employés dans l'invention sont solubles dans l'eau. Par « soluble dans l'eau », on entend que ces agents présentent dans l'eau à un pH de 7 et à 25°C une solubilité minimale de 50 mmol/L, de préférence une solubilité minimale de 100 mmol/L, et plus préférentiellement de 250 mmol/L. [00049] Selon un mode de réalisation préféré, le ou les agents solubilisants employés dans l'invention répond(ent) à la formule générale (I) suivante :
Figure imgf000008_0001
avec :
Ar désigne un noyau aromatique comprenant au moins 6 chaînons ;
- X désigne un radical divalent linéaire ou ramifié, saturé ou insaturé, dont la chaîne principale est constituée de 1 à 4 atomes de carbone et éventuellement 1 ou 2 hétéroatomes choisis parmi les atomes d'azote et d'oxygène, ladite chaîne principale pouvant en option porter un ou plusieurs substituants ;
- Yl et Y2 désignent, indépendamment l'un de l'autre : un atome d'hydrogène ; un groupement -OH ; un groupement -OR1 avec RI désignant un radical alkyle contenant de 1 à 6 atomes de carbone ou un radical hydroxyalkyle contenant de 1 à 6 atomes de carbone ; et de préférence Yl et Y2 désignent, indépendamment l'un de l'autre, un atome d'hydrogène ou un groupement - OH ; et
M désigne un cation tel que notamment Na÷ ou K+.
[00050] De préférence, Ar désigne un noyau benzénique ou un noyau indole.
[00051] Selon un premier mode de réalisation particulièrement préféré, Ar désigne un noyau benzénique. Dans ce mode de réalisation, 'le ou les agents solubilisants répondent à la formule (la) suivante :
Figure imgf000008_0002
avec X, Yi, Y2 et M tels que définis ci-avant.
[00052] Selon un second mode de réalisation préféré, Ar désigne un noyau indole. Dans ce mode de réalisation, le ou les agents solubilisants répondent de préférence à la formule (Ib) suivante :
Figure imgf000009_0001
- avec X, Y1# Y2 et M tels que définis ci-avant.
[00053] Dans les formules (I), (la) et (Ib) ci-avant, le radical divalent X comprend une chaîne principale, constituée de 1 à 4 atomes de carbone et en option 1 ou 2 hétéroatomes choisis parmi les atomes d'azote et d'oxygène. Les atomes de carbone constituant la chaîne principale peuvent être indépendamment les uns des autres saturés ou insaturés. Par chaîne principale, on désigne un enchaînement d'atomes comprenant de 1 à 4 atomes de carbone et reliant de manière linéaire, le groupement aromatique Ar à un groupement carboxylate -COOM.
[00054] Comme exposé ci-avant, cette chaîne principale peut porter un ou plusieurs substituants, c'est-à-dire un ou plusieurs atomes ou groupements d'atomes différents d'un atome d'hydrogène.
[00055] Le ou les substituants répondent alors avantageusement à la formule générale :
-L-Z
avec :
L désigne une liaison simple ou un groupement choisi parmi un groupement amide -NHCO-, un groupement carbamate -NHCOO— ou un groupement urée -NHCONH-; et
- Z désigne un groupement hydroxy (-OH) ; un radical linéaire ou ramifié, saturé ou insaturé, comprenant de 1 à 4 atomes de carbone, lesdits atomes de carbone portant au moins un groupement hydroxy -[CH2]x-[OH]Y ; un groupement acide carboxylique salifié (-COOM' avec M' = Na+ ou K+) ; ou un radical linéaire ou ramifié, saturé ou insaturé, comprenant de 1 à 12 atomes de carbone et éventuellement un ou plusieurs hétéroatomes tel que notamment un ou plusieurs atomes d'oxygène.
[00056] De préférence, L désigne une liaison simple ou un groupement amide.
[00057] De préférence, Z est choisi parmi un groupement hydroxy (-OH) ou un radical linéaire ou ramifié, saturé ou insaturé, comprenant de 1 à 4 atomes de carbone pouvant en option porter un ou plusieurs groupement hydroxy (-OH) et/ou groupement acide carboxylique salifié (-COOM" avec M" = Na+ ou K+). [00058] Selon un mode de réalisation préféré le ou les agents solubilisants répondent à la formule (la) ci-avant dans laquelle :
- Yi et Y2 désignent tous deux un atome d'hydrogène ;
- X désigne un radical divalent linéaire, saturé ou insaturé, dont la chaîne principale est constituée de 1 à 4 atomes de carbone et en option un ou deux hétéroatome(s) choisi(s) parmi les atomes d'azote et d'oxygène, ladite chaîne ne portant pas de substituant autre que des atomes d'hydrogène.
[00059] Dans ce mode de réalisation, de préférence la chaîne principale est constituée de 1 ou 2 atomes de carbone et en option un hétéroatome choisi parmi les atomes d'azote et d'oxygène, et plus préférentiellement la chaîne principale est constituée de 1 ou 2 atomes de carbone.
[00060] Selon un autre mode de réalisation préféré, le ou les agents solubilisants répondent à la formule (la) ci-avant dans laquelle ;
- Yi et Y2 désignent tous deux un atome d'hydrogène ;
X désigne un radical divalent ramifié, saturé ou insaturé, dont la chaîne principale est constituée de 1 à 4 atomes de carbone et en option un ou deux hétéroatome(s) choisi(s) parmi les atomes d'azote et d'oxygène, ladite chaîne portant un ou plusieurs substituant -L-Z tel que défini(s) ci-avant.
[00061] Dans ce mode de réalisation, de préférence la chaîne principale est constituée de 1 ou 2 atomes de carbone et en option un hétéroatome choisi parmi les atomes d'azote et d'oxygène, et plus préférentiellement la chaîne principale est constituée de 1 ou 2 atomes de carbone.
[00062] Dans ce mode de réalisation, selon une première variante préférée, la chaîne principale porte un ou plusieurs, et de préférence un, substituant(s) -L-Z, avec L désignant un groupement amide et Z désignant un radical linéaire ou ramifié, saturé ou insaturé, comprenant de 1 à 4 atomes de carbone pouvant en option porter un ou plusieurs groupement hydroxy (-OH) et/ou un groupement acide carboxylique salifié (-COOM" avec M" = Na+ ou K+).
[00063] Dans ce mode de réalisation, selon une seconde variante également préférée, la chaîne principale porte un ou plusieurs substituant(s) -L-Z, L désignant une simple liaison et Z désignant un groupement hydroxy (-OH) ; un groupement acide carboxylique salifié (-COOM' avec M' = Na+ ou K+) ; ou un radical linéaire ou ramifié, saturé ou insaturé, comprenant de 1 à 12 atomes de carbone et portant éventuellement un ou plusieurs groupements hydroxy (-OH) et/ou un groupement acide carboxylique salifié (-COOM" avec M" = Na+ ou K+) .
[00064] Dans cette seconde variante, de préférence Z désigne un groupement hydroxy (-OH ) ou un groupement acide carboxylique salifié (-COOM' avec M' = Na+ ou K+) . [00065] La chaîne principale du radical divalent X peut alors par exemple porter : un ou plusieurs groupement(s) hydroxy (-OH) ; ou
- un ou plusieurs groupements acide carboxylique salifié (-COOM') et de préférence un groupement acide carboxylique salifié; ou encore
un ou plusieurs groupements hydroxy (-OH) et un ou plusieurs groupements acide carboxylique salifié (-COOM') et de préférence un groupement hydroxy et un groupement acide carboxylique salifié.
[00066] Selon un autre mode de réalisation préféré le ou les agents solubilisants répondent à la formule (la) ci-avant dans laquelle :
- l'un au moins de Y] et Y2 désigne un groupement -OH, et de préférence Yi désigne un groupement -OH et Y2 désigne un atome d'hydrogène ;
X désigne un radical divalent linéaire, saturé ou insaturé, dont la chaîne principale est constituée de 1 à 4 atomes de carbone et en option un ou deux hétéroatome(s) cholsi(s) parmi les atomes d'azote et d'oxygène, ladite chaîne ne portant pas de substituant autre que des atomes d'hydrogène.
[00067] Dans ce mode de réalisation, de préférence la chaîne principale est constituée de 1 ou 2 atomes de carbone et en option un hétéroatome choisi parmi les atomes d'azote et d'oxygène, et plus préférentiellement la chaîne principale est constituée de 1 ou 2 atomes de carbone.
[00068] Selon un autre mode de réalisation préféré le ou les agents solubilisants répondent à la formule (la) ci-avant dans laquelle :
l'un au moins de Yi et Y2 désigne un groupement -OH, et de préférence Yi désigne un groupement -OH et Y2 désigne un atome d'hydrogène ;
X désigne un radical divalent ramifié, saturé ou insaturé, dont la chaîne principale est constituée de 1 à 4 atomes de carbone et en option un ou deux hétéroatome(s) choisi(s) parmi les atomes d'azote et d'oxygène, ladite chaîne portant un ou plusieurs substituant -L-Z tel que défini(s) ci-avant.
