CN105842352A - 一种简便的gc法测定人血白蛋白中辛酸钠含量的方法 - Google Patents
一种简便的gc法测定人血白蛋白中辛酸钠含量的方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN105842352A CN105842352A CN201610157446.4A CN201610157446A CN105842352A CN 105842352 A CN105842352 A CN 105842352A CN 201610157446 A CN201610157446 A CN 201610157446A CN 105842352 A CN105842352 A CN 105842352A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- solution
- octanoic acid
- sodium caprylate
- human albumin
- content
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N2030/022—Column chromatography characterised by the kind of separation mechanism
- G01N2030/025—Gas chromatography
Landscapes
- Physics & Mathematics (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
本发明公开一种简便的GC法测定人血白蛋白中辛酸钠含量的方法,其特征在于:在采用三氯甲烷制备样品时简便,系统适用性,专属性,定量限,线性,准确度,精密度,耐用性,符合《中国药典》药品质量标准分析方法验证指导原则和《药品GMP指南·质量控制实验室与物料系统》的要求。本发明对现行的采用气相色谱法测定人血白蛋白中辛酸钠含量的方法进行了改进,并且对改进后的方法进行系统适用性、准确度、精密度、专属性、定量限、线性及耐用性的验证,确保该分析方法能够满足测定要求,具有不需要将三氯甲烷挥发干、操作时间短、增加了实验效率、有机相体积为1.0 mL和操作偏差小的特点。
Description
技术领域
本发明涉及一种生物制品的测定方法,特别是涉及一种简便的GC法测定人血白蛋白中辛酸钠含量的方法,本发明采用气相色谱法检测人血白蛋白中辛酸钠的含量,优化了检测方法,并对新的方法进行验证。
背景技术
辛酸钠被广泛用于人血白蛋白的稳定剂,它在人血白蛋白加热保温过程中能够起稳定和保护作用,防止白蛋白的变性,确保制品有良好的外观。然而,辛酸钠有一定的毒性,需控制其在人白蛋白中的含量。《中国药典》规定每1g蛋白质中应为0.140~0.180mmol。
《中国药典》已经收录了辛酸钠测定法(附录Ⅵ K),但该方法制备样品需要将三氯甲烷挥发至干,并且样品的终体积是100μL。操作时间较长并且容易在检测中产生偏差,因此,本发明对药典方法进行了改变和优化,根据《中国药典》药品质量标准分析方法验证指导原则和《药品GMP指南·质量控制实验室与物料系统》的要求,非药典分析方法或方法发生改变,应进行验证后才能使用。
发明内容
本发明的目的就在于解决现有技术存在的上述不足,经过大量试验和反复研究,给出了一种简便的GC法测定人血白蛋白中辛酸钠含量的方法。本发明对现行的采用GC法测定人血白蛋白中辛酸钠含量的方法进行了改进,并且对改进后的方法进行系统适用性、准确度、精密度、专属性、定量限、线性及耐用性的验证,确保该分析方法能够满足测定要求,具有不需要将三氯甲烷挥发干、操作时间短、增加了实验效率、有机相体积为1.0 mL和操作偏差小的特点。
本发明给出的技术解决方案是,这种简便的GC法测定人血白蛋白中辛酸钠含量的方法,其特征在于:其测定方法如下。
由以下步骤组成。
1.取人血白蛋白一批次1瓶,作为方法验证供试品。
溶液配制。
