WO2010010859A1 - キャピラリー電気泳動法による分析装置および分析方法 - Google Patents

キャピラリー電気泳動法による分析装置および分析方法 Download PDF

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幸司 杉山
行雄 東五十川
雄介 中山
喜秀 田中
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アークレイ株式会社
独立行政法人産業技術総合研究所
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    • G01N2800/042—Disorders of carbohydrate metabolism, e.g. diabetes, glucose metabolism

Definitions

  • the present invention relates to an analyzer and an analysis method for analyzing proteins contained in blood by capillary electrophoresis.
  • the blood contains proteins such as albumin, globulin ( ⁇ 1, ⁇ 2, ⁇ , ⁇ globulin), fibrinogen, hemoglobin and the like. These proteins are analyzed for ratios, mutations, etc., and are used for diagnosis of diseases. Among these proteins, albumin, globulin ( ⁇ 1, ⁇ 2, ⁇ , ⁇ globulin) and fibrinogen are proteins that are contained in large amounts in blood. These protein ratios are, for example, important indicators in the diagnosis of cirrhosis, nephrotic syndrome, collagen disease, and the like, and are analyzed using a cellulose acetate membrane electrophoresis method or the like.
  • hemoglobin includes hemoglobin A (HbA), hemoglobin F (HbF), hemoglobin S (HbS), glycated hemoglobin, and the like.
  • HbA and HbF are normal hemoglobins in humans.
  • HbS is an abnormal hemoglobin in which the 6th glutamic acid in the ⁇ chain is replaced with valine, and is a diagnostic index for sickle cell anemia.
  • glycated hemoglobin is hemoglobin that has reacted with glucose in the blood, and reflects the past history of blood glucose levels in the living body. Therefore, it is used as an index in the diagnosis and treatment of diabetes.
  • hemoglobin A1c obtained by glycating ⁇ -chain N-terminal valine is a particularly important index and is a test item for periodic health examinations.
  • proteins in blood, including hemoglobin are important indicators of various diseases, there is a need for the development of a small-sized analyzer that can be used in clinical examinations and has low running costs. ing.
  • the methods for measuring hemoglobin include, for example, an immunization method, an enzyme method, an affinity chromatography method, an HPLC method, and a capillary electrophoresis method. Since the immunization method and the enzyme method can be applied to an automatic analyzer, they have the advantage of being able to process a large amount of specimen, but lack measurement accuracy and require about 10 minutes for analysis.
  • the affinity chromatography method has low measurement accuracy of HbA1c due to the separation principle, and requires about 2 minutes for analysis.
  • the HPLC method is widely used as a method for measuring hemoglobin (for example, Patent Document 1), but requires a large and expensive dedicated device, which makes it difficult to reduce the size and cost of the device.
  • the present invention provides an analyzer for analyzing by capillary electrophoresis, which is capable of analyzing a protein contained in blood in a short time with high accuracy, with the entire apparatus being downsized, simple operation, low running cost, and The purpose is to provide an analysis method.
  • the analyzer of the present invention comprises: A capillary electrophoresis analyzer for analyzing blood proteins by capillary electrophoresis, Having an electrophoresis chip, voltage application means, liquid feeding means and absorbance measurement means,
  • the electrophoresis chip includes a substrate, a plurality of liquid tanks and a capillary channel,
  • the voltage applying means includes an electrode, The plurality of liquid tanks are formed on the substrate, The plurality of liquid tanks are communicated with each other through the capillary channel,
  • the capillary channel includes a capillary channel for sample analysis, Using the liquid feeding means, the capillary channel for sample analysis is filled with an electrophoresis solution, A sample containing the blood protein to be analyzed is introduced into the capillary channel for sample analysis filled with the electrophoresis solution, A voltage is applied to the electrode, the sample is electrophoresed,
  • the absorbance measurement means measures the absorbance of the blood protein in the electrophoresed sample, The analysis time of the blood protein is 35 seconds or
  • the analysis method of the present invention is an analysis method for analyzing proteins in blood by capillary electrophoresis, Using an electrophoresis chip with a capillary channel formed,
  • the capillary channel includes a capillary channel for sample analysis;
  • the analysis time of the blood protein is 35 seconds or less.
  • the electrophoresis chip is preferably the electrophoresis chip in the above-described capillary electrophoresis analysis apparatus of the present invention, and the capillary electrophoresis analysis apparatus is preferably used.
  • the capillary electrophoresis analyzer of the present invention can be downsized as a whole, is easy to operate, has low running cost, and can analyze blood proteins with high accuracy in a short time of 35 seconds or less.
  • the analysis method of the present invention is simple in operation, low in running cost, can use a small-sized analyzer, and can analyze blood proteins with high accuracy in a short time of 35 seconds or less.
  • the capillary electrophoresis analysis apparatus of the present invention and the analysis method using the apparatus are suitable for a micro analysis system ( ⁇ TAS).
  • FIG. 1A is a plan view showing an example of an electrophoresis chip included in the capillary electrophoresis analyzer of the present invention.
  • FIG. 1B is a cross-sectional view of the electrophoresis chip shown in FIG.
  • FIG. 2 is a schematic view showing an example of a capillary electrophoresis analyzer of the present invention.
  • FIG. 3A is a plan view showing another example of the electrophoresis chip included in the capillary electrophoresis analyzer of the present invention.
  • FIG. 3B is a cross-sectional view of the electrophoresis chip shown in FIG. 3A viewed in the II direction.
  • FIG. 3C is a cross-sectional view of the electrophoresis chip shown in FIG.
  • FIG. 4A is a plan view showing still another example of the electrophoresis chip included in the capillary electrophoresis analyzer of the present invention.
  • FIG. 4B is a perspective view of the electrophoresis chip shown in FIG.
  • FIG. 5 is a schematic view showing another example of the capillary electrophoresis analyzer of the present invention.
  • FIG. 6 is a graph showing an analysis result of hemoglobin in an example of the analysis method of the present invention.
  • FIG. 7 is a graph showing the results of hemoglobin analysis in another example of the analysis method of the present invention.
  • FIG. 8 is a graph showing the results of hemoglobin analysis in still another example of the analysis method of the present invention.
  • FIG. 9 is a graph showing the analysis results of hemoglobin in still another example of the analysis method of the present invention.
  • FIG. 10 is a graph showing the analysis results of hemoglobin in still another example of the present invention.
  • FIG. 11 is a graph showing the analysis result of hemoglobin in the analysis method of the comparative example.
  • FIG. 12 is a graph showing the analysis results of hemoglobin in the analysis methods of other comparative examples.
  • the capillary electrophoresis analyzer of the present invention is In the sample analysis capillary channel,
  • the cross-sectional shape perpendicular to the flow path direction is circular or rectangular, In the case of a circle, the diameter is in the range of 25 ⁇ m to 100 ⁇ m, In the case of a rectangle, the width is in the range of 25 ⁇ m to 100 ⁇ m, the depth is in the range of 25 ⁇ m to 100 ⁇ m, From the electrophoresis start point, the electrophoresis of the sample is started, The absorbance of the blood protein in the electrophoresed sample is measured at the detection point; It is preferable that the distance from the electrophoresis start point to the detection point is 5 cm or less.
  • the inner wall surface of the sample analysis capillary channel has an ionic functional group
  • the pH of the electrophoresis solution is in the range of pH 4.0 to 6.0;
  • the electroosmotic flow generated when the voltage is applied may be 3 cm / min or more.
  • the electrophoresis solution preferably contains a sulfated polysaccharide.
  • the sulfated polysaccharide is chondroitin sulfate.
  • the distance from the electrophoresis start point to the detection point is In the case of 0.25 cm or more and less than 0.75 cm, the separation electric field is 300 V / cm or less, In the case of 0.75 cm or more and less than 1.25 cm, the separation electric field is 300 to 600 V / cm, In the case of 1.25 cm or more and less than 1.75 cm, the separation electric field is 400 to 650 V / cm, In the case of 1.75 cm or more and less than 2.25 cm, the separation electric field is preferably 450 to 700 V / cm.
  • the distance from the electrophoresis start point to the detection point is In the case of 0.25 cm or more and less than 0.75 cm, the separation electric field is 250 V / cm or less, In the case of 0.75 cm or more and less than 1.25 cm, the separation electric field is 250 to 500 V / cm, In the case of 1.25 cm or more and less than 1.75 cm, the separation electric field is 375 to 550 V / cm, In the case of 1.75 cm or more and less than 2.25 cm, the separation electric field is preferably 400 to 600 V / cm.
  • the distance from the electrophoresis start point to the detection point is In the case of 0.25 cm or more and less than 0.75 cm, the separation electric field is 200 V / cm or less, In the case of 0.75 cm or more and less than 1.25 cm, the separation electric field is 200 to 450 V / cm, In the case of 1.25 cm or more and less than 1.75 cm, the separation electric field is 300 to 500 V / cm, In the case of 1.75 cm or more and less than 2.25 cm, the separation electric field is preferably 350 to 550 V / cm.
  • the separation electric field is 150 V / cm or less, In the case of 0.75 cm or more and less than 1.25 cm, the separation electric field is 150 to 400 V / cm, In the case of 1.25 cm or more and less than 1.75 cm, the separation electric field is 250 to 450 V / cm, In the case of 1.75 cm or more and less than 2.25 cm, the separation electric field is preferably 300 to 500 V / cm.
  • the blood protein is an analysis item, and the analysis item is hemoglobin.
  • the hemoglobin is at least one of hemoglobin A1c (HbA1c) and hemoglobin F (HbF).
  • the hemoglobin A1c concentration HbA1c concentration
  • HbA1c concentration the hemoglobin A1c concentration
  • the sample is a sample obtained by hemolyzing the blood, and the hemoglobin in the sample obtained by hemolyzing the blood is analyzed.
  • the cross-sectional shape perpendicular to the flow path direction is circular or rectangular, In the case of a circle, the diameter is in the range of 25 ⁇ m to 100 ⁇ m. In the case of a rectangle, the width is in the range of 25 ⁇ m to 100 ⁇ m, and the depth is in the range of 25 ⁇ m to 100 ⁇ m. From the electrophoresis start point, the electrophoresis of the sample is started, The absorbance of the blood protein in the electrophoresed sample is measured at the detection point; It is preferable that the distance from the electrophoresis start point to the detection point is 5 cm or less.
  • the inner wall surface of the sample analysis capillary channel has an ionic functional group
  • the pH of the electrophoresis solution is in the range of pH 4.0 to 6.0;
  • the electroosmotic flow generated when the voltage is applied may be 3 cm / min or more.
  • the electrophoresis solution preferably contains a sulfated polysaccharide.
  • the sulfated polysaccharide is preferably chondroitin sulfate.
  • the distance from the migration start point to the detection point is: In the case of 0.25 cm or more and less than 0.75 cm, the separation electric field is 300 V / cm or less, In the case of 0.75 cm or more and less than 1.25 cm, the separation electric field is 300 to 600 V / cm, In the case of 1.25 cm or more and less than 1.75 cm, the separation electric field is 400 to 650 V / cm, In the case of 1.75 cm or more and less than 2.25 cm, the separation electric field is preferably 450 to 700 V / cm.
  • the distance from the migration start point to the detection point is In the case of 0.25 cm or more and less than 0.75 cm, the separation electric field is 250 V / cm or less, In the case of 0.75 cm or more and less than 1.25 cm, the separation electric field is 250 to 500 V / cm, In the case of 1.25 cm or more and less than 1.75 cm, the separation electric field is 375 to 550 V / cm, In the case of 1.75 cm or more and less than 2.25 cm, the separation electric field is preferably 400 to 600 V / cm.
  • the distance from the migration start point to the detection point is: In the case of 0.25 cm or more and less than 0.75 cm, the separation electric field is 200 V / cm or less, In the case of 0.75 cm or more and less than 1.25 cm, the separation electric field is 200 to 450 V / cm, In the case of 1.25 cm or more and less than 1.75 cm, the separation electric field is 300 to 500 V / cm, In the case of 1.75 cm or more and less than 2.25 cm, the separation electric field is preferably 350 to 550 V / cm.
  • the distance from the migration start point to the detection point is: In the case of 0.25 cm or more and less than 0.75 cm, the separation electric field is 150 V / cm or less, In the case of 0.75 cm or more and less than 1.25 cm, the separation electric field is 150 to 400 V / cm, In the case of 1.25 cm or more and less than 1.75 cm, the separation electric field is 250 to 450 V / cm, In the case of 1.75 cm or more and less than 2.25 cm, the separation electric field is preferably 300 to 500 V / cm.
  • the blood protein is an analysis item, and the analysis item is hemoglobin.
  • the hemoglobin is preferably at least one of hemoglobin A1c (HbA1c and hemoglobin F (HbF).
  • HbA1c concentration the hemoglobin A1c concentration as the analysis of the hemoglobin A1c (HbA1c) using the hemoglobin A1c (HbA1c) as an analysis item.
  • the sample is a sample obtained by hemolyzing the blood, and the hemoglobin in the sample obtained by hemolyzing the blood is analyzed.
  • the capillary electrophoresis analysis apparatus of the present invention only needs to have the following electrophoresis chip, voltage application means, liquid feeding means, and absorbance measurement means, and other configurations are not particularly limited. .
  • the capillary electrophoresis analyzer of the present invention may not have the liquid feeding means, for example.
  • the electrophoresis chip includes a substrate, a plurality of liquid tanks, and a capillary channel as described above.
  • the size of the electrophoresis chip is not particularly limited.
  • the maximum length is in the range of 10 mm to 100 mm
  • the maximum width is in the range of 10 mm to 60 mm
  • the maximum thickness is 0. It is in the range of 3 mm to 5 mm, preferably the maximum length is in the range of 30 mm to 70 mm.
  • the maximum length of the electrophoresis chip is the length of the longest portion in the longitudinal direction of the electrophoresis chip, and the maximum width of the electrophoresis chip is the longest portion of the electrophoresis chip in the short direction.
  • the maximum thickness of the electrophoresis chip is the length of the longest portion in the direction (thickness direction) perpendicular to both the longitudinal direction and the short direction of the electrophoresis chip.
  • the electrophoresis chip only needs to include a substrate, a plurality of liquid tanks, and a capillary channel, and other configurations are not particularly limited.
  • the substrate is not particularly limited, and examples thereof include a configuration constituted by a single substrate and a configuration in which an upper substrate and a lower substrate are combined.
  • the material of the substrate is not particularly limited, and examples thereof include glass and polymer materials.
  • the glass material is not particularly limited, and examples thereof include synthetic quartz glass, borosilicate glass, and fused silica.
  • the polymer material is not particularly limited. For example, polymethyl methacrylate (PMMA), cycloolefin polymer (COP), polycarbonate (PC), polydimethylsiloxane (PDMS), polystyrene (PS), polylactic acid (PLA), and the like. Can be given.
  • the liquid tank is not particularly limited, and examples thereof include a recess formed by sealing the bottom of a through hole formed in the upper substrate with the lower substrate.
  • the shape of the liquid tank is not particularly limited, and examples thereof include a columnar shape, a quadrangular prism shape, a quadrangular pyramid shape, and a conical shape.
  • the volume of each liquid tank is not particularly limited, and is, for example, in the range of 1 to 1000 mm 3 , and preferably in the range of 10 to 100 mm 3 .
  • the volume of each liquid tank may be the same or different, and is not particularly limited.
  • the capillary channel may be formed on the substrate, for example, or may be a capillary tube embedded in the substrate.
  • the cross-sectional shape perpendicular to the channel direction is not particularly limited, and examples thereof include a circle, a rectangle, and an ellipse.
  • the diameter is not particularly limited, but is, for example, in the range of 1 ⁇ m to 1000 ⁇ m, and preferably in the range of 10 ⁇ m to 200 ⁇ m.
  • the width and depth are not particularly limited, but for example, the width is in the range of 10 ⁇ m to 200 ⁇ m and the depth is in the range of 10 ⁇ m to 200 ⁇ m.
  • the length of the capillary channel is not particularly limited, and is, for example, in the range of 0.5 cm to 15 cm, and preferably in the range of 1 cm to 5 cm.
  • the capillary flow path includes the sample analysis capillary flow path.
  • the diameter is not particularly limited, but is, for example, in the range of 10 ⁇ m to 200 ⁇ m, and preferably 25 ⁇ m to 100 ⁇ m. Range.
  • the width is in the range of 25 ⁇ m to 100 ⁇ m
  • the depth is in the range of 25 ⁇ m to 100 ⁇ m.
  • the length of the sample analysis capillary channel is not particularly limited, and is, for example, in the range of 0.5 cm to 15 cm, and preferably in the range of 1 cm to 5 cm.
  • the capillary channel may be formed of the substrate, for example, or may be formed in the substrate by embedding a capillary tube.
  • the material of the capillary channel is, for example, the material of the substrate, and in the latter case, the material of the capillary channel is, for example, the material of the capillary tube to be embedded.
  • the material of the capillary channel is not particularly limited.
  • glass materials such as synthetic quartz glass, borosilicate glass, and fused silica, polymethyl methacrylate (PMMA), cycloolefin polymer (COP), Polymer materials such as polycarbonate (PC), polydimethylsiloxane (PDMS), polystyrene (PS), polylactic acid (PLA), polyethylene (PE), polytetrafluoroethylene (PTFE), polyetheretherketone (PEEK) It is done.
  • a commercially available product may be used as the capillary tube.
  • the inner wall of the glass capillary channel usually has a cathodic charge.
  • the inner wall surface can be brought into a state having an anodic charge.
  • the inner wall of the polymer capillary channel is usually in a state of having an anodic or cathodic charge or in an uncharged (nonpolar) state depending on the presence or type of the polar group in the polymer. .
  • the uncharged polymer capillary flow path can be brought into a state of having a charge on the inner wall surface by introducing, for example, a polar group.
  • the inner wall of the capillary channel for sample analysis preferably has an ionic functional group on the surface thereof.
  • the ionic functional group include an anodic group and a cathodic group.
  • the capillary channel for sample analysis having the anodic group on the inner wall surface may be formed, for example, by coating the inner wall of the capillary channel for sample analysis with an anodic group-containing compound.
  • an anodic layer coating with an anodic group-containing compound may be referred to as an anodic layer.
  • the anodic group-containing compound is not particularly limited, and examples thereof include compounds containing the anodic group and a reactive group.
  • the compound containing an anodic group and reactive group may be a compound having an anodic group and silicon (silylating agent) or the like.
  • the anodic group is not particularly limited, but is preferably an amino group or an ammonium group.
  • the anodic group-containing compound is not particularly limited, but a silylating agent having at least one anodic group of an amino group and an ammonium group is preferable.
  • the amino group may be primary, secondary, or tertiary.
  • silylating agent examples include N- (2-diaminoethyl) -3-propyltrimethoxysilane, aminophenoxydimethylvinylsilane, 3-aminopropyldiisopropylethoxysilane, 3-aminopropylmethylbis (trimethylsiloxy) silane, 3-aminopropylpentamethyldisiloxane, 3-aminopropylsilanetriol, bis (P-aminophenoxy) dimethylsilane, 1,3-bis (3-aminopropyl) tetramethyldisiloxane, bis (dimethylamino) dimethylsilane, Bis (dimethylamino) vinylmethylsilane, bis (2-hydroxyethyl) -3-aminopropyltriethoxysilane, 3-cyanopropyl (diisopropyl) dimethylaminosilane, (aminoethylaminomethyl) phenethoxy
  • anodic group-containing compound a compound in which the silicon atom in the silylating agent is substituted with titanium or zirconium may be used.
  • the said anodic group containing compound may be used individually by 1 type, and may use 2 or more types together.
  • the coating of the inner wall of the capillary channel for sample analysis using the silylating agent is performed as follows, for example.
  • a treatment liquid is prepared by dissolving or dispersing the silylating agent in an organic solvent.
  • an organic solvent used for preparation of the said process liquid a dichloromethane, toluene, methanol, acetone etc. can be used, for example.
  • the concentration of the silylating agent in the treatment liquid is not particularly limited.
  • This treatment liquid is passed through a capillary channel made of glass or fused silica, for example, and heated.
  • the silylating agent is covalently bonded to the inner wall of the capillary channel, and as a result, an anodic group is disposed on the inner wall of the capillary channel.
  • the organic solvent is washed away with at least one of an acidic solution such as phosphoric acid, an alkaline solution, and a surfactant solution, and the inside of the capillary channel is washed.