[00069] Dans ce mode de réalisation, de préférence la chaîne principale est constituée de 1 ou 2 atomes de carbone et en option un hétéroatome choisi parmi les atomes d'azote et d'oxygène, et plus préférentiellement la chaîne principale est constituée de 1 ou 2 atomes de carbone.
[00070] Dans ce mode de réalisation, selon une première variante préférée, la chaîne principale porte un ou plusieurs, et de préférence un, substituant(s) -L-Z, avec L désignant un groupement amide et Z désignant un radical linéaire ou ramifié, saturé ou insaturé, comprenant de 1 à 4 atomes de carbone pouvant en option porter un ou plusieurs groupement hydroxy (-OH) et/ou un groupement acide carboxylique salifié (-COOM" avec M" = Na+ ou K+). [00071] Dans ce mode de réalisation, selon une seconde variante également préférée, la chaîne principale porte un ou plusieurs substituant(s) -L-Z, L désignant une simple liaison et Z désignant un groupement hydroxy (-OH) ; un groupement acide carboxylique salifié (-COOM' avec M' = Na+ ou K+) ; ou un radical linéaire ou ramifié, saturé ou insaturé, comprenant de 1 à 12 atomes de carbone et portant éventuellement un ou plusieurs groupements hydroxy (-OH) et/ou un groupement acide carboxylique salifié (-COOM" avec M" = Na+ ou K+).
[00072] Dans cette seconde variante, de préférence Z désigne un groupement hydroxy (-OH) ou un groupement acide carboxylique salifié (-COOM' avec M' - Na+ ou K+).
[00073] La chaîne principale du radical divalent X peut alors par exemple porter : un ou plusieurs groupement(s) hydroxy (-OH) ; ou
un ou plusieurs groupements acide carboxylique salifié (-COOM') et de préférence un groupement acide carboxylique salifié; ou encore
- un ou plusieurs groupements hydroxy (-OH) et un ou plusieurs groupements acide carboxylique salifié (-COOM') et de préférence un groupement hydroxy et un groupement acide carboxylique salifié.
[00074] Selon un mode de réalisation également préféré de l'invention, le composé de formule (I) est issu d'un acide aminé naturel ou synthétique portant un cycle aromatique.
[00075] Parmi les acides aminés naturels, on préfère tout particulièrement employer les alpha-acide aminés tels que la phénylalanine, la tyrosine et le tryptophane.
[00076] Selon un mode de réalisation particulièrement préféré, le composé de formule (I) est issu de la phénylalanine.
[00077] Selon un mode de réalisation particulièrement préféré, le composé de formule (I) est issu du tryptophane.
[00078] Selon un mode de réalisation le composé de formule (I) est issu d'un acide aminé aminé synthétique et dans un mode de réalisation l'acide aminé synthétique est la phénylglycine.
[00079] Les acides aminés peuvent être employés sous forme de l'un ou l'autre de leurs isomères optiques (formes L ou D), ou sous forme d'un mélange de tels isomères et notamment sous forme de racémate.
[00080] De préférence, l'agent solubilisant selon l'invention est issu d'un acide aminé dont le groupement aminé a été transformé en un groupement choisi parmi un groupement amide, un groupement carbamate ou un groupement urée ou substitué. [00081] Ledit groupement amide, carbamate ou urée peut être relié à un atome d'hydrogène ou à un substituant hydrocarboné contenant de 1 à 6 atomes de carbone et éventuellement un ou plusieurs atomes d'oxygène.
[00082] Lorsque la fonction aminé est substituée, elle peut être substituée par un substituant choisi dans le groupe constitué par les hydroxycarboxyl en C2 à C4, notamment le groupe hydroxyacétyl.
[00083] De préférence, l'agent solubilisant et notamment le composé de formule (I) est issu d'un acide aminé dont le groupement aminé a été transformé en un groupement amide. De préférence, ledit groupement amide est substituée par un radical hydrocarboné contenant de 1 à 6, et de préférence de 1 à 4 atomes de carbone, et pouvant en option porter un ou plusieurs groupement hydroxy (-OH).
[00084] Deux composés particulièrement préférés sont la N -hydroxyacétyl - phénylalanine et le N-hydroxyacétyl-tryptophane, répondant aux formules suivantes ;
Figure imgf000013_0001
et employés sous forme de sel de sodium ou de potassium.
[00085] Selon un mode de réalisation également préféré, l'agent solubilisant et notamment le composé de formule (I) est issu d'un phénol.
[00086] La composition selon l'invention comprend avantageusement le ou les agents(s) solubilisant(s) tels que décrits ci-avant en une concentration totale comprise entre 1 g/L et 100 g/L. [00087] L'invention concerne également un procédé de solubilisation dans l'eau d'une ou plusieurs protéine(s) caractérisé en ce qu'au moins un agent solubilisant choisi dans le groupe constitué par les composés anioniques de structure non saccharidique dont ladite structure contient au moins un noyau aromatique comprenant au moins 6 chaînons (6 atomes) et au moins un groupement acide carboxylique sous forme salifiée, et qui présente sous sa forme acide une masse molaire compris entre 130 et 500 g/mol, est additionné à une composition aqueuse de protéine pour solubiliser la protéine. [00088] L'invention concerne également une utilisation, afin d'améliorer la solubilisation d'une ou plusieurs protéine(s) au sein d'une composition aqueuse, d'au moins un agent solubilisant choisi dans le groupe constitué par les composés anioniques de structure non saccharidique dont ladite structure contient au moins un noyau aromatique comprenant au moins 6 chaînons (6 atomes) et au moins un groupement acide carboxylique sous forme salifiée, et qui présente sous sa forme acide une masse molaire compris entre 130 et 500 g/mol.
[00089] Les modes de réalisation suivants s'appliquent à la fois au procédé de solubilisation d'une ou plusieurs protéine(s) au sein d'une composition aqueuse et/ou à l'utilisation.
[00090] Dans un mode de réalisation, le procédé ou l'utilisation selon l'invention est caractérisé en ce qu'au moins un agent solubilisant répond à la formule générale (I) suivante :
Figure imgf000014_0001
avec :
Ar désignant un noyau aromatique comprenant au moins 6 chaînons ;
X désignant un radical divalent linéaire ou ramifié, saturé ou insaturé, dont la chaîne principale est constituée de 1 à 4 atome(s) de carbone et éventuellement 1 ou 2 hétéroatome(s) choisi(s) parmi les atomes d'azote et d'oxygène, ladite chaîne principale pouvant en option porter un ou plusieurs substituant(s) ;
- Yl et Y2 désignant, indépendamment l'un de l'autre : un atome d'hydrogène ; un groupement -OH ; un groupement -OR1 avec RI désignant un radical alkyle contenant de 1 à 6 atome(s) de carbone ou un radical hydroxyalkyle contenant de 1 à 6 atome(s) de carbone ; et de préférence Yl et Y2 désignent, indépendamment l'un de l'autre, un atome d'hydrogène ou un groupement - OH ; et
M désignant un cation tel que notamment Na+ ou K+ .
[00091 ] Dans un mode de réalisation, le procédé ou l'utilisation selon l'invention est caractérisé en ce que dans la formule (I), Ar désigne un noyau benzénique ou un noyau indole. [00092] Dans un mode de réalisation, le procédé ou l'utilisation selon l'invention est caractérisé en ce que le ou les agents solubilisants répondent à la formule (la) suivante :
Figure imgf000015_0001
avec ;
X désignant un radical divalent linéaire ou ramifié, saturé ou insaturé, dont la chaîne principale est constituée de 1 à 4 atome(s) de carbone et éventuellement 1 ou 2 hétéroatome(s) choisi(s) parmi les atomes d'azote et d'oxygène, ladite chaîne principale pouvant en option porter un ou plusieurs substituant(s) ;
Yl et Y2 désignant, indépendamment l'un de l'autre : un atome d'hydrogène ; un groupement -OH ; un groupement -OR1 avec RI désignant un radical alkyle contenant de 1 à 6 atome(s) de carbone ou un radical hydroxyalkyle contenant de 1 à 6 atome(s) de carbone ; et de préférence Yl et Y2 désignent, indépendamment l'un de l'autre, un atome d'hydrogène ou un groupement - OH ; et
M désignant un cation tel que notamment Na+ ou K+.
