CN101806769A - 一种检测牛乳中牛血清白蛋白含量的方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种检测乳中成分的方法，特别是一种检测牛乳中牛血清白蛋白含量的方法，属于检测技术领域。本发明是用高压毛细管电泳分析仪检测牛血清白蛋白的含量，包括(a)配制标准溶液，制订标准曲线；(b)检测待测牛乳；(c)样品定量读数、计算结果等步骤。本发明是样品在高压毛细管电泳分析仪上跑电泳，从而高压毛细管电泳分析仪的色谱系统检测出样品的吸光值，以图谱的形式表达出来，从而能准确检测出牛乳中牛血清白蛋白的含量，为牛乳成分分析提供技术支持。本发明所使用的样品缓冲液其刺激性气味小、毒性低，且检测结果更加准确。

Description

一种检测牛乳中牛血清白蛋白含量的方法

技术领域

本发明涉及一种检测牛血清白蛋白含量的方法，特别是一种检测牛乳中牛血清白蛋白含量的方法。

背景技术

牛血清白蛋白是含581个氨基酸残基的多肽，理论计算的分子量为68kD，等电点为4.8。含氮量16％，含糖量0.08％，仅含己糖和己糖胺，含脂量只有0.2％。它由581个氨基酸残基组成，其中35个半胱氨酸组成17个二硫键，使分子呈9段弯曲，形成3个等体积的球状，在肽链的第34位有一自由巯基。牛血清白蛋白可与多种阳离子、阴离子和其他小分子物质结合。牛乳总蛋白中有1％-2％的蛋白为牛血清白蛋白，通过细胞间结合处进入牛乳，不具有特殊生理功能，但在乳成分分析检测领域中有重要作用。牛血清白蛋白在牛血液中约占50％，血液中的牛血清白蛋白主要起维持渗透压作用、PH缓冲作用、载体作用和营养作用。

目前，国内外检测牛血清白蛋白主要方法为ELISA法、凯氏定氮法、双缩脲法、Folin-酚试剂法、紫外吸收法和考马斯亮蓝法。这些方法均有操作复杂、时间较长、准确度低等缺点。鉴于以上方法的缺点，本发明提供了一种利用毛细管电泳技术快速检测牛血清白蛋白含量的方法。高压毛细管电泳分析仪是一类包括电泳、色谱及其交叉内容的液相微分离设备。它能快速精确检测出牛乳中的微量蛋白。该方法操作简便、准确，检测到出结果时间仅为1h左右。

目前，毛细管电泳技术逐渐应用到乳品领域里，如产品开发和控制质量问题等，但毛细管电泳技术尚未开发检测牛乳中牛血清白蛋白含量的方法。本发明成功弥补了乳品领域中的缺点，能准确测定牛血清白蛋白的含量，且检出率高，从而有利于牛乳的分析检测。

发明内容

本发明的目的是提供一种检测牛乳中牛血清白蛋白含量的方法，该方法所使用的样品缓冲液其刺激性气味小、毒性低，且该方法检出率高、检测结果更加准确。

本发明提供了一种检测牛乳中牛血清白蛋白含量的方法，该检测方法采用高压毛细管电泳分析仪进行检测，包括如下步骤：

(a)配制不同浓度的牛血清白蛋白标准溶液，根据标准溶液，制定牛血清白蛋白浓度与高压毛细管电泳分析仪输出的牛血清白蛋白的峰面积之间对应关系的标准曲线；

(b)在高压毛细管电泳分析仪中以与标准溶液相同的高压毛细管电泳分析仪的检测参数检测待测牛乳；

(c)利用得到的标准曲线和待测牛乳的检测结果，确定待测牛乳中牛血清白蛋白的含量。

在本发明的再一种具体实施方式中，标准溶液的浓度在8mg/ml至0.01mg/ml之间。

在本发明的另一种具体实施方式中，标准溶液的浓度在4mg/ml至0.01mg/ml之间。

在本发明的还一种具体实施方式中，标准溶液的浓度分别为4mg/ml、2mg/ml、1mg/ml、0.5mg/ml和0.01mg/ml。

上述检测方法的步骤(a)中制定标准曲线时，标准溶液的检测条件为：精确提取标准溶液加入样品管中，超声波清洗0.5至15min后用高压毛细管电泳分析仪进行测定。

上述检测方法的步骤(b)中待测牛乳的检测条件为：装入10ml至50ml的离心管中，在1500至6000r/min的离心条件下离心6至10min，离心温度在4至25℃之间，得到检测样品，在检测样品中按1∶1至1∶20的体积比加入样品缓冲液，摇匀之后精确提取10至200μl加入样品管中，超声波清洗0.5至15min后用高压毛细管电泳分析仪进行测定。