  • an acidic solution such as phosphoric acid, an alkaline solution, and a surfactant solution
  • a commercial product may be used for the capillary channel whose inner wall is coated with the silylating agent.
  • the sample analysis capillary channel having the cathodic group on the inner wall surface may be formed, for example, by coating the inner wall of the sample analysis capillary channel with a cathodic group-containing compound.
  • a cathodic layer the coating with the cathodic group-containing compound may be referred to as a cathodic layer.
  • the direction of the said electroosmotic flow becomes the reverse of the case where the said anodic group is coat
  • the sample and the cathodic group-containing compound present in the electrophoresis solution form a complex, and this complex is electrophoresed, the separation efficiency is higher than that of electrophoresis by the sample alone. As a result, more accurate analysis can be performed in a shorter time.
  • the cathodic group-containing compound that forms a complex with the sample is preferably, for example, a cathodic group-containing polysaccharide.
  • anionic group-containing polysaccharides examples include sulfated polysaccharides, carboxylated polysaccharides, sulfonated polysaccharides and phosphorylated polysaccharides. Among them, sulfated polysaccharides and carboxylated polysaccharides include preferable. As the sulfated polysaccharide, chondroitin sulfate, heparin and the like are preferable, and chondroitin sulfate is more preferable. As the carboxylated polysaccharide, alginic acid or a salt thereof (for example, sodium alginate) is preferable. There are seven types of chondroitin sulfate, A, B, C, D, E, H, and K. Any of them may be used, but chondroitin sulfate C is preferred.
  • the cathode layer may be laminated on the inner wall of the capillary channel for sample analysis via an intervening layer, for example.
  • the intervening layer is not particularly limited, and can be formed using, for example, the anodic group-containing compound.
  • the cathodic layer laminated via the intervening layer brings the liquid containing the cathodic group-containing compound into contact with the inner wall of the capillary channel for sample analysis coated with the anodic group-containing compound. It may be formed.
  • a liquid for forming the cathodic group may be prepared separately, but from the viewpoint of operation efficiency, the electrophoretic liquid prepared by adding the cathodic group-containing compound is added to the intervening layer on the inner wall. It is preferable that liquid is passed through the capillary channel in which is formed.
  • the inner wall of another capillary channel formed on the substrate may have the ionic functional group
  • the inner walls of all capillary channels may have the ionic functional group.
  • the other capillary channel having the ionic functional group on the inner wall can be formed in the same manner as the sample analysis capillary channel described above.
  • a sample containing blood protein to be analyzed and an electrophoresis solution are introduced into the capillary channel for sample analysis.
  • the electrophoresis solution is not particularly limited, but an electrophoresis solution containing an organic acid is preferable.
  • the organic acid is not particularly limited, and examples thereof include maleic acid, tartaric acid, succinic acid, fumaric acid, phthalic acid, malonic acid, malic acid and the like.
  • the electrophoresis solution is not particularly limited, but preferably includes, for example, a weak base.
  • the weak base is not particularly limited, and examples thereof include arginine, lysine, histidine, and tris.
  • the electrophoresis solution is not particularly limited, but for example, ADA buffer, MES buffer, Bis-Tris buffer, PIPES buffer, ACES buffer, MOPSO buffer, BES buffer, HEPES buffer, TES buffer And phosphate buffer.
  • the pH of the electrophoresis solution is not particularly limited, and is, for example, in the above-mentioned range, and preferably in the range of pH 4.5 to 6.0.
  • the cathodic group-containing compound is preferably added to the electrophoresis solution.
  • the anionic group-containing compound is not particularly limited, and examples thereof include the aforementioned anionic group-containing compound.
  • the concentration of the cathodic group-containing compound contained in the electrophoresis solution is not particularly limited, and is, for example, in the range of 0.001 to 10% by weight, and preferably in the range of 0.1 to 5% by weight. is there.
  • a surfactant may be added to the electrophoresis solution.
  • the surfactant is not particularly limited, and examples thereof include betaine type amphoteric surfactants and nonionic surfactants.
  • the betaine-type amphoteric surfactant is not particularly limited, and examples thereof include a carboxybetaine-type surfactant and a sulfobetaine-type surfactant.
  • the carboxybetaine surfactant include N, N-dimethyl-N-alkyl-N-carboxyalkylene ammonium betaine.
  • Examples of the sulfobetaine type surfactant include N, N, N-trialkyl-N-sulfoalkylene ammonium betaine.
  • Specific examples of the sulfobetaine surfactant include palmityl sulfobetaine and the like.
  • anionic chaotropic ions may be added to the electrophoresis solution.
  • the anionic chaotropic ions include salts containing anionic chaotropic ions, substances that generate anionic chaotropic ions by ionization, and the like.
  • the salt include acidic salts, neutral salts, and basic salts.
  • the anionic chaotropic ion is not particularly limited, and examples thereof include perchloric acid, thiocyanic acid, potassium iodide, potassium bromide, trichloroacetic acid, and trifluoroacetic acid.
  • the concentration of the anionic chaotropic ion contained in the electrophoresis solution is not particularly limited, and is, for example, in the range of 1 to 3000 mmol / L, preferably in the range of 5 to 100 mmol / L. Preferably, it is in the range of 10 to 50 mmol / L.
  • examples of the sample containing the blood protein to be analyzed include whole blood, a sample obtained by hemolyzing blood, and the like. Among these, in the present invention, it is preferable to analyze proteins in a sample obtained by hemolyzing the blood.
  • examples of the hemolysis treatment include surfactant treatment, osmotic pressure change treatment, ultrasonic treatment, freeze-thaw treatment, pressurization treatment, etc., preferably surfactant treatment, osmotic pressure change treatment, ultrasonic treatment. It is.
  • the surfactant treatment is not particularly limited, but for example, whole blood may be hemolyzed with a diluent added with a surfactant.
  • the surfactant include the aforementioned surfactants and saponins.
  • the osmotic pressure change treatment is not particularly limited, and for example, whole blood may be hemolyzed using a solution adjusted to a low osmotic pressure.
  • the solution is not particularly limited, and examples thereof include distilled water and a dilute solution adjusted to a low osmotic pressure, and preferably distilled water.
  • the ultrasonic treatment is not particularly limited, and for example, an ultrasonic treatment apparatus may be used.
  • the diluent is not particularly limited, and examples thereof include distilled water and the electrophoresis solution.
  • the blood protein refers to a protein contained in blood.
  • the blood protein is not particularly limited, and examples thereof include hemoglobin (Hb), albumin (Alb), globulins ( ⁇ 1, ⁇ 2, ⁇ , ⁇ globulins), fibrinogen, and the like.
  • the hemoglobin is not particularly limited, and examples thereof include normal hemoglobin (HbA0), glycated hemoglobin, modified hemoglobin, fetal hemoglobin (HbF) and the like.
  • HbA0 normal hemoglobin
  • glycated hemoglobin include hemoglobin A1a (HbA1a), hemoglobin A1b (HbA1b), hemoglobin A1c (HbA1c), and GHbLys.
  • Examples of the hemoglobin A1c include stable HbA1c and unstable HbA1c.
  • the modified hemoglobin include carbamylated Hb and acetylated Hb.
  • the capillary electrophoresis analyzer of the present invention uses the blood protein as an analysis item.
  • the analysis item is not particularly limited, and, for example, hemoglobin is preferable among the aforementioned blood proteins.
  • the analysis items are not particularly limited, and examples thereof include the various hemoglobin ratios, hemoglobin A1c concentration, albumin concentration, globulin concentration, and albumin / globulin ratio.
  • the sample is electrophoresed from the electrophoretic start point to the detection point by electroosmotic flow generated by voltage application to the electrodes. Then, at a detection point on the sample analysis capillary channel, the absorbance of the blood protein in the sample subjected to electrophoresis is measured.
  • the migration start point is a point on the sample analysis capillary channel at which the sample introduced into the sample analysis capillary channel starts electrophoresis upon voltage application.
  • the migration starting point is not particularly limited, and may be, for example, a boundary between a liquid tank into which the sample is introduced and the capillary channel for sample analysis.
  • the detection point is a point for measuring the absorbance of blood protein in the sample that has been electrophoresed in the capillary channel for sample analysis, as described above.
  • the detection point is on the sample analysis capillary channel, and the distance from the migration start point is not particularly limited, but it is preferable that the detection point is, for example, in a range described later.
  • the distance (separation length) from the migration start point to the detection point is not particularly limited, but is, for example, in the range of 0.5 cm to 15 cm, and preferably in the range of 1 cm to 5 cm.
  • the voltage is not particularly limited, but is, for example, in the range of 0.075 kV to 20 kV, and preferably in the range of 0.3 kV to 5 kV.
  • the electroosmotic flow is not particularly limited, but is, for example, in the range of 3 cm / min to 15 cm / min, and preferably in the range of 8 cm / min to 12 cm / min.
  • the absorbance measurement wavelength is, for example, in the range of 260 nm to 300 nm or 380 nm to 450 nm, and preferably in the range of 400 nm to 430 nm.
  • the blood protein analysis time is, for example, the time for separating the blood protein contained in the sample to be analyzed and completing its detection.
  • the analysis time of the blood protein is, for example, the time from the start of voltage application to the electrode until the detection of all of the blood protein to be analyzed is completed.
  • the blood protein analysis time is more than 0 seconds and not more than 35 seconds, preferably more than 0 seconds and not more than 30 seconds, more preferably more than 0 seconds and not more than 25 seconds. More preferably, it is longer than 0 second and not longer than 20 seconds.
  • the distance from the electrophoresis start point to the detection point and the separation electric field are set in the predetermined range according to the width and depth of the capillary channel, for example.
  • the separation electric field is a voltage applied per 1 cm between electrodes.
  • the predetermined range can be appropriately set depending on the type of electrophoresis solution (electrophoresis buffer), the method of coating the capillary channel with the ionic functional group, and the like, and is not limited to the above range.
  • the capillary electrophoresis analyzer of the present invention is not particularly limited, and may further include, for example, a quantitative dispensing means, a stirring means, a stray light removing means, a position adjusting means, and the like.
  • capillary electrophoresis analyzer of the present invention and the analysis method using the same will be described with examples.
  • the capillary electrophoresis analyzer of the present invention and the analysis method using the same are not limited to the following examples.
  • FIG. 1 shows an electrophoresis chip used in the capillary electrophoresis analyzer of this example.
  • FIG. 1A is a plan view of the electrophoresis chip of this example
  • FIG. 1B is a cross-sectional view as seen in the II direction of FIG. 1A.
  • the size, ratio, and the like of each component are different from actual ones for easy understanding.
  • the electrophoresis chip 2 of this example is configured by laminating an upper substrate 3a on a lower substrate 3b. Three through holes are formed in the upper substrate 3a. Three liquid tanks 4a, 4b and 4e are formed by sealing the bottoms of the three through holes formed in the upper substrate 3a with the lower substrate 3b.
  • An I-shaped groove is formed on the lower substrate 3b.
  • the upper part of the I-shaped groove formed on the lower substrate 3b is sealed with the upper substrate 3a, so that a capillary channel for sample analysis 5x is formed.
  • the liquid tank 4a and the liquid tank 4b are communicated with each other through the sample analysis capillary channel 5x.
  • the liquid tank 4e does not communicate with the sample analysis capillary channel 5x but is arranged as a single liquid tank.
  • the end of the capillary channel 5x on the liquid tank 4a side is an electrophoretic start point 80.
  • One point between the liquid tank 4a and the liquid tank 4b on the capillary channel 5x is a detection point 90.
  • the electrophoresis chip 2 in this example has a rectangular parallelepiped shape.
  • the electrophoresis chip may have any shape as long as it does not hinder analysis of a sample described later.
  • the electrophoresis chip 2 of this example includes two substrates (an upper substrate 3a and a lower substrate 3b).
  • the present invention is not limited to this.
  • the electrophoresis chip may be composed of, for example, a single substrate.
  • the length and width of the upper substrate 3a are the maximum length and the maximum width of the entire electrophoresis chip. Accordingly, the length and width of the upper substrate 3a may be the same as the maximum length and maximum width of the entire electrophoresis chip.
  • the thickness of the upper substrate 3a in the electrophoresis chip 2 of this example can be appropriately set according to the volumes of the plurality of liquid tanks 4a, 4b, and 4e, but is preferably in the range of 0.1 mm to 3 mm, for example. Is in the range of 1 mm to 2 mm.
  • the length and width of the lower substrate 3b are the same as the length and width of the upper substrate 3a.
  • the thickness of the lower substrate 3b is not particularly limited, but is, for example, in the range of 0.1 mm to 3 mm, and preferably in the range of 0.1 mm to 1 mm.
  • the material of the upper substrate 3a and the lower substrate 3b is not particularly limited as long as it does not hinder the measurement of the absorbance.
  • As the material of the upper substrate 3a and the lower substrate 3b for example, those formed from the materials described above can be used.
  • the width and depth of the sample analysis capillary channel 5x are, for example, in the range of 25 ⁇ m to 100 ⁇ m in width and in the range of 25 ⁇ m to 100 ⁇ m in depth.
  • the distance from the migration start point 80 to the detection point 90 is, for example, in the range of 0.5 cm to 15 cm, and preferably in the range of 1 cm to 5 cm.
  • the volumes of the liquid tank 4a, the liquid tank 4b, and the liquid tank 4e are the same as described above.
  • the shapes of the liquid tanks 4a, 4b and 4e are cylindrical.
  • the present invention is not limited to this.
  • the shape of the liquid tanks 4a, 4b and 4e can be any shape as described above.
  • the maximum thickness of the chip is the total thickness of the upper substrate 3a and the lower substrate 3b.
  • the thickness of the entire chip is as described above.
  • FIG. 2 shows the capillary electrophoresis analyzer of this example.
  • this capillary electrophoresis analyzer 1 includes the above-described electrophoresis chip 2, electrodes 6 a and 6 b, electric wires 7 a to 7 f, a slit 8, a controller 9, a light source 11, and an optical filter 12.
  • the condenser lens 13, the detector 14, the electrophoresis chip moving mechanism 20, the quantitative dispenser 30, the dilution liquid 31, and the electrophoresis liquid 32 are included as main components.
  • the electrophoresis chip moving mechanism 20 includes a driving unit 21 and a stage 22.
  • the electrophoresis chip 2 is disposed on the stage 22.
  • the electrodes 6a and 6b are disposed in the liquid tanks 4a and 4b of the electrophoresis chip 2, respectively.
  • the detector 14, the quantitative dispenser 30, the electrodes 6a and 6b, the electrophoresis chip moving mechanism 20, and the light source 11 are connected to the control unit 9 by the electric wires 7a to 7f, respectively.
  • the control unit 9 controls the supply of power to the above-described components connected by the electric wires 7a to 7f.
  • the stage 22 can be moved in the horizontal biaxial direction (XY direction) by the driving unit 21 connected to one end thereof.
  • the X direction and the Y direction intersect each other perpendicularly on the horizontal plane.
  • the position of the electrophoresis chip 2 can be adjusted.
  • the quantitative dispenser 30 can quantitate the diluted solution 31 and the electrophoretic liquid 32 and dispense them into the liquid tank 4 a or the liquid tank 4 e of the electrophoresis chip 2.
  • the sample introduced into the sample analysis capillary channel 5x can be electrophoresed.
  • the light emitted from the light source 11 is split into specific wavelength light by the optical filter 12, converged by the condenser lens 13, the amount of light is increased, stray light is removed by the slit 8, and the electrophoresis chip
  • the sample at the detection point 90 on the second sample analysis capillary channel 5x is irradiated.
  • the detector 14 detects the transmitted light of the light irradiated to the detection point 90, and measures the absorbance, whereby the blood protein to be analyzed contained in the sample can be analyzed.
  • the method for producing the electrophoresis chip 2 of the capillary electrophoresis analyzer 1 of the present example is not particularly limited, and for example, a conventionally known method may be appropriately used.
  • the electrophoresis solution 32 is prepared.
  • the electrophoresis solution 32 is not particularly limited as long as it is the above-described electrophoresis solution.
  • chondroitin sulfate C is added to 100 mmol / L fumaric acid and arginic acid aqueous solution at a ratio of 0.8% by weight. And an aqueous solution adjusted to pH 4.8.
  • the electrophoresis chip 2 is mounted on the stage 22 and placed in the capillary electrophoresis analyzer 1 of this example.
  • the electrophoresis solution 32 is injected into the liquid tank 4a using the quantitative dispenser 30.
  • a vacuum pump (not shown) is connected to the liquid tank 4b to reduce the pressure, and the electrophoresis liquid 32 is filled into the sample analysis capillary channel 5x.
  • the sample and the A mixed solution of the diluent 31 is prepared.
  • the dilution liquid 31 for example, distilled water is used.
  • the mixed liquid is poured into the liquid tank 4a.
  • a voltage is applied to the electrodes 6a and 6b disposed in the liquid tanks 4a and 4b, respectively, to generate a potential difference between both ends of the sample analysis capillary channel 5x. Thereby, the sample is moved from the migration start point 80 to the liquid tank 4b side.
  • the voltage is not particularly limited, but is, for example, in the range of 0.5 kV to 20 kV.
  • the separation electric field of the sample analysis capillary channel 5x by the voltage application can be appropriately set according to the distance from the migration start point to the detection point and the width and depth of the capillary channel. For example, it is in the range of 150 V / cm to 700 V / cm, and preferably in the range of 300 V / cm to 600 V / cm.
  • the detection point 90 is irradiated with light (wavelength 415 nm) that has been spectrally and condensed in the same manner as described above, and from which stray light has been removed. Further, the transmitted light at the detection point 90 is detected using the detector 14, the absorbance due to the protein in the sample is measured, and the magnitude of the obtained absorbance and the analysis time (detected from the start of electrophoresis). A pherogram showing the correspondence of the time until) is created.
  • FIG. 3 shows an electrophoresis chip used in the capillary electrophoresis analyzer of this example.
  • the same parts as those in FIG. 3A is a plan view of the electrophoresis chip of this example
  • FIG. 3B is a cross-sectional view taken along the line II in FIG. 3A
  • FIG. FIG. 4 is a cross-sectional view taken along the line II-II in FIG.
  • the electrophoresis chip 2 of this example is configured by laminating an upper substrate 3a on a lower substrate 3b. A plurality (four in this example) of through-holes are formed in the upper substrate 3a.
  • liquid tanks 4a to 4d are formed by sealing the bottoms of the four through holes formed in the upper substrate 3a with the lower substrate 3b.
  • a cross-shaped groove is formed on the lower substrate 3b.
  • the upper part of the cross-shaped groove formed on the lower substrate 3b is sealed with the upper substrate 3a, so that a capillary channel for sample analysis 5x and a capillary channel for sample introduction 5y are formed.
  • the liquid tank 4a and the liquid tank 4b are communicated with each other through the sample analysis capillary channel 5x.
  • the liquid tank 4c and the liquid tank 4d are communicated with each other through the sample introduction capillary channel 5y.
  • the sample analysis capillary channel 5x and the sample introduction capillary channel 5y intersect each other.
  • the sample analysis capillary channel 5x and the sample introduction capillary channel 5y communicate with each other at the intersection.
  • the intersecting portion becomes the migration start point 80.
  • One point between the liquid tank 4a and the liquid tank 4b on the capillary channel 5x is a detection point 90.
  • the maximum lengths of the sample analysis capillary channel 5x and the sample introduction capillary channel 5y are different.
  • the present invention is not limited to this.
  • the sample analysis capillary channel 5x and the sample introduction capillary channel 5y of the electrophoresis chip 2 may have the same maximum length.
  • the electrophoresis chip 2 of this example is shown in FIG. 1 except that the liquid tank 4c and the liquid tank 4d and the sample introduction capillary channel 5y are formed, and the liquid tank 4e is not formed.