1.5mol/L高氯酸溶液:取高氯酸12.2 mL,加超纯水定容至100 mL。
正庚酸溶液:精密称定0.2 g,用三氯甲烷定容至10 mL,浓度为20 mg/mL。
正辛酸溶液:精密称定0.5 g,用三氯甲烷定容至10 mL,浓度为50 mg/mL。
线性溶液:分别量取正辛酸溶液120 μL、300 μL、500 μL、700 μL、900 μL,各加入正庚酸溶液1.0 mL,分别用三氯甲烷定容至10 mL,辛酸线性浓度为0.6 mg/mL、1.5 mg/mL、2.5 mg/mL、3.5 mg/mL、4.5 mg/mL。
定量限溶液:取辛酸线性浓度为0.6 mg/mL溶液1.0 mL,用三氯甲烷定容至10 mL。
标准品溶液:取辛酸线性浓度为3.5 mg/mL溶液作为标准品溶液。
内标溶液:取正庚酸溶液2.5 mL,用三氯甲烷定容至25 mL。
精密度溶液:量取人血白蛋白500 μL加水500 μL,加1.5 mol/L高氯酸溶液400 μL,振荡混匀2分钟,加1.0 mL内标溶液,振荡混匀2分钟,以3000转/分钟,离心20分钟。平行制备6份,取下层有机溶液进样。
准确度溶液:分别量取人血白蛋白600 μL加水400 μL(120%溶液)、400 μL加水600μL(80%溶液),混匀,各加1.5 mol/L高氯酸溶液400 μL,振荡混匀2分钟,各加1.0 mL内标溶液,振荡混匀2分钟,以3000转/分钟,离心20分钟。分别平行制备3份,取下层有机溶液进样。
供试品溶液:精密度溶液作为供试品溶液。
空白溶液:取三氯甲烷作为空白溶液。
试验条件(仪器参数)。
色谱柱:DB-FFAP(123-3232),0.32 mm*30 m。
FID:230℃。
进样口:230℃。
炉温:160℃。
载气:氮气。
流速:2.0 mL/min。
进样量:0.1 μL。
运行时间:10分钟。
结果计算。
标准品溶液中辛酸峰与庚酸峰的分离度均应大于1.5,辛酸峰与庚酸峰面积之比的RSD应不大于5 %。以线性溶液中辛酸峰与庚酸峰面积比对辛酸浓度(mg/mL)作直线回归,求得直线回归方程,直线回归相关系数应不低于0.99,计算出供试品溶液中辛酸的浓度(mg/mL),结果计算中除辛酸峰与庚酸峰以外,其他的峰可忽略不计。再按下式计算供试品中辛酸钠含量。
辛酸钠含量(mmol/g蛋白质)。
式中:A 为供试品溶液中辛酸的浓度,mg/m。
n 为供试品溶液的稀释倍数(1/供试品的取用量,以mL计算)。
144.22 为辛酸分子量(1 mmol辛酸相当于1 mmol辛酸钠)。
C 为供试品蛋白质含量,g/mL。
本发明在采用三氯甲烷制备样品时简便,系统适用性,专属性,定量限,线性,准确度,精密度,耐用性,符合《中国药典》药品质量标准分析方法验证指导原则和《药品GMP指南·质量控制实验室与物料系统》的要求。
所述的三氯甲烷制备样品时不需要将三氯甲烷挥发至干。
所述的系统适用性:标准品溶液中辛酸峰与庚酸峰的分离度均应大于1.5,标准品溶液中辛酸峰与庚酸峰面积之比的RSD应不大于5 %,标准品溶液中辛酸峰的拖尾因子应在0.95~1.20之间。
所述的专属性:空白溶液应没有其他峰干扰测定,标准品溶液与供试品溶液中辛酸峰的保留时间的RSD不大于2%。
所述的线性:r不低于0.99。
所述的定量限:辛酸峰信噪比的平均值应不小于10。
所述的精密度:重复性:精度度溶液中辛酸钠含量的RSD应不大于5%,中间精密度:两个分析人员的RSD应不大于5%。
所述的准确度:准确度溶液与精密度溶液中辛酸钠含量的RSD应不大于5%。
所述的耐用性:流速变化±25%系统适用性应符合上述标准要求。
与现有技术相比,本发明的有益效果为。
1.三氯甲烷对人体及环境都有危害,本发明不需要将三氯甲烷挥发干,操作时间短。增加了实验效率。
2.样品的终体积是100μL,容易引起偏差,本发明有机相体积为1.0 mL,操作偏差小。
具体实施方式
以下通过实施例详细说明发明的内容,这些实施例并非是对本发明的限制。
1.进样顺序:
空白溶液(1针)
内标溶液(1针)