上述样品缓冲液能够使蛋白质分散，它是在1体积份的150至170mmol/L三甲基氨基甲烷缓冲液中加入浓度为50至70mmol/L的乙二胺四乙酸二钠、5至7mol/L的尿素、1至5mg/ml的二硫基苏糖醇、0.01％至0.5％(即1至50mg/ml)的甲基羟乙基纤维素，加入的所述乙二胺四乙酸二钠、尿素、二硫基苏糖醇、甲基羟乙基纤维素的体积份相同，均为1至20体积份，pH值为8.5±0.5。

上述高压毛细管电泳分析仪的检测参数为：检测温度在15至45℃之间，毛细管柱直径在20至80μm之间、长度在150至700mm之间，紫外光检测器的进样压力在0.5至2psi之间，进样时间在1s至25s之间，分离温度在15至45℃之间，工作电压在7至30kV之间。

上述毛细管柱是涂层或未涂层的。

上述高压毛细管电泳分析仪中电泳缓冲液的pH值在2.0至3.0之间，主要成分为柠檬酸。

上述检测结果的处理方法如下：检测结果为样品分离的图谱，运用高压毛细管电泳分析仪所带的分析软件，积分各峰的面积，计算出试样浓度，再乘稀释倍数，即得实际浓度。

牛乳中牛血清白蛋白的含量在100mg/L至400mg/L之间。高压毛细管电泳分析仪检测的最低浓度能达到10^-5至10^-8mol/L，所以高压毛细管电泳分析仪能检测出其含量。使用高压毛细管电泳分析仪检测牛乳中牛血清白蛋白含量的方法包括样品性质的了解、分离模式、建立缓冲体系、优化缓冲体系和换分离模式等步骤，此方法能用于分析检测领域中。

本发明的检测方法线性回归方程相关系数＞0.98，其线性范围在0.01mg/ml～4mg/ml，最低检出限为0.1ng，最低检出浓度为0.01mg/ml。精确度达90％以上，柱子回收率达到90％以上，样品回收率达70％以上。已公开的发明中，有的样品缓冲液里使用β-巯基乙醇，本发明的检测方法中所使用的样品缓冲液，用二硫基苏糖醇替代了β-巯基乙醇。与β-巯基乙醇相比，本发明使用的二硫基苏糖醇低毒、检出率高，能把牛乳中的牛血清白蛋白充分变性分散于缓冲体系中。国内许多研究证明，β-巯基乙醇其毒性为：LD50(大鼠)300mg/kg，LD50(小鼠)345mg/kg；而二硫基苏糖醇毒性为：LD50(大鼠)35mg/kg，LD50(小鼠)50mg/kg。后者较前者低7倍左右。两种物质的检出率差距为10％，因此本发明的检测方法更加准确。

具体实施方式

以下所述仅为本发明示意性的具体实施方式，并非用以限定本发明的范围。任何本领域的技术人员，在不脱离本发明的构思和原则的前提下所作的等同变化、修改与结合，均应属于本发明保护的范围。

实施例1：

本发明的检测牛乳中牛血清白蛋白含量的方法包括如下步骤：

(a)配制标准溶液，制订标准曲线：

将牛血清白蛋白标准品溶于样品缓冲液，配制浓度分别为4mg/ml、2mg/ml、1mg/ml、0.5mg/ml、0.01mg/ml的标准溶液。精确提取40μl标准溶液加入样品管中，超声波清洗3min后使用高压毛细管电泳分析仪分析。积分后的峰面积分别为57568、29684、15481、7125、148，利用软件得出标准曲线，线性回归相关系数为0.9993，最低检出限为0.1ng，最低检出含量为0.01mg/ml，标准样品回收率达90％。

(b)检测待测牛乳：

把奶样品加入15ml的离心管中，在5000r/min离心条件下离心10min，离心温度为4℃，然后准确提取100μl置于2ml离心管中(或其他容器)，提取400μl样品缓冲液加入2ml离心管中稀释5倍，使用漩涡混合器混匀。精确提取40μl上述处理样品加入样品管中，放置于超声波清洗机3min，之后使用高压毛细管电泳分析仪测定。

上述步骤(a)和(b)中，处理样品缓冲液配置方法：在1体积份150mmol/L的三甲基氨基甲烷缓冲液中加入4体积份50mmol/L的乙二胺四乙酸二钠、4体积份5mol/L的尿素、4体积份2mg/ml的二硫基苏糖醇、4体积份0.03％的甲基羟乙基纤维素，使用氢氧化钠溶液把pH值调至8.5。

上述步骤(a)和(b)中，高压毛细管电泳分析仪的电泳温度控制在35℃，使用直径为50μm、长度为200mm的涂层石英毛细管柱，紫外线检测器，压力进样，压力为0.5psi，时间为10s，分离温度为15℃，工作电压为17kV。

上述步骤(a)和(b)中，电泳缓冲液的配置方法：柠檬酸缓冲液，pH值为3.0。

(c)样品定量读数：

根据样品分离的图谱，运用高压毛细管电泳分析仪所带的分析软件，积分牛血清白蛋白的峰面积为1035，利用分析软件自动套入标准曲线方程内计算出试样浓度为0.067mg/ml，再乘稀释倍数5，即得实际浓度为0.335mg/ml，所以该牛奶样品含有的牛血清白蛋白浓度为0.335g/L。

实施例2：

本发明的检测牛乳中牛血清白蛋白含量的方法包括如下步骤：

(a)配制标准溶液，制订标准曲线：

将牛血清白蛋白标准品溶于样品缓冲液，配制浓度分别为4mg/ml、2mg/ml、1mg/ml、0.5mg/ml、0.01mg/ml的标准溶液。精确提取40μl标准溶液加入样品管中，超声波清洗3min后使用高压毛细管电泳分析仪分析，积分后的峰面积分别为，58624、28574、15267、7458、151利用软件得出标准曲线，线性回归相关系数为0.9995，最低检出限为0.002μg，最低检出含量为0.02mg/ml，标准样品回收率达91％。

(b)检测待测牛乳：

把奶样品加入15ml的离心管中，在5000r/min离心条件下离心6min，离心温度为8℃，然后准确提取100μl置于2ml离心管(或其他容器)，提取400μl样品缓冲液加入2ml离心管，稀释5倍，并使用漩涡混合器混匀。精确提取40μl上述处理样品加入样品管中，放置于超声波清洗机3min，之后使用高压毛细管电泳分析仪测定。

上述步骤(a)和(b)中，处理样品缓冲液配置方法：在1体积份160mmol/L的三甲基氨基甲烷缓冲液中加入10体积份60mmol/L的乙二胺四乙酸、10体积份6mol/L的尿素、10体积份3mg/ml的二硫基苏糖醇、10体积份0.04％的甲基羟乙基纤维素，使用0.1M氢氧化钠调至pH值为8.5。

上述步骤(a)和(b)中，高压毛细管电泳分析仪的电泳温度控制在37℃，使用直径为75μm、长度为600mm的未涂层石英毛细管柱，紫外线检测器，压力进样，压力为1psi，时间为6s，分离温度为25℃，工作电压为26kV。

上述步骤(a)和(b)中，电泳缓冲液的配置方法：柠檬酸缓冲液，pH值为3.0。

(c)样品定量读数：

根据样品分离的图谱，运用高压毛细管电泳分析仪所带的分析软件，积分牛血清白蛋白的峰面积为569，利用分析软件自动套入标准曲线方程内计算出试样浓度为0.0367mg/ml，再乘稀释倍数5，即得实际浓度为0.1835mg/ml，所以该牛奶样品中含有的牛血清白蛋白浓度为0.1835g/L。

实施例3：

本发明的检测牛乳中牛血清白蛋白含量的方法包括如下步骤：

(a)配制标准溶液，制订标准曲线：

将牛血清白蛋白标准品溶于样品缓冲液，配制浓度分别为8mg/ml、4mg/ml、1mg/ml、0.25mg/ml、0.01mg/ml的标准溶液。精确提取40μl标准溶液加入样品管中，超声波清洗0.5min后，使用高压毛细管电泳分析仪分析，积分后的峰面积分别为132134、65368、15234、3829、153，利用软件得出标准曲线，线性回归相关系数为0.9987，最低检出限为0.2ng，最低检出含量为0.01mg/ml，标准样品回收率达91％。