[00093] Dans un mode de réalisation, le procédé ou l'utilisation selon l'invention est
caractérisé en ce que le ou les agents solubilisants répondent à la formule (Ib) suivante :
Figure imgf000015_0002
X désignant un radical divalent linéaire ou ramifié, saturé ou insaturé, dont la chaîne principale est constituée de 1 à 4 atome(s) de carbone et éventuellement 1 ou 2 hétéroatome(s) choisi(s) parmi les atomes d'azote et d'oxygène, ladite chaîne principale pouvant en option porter un ou plusieurs substituant(s) ; - Yl et Y2 désignant, indépendamment l'un de l'autre : un atome d'hydrogène ; un groupement -OH ; un groupement -OR1 avec RI désignant un radical alkyle contenant de 1 à 6 atome(s) de carbone ou un radical hydroxyalkyle contenant de 1 à 6 atome(s) de carbone ; et de préférence Yl et Y2 désignent, indépendamment l'un de l'autre, un atome d'hydrogène ou un groupement -
OH ; et
M désignant un cation tel que notamment Na+ ou K+.
[00094] Dans un mode de réalisation, le procédé ou l'utilisation selon l'invention est caractérisé en ce que dans les formule (I), (la) ou (Ib) le radical divalent X porte sur sa chaîne principale un ou plusieurs substituant répondant à la formule générale :
-L-Z
avec :
L désigne une liaison simple ou un groupement choisi parmi un groupement amide -NHCO-, un groupement carbamate -NHCOO— ou un groupement urée -NHCONH-; et
Z désigne un groupement hydroxy (-OH) ; un radical linéaire ou ramifié, saturé ou insaturé, comprenant de 1 à 4 atomes de carbone, lesdits atomes de carbone portant au moins un groupement hydroxy -[CH2]x-[OH]Y ; un groupement acide carboxylique salifié (-COOM' avec M' = Na+ ou K+) ; ou un radical linéaire ou ramifié, saturé ou insaturé, comprenant de 1 à 12 atomes de carbone et éventuellement un ou plusieurs hétéroatomes tel que notamment un ou plusieurs atomes d'oxygène.
[00095] Dans un mode de réalisation, le procédé ou l'utilisation selon l'invention est caractérisé en ce que L désigne une liaison simple ou un groupement amide.
[00096] Dans un mode de réalisation, le procédé ou l'utilisation selon l'invention est caractérisé en ce que l'agent solubilisant est issu d'un acide aminé naturel ou synthétique portant un cycle aromatique, de préférence choisi parmi la phénylalanine, la ty rosi ne et le tryptophane, et plus préférentiellement la phénylalanine ou le tryptophane.
[00097] Dans un mode de réalisation, le procédé ou l'utilisation selon l'invention est caractérisé en ce que l'agent solubilisant est choisi dans le groupe constitué par la N-hydroxyacétyl-phénylalanine et le N-hydroxyacétyl-tryptophane, répondant aux formules suivantes :
Figure imgf000017_0001
employés sous forme sous forme de sel de sodium ou de potassium.
Dans un mode de réalisation, le procédé ou l'utilisation selon l'invention est caractérisé en ce que l'agent solubilisant est issu d'un phénol.
[00098] Dans un mode de réalisation, le procédé ou l'utilisation selon l'invention est caractérisé en ce que l'agent solubilisant est choisi parmi les composés suivants, employés sous forme sous forme de sels de sodium ou de potassium :
Nom Structure
Acide phénylacétique
Acide mandélique
Acide hydro-cinnamique
Acide trans-cinnamique
Acide 2-phénoxy- ropionique
Figure imgf000018_0001
Acide 3-phényl-lactique
Acide p ényl-succinique
Acide alpha-hydroxyhippurique
Figure imgf000018_0002
[00099] Dans un mode de réalisation, le procédé ou l'utilisation selon l'invention est caractérisé en ce que ladite composition aqueuse comprend le ou les agents(s) solubilisant(s) en une concentration totale comprise entre 1 g/L et 100 g/L.
[000100] Dans un mode de réalisation, le procédé ou l'utilisation selon l'invention est caractérisé en ce que ladite composition aqueuse contient une concentration totale en protéine(s) comprise entre 0,5 et 400 mg/mL, de préférence entre 50 et 350 mg/mL
[000101] Dans un mode de réalisation, le procédé ou l'utilisation selon l'invention est caractérisé en ce que le ratio molaire entre la quantité totale d'agent(s) solubilisant(s) et la quantité totale de protéine(s) dans la composition est supérieur ou égal à 20, de préférence supérieur ou égal à 35, plus préférentiellement supérieur ou égal à 45, encore plus préférentiellement supérieur ou égal à 100, plus préférentiellement supérieur ou égal à 150, et mieux encore supérieur ou égal à 200.
[000102] Dans un mode de réalisation, le procédé ou l'utilisation selon l'invention est
caractérisé en ce que ladite composition aqueuse est destinée à être administrée par injection intraveineuse, par injection sous-cutanée ou par injection intramusculaire, et de préférence par injection sous-cutanée.
[000103]
[000104]
[000105] La composition selon l'invention contient également une ou plusieurs protéine(s).
[000106] Par protéine, on désigne de manière connue en soi une macromolécule composée d'une ou plusieurs chaînes d'acides aminés liés entre eux par des liaisons peptidiques.
[000107] Les protéines mises en œuvre dans l'invention peuvent être d'origine naturelle ou synthétique.
[000108] L'invention convient tout particulièrement à la solubilisation de protéines contenant au moins 10, et de préférence au moins 50 acides aminés.
[000109] De préférence, les protéines intervenant dans la présente invention présentent un point isoélectrique compris entre 4 et 9, plus préférentiellement entre 4,5 et 8,5, et plus particulièrement entre 5,5 et 8.
[000110] L'invention s'applique tout particulièrement à des protéines qui présentent à leur point isoélectrique une diminution de leur solubilité maximale dans l'eau d'au moins 2%, de préférence au moins 5%, voire au moins 10%. Pour de telles protéines, on constate notamment par simple observation visuelle qu'une solution aqueuse les contenant passe de limpide à trouble, lorsque le pH de la solution approche le point isoélectrique de la protéine. [000111] Selon un mode de réalisation préféré de l'invention, la ou les protéines sont choisies parmi les protéines thérapeutiques.
[000112] Selon un mode de réalisation préféré de l'invention, la ou les protéines sont choisies parmi les protéines contenant au moins un fragment d'anticorps.
[000113] On entend par « protéine comprenant au moins un fragment d'anticorps » une protéine choisie parmi les anticorps monoclonaux (mAbs), les anticorps polyclonaux, les protéines de fusion, les nanobodies, les anticorps bispécifiques et les anticorps couplés à des principes actifs cytotoxiques (ADC).
[000114] Selon un mode de réalisation de la présente invention, la protéine comportant au moins un fragment d'anticorps est un anticorps monoclonal.
[000115] On entend par « anticorps monoclonal » un anticorps complet, un fragment d'anticorps ou un dérivé d'anticorps qui possède une spécificité identique et unique c'est à dire qui ne reconnaît qu'un seul type d'épitope sur un antigène donné.
[000116] Selon la présente invention, un anticorps monoclonal peut aussi être appelé immunoglobuline (ci-après Ig).
[000117] On entend par « anticorps complet » un anticorps composé de deux chaînes lourdes identiques (" CH ") et de deux chaînes légères identiques (" CL ") qui sont liées par un pont disulfure. Chaque chaîne est constituée, en position N- terminale, d'une région (ou domaine) variable (codée par les gènes réarrangés V-3 pour les chaînes légères et V-D-J pour les chaînes lourdes) spécifique de l'antigène contre lequel l'anticorps est dirigé, et en position C-terminale, d'une région constante, constituée d'un seul domaine CL pour les chaînes légères ou de plusieurs domaines pour les chaînes lourdes. Chaque région variable comprend trois segments appelés " régions déterminant la complémentarité " (" CDRs ") ou " régions hypervariables ", qui sont principalement responsables de la liaison à l'épitope d'un antigène. Les deux chaînes lourdes (H, Heavy) et les deux chaînes légères (L, Light) sont identiques entre elles. La chaîne légère est composée de 2 domaines, un domaine variable V et un domaine constant C, repliés indépendamment l'un de l'autre dans l'espace. On les appelle VL et CL. La chaîne lourde comporte également un domaine V noté VH et 3 ou 4 domaines C noté de CH 1 à CH4. Chaque domaine comprend environ 110 acides aminés et est structuré de manière comparable. Les 2 chaînes lourdes sont liées par des ponts disulfures et chaque chaîne lourde est liée à une chaîne légère par un pont disulfure également. La région qui détermine la spécificité de l'anticorps pour l'antigène est portée par les parties variables, alors que les parties constantes peuvent interagir avec les récepteurs Fc des cellules effectrices ou des molécules comme le complément pour médier différentes propriétés fonctionnelles. Le terme " VH " fait référence aux régions variables d'une chaîne lourde d'immunoglobuline d'un anticorps, incluant les chaînes lourdes d'un fragment Fv, scFv, dsFv, Fab, Fab' ou F(ab)'. Le terme " VL " fait référence aux régions variables d'une chaîne légère d'immunoglobuline d'un anticorps, incluant les chaînes légères d'un fragment Fv, scFv, dsFv, Fab, Fab' ou F(ab)'. Par " régions CDR ou CDRs ", on entend désigner les régions hypervariables des chaînes lourdes et légères des immunoglobulines comme définies par Kabat et al. (Kabat et al., Séquences of proteins of immunological interest, 5t" Ed., U.S. Department of Health and Human Services, NIH, 1991 , and later éditions). I! existe 3 CDRs de chaîne lourde et 3 CDRs de chaîne légère. Le terme CDR ou CDRs est utilisé ici pour désigner suivant les cas, l'une de ces régions ou plusieurs, voire l'ensemble, de ces régions qui contiennent la majorité des résidus d'acides aminés responsables de la liaison affine de l'anticorps pour l'antigène ou l'épitope qu'il reconnaît. Les régions les plus conservées des domaines variables sont appelées régions ou séquences FR pour " framework " ou régions " charpentes" au nombre de 4 (FR 1 à FR4).