  • the configuration is the same as that of the electrophoresis chip.
  • the width and depth of the sample introduction capillary channel 5y are the same as the width and depth of the sample analysis capillary channel 5x.
  • the distance from the electrophoresis start point 80 to the detection point 90 is the same as that of the electrophoresis chip shown in FIG.
  • the volume and shape of the liquid tank 4c and the liquid tank 4d are the same as the liquid tank of the electrophoresis chip shown in FIG.
  • the electrophoresis chip 2 is the electrophoresis chip shown in FIG. 3 instead of the electrophoresis chip shown in FIG. 1, and the electrodes 6c and 6d (not shown) are provided. 2 is the same as the capillary electrophoresis analyzer shown in FIG. 2 except that it is disposed in the liquid tanks 4 c and 4 d of the electrophoresis chip 2.
  • the electrophoresis chip 2 is mounted on the stage 22 and placed in the capillary electrophoresis analyzer 1 of this example.
  • the electrophoresis solution 32 is injected into the liquid tank 4a using the quantitative dispenser 30.
  • a vacuum pump (not shown) is connected to the liquid tank 4b to reduce the pressure, and the sample analysis capillary channel 5x is filled with the electrophoresis solution 32.
  • the electrophoresis solution 32 is injected into the liquid tank 4 c using the quantitative dispenser 30.
  • a vacuum pump (not shown) is connected to the liquid tank 4d to reduce the pressure, and the electrophoresis liquid 32 is filled into the sample introduction capillary channel 5y.
  • a voltage is applied to the electrodes 6c and 6d to generate a potential difference between both ends of the sample introduction capillary channel 5y.
  • the voltage applied between the electrode 6c and the electrode 6d is not particularly limited, but is, for example, in the range of 0.5 kV to 20 kV.
  • a voltage is applied to the electrodes 6a and 6b to generate a potential difference between both ends of the sample analysis capillary channel 5x.
  • the voltage is not particularly limited, but is, for example, in the range of 0.5 kV to 20 kV.
  • the separation electric field of the sample analysis capillary channel 5x by the voltage application can be appropriately set according to the distance from the migration start point to the detection point and the width and depth of the capillary channel.
  • the range is the same as in the first embodiment.
  • the detection point 90 is irradiated with light (wavelength 415 nm) that has been spectrally and condensed and further removed with stray light in the same manner as in the first embodiment. Furthermore, the transmitted light at the detection point 90 is detected using the detector 14, the absorbance due to the protein in the sample is measured, and the correspondence between the magnitude of the obtained absorbance and the analysis time (electrophoresis time) is measured. Create a pherogram showing.
  • FIG. 4 shows an electrophoresis chip used in the capillary electrophoresis analyzer of this example.
  • FIG. 4A is a plan view of the electrophoresis chip of this example
  • FIG. 4B is a perspective view of the electrophoresis chip of this example.
  • the electrophoresis chip 200 of this example includes a stacked body in which an upper substrate 3a is stacked on a lower substrate 3b, and a connector 70.
  • the connector 70 is disposed on one side surface of the laminate.
  • a wiring pattern (not shown) is formed on the lower substrate 3b.
  • Six through holes are formed in the upper substrate 3a.
  • Six liquid tanks are formed by sealing the bottoms of the six through holes with the lower substrate 3b.
  • the six liquid tanks are a sample introduction port 41, a drain 45, a drain 55, a drain 57, a drain 59, and a drain 63, respectively.
  • Three concave portions are formed on the bottom surface of the upper substrate 3a.
  • Two liquid tanks are formed by sealing the opening surfaces of two of the three recesses with the lower substrate 3b.
  • the two liquid tanks are a reagent tank 51 and a dilution tank 58, respectively.
  • the reagent tank 51 is filled with an electrophoretic solution.
  • an electrode 6a connected to the wiring in the wiring pattern is arranged, and a stirring bar (not shown) is enclosed.
  • the electrode 6b connected to the wiring in the wiring pattern is formed in the electrode placement portion 61 formed by sealing the opening surface of the remaining one recess with the lower substrate 3b. Be placed.
  • a plurality of grooves are formed on the bottom surface of the upper substrate 3a. The opening surfaces of the plurality of grooves are sealed by the lower substrate 3b, thereby forming flow paths that connect the six liquid tanks and the three recesses.
  • the capillary channel that communicates the dilution tank 58 and the electrode arrangement part 61 is the sample analysis capillary channel 5x.
  • the end of the sample analysis capillary channel 5x on the dilution tank 58 side is an electrophoresis start point 80.
  • One point on the sample analysis capillary channel 5x is a detection point 90. Details of the channels other than the sample analysis capillary channel 5x will be described later.
  • the sample introduction port 41 communicates with the drain 45 through a sample introduction channel 42, a branch part 43, and an overflow channel 44 in this order. Further, the sample introduction port 41 communicates with the dilution tank 58 from the branch portion 43 through the sample measurement channel 46.
  • the sample introduction port 41 is an introduction port for introducing a sample containing blood protein to be analyzed into the electrophoresis chip.
  • An orifice 47 having a narrow channel cross-sectional area is formed at the end of the sample measuring channel 46 on the dilution tank 58 side.
  • the sample is weighed and introduced into the electrophoresis chip as follows. First, after introducing a sample into the sample introduction port 41, air is sucked from the drain 45 using a decompression pump or the like (not shown). Due to the suction, the sample exceeding the volume of the sample metering channel 46 between the branch portion 43 and the orifice 47 flows out into the overflow channel 44. Further, by closing the drain 45 and using a pressure pump or the like (not shown) to discharge air from the sample introduction port 41, the sample of the volume amount stored in the sample metering channel 46 is obtained. Is weighed and introduced into the dilution tank 58.
  • the reagent tank 51 communicates with the drain 55 through a reagent introduction channel 52a, a branch part 53a, and an overflow channel 54 in this order.
  • the reagent tank 51 also communicates with the dilution tank 58 from the branch part 53a through the reagent measurement channel 56, the branch part 53b, and the sample introduction channel 52b.
  • the drain 57 is formed at the end of the flow path branched by the branch portion 53b.
  • a drain 59 is formed at the end of the flow path branched at the end of the sample analysis capillary flow path 5x on the dilution tank 58 side.
  • a flow rate measurement flow path 62 is formed between the electrode arrangement portion 61 and the drain 63.
  • the sample analysis capillary channel 5x is filled with the electrophoresis solution, and the electrophoresis solution is weighed and introduced into the dilution tank 58 as follows. First, the sample introduction port 41 and the drains 45, 55, 57 and 59 are closed, and the reagent introduction is performed by sucking air using a decompression pump or the like (not shown) connected to the drain 63. Electricity sealed in the reagent tank 51 in the flow paths 52a and 52b, the reagent measurement flow path 56, the dilution tank 58, the sample analysis capillary flow path 5x, the electrode placement portion 61 or the flow rate measurement flow path 62. The electrophoresis solution is filled.
  • the reagent reservoir 51 is closed, the drain 59 is opened, and air is sucked using a decompression pump or the like (not shown) connected to the drain 57, whereby the sample introduction channel 52b and the dilution channel are diluted.
  • the electrophoresis solution in the tank 58 is removed. Further, by closing the drain 57, opening the drain 55, and using a vacuum pump or the like (not shown) connected to the drain 59, the air is aspirated, so that the volume of the reagent metering flow path 56 is increased.
  • the electrophoresis solution can be weighed and introduced into the dilution tank 58. Then, as described above, the sample and the electrophoresis liquid are introduced by introducing the sample into the dilution tank 58 and rotating a stirrer (not shown) using a magnetic stirrer (not shown). And can be mixed.
  • the material of the upper substrate 3a is not particularly limited as long as it does not hinder the measurement of the absorbance.
  • the upper substrate 3a for example, one formed from the above-described materials or the like can be used.
  • the length and width of the upper substrate 3a in the electrophoresis chip 200 of this example are, for example, in the range of 10 mm to 200 mm, and preferably in the range of 20 mm to 100 mm.
  • the thickness of the upper substrate 3a is, for example, in the range of 0.1 mm to 10 mm, and preferably in the range of 1 mm to 5 mm.
  • the lower substrate 3b can be made of, for example, an acrylic resin, the same material as the upper substrate 3a, or the like.
  • the lower substrate 3b is configured by laminating a plurality of substrates formed of the material, and a wiring pattern made of a copper foil or the like is formed between the plurality of substrates.
  • the length and width of the lower substrate 3b are the same as the length and width of the upper substrate 3a.
  • the thickness of the lower substrate 3b is, for example, in the range of 0.1 mm to 10 mm.
  • the diameter and depth of the sample introduction port 41 are, for example, in the range of 0.1 mm to 10 mm in diameter and in the range of 0.1 mm to 10 mm.
  • the diameter is in the range of 1 mm to 5 mm and the depth is in the range of 1 mm to 5 mm.
  • the diameter and depth of the reagent tank 51 are, for example, in the range of 0.5 mm to 50 mm in diameter, and in the range of 0.1 mm to 10 mm in depth.
  • the diameter is in the range of 1 mm to 20 mm and the depth is in the range of 1 mm to 5 mm.
  • the diameter and depth of the dilution tank 58 are, for example, in the range of 0.5 mm to 50 mm in diameter and in the range of 0.1 mm to 10 mm.
  • the diameter is in the range of 1 mm to 10 mm, and the depth is in the range of 1 mm to 5 mm.
  • the diameters and depths of the drains 45, 55, 57, 59, 63 are each in the range of 0.1 mm to 10 mm, and the depth is 0.1 mm.
  • the diameter is in the range of 1 mm to 5 mm, preferably the diameter is in the range of 1 mm to 5 mm, and the depth is in the range of 1 mm to 5 mm.
  • the sample introduction port 41, the reagent tank 51, the dilution tank 58, and the drains 45, 55, 57, 59, and 63 are cylindrical.
  • the sample introduction port 41, the reagent tank 51, the dilution tank 58, and the drains 45, 55, 57, 59, 63 may have, for example, a rectangular column shape, a quadrangular pyramid shape, a conical shape, etc. It can be set as arbitrary shapes, such as the shape which combined.
  • the shapes of the sample inlet 41, the reagent tank 51, the dilution tank 58, and the drains 45, 55, 57, 59, 63 may all be the same or different.
  • the width and depth of the sample analysis capillary channel 5x are the same as those of the electrophoresis chip 2 shown in FIG.
  • the distance from the electrophoresis start point 80 to the detection point 90 is the same as that of the electrophoresis chip 2 shown in FIG.
  • the width and depth of the reagent metering channel 56 are, for example, in the range of 0.1 mm to 10 mm in width at the maximum cross-sectional area.
  • the range is 0.1 mm to 10 mm.
  • the width and depth of the orifice 47 are, for example, the width is in the range of 1 ⁇ m to 200 ⁇ m, the depth is in the range of 1 ⁇ m to 200 ⁇ m, and preferably the width is The depth is 10 ⁇ m to 100 ⁇ m, and the depth is 10 ⁇ m to 100 ⁇ m.
  • the width and depth of the capillary channel other than the sample analysis capillary channel 5x, the reagent metering channel 56, and the orifice 47 are, for example, in the range of 10 ⁇ m to 1000 ⁇ m.
  • the depth is in the range of 10 ⁇ m to 1000 ⁇ m, preferably the width is 50 ⁇ m to 500 ⁇ m and the depth is 50 ⁇ m to 500 ⁇ m.
  • the maximum thickness of the entire electrophoresis chip is the total thickness of the upper substrate 3a and the lower substrate 3b.
  • the thickness of the entire chip is as described above.
  • the manufacturing method of the electrophoresis chip 200 in this example is not particularly limited, and for example, a conventionally known method may be used as appropriate.
  • FIG. 5 shows the capillary electrophoresis analyzer of this example.
  • the electrophoresis chip is the electrophoresis chip shown in FIG. 4 instead of the electrophoresis chip shown in FIG. Except for having the diluting liquid 31 and the electric wires 7b to d, having the electrophoretic liquid in the electrophoretic chip 200, and having the connecting portion (not shown) of the connector 70 and the electric wire 7g. It is the same as the electrophoretic analyzer 1 shown in FIG.
  • the electrophoresis chip 200 is mounted on the stage 22 via the connector 70 and mounted on the capillary electrophoresis analyzer 100.
  • the connector 70 is connected to the control unit 9 by the electric wire 7g.
  • the controller 9 controls the supply of power to the connector 70 and the like.
  • the electrophoresis chip 200 is attached to the capillary electrophoresis analyzer 100 via the connector 70.
  • the sample analysis capillary channel 5 x is filled with the electrophoresis solution, and the electrophoresis solution is weighed and introduced into the dilution tank 58.
  • human whole blood is introduced from the sample introduction port 41 in the same manner as described above, and the volume of the sample measurement channel 46 is measured and introduced into the dilution tank 58.
  • the introduced sample and the electrophoresis solution are mixed in the dilution tank 58, and the stirrer (not shown) is rotated by the magnetic stirrer (not shown) and stirred.
  • a voltage is applied to the electrodes 6a and 6b to generate a potential difference between both ends of the sample analysis capillary channel 5x.
  • the voltage is applied by supplying electric power from the connector 70 to the electrode 6a and the electrode 6b by the electric wire 7g in the wiring pattern.
  • the voltage is not particularly limited, but is, for example, in the range of 0.5 kV to 20 kV.
  • the separation electric field of the sample analysis capillary channel 5x by the voltage application can be appropriately set according to the distance from the migration start point to the detection point and the width and depth of the capillary channel. For example, the range is the same as in the first embodiment.
  • the detection point 90 is irradiated with light (wavelength 415 nm) that has been spectrally and condensed and further removed with stray light in the same manner as in the first embodiment. Furthermore, the transmitted light at the detection point 90 is detected using the detector 14, the absorbance due to the protein in the electrophoresed sample is measured, and the correspondence between the magnitude of the obtained absorbance and the analysis time Create a pherogram showing.
  • HbA1c glycated hemoglobin
  • Example 1 First, the electrophoresis chip shown in FIG. 1 was produced.
  • the electrophoresis chip 2 of this example was made of PMMA, the length of the chip (the dimension in the direction along the sample analysis capillary channel 5x) was 70 mm, and the width was 30 mm.
  • the sample analysis capillary channel 5x had a width of 40 ⁇ m and a depth of 40 ⁇ m.
  • the distance from the migration start point 80 to the detection point 90 was 1.5 cm.
  • the electrophoresis chip 2 of this example was mounted on the stage 22 to configure the capillary electrophoresis analyzer 1 shown in FIG.
  • 0.8 wt% chondroitin sulfate C was further added to a solution prepared by adding arginine to pH 4.8 by adding 30 mmol / L sodium thiocyanate to 50 mmol / L fumaric acid, and the electrophoresis solution 32 was prepared.
  • hemoglobin manufactured by BML
  • the sample had a hemoglobin A1c concentration of about 5% by weight, and the hemoglobin concentration corresponded to a hemoglobin concentration obtained by diluting human blood 15 times.
  • the electrophoresis liquid 32 was injected into the liquid tank 4 a of the electrophoresis chip 2. Then, air was sucked with a vacuum pump connected to the liquid tank 4b, and the electrophoresis solution 32 was filled into the capillary channel for sample analysis 5x. Subsequently, the sample was introduced into the liquid tank 4a. Then, a separation electric field of 450 V / cm was applied to the electrodes 6a and 6b to generate a potential difference between both ends of the sample analysis capillary channel 5x. Thereby, the sample was moved from the liquid tank 4a to the liquid tank 4b.
  • Example 2 the electrophoresis chip 2 was produced in the same manner as in Example 1, and the capillary electrophoresis analyzer 1 was configured.
  • the capillary electrophoresis analyzer 1 was used to analyze stable hemoglobin A1c and unstable hemoglobin A1c.
  • 10 g diluted 100 g / L hemoglobin added with 500 mg / dL glucose at 37 ° C. for 3 hours was used as the sample in place of the 10 g / L hemoglobin described above, and diluted 10 times. Analysis was performed in the same manner as in Example 1.
  • Example 3 the electrophoresis chip 2 was produced in the same manner as in Example 1, and the capillary electrophoresis analyzer 1 was configured. Then, using the capillary electrophoresis analyzer 1, hemoglobin A1c was analyzed. In this example, analysis was performed in the same manner as in Example 1 except that the length from the electrophoresis start point 80 to the detection point 90 was changed to 1.0 cm instead of the above-mentioned 1.5 cm.
  • Example 4 the electrophoresis chip 2 was produced in the same manner as in Example 1, and the capillary electrophoresis analyzer 1 was configured. Then, using the capillary electrophoresis analyzer 1, hemoglobin A1c was analyzed. In this example, analysis was performed in the same manner as in Example 1 except that the length from the electrophoresis start point 80 to the detection point 90 was set to 2.0 cm instead of the above-described 1.5 cm.
  • Example 5 the electrophoresis chip 2 was produced in the same manner as in Example 1, and the capillary electrophoresis analyzer 1 was configured. Then, using the capillary electrophoresis analyzer 1, hemoglobin A1c was analyzed. In this example, the length from the migration start point 80 to the detection point 90 is set to 0.5 cm instead of the above-described 1.5 cm, and the separation electric field applied to the electrodes 6a and 6b is set to the above-described separation electric field. The analysis was performed in the same manner as in Example 1 except that instead of 450 V / cm, 250 V / cm was used.
  • Example 1 Comparative Example 1
  • the electrophoresis chip 2 was produced in the same manner as in Example 1, and the capillary electrophoresis analyzer 1 was configured. Then, using the capillary electrophoresis analyzer 1, hemoglobin A1c was analyzed.
  • the hemoglobin concentration is set to 5 g / L (hemoglobin A1c concentration of about 11%) instead of 10 g / L, and the length from the migration start point 80 to the detection point 90 is 1.5 cm.
  • the measurement was performed in the same manner as in Example 1 except that the separation electric field applied to the electrodes 6a and 6b was 250 V / cm instead of 450 V / cm.
  • the hemoglobin concentration of 5 g / L in the sample corresponded to the hemoglobin concentration obtained by diluting human blood 30 times.
  • Example 2 the sample analysis capillary channel 5x was the same as in Example 1 except that a separate capillary tube (inner diameter 40 ⁇ m) embedded in a groove formed in the lower substrate 3b was used.
  • An electrophoresis chip 2 was produced, and a capillary electrophoresis analyzer 1 was constructed.
  • the material of the capillary tube was made of fused silica.
  • hemoglobin A1c was analyzed.
  • analysis was performed in the same manner as in Comparative Example 1 except that the electrophoresis chip 2 was used.
  • FIGS. 6 shows the results of Example 1
  • FIG. 7 shows the results of Example 2
  • FIG. 8 shows the results of Example 3
  • FIG. 9 shows the results of Example 4, and FIG.
  • FIG. 11 is the results of Comparative Example 1
  • FIG. 12 is the results of Comparative Example 2.
  • the horizontal axis represents the time elapsed (seconds) from the start of voltage application
  • the vertical axis represents the absorbance at a measurement wavelength of 415 nm.
  • Example 1 The results of calculating electroosmotic flow in Examples 1 to 5, Comparative Example 1 and Comparative Example 2 are shown in Table 1 below. As shown in the table, for electroosmotic flow, Examples 1 and 2 are 10 cm / min, Example 3 is 8.6 cm / min, and Example 4 is 7.5 cm / min. Example 5 was 3.0 cm / min, Comparative Example 1 was 4.0 cm / min, and Comparative Example 2 was 2.4 cm / min.
  • Example 1 Example 3, Example 4, Example 5, Comparative Example 1 and Comparative Example 2
  • hemoglobin A1c and hemoglobin A0 are separated and detected. It was possible. Further, as shown in the graph of FIG. 7, in Example 2, three hemoglobins of stable hemoglobin A1c, unstable hemoglobin A1c, and hemoglobin A0 could be separated and detected.
  • the time from the start of voltage application to the completion of detection in each example was about 24 seconds in Example 1, about 25 seconds in Example 2, and about 18 seconds in Example 3. In Example 4, it was about 30 seconds, and in Example 5, it was about 18 seconds, while in Comparative Example 1, it was about 60 seconds, and in Comparative Example 2, it was about 90 seconds. That is, in Examples 1 to 5, the analysis time was a very short time of 35 seconds or less, but in Comparative Examples 1 and 2, the analysis time was 60 seconds or more.
  • the entire analyzer can be miniaturized, the operation is simple, the running cost is low, and the blood protein can be analyzed with high accuracy in a short time of 35 seconds or less.
  • the present invention is suitable for a micro analysis system ( ⁇ TAS).
  • ⁇ TAS micro analysis system
  • the present invention can be applied to all fields for analyzing blood proteins, such as clinical tests, biochemical tests, and medical research, and the use thereof is not limited and can be applied to a wide range of fields.