(b)检测待测牛乳：

把奶样品加入10ml的离心管中，在1500r/min离心条件下离心8min，离心温度为25℃，然后准确提取10μl置于1.8ml离心管中(或其他容器)，提取200μl样品缓冲液加入1.8ml离心管中稀释21倍，使用漩涡混合器混匀。精确提取10μl上述处理样品加入样品管中，放置于超声波清洗机0.5min，之后使用高压毛细管电泳分析仪测定。

上述步骤(a)和(b)中，处理样品缓冲液配置方法：在1体积份170mmol/L的三甲基氨基甲烷缓冲液中加入20体积份70mmol/L的乙二胺四乙酸二钠、20体积份7mol/L的尿素、20体积份1mg/ml的二硫基苏糖醇、20体积份0.01％的甲基羟乙基纤维素，使用氢氧化钠溶液把pH值调至8.0。

上述步骤(a)和(b)中，高压毛细管电泳分析仪的电泳温度控制在15℃，使用直径为20μm、长度为150mm的涂层石英毛细管柱，紫外线检测器，压力进样，压力为2psi，时间为1s，分离温度为35℃，工作电压为7kV。

上述步骤(a)和(b)中，电泳缓冲液的配置方法：柠檬酸缓冲液，pH值为2.0。

(c)样品定量读数：

根据样品分离的图谱，运用高压毛细管电泳分析仪所带的分析软件，积分牛血清白蛋白的峰面积为198，利用分析软件自动套入标准曲线方程内计算出试样浓度为0.013mg/ml，再乘稀释倍数21，即得实际浓度为0.273mg/ml，所以该牛奶样品含有的牛血清白蛋白浓度为0.273g/L。

实施例4：

本发明的检测牛乳中牛血清白蛋白含量的方法包括如下步骤：

(a)配制标准溶液，制订标准曲线：

将牛血清白蛋白标准品溶于样品缓冲液，配制浓度分别为4mg/ml、2mg/ml、1mg/ml、0.5mg/ml、0.01mg/ml的标准溶液。精确提取40μl标准溶液加入样品管中，超声波清洗15min后，使用高压毛细管电泳分析仪分析，积分后的峰面积分别为66214、30101、16521、8532、158，利用软件得出标准曲线，线性回归相关系数为0.9976，最低检出限为0.2ng，最低检出含量为0.02mg/ml，标准样品回收率达93％。

(b)检测待测牛乳：

把奶样品加入50ml的离心管中，在6000r/min离心条件下离心10min，离心温度为15℃，然后准确提取200μl置于2ml离心管中(或其他容器)，提取200μl样品缓冲液加入2ml离心管中稀释2倍，使用漩涡混合器混匀。精确提取200μl上述处理样品加入样品管中，放置于超声波清洗机15min，之后使用高压毛细管电泳分析仪测定。

上述步骤(a)和(b)中，处理样品缓冲液配置方法：在1体积份150mmol/L的三甲基氨基甲烷缓冲液中加入1体积份60mmol/L的乙二胺四乙酸二钠、1体积份5mol/L的尿素、1体积份5mg/ml的二硫基苏糖醇、1体积份0.5％的甲基羟乙基纤维素，使用氢氧化钠溶液把pH值调至9.0。

上述步骤(a)和(b)中，高压毛细管电泳分析仪的电泳温度控制在45℃，使用直径为80μm、长度为700mm的未涂层石英毛细管柱，紫外线检测器，压力进样，压力为0.5psi，时间为25s，分离温度为45℃，工作电压为30kV。

上述步骤(a)和(b)中，电泳缓冲液的配置方法：柠檬酸缓冲液，pH值为2.5。

(c)样品定量读数：

根据样品分离的图谱，运用高压毛细管电泳分析仪所带的分析软件，积分牛血清白蛋白的峰面积为2478，利用分析软件自动套入标准曲线方程内计算出试样浓度为0.15mg/ml，再乘稀释倍数2，即得实际浓度为0.3mg/ml，所以该牛奶样品含有的牛血清白蛋白浓度为0.3g/L。

实施例5：

检测牛乳中牛血清白蛋白含量的方法包括如下步骤：

(a)配制标准溶液，制订标准曲线：

将牛血清白蛋白标准品溶于样品缓冲液，配制浓度分别为4mg/ml、2mg/ml、1mg/ml、0.5mg/ml、0.01mg/ml的标准溶液。精确提取40μl标准溶液加入样品管中，超声波清洗15min后，使用高压毛细管电泳分析仪分析，积分后的峰面积分别为65447、27586、12375、6524、112，利用软件得出标准曲线，线性回归相关系数为0.9921，最低检出限为0.2ng，最低检出含量为0.01mg/ml，标准样品回收率达90％。

(b)检测待测牛乳：

使用与实施例4相同的待测牛乳。把奶样品加入50ml的离心管中，在6000r/min离心条件下离心10min，离心温度为15℃，然后准确提取200μl置于2ml离心管中(或其他容器)，提取200μl样品缓冲液加入2ml离心管中稀释2倍，使用漩涡混合器混匀。精确提取200μl上述处理样品加入样品管中，放置于超声波清洗机15min，之后使用高压毛细管电泳分析仪测定。

上述步骤(a)和(b)中，处理样品缓冲液配置方法：在1体积份150mmol/L的三甲基氨基甲烷缓冲液中加入1体积份60mmol/L的乙二胺四乙酸二钠、1体积份5mol/L的尿素、1体积份5ul/ml的β-巯基乙醇、1体积份0.5％的甲基羟乙基纤维素，使用氢氧化钠溶液把pH值调至9.0。此样品缓冲液不用本发明的二硫基苏糖醇而使用已公开的β-巯基乙醇。

上述步骤(a)和(b)中，高压毛细管电泳分析仪的电泳温度控制在45℃，使用直径为80μm、长度为700mm的未涂层石英毛细管柱，紫外线检测器，压力进样，压力为0.5psi，时间为25s，分离温度为45℃，工作电压为30kV。

上述步骤(a)和(b)中，电泳缓冲液的配置方法：柠檬酸缓冲液，pH值为2.5。

(c)样品定量读数：

根据样品分离的图谱，运用高压毛细管电泳分析仪所带的分析软件，积分牛血清白蛋白的峰面积为1608，利用分析软件自动套入标准曲线方程内计算出试样浓度为0.13mg/ml，再乘稀释倍数2，即得实际浓度为0.26mg/ml，所以该牛奶样品含有的牛血清白蛋白浓度为0.26g/L。

同样的待测牛乳样品，本发明所使用的检测方法，在实施例4中能检测出0.3mg/ml，而按已公开的专利方法使用含有β-巯基乙醇的样品缓冲液，只能检测出0.26mg/ml，检出率降低13.3％，因此本发明的检测结果更加准确。

实施例6：

检测牛乳中牛血清白蛋白含量的方法包括如下步骤：

(a)配制标准溶液，制订标准曲线：

将牛血清白蛋白标准品溶于样品缓冲液，配制浓度分别为4mg/ml、2mg/ml、1mg/ml、0.5mg/ml、0.01mg/ml的标准溶液。精确提取40μl标准溶液加入样品管中，超声波清洗15min后，使用高压毛细管电泳分析仪分析，积分后的峰面积分别为59862、29534、17254、7698、164，利用软件得出标准曲线，线性回归相关系数为0.998，最低检出限为0.3ng，最低检出含量为0.02mg/ml，标准样品回收率达90％。

(b)检测待测牛乳：

使用与实施例4相同的待测牛乳。把奶样品加入50ml的离心管中，在6000r/min离心条件下离心10min，离心温度为15℃，然后准确提取200μl置于2ml离心管中(或其他容器)，提取200μl样品缓冲液加入2ml离心管中稀释2倍，使用漩涡混合器混匀。精确提取200μl上述处理样品加入样品管中，放置于超声波清洗机15min，之后使用高压毛细管电泳分析仪测定。

上述步骤(a)和(b)中，处理样品缓冲液配置方法：在1体积份150mmol/L的三甲基氨基甲烷缓冲液中加入1体积份60mmol/L的乙二胺四乙酸二钠、1体积份5mol/L的尿素、1体积份5mg/ml的二硫基苏糖醇、1体积份0.5％的甲基羟乙基纤维素，使用氢氧化钠溶液把pH值调至9.0。

上述步骤(a)和(b)中，高压毛细管电泳分析仪的电泳温度控制在45℃，使用直径为80μm、长度为700mm的未涂层石英毛细管柱，紫外线检测器，压力进样，压力为0.5psi，时间为25s，分离温度为45℃，工作电压为30kV。

上述步骤(a)和(b)中，电泳缓冲液的配置方法：柠檬酸缓冲液，pH值为5.0。

(c)样品定量读数：

根据样品分离的图谱，运用高压毛细管电泳分析仪所带的分析软件，积分牛血清白蛋白的峰面积为1735，利用分析软件自动套入标准曲线方程内计算出试样浓度为0.105mg/ml，再乘稀释倍数2，即得实际浓度为0.21mg/ml，所以该牛奶样品含有的牛血清白蛋白浓度为0.21g/L。

同样的待测牛乳样品，本发明所使用的检测方法，在实施例4中能检测出0.3mg/ml，而按已公开的专利方法电泳缓冲液pH大于3.0时，例如本实施例将pH值设定为5.0，则只能检测出0.21mg/ml，检出率降低30％，因此本发明更加准确。

上文所列出的一系列的详细说明仅仅是针对本发明的可行性实施例的具体说明，它们并非用以限制本发明的保护范围，凡未脱离本发明技艺精神所作的等效实施例或变更均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种检测牛乳中牛血清白蛋白含量的方法，其特征在于：该检测方法采用高压毛细管电泳分析仪进行检测，且所述的方法包括如下步骤：

(a)配制不同浓度的牛血清白蛋白标准溶液，根据所述的标准溶液，制定牛血清白蛋白浓度与所述高压毛细管电泳分析仪输出的牛血清白蛋白的峰面积之间对应关系的标准曲线；

(b)在所述高压毛细管电泳分析仪中以与所述标准溶液相同的所述高压毛细管电泳分析仪的检测参数检测待测牛乳；

(c)利用得到的所述标准曲线和所述待测牛乳的检测结果，确定所述待测牛乳中牛血清白蛋白的含量。

2.根据权利要求1所述的方法，其中，所述标准溶液的浓度在8mg/ml至0.01mg/ml之间。

3.根据权利要求2所述的方法，其中，所述标准溶液的浓度在4mg/ml至0.01mg/ml之间。

4.根据权利要求3所述的方法，其中，所述标准溶液的浓度分别为4mg/ml、2mg/ml、1mg/ml、0.5mg/ml和0.01mg/ml。

5.根据权利要求1所述的方法，其中所述步骤(a)中制定所述标准曲线时，所述标准溶液的检测条件为：精确提取所述标准溶液加入样品管中，超声波清洗0.5至15min后用所述高压毛细管电泳分析仪进行测定。

6.根据权利要求1所述的方法，其中所述步骤(b)中所述待测牛乳的检测条件为：装入10ml至50ml的离心管中，在1500至6000r/min的离心条件下离心6至10min，离心温度在4至25℃之间，得到检测样品，在所述检测样品中按1∶1至1∶20的体积比加入样品缓冲液，摇匀之后精确提取10至200μl加入样品管中，超声波清洗0.5至15min后用所述高压毛细管电泳分析仪进行测定。

7.根据权利要求6所述的方法，其中所述样品缓冲液能够使蛋白质分散，它是在1体积份的150至170mmol/L三甲基氨基甲烷缓冲液中加入浓度为50至70mmol/L的乙二胺四乙酸二钠、5至7mol/L的尿素、1至5mg/ml的二硫基苏糖醇、0.01％至0.5％的甲基羟乙基纤维素，加入的所述乙二胺四乙酸二钠、尿素、二硫基苏糖醇、甲基羟乙基纤维素的体积份相同，均为1至20体积份，pH值为8.5±0.5。

8.根据权利要求1所述的方法，其中所述高压毛细管电泳分析仪的所述检测参数为：检测温度在15至45℃之间，毛细管柱直径在20至80μm之间、长度在150至700mm之间，紫外光检测器的进样压力在0.5至2psi之间，进样时间在1s至25s之间，分离温度在15至45℃之间，工作电压在7至30kV之间。

9.根据权利要求8所述的方法，其中所述毛细管柱是涂层或未涂层的。

10.根据权利要求1所述的方法，其中所述高压毛细管电泳分析仪中电泳缓冲液的pH值在2.0至3.0之间，主要成分为柠檬酸。