[000118] Les anticorps sont subdivisés en 5 classes ou isotypes : IgG, IgA, IgM, IgE et IgD selon la structure des domaines constants des chaînes lourdes, i.e. respectivement chaînes γ, α, μ, ε et δ.
[000119] Les classes des IgG et des IgA sont par ailleurs subdivisées en sous- classes selon notamment la taille des régions charnières ainsi que le nombre et la position de ponts disulfures entre chaînes lourdes.
[000120] La classe des IgG est subdivisée en 4 sous-classes i.e. IgGl, IgG2, IgG3 et IgG4.
[000121] La classe des IgA est quant à elle subdivisée en 2 sous-classes i.e. IgAl et IgA2.
[000122] De préférence, la protéine comportant au moins un fragment d'anticorps est un anticorps monoclonal choisi parmi les IgG, les IgA, les IgM, les IgE et les IgD. Les IgA peuvent être choisies parmi les IgAl et les IgA2, et les IgG peuvent être choisis parmi les IgGl, les IgG2, les IgG3 et les IgG4.
[000123] Dans un mode de réalisation, l'anticorps monoclonal est un IgG.
[000124] Dans un mode de réalisation, l'anticorps monoclonal est un IgA.
[000125] Dans un mode de réalisation, l'anticorps monoclonal est un IgM.
[000126] Dans un mode de réalisation, l'anticorps monoclonal est un IgE.
[000127] Dans un mode de réalisation, l'anticorps monoclonal est un IgD.
[000128] Dans un mode de réalisation, l'anticorps monoclonal est un IgGl .
[000129] Dans un mode de réalisation, l'anticorps monoclonal est un IgG2.
[000130] Dans un mode de réalisation, l'anticorps monoclonal est un IgG3.
[000131] Dans un mode de réalisation, l'anticorps monoclonal est un IgG4.
[000132] Dans un mode de réalisation, l'anticorps monoclonal est un IgAl.
[000133] Dans un mode de réalisation, l'anticorps monoclonal est un IgA2. [000134] On entend par « fragment d'anticorps » tout fragment fonctionnel d'anticorps e.g. Fab (Fragment antigen binding), Fv, scFv (single chain Fv), Fc (Fragment cristallisable), F(ab') 2, Fab', scFv-Fc, des polypeptides synthétiques contenant les séquences d'un ou de CDRs, qui possèdent généralement la même spécificité de fixation que l'anticorps dont ils sont issus.
[000135] Les fragments d'anticorps employés dans l'invention peuvent être obtenus à partir des anticorps par des méthodes telles que la digestion par des enzymes, comme la pepsine ou la papaïne et/ou par clivage des ponts disulfures par réduction chimique. La digestion enzymatique des anticorps par la papaïne génère 2 fragments identiques, qu'on appelle « fragment Fab (Fragment Antigen Binding), et un fragment Fc (fragment cristallisable). Le fragment Fc est le support des fonctions effectrices des immunoglobulines. Par digestion à la pepsine, un fragment F (ab') 2 est généré, où les deux fragments Fab restent liés par deux ponts disulfure, et le fragment Fc est scindé en plusieurs peptides. Le fragment F (ab') 2 est formé de deux fragments Fab', liés par des ponts disulfure intercaténaires pour former un F(ab')2.
[000136] Ainsi, le ou les anticorps monoclonaux selon l'invention peuvent avantageusement contenir un ou plusieurs de ces fragments, et toutes les combinaisons entre les fragments précédemment cités peuvent être utilisés dans le cadre de la présente invention.
[000137] On entend par « dérivé d'anticorps » tout anticorps, cet anticorps pouvant comprendre une ou plusieurs mutations, substitutions, délétions et/ou additions d'un ou plusieurs résidus d'acides aminés. Un tel ajout, substitution ou délétion peut être localisé à n'importe quelle position dans la molécule. Dans le cas où plusieurs acides aminés ont été ajoutés, substitués ou délétés, toute combinaison d'ajout, de substitution ou de délétion peut être considérée, à condition que l'anticorps résultant présente toujours au moins les propriétés avantageuses de l'anticorps de l'invention.
[000138] Selon l'invention, l'anticorps monoclonal peut avantageusement être un anticorps chimérique ou un anticorps humanisé. Par « anticorps chimérique » on entend un anticorps dont les régions variables des chaînes légères et lourdes, ou au moins un domaine ou fragment de ces régions, appartiennent à une espèce différente de l'espèce à laquelle appartiennent les régions constantes des chaînes légères et des chaînes lourdes. Par « anticorps humanisé » on entend un anticorps qui contient principalement des séquences immunoglobuline humaines. Ce terme fait généralement référence à une immunoglobuline non humaine qui a été modifiées par incorporation de séquences humaines ou de résidus trouvés dans des séquences humaines.
[000139] Les anticorps décrits ci-avant peuvent par exemple être obtenus en utilisant les techniques standard de l'ADN recombinant, bien connues de l'homme du métier, par exemple en utilisant les techniques de construction des anticorps chimériques décrites par exemple dans Morrison et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S. A., 81, pp. 6851-55 (1984), où la technologie de l'ADN recombinant est utilisée pour remplacer la région constante d'une chaîne lourde et/ou la région constante d'une chaîne légère d'un anticorps provenant d'un mammifère non-humain avec les régions correspondantes d'une immunoglobuline humaine. De tels anticorps et leur mode de préparation ont également été décrits dans la demande de brevet EP 173 494, dans le document Neuberger, M. S. et al., Nature 312 (5995) : 604-8 (1985), ainsi que dans le document EP 125 023 par exemple. Des méthodes pour générer des anticorps chimériques sont largement disponibles pour l'homme du métier. Par exemple, les chaînes lourdes et légères de l'anticorps peuvent être exprimées séparément en utilisant un vecteur pour chaque chaîne, ou bien être intégrées dans un seul vecteur.
[000140] A titre d'exemple on citera parmi les anticorps monoclonaux commercialisés les anticorps monoclonaux suivants : le Muromonab-CD3 (commercialisé sous le nom de Orthoclone Okt3®), l'Abciximab (commercialisé sous le nom de Reopro®), le Rituximab (commercialisé sous les noms de MabThera® et Rituxan®), le Basiliximab (commercialisé sous le nom de Simulect®), le Daclizumab (commercialisé sous le nom de Zenapax®), le Palivizumab (commercialisé sous le nom de Synagis®), l'Infliximab (commercialisé sous le nom de Remicade®), le Trastuzumab (commercialisé sous le nom de Herceptin®), l'Alemtuzumab (commercialisé sous les noms de MabCampath®, Campath-1H®), l'Adalimumab (commercialisé sous le nom de Humira®), le Tositumomab-1131 (commercialisé sous le nom de Bexxar®), l'Efalizumab (commercialisé sous le nom de Raptiva®), le Cetuximab (commercialisé sous le nom de Erbitux®), l'Ibritumomab tiuxetan (commercialisé sous le nom de Zevalin®), l'Omalizumab (commercialisé sous le nom de Xolair®), le Bevacizumab (commercialisé sous le nom de Avastin®), le Natalizumab (commercialisé sous le nom de Tysabri®), le Ranibizumab (commercialisé sous le nom de Lucentis®), le Panitumumab (commercialisé sous le nom de Vectibix®), l'Eculizumab (commercialisé sous le nom de Soliris®), le Certolizumab pegol (commercialisé sous le nom de Cimzia®), le Golimumab (commercialisé sous le nom de Simponi®), le Canakinumab (commercialisé sous le nom de Ilaris®), le Catumaxomab (commercialisé sous le nom de Removab®), l'Ustekinumab (commercialisé sous le nom de Stelara®), le Tocilizumab (commercialisé sous les noms de RoActemra®, et Actemra®), ofatumumab (commercialisé sous le nom de Arzerra®), le Denosumab (commercialisé sous le nom de Prolia®), le Belimumab (commercialisé sous le nom de Benlysta®), le Raxibacumab (pas encore commercialisé), l'Ipilimumab (commercialisé sous le nom de Yervoy®)et le Pertuzumab (commercialisé sous le nom de Perjeta®).
[000141] Selon un mode de réalisation de la présente invention, la protéine comportant au moins un fragment d'anticorps est un anticorps polyclonal. [000142] On entend par « anticorps polyclonal » un mélange d'anticorps complets, un mélange de fragments d'anticorps ou un mélange de dérivés d'anticorps tel que décrits ci-avant, reconnaissant différents types d'épitopes sur un antigène donné.
[000143] Selon un mode de réalisation de la présente invention, la protéine comportant au moins un fragment d'anticorps est une protéine de fusion.
[000144] On entend par « protéine de fusion » une construction qui renferme plusieurs protéines ou polypeptides d'origine différente. Cette protéine de fusion est codée par un acide nucléique obtenu par les technologies d'ADN recombinant bien connues de l'homme du métier. Selon la présente invention, la protéine de fusion est constituée par un fragment d'anticorps monoclonal tel que précédemment décrit et un fragment d'une protéique d'intérêt.
[000145] A titre d'exemple on citera la protéine de fusion constituée par un fragment d'anticorps monoclonal qui est la région Fc d'une immunoglobuline IgGl et un fragment d'une protéine d'intérêt qui est le domaine extra-cellulaire du récepteur de protéine CTLA-4 (Cytotoxic T-Lymphocyte Antigen 4), cette protéine de fusion i.e. abatacept, étant commercialisée sous le nom d'Orencia®.
[000146] A titre d'exemple on citera également la protéine de fusion constituée par un fragment d'anticorps monoclona! qui est la région Fc d'une IgGl et un fragment d'une protéine d'intérêt qui est la fraction P75 du récepteur soluble du TNF-alpha, cette protéine de fusion i.e. etanercept étant commmercialisée sous le nom Enbrel®.
[000147] A titre d'exemple on citera également la protéine de fusion constituée par un fragment d'anticorps monoclonal qui est la région Fc d'une IgGl et un fragment d'une protéine d'intérêt qui sont les portions extracellulaires de I'IL-1 1 (interleukin-1 receptor component) et de IL-lRAcP (IL-1 receptor accessory protein), cette protéine de fusion i.e. rilonacept étant commercialisée sous le nom de Arcalyst®.
[000148] A titre d'exemple on citera également la protéine de fusion constituée par un fragment d'anticorps monoclonal qui sont les régions IgGl charnière, C(H)2 et C(H)3, et un fragment d'une protéine d'intérêt qui est le domaine extracellulaire de LFA-3, cette protéine de fusion i.e. alefacept étant commercialisée sous le nom d'Amevive®.
[000149] Selon un mode de réalisation de la présente invention, la protéine comportant au moins un fragment d'anticorps est un nanobody.
[000150] On entend par « nanobody » tout domaine variable unique de chaînes lourdes d 'immunoglobuline. Les nanobodies sont plus largement décrits dans la publication D. Saerens and S. Muyldermans (eds.) Single Domain Antibodies : Methods and Protocols, Methods in Molecular Biology, vol. 911; et Med Microbiol Immunol (2009). [000151] Selon un mode de réalisation de la présente invention, la protéine comportant au moins un fragment d'anticorps est un anticorps bispécifique.
[000152] On entend par « anticorps bispécifique » (aussi appelé anticorps bifonctionnel ou « diabody ») tout fragment d'immunoglobuline comprenant 2 sites de présentation à l'antigène. Les anticorps bifonctionnels sont plus largement décrits dans la publication Hollinger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90: 6444-6448 (1993).
[000153] Selon un mode de réalisation de la présente invention, la protéine comportant au moins un fragment d'anticorps est un anticorps couplé à un principe actif cytotoxique.
[000154] On entend par « anticorps couplé à un principe actif cytotoxique » un anticorps monoclonal tel que précédemment décrit couplé à un principe actif cytotoxique.
[000155] A titre d'exemple de principe actif cytotoxique, on citera notamment vedotin.
[000156] Un exemple d'anticorps couplé à un principe actif cytotoxique est l'anticorps brentuximab couplé au principe actif cytotoxique vedotin. Cet anticorps couplé à ce principe actif cytotoxique est commercialisé sous le nom d'Adcetris®.
[000157] Selon un mode de réalisation également préféré de l'invention, la ou les protéine(s) sont choisies parmi les hormones.
[000158] L'on peut citer en particulier : l'insuline ; les facteurs de croissance tels que les BMP (de l'anglais « Bone Morphogenetic Protein »), les PDGF (de l'anglais « Platelet-Derived Growth Factor »), les facteurs de coagulation, les hormones para- thyroïdiques.
[000159] La ou les protéines sont présentes dans la composition selon l'invention sous forme solubilisée.
[000160] D'une manière générale, la composition selon l'invention contient une concentration totale en protéine(s) comprise entre 0,5 et 400 mg/mL.
[000161] De préférence, la concentration totale en protéine(s) est comprise entre 50 et 350 mg/mL, en particulier entre 80 et 250 mg/mL, de préférence entre 80 et 200 mg/mL, plus préférentiellement entre 100 et 200 mg/mL, mieux entre 120 et 200 mg/mL, et mieux encore entre 120 et 180 mg/mL.
[000162] Selon un mode de réalisation particulièrement avantageux de l'invention, la concentration de la protéine dans la composition est supérieure à la concentration maximale de la même protéine en solution aqueuse à son point isoélectrique, à une température de 25°C.
[000163] Typiquement, la protéine est présente dans la composition une osmolalité inférieure ou égale à 700 mosmol/L, notamment inférieure ou égale à 500 mosmol/L, voire inférieure ou égale à 350 mosmol/L. [000164] Typiquement, la protéine est présente dans la composition une osmolalité supérieure ou égale à 50 mosmol/L, notamment supérieure ou égale à 200 mosmol/L, voire supérieure ou égale à 250 mosmol/L.
[000165] Typiquement, la protéine est présente dans la composition une osmolalité comprise entre 150 et 700 mosmol/L, notamment comprise entre 200 et 500 mosmol/L, voire comprise entre 250 et 350 mosmol/L.
[000166] L 'osmolalité peut être mesurée par un appareil Foske Micro-Osmometer - Model 210.
[000167] En outre, le ratio molaire entre la quantité totale d'agent(s) solubilisant(s) et la quantité totale de protéine(s) dans la composition est avantageusement supérieur ou égal à 20, de préférence supérieur ou égal à 35, et plus préférentiellement supérieur ou égal à 45.
[000168] Plus particulièrement, le ratio molaire entre la quantité totale d'agent(s) solubilisant(s) et la quantité totale de protéine(s) dans la composition est supérieur ou égal à 100, de préférence supérieur ou égal à 150, et plus préférentiellement supérieur ou égal à 200.
[000169] La composition selon l'invention comprend un milieu aqueux, c'est-à-dire qu'elle comprend de l'eau comme composant principal. Avantageusement, la composition comprend plus de 50% en poids d'eau, de préférence au moins 70% en poids d'eau, plus préférentiellement au moins 80% en poids d'eau et mieux encore au moins 90% en poids d'eau, par rapport à son poids total.
[000170] L'eau employée dans la composition peut notamment être une eau stérile pour injection ou une eau bactériostatique pour injection.
[000171] D'une manière générale, le pH de la composition selon l'invention peut aller de 4 à 8.
[000172] Selon un mode de réalisation de l'invention, le pH de la composition est compris entre 5 et 6,5.
[000173] Selon un autre mode de réalisation, le pH est compris entre 5 et 8, de préférence entre 6 et 7,5, et plus préférentiellement entre 6 et 7.
[000174] Le pH de la composition peut être ajusté de manière connue en soi par l'ajout d'acides, de bases et/ou de systèmes tampon, de préférence pharmaceutiquement acceptables.
[000175] La composition selon l'invention présente avantageusement une viscosité, mesurée à 25°C et à pression atmosphérique, inférieure ou égale à 20 cP.
[000176] Selon un mode de réalisation, la composition selon l'invention comprend un ou plusieurs acide(s) pharmaceutiquement acceptable(s).
[000177] Ces acides peuvent en particulier être choisis parmi l'acide hydrochlorique, l'acide phosphorique, l'acide citrique, l'acide acétique, l'acide ascorbique, l'acide éthylène diamine tétraacétique (appelé aussi EDTA), l'acide tartrique.
[000178] Selon un mode de réalisation, la composition selon l'invention comprend une ou plusieurs base(s) pharmaceutiquement acceptable(s).
[000179] Ces bases peuvent en particulier être choisies parmi les bases inorganiques formées à partir des métaux tels que le sodium, le potassium, le calcium, le magnésium, et notamment dans le groupe constitué par la soude (NaOH), la potasse (KOH), l'hydroxyde de magnésium (Mg(OH)2) .
[000180] Additionnellement, les acides et/ou bases pharmaceutiquement acceptables incluent ceux ou celles dérivés d'acides aminés comme par exemple l'histidine, l'arginine ou la glycine.
[000181] Selon un mode de réalisation, la composition selon l'invention comprend un système tampon pharmaceutiquement acceptable. Ces systèmes tampons pharmaceutiquement acceptables incluent ceux qui sont dérivés des sels des acides et des bases précédemment citées ou de la combinaison de ces derniers.
[000182] Le système tampon peut notamment être choisi parmi les associations suivantes: phosphate de sodium monobasique (appelé aussi phosphate monosodique)/phosphate de sodium dibasique (appelé aussi phosphate disodique), phosphate de potassium monobasique (appelé aussi phosphate monopotassique)/phosphate de sodium dibasique (appelé aussi phosphate disodique)/sel de sodium, acide acétique/acétate de sodium, acide citrique/citrate de sodium, hydrochlorate de L-histidine/histidine, hydrochlorate de glycine/glycine.
[000183] La composition selon l'invention peut comprendre en outre un ou plusieurs sel(s) inorganique(s), de préférence choisis parmi les sel(s) inorganique(s) pharmaceutiquement acceptables.
[000184] De tels sels peuvent notamment être choisis parmi le chlorure de sodium, le chlorure de potassium et le chlorure d'étain(II).
[000185] La composition selon l'invention peut comprendre la ou les protéines comme seul actif thérapeutique. Elle peut également comprendre, en plus de la ou des protéines, d'autres actifs thérapeutiques.
[000186] La composition selon l'invention peut comprendre en outre tout additif, adjuvant ou excipient, de préférence pharmaceutiquement acceptable.
[000187] L'homme de l'art veillera à choisir ce ou ces éventuels composés et/ou actifs complémentaires de manière telle que les propriétés avantageuses attachées intrinsèquement à la composition selon l'invention ne soient pas, ou substantiellement pas, altérées par la ou les adjonctions envisagées. [000188] De tels additifs peuvent être en général présents en quantité comprise pour chacun d'entre eux entre 0 et 10% en poids par rapport au poids total de la composition.
[000189] En particulier, la composition selon l'invention peut comprendre en outre au moins un agent conservateur.
[000190] Le ou les agents conservateurs peuvent notamment être choisis parmi l'alcool benzylique, le phénol, le m-crésol et la povidone.
[000191] La composition selon l'invention peut comprendre en outre au moins un tensio-actif.
[000192] Le ou les tensio-actifs peuvent être par exemple choisis parmi le polysorbate 20 (appelé aussi PS20 ou Tween20), le polysorbate 80 (appelé aussi PS80 Tween80), le Pluronic F-68, les « Brij » ainsi que les alkylglucosides tels que le n- dodecyl-â-D-maltoglucoside (DDM).
[000193] La composition selon l'invention peut comprendre en outre un agent lyoprotecteur et/ou un sucre pharmaceutiquement acceptable.
[000194] L'agent lyoprotecteur et le sucre pharmaceutiquement acceptable peuvent par exemple être choisis parmi α-tréhalose, le saccharose (appelé aussi sucrose), le maltose, le mannitol, le sorbitol, le dextran. L'on peut également employer comme agent lyoprotecteur incluent des acides aminés tels que l'histidine.
[000195] Selon un mode de réalisation particulièrement préféré, la composition selon l'invention est destinée à une utilisation thérapeutique, à usage humain ou animal.
[000196] La composition selon l'invention est alors une composition pharmaceutique ou vétérinaire, de préférence pharmaceutique.
[000197] Dans ce mode de réalisation, la composition selon l'invention est de préférence destinée à une administration par voie systémique. Il s'agit notamment d'une composition injectable, destinée à être administrée par exemple par injection intraveineuse, par injection sous-cutanée ou par injection intramusculaire, et plus préférentiellement par injection sous-cutanée.
[000198] De manière particulièrement préférée, la composition selon l'invention est destinée à une utilisation thérapeutique chez l'être humain.
[000199] La présente invention a également pour objet la composition telle que décrite ci-avant, pour son utilisation comme médicament.
[000200] Selon un mode de réalisation préférée, l'invention a pour objet la composition telle que décrite ci-avant, pour son utilisation pour prévenir et/ou traiter une ou plusieurs pathologies chez l'homme ou l'animal.
[000201] La composition est particulièrement utile pour traiter toutes les pathologies humaines impliquant l'administration au patient d'une ou plusieurs protéines thérapeutiques. En particulier, et de manière non limitative, la composition selon l'invention peut être utilisée pour traiter les diverses formes de cancer, les diabètes, les maladies auto-immunes, la maladie d'Alzheimer, la maladie de Crohn, les maladies cardiovasculaires, les anémies, les rejets de greffe, les scléroses, l'arthrite rhumatoïde.
[000202] La composition selon l'invention peut être préparée par simple mélange dans l'eau de ses ingrédients, sous agitation.
[000203] Elle peut être en particulier préparée en mélangeant dans l'eau le ou les agent(s) solubilisant(s) et la ou le protéine(s), à un pH de préférence différent du point isoélectrique de la ou des protéine(s) considérées. Le pH peut être ensuite ajusté si besoin.
[000204] L'invention concerne enfin l'utilisation, afin d'améliorer la solubilisation de protéines au sein d'une composition aqueuse, d'un agent solubilisant constitué d'un composé anionique de structure non saccharidique, qui contient au moins un noyau aromatique comprenant au moins 6 chaînons et au moins un groupement acide carboxylique sous forme salifiée, et qui présente sous sa forme acide une masse molaire comprise entre 130 et 500 g/mol.
[000205] Tout de qui a été décrit ci-avant concernant la composition selon l'invention s'applique par analogie à l'utilisation selon l'invention.
[000206] Les exemples suivants servent à illustrer l'invention sans toutefois présenter un caractère limitatif.
EXEMPLES ; Partie A : Synthèse
Exemple Al : molécule Al
[000207] La molécule Al ou N-(2-hydroxyacétyl-)-L-phénylalanine est obtenue à partir du méthyl ester de la L-phénylalanine, sel de chlorhydrate (Bachem) et de l'acide glycolique (Alfa Aesar) selon le procédé décrit dans l'article Pratt R.F. et al. Biochemistry, 2006, 45, 13074-13082.
Rendement: 7,5 g (77%)
RMN *Η (DMSO-d6, ppm) : 3,00-3,20 (2H) ; 3,80 (1H) ; 4,55 (1H) ; 5,60 (1H) ; 7,15- 7,50 (5H) ; 7,70 (1H) ; 12,90 (1H). Exemple Â2 : molécule A2
[000208] La molécule A2 ou N-(2-hydroxyacétyl-)-L-tryptophane est obtenue à partir du méthyl ester de la L-phénylalanine, sel de chlorhydrate (Bachem) et de l'acide glycolique (Alfa Aesar) selon le procédé décrit dans l'article Pratt R.F. et al. Biochemistry, 2006, 45, 13074-13082.
Rendement: 2,1 g (42%)
RMN lH (DMSO-d6, ppm) : 3,25 (2H) ; 3,80 (2H) ; 4,60 (1H) ; 5,55 (1H) ; 6,99-7,55 (5H) ; 7,65 (1H) ; 10,90 ( 1H) ; 12,75 (1H).
Préparation des solutions de composés utilisées dans les exemples
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Exemple Bl : Préparation d'une solution de la molécule Al à 315 mg/mL
[000209] La forme solide de la molécule Al est solubilisée dans l'hydroxyde de sodium à 1 mol/L, puis en ajoutant de l'hydroxyde de sodium à 10 mol/L, de sorte à obtenir une solution à 315 mg/mL à pH 5,1.
Exemple B2 : Préparation d'une solution de sucrose à 800 mM.
[000210] Le sucrose (CAS 57-50-1, Ref Sigma S3929) est solubilisé dans l'eau à la concentration de 800mM. Exemple B3 : Préparation d'une solution de L-histidine à 200 mM.
[000211] La L-histidine (CAS 71-00-1, Ref Sigma H6034) est solubilisée dans l'eau à la concentration de 200 mM. La solution obtenue possède un pH de 6,5. Exemple B4 ; Préparation de la solution d'acide mandélique à 1000 mM
[000212] L'acide mandélique (CAS 90-64-2, Ref Aldrich M2101) est solubilisé dans l'hydroxyde de sodium à 1 mol/L, puis en ajoutant de l'hydroxyde de sodium à 10 mol/L, de sorte à obtenir une solution à 1000 mM à pH 5, 1. Exemple B5 : Préparation de la solution d'acide acétique à lOOOmM
[000213] L'acide acétique (CAS 64-19-7, Ref Roth 3738.1) est dilué dans l'eau à 1000 mM.