标准品溶液(6针)
线性溶液(各1针)
定量限溶液(6针)
精密度溶液(各1针)
准确度溶液(各1针)
流速变化(±25%)后进样顺序:标准品溶液(6针)。
2.系统适用性验证。
目的:确认色谱条件符合系统适用性要求,能够满足检测需要。
方法:以6针标准品溶液进行系统适用性验证,计算辛酸峰与庚酸峰的分离度、辛酸峰与庚酸峰面积之比及RSD值,及辛酸峰的拖尾因子。
可接受标准。
A. 辛酸峰与庚酸峰的分离度均应大于1.5。
B. 辛酸峰与庚酸峰面积之比的RSD应不大于5 % 。
C. 辛酸峰的拖尾因子应在0.95~1.20之间。
3.专属性验证。
目的:确认在杂质(庚酸)存在下,本方法能够正确测定出被测物辛酸。
方法。
A. 通过1针空白溶液确定其他杂质对辛酸测定无干扰。
B. 通过1针内标溶液确定庚酸峰保留时间。
C. 标准品溶液6针,分别计算庚酸峰保留时间和辛酸峰保留时间。
D. 供试品溶液(精密度溶液)6份各1针,分别计算庚酸峰保留时间和辛酸峰保留时间。
E. 计算标准品溶液和供试品溶液辛酸峰保留时间的RSD值。
可接受标准。
A. 空白溶液应没有其他峰干扰测定。
B. 辛酸峰的保留时间的RSD不大于2%。
4.线性验证。
目的:确认在设计范围内,辛酸峰与庚酸峰面积比与样品中被测物辛酸的浓度直接呈正比关系的程度。
方法:以5种浓度的线性溶液的辛酸峰与庚酸峰面积比对辛酸浓度(mg/mL)作直线回归,求得直线回归方程。
可接受标准。
直线回归相关系数(r)应不低于0.99。
5.定量限验证。
目的:确认样品中的被测物能够被定量测定的最低量。
方法:取定量限溶液(线性验证中的最低浓度0.6 mg/mL溶液再稀释10倍)6份各1针连续进样,计算辛酸峰的信噪比。
可接受标准:连续6针定量限溶液的辛酸峰信噪比平均值不小于10。
6.精密度验证。
目的:通过重复性验证和中间精密度验证,确认在选定的测试条件下,对同一均匀供试品溶液多次测定所得结果之间的接近程度。
方法。
A. 重复性验证。
在相同条件下,由同一个分析人员对6份精密度溶液(供试品溶液)各1针连续进样,计算出辛酸钠含量,并计算辛酸钠含量RSD。
B. 中间精密度验证。
在同一个实验室,在不同的时间,由另一个分析人员对6份精密度溶液(供试品溶液)各1针连续进样,计算辛酸钠含量,并计算两个分析人员测定结果的RSD。
可接受标准。
重复性验证:辛酸钠含量RSD应不大于5%。
中间精密度验证:两个分析人员测定结果的RSD应不大于5%。
7.准确度验证。
目的:确认用本方法测定的结果与真实值接近的程度。
方法:分别对6针精密度溶液(100%溶液)、两种准确度溶液(120%溶液和80%溶液)各3针进行辛酸峰与庚酸峰面积之比计算,计算辛酸钠含量,并计算辛酸钠含量的RSD。
可接受标准:辛酸钠含量RSD应不大于5%。
8.耐用性验证。
目的:确认在流速变化±25%时,系统适用性结果不受影响。
方法。
A. 将流速调整为2.5mL/min(+25%),进6针标准品溶液,计算辛酸峰与庚酸峰的分离度、辛酸峰与庚酸峰面积之比及辛酸峰的拖尾因子。
B. 将流速调整为1.5mL/min(-25%),进6针标准品溶液,计算辛酸峰与庚酸峰的分离度、辛酸峰与庚酸峰面积之比及辛酸峰的拖尾因子。
可接受标准。
系统适用性符合下列要求。
A.辛酸峰与庚酸峰的分离度应大于1.5。
B.辛酸峰与庚酸峰面积之比RSD应不大于5%。
C.辛酸峰的拖尾因子应在0.95~1.20之间。
总结:本发明给出的该方法可以准确的检测人血白蛋白中辛酸钠的含量,减少了实验偏差和环境污染,提高了实验效率。
Claims (9)
1.一种简便的GC法测定人血白蛋白中辛酸钠含量的方法,其特征在于:采用三氯甲烷制备样品时简便,系统适用性,专属性,定量限,线性,准确度,精密度,耐用性,符合《中国药典》药品质量标准分析方法验证指导原则和《药品GMP指南·质量控制实验室与物料系统》的要求,该测定方法如下:
取人血白蛋白一批次1瓶,作为方法验证供试品;
溶液配制:
1.5mol/L高氯酸溶液:取高氯酸12.2 mL,加超纯水定容至100 mL;