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Abstract

　装置全体が小型化され、操作が簡便で、ランニングコストが低く、血液に含まれるタンパク質を、短時間かつ高精度に分析可能な分析装置を提供する。 　本発明のキャピラリー電気泳動分析装置は、血中タンパク質をキャピラリー電気泳動法により分析する分析装置であって、電気泳動チップ、電圧印加手段、送液手段および吸光度測定手段を有し、前記電気泳動チップが、基板と、複数の液槽と、キャピラリー流路とを含み、前記基板上に、前記複数の液槽と、前記キャピラリー流路が形成され、前記複数の液槽が、前記キャピラリー流路で連通され、前記キャピラリー流路が、試料分析用キャピラリー流路を含み、前記血中タンパク質の分析時間が３５秒以下である。

Description

キャピラリー電気泳動法による分析装置および分析方法
　本発明は、血液に含まれるタンパク質をキャピラリー電気泳動法により分析する分析装置および分析方法に関する。
　血液中には、アルブミン、グロブリン（α１、α２、β、γグロブリン）、フィブリノーゲン、ヘモグロビン等のタンパク質が含まれている。これらのタンパク質は、その比率や変異等が分析され、疾病の診断に利用されている。これらのタンパク質の中で、アルブミン、グロブリン（α１、α２、β、γグロブリン）およびフィブリノーゲンは、血液中に多量に含まれるタンパク質である。そして、これらのタンパク質比率は、例えば、肝硬変、ネフローゼ症候群、膠原病等の診断における重要な指標とされ、セルロースアセテート膜電気泳動法等を用いて分析されている。また、ヘモグロビン（Ｈｂ）には、ヘモグロビンＡ（ＨｂＡ）、ヘモグロビンＦ（ＨｂＦ）、ヘモグロビンＳ（ＨｂＳ）、糖化ヘモグロビン等がある。これらのヘモグロビンのうち、ＨｂＡおよびＨｂＦは、ヒトにおける正常ヘモグロビンである。そして、ＨｂＳは、β鎖の第６番目のグルタミン酸が、バリンに置換された異常ヘモグロビンであり、鎌形赤血球貧血症の診断指標である。さらに、糖化ヘモグロビンは、血液中のグルコースと反応したヘモグロビンであり、生体内血糖値の過去の履歴を反映しているため、糖尿病の診断や治療等における指標とされている。糖化ヘモグロビンの中でも、β鎖Ｎ末端のバリンが糖化したヘモグロビンＡ１ｃ（ＨｂＡ１ｃ）は、特に重要な指標であり、定期健康診断の検査項目である。このように、ヘモグロビンを含め、血液中のタンパク質は、種々の疾患の重要な指標であることから、臨床検査等でも利用可能な、ランニングコストの低い、小型化された分析装置の開発が求められている。
　血液中のヘモグロビンの測定方法の中で、ヘモグロビンの測定方法には、例えば、免疫法、酵素法、アフィニティクロマトグラフィ法、ＨＰＬＣ法、キャピラリー電気泳動法等がある。免疫法および酵素法は、自動分析装置に適用可能であるため、検体を大量に処理できるという長所を有するが、測定精度に欠け、分析に約１０分間を要する。そして、アフィニティクロマトグラフィ法は、分離原理上、ＨｂＡ１ｃの測定精度が低く、分析に約２分間を要する。また、ＨＰＬＣ法は、ヘモグロビンの測定方法として汎用されているが（例えば、特許文献１等）、大型で高価な専用装置を必要とし、装置の小型化および低コスト化が困難であり、分析に約１分間を要する。そして、キャピラリー電気泳動法は、マイクロチップの利用による装置の小型化が可能であり、約９０秒で分析可能であるが（例えば、特許文献２等）、臨床検査での利用の観点から、分析時間のより一層の短縮化が要請されている。
特許第３４２９７０９号公報 国際公開第２００８／０４７７０３号パンフレット
　そこで、本発明は、装置全体が小型化され、操作が簡便で、ランニングコストが低く、血液に含まれるタンパク質を、短時間で高精度に分析可能な、キャピラリー電気泳動法により分析する分析装置および分析方法を提供することを目的とする。
　前記目的を達成するために、本発明の分析装置は、
血中タンパク質をキャピラリー電気泳動法により分析するためのキャピラリー電気泳動分析装置であって、
電気泳動チップ、電圧印加手段、送液手段および吸光度測定手段を有し、
前記電気泳動チップは、基板、複数の液槽およびキャピラリー流路を含み、
前記電圧印加手段は、電極を含み、
前記基板上に、前記複数の液槽が形成され、
前記複数の液槽は、前記キャピラリー流路で連通され、
前記キャピラリー流路は、試料分析用のキャピラリー流路を含み、
前記送液手段を使用して、前記試料分析用キャピラリー流路に、電気泳動液を充填し、
前記電気泳動液が充填された前記試料分析用キャピラリー流路に、分析対象の前記血中タンパク質を含む試料を導入し、
前記電極に電圧を印加して、前記試料を電気泳動させ、
前記吸光度測定手段により、電気泳動させた前記試料中の前記血中タンパク質の吸光度を測定し、
前記血中タンパク質の分析時間が、３５秒以下であることを特徴とする。
　本発明の分析方法は、キャピラリー電気泳動法により、血中タンパク質を分析する分析方法であって、
キャピラリー流路が形成された電気泳動チップを使用し、
前記キャピラリー流路が、試料分析用のキャピラリー流路を含み、
電気泳動液が充填された前記試料分析用キャピラリー流路に、前記血中タンパク質を含む試料を導入し、電極に電圧を印加し、前記試料を電気泳動させる電気泳動工程と、
前記電気泳動させた試料中の前記血中タンパク質の吸光度を測定する測定工程とを含み、
前記血中タンパク質の分析時間が、３５秒以下であることを特徴とする。なお、本発明の分析方法において、前記電気泳動チップは、前述の本発明のキャピラリー電気泳動分析装置における前記電気泳動チップが好ましく、また、前記キャピラリー電気泳動分析装置を使用することが好ましい。
　本発明のキャピラリー電気泳動分析装置は、装置全体が小型化可能であり、操作が簡便で、ランニングコストが低く、３５秒以下の短時間で、かつ高精度に、血中タンパク質を分析できる。また、本発明の分析方法は、操作が簡便で、ランニングコストが低く、小型化可能な分析装置を使用可能であり、３５秒以下の短時間で、かつ高精度に血中タンパク質を分析できる。特に、本発明のキャピラリー電気泳動分析装置およびその装置を使用した分析方法は、微小分析システム（μＴＡＳ）に適している。
図１（Ａ）は、本発明のキャピラリー電気泳動分析装置に含まれる電気泳動チップの一例を示す平面図である。図１（Ｂ）は、図１（Ａ）に示す電気泳動チップのＩ－Ｉ方向に見た断面図である。 図２は、本発明のキャピラリー電気泳動分析装置の一例を示す模式図である。 図３（Ａ）は、本発明のキャピラリー電気泳動分析装置に含まれる電気泳動チップのその他の例を示す平面図である。図３（Ｂ）は、図３（Ａ）に示す電気泳動チップのＩ－Ｉ方向に見た断面図である。図３（Ｃ）は、図３（Ａ）に示す電気泳動チップのＩＩ－ＩＩ方向に見た断面図である。 図４（Ａ）は、本発明のキャピラリー電気泳動分析装置に含まれる電気泳動チップのさらにその他の例を示す平面図である。図４（Ｂ）は、図４（Ａ）に示す電気泳動チップの斜視図である。 図５は、本発明のキャピラリー電気泳動分析装置のその他の例を示す模式図である。 図６は、本発明の分析方法の一例におけるヘモグロビンの分析結果を示すグラフである。 図７は、本発明の分析方法のその他の例におけるヘモグロビンの分析結果を示すグラフである。 図８は、本発明の分析方法のさらにその他の例におけるヘモグロビンの分析結果を示すグラフである。 図９は、本発明の分析方法のさらにその他の例におけるヘモグロビンの分析結果を示すグラフである。 図１０は、本発明のさらにその他の例におけるヘモグロビンの分析結果を示すグラフである。 図１１は、比較例の分析方法におけるヘモグロビンの分析結果を示すグラフである。 図１２は、その他の比較例の分析方法におけるヘモグロビンの分析結果を示すグラフである。
　本発明のキャピラリー電気泳動分析装置は、
前記試料分析用キャピラリー流路において、
流路方向に対し垂直方向の断面形状が、円形もしくは矩形であり、
円形の場合、その径が、２５μｍ～１００μｍの範囲であり、
矩形の場合、その幅が、２５μｍ～１００μｍの範囲であり、その深さが、２５μｍ～１００μｍの範囲であり、
泳動開始点から、前記試料の電気泳動が開始され、
前記電気泳動された試料中の前記血中タンパク質の吸光度が、検出点で測定され、
前記泳動開始点から前記検出点までの距離が、５ｃｍ以下であることが好ましい。
　本発明のキャピラリー電気泳動分析装置において、前記試料分析用キャピラリー流路の内壁表面が、イオン性官能基を有し、
前記電気泳動液のｐＨが、ｐＨ４．０～６．０の範囲であり、
前記電圧印加時に生じる電気浸透流が、３ｃｍ／分以上であってもよい。
　本発明のキャピラリー電気泳動分析装置において、前記電気泳動液が、硫酸化多糖類を含むことが好ましい。
　本発明のキャピラリー電気泳動分析装置において、前記硫酸化多糖類が、コンドロイチン硫酸であることが好ましい。
　本発明のキャピラリー電気泳動分析装置は、前記試料分析用キャピラリー流路において、前記断面形状が、幅および深さがそれぞれ３０μｍの矩形の場合、前記泳動開始点から前記検出点までの距離が、
０.２５ｃｍ以上０.７５ｃｍ未満の場合、分離電場が３００Ｖ／ｃｍ以下であり、
０.７５ｃｍ以上１.２５ｃｍ未満の場合、分離電場が３００～６００Ｖ／ｃｍであり、
１.２５ｃｍ以上１.７５ｃｍ未満の場合、分離電場が４００～６５０Ｖ／ｃｍであり、
１.７５ｃｍ以上２.２５ｃｍ未満の場合、分離電場が４５０～７００Ｖ／ｃｍであることが好ましい。
　本発明のキャピラリー電気泳動分析装置は、前記試料分析用キャピラリー流路において、前記断面形状が、幅および深さがそれぞれ４０μｍの矩形の場合、前記泳動開始点から前記検出点までの距離が、
０.２５ｃｍ以上０.７５ｃｍ未満の場合、分離電場が２５０Ｖ／ｃｍ以下であり、
０.７５ｃｍ以上１.２５ｃｍ未満の場合、分離電場が２５０～５００Ｖ／ｃｍであり、
１.２５ｃｍ以上１.７５ｃｍ未満の場合、分離電場が３７５～５５０Ｖ／ｃｍであり、
１.７５ｃｍ以上２.２５ｃｍ未満の場合、分離電場が４００～６００Ｖ／ｃｍであることが好ましい。
　本発明のキャピラリー電気泳動分析装置は、前記試料分析用キャピラリー流路において、前記断面形状が、幅および深さがそれぞれ５０μｍの矩形の場合、前記泳動開始点から前記検出点までの距離が、
０.２５ｃｍ以上０.７５ｃｍ未満の場合、分離電場が２００Ｖ／ｃｍ以下であり、
０.７５ｃｍ以上１.２５ｃｍ未満の場合、分離電場が２００～４５０Ｖ／ｃｍであり、
１.２５ｃｍ以上１.７５ｃｍ未満の場合、分離電場が３００～５００Ｖ／ｃｍであり、
１.７５ｃｍ以上２.２５ｃｍ未満の場合、分離電場が３５０～５５０Ｖ／ｃｍであることが好ましい。
　本発明のキャピラリー電気泳動分析装置は、前記試料分析用キャピラリー流路において、前記断面形状が、幅および深さがそれぞれ６０μｍの矩形の場合、前記泳動開始点から前記検出点までの距離が、
０.２５ｃｍ以上０.７５ｃｍ未満の場合、分離電場が１５０Ｖ／ｃｍ以下であり、
０.７５ｃｍ以上１.２５ｃｍ未満の場合、分離電場が１５０～４００Ｖ／ｃｍであり、
１.２５ｃｍ以上１.７５ｃｍ未満の場合、分離電場が２５０～４５０Ｖ／ｃｍであり、
１.７５ｃｍ以上２.２５ｃｍ未満の場合、分離電場が３００～５００Ｖ／ｃｍであることが好ましい。
　本発明のキャピラリー電気泳動分析装置において、前記血中タンパク質を分析項目とし、前記分析項目が、ヘモグロビンであることが好ましい。
　本発明のキャピラリー電気泳動分析装置において、前記ヘモグロビンが、ヘモグロビンＡ１ｃ（ＨｂＡ１ｃ）およびヘモグロビンＦ（ＨｂＦ）の少なくとも一方であることが好ましい。
　本発明のキャピラリー電気泳動分析装置において、前記ヘモグロビンＡ１ｃ（ＨｂＡ１ｃ）を分析項目とし、前記ヘモグロビンＡ１ｃ（ＨｂＡ１ｃ）の分析として、ヘモグロビンＡ１ｃ濃度（ＨｂＡ１ｃ濃度）を算出することが好ましい。
　本発明のキャピラリー電気泳動分析装置において、前記試料が、前記血液を溶血処理した試料であり、前記血液を溶血処理した試料中の前記ヘモグロビンを分析することが好ましい。
　本発明の分析方法は、前記試料分析用キャピラリー流路において、
流路方向に対し垂直方向の断面形状が、円形もしくは矩形であり、
円形の場合、その径が、２５μｍ～１００μｍの範囲であり、矩形の場合、その幅が、２５μｍ～１００μｍの範囲であり、その深さが、２５μｍ～１００μｍの範囲であり、
泳動開始点から、前記試料の電気泳動が開始され、
前記電気泳動された試料中の前記血中タンパク質の吸光度が、検出点で測定され、
前記泳動開始点から前記検出点までの距離が、５ｃｍ以下であることが好ましい。
　本発明の分析方法において、前記試料分析用キャピラリー流路の内壁表面が、イオン性官能基を有し、
前記電気泳動液のｐＨが、ｐＨ４．０～６．０の範囲であり、
前記電圧印加時に生じる電気浸透流が、３ｃｍ／分以上であってもよい。
　本発明の分析方法において、前記電気泳動液が、硫酸化多糖類を含むことが好ましい。
　本発明の分析方法において、前記硫酸化多糖類が、コンドロイチン硫酸であることが好ましい。
　本発明の分析方法では、前記試料分析用キャピラリー流路において、前記断面形状が、幅および深さがそれぞれ３０μｍの矩形の場合、前記泳動開始点から前記検出点までの距離が、
０.２５ｃｍ以上０.７５ｃｍ未満の場合、分離電場が３００Ｖ／ｃｍ以下であり、
０.７５ｃｍ以上１.２５ｃｍ未満の場合、分離電場が３００～６００Ｖ／ｃｍであり、
１.２５ｃｍ以上１.７５ｃｍ未満の場合、分離電場が４００～６５０Ｖ／ｃｍであり、
１.７５ｃｍ以上２.２５ｃｍ未満の場合、分離電場が４５０～７００Ｖ／ｃｍであることが好ましい。
　本発明の分析方法では、前記試料分析用キャピラリー流路において、前記断面形状が、幅および深さがそれぞれ４０μｍの矩形の場合、前記泳動開始点から前記検出点までの距離が、
０.２５ｃｍ以上０.７５ｃｍ未満の場合、分離電場が２５０Ｖ／ｃｍ以下であり、
０.７５ｃｍ以上１.２５ｃｍ未満の場合、分離電場が２５０～５００Ｖ／ｃｍであり、
１.２５ｃｍ以上１.７５ｃｍ未満の場合、分離電場が３７５～５５０Ｖ／ｃｍであり、
１.７５ｃｍ以上２.２５ｃｍ未満の場合、分離電場が４００～６００Ｖ／ｃｍであることが好ましい。
　本発明の分析方法では、前記試料分析用キャピラリー流路において、前記断面形状が、幅および深さがそれぞれ５０μｍの矩形の場合、前記泳動開始点から前記検出点までの距離が、
０.２５ｃｍ以上０.７５ｃｍ未満の場合、分離電場が２００Ｖ／ｃｍ以下であり、
０.７５ｃｍ以上１.２５ｃｍ未満の場合、分離電場が２００～４５０Ｖ／ｃｍであり、
１.２５ｃｍ以上１.７５ｃｍ未満の場合、分離電場が３００～５００Ｖ／ｃｍであり、
１.７５ｃｍ以上２.２５ｃｍ未満の場合、分離電場が３５０～５５０Ｖ／ｃｍであることが好ましい。
　本発明の分析方法では、前記試料分析用キャピラリー流路において、前記断面形状が、幅および深さがそれぞれ６０μｍの矩形の場合、前記泳動開始点から前記検出点までの距離が、
０.２５ｃｍ以上０.７５ｃｍ未満の場合、分離電場が１５０Ｖ／ｃｍ以下であり、
０.７５ｃｍ以上１.２５ｃｍ未満の場合、分離電場が１５０～４００Ｖ／ｃｍであり、
１.２５ｃｍ以上１.７５ｃｍ未満の場合、分離電場が２５０～４５０Ｖ／ｃｍであり、
１.７５ｃｍ以上２.２５ｃｍ未満の場合、分離電場が３００～５００Ｖ／ｃｍであることが好ましい。
　本発明の分析方法において、前記血中タンパク質を分析項目とし、前記分析項目が、ヘモグロビンであることが好ましい。
　本発明の分析方法において、前記ヘモグロビンが、ヘモグロビンＡ１ｃ（ＨｂＡ１ｃおよびヘモグロビンＦ（ＨｂＦ）の少なくとも一方であることが好ましい。
　本発明の分析方法において、前記ヘモグロビンＡ１ｃ（ＨｂＡ１ｃ）を分析項目とし、前記ヘモグロビンＡ１ｃ（ＨｂＡ１ｃ）の分析として、ヘモグロビンＡ１ｃ濃度（ＨｂＡ１ｃ濃度）を算出することが好ましい。
　本発明の分析方法において、前記試料が、前記血液を溶血処理した試料であり、前記血液を溶血処理した試料中の前記ヘモグロビンを分析することが好ましい。
　以下に、本発明のキャピラリー電気泳動分析装置について、詳細に説明する。
　本発明のキャピラリー電気泳動分析装置は、前述のように、以下に示す、電気泳動チップ、電圧印加手段、送液手段および吸光度測定手段を有していればよく、その他の構成は、特に制限されない。なお、本発明のキャピラリー電気泳動分析装置は、例えば、前記送液手段を有していなくてもよい。
　本発明のキャピラリー電気泳動分析装置において、前記電気泳動チップは、前述のように、基板、複数の液槽およびキャピラリー流路を含んでいる。
　前記電気泳動チップの大きさは、特に制限されないが、例えば、その最大長さは、１０ｍｍ～１００ｍｍの範囲であり、その最大幅は、１０ｍｍ～６０ｍｍの範囲であり、その最大厚みは、０．３ｍｍ～５ｍｍの範囲であり、好ましくは、その最大長さは、３０ｍｍ～７０ｍｍの範囲である。なお、前記電気泳動チップの最大長さとは、前記電気泳動チップの長手方向の最長部の長さであり、前記電気泳動チップの最大幅とは、前記電気泳動チップの短手方向の最長部の長さであり、前記電気泳動チップの最大厚みとは、前記電気泳動チップの前記長手方向および前記短手方向の両方に垂直な方向（厚み方向）の最長部の長さである。
　本発明のキャピラリー電気泳動分析装置において、前記電気泳動チップは、基板と、複数の液槽と、キャピラリー流路とを含んでいればよく、その他の構成は、特に制限されない。
　前記基板は、特に限定されず、例えば、一枚の基板で構成される形態、上基板と下基板とを合わせた形態等があげられる。前記基板の材質としては、特に制限されないが、例えば、ガラス、ポリマー材料等があげられる。前記ガラス材料としては、特に制限されないが、例えば、合成石英ガラス、ホウケイ酸ガラス、溶融シリカ等があげられる。前記ポリマー材料としては、特に制限されないが、例えば、ポリメチルメタクリレート（ＰＭＭＡ）、シクロオレフィンポリマー（ＣＯＰ）、ポリカーボネート（ＰＣ）、ポリジメチルシロキサン（ＰＤＭＳ）、ポリスチレン（ＰＳ）、ポリ乳酸（ＰＬＡ）等があげられる。
　前記液槽は、特に制限されず、例えば、前記上基板に形成された貫通孔の底部が、前記下基板で封止されて形成された凹部等があげられる。前記液槽の形状は、特に限定されず、例えば、円柱状、四角柱状、四角錘状、円錐状等があげられる。また、前記各液槽の容積は、特に限定されず、例えば、それぞれ、１～１０００ｍｍ３の範囲であり、好ましくは、１０～１００ｍｍ３の範囲である。前記各液槽の容積は、全て同じであってもよいし、異なっていてもよく、特に制限されない。
前記キャピラリー流路は、例えば、前記基板に形成されてもよいし、前記基板に埋設されたキャピラリー管でもよい。
　前記キャピラリー流路において、流路方向に対し垂直方向の断面形状は、特に限定されず、例えば、円形、矩形、楕円形等があげられる。前記キャピラリー流路の前記断面形状が、円形の場合、その径は、特に限定されないが、例えば、１μｍ～１０００μｍの範囲であり、好ましくは、１０μｍ～２００μｍの範囲である。前記キャピラリー流路の前記断面形状が、矩形の場合、その幅および深さは、特に限定されないが、例えば、幅が、１０μｍ～２００μｍの範囲であり、深さが、１０μｍ～２００μｍの範囲である。前記キャピラリー流路において、その長さは、特に限定されず、例えば、０．５ｃｍ～１５ｃｍの範囲であり、好ましくは、１ｃｍ～５ｃｍの範囲である。
　前述のように、前記キャピラリー流路には、前記試料分析用キャピラリー流路が含まれる。前記試料分析用キャピラリー流路において、流路方向に対し垂直方向の断面形状が、円形の場合、その径は、特に限定されないが、例えば、１０μｍ～２００μｍの範囲であり、好ましくは、２５μｍ～１００μｍの範囲である。前記試料分析用キャピラリー流路において、前記断面形状が、矩形の場合、例えば、その幅は、２５μｍ～１００μｍの範囲であり、その深さは、２５μｍ～１００μｍの範囲である。また、本発明において、前記試料分析用キャピラリー流路の長さは、特に限定されず、例えば、０．５ｃｍ～１５ｃｍの範囲であり、好ましくは、１ｃｍ～５ｃｍの範囲である。
　前記キャピラリー流路は、前述のように、例えば、前記基板により形成されていてもよいし、キャピラリー管の埋入により前記基板内に形成されてもよい。前者の場合、前記キャピラリー流路の材質は、例えば、前記基板の材質であり、後者の場合、前記キャピラリー流路の材質は、例えば、埋入する前記キャピラリー管の材質である。前記キャピラリー流路の材質としては、特に限定されず、例えば、前述と同様に、合成石英ガラス、ホウケイ酸ガラス、溶融シリカ等のガラス材料、ポリメチルメタクリレート（ＰＭＭＡ）、シクロオレフィンポリマー（ＣＯＰ）、ポリカーボネート（ＰＣ）、ポリジメチルシロキサン（ＰＤＭＳ）、ポリスチレン（ＰＳ）、ポリ乳酸（ＰＬＡ）、ポリエチレン（ＰＥ）、ポリテトラフルオロエチレン（ＰＴＦＥ）、ポリエーテルエーテルケトン（ＰＥＥＫ）等のポリマー材料等があげられる。前記キャピラリー管は、例えば、市販品を使用してもよい。
　前記ガラス製のキャピラリー流路の内壁は、通常、陰極性の電荷を有する状態である。このようなガラス製のキャピラリー流路は、例えば、陽極性基の導入により、その内壁表面を陽極性の電荷を有する状態にすることができる。前記ポリマー製のキャピラリー流路の内壁は、通常、前記ポリマー内の極性基の有無や種類により、陽極性もしくは陰極性の電荷を有する状態であり、または、無電荷（無極性）の状態である。前記無電荷の前記ポリマー製のキャピラリー流路は、例えば、極性基の導入により、その内壁表面に電荷を有する状態にすることができる。
　本発明において、前記試料分析用キャピラリー流路の内壁は、前述のように、その表面に、イオン性官能基を有しているのが好ましい。前記イオン性官能基としては、例えば、陽極性基、陰極性基があげられる。
　本発明において、前記陽極性基を内壁表面に有する試料分析用キャピラリー流路は、例えば、前記試料分析用キャピラリー流路の内壁を、陽極性基含有化合物により被覆し、形成してもよい。なお、以下、陽極性基含有化合物による被覆を、陽極性層という場合もある。前記陽極性基含有化合物の被覆（陽極性層）により、例えば、試料中のプラス電荷のタンパク質等が、前記試料分析用キャピラリー流路の内壁に吸着するのを防止できる。また、電気浸透流は、例えば、前記陽極性基含有化合物の被覆により、未処理に比べて速くなる傾向がある。前記陽極性基含有化合物としては、特に限定されないが、例えば、前記陽極性基および反応基を含む化合物等があげられる。例えば、前記試料分析用キャピラリー流路が、ガラス製もしくは溶融シリカ製である場合は、前記陽極性基および反応基を含む化合物としては、陽極性基およびケイ素を有する化合物（シリル化剤）等を使用することができる。前記陽極性基としては、特に限定されないが、アミノ基、アンモニウム基が好ましい。前記陽極性基含有化合物としては、特に限定されないが、アミノ基およびアンモニウム基の少なくとも一方の陽極性基を有するシリル化剤が好ましい。前記アミノ基は、一級、二級、三級のいずれであってもよい。
　前記シリル化剤としては、例えば、Ｎ－（２－ジアミノエチル）－３－プロピルトリメトキシシラン、アミノフェノキシジメチルビニルシラン、３－アミノプロピルジイソプロピルエトキシシラン、３－アミノプロピルメチルビス（トリメチルシロキシ）シラン、３－アミノプロピルペンタメチルジシロキサン、３－アミノプロピルシラントリオール、ビス（Ｐ－アミノフェノキシ）ジメチルシラン、１，３－ビス（３－アミノプロピル）テトラメチルジシロキサン、ビス（ジメチルアミノ）ジメチルシラン、ビス（ジメチルアミノ）ビニルメチルシラン、ビス（２－ヒドロキシエチル）－３－アミノプロピルトリエトキシシラン、３－シアノプロピル（ジイソプロピル）ジメチルアミノシラン、（アミノエチルアミノメチル）フェネチルトリメトキシシラン、Ｎ－メチルアミノプロピルトリエトキシシラン、テトラキス（ジエチルアミノ）シラン、トリス（ジメチルアミノ）クロロシラン、トリス（ジメチルアミノ）シラン等があげられる。
　前記陽極性基含有化合物としては、この他に、前記シリル化剤におけるケイ素原子を、チタンもしくはジルコニウムに置換した化合物を用いてもよい。前記陽極性基含有化合物は、一種類を単独で使用してもよいし、二種類以上を併用してもよい。
　前記シリル化剤を用いた、前記試料分析用キャピラリー流路内壁の被覆は、例えば、つぎのようにして実施する。まず、前記シリル化剤を有機溶媒に溶解もしくは分散させて処理液を調製する。前記処理液の調製に使用する前記有機溶媒としては、例えば、ジクロロメタン、トルエン、メタノール、アセトン等を使用できる。前記処理液中のシリル化剤の濃度は、特に限定されない。この処理液を、例えば、ガラス製もしくは溶融シリカ製のキャピラリー流路内に通液し、加熱する。この加熱によって、前記シリル化剤が、前記キャピラリー流路内壁に共有結合で結合し、その結果、陽極性基が前記キャピラリー流路内壁に配置されることになる。その後、後処理として、前記有機溶媒を、リン酸等の酸性溶液、アルカリ性溶液および界面活性剤溶液の少なくとも一つで洗い流し、前記キャピラリー流路内を洗浄する。なお、この洗浄は任意であるが、実施することが好ましい。前記シリル化剤で内壁が被覆されたキャピラリー流路は、市販品を用いてもよい。
　前記陰極性基を内壁表面に有する試料分析用キャピラリー流路は、例えば、前記試料分析用キャピラリー流路の内壁を、陰極性基含有化合物により被覆し、形成してもよい。なお、以下、陰極性基含有化合物による被覆を、陰極性層という場合もある。前記陰極性基含有化合物の被覆（陰極性層）により、例えば、試料中のマイナス電荷のタンパク質等が、前記試料分析用キャピラリー流路の内壁に吸着するのを防止できる。そして、電気浸透流は、例えば、前記陰極性基の被覆により、未処理に比べて速くなる傾向がある。なお、前記陰極性基含有化合物を被覆した場合、前記電気浸透流の方向は、前記陽極性基を被覆した場合の逆になる。また、前記試料と電気泳動液中に存在する前記陰極性基含有化合物とが複合体を形成し、この複合体を電気泳動させるため、試料単独で電気泳動するよりも分離効率が高くなる。これらの結果、より短時間で、より高精度な分析が可能となる。前記試料と複合体を形成する前記陰極性基含有化合物としては、例えば、陰極性基含有多糖類が好ましい。
　前記陰極性基含有多糖類としては、例えば、硫酸化多糖類、カルボン酸化多糖類、スルホン酸化多糖類およびリン酸化多糖類等があげられ、このなかで、硫酸化多糖類およびカルボン酸化多糖類が好ましい。前記硫酸化多糖類としては、コンドロイチン硫酸、ヘパリン等が好ましく、より好ましくは、コンドロイチン硫酸である。前記カルボン酸化多糖類としては、アルギン酸またはその塩（例えば、アルギン酸ナトリウム）が好ましい。前記コンドロイチン硫酸は、Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋの七種類があり、いずれを用いてもよいが、コンドロイチン硫酸Ｃが好ましい。
　前記陰極性層は、例えば、介在層を介して、前記試料分析用キャピラリー流路内壁に積層されてもよい。前記介在層は、特に限定されず、例えば、前記陽極性基含有化合物を用いて形成することができる。前記介在層を介して積層された前記陰極性層は、例えば、前記陽極性基含有化合物により被覆された前記試料分析用キャピラリー流路の内壁に、前記陰極性基含有化合物を含む液を接触させることにより、形成してもよい。この場合、前記陰極性基を形成するための液を別途調製してもよいが、操作効率の面から、前記陰極性基含有化合物を添加して調製した電気泳動液を、内壁に前記介在層が形成された前記キャピラリー流路に通液することが好ましい。
　本発明において、前述のように、前記試料分析用キャピラリー流路に限られず、例えば、前記基板上に形成されたその他のキャピラリー流路の内壁が、前記イオン性官能基を有してもよく、全てのキャピラリー流路の内壁が前記イオン性官能基を有していてもよい。前記イオン性官能基を内壁に有するその他のキャピラリー流路は、前述の試料分析用キャピラリー流路と同様にして形成できる。
　本発明では、前記試料分析用キャピラリー流路に、分析対象となる血中タンパク質を含む試料と電気泳動液とを導入する。
　本発明において、前記電気泳動液としては、特に限定されないが、有機酸を含む電気泳動液が好ましい。前記有機酸は、特に限定されないが、例えば、マレイン酸、酒石酸、コハク酸、フマル酸、フタル酸、マロン酸、リンゴ酸等があげられる。また、前記電気泳動液は、特に限定されないが、例えば、弱塩基を含むことが好ましい。前記弱塩基としては、特に限定されないが、例えば、アルギニン、リジン、ヒスチジン、トリス等があげられる。前記電気泳動液は、特に限定されないが、例えば、ＡＤＡ緩衝液、ＭＥＳ緩衝液、Ｂｉｓ－Ｔｒｉｓ緩衝液、ＰＩＰＥＳ緩衝液、ＡＣＥＳ緩衝液、ＭＯＰＳＯ緩衝液、ＢＥＳ緩衝液、ＨＥＰＥＳ緩衝液、ＴＥＳ緩衝液、リン酸緩衝液等があげられる。前記電気泳動液のｐＨは、特に限定されず、例えば、前述の範囲であり、好ましくは、ｐＨ４．５～６．０の範囲である。
　本発明において、前記電気泳動液には、前述のように、前記陰極性基含有化合物を添加することが好ましい。前記陰極性基含有化合物としては、特に限定されず、例えば、前述の陰極性基含有化合物等があげられる。前記電気泳動液中に含まれる前記陰極性基含有化合物の濃度は、特に限定されず、例えば、０．００１～１０重量％の範囲であり、好ましくは、０．１～５重量％の範囲である。
　本発明において、前記電気泳動液には、例えば、界面活性剤が添加されていてもよい。前記界面活性剤としては、特に限定されないが、例えば、ベタイン型両性界面活性剤、非イオン性界面活性剤等があげられる。前記ベタイン型両性界面活性剤としては、特に限定されないが、例えば、カルボキシベタイン型界面活性剤、スルホベタイン型界面活性剤等があげられる。前記カルボキシベタイン型界面活性剤としては、例えば、Ｎ，Ｎ－ジメチル－Ｎ－アルキル－Ｎ－カルボキシアルキレンアンモニウムベタイン等があげられる。また、前記スルホベタイン型界面活性剤としては、例えば、Ｎ，Ｎ，Ｎ－トリアルキル－Ｎ－スルホアルキレンアンモニウムベタイン等があげられる。前記スルホベタイン型界面活性剤の具体例としては、例えば、パルミチルスルホベタイン等があげられる。
　本発明において、前記電気泳動液には、例えば、陰イオン性のカオトロピックイオンが添加されていてもよい。本発明において、前記陰イオン性のカオトロピックイオンには、陰イオン性のカオトロピックイオンを含む塩、電離して陰イオン性のカオトロピックイオンを生じる物質等も含まれる。前記塩としては、例えば、酸性塩、中性塩、塩基性塩があげられる。本発明において、前記陰イオン性のカオトロピックイオンとしては、特に限定されず、例えば、過塩素酸、チオシアン酸、ヨウ化カリウム、臭化カリウム、トリクロロ酢酸、トリフルオロ酢酸等があげられる。前記電気泳動液中に含まれる前記陰イオン性のカオトロピックイオンの濃度は、特に限定されず、例えば、１～３０００ｍｍｏｌ／Ｌの範囲であり、好ましくは、５～１００ｍｍｏｌ／Ｌの範囲であり、より好ましくは、１０～５０ｍｍｏｌ／Ｌの範囲である。
　本発明において、分析対象の前記血中タンパク質を含む試料としては、例えば、全血、血液を溶血処理した試料等があげられる。このなかで、本発明においては、前記血液を溶血処理した試料中のタンパク質を分析するのが好ましい。前記溶血処理としては、例えば、界面活性剤処理、浸透圧変化処理、超音波処理、凍結解凍処理、加圧処理等があげられ、好ましくは、界面活性剤処理、浸透圧変化処理、超音波処理である。
　前記界面活性剤処理は、特に制限されないが、例えば、界面活性剤を添加した希釈液により、全血を溶血させてもよい。前記界面活性剤としては、例えば、前述の界面活性剤、サポニン等があげられる。また、前記浸透圧変化処理は、特に制限されないが、例えば、低浸透圧に調整した溶液を使用して、全血を溶血させてもよい。前記溶液としては、特に限定されず、例えば、蒸留水、低浸透圧に調整した希釈液等があげられ、好ましくは、蒸留水である。そして、前記超音波処理としては、特に制限されず、例えば、超音波処理装置を使用してもよい。本発明において、前記希釈液としては、特に限定されないが、例えば、蒸留水、前記電気泳動液等があげられる。
　なお、本発明において、前記血中タンパク質とは、血液に含まれるタンパク質をいう。前記血中タンパク質としては、特に限定されず、例えば、ヘモグロビン（Ｈｂ）、アルブミン（Ａｌｂ）、グロブリン（α１、α２、β、γグロブリン）、フィブリノーゲン等があげられる。
　前記ヘモグロビンとしては、特に限定されず、例えば、正常ヘモグロビン（ＨｂＡ０）、糖化ヘモグロビン、修飾ヘモグロビン、胎児ヘモグロビン（ＨｂＦ）等があげられる。前記糖化ヘモグロビンとしては、例えば、ヘモグロビンＡ１ａ（ＨｂＡ１ａ）、ヘモグロビンＡ１ｂ（ＨｂＡ１ｂ）、ヘモグロビンＡ１ｃ（ＨｂＡ１ｃ）、ＧＨｂＬｙｓ等があげられる。前記ヘモグロビンＡ１ｃとしては、例えば、安定型ＨｂＡ１ｃ、不安定型ＨｂＡ１ｃ等があげられる。前記修飾ヘモグロビンとしては、例えば、カルバミル化Ｈｂ、アセチル化Ｈｂ等があげられる。
　本発明のキャピラリー電気泳動分析装置は、前記血中タンパク質を分析項目とする。前記分析項目としては、特に限定されず、例えば、前述の血中タンパク質の中でも、ヘモグロビンが好ましい。
　本発明において、分析項目としては、特に限定されず、例えば、前記各種ヘモグロビンの比率、ヘモグロビンＡ１ｃ濃度、アルブミン濃度、グロブリン濃度、アルブミン／グロブリン比率等があげられる。
　本発明においては、前記電極への電圧印加で生じる電気浸透流により、泳動開始点から検出点に向けて、前記試料を電気泳動させる。そして、前記試料分析用キャピラリー流路上の検出点において、電気泳動させた前記試料中の血中タンパク質の吸光度を測定する。
　本発明において、前記泳動開始点とは、前記試料分析用キャピラリー流路に導入した前記試料が、電圧印加により電気泳動を開始する、前記試料分析用キャピラリー流路上のポイントである。前記泳動開始点は、例えば、前記試料を導入する液槽と前記試料分析用キャピラリー流路との境界等があげられ、特に限定されない。また、本発明において、前記検出点とは、前述のように、前記試料分析用キャピラリー流路内を前記電気泳動させた前記試料中の血中タンパク質の吸光度を測定するポイントである。前記検出点は、前記試料分析用キャピラリー流路上にあり、前記泳動開始点からの距離は、特に制限されないが、例えば、後述の範囲になる位置にあることが好ましい。本発明において、前記泳動開始点から前記検出点までの距離（分離長）は、特に限定されないが、例えば、０．５ｃｍ～１５ｃｍの範囲であり、好ましくは、１ｃｍ～５ｃｍの範囲である。
　本発明において、前記電圧は、特に制限されないが、例えば、０．０７５ｋＶ～２０ｋＶの範囲であり、好ましくは、０．３ｋＶ～５ｋＶの範囲である。また、本発明において、前記電気浸透流は、特に限定されないが、例えば、３ｃｍ／分～１５ｃｍ／分の範囲であり、好ましくは、８ｃｍ／分～１２ｃｍ／分の範囲である。
　本発明において、前記吸光度の測定波長としては、例えば、２６０ｎｍ～３００ｎｍまたは３８０ｎｍ～４５０ｎｍの範囲であり、４００ｎｍ～４３０ｎｍの範囲が好ましい。
　本発明において、前記血中タンパク質の分析時間とは、例えば、分析対象となる前記試料に含まれる前記血中タンパク質を分離し、その検出を完了する時間である。前記血中タンパク質の分析時間は、具体的には、例えば、前記電極への電圧印加開始時から、分析対象となる前記血中タンパク質の全ての検出が完了するまでの時間である。本発明において、前記血中タンパク質の分析時間は、０秒を超え、３５秒以下であり、好ましくは、０秒を超え、３０秒以下であり、より好ましくは、０秒を超え、２５秒以下であり、さらに好ましくは、０秒を超え、２０秒以下である。
　本発明において、前記泳動開始点から前記検出点までの距離および前記分離電場は、例えば、前記キャピラリー流路の幅および深さに応じて、前述の所定範囲に設定するのが好ましい。本発明において、前記分離電場とは、電極間距離１ｃｍあたりに印加する電圧である。本発明において、前記キャピラリー流路の幅および深さに応じて、前記泳動開始点から前記検出点までの距離および前記分離電場を前述の所定範囲に設定することにより、前記血中タンパク質を３５秒以下の短時間で分析できる。本発明において、前記所定範囲は、電気泳動液（泳動緩衝液）の種類、キャピラリー流路への前記イオン性官能基のコーティング方法等により、適宜設定可能であり、前述の範囲に制限されない。
　本発明のキャピラリー電気泳動分析装置は、特に制限されないが、例えば、さらに、定量分注手段、撹拌手段、迷光除去手段、位置調整手段等を有してもよい。
　つぎに、本発明のキャピラリー電気泳動分析装置とそれを用いた分析方法について、例をあげて説明する。ただし、本発明のキャピラリー電気泳動分析装置とそれを用いた分析方法は、下記の例に制限されるものではない。
（実施形態１）
　図１に、本例のキャピラリー電気泳動分析装置に用いる電気泳動チップを示す。図１（Ａ）は、この例の電気泳動チップの平面図であり、図１（Ｂ）は、図１（Ａ）のＩ－Ｉ方向に見た断面図である。同図において、わかりやすくするために、各構成要素の大きさや比率等は、実際と異なっている。図示のとおり、この例の電気泳動チップ２は、下基板３ｂの上に、上基板３ａが積層されて、構成されている。前記上基板３ａには、三つの貫通孔が形成されている。前記上基板３ａに形成された三つの貫通孔の底部が、前記下基板３ｂで封止されることで、三つの液槽４ａ、４ｂおよび４ｅが形成されている。前記下基板３ｂ上には、Ｉ字状の溝が形成されている。前記下基板３ｂ上に形成されたＩ字状の溝の上部が、前記上基板３ａで封止されることで、試料分析用キャピラリー流路５ｘが形成されている。前記液槽４ａおよび前記液槽４ｂは、前記試料分析用キャピラリー流路５ｘで連通されている。一方、前記液槽４ｅは、前記試料分析用キャピラリー流路５ｘには連通せず、単独の液槽として配置されている。前記キャピラリー流路５ｘの前記液槽４ａ側の端部が、泳動開始点８０となる。また、前記キャピラリー流路５ｘ上の前記液槽４ａと前記液槽４ｂとの間の一点が、検出点９０となる。なお、この例の電気泳動チップ２は、直方体状である。ただし、本発明は、本例に限定されない。本発明において、電気泳動チップは、後述の試料の分析に支障をきたさなければ、いかなる形状であってもよい。また、この例の電気泳動チップ２は、二枚の基板（上基板３ａおよび下基板３ｂ）を含む。ただし、本発明は、これに限定されない。本発明において、電気泳動チップは、例えば、一枚の基板で構成されていてもよい。
　この例の電気泳動チップ２においては、前記上基板３ａの長さおよび幅が、前記電気泳動チップ全体の最大長さおよび最大幅となる。したがって、前記上基板３ａの長さおよび幅は、前記電気泳動チップ全体の最大長さおよび最大幅と同様にすればよい。本例の電気泳動チップ２における前記上基板３ａの厚みは、前記複数の液槽４ａ、４ｂおよび４ｅの容積に応じて、適宜設定できるが、例えば、０．１ｍｍ～３ｍｍの範囲であり、好ましくは、１ｍｍ～２ｍｍの範囲である。
　この例の電気泳動チップ２においては、前記下基板３ｂの長さおよび幅は、前記上基板３ａの長さおよび幅と同様である。前記下基板３ｂの厚みは、特に限定されないが、例えば、０．１ｍｍ～３ｍｍの範囲であり、好ましくは、０．１ｍｍ～１ｍｍの範囲である。
　前記上基板３ａおよび前記下基板３ｂの材質は、前記吸光度の測定に支障がないものであれば、特に制限されない。前記上基板３ａおよび前記下基板３ｂの材質としては、例えば、前述の材料等から形成されたものが使用できる。
　前記試料分析用キャピラリー流路５ｘの幅および深さは、例えば、その幅が、２５μｍ～１００μｍの範囲、その深さが、２５μｍ～１００μｍの範囲である。また、前記泳動開始点８０から前記検出点９０までの距離は、例えば、０．５ｃｍ～１５ｃｍの範囲であり、好ましくは、１ｃｍ～５ｃｍの範囲である。
　前記液槽４ａ、前記液槽４ｂおよび前記液槽４ｅの容積は、前述と同様である。図１においては、前記液槽４ａ、４ｂおよび４ｅの形状は、円柱状である。ただし、本発明は、これに限定されない。本発明において、前記液槽４ａ、４ｂおよび４ｅの形状は、前述のとおり、任意の形状とすることができる。
　この例の電気泳動チップ２において、前記チップの最大厚みは、前記上基板３ａおよび前記下基板３ｂの厚みの合計となる。前記チップ全体の厚みは、前述のとおりである。
　図２に、本例のキャピラリー電気泳動分析装置を示す。図示のように、このキャピラリー電気泳動分析装置１は、前述の電気泳動チップ２と、電極６ａおよび６ｂと、電線７ａ～ｆと、スリット８と、制御部９と、光源１１と、光学フィルター１２と、集光レンズ１３と、検出器１４と、電気泳動チップ移動機構２０と、定量分注器３０と、希釈液３１と、電気泳動液３２とを主要な構成部材として有する。前記電気泳動チップ移動機構２０は、駆動部２１およびステージ２２を含む。前記電気泳動チップ２は、前記ステージ２２上に配置される。前記電極６ａおよび６ｂは、それぞれ、前記電気泳動チップ２の液槽４ａおよび４ｂ内に配置される。前記検出器１４、前記定量分注器３０、前記電極６ａおよび６ｂ、前記電気泳動チップ移動機構２０、前記光源１１は、それぞれ、前記電線７ａ～ｆにより、前記制御部９に接続されている。前記制御部９は、前記電線７ａ～ｆにより接続された前述の各構成部材への電力の供給等を制御する。
　本例のキャピラリー電気泳動分析装置１において、前記ステージ２２は、その一端に連結された前記駆動部２１により、水平の二軸方向（Ｘ－Ｙ方向）に移動可能である。なお、前記Ｘ方向と前記Ｙ方向は、前記水平面上で互いに垂直に交わる。これにより、前記電気泳動チップ２の位置を、調整可能である。前記電気泳動チップ２の位置の調整により、前記検出点９０に、特定波長光の光束を正確に入射させることができる。また、前記定量分注器３０は、前記希釈液３１および前記電気泳動液３２をそれぞれ定量し、前記電気泳動チップ２の液槽４ａまたは液槽４ｅに分注可能である。前記電極６ａおよび６ｂ間に電圧を印加することにより、前記試料分析用キャピラリー流路５ｘに導入された試料を電気泳動させることができる。そして、前記光源１１から照射された光は、光学フィルター１２により特定波長光に分光され、集光レンズ１３により収束し、かつ光量が増加し、前記スリット８により迷光が除去され、前記電気泳動チップ２の試料分析用キャピラリー流路５ｘ上の検出点９０の試料に照射される。前記検出点９０に照射された光の透過光を、前記検出器１４が検出し、吸光度を測定することで、前記試料中に含まれる分析対象の血中タンパク質を分析できる。
　本例のキャピラリー電気泳動分析装置１の電気泳動チップ２の製造方法は、特に限定されず、例えば、従来公知の方法を適宜用いればよい。
　つぎに、本例のキャピラリー電気泳動分析装置１を使用した、前記血中タンパク質の分析方法について説明する。
　まず、前記電気泳動液３２を準備する。前記電気泳動液３２としては、前述の電気泳動液であればよく、特に限定されないが、例えば、１００ｍｍｏｌ／Ｌのフマル酸とアルギニン酸水溶液に、０．８重量％の割合でコンドロイチン硫酸Ｃを添加し、ｐＨ４．８に調整した水溶液等があげられる。ついで、前記電気泳動チップ２を、ステージ２２に装着し、本例のキャピラリー電気泳動分析装置１に配置する。そして、前記定量分注器３０を使用して、前記液槽４ａに、前記電気泳動液３２を注入する。さらに、前記液槽４ｂに、減圧ポンプ（図示せず）を連結して減圧し、前記試料分析用キャピラリー流路５ｘに、前記電気泳動液３２を充填する。
　つぎに、前記定量分注器３０を使用して、前記液槽４ｅに、前記希釈液３１を注入後、さらに、試料としてヒトの全血を注入し、ピペッティングにより撹拌し、前記試料および前記希釈液３１の混合液を調製する。なお、前記希釈液３１としては、例えば、蒸留水等を用いる。ついで、前記混合液を、前記液槽４ａに注入する。そして、前記液槽４ａおよび４ｂ内にそれぞれ配置された前記電極６ａおよび６ｂに電圧を印加して、前記試料分析用キャピラリー流路５ｘの両端に電位差を生じさせる。これにより、前記試料を、前記泳動開始点８０から前記液槽４ｂ側に移動させる。前記電圧は、特に限定されないが、例えば、０．５ｋＶ～２０ｋＶの範囲である。前記電圧印加による前記試料分析用キャピラリー流路５ｘの分離電場は、前述のように、前記泳動開始点から前記検出点までの距離および前記キャピラリー流路の幅および深さに応じて適宜設定できるが、例えば、１５０Ｖ／ｃｍ～７００Ｖ／ｃｍの範囲であり、好ましくは、３００Ｖ／ｃｍ～６００Ｖ／ｃｍの範囲である。
　つぎに、前述と同様にして分光および集光され、さらに迷光除去された光（波長４１５ｎｍ）を、前記検出点９０に照射する。さらに、前記検出点９０における透過光を、前記検出器１４を使用して検出し、前記試料中の前記タンパク質による吸光度を測定し、得られた前記吸光度の大きさおよび分析時間（泳動開始から検出までの時間）の対応を示すフェログラムを作成する。
（実施形態２）
　図３に、本例のキャピラリー電気泳動分析装置に用いる電気泳動チップを示す。同図において、図１と同一部分には同一符号を付している。図３（Ａ）は、この例の電気泳動チップの平面図であり、図３（Ｂ）は、図３（Ａ）のＩ－Ｉ方向に見た断面図であり、図３（Ｃ）は、図３（Ａ）のＩＩ－ＩＩ方向に見た断面図である。図示のように、この例の電気泳動チップ２は、下基板３ｂ上に、上基板３ａが積層されて、構成されている。前記上基板３ａには、複数（本例では四つ）の貫通孔が形成されている。前記上基板３ａに形成された四つの貫通孔の底部が、前記下基板３ｂで封止されることで、四つの液槽４ａ～４ｄが形成されている。前記下基板３ｂ上には、十字状の溝が形成されている。前記下基板３ｂ上に形成された十字状の溝の上部が、前記上基板３ａで封止されることで、試料分析用キャピラリー流路５ｘおよび試料導入用のキャピラリー流路５ｙが形成されている。前記液槽４ａと前記液槽４ｂとは、前記試料分析用キャピラリー流路５ｘで連通されている。前記液槽４ｃと前記液槽４ｄとは、前記試料導入用キャピラリー流路５ｙで連通されている。前記試料分析用キャピラリー流路５ｘと前記試料導入用キャピラリー流路５ｙとは、交差している。前記試料分析用キャピラリー流路５ｘと前記試料導入用キャピラリー流路５ｙとは、前記交差部分で連通されている。前記交差部分が、泳動開始点８０となる。また、前記キャピラリー流路５ｘ上の前記液槽４ａと前記液槽４ｂとの間の一点が、検出点９０となる。この例の電気泳動チップ２では、前記試料分析用キャピラリー流路５ｘと前記試料導入用キャピラリー流路５ｙの最大長さは、異なっている。ただし、本発明は、これに限定されない。本発明において、前記電気泳動チップ２の前記試料分析用キャピラリー流路５ｘと前記試料導入用キャピラリー流路５ｙの最大長さは、同じであってもよい。
　この例の電気泳動チップ２は、前記液槽４ｃおよび前記液槽４ｄと、前記試料導入用キャピラリー流路５ｙとが形成され、前記液槽４ｅが形成されていない点を除き、図１に示した電気泳動チップと同様の構成である。前記試料導入用キャピラリー流路５ｙの幅および深さは、前記試料分析用キャピラリー流路５ｘの幅および深さと同様である。そして、前記泳動開始点８０から前記検出点９０までの距離は、図１に示した電気泳動チップと同様である。また、前記液槽４ｃおよび前記液槽４ｄの容積および形状は、図１に示した電気泳動チップの液槽と同様である。
　本例のキャピラリー電気泳動分析装置は、電気泳動チップ２が、図１に示した電気泳動チップに代えて、図３に示した電気泳動チップであり、電極６ｃおよび電極６ｄ（図示せず）が、前記電気泳動チップ２の液槽４ｃおよび４ｄ内に配置されていることを除き、図２に示したキャピラリー電気泳動分析装置と同様である。
　つぎに、本例のキャピラリー電気泳動分析装置１を使用した、前記血中タンパク質の分析方法について説明する。
　まず、前記電気泳動チップ２を、ステージ２２に装着し、本例のキャピラリー電気泳動分析装置１に配置する。ついで、実施形態１と同様にして、前記定量分注器３０を使用して、前記液槽４ａに、前記電気泳動液３２を注入する。つぎに、実施形態１と同様にして、前記液槽４ｂに、減圧ポンプ（図示せず）を連結して減圧し、前記試料分析用キャピラリー流路５ｘに、前記電気泳動液３２を充填する。そして、前記定量分注器３０を使用して、前記液槽４ｃに、前記電気泳動液３２を注入する。さらに、前記液槽４ｄに、減圧ポンプ（図示せず）を連結して減圧し、前記試料導入用キャピラリー流路５ｙに、前記電気泳動液３２を充填する。
　つぎに、前記定量分注器３０を使用して、前記液槽４ｃに前記希釈液３１を注入後、さらに、試料としてヒトの全血を注入し、ピペッティングにより撹拌する。ついで、前記電極６ｃおよび６ｄに電圧を印加して、前記試料導入用キャピラリー流路５ｙの両端に電位差を生じさせる。これにより、前記試料分析用キャピラリー流路５ｘと前記試料導入用キャピラリー流路５ｙの交差部分まで、前記試料を移動させる。前記電極６ｃと前記電極６ｄ間に印加する電圧は、特に限定されないが、例えば、０．５ｋＶ～２０ｋＶの範囲である。
　つぎに、前記電極６ａおよび６ｂに電圧を印加して、前記試料分析用キャピラリー流路５ｘの両端に電位差を生じさせる。これにより、前記試料を、前記泳動開始点８０から前記液槽４ｂ側に移動させる。前記電圧は、特に限定されないが、例えば、０．５ｋＶ～２０ｋＶの範囲である。前記電圧印加による前記試料分析用キャピラリー流路５ｘの分離電場は、前述のように、前記泳動開始点から前記検出点までの距離および前記キャピラリー流路の幅および深さに応じて適宜設定できるが、例えば、実施形態１と同様の範囲である。
　つぎに、実施形態１と同様にして分光および集光され、さらに迷光除去された光（波長４１５ｎｍ）を、検出点９０に照射する。さらに、前記検出点９０における透過光を、前記検出器１４を使用して検出し、前記試料中のタンパク質による吸光度を測定し、得られた前記吸光度の大きさおよび分析時間（泳動時間）の対応を示すフェログラムを作成する。
（実施形態３）
　図４に、本例のキャピラリー電気泳動分析装置に用いる電気泳動チップを示す。同図において、図１および図３と同一部分には、同一符号を付している。図４（Ａ）は、この例の電気泳動チップの平面図であり、図４（Ｂ）は、この例の電気泳動チップの斜視図である。図示のように、この例の電気泳動チップ２００は、下基板３ｂの上に、上基板３ａが積層された積層体と、コネクタ７０とを含む。前記コネクタ７０は、前記積層体の一側面に配置されている。前記下基板３ｂには、配線パターン（図示せず）が形成されている。前記上基板３ａには、六つの貫通孔が形成されている。前記六つの貫通孔の底部が、前記下基板３ｂにより封止されることにより、六つの液槽が形成されている。前記六つの液槽は、それぞれ、試料導入口４１、ドレイン４５、ドレイン５５、ドレイン５７、ドレイン５９およびドレイン６３である。また、前記上基板３ａの底面には、大小三つの凹部が形成されている。前記三つの凹部のうち、二つの凹部の開口面が、前記下基板３ｂにより封止されることで、二つの液槽が形成されている。前記二つの液槽は、それぞれ、試薬槽５１および希釈槽５８である。前記試薬槽５１には、電気泳動液が封入されている。前記希釈槽５８には、前記配線パターン中の配線に接続した電極６ａが配置され、撹拌子（図示せず）が封入されている。前記三つの凹部のうち、残りの一つの凹部の開口面が、前記下基板３ｂにより封止されることで形成される電極配置部６１には、前記配線パターン中の配線に接続した電極６ｂが配置される。さらに、前記上基板３ａの底面には、複数の溝が形成されている。前記複数の溝の開口面が、前記下基板３ｂにより封止されることで、前記六つの液槽および前記三つの凹部を連通する流路が形成されている。前記希釈槽５８および前記電極配置部６１を連通するキャピラリー流路が、試料分析用キャピラリー流路５ｘである。前記試料分析用キャピラリー流路５ｘの前記希釈槽５８側の端部が、泳動開始点８０となる。また、前記試料分析用キャピラリー流路５ｘ上の一点が、検出点９０となる。前記試料分析用キャピラリー流路５ｘ以外の流路の詳細については、後述する。
　前記試料導入口４１は、試料導入流路４２、分岐部４３、オーバーフロー流路４４を順に介して、前記ドレイン４５に連通している。また、前記試料導入口４１は、前記分岐部４３から、試料計量流路４６を介して、前記希釈槽５８にも連通している。前記試料導入口４１は、分析対象となる血中タンパク質を含む試料を電気泳動チップに導入するための導入口である。そして、前記試料計量流路４６の前記希釈槽５８側の端部には、流路断面積の狭いオリフィス４７が形成されている。
　この例の電気泳動チップ２００では、つぎのようにして、前記試料を計量し、電気泳動チップ内に導入する。まず、前記試料導入口４１に試料導入後、前記ドレイン４５より減圧ポンプ等（図示せず）を使用してエアを吸引する。前記吸引により、前記分岐部４３および前記オリフィス４７間の前記試料計量流路４６の容積を超える前記試料は、オーバーフロー流路４４に流出する。さらに、前記ドレイン４５を閉じ、加圧ポンプ等（図示せず）を使用して、前記試料導入口４１からエアを吐出することにより、前記試料計量流路４６内に貯留した前記容積分量の試料を計量し、前記希釈槽５８に導入する。
　前記試薬槽５１は、試薬導入流路５２ａ、分岐部５３ａ、オーバーフロー流路５４を順に介して、前記ドレイン５５に連通している。また、前記試薬槽５１は、前記分岐部５３ａから、試薬計量流路５６、分岐部５３ｂ、試料導入流路５２ｂを介して、前記希釈槽５８にも連通している。前記分岐部５３ｂで分岐した流路の末端には、前記ドレイン５７が形成されている。そして、前記試料分析用キャピラリー流路５ｘの前記希釈槽５８側端部で分岐した流路の末端には、ドレイン５９が形成されている。さらに、前記電極配置部６１と前記ドレイン６３との間には、流量計測流路６２が形成されている。
　この例の電気泳動チップ２００では、つぎのようにして、前記試料分析用キャピラリー流路５ｘに前記電気泳動液を充填し、さらに、前記電気泳動液を計量し、前記希釈槽５８に導入する。まず、前記試料導入口４１、ドレイン４５、５５、５７および５９を閉状態とし、前記ドレイン６３に連結した減圧ポンプ等（図示せず）を使用して、エアを吸引することにより、前記試薬導入流路５２ａおよび５２ｂ、前記試薬計量流路５６、前記希釈槽５８、前記試料分析用キャピラリー流路５ｘ、前記電極配置部６１ないし前記流量計測流路６２に、前記試薬槽５１に封入された電気泳動液が充填される。ついで、前記試薬槽５１を閉じ、前記ドレイン５９を開き、前記ドレイン５７に連結した減圧ポンプ等（図示せず）を使用して、エアを吸引することにより、前記試料導入流路５２ｂおよび前記希釈槽５８内の電気泳動液が除去される。さらに、前記ドレイン５７を閉じ、前記ドレイン５５を開き、前記ドレイン５９に連結した減圧ポンプ等（図示せず）を使用して、エアを吸引することにより、前記試薬計量流路５６容積分量の電気泳動液を計量し、前記希釈槽５８に導入することができる。そして、前述のようにして、前記試料を前記希釈槽５８に導入し、マグネティックスターラー（図示せず）を使用して撹拌子（図示せず）を回転させることにより、前記試料と前記電気泳動液とを混合することができる。
　この例の電気泳動チップ２００においては、前記上基板３ａの材質としては、前記吸光度の測定に支障のないものであれば、特に制限されない。前記上基板３ａとしては、例えば、前述の材料等から形成されたものを使用できる。
　この例の電気泳動チップ２００における前記上基板３ａの長さおよび幅は、例えば、１０ｍｍ～２００ｍｍの範囲であり、好ましくは、２０ｍｍ～１００ｍｍの範囲である。また、前記上基板３ａの厚みは、例えば、０．１ｍｍ～１０ｍｍの範囲であり、好ましくは、１ｍｍ～５ｍｍの範囲である。
　この例の電気泳動チップ２００においては、前記下基板３ｂとして、例えば、アクリル樹脂、前記上基板３ａと同様の材質等から形成されたものが使用できる。前記下基板３ｂは、前記材質で形成された複数の基板が積層されて構成され、前記複数の基板間に、銅箔等からなる配線パターンが形成されている。
　前記下基板３ｂの長さおよび幅は、前記上基板３ａの長さおよび幅と同様である。前記下基板３ｂの厚みは、例えば、０．１ｍｍ～１０ｍｍの範囲である。
　この例の電気泳動チップ２００においては、前記試料導入口４１の直径および深さは、例えば、直径が、０．１ｍｍ～１０ｍｍの範囲であり、深さが、０．１ｍｍ～１０ｍｍの範囲であり、好ましくは、直径が、１ｍｍ～５ｍｍの範囲であり、深さが、１ｍｍ～５ｍｍの範囲である。
　この例の電気泳動チップ２００においては、前記試薬槽５１の直径および深さは、例えば、直径が、０．５ｍｍ～５０ｍｍの範囲であり、深さが、０．１ｍｍ～１０ｍｍの範囲であり、好ましくは、直径が、１ｍｍ～２０ｍｍの範囲であり、深さが、１ｍｍ～５ｍｍの範囲である。そして、この例の電気泳動チップ２００においては、前記希釈槽５８の直径および深さは、例えば、直径が、０．５ｍｍ～５０ｍｍの範囲であり、深さが、０．１ｍｍ～１０ｍｍの範囲であり、好ましくは、直径が、１ｍｍ～１０ｍｍの範囲であり、深さが、１ｍｍ～５ｍｍの範囲である。
　この例の電気泳動チップ２００においては、前記ドレイン４５、５５、５７、５９、６３の直径および深さは、それぞれ、直径が、０．１ｍｍ～１０ｍｍの範囲であり、深さが、０．１ｍｍ～１０ｍｍの範囲であり、好ましくは、それぞれ、直径が、１ｍｍ～５ｍｍの範囲であり、深さが、１ｍｍ～５ｍｍの範囲である。
　この例の電気泳動チップ２００においては、前記試料導入口４１、前記試薬槽５１、前記希釈槽５８および前記ドレイン４５、５５、５７、５９、６３の形状は、円柱状である。ただし、本発明は、これに限定されない。前記試料導入口４１、前記試薬槽５１、前記希釈槽５８および前記ドレイン４５、５５、５７、５９、６３の形状は、例えば、前記円柱状の他、四角柱状、四角錐状、円錐状、これらを組み合わせた形状等、任意の形状とすることができる。また、前記試料導入口４１、前記試薬槽５１、前記希釈槽５８および前記ドレイン４５、５５、５７、５９、６３の形状は、全て同じであってもよいし、それぞれ異なってもよい。
　この例の電気泳動チップ２００において、前記試料分析用キャピラリー流路５ｘの幅および深さは、図１に示した電気泳動チップ２と同様である。そして、前記泳動開始点８０から前記検出点９０までの距離は、図１に示した電気泳動チップ２と同様である。
　この例の電気泳動チップ２００において、前記試薬計量流路５６の流路の幅および深さは、断面積の最大部分において、例えば、幅が、０．１ｍｍ～１０ｍｍの範囲であり、深さが、０．１ｍｍ～１０ｍｍの範囲である。
　この例の電気泳動チップ２００において、前記オリフィス４７の幅および深さは、例えば、幅が、１μｍ～２００μｍの範囲であり、深さが、１μｍ～２００μｍの範囲であり、好ましくは、幅が、１０μｍ～１００μｍであり、深さが、１０μｍ～１００μｍである。
　この例の電気泳動チップ２００において、前記試料分析用キャピラリー流路５ｘ、前記試薬計量流路５６、前記オリフィス４７以外のキャピラリー流路の幅および深さは、例えば、幅が、１０μｍ～１０００μｍの範囲であり、深さが、１０μｍ～１０００μｍの範囲であり、好ましくは、幅が、５０μｍ～５００μｍであり、深さが、５０μｍ～５００μｍである。
　この例の電気泳動チップ２００において、前記電気泳動チップ全体の最大厚みは、前記上基板３ａおよび前記下基板３ｂの厚みの合計となる。前記チップ全体の厚みは、前述のとおりである。
　この例の電気泳動チップ２００の製造方法は、特に限定されず、例えば、従来公知の方法を適宜用いればよい。
　図５に、本例のキャピラリー電気泳動分析装置を示す。同図において、図２と同一部分には、同一符号を付している。図示のように、本例のキャピラリー電気泳動分析装置１００は、電気泳動チップが、図１に示した電気泳動チップに代えて、図４に示した電気泳動チップであり、定量分注器３０、希釈液３１、電線７ｂ～ｄを有さず、前記電気泳動液を前記電気泳動チップ２００内に有し、前記コネクタ７０の接続部（図示せず）および電線７ｇを有することを除き、図２に示した電気泳動分析装置１と同様である。同図には表れていないが、前記電気泳動チップ２００は、前記コネクタ７０を介して前記ステージ２２に装着され、前記キャピラリー電気泳動分析装置１００に搭載される。前記コネクタ７０は、前記電線７ｇにより、前記制御部９に接続されている。前記制御部９は、前記コネクタ７０への電力の供給等を制御する。
　つぎに、本例のキャピラリー電気泳動分析装置１００を使用した、血中タンパク質の分析方法について説明する。
　まず、前記電気泳動チップ２００を、前記コネクタ７０を介して前記キャピラリー電気泳動分析装置１００に装着する。ついで、前述と同様にして、前記試料分析用キャピラリー流路５ｘに前記電気泳動液を充填し、さらに、前記電気泳動液を計量し、前記希釈槽５８に導入する。そして、前記試料として、ヒト全血を、前述と同様にして、前記試料導入口４１から導入し、前記試料計量流路４６の容量分量を計量し、前記希釈槽５８に導入する。導入した前記試料および前記電気泳動液を、前記希釈槽５８で混合し、前記撹拌子（図示せず）を前記マグネティックスターラー（図示せず）で回転させて撹拌する。
　つぎに、前記電極６ａおよび前記電極６ｂに電圧を印加して、前記試料分析用キャピラリー流路５ｘの両端に電位差を生じさせる。これにより、前記試料を、前記泳動開始点８０から前記電極６ｂ側に移動させる。前記電圧の印加は、前記配線パターン中の前記電線７ｇにより、前記コネクタ７０から前記電極６ａおよび前記電極６ｂに電力を供給することで実施する。前記電圧は、特に限定されないが、例えば、０．５ｋＶ～２０ｋＶの範囲である。前記電圧印加による前記試料分析用キャピラリー流路５ｘの分離電場は、前述のように、前記泳動開始点から前記検出点までの距離および前記キャピラリー流路の幅および深さに応じて適宜設定できるが、例えば、実施形態１と同様の範囲である。
　つぎに、実施形態１と同様にして分光および集光され、さらに迷光除去された光（波長４１５ｎｍ）を、前記検出点９０に照射する。さらに、前記検出点９０における透過光を、前記検出器１４を使用して検出し、電気泳動された前記試料中のタンパク質による吸光度を測定し、得られた前記吸光度の大きさおよび分析時間の対応を示すフェログラムを作成する。
　つぎに、図２に示した本発明のキャピラリー電気泳動分析装置を使用した、糖化ヘモグロビン（ＨｂＡ１ｃ）の分析例について説明する。
（実施例１）
　まず、図１に示した電気泳動チップを作製した。本例の電気泳動チップ２は、ＰＭＭＡ製であり、チップの長さ（前記試料分析用キャピラリー流路５ｘに沿った方向の寸法）は７０ｍｍであり、幅は３０ｍｍであった。本例の電気泳動チップ２において、前記試料分析用キャピラリー流路５ｘの幅は、４０μｍであり、その深さは、４０μｍであった。また、前記泳動開始点８０から前記検出点９０までの距離は、１．５ｃｍであった。
　つぎに、本例の電気泳動チップ２をステージ２２に搭載し、図２に示したキャピラリー電気泳動分析装置１を構成した。また、５０ｍｍｏｌ／Ｌ　フマル酸に３０ｍｍｏｌ／Ｌ　チオシアン酸ナトリウムを添加したものに、アルギニンを加えてｐＨ４．８に調整した溶液に、０．８重量％　コンドロイチン硫酸Ｃをさらに添加して、電気泳動液３２を調製した。そして、前記電気泳動液３２を用いて、ヘモグロビン（ＢＭＬ社製）を１０ｇ／Ｌの濃度に希釈し、試料を調製した。なお、前記試料は、ヘモグロビンＡ１ｃ濃度が、約５重量％であり、そのヘモグロビン濃度は、ヒト血液を１５倍に希釈したヘモグロビン濃度に相当した。
　つぎに、前記電気泳動チップ２の液槽４ａに前記電気泳動液３２を注入した。そして、液槽４ｂに連結した減圧ポンプでエアを吸引して、試料分析用キャピラリー流路５ｘに、前記電気泳動液３２を充填した。ついで、前記液槽４ａに前記試料を導入した。そして、前記電極６ａおよび電極６ｂに４５０Ｖ／ｃｍの分離電場を印加し、前記試料分析用キャピラリー流路５ｘの両端に電位差を生じさせた。これにより、前記試料を、前記液槽４ａから、前記液槽４ｂ側に移動させた。このとき、前記検出器１４により、前記試料分析用キャピラリー流路５ｘの前記検出点９０における吸光度（測定波長４１５ｎｍ）を測定した。そして、前記電圧印加開始からの経過時間、すなわち分析時間（秒）と前記吸光度との関係を示すフェログラムを作成した。さらに、前記フェログラムにおいて、ヘモグロビンの検出前に現れる吸光度の低下点をｔ（秒）、泳動開始点から検出点までの距離をｄ（ｃｍ）とし、下記に示す式（１）を用いて、電気浸透流を算出した。
　　電気浸透流（ｃｍ／分）＝ｄ／（ｔ／６０）　　　・・・（１）
（実施例２）
　本例では、実施例１と同様にして、電気泳動チップ２を作製し、キャピラリー電気泳動分析装置１を構成した。そして、前記キャピラリー電気泳動分析装置１を使用して、安定型ヘモグロビンＡ１ｃおよび不安定型ヘモグロビンＡ１ｃの分析を行った。本例では、前記試料として、前述の１０ｇ／Ｌ　ヘモグロビンに代えて、５００ｍｇ／ｄＬ　グルコースを添加した１００ｇ／Ｌ　ヘモグロビンを３７℃で３時間インキュベーションしたものを１０倍希釈して使用した以外は、実施例１と同様にして分析した。
（実施例３）
　本例では、実施例１と同様にして、電気泳動チップ２を作製し、キャピラリー電気泳動分析装置１を構成した。そして、前記キャピラリー電気泳動分析装置１を使用して、ヘモグロビンＡ１ｃを分析した。本例では、前記泳動開始点８０から前記検出点９０までの長さを、前述の１．５ｃｍに代えて、１．０ｃｍとした以外は、実施例１と同様にして分析した。
（実施例４）
　本例では、実施例１と同様にして、電気泳動チップ２を作製し、キャピラリー電気泳動分析装置１を構成した。そして、前記キャピラリー電気泳動分析装置１を使用して、ヘモグロビンＡ１ｃの分析を行った。本例では、前記泳動開始点８０から前記検出点９０までの長さを、前述の１．５ｃｍに代えて、２．０ｃｍとした以外は、実施例１と同様にして分析した。
（実施例５）
　本例では、実施例１と同様にして、電気泳動チップ２を作製し、キャピラリー電気泳動分析装置１を構成した。そして、前記キャピラリー電気泳動分析装置１を使用して、ヘモグロビンＡ１ｃの分析を行った。本例では、前記泳動開始点８０から前記検出点９０までの長さを、前述の１．５ｃｍに代えて、０．５ｃｍとし、さらに前記電極６ａおよび電極６ｂに印加する分離電場を、前述の４５０Ｖ／ｃｍに代えて、２５０Ｖ／ｃｍとした以外は、実施例１と同様にして分析した。
（比較例１）
　本例では、実施例１と同様にして、電気泳動チップ２を作製し、キャピラリー電気泳動分析装置１を構成した。そして、前記キャピラリー電気泳動分析装置１を使用して、ヘモグロビンＡ１ｃの分析を行った。本例では、試料として、ヘモグロビン濃度を、１０ｇ／Ｌに代えて、５ｇ／Ｌ（ヘモグロビンＡ１ｃ濃度約１１％）とし、前記泳動開始点８０から前記検出点９０までの長さを、１．５ｃｍに代えて、２．０ｃｍとし、前記電極６ａおよび電極６ｂに印加する分離電場を、４５０Ｖ／ｃｍに代えて、２５０Ｖ／ｃｍとした以外は、実施例１と同様にして測定した。なお、前記試料のヘモグロビン濃度　５ｇ／Ｌは、ヒト血液を３０倍に希釈したヘモグロビン濃度に相当した。
（比較例２）
　本例では、前記試料分析用キャピラリー流路５ｘとして、前記下基板３ｂに形成された溝に埋設した別部材のキャピラリー管（内径４０μｍ）を用いた以外は、前記実施例１と同様にして、電気泳動チップ２を作製し、キャピラリー電気泳動分析装置１を構成した。なお、前記キャピラリー管の材質は、フューズドシリカ製であった。そして、前記キャピラリー電気泳動分析装置１を使用して、ヘモグロビンＡ１ｃの分析を行った。本例では、前記電気泳動チップ２を使用した以外は、比較例１と同様にして分析した。
　実施例１～５、比較例１および比較例２における分析結果を、図６～１２のグラフに示す。図６は、実施例１の結果であり、図７は、実施例２の結果であり、図８は、実施例３の結果であり、図９は、実施例４の結果であり、図１０は、実施例５の結果であり、図１１は、比較例１の結果であり、図１２は、比較例２の結果である。また、図６～１２のグラフにおいて、横軸は、前記電圧印加開始時からの時間経過（秒）であり、縦軸は、４１５ｎｍの測定波長における吸光度である。
　実施例１～５、比較例１および比較例２において、電気浸透流を算出した結果を、下記表１に示す。同表に示すように、電気浸透流について、実施例１および２は、１０ｃｍ／分であり、実施例３は、８．６ｃｍ／分であり、実施例４は、７．５ｃｍ／分であり、実施例５は、３．０ｃｍ／分であり、比較例１は、４．０ｃｍ／分であり、比較例２は、２．４ｃｍ／分であった。
（表１）
　　　　　　　　ｔ（秒）　　　　電気浸透流（ｃｍ／分）
実施例１　　　　　９　　　　　　　　　１０
実施例２　　　　　９　　　　　　　　　１０
実施例３　　　　　７　　　　　　　　　　８．６
実施例４　　　　１６　　　　　　　　　　７．５
実施例５　　　　１０　　　　　　　　　　３．０
比較例１　　　　３０　　　　　　　　　　４．０
比較例２　　　　５０　　　　　　　　　　２．４
　図６および図８～１２のグラフに示すように、実施例１、実施例３、実施例４、実施例５、比較例１および比較例２では、ヘモグロビンＡ１ｃとヘモグロビンＡ０とを分離して検出可能であった。また、図７のグラフに示すように、実施例２では、安定型ヘモグロビンＡ１ｃ、不安定型ヘモグロビンＡ１ｃおよびヘモグロビンＡ０の３つのヘモグロビンを分離して検出可能であった。そして、各例における電圧印加開始から検出完了までの時間（ヘモグロビンの分析時間）は、実施例１では、約２４秒、実施例２では、約２５秒、実施例３では、約１８秒、実施例４では、約３０秒、実施例５では、約１８秒であったのに対し、比較例１では、約６０秒、比較例２では、約９０秒であった。すなわち、実施例１～５では、分析時間が、３５秒以下の非常に短時間であったが、比較例１および比較例２では、分析時間が、６０秒以上であった。
　本発明によれば、分析装置全体が小型化可能であり、操作が簡便で、ランニングコストが低く、３５秒以下の短時間で、高精度に血中タンパク質を分析できる。特に、本発明は、微小分析システム（μＴＡＳ）に適している。本発明は、臨床検査、生化学検査、医学研究等の血中タンパク質を分析する全ての分野に適用可能であり、その用途は限定されず、広い分野に適用可能である。
１、１００　　　キャピラリー電気泳動分析装置
２、２００　　　電気泳動チップ
３ａ　　　　　　上基板
３ｂ　　　　　　下基板
４ａ、４ｂ、４ｃ、４ｄ、４ｅ　液槽
５ｘ　　　　　　試料分析用キャピラリー流路
５ｙ　　　　　　試料導入用キャピラリー流路
６ａ、６ｂ、６ｃ、６ｄ　電極
７ａ、７ｂ、７ｃ、７ｄ、７ｅ、７ｆ、７ｇ　電線
８　　　　　　　スリット
９　　　　　　　制御部
１１　　　　　　光源
１２　　　　　　光学フィルター
１３　　　　　　集光レンズ
１４　　　　　　検出器
２０　　　　　　電気泳動チップ移動機構
２１　　　　　　駆動部
２２　　　　　　ステージ
３０　　　　　　定量分注器
３１　　　　　　希釈液
３２　　　　　　電気泳動液
４１　　　　　　試料導入口
４２　　　　　　試料導入流路
４３、５３ａ、５３ｂ　分岐部
４４、５４　オーバーフロー流路
４５、５５、５７、５９、６３　ドレイン
４６　　　　　　試料計量流路
４７　　　　　　オリフィス
５１　　　　　　試薬槽
５２ａ、５２ｂ　試薬導入流路
５６　　　　　　試薬計量流路
５８　　　　　　希釈槽
６１　　　　　　電極配置部
６２　　　　　　流量計測流路
７０　　　　　　コネクタ
８０　　　　　　泳動開始点
９０　　　　　　検出点