Exemple B6 : Préparation de la solution d'acide phénylacétlque à 900 mM
[000214] L'acide phénylacétique (CAS 103-82-2, Ref Aldrich P16621) est solubilisé dans l'hydroxyde de sodium à 1 mol/L de sorte à obtenir une solution à 900 mM à pH 5,9.
Exemple B7 : Préparation de la solution d'acide 2-phénoxyproplonique à 1125 mM
[000215] L'acide 2-phénoxypropionique (CAS 940-31-8, Ref Aldrich 197149) est solubilisé dans l'hydroxyde de sodium à 1 mol/L, puis en ajoutant de l'hydroxyde de sodium à 10 mol/L de sorte à obtenir une solution à 1000 mM à pH 12,5. Exemple B8 : Préparation d'une solution de la molécule A2 à 315 mg/mL
[000216] La forme solide de la molécule A2 est solubilisée dans l'hydroxyde de sodium à 1 mol/L, puis en ajoutant de l'hydroxyde de sodium à 10 mol/L, de sorte à obtenir une solution à 315 mg/mL à pH 5, 1. Partie C : Solubilisatlon de protéines à leurs points Isoélectriques
Exemple Cl : Solubilisatlon de l'insuline humaine à son point isoélectrique
[000217] L'insuline humaine a un point isoélectrique (pi) de 5,3. Au pH de 5,3 l'insuline humaine précipite à une concentration supérieure ou égale à 10 Ul/ml. Un test de solubilité au pi de l'insuline humaine avec différents composés est exécuté. [000218] Une solution d'insuline humaine à 500 UI/mL est préparée. Des solutions de composés à différentes concentrations dans l'eau sont préparées comme décrit dans les exemples Bl à B4. Un mélange entre une solution d'insuline humaine et la solution de composé est effectué pour obtenir une solution contenant 100 UI/mL d'insuline humaine et la concentration désirée en composé. Le pH des différentes solutions est ajusté à pH 5,3 par ajout d'acide chlorhydrique ou d'hydroxyde de sodium en fonction du pH atteint à la suite du mélange entre le composé et la solution d'insuline humaine.
[000219] L'aspect de la solution est documenté. Si la solution est turbide, le composé à la concentration testée ne permet pas la solubilisation totale de l'insuline humaine à son point isoélectrique. Si la solution est limpide, le composé permet la solubilisation totale de l'insuline humaine à la concentration testée. En outre, les mélanges sont centrifugés à 4000 rpm pendant 10 minutes sur une centrifugeuse Hereaus Biofuge Pico (Rotor #3328) puis filtré sur 0,22 pm afin d'éliminer le précipité. Les fractions solubles ainsi obtenues sont ensuite dosées par RP-HPLC (Colonne: Sunfire C18, Waters ref : 186003417 ; Phase mobile : gradient de phosphate de sodium/acétonitrile; Détection : UV à 276 nm) avec une gamme d'insuline externe afin de quantifier le pourcentage d'insuline soluble au pl. Les résultats obtenus (aspect et pourcentages solubles) sont présentés dans le Tableau 1.
Figure imgf000032_0001
Tableau 1
[000220] Les exemples avec la molécule Al, la molécule A2 et avec l'acide mandélique (selon l'invention) démontrent une très forte amélioration de la solubilité de l'insuline humaine à son pl. En effet, ils conduisent à des solutions limpides d'insuline à son point isoélectrique avec une concentration en insuline supérieure à sa solubilité maximum au pl. Exemple C2 : Réduction de l'agrégation d'une formulation
d'immunoglobulines humaines (Nanogam) à son point isoélectrique.
[000221] La formulation Nanogam est une formulation d'immunoglobulines humaines à 50 mg/mL et à pH 4,3 contenant différents sous classes d'IgG (IgGl : 54- 70%, IgG2 : 29-45%, IgG3 : 1-4%, IgG4 : 0-0,5%, IgA : au maximum 6 Mg/mL). Le point isoélectrique de cette composition est d'environ 8,5. A ce pH de 8,5, les immunoglobulines ont tendance à s'agréger. Un test avec différents composés est donc exécuté au point isoélectrique afin d'identifier les composés permettent de réduire ce phénomène d'agrégation.
[000222] Une solution commerciale de Nanogam à 50 mg/mL est utilisée. Des solutions de composés à différentes concentrations sont préparées comme décrit dans les exemples Bl-2 et B3-B7. Un mélange entre la solution de Nanogam et une des solutions de composé est effectué pour obtenir une solution contenant 40 mg/mL d'immunoglobulines humaines et la concentration désirée en composé. Le pH des différentes solutions est ajusté à pH 8,5 par ajout d'acide chlorhydrique ou d'hydroxyde de sodium en fonction du pH atteint à la suite du mélange entre le composé d'intérêt et la solution d'immunoglobulines humaines.
[000223] Les mélanges sont ensuite analysés par diffusion de lumière sur un instrument Malvern NanoZS. Les résultats obtenus (intensités diffusées à 12,8° normalisée, c'est-à-dire Idiff 12,8° Mélange / Idiff 12,8° Nanogam à pH 4,3) sont présentés dans le Tableau 2.
[000224] Les intensités diffusées sont mesurées à 12.8°. Cet angle de mesure est sélectionné car il est sensible aux plus grosses nanoparticules/microparticules en suspension telles que les fibrilles qui apparaissent au point isoélectrique du Nanogam. Ici if f
Mélanges Ratio molaire Concentration en 12,8°
(COMPOSE/ ANOGAM) composé (mmol/L) normalisé
Contrôle - - 65,31 Nanogam
Composé Al 320 85 23.5
Acide mandélique 675 27,5 22,15
Acide 675 180 20,082 phénylacétique
Acide 2- 675 180 6,38 phénoxypropionique
Histidine 150 40 80,82
Acide acétique 675 180 200,18
Tableau 2
[000226] Les exemples avec la molécule Al, l'acide mandélique, l'acide phénylacétique et l'acide 2-phénoxypropionique montrent une très forte amélioration de la solubilité de Nanogam à son point isoélectrique. Alors que les exemples avec l'histidine et l'acide acétique ne démontrent pas d'amélioration de la solubilisation de Nanogam à son point isoélectrique.

Claims

REVENDICATIONS
1. Procédé de solubilisation dans l'eau d'une ou plusieurs protéine(s) caractérisé en ce qu'au moins un agent solubilisant choisi dans le groupe constitué par les composés anioniques de structure non saccharidique dont ladite structure contient au moins un noyau aromatique comprenant au moins 6 chaînons (6 atomes) et au moins un groupement acide carboxylique sous forme salifiée et qui présente sous sa forme acide une masse molaire compris entre 130 et 500 g/mol est additionné à une compostion aqueuse de protéine.
2. Utilisation, afin d'améliorer la solubilisation de protéines au sein d'une composition aqueuse, d'au moins un agent solubilisant choisi dans le groupe constitué par les composés anioniques de structure non saccharidique dont ladite structure contient au moins un noyau aromatique comprenant au moins 6 chaînons (6 atomes) et au moins un groupement acide carboxylique sous forme salifiée, et qui présente sous sa forme acide une masse molaire compris entre 130 et 500 g/mol.
3. Procédé ou utilisation, caractérisé en ce que l'agent solubilisant le ou les agents solubilisants répondent à la formule générale (I) suivante :
Figure imgf000035_0001
avec :
- Ar désignant un noyau aromatique comprenant au moins 6 chaînons ;
- X désignant un radical divalent linéaire ou ramifié, saturé ou insaturé, dont la chaîne principale est constituée de 1 à 4 atomes de carbone et éventuellement 1 ou 2 hétéroatomes choisis parmi les atomes d'azote et d'oxygène, ladite chaîne principale pouvant en option porter un ou plusieurs substituants ;
- Yi et Y2 désignant, indépendamment l'un de l'autre : un atome d'hydrogène ; un groupement -OH ; un groupement -ORi avec Ri désignant un radical alkyle contenant de 1 à 6 atomes de carbone ou un radical hydroxyaikyle contenant de 1 à 6 atomes de carbone ; et de préférence Yj. et Y2 désignent, indépendamment l'un de l'autre, un atome d'hydrogène ou un groupement - OH ; et M désignant un cation tel que notamment Na+ ou K+.
4. Procédé ou utilisation, selon la revendication 3, caractérisé en ce que dans la formule (1), Ar désigne un noyau benzénique ou un noyau indole.
5. Procédé ou utilisation selon la revendication 3 ou 4, caractérisé en ce que le ou les agents solubilisants répondent à la formule (la) suivante :
Figure imgf000036_0001
avec X, Yi, Y2 et M tels que définis dans la revendication 3.
6. Procédé ou utilisation selon la revendication 3 ou 4, caractérisé en ce que le ou les agents solubilisants répondent à la formule (Ib) suivante :
Figure imgf000036_0002
avec X, Ylf Y2 et M tels que définis dans la revendication 3.
7. Procédé ou utilisation selon l'une quelconque des revendications 3 à 6, caractérisé en ce que dans les formule (I), (la) ou (Ib) le radical divalent X porte sur sa chaîne principale un ou plusieurs substituant répondant à la formule générale :
-L-Z
- avec :
L désigne une liaison simple ou un groupement choisi parmi un groupement amide -NHCO-, un groupement carbamate -NHCOO— ou un groupement urée -NHCONH-; et
Z désigne un groupement hydroxy (-OH) ; un radical linéaire ou ramifié, saturé ou insaturé, comprenant de 1 à 4 atomes de carbone, lesdits atomes de carbone portant au moins un groupement hydroxy -[CH2]x-[OH]Y ; un groupement acide carboxylique salifié (-COOM' avec M' = Na+ ou K+) ; ou un radical linéaire ou ramifié, saturé ou insaturé, comprenant de 1 à 12 atomes de carbone et éventuellement un ou plusieurs hétéroatomes tel que notamment un ou plusieurs atomes d'oxygène.
8. Procédé ou utilisation selon la revendication 7, caractérisé en ce que L désigne une liaison simple ou un groupement amide.
9. Procédé ou utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 à 8, caractérisé en ce que l'agent solubilisant est issu d'un acide aminé naturel ou synthétique portant un cycle aromatique, de préférence choisi parmi la phénylalanine, la tyrosine et le tryptophane, et plus préférentiellement la phénylalanine.
10. Procédé ou utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 à 9, caractérisé en ce que l'agent solubilisant est choisi dans le groupe constitué par la N- hydroxyacétyl-phénylalanine et le N-hydroxyacétyl-tryptophane, répondant aux formules suivantes :
Figure imgf000037_0001
employés sous forme sous forme de sel de sodium ou de potassium.
11. Procédé ou utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 ou 2, caractérisé en ce que l'agent solubilisant est issu d'un phénol.
12. Procédé ou utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 ou 2, caractérisé en ce que l'agent solubilisant est choisi parmi les composés suivants, employés sous forme sous forme de sels de sodium ou de potassium :
Figure imgf000038_0001
13. Procédé ou utilisation selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce que ladite composition aqueuse comprend le ou les agents(s) solubilisant(s) en une concentration totale comprise entre 1 g/L et 100 g/L.
14. Procédé ou utilisation selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce que ladite composition aqueuse contient une concentration totale en protéine(s) comprise entre 0,5 et 400 mg/mL, de préférence entre 50 et 350 mg/mL.
15. Procédé ou utilisation selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce que le ratio molaire entre la quantité totale d'agent(s) solubilisant(s) et la quantité totale de protéine(s) dans la composition est supérieur ou égal à 20, de préférence supérieur ou égal à 35, plus préférentiellement supérieur ou égal à 45, encore plus préférentiellement supérieur ou égal à 100, plus préférentiellement supérieur ou égal à 150, et mieux encore supérieur ou égal à 200.
16. Procédé ou utilisation selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce que ladite composition aqueuse est destinée à être administrée par injection intraveineuse, par injection sous-cutanée ou par injection intramusculaire, et de préférence par injection sous-cutanée.
17. Composition liquide comprenant, dans un milieu aqueux, une ou plusieurs protélne(s) choisies parmi les protéines contenant au moins un fragment d'anticorps, et de préférence parmi les anticorps monoclonaux (mAbs), les anticorps polyclonaux, les protéines de fusion, les nanobodies, les anticorps bispécifiques et les anticorps couplés à des principes actifs cytotoxiques (ADC) et un ou plusieurs agent(s) solubilisant(s), caractérisée en ce que le ou les agents solubilisants répondent à la formule générale (I) suivante :
Figure imgf000039_0001
Ar désignant un noyau aromatique comprenant au moins 6 chaînons ;
X désignant un radical divalent linéaire ou ramifié, saturé ou insaturé, dont la chaîne principale est constituée de 1 à 4 atomes de carbone et éventuellement 1 ou 2 hétéroatomes choisis parmi les atomes d'azote et d'oxygène, ladite chaîne principale pouvant en option porter un ou plusieurs substituants ;
- Yi et Y2 désignant, indépendamment l'un de l'autre : un atome d'hydrogène ; un groupement -OH ; un groupement -OR avec Ri désignant un radical alkyle contenant de 1 à 6 atomes de carbone ou un radical hydroxyalkyle contenant de 1 à 6 atomes de carbone ; et de préférence Yi et Y2 désignent, indépendamment l'un de l'autre, un atome d'hydrogène ou un groupement - OH ; et
M désignant un cation tel que notamment Na+ ou K+.
18. Composition selon la revendication précédente, caractérisée en ce que dans la formule (I), Ar désigne un noyau benzénique ou un noyau indole.
19. Composition selon l'une des revendications 1 ou 2, caractérisée en ce que le ou les agents solubilisants répondent à la formule (la) suivante :
Figure imgf000040_0001
avec X, Yi, Y2 et M tels que définis dans la revendication 3.
20. Composition selon l'une des revendications 1 ou 2, caractérisée en ce que le ou les agents solubilisants répondent à la formule (Ib) suivante :
Figure imgf000040_0002
avec X, Ylf Y2 et M tels que définis dans la revendication 3.
21. Composition selon l'une des revendications 1 à 5, caractérisée en ce que dans les formule (I), (la) ou (Ib) le radical divalent X porte sur sa chaîne principale un ou plusieurs substituant répondant à la formule générale : -L-Z
avec :
L désigne une liaison simple ou un groupement choisi parmi un groupement amide -NHCO-, un groupement carbamate -NHCOO— ou un groupement urée -NHCONH-; et
Z désigne un groupement hydroxy (-OH) ; un radical linéaire ou ramifié, saturé ou insaturé, comprenant de 1 à 4 atomes de carbone, lesdits atomes de carbone portant au moins un groupement hydroxy -[CH2]x-[OH]Y ; un groupement acide carboxylique salifié (-COOM' avec M' = Na+ ou K+) ; ou un radical linéaire ou ramifié, saturé ou insaturé, comprenant de 1 à 12 atomes de carbone et éventuellement un ou plusieurs hétéroatomes tel que notamment un ou plusieurs atomes d'oxygène.
22. Composition selon la revendication précédente, caractérisée en ce que L désigne une liaison simple ou un groupement amide.
23. Composition selon l'une des revendications précédentes, caractérisée en ce que l'agent solubilisant est issu d'un acide aminé naturel ou synthétique portant un cycle aromatique, de préférence choisi parmi la phénylalanine, la tyrosine et le tryptophane, et plus préférentieilement la phénylalanine.
24. Composition selon l'une des revendications précédentes, caractérisée en ce que l'agent solubilisant est choisi dans le groupe constitué par la N-hydroxyacétyl- phénylalanine et le N-hydroxyacétyl-tryptophane, répondant aux formules suivantes :
Figure imgf000041_0001
employés sous forme sous forme de sel de sodium ou de potassium.
25. Composition selon l'une des revendications 1 à 5 et 7 à 10, caractérisée que l'agent solubilisant est issu d'un phénol.
26. Composition selon l'une des revendications 1 à 5, 7 à 11 et 13, caractérisée en ce que l'agent solubilisant est choisi parmi les composés suivants, employés sous forme sous forme de sels de sodium ou de potassium :
Figure imgf000042_0001
27. Composition selon l'une des revendications précédentes, caractérisée en ce que qu'elle comprend le ou les agents(s) solubilisant(s) en une concentration totale comprise entre 1 g/L et 100 g/L.
28. Composition selon l'une des revendications précédentes, caractérisée en ce que qu'elle contient une concentration totale en protéine(s) comprise entre 0,5 et 400 mg/mL, de préférence entre 50 et 350 mg/mL.
29. Composition selon l'une des revendications précédentes, caractérisée en ce que le ratio molaire entre la quantité totale d'agent(s) solubilisant(s) et la quantité totale de protéine(s) dans la composition est supérieur ou égal à 20, de préférence supérieur ou égal à 35, plus préférentiellement supérieur ou égal à 45, encore plus préférentiellement supérieur ou égal à 100, plus préférentiellement supérieur ou égal à 150, et mieux encore supérieur ou égal à 200.
30. Composition selon l'une des revendications 20 et 21, caractérisée en ce qu'elle est destinée à être administrée par injection intraveineuse, par injection sous- cutanée ou par injection intramusculaire, et de préférence par injection sous-cutanée.
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