正庚酸溶液:精密称定0.2 g,用三氯甲烷定容至10 mL,浓度为20 mg/mL;
正辛酸溶液:精密称定0.5 g,用三氯甲烷定容至10 mL,浓度为50 mg/mL;
线性溶液:分别量取正辛酸溶液120 μL、300 μL、500 μL、700 μL、900 μL,各加入正庚酸溶液1.0 mL,分别用三氯甲烷定容至10 mL,辛酸线性浓度为0.6 mg/mL、1.5 mg/mL、2.5mg/mL、3.5 mg/mL、4.5 mg/mL;
定量限溶液:取辛酸线性浓度为0.6 mg/mL溶液1.0 mL,用三氯甲烷定容至10 mL;
标准品溶液:取辛酸线性浓度为3.5 mg/mL溶液作为标准品溶液;
内标溶液:取正庚酸溶液2.5 mL,用三氯甲烷定容至25 mL;
精密度溶液:量取人血白蛋白500 μL加水500 μL,加1.5 mol/L高氯酸溶液400 μL,振荡混匀2分钟,加1.0 mL内标溶液,振荡混匀2分钟,以3000转/分钟,离心20分钟;
平行制备6份,取下层有机溶液进样;
准确度溶液:分别量取人血白蛋白600 μL加水400 μL(120%溶液)、400 μL加水600 μL(80%溶液),混匀,各加1.5 mol/L高氯酸溶液400 μL,振荡混匀2分钟,各加1.0 mL内标溶液,振荡混匀2分钟,以3000转/分钟,离心20分钟,分别平行制备3份,取下层有机溶液进样;
供试品溶液:精密度溶液作为供试品溶液;
空白溶液:取三氯甲烷作为空白溶液;
试验条件(仪器参数):
色 谱 柱:DB-FFAP(123-3232),0.32 mm*30 m,
FID:230℃,
进样口:230℃,
炉温:160℃,
载气:氮气,
流速:2.0 mL/min,
进样量:0.1 μL,
运行时间:10分钟;
结果计算:
标准品溶液中辛酸峰与庚酸峰的分离度均应大于1.5,辛酸峰与庚酸峰面积之比的RSD应不大于5 %,以线性溶液中辛酸峰与庚酸峰面积比对辛酸浓度(mg/mL)作直线回归,求得直线回归方程,直线回归相关系数应不低于0.99,计算出供试品溶液中辛酸的浓度(mg/mL),结果计算中除辛酸峰与庚酸峰以外,其他的峰可忽略不计,再按下式计算供试品中辛酸钠含量,
辛酸钠含量(mmol/g蛋白质):
式中:A 为供试品溶液中辛酸的浓度,mg/mL;
n 为供试品溶液的稀释倍数(1/供试品的取用量,以mL计算);
144.22 为辛酸分子量(1 mmol辛酸相当于1 mmol辛酸钠);
C 为供试品蛋白质含量,g/mL 。
2.按照权利要求1所述一种简便的GC法测定人血白蛋白中辛酸钠含量的方法,其特征在于:三氯甲烷制备样品时不需要将三氯甲烷挥发至干。
3.按照权利要求1所述一种简便的GC法测定人血白蛋白中辛酸钠含量的方法,其特征在于:所述的系统适用性:标准品溶液中辛酸峰与庚酸峰的分离度均应大于1.5,标准品溶液中辛酸峰与庚酸峰面积之比的RSD应不大于5 %,标准品溶液中辛酸峰的拖尾因子应在0.95~1.20之间。
4.按照权利要求1所述一种简便的GC法测定人血白蛋白中辛酸钠含量的方法,其特征在于:所述的专属性:空白溶液没有其他峰干扰测定,标准品溶液与供试品溶液中辛酸峰的保留时间的RSD不大于2%。
5.按照权利要求1所述一种简便的GC法测定人血白蛋白中辛酸钠含量的方法,其特征在于:所述的线性:r不低于0.99。
6.按照权利要求1所述一种简便的GC法测定人血白蛋白中辛酸钠含量的方法,其特征在于:所述的定量限:辛酸峰信噪比的平均值应不小于10。
7.按照权利要求1所述一种简便的GC法测定人血白蛋白中辛酸钠含量的方法,其特征在于:所述的精密度和重复性:精度度溶液中辛酸钠含量的RSD应不大于5%,中间精密度:两个分析人员的RSD应不大于5%。
8.按照权利要求1所述一种简便的GC法测定人血白蛋白中辛酸钠含量的方法,其特征在于:所述的准确度:准确度溶液与精密度溶液中辛酸钠含量的RSD应不大于5%。