Claims (26)

  1. 血中タンパク質をキャピラリー電気泳動法により分析するキャピラリー電気泳動分析装置であって、
    電気泳動チップ、電圧印加手段、送液手段および吸光度測定手段を有し、
    前記電気泳動チップが、基板と、複数の液槽およびキャピラリー流路を含み、
    前記電圧印加手段が、電極を含み、
    前記基板上に、前記複数の液槽が形成され、
    前記複数の液槽が、前記キャピラリー流路で連通され、
    前記キャピラリー流路が、試料分析用のキャピラリー流路を含み、
    前記送液手段を使用して、前記試料分析用キャピラリー流路に、電気泳動液を充填し、
    前記電気泳動液が充填された前記試料分析用キャピラリー流路に、分析対象の前記血中タンパク質を含む試料を導入し、前記電極に電圧を印加し、前記試料を電気泳動させ、
    前記吸光度測定手段により、前記電気泳動させた試料中の前記血中タンパク質の吸光度を測定し、
    前記血中タンパク質の分析時間が、３５秒以下であることを特徴とするキャピラリー電気泳動分析装置。
  2. 前記試料分析用キャピラリー流路において、
    流路方向に対し垂直方向の断面形状が、円形もしくは矩形であり、
    円形の場合、その径が、２５μｍ～１００μｍの範囲であり、
    矩形の場合、その幅が、２５μｍ～１００μｍの範囲であり、その深さが、２５μｍ～１００μｍの範囲であり、
    泳動開始点から、前記試料の電気泳動が開始され、
    前記電気泳動された試料中の前記血中タンパク質の吸光度が、検出点で測定され、
    前記泳動開始点から前記検出点までの距離が、５ｃｍ以下である請求の範囲１記載のキャピラリー電気泳動分析装置。
  3. 前記試料分析用キャピラリー流路の内壁表面が、イオン性官能基を有し、
    前記電気泳動液のｐＨが、ｐＨ４．０～６．０の範囲であり、
    前記電圧印加時に生じる電気浸透流が、３ｃｍ／分以上である請求の範囲１記載のキャピラリー電気泳動分析装置。
  4. 前記電気泳動液が、硫酸化多糖類を含むことを特徴とする請求の範囲１記載のキャピラリー電気泳動分析装置。
  5. 前記硫酸化多糖類が、コンドロイチン硫酸であることを特徴とする請求の範囲４記載のキャピラリー電気泳動分析装置。
  6. 前記試料分析用キャピラリー流路において、前記断面形状が、幅および深さがそれぞれ３０μｍの矩形の場合、前記泳動開始点から前記検出点までの距離が、
    ０.２５ｃｍ以上０.７５ｃｍ未満の場合、分離電場が３００Ｖ／ｃｍ以下であり、
    ０.７５ｃｍ以上１.２５ｃｍ未満の場合、分離電場が３００～６００Ｖ／ｃｍであり、
    １.２５ｃｍ以上１.７５ｃｍ未満の場合、分離電場が４００～６５０Ｖ／ｃｍであり、
    １.７５ｃｍ以上２.２５ｃｍ未満の場合、分離電場が４５０～７００Ｖ／ｃｍであることを特徴とする請求の範囲２記載のキャピラリー電気泳動分析装置。
  7. 前記試料分析用キャピラリー流路において、前記断面形状が、幅および深さがそれぞれ４０μｍの矩形の場合、前記泳動開始点から前記検出点までの距離が、
    ０.２５ｃｍ以上０.７５ｃｍ未満の場合、分離電場が２５０Ｖ／ｃｍ以下であり、
    ０.７５ｃｍ以上１.２５ｃｍ未満の場合、分離電場が２５０～５００Ｖ／ｃｍであり、
    １.２５ｃｍ以上１.７５ｃｍ未満の場合、分離電場が３７５～５５０Ｖ／ｃｍであり、
    １.７５ｃｍ以上２.２５ｃｍ未満の場合、分離電場が４００～６００Ｖ／ｃｍであることを特徴とする請求の範囲２記載のキャピラリー電気泳動分析装置。
  8. 前記試料分析用キャピラリー流路において、前記断面形状が、幅および深さがそれぞれ５０μｍの矩形の場合、前記泳動開始点から前記検出点までの距離が、
    ０.２５ｃｍ以上０.７５ｃｍ未満の場合、分離電場が２００Ｖ／ｃｍ以下であり、
    ０.７５ｃｍ以上１.２５ｃｍ未満の場合、分離電場が２００～４５０Ｖ／ｃｍであり、
    １.２５ｃｍ以上１.７５ｃｍ未満の場合、分離電場が３００～５００Ｖ／ｃｍであり、
    １.７５ｃｍ以上２.２５ｃｍ未満の場合、分離電場が３５０～５５０Ｖ／ｃｍであることを特徴とする請求の範囲２記載のキャピラリー電気泳動分析装置。
  9. 前記試料分析用キャピラリー流路において、前記断面形状が、幅および深さがそれぞれ６０μｍの矩形の場合、前記泳動開始点から前記検出点までの距離が、
    ０.２５ｃｍ以上０.７５ｃｍ未満の場合、分離電場が１５０Ｖ／ｃｍ以下であり、
    ０.７５ｃｍ以上１.２５ｃｍ未満の場合、分離電場が１５０～４００Ｖ／ｃｍであり、
    １.２５ｃｍ以上１.７５ｃｍ未満の場合、分離電場が２５０～４５０Ｖ／ｃｍであり、
    １.７５ｃｍ以上２.２５ｃｍ未満の場合、分離電場が３００～５００Ｖ／ｃｍであることを特徴とする請求の範囲２記載のキャピラリー電気泳動分析装置。
  10. 前記血中タンパク質を分析項目とし、
    前記分析項目が、ヘモグロビンである請求の範囲１記載のキャピラリー電気泳動分析装置。
  11. 前記ヘモグロビンが、ヘモグロビンＡ１ｃ（ＨｂＡ１ｃ）およびヘモグロビンＦ（ＨｂＦ）の少なくとも一方である請求の範囲１０記載のキャピラリー電気泳動分析装置。
  12. 前記ヘモグロビンＡ１ｃ（ＨｂＡ１ｃ）を分析項目とし、
    前記ヘモグロビンＡ１ｃ（ＨｂＡ１ｃ）の分析として、ヘモグロビンＡ１ｃ濃度（ＨｂＡ１ｃ濃度）を算出する請求の範囲１１記載のキャピラリー電気泳動分析装置。
  13. 前記試料が、前記血液を溶血処理した試料であり、
    前記血液を溶血処理した試料中の前記ヘモグロビンを分析する請求の範囲１記載のキャピラリー電気泳動分析装置。
  14. キャピラリー電気泳動法により、血中タンパク質を分析する分析方法であって、
    キャピラリー流路が形成された電気泳動チップを使用し、
    前記キャピラリー流路が、試料分析用のキャピラリー流路を含み、
    電気泳動液が充填された前記試料分析用キャピラリー流路に、前記血中タンパク質を含む試料を導入し、電極に電圧を印加し、前記試料を電気泳動させる電気泳動工程と、
    前記電気泳動させた試料中の前記血中タンパク質の吸光度を測定する測定工程とを含み、
    前記血中タンパク質の分析時間が、３５秒以下であることを特徴とする分析方法。
  15. 前記試料分析用キャピラリー流路において、
    流路方向に対し垂直方向の断面形状が、円形もしくは矩形であり、
    円形の場合、その径が、２５μｍ～１００μｍの範囲であり、矩形の場合、その幅が、２５μｍ～１００μｍの範囲であり、その深さが、２５μｍ～１００μｍの範囲であり、
    泳動開始点から、前記試料の電気泳動が開始され、
    前記電気泳動された試料中の前記血中タンパク質の吸光度が、検出点で測定され、
    前記泳動開始点から前記検出点までの距離が、５ｃｍ以下である請求の範囲１４記載の分析方法。
  16. 前記試料分析用キャピラリー流路の内壁表面が、イオン性官能基を有し、
    前記電気泳動液のｐＨが、ｐＨ４．０～６．０の範囲であり、
    前記電圧印加時に生じる電気浸透流が、３ｃｍ／分以上である請求の範囲１４記載の分析方法。
  17. 前記電気泳動液が、硫酸化多糖類を含むことを特徴とする請求の範囲１４記載の分析方法。
  18. 前記硫酸化多糖類が、コンドロイチン硫酸であることを特徴とする請求の範囲１７記載の分析方法。
  19. 前記試料分析用キャピラリー流路において、前記断面形状が、幅および深さがそれぞれ３０μｍの矩形の場合、前記泳動開始点から前記検出点までの距離が、
    ０.２５ｃｍ以上０.７５ｃｍ未満の場合、分離電場が３００Ｖ／ｃｍ以下であり、
    ０.７５ｃｍ以上１.２５ｃｍ未満の場合、分離電場が３００～６００Ｖ／ｃｍであり、
    １.２５ｃｍ以上１.７５ｃｍ未満の場合、分離電場が４００～６５０Ｖ／ｃｍであり、
    １.７５ｃｍ以上２.２５ｃｍ未満の場合、分離電場が４５０～７００Ｖ／ｃｍであることを特徴とする請求の範囲１５記載の分析方法。
  20. 前記試料分析用キャピラリー流路において、前記断面形状が、幅および深さがそれぞれ４０μｍの矩形の場合、前記泳動開始点から前記検出点までの距離が、
    ０.２５ｃｍ以上０.７５ｃｍ未満の場合、分離電場が２５０Ｖ／ｃｍ以下であり、
    ０.７５ｃｍ以上１.２５ｃｍ未満の場合、分離電場が２５０～５００Ｖ／ｃｍであり、
    １.２５ｃｍ以上１.７５ｃｍ未満の場合、分離電場が３７５～５５０Ｖ／ｃｍであり、
    １.７５ｃｍ以上２.２５ｃｍ未満の場合、分離電場が４００～６００Ｖ／ｃｍであることを特徴とする請求の範囲１５記載の分析方法。
  21. 前記試料分析用キャピラリー流路において、前記断面形状が、幅および深さがそれぞれ５０μｍの矩形の場合、前記泳動開始点から前記検出点までの距離が、
    ０.２５ｃｍ以上０.７５ｃｍ未満の場合、分離電場が２００Ｖ／ｃｍ以下であり、
    ０.７５ｃｍ以上１.２５ｃｍ未満の場合、分離電場が２００～４５０Ｖ／ｃｍであり、
    １.２５ｃｍ以上１.７５ｃｍ未満の場合、分離電場が３００～５００Ｖ／ｃｍであり、
    １.７５ｃｍ以上２.２５ｃｍ未満の場合、分離電場が３５０～５５０Ｖ／ｃｍであることを特徴とする請求の範囲１５記載の分析方法。
  22. 前記試料分析用キャピラリー流路において、前記断面形状が、幅および深さがそれぞれ６０μｍの矩形の場合、前記泳動開始点から前記検出点までの距離が、
    ０.２５ｃｍ以上０.７５ｃｍ未満の場合、分離電場が１５０Ｖ／ｃｍ以下であり、
    ０.７５ｃｍ以上１.２５ｃｍ未満の場合、分離電場が１５０～４００Ｖ／ｃｍであり、
    １.２５ｃｍ以上１.７５ｃｍ未満の場合、分離電場が２５０～４５０Ｖ／ｃｍであり、
    １.７５ｃｍ以上２.２５ｃｍ未満の場合、分離電場が３００～５００Ｖ／ｃｍであることを特徴とする請求の範囲１５記載の分析方法。
  23. 前記血中タンパク質を分析項目とし、
    前記分析項目が、ヘモグロビンである請求の範囲１４記載の分析方法。
  24. 前記ヘモグロビンが、ヘモグロビンＡ１ｃ（ＨｂＡ１ｃ）およびヘモグロビンＦ（ＨｂＦ）の少なくとも一方である請求の範囲２３記載の分析方法。
  25. 前記ヘモグロビンＡ１ｃ（ＨｂＡ１ｃ）を分析項目とし、
    前記ヘモグロビンＡ１ｃ（ＨｂＡ１ｃ）の分析として、ヘモグロビンＡ１ｃ濃度（ＨｂＡ１ｃ濃度）を算出する請求の範囲２４記載の分析方法。
  26. 前記試料が、前記血液を溶血処理した試料であり、
    前記血液を溶血処理した試料中の前記ヘモグロビンを分析する請求の範囲１４記載の分析方法。
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Cited By (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101806769A (zh) * 2010-03-29 2010-08-18 内蒙古蒙牛乳业（集团）股份有限公司 一种检测牛乳中牛血清白蛋白含量的方法
JP2012026739A (ja) * 2010-07-20 2012-02-09 Arkray Inc 分析装置および分析方法
EP2757368A1 (en) 2013-01-22 2014-07-23 ARKRAY, Inc. Sample analysis method and solution to be used therein, wherein a non-surfactant-type zwitterionic substance is used
JP2015045664A (ja) * 2014-12-10 2015-03-12 富士フイルム株式会社 分析チップ
JP2015179080A (ja) * 2014-02-28 2015-10-08 アークレイ株式会社 プラズマ発生用チップ、プラズマ発生装置およびプラズマ分光分析方法
EP2993467A1 (en) 2014-09-04 2016-03-09 ARKRAY, Inc. Analysis method and analysis system
JP2016057288A (ja) * 2014-09-04 2016-04-21 アークレイ株式会社 分析方法および分析システム
EP3179243A1 (en) 2015-12-09 2017-06-14 ARKRAY, Inc. Analytical tool for capillary electrophoresis with pressure fluctuation reducer
JP2017106904A (ja) * 2015-12-09 2017-06-15 アークレイ株式会社 分析用具および分析システム

Families Citing this family (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP4814945B2 (ja) * 2006-09-04 2011-11-16 独立行政法人産業技術総合研究所 キャピラリー電気泳動法による試料の分析方法
JP5462841B2 (ja) * 2010-08-16 2014-04-02 アークレイ株式会社 ヘモグロビンの分析方法
JP5462919B2 (ja) * 2011-10-31 2014-04-02 アークレイ株式会社 基材の修飾方法
EP2998732B1 (en) * 2014-09-11 2023-12-13 ARKRAY, Inc. Analysis method
CN104677972B (zh) * 2015-02-10 2017-02-22 四川大学 毛细管等速微通道电泳芯片
US11422128B2 (en) 2016-04-13 2022-08-23 Lsi Medience Corporation Immunoassay employing sulfated polysaccharide
EP3646021A4 (en) * 2017-06-29 2021-03-31 Technion Research & Development Foundation Limited DEVICES AND METHODS FOR FLOW CONTROL BY USING ELECTROOSMOTIC FLOW
JP6871129B2 (ja) * 2017-10-23 2021-05-12 アークレイ株式会社 分析方法
CN112114021B (zh) 2019-06-21 2024-04-05 爱科来株式会社 待测体成分的分离分析方法
JP7384752B2 (ja) * 2019-06-21 2023-11-21 アークレイ株式会社 検体成分の分離分析方法

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP3429709B2 (ja) 1998-08-07 2003-07-22 積水化学工業株式会社 安定型ヘモグロビンＡ１ｃの測定方法
JP2005519669A (ja) * 2002-03-11 2005-07-07 ポーリスツィン、ジャヌス・ビー 生体組織検査用マイクロ装置及び分析方法
JP2005265675A (ja) * 2004-03-19 2005-09-29 Kobe Steel Ltd マイクロ反応器用チップおよびマイクロ反応器
WO2008047703A1 (en) 2006-10-16 2008-04-24 Sekisui Chemical Co., Ltd. Hemoglobin determination method
WO2008078781A1 (ja) * 2006-12-26 2008-07-03 Sekisui Chemical Co., Ltd. ヘモグロビン類の測定方法及び電気泳動装置

Family Cites Families (15)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4842701A (en) * 1987-04-06 1989-06-27 Battelle Memorial Institute Combined electrophoretic-separation and electrospray method and system
US5431793A (en) * 1994-07-29 1995-07-11 Beckman Instruments, Inc. Quantitative analysis of glycosylated hemoglobin by immunocappillary electrophoresis
US6001229A (en) * 1994-08-01 1999-12-14 Lockheed Martin Energy Systems, Inc. Apparatus and method for performing microfluidic manipulations for chemical analysis
JPH11512617A (ja) * 1995-10-06 1999-11-02 パーセプテイブ・バイオシステムズ・インコーポレイテツド ペプチド核酸プローブを用いるハイブリダイゼーション分析のための方法、装置及びキット
US6001231A (en) * 1997-07-15 1999-12-14 Caliper Technologies Corp. Methods and systems for monitoring and controlling fluid flow rates in microfluidic systems
EP1103812B1 (en) * 1998-08-07 2015-11-18 Sekisui Chemical Co., Ltd. Method for determining hemoglobins
US6783649B2 (en) * 2000-12-01 2004-08-31 Cetek Corporation High throughput capillary electrophoresis system
US7232689B2 (en) * 2002-03-11 2007-06-19 Pawliszyn Janusz B Calibration procedure for investigating biological systems
WO2003102539A2 (en) * 2002-05-31 2003-12-11 The Regents Of The University Of Michigan Automated protein analysis system comprising capillary electrophoresis-tandem mass spectrometry
US7534335B2 (en) * 2003-02-28 2009-05-19 Combisep, Inc. Multiplexed, absorbance-based capillary electrophoresis system and method
EP2060912B1 (en) * 2006-09-04 2014-10-01 National Institute of Advanced Industrial Science and Technology Method for analysis of sample by capillary electrophoresis
JP4814945B2 (ja) * 2006-09-04 2011-11-16 独立行政法人産業技術総合研究所 キャピラリー電気泳動法による試料の分析方法
JP2009186445A (ja) * 2008-02-08 2009-08-20 Arkray Inc キャピラリー電気泳動法によるヘモグロビンの分析方法およびそれに用いる試薬
US20100155242A1 (en) * 2006-09-04 2010-06-24 Arkray, Inc. Method of Analyzing a Sample by Capillary Electrophoresis
EP2144057B1 (en) * 2007-04-27 2019-04-10 ARKRAY, Inc. Method for analyzing a sample containing glycosylated hemoglobin and glucose

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP3429709B2 (ja) 1998-08-07 2003-07-22 積水化学工業株式会社 安定型ヘモグロビンＡ１ｃの測定方法
JP2005519669A (ja) * 2002-03-11 2005-07-07 ポーリスツィン、ジャヌス・ビー 生体組織検査用マイクロ装置及び分析方法
JP2005265675A (ja) * 2004-03-19 2005-09-29 Kobe Steel Ltd マイクロ反応器用チップおよびマイクロ反応器
WO2008047703A1 (en) 2006-10-16 2008-04-24 Sekisui Chemical Co., Ltd. Hemoglobin determination method
WO2008078781A1 (ja) * 2006-12-26 2008-07-03 Sekisui Chemical Co., Ltd. ヘモグロビン類の測定方法及び電気泳動装置

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
See also references of EP2312308A4

Cited By (13)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101806769A (zh) * 2010-03-29 2010-08-18 内蒙古蒙牛乳业（集团）股份有限公司 一种检测牛乳中牛血清白蛋白含量的方法
JP2012026739A (ja) * 2010-07-20 2012-02-09 Arkray Inc 分析装置および分析方法
EP2757368A1 (en) 2013-01-22 2014-07-23 ARKRAY, Inc. Sample analysis method and solution to be used therein, wherein a non-surfactant-type zwitterionic substance is used
JP2014160058A (ja) * 2013-01-22 2014-09-04 Arkray Inc 試料の分析方法及びそれに用いる溶液
US9618478B2 (en) 2013-01-22 2017-04-11 Arkray, Inc. Sample analysis method and solution to be used therein
JP2015179080A (ja) * 2014-02-28 2015-10-08 アークレイ株式会社 プラズマ発生用チップ、プラズマ発生装置およびプラズマ分光分析方法
EP2993467A1 (en) 2014-09-04 2016-03-09 ARKRAY, Inc. Analysis method and analysis system
JP2016057288A (ja) * 2014-09-04 2016-04-21 アークレイ株式会社 分析方法および分析システム
US10018589B2 (en) 2014-09-04 2018-07-10 Arkray, Inc. Analysis method and analysis system
JP2015045664A (ja) * 2014-12-10 2015-03-12 富士フイルム株式会社 分析チップ
EP3179243A1 (en) 2015-12-09 2017-06-14 ARKRAY, Inc. Analytical tool for capillary electrophoresis with pressure fluctuation reducer
JP2017106904A (ja) * 2015-12-09 2017-06-15 アークレイ株式会社 分析用具および分析システム
US11187674B2 (en) 2015-12-09 2021-11-30 Arkray, Inc. Analytical tool and analytical system

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