9.按照权利要求1所述一种简便的GC法测定人血白蛋白中辛酸钠含量的方法,其特征在于:所述的耐用性:流速变化±25%系统适用性应符合上述标准要求。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201610157446.4A CN105842352A (zh) | 2016-03-18 | 2016-03-18 | 一种简便的gc法测定人血白蛋白中辛酸钠含量的方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201610157446.4A CN105842352A (zh) | 2016-03-18 | 2016-03-18 | 一种简便的gc法测定人血白蛋白中辛酸钠含量的方法 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN105842352A true CN105842352A (zh) | 2016-08-10 |
Family
ID=56587436
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201610157446.4A Pending CN105842352A (zh) | 2016-03-18 | 2016-03-18 | 一种简便的gc法测定人血白蛋白中辛酸钠含量的方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN105842352A (zh) |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN108801754A (zh) * | 2018-06-06 | 2018-11-13 | 华兰生物工程重庆有限公司 | 一种提高人血白蛋白铝残留量重复性的方法 |
CN113504323A (zh) * | 2021-07-02 | 2021-10-15 | 贵州泰邦生物制品有限公司 | 一种免疫球蛋白中辛酸残留量的检测方法 |
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN101927011A (zh) * | 2009-06-23 | 2010-12-29 | 武汉生物制品研究所 | 一种球蛋白溶液的病毒灭活方法 |
CN102590403A (zh) * | 2012-03-08 | 2012-07-18 | 中华人民共和国苏州出入境检验检疫局 | 检测纺织品中可游离水解的甲醛的方法 |
-
2016
- 2016-03-18 CN CN201610157446.4A patent/CN105842352A/zh active Pending
Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN101927011A (zh) * | 2009-06-23 | 2010-12-29 | 武汉生物制品研究所 | 一种球蛋白溶液的病毒灭活方法 |
CN102590403A (zh) * | 2012-03-08 | 2012-07-18 | 中华人民共和国苏州出入境检验检疫局 | 检测纺织品中可游离水解的甲醛的方法 |
Non-Patent Citations (5)
Title |
---|
仲立军等: "人血白蛋白中辛酸钠的含量测定", 《中国医院药学杂志》 * |
国家药典委员会: "辛酸钠测定法", 《中华人民共和国药典2015版》 * |
宋青: "气相色谱法测定人白蛋白制品中辛酸钠含量", 《微生物免疫学进展》 * |
彭红: "《药物分析》", 31 March 2015 * |
李荣贞等: "两种定量测定人血白蛋白中辛酸钠含量方法的比较", 《药学研究》 * |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN108801754A (zh) * | 2018-06-06 | 2018-11-13 | 华兰生物工程重庆有限公司 | 一种提高人血白蛋白铝残留量重复性的方法 |
CN113504323A (zh) * | 2021-07-02 | 2021-10-15 | 贵州泰邦生物制品有限公司 | 一种免疫球蛋白中辛酸残留量的检测方法 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN102692462A (zh) | 一种丹红注射液质量控制方法 | |
CN102175778A (zh) | 一种同时测定多种抗抑郁药血药浓度的方法 | |
WO2023124924A1 (zh) | 一种盐酸平阳霉素原料药中残留溶剂的检测方法 | |
CN102288696A (zh) | 一种测定百草枯血药浓度的方法 | |
CN109633063A (zh) | 一种人血浆中替格瑞洛及其活性代谢产物浓度的检测方法 | |
CN106950291A (zh) | 一种盐酸氨溴索注射剂有关物质的检测方法 | |
CN105842352A (zh) | 一种简便的gc法测定人血白蛋白中辛酸钠含量的方法 | |
Joseph et al. | Determination of biotin by liquid chromatography coupled with immunoaffinity column cleanup extraction: Single-laboratory validation, first action 2016.02 | |
CN100580447C (zh) | 一种测定人血浆中抗病毒药物浓度的方法 | |
CN101093214B (zh) | 一种测定抗癫痫药物血药浓度的方法 | |
CN111122727A (zh) | 人血浆中同时测定伊马替尼及伊马替尼代谢物浓度的方法 | |
CN105974016B (zh) | 一种同时检测血浆中福沙匹坦和阿瑞匹坦的方法 | |
CN105424834B (zh) | 同时检测聚维酮k30中2-吡咯烷酮和甲酸方法 | |
CN101658550A (zh) | 夏枯草口服液含量测定方法 | |
CN106124682A (zh) | 一种刺五加注射液的成分检验方法 | |
CN110736796A (zh) | 一种检测肺炎球菌荚膜多糖分子量的方法 | |
Harazono et al. | Interlaboratory comparison about feasibility of insoluble particulate matter test for injections with reduced test volume in light obscuration method | |
CN105158348A (zh) | 利用气相色谱法对莪术油中五种有效成分测定的方法 | |
CN111426760B (zh) | 一种多索茶碱原料药中基因毒性杂质的测定方法 | |
CN111077245B (zh) | 天葵子药材的uplc特征图谱建立方法及检测方法 | |
CN114034794A (zh) | 一种清热解毒口服液多组分含量测定方法 | |
CN106153766A (zh) | 一种测定血浆中8‑表黄独素e乙酸酯浓度的方法 | |
CN109828040B (zh) | 墨旱莲药材uplc特征图谱的构建方法和检测方法 | |
CN102636597A (zh) | 顶空气相色谱法测定盐酸四环素原料药中残留溶剂的方法 | |
CN100383520C (zh) | 一种测定人血浆中霉酚酸及其代谢物的方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
C10 | Entry into substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20160810 |
|
RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |