WO2005016888A1 - アミロイド蓄積性疾患のプローブ、アミロイド染色剤、アミロイド蓄積性疾患の治療および予防薬、ならびに神経原線維変化の診断プローブおよび染色剤 - Google Patents

アミロイド蓄積性疾患のプローブ、アミロイド染色剤、アミロイド蓄積性疾患の治療および予防薬、ならびに神経原線維変化の診断プローブおよび染色剤 Download PDF

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Yukitsuka Kudo
Masako Suzuki
Takahiro Suemoto
Nobuyuki Okamura
Tsuyoshi Shiomitsu
Hiroshi Shimazu
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Definitions

  • the present invention relates to a diagnostic imaging probe for a disease in which amyloid; 3 protein is accumulated, specifically a probe labeled with a positron-emitting nuclide, and a diagnostic imaging composition containing the probe. Furthermore, the present invention provides, for example, detection and staining of amyloid; 3 protein in brain material, for example, detection of senile plaques in the brain of an Alzheimer's disease patient, and staining of the protein sheet structure as a cause or a part of the etiology. The present invention also relates to a pharmaceutical composition for preventing and / or treating any disease.
  • the present invention also relates to a compound useful for diagnosing a disease in which neurofibrillary tangles are etiological or a part of the etiology, a diagnostic imaging composition containing the compound, and a composition for staining neurofibrillary tangles. .
  • Amyloid-accumulating diseases include various diseases characterized by the deposition of insoluble fibrillar proteins (amyloid) on various organs and tissues in the body, and include Alzheimer's disease and Down's syndrome group. It is. Of these, Alzheimer's disease (AD) is currently regarded as one of the most difficult to treat, and accurate early diagnosis is desired.
  • AD Alzheimer's disease
  • Alzheimer's disease is currently regarded as one of the most difficult diseases to treat and is a disease for which an accurate early diagnosis is desired.
  • Alzheimer's disease is a disease characterized by progressive dementia that occurs mainly from the old age to the old age. Pathologically, it is characterized by general atrophy of the cerebrum, marked degeneration and loss of neurons, neurofibrillary tangles and the appearance of senile plaques.
  • the greatest risk factor for dementia represented by Alzheimer's disease is aging. Therefore, the increase in the number of patients accompanying the aging population is particularly remarkable in Japan, the United States, and European countries, where the population is aging, and the cost of medical care has put the healthcare system in these countries at risk. ing.
  • the number of Alzheimer's disease patients in Japan is estimated to be about 1 million, and it is expected that the number of Alzheimer's disease will increase as the population ages in the future. Alukhaima
  • the cost of working for a single patient, including nursing care costs, is considered to exceed 2.5 million yen per patient per year, so Japan has already paid more than 2.5 trillion yen in socio-economic costs. Will be. It is now common knowledge in the world that treating patients with Alzheimer's disease before or when dementia symptoms become evident, and that providing treatment as early as possible has significant medical and economic benefits. At present, it is extremely difficult to accurately diagnose these stages of Alzheimer's disease.
  • the histopathology of Alzheimer's disease is represented by two main features. These are senile plaques and neurofibrillary tangles.
  • the main component of the former is the amyloid / 3 (A j3) protein having a / 3 sheet structure, and the latter is the hyperphosphorylated amyloid / 3 protein.
  • a j3 amyloid / 3
  • the definitive diagnosis of Artzuno and Ima's disease relies on the appearance of these pathological features in the patient's brain.
  • the amyloid / 3 protein is characteristic of diseases in which amyloid accumulates, including Alzheimer's disease, and is closely related. Therefore, detection of sheet-shaped amyloid / 3 protein as a marker in the body, especially in the brain, is one of the important diagnostic methods for amyloid-accumulating diseases, particularly Alzheimer's disease. Including Alzheimer's disease For the purpose of diagnosing diseases in which amyloid accumulates, a substance that specifically binds to and stains amyloid / 3 protein in the body, especially in the brain, has been conventionally searched.
  • Such substances include Congo Red (see Non-Patent Document 1), Thioflavin S (see Non-Patent Document 2), Thioflavin T (Non-Patent Document 3), Chrysamine G and its derivatives (see Patent Documents 1 and 2), and the like.
  • Congo Red see Non-Patent Document 1
  • Thioflavin S see Non-Patent Document 2
  • Thioflavin T Non-Patent Document 3
  • Chrysamine G and its derivatives see Patent Documents 1 and 2
  • Patent Document 3 there are many problems in terms of binding specificity to amyloid / 3 protein, blood-brain barrier permeability, solubility, toxicity and the like.
  • the present inventors have found various compound compounds having characteristics such as high blood-brain barrier permeability, high solubility, and low toxicity with respect to the amyloid / 3 protein (Patent Document 3, Patent Document 4, Patent Document 5, Patent Document 6, and Patent Document 7).
  • amyloid protein and tau protein having a ⁇ -sheet structure show neurotoxicity
  • compounds that suppress the cytotoxicity may be caused by the protein itself having a / 3 sheet structure. It is suggested that the drug may be a therapeutic agent for some diseases such as artzuno and imma disease.
  • Alzheimer's disease Another major histopathological feature of Alzheimer's disease is neurofibrillary tangles and hyperphosphorylated tau protein, which is a major component thereof, but these are generally delayed from amyloid protein. It is thought to be expressed. However, neurofibrillary tangles are believed to correlate well with the degree of dementia as compared to amyloid protein (Braak H and Braak E: Acta Neuropathol. 82, 239-259, 1991. Wischik et al .: In "Neurobiology" of Alzheimer's Disease “, 103-206, Oxford University Press, Oxford, 2001).
  • tau protein is characteristic of diseases in which tau protein is accumulated, including Alzheimer's disease, and is closely related. Therefore, detection of a tau protein having a three-sheet structure as a marker in the body, particularly in the brain, is one of the important diagnostic methods for diseases in which tau accumulates, particularly Alzheimer's disease.
  • Non-patent Document 4 For the purpose of diagnosing diseases in which tau accumulates, such as Alzheimer's disease, a method of quantifying tau in the body, particularly in cerebrospinal fluid, has been reported from a few gnooleps (Non-patent Document 4). And Non-Patent Document 5). However, there is no probe in the world for non-invasively quantifying tau in vivo.
  • neurofibrillary tangles for diagnosing or treating diseases in which neurofibrillary tangles such as Alzheimer's disease is etiology or a part of the etiology, or for staining neurofibrillary tangles,
  • the need for highly potent compounds is increasing.
  • Patent document 1 International patent application PCTZUS96Z05918 specification
  • Patent Document 2 International Patent Application PCTZUS98Z07889 Specification
  • Patent Document 3 Japanese Patent Application No. 2000-080082
  • Patent Document 4 Japanese Patent Application No. 2000-080083
  • Patent Document 5 Japanese Patent Application No. 2001-076075
  • Patent Document 6 International Patent Application PCT / JP01 / 02204 Specification
  • Patent Document 7 International Patent Application PCT / JP01 / 02205 Specification
  • Non-Patent Document 1 Puchtler et al., Journal of histochemistry and Cytochemistry (Vol. 10, d5, 19-2)
  • Non-Patent Document 2 Puchtler et al., Journal of Histochemistry and Cytochemistry (Journal of histochemistry and Cytochemistry, Vol. 77, 431 Hashi, 1983)
  • Non-Patent Document 3 LeVine, Protein Science, Volume 2, 404-410, 1993
  • Non-Patent Document 4 Ishiguro et al., Neuroscience 'Letter (Neurosci. Lett.), 270, 81-84, 1999
  • Non-Patent Document 5 Itoh et al., Anals 'ob' Neurology (Ann. Neurol.), Vol. 50, pp. 150-156, 2001
  • the present invention provides an imaging diagnostic probe for a disease in which amyloid / 3 protein accumulates, which has high binding specificity to amyloid / 3 protein and high blood-brain barrier permeability. It provides a substance that can be used.
  • the present invention also provides a labeled powerful substance used as an imaging diagnostic probe for a disease in which amyloid protein accumulates, and a diagnostic imaging composition and kit containing such a probe.
  • the present invention provides a method for staining amyloid / 3 protein in brain material, for example, senile plaques containing the same as a main component, prevention of a disease in which the / 3 sheet structure of the protein is etiological or a part of the etiology, and Z or Also provided are pharmaceutical compositions for treatment.
  • the present invention also provides a compound useful for early diagnosis of Alzheimer's disease and Tawapati, a diagnostic imaging composition and a tau protein staining composition containing the same.
  • the present inventors have conducted intensive studies to solve the above-mentioned problems, and as a result, it was found that the compound represented by the formula 1 (a) or I (b) or a salt or solvate thereof has a high amyloid protein level. They have found that they have binding specificity and also have high blood-brain barrier permeability, and have completed the present invention.
  • the compound of the present invention specifically and sharply stains the amyloid / 3 protein, and thus can be said to enable accurate early diagnosis, particularly of Alzheimer's disease and Down's syndrome.
  • the compound of the present invention since the compound of the present invention has high blood-brain barrier permeability, noninvasive diagnosis can be made before birth.
  • the present invention provides:
  • Formula I used as a diagnostic probe for amyloid / 3 protein accumulation disease:
  • ring A is a 5- or 6-membered ring and has the following structure:
  • X and Y are independently N or CH;
  • Z is 0, S, CH or N—CH
  • G is N or CH
  • J is 0, S, CH or N_CH
  • p is an integer of 1-4;
  • q is an integer of 1-4;
  • R and R are independently selected from the group consisting of hydrogen and alkyl having 1-4 carbon atoms.
  • R is hydrogen, halogen, ⁇ H, C ⁇ OH, SO H, NH, NO, C 1-4 alkyl
  • R and R are independently hydrogen, halogen, OH, CO ⁇ H, SO H, NH, NO, carbon
  • C 1-4 alkyl 0-C 1-4 alkyl (where C 1-4 alkyl may be substituted by halogen), and feneruka Forms a benzene ring which may be substituted by one to four selected groups; provided that when m is 0 and R and R together form a benzene ring, ring A is Benzene ring
  • n is an integer from 0 to 4, with the proviso that when Ring A is a benzene ring, m is an integer from 2 to 4;
  • n is an integer from 0—4]
  • gamma-ray emitting nuclides 99 m Tc, m In, 67 Ga, 2 ⁇ 1, 123 compound or a salt or solvate according to are those selected from the group consisting of ⁇ and 133 Xe (6) Japanese;
  • composition for diagnostic imaging of amyloid protein accumulation disease comprising the compound according to any of (4) to (9) or a salt or solvate thereof, and a pharmaceutically acceptable carrier;
  • a kit for imaging diagnosis of an amyloid protein-accumulating disease and / or taupopatchi comprising the compound according to any of (4) to (9) or a salt or solvate thereof as an essential component;
  • a pharmaceutical composition for treating and / or preventing amyloid / 3 protein accumulation disease comprising the compound according to (1) or a pharmaceutically acceptable salt or solvate thereof and a pharmaceutically acceptable carrier;
  • R, R, X, Y, Z, G and J are as defined above;
  • R is halogen, ⁇ H, COOH, SO H, NH, NO, C 1-4 alkyl, O — Alkyl having 1-4 carbons (where the alkyl having 1-4 carbons is substituted or unsubstituted with halogen) or phenyl;
  • k means an integer from 0—4]
  • the present invention provides a compound having high specificity for amyloid protein, high blood-brain barrier permeability, and extremely high safety. Further, the present invention provides a compound that has high specificity for neurofibrillary tangles (and tau protein as a main component thereof), high blood-brain barrier permeability, and extremely high safety. Thus, for example, the compounds of the present invention are considered to be useful as stains for senile plaques and Z or diffuse senile plaques in the brain of Alzheimer's disease patients, or as agents for detecting neurofibrillary tangles.
  • compositions and kits for diagnostic imaging of a disease in which amyloid / 3 protein or tau protein is accumulated comprising the compound of the present invention.
  • Use of such compounds, compositions or kits allows for early and accurate diagnosis of disease.
  • a pharmaceutical composition containing the compound of the present invention which is used for the prevention and / or treatment of a disease in which the accumulation of amyloid / 3 protein or tau protein causes or is a part of the etiology, and the present invention.
  • FIG. 1 shows staining of BSB (upper panel), Thioflavin S (middle panel, adjacent section of upper panel) and BF-185 (lower panel, adjacent section of middle panel) in Alzheimer's disease patient brain section. The gender comparison is shown. BF-185 stained mainly senile plaques (wedge-shaped arrows), whereas BSB and Thioflavin S stained both senile plaques and neurofibrillary tangles (arrows).
  • Fig. 2 shows a comparison of the staining properties of BF-185 (left panel) and thioflavin S (right panel, adjacent panel of left panel) in brain sections of Alzheimer's disease patients.
  • BF-185 is mainly Thioflavin S stained both senile plaques and neurofibrillary tangles (arrows), whereas senile plaques (wedge-shaped arrows) were stained.
  • FIG. 3 shows a comparison of the staining properties of BF-185 (left panel) and anti-Aj3 antibody 6F / 3D immunostaining (right panel, adjacent section on left panel) in brain sections of Alzheimer's disease patients.
  • FIG. 4 shows a comparison of the staining properties of BF-187 (left panel) and thioflavin S (right panel, adjacent panel of left panel) in brain sections of Alzheimer's disease patients.
  • FIG. 5 shows a comparison of the staining properties of BF-188 (left panel) and thioflavin S (right panel, adjacent panel of left panel) in brain sections of Alzheimer's disease patients.
  • FIG. 6 shows a comparison of the staining properties of BF-189 (left panel) and thioflavin S (right panel, adjacent panel of left panel) in brain sections of Alzheimer's disease patients.
  • FIG. 7 shows a comparison of the staining properties of BF-196 (left panel) and thioflavin S (right panel, adjacent panel of left panel) in brain sections of Alzheimer's disease patients.
  • BF-196 stained mainly senile plaques (wedge-shaped arrows), whereas Thioflavin S stained both senile plaques and neurofibrillary tangles (arrows).
  • FIG. 8 shows a comparison of the staining properties of BF-196 (left panel) and anti-Aj3 antibody 6F / 3D immunostaining (right panel, adjacent section of left panel) in brain sections of Alzheimer's disease patients.
  • FIG. 9 shows a comparison of the staining properties of BF-197 (left panel) and thioflavin S (right panel, adjacent panel of left panel) in brain sections of Alzheimer's disease patients.
  • BF-197 stained mainly senile plaques (wedge-shaped arrows), whereas Thioflavin S stained both senile plaques and neurofibrillary tangles (arrows).
  • FIG. 10 shows a comparison of the staining properties of BF_197 (left panel) and anti-A j3 antibody 6F / 3D immunostaining (right panel, adjacent section of left panel) in brain sections of Alzheimer's disease patients.
  • FIG. 11 shows a comparison of staining properties between BF-201 (left panel) and thioflavin S (right panel, adjacent panel on left panel) in brain sections of Alzheimer's disease patients.
  • FIG. 12 shows a comparison of the staining properties of BF-201 (left panel) and anti-A j3 antibody 6F / 3D immunostaining (right panel, adjacent section of left panel) in brain sections of Alzheimer's disease patients.
  • BF-201 stained senile plaques (wedge-shaped arrows) stained by anti-A; 3 antibody 6F / 3D.
  • FIG. 13 shows a comparison of the staining properties of BF-214 (left panel) and thioflavin S (right panel, adjacent section of left panel) in brain sections of Alzheimer's disease patients.
  • FIG. 14 shows a comparison of staining properties of BF-215 (left panel) and thioflavin S (right panel, adjacent panel of left panel) in brain sections of Alzheimer's disease patients.
  • BF-215 stained senile plaques (wedge-shaped arrows) stained by Thioflavin S.
  • FIG. 15 shows a comparison of the staining properties of BF-227 (left panel) and Thioflavin S (right panel, adjacent section of left panel) in brain sections of Alzheimer's disease patients.
  • BF-227 stained mainly senile plaques (wedge-shaped arrows), whereas Thioflavin S stained both senile plaques and neurofibrillary tangles (arrows).
  • FIG. 16 shows a comparison of the staining properties of BF-227 (left panel) and anti-A j3 antibody 6F / 3D immunostaining (right panel, adjacent section of left panel) in Alzheimer's disease patient brain section.
  • BF-227 stained senile plaques (wedge-shaped arrows) and diffuse senile plaques (dotted circles) stained by anti-Aj3 antibody 6F / 3D.
  • FIG. 17 shows a comparison of staining properties between BF-221 (left panel) and thioflavin S (right panel, adjacent panel of left panel) in brain sections of Alzheimer's disease patients.
  • BF-221 stained neurofibrillary tangles (arrows) stained by Thioflavin S.
  • FIG. 18 shows a comparison of the staining properties of BF-221 (left panel) and anti-phosphorylated tau antibody (pSer422) (right panel, adjacent section of left panel) in brain sections of Alzheimer's disease patients.
  • BF-221 stained neurofibrillary tangles (arrows) stained by anti-phosphorylated tau antibody (pSer422).
  • FIG. 19 shows a comparison of the staining properties of BF-231 (left panel) and thioflavin S (right panel, adjacent panel of left panel) in brain sections of Alzheimer's disease patients.
  • BF-231 stained senile plaques (wedge-shaped arrows) stained by Thioflavin S.
  • the substance used as an imaging diagnostic probe for diseases in which the amyloid; 3 protein is accumulated according to the present invention is the compound represented by the above general formula I or a salt or solvate thereof.
  • Table 1 shows some examples of the compounds of formula I.
  • Preferred compounds of the present invention are BF-185, BF-187, BF-188, BF_189, BF-196, BF-197, BF-201, BF_214, BF-215, BF-227, and BF-231.
  • BF-185 and BF-227 have high specificity for diffuse senile plaques and are useful for early detection of Alzheimer's disease. Further, BF_227 is preferable in that clearance from the brain is prompt.
  • the compound represented by the formula II recognizes neurofibrillary tangle change well, It is useful as a probe recognizing DNA and as a stain for neurofibrillary tangles.
  • a typical example of such a compound is BF-221.
  • BF_239, BF-240 and BF-255 also have high selectivity for neurofibrillary tangles.
  • the compound of the present invention is also highly useful because it has extremely low toxicity and high brain-localization.
  • Thioflavin T is known as a compound that well recognizes the ⁇ structure, and is listed for reference.
  • Table 1 Compounds of the present invention that specifically recognize amyloid protein (thioflavin ⁇ ⁇ is included for reference)
  • alkyl having 114 carbon atoms includes methinole, ethyl, propyl, butyl, and structural isomers thereof.
  • halogen refers to fluorine, chlorine, bromine and iodine.
  • Ring A is
  • the compound of the present invention which is a 5-membered ring or a 6-membered ring represented by embedded image and wherein Ring A is a 5-membered ring, is preferable in that clearance from the brain is prompt.
  • X and Y are independently nitrogen (N) or CH.
  • Z is oxygen (O), zeolite (S), CH or N_CH, where p is 1
  • G is N or CH.
  • J is 0, S, CH or N_CH, where q is 1
  • p 2p + l is an integer of four.
  • R and R are independently selected from the group consisting of hydrogen and alkyl having 1-4 carbon atoms.
  • R and R include hydrogen and methyl.
  • R and R are the same
  • R is hydrogen, halogen, ⁇ H, C ⁇ OH, SO H, NH, N ⁇ , an alkyl group having 1 to 4 carbon atoms.
  • R and R may be the same or different and are independently hydrogen, halogen, O
  • R is a force selected from the group consisting of 2 4 alkyls, phenyl and 1 to 4 carbons, wherein 1 to 4 carbons may be substituted by halogen; or R And R are together
  • a benzene ring which may be substituted by one to four groups selected from the group consisting of: provided that when m is 0 and R and R together form a benzene ring, Is
  • Ring A is a benzene ring.
  • Preferred R and R are hydrogen, methyl and dihalogen
  • D is NH, S, O or CH.
  • E is N or CH.
  • m is an integer of 0-4, provided that when ring A is a benzene ring, m is an integer of 2-4.
  • n is an integer of 0-4.
  • a preferred value of m is 1 to 3, and a preferred value of n is 0 or 1.
  • the R substituent may be present at any position on the ring to which it is attached. 2 or more R
  • each may be the same or different.
  • both cis and trans isomers may exist in the compound of the formula I.
  • Salts of the compounds of formula I are also encompassed by the present invention. Salts may be formed with the nitrogen atom or any functional group in the compound of formula I. When a carboxy group or a sulfonate group is present in the compound, a salt may be formed between this and a metal. Examples of such salts include salts with alkali metals such as lithium, sodium and potassium, and salts with alkaline earth metals such as magnesium, calcium and barium. When the compound of the formula I contains a hydroxyl group, a compound whose hydrogen is a metal such as sodium or potassium is also encompassed in the present invention.
  • a complex formed with a compound of the formula I and a metal salt for example, a complex formed with a metal salt such as magnesium chloride and iron chloride
  • these are also referred to herein.
  • a salt of the compound of formula I is used in the body of the subject, it is preferably a pharmaceutically acceptable salt.
  • Pharmaceutically acceptable salts of the compounds of formula I include, for example, salts with halide ions such as chlorine, bromine and iodine, or salts with metals such as sodium, potassium and calcium. Strong salts are included in the present invention. Also, solvates of the compounds of formula I are encompassed by the present invention.
  • solvates examples include hydrates, methanol solvates, ethanol solvates, and ammonia solvates. If a solvate of the compound of formula I is used in the body of the subject, it is preferably a pharmaceutically acceptable solvate. Pharmaceutically acceptable solvates include hydrates, ethanol solvates and the like.
  • the term "compound of the present invention” or “compound of the present invention” refers to a compound of formula 1 (compound of formula II Of course) and salts and solvates thereof.
  • the present invention further provides compounds of the present invention, ie, compounds that can be used as precursors for the synthesis of compounds of formula or formula II.
  • compounds of the present invention ie, compounds that can be used as precursors for the synthesis of compounds of formula or formula II.
  • Those skilled in the art can easily design a strong precursor and the structure of the intended compound of the present invention, and synthesize it. Alternatively, such precursors can be obtained by modifying commercially available ones.
  • the precursor of the compound of the present invention include BF-223 (a precursor of BF_224), BF-226 (a precursor of BF-227), BF-246 (a precursor of BF-247), and BF-251 (BF —252 precursor) and BF-253 (a precursor of BF-254).
  • a label preferably a radioactive label
  • a label preferably a radioactive label
  • the above precursor compound selected from the group consisting of BF-223, BF-226, BF_246, BF-251 and BF-253;
  • labeling position and method refer to the description of the labeling of the compound of formula or II.
  • a formula specifically binding in vivo to amyloid protein (also referred to as “ ⁇ / 3 protein” or “ ⁇ / 3” in the present specification) in the body in a disease in which amyloid / 3 protein is accumulated.
  • the compound of I or a salt or solvate thereof is used as a diagnostic probe for a disease in which amyloid / 3 protein is accumulated.
  • Senile plaques are clearly stained by the compound of the present invention.
  • the term “disease in which ⁇ accumulates” refers to a disease characterized by accumulation of ⁇ protein in the brain.Also, diseases that can be diagnosed using A protein, ie, senile plaque as a marker, include Alzheimer's disease, Down syndrome and the like.
  • the compound of the present invention is labeled.
  • Labels include fluorescent substances, affinity substances, enzyme substrates, radionuclides, and the like.
  • a probe labeled with a radionuclide is usually used.
  • the compounds of the present invention can be labeled with various radionuclides by methods well known in the art. For example, 3 H, MC , 35 S, 1311, etc. are radionuclides that have been previously used, and are often used in vitro.
  • an imaging probe and its detection means are that it can be diagnosed in vivo, that it is less harmful to the patient (especially non-invasive), that it has high detection sensitivity, and that it has an appropriate half-life. (Appropriate label probe preparation time and diagnostic time). Therefore, recently, positron emission tomography (PET) using gamma rays, which has high detection sensitivity and material permeability, or computed tomography (SPECT) using gamma-ray emitting nuclides has been used. Of these, PET detects two ⁇ -rays emitted from positron-emitting nuclides in opposite directions by a coincidence method using a pair of detectors, so that information with excellent resolving power and quantitative properties can be obtained. preferable.
  • PET positron emission tomography
  • SPECT computed tomography
  • the for SPECT can be used to label 99 m Tc, m In, 67 Ga, 201 T1, 123 ⁇ , the present invention compounds of ⁇ -ray emitting nuclides such as 133 Xe. "Are often used m Tc and 123 1 power SSPECT. Is for PET 11 C, 13 N, 15 ⁇ , 18 F, 62 Cu, 68 Ga, 7 present compound in positron release out nuclides such 3 ⁇ 4r the it can be labeled. among positron emitting nuclide, half-life is appropriate, labeled 11 in terms of easiness C, 13 N, 15 0, 18 F is preferred instrument 18 F are particularly preferred.
  • the labeling position of the compound of the present invention on a radionuclide such as a positron-emitting nuclide or a gamma-ray-emitting nuclide may be any position in the formula I.
  • the hydrogen on the ring is a positron.
  • the radionuclide, such as a radionuclide or a gamma-ray radionuclide may be substituted, as described above.
  • Position is on alkyl group and ⁇ ⁇ ⁇ or phenyl ring in compound
  • any of the side chains may be labeled with 18 F, or hydrogen on the ring may be replaced with 18 F.
  • The may be substituted with 18 F or the like.
  • these nuclides are placed in devices called cyclotrons or generators. Produced from Those skilled in the art can select a production method and an apparatus according to the produced nuclide. The nuclide thus produced can be used to label the compound of the present invention.
  • Methods for producing labeled compounds labeled with these radionuclides are well known in the art. Representative methods include chemical synthesis, isotope exchange, and biosynthesis. Chemical synthesis has been widely used and is essentially the same as ordinary chemical synthesis except for using radioactive starting materials. Various nuclides are introduced into the compound by this method. Isotope exchange method, a 3 H, 35 S, 125 1 etc. in a compound of simple structure transferred into compounds of complex structure, is a method of obtaining a compound of complex structure labeled with these radionuclides .
  • the biosynthesis method is a method in which a compound labeled with 14 C, 35 s or the like is given to cells such as microorganisms to obtain a metabolite into which these nuclides have been introduced.
  • a label can be introduced at a desired position by designing a synthesis scheme according to the purpose in the same manner as in ordinary synthesis. Such designs are well-known to those skilled in the art.
  • a desired nuclide can be introduced into a desired position of the compound of the present invention and labeled.
  • Administration of the labeled compound of the present invention to a subject may be local or systemic.
  • Administration routes include intradermal, intraperitoneal, intravenous, arterial, or spinal fluid injection or infusion, etc., but are selected based on factors such as the type of disease, nuclide used, compound used, target condition, and test site. it can.
  • the detection site can be examined by means such as PET or SPECT. These means can be appropriately selected depending on factors such as the type of disease, nuclide used, compound used, condition of the subject, and site to be examined.
  • the dose of the compound of the present invention labeled with a radionuclide varies depending on the type of disease, nuclide used, compound used, age of the subject, physical condition, sex, degree of the disease, test site, and the like. The In particular, it is necessary to pay close attention to the exposure dose of the target. For example, C, "New, 1 5 ⁇ , radioactivity of 18 F present compounds labeled with positron-emitting nuclides such as the passage is always 3.7 Megabe Clermont to 3.7 Gigabe Clermont, preferably The range is 18 mega becquerels and 740 mega becquerels.
  • the present invention also provides a composition for diagnostic imaging of a disease in which amyloid / 3 protein is accumulated, comprising the compound of the present invention.
  • the composition of the present invention comprises the compound of the present invention and a pharmaceutically acceptable carrier.
  • the compound of the present invention in the composition is preferably labeled. Please when labeling method described above is a variety, it is desirable for diagnostic imaging applications in vivo which is labeled with a radionuclide (in particular 11 C, 1 3 N, 15 ⁇ , 18 F positron emission such as) .
  • the composition of the present invention is preferably in a form capable of being injected or infused.
  • a pharmaceutically acceptable carrier is preferably a liquid, and an aqueous solvent such as potassium phosphate buffer, physiological saline, Ringer's solution, distilled water, or the like, or polyethylene glycol, vegetable oil, ethanol, glycerin, Non-aqueous solvents such as dimethyl sulfoxide, propylene glycol and the like, but are not limited thereto.
  • the mixing ratio of the carrier and the compound of the present invention can be appropriately selected depending on the application site, detection means, etc., but is usually 100,000 to 1 to 2: 1, preferably 10,000 to 1 to 10: 1. This is a one-to-one ratio.
  • composition of the present invention may further contain a known antibacterial agent (for example, an antibiotic), a local anesthetic (for example, proforce hydrochloride, dibuforce hydrochloride, etc.), a buffer (for example, Tris-HCl buffer, Hess buffer). And osmotic pressure regulators (eg, gnorecose, sorbitol, sodium chloride, etc.).
  • a known antibacterial agent for example, an antibiotic
  • a local anesthetic for example, proforce hydrochloride, dibuforce hydrochloride, etc.
  • a buffer for example, Tris-HCl buffer, Hess buffer.
  • osmotic pressure regulators eg, gnorecose, sorbitol, sodium chloride, etc.
  • the present invention provides a diagnostic imaging kit for a disease in which amyloid protein is accumulated, comprising the compound of the present invention as an essential component.
  • the kit contains the compound of the present invention, a solvent for dissolving the compound, a buffer, an osmotic agent, an antibacterial agent, a local anesthetic, etc., separately or in combination with each other in each container. It is a collection of the results.
  • the compound of the present invention may be unlabeled or labeled. If unlabeled, the compounds of the invention can be labeled before use by conventional methods as described above.
  • the compound of the present invention may be provided as a solid such as a lyophilized powder or may be provided after being dissolved in an appropriate solvent.
  • the composition of the present invention described above May be the same as the carrier used in the above.
  • the components such as a buffer, an osmotic pressure regulator, an antibacterial agent, and a local anesthetic may be the same as those used in the above-mentioned composition of the present invention.
  • Various containers can be appropriately selected, and the container can be formed into a shape suitable for the operation of introducing a label into the compound of the present invention, and can be made of a light-shielding material depending on the properties of the compound, or administered to a patient. It can also be in the form of a vial or syringe for convenience.
  • the kit may appropriately include instruments necessary for diagnosis, for example, instruments used for a syringe, an infusion set, or a PET device. Usually, instructions are attached to the kit.
  • the compound of the present invention specifically binds to amyloid protein
  • the compound of the present invention is used as it is, without labeling or after labeling, for the detection and quantification of amyloid protein in vitro. You can also.
  • the compound of the present invention may be used for amyloid protein staining of a microscope specimen, colorimetric determination of amyloid protein in a sample, or determination of amyloid; 3 protein using a scintillation counter.
  • the compound of the present invention has high specificity for amyloid iS protein. Therefore, the compound of the present invention is useful, for example, for studying amyloid; 3 protein-accumulating disease or for diagnosing the disease before or after birth, and is considered to be useful, for example, as a stain for senile plaques in the brain of Alzheimer's disease patients. Staining of a brain section using the compound of the present invention can be performed by an ordinary method.
  • the present invention provides a compound of the present invention or a pharmaceutically acceptable salt or solvent thereof.
  • Amyloid in a brain sample containing, as an essential component, a composition for staining amyloid / 3 protein in a brain sample containing a solvate, and a compound of the present invention or a pharmaceutically acceptable salt or solvate thereof.
  • / 3 Protein staining kit Furthermore, the present invention relates to a method for staining amyloid protein in a brain sample, which comprises using the compound of the present invention or a pharmaceutically acceptable salt or solvate thereof.
  • amyloid / 3 protein having a sheet structure exhibits neurotoxicity.
  • the compound of the present invention can be used as a therapeutic agent for diseases that cause pathogenesis or become a part of pathogenesis, for example, Alzheimer's disease when the protein itself takes a sheet structure.
  • Amyloid characterized by administering a compound of formula (I) or a salt or solvate thereof; a method for treating and / or preventing 3 protein accumulation diseases;
  • a method for diagnosing an amyloid ⁇ protein-accumulating disease which comprises using the compound of the formula (I) or a salt or solvate thereof;
  • Examples of the disease in which the / 3 sheet structure of the protein is a cause or a part of the cause include Alzheimer's disease and Down's syndrome.
  • the form of the powerful pharmaceutical composition is not particularly limited, but a liquid formulation is preferred, and an injection formulation is particularly preferred.
  • a powerful injection formulation can be directly injected into the brain, or the compound of the present invention has high blood / brain barrier permeability as shown in Example 3, so that the above-mentioned pharmaceutical composition can be injected intravenously or intravenously. It can also be formulated and administered for infusion. Preparation of such a liquid formulation can be performed by a method known in the art.
  • the compound of the present invention is dissolved in a suitable carrier, water for injection, physiological saline, Ringer's solution, and the like, sterilized with a filter or the like, and then filled in a suitable container, for example, a vial or ampoule. Refill. It is also possible to freeze-dry the solution and reconstitute the solution with a suitable carrier at the time of use.
  • a suitable carrier for example, water for injection, physiological saline, Ringer's solution, and the like
  • a suitable container for example, a vial or ampoule. Refill.
  • the compound of the present invention can be added, for example, to ethylene oxide.
  • the solution can be sterilized by exposure to a liquid carrier, and then suspended in a sterilized liquid carrier.
  • the dose of the compound of the present invention depends on the condition, sex, age, weight, etc. of the patient. In general, in the case of an adult weighing 70 kg, 0.1 mg to lg per day is preferable. Is between 1 mg and 100 mg, more preferably between 5 mg and 50 mg.
  • the treatment can be performed at such doses over a period of time, and the dose can be increased or decreased depending on the results.
  • the compound represented by the formula II or a salt or solvate thereof is a probe recognizing neurofibrillary tangles having high specificity for tau protein, or It can be used as a stain for neurofibrillary tangles. Accordingly, the present invention provides a compound of formula II, or a salt or solvate thereof, for use as an imaging probe for neurofibrillary tangles.
  • a method for detecting or staining neurofibrillary tangles characterized by using a compound of formula II or a salt or solvate thereof;
  • a preferred compound of the formula II of the present invention used for detecting or staining the above-mentioned neurofibrillary tangles is BF-221.
  • BF_239, BF-240 and BF-255 also have high selectivity for neurofibrillary tangles.
  • the compound of the present invention ie, the compound represented by Formula II or a salt or solvate thereof, is used as a diagnostic probe for conformation disease, and preferably, is a radiologically labeled nuclide. It can also be used as a probe. Furthermore, the compounds of the invention are also effective in treating and preventing or preventing conformational disease. Accordingly, the present invention relates to a compound of formula II or a salt or solvate thereof for use as a diagnostic probe for conformation disease;
  • Formula II contains a compound of formula II or a salt or solvate thereof, A diagnostic imaging composition or kit;
  • a pharmaceutical composition for preventing and / or treating conformation disease comprising a compound of formula II or a pharmaceutically acceptable salt or solvate thereof and a pharmaceutically acceptable carrier;
  • a method for diagnosing conformation disease comprising using a compound of formula II or a pharmaceutically acceptable salt or solvate thereof;
  • Conformation disease includes Alzheimer's disease (senile plaques, neurofibrillary tangles), Lewy body disease, Parkinson's disease, Huntington's disease, spinal and bulbar muscular atrophy, dentate nucleus' pallidal Louis atrophy Syndrome, spinocerebellar degeneration, Machado-Joseph disease, amyotrophic lateral sclerosis, Down syndrome, progressive supranuclear palsy, Pick's disease, FTDP-17 (Frontotemporal Dementia and Parkinsonism Linkea to nromosome 17), LNTD (Limbic Neurofibrillary ⁇ angle Dementia), Sudan favored leukodystrophy, amyloid angiopathy and the like.
  • Alzheimer's disease senile plaques, neurofibrillary tangles
  • Lewy body disease Parkinson's disease, Huntington's disease, spinal and bulbar muscular atrophy, dentate nucleus' pallidal Louis atrophy Syndrome, spinocere
  • the compound of the present invention can be synthesized from a known substance, for example, a commercially available substance, by a known method. Those skilled in the art can appropriately select a starting material and a synthesis method depending on the intended compound of the present invention.
  • the synthesis examples of the compounds of the present invention, BF_185, BF-196, BF-197, BF-214, BF-225, BF-227, BF-215, and BF-228, are shown below.
  • n-butyllithium / n-hexane solution (2.81 ml, 4.23 mmol) was added dropwise at ⁇ 60 ° C. or lower, and the temperature was gradually raised to 0 ° C.
  • a solution of 16 (0.52 ml, 4.23 mmol) in tetrahydrofuran (6 ml) was added dropwise at ⁇ 70 ° C. or lower, and the mixture was stirred at ⁇ 78 ° C. for 1 hour.
  • a 200 ml reaction vessel was charged with 1.61 g (0.0061 mol) of 5-dimethylamino-2-[(diethoxy-phosphinyl) methyl] -oxazole (28) and 70 ml of dry THF under an argon stream, and 0.245 g of 60% sodium hydride (in oil). 0.0061 mol) for 10 minutes. After stirring for 30 minutes, 0.9 g (0.0061 mol) of benzoxazole-2-carbaldehyde (30) was added over 15 minutes. Thereafter, the mixture was stirred for 12 hours.
  • reaction mixture was poured into ice water, extracted with ethyl acetate, washed with saturated saline, dried over anhydrous sodium sulfate, and evaporated.
  • a 500 ml reaction vessel was charged with 2.5 g (0.0081 mol: purity conversion) of 4,5-dimethyl-2 _ [(diethoxyphosphinyl) -methyltoxazole and 70 ml of dry THF under an argon stream, and 60% sodium hydride (in oil) 0.323 g (0.0081 mol) was added over 10 minutes. Stir for 10 minutes After that, 1.42 g (0.0081 mol) of 4-dimethylaminocinnamaldehyde (33) was added over 10 minutes. Thereafter, the mixture was stirred for 2 hours.
  • the reaction mixture was poured into ice water, extracted with ethyl acetate, washed with saturated saline, dried over anhydrous sodium sulfate, and the solvent was distilled off.
  • Amyloid protein purchased from Peptide Laboratories was dissolved in phosphate buffer ( ⁇ 7.4) and left at 37 ° C for 4 days.
  • test compound dissolved in the same buffer was added in an amount of 100 ⁇ l each (final concentration: 10 ⁇ m) and left for 60 minutes.
  • Test compound / 3 Structure recognition degree (%) ⁇ ( ⁇ - ⁇ ) / (C-D) ⁇ X 100
  • paraffin-embedded brain tissue was sliced at a thickness of 6 ⁇ or 8 / m, stretched on a slide glass and dried. Paraffin brain sections were deparaffinized in the order of xylene 10 min X 2, 100% ethanol 15 min X 2, 95% ethanol X 2, and running water for 10 min.
  • washing was performed three times with PBS for 2 minutes X 3 times.
  • the cells were sealed with Reagent (Calbiochem) and microscopically examined using a fluorescence microscope (Nikon, Eclips E800). Images were taken with a digital camera (Plaroid PDMCII).
  • the acute acute toxicity of the compound of the present invention was examined by intravenous intravenous administration using mausus. .
  • CCrrjj : CCDD11 strain
  • Male and female mammous mice were used per group as a group of 44 animals. ((Each group average weight was 3311—— 3322gg That's it))).
  • Each compound was dissolved and dissolved in a mixed liquid mixture of IINN HHCC11, POPOLYRIETIETYLENE GLYCOCONONORE 440000, and distilled distilled water, and remained as it was. After dissolving and dissolving in DDMM SS ⁇ , dilute and dilute with distilled distilled water, and administer via tail vein vein; Thereafter, observations were made 77 days later. .
  • the measurement of brain-to-brain transferability was performed according to the following procedure. .
  • the compound of the present invention was administered to ma wusu by intravenous injection into a vein, and the brain-brain migration property in in vivo was measured. .
  • the compound to be tested was dissolved and dissolved in a mixed liquid mixture of 11NNHHCC11, 110000 polyphenol, ethylene glycol ethylene glycol 44,000, and DDMMSSOO. After dissolving and dissolving with ethiruluarualcohol, dilute and dilute with purified water, and inject and inject through tail vein vein. After 22 minutes from the administration of the injection, the patient was subjected to paparillin-treated injection syringe barrel from the abdominal aortic aortic artery pulse under anesthesia with Aetheratel anesthesia. The blood sampling, blood sampling, and brain sampling. .
  • mi is an amyloid and s ⁇
  • Table 1 The compounds shown in Table 1 were found by the above-mentioned screening method for compounds that specifically recognize amyloid protein (thioflavin ⁇ is shown for reference). See Table 1 for compound structures. The ⁇ -structure recognition of the compound of the present invention tended to be higher than that of thioflavin ⁇ (Table 1).
  • BSB ((trans, trans) _l_bromo-2,5-bis- (3-hydroxycarbonyl 4-hydroxy) styrylbenzene) (Fig. 1, upper panel) and Thioflavin S (Fig. 1) in brain sections of Alzheimer's disease patients
  • the staining properties of the middle panel, adjacent section of the upper panel) and BF-185 (lower panel in Fig. 1, adjacent section of the middle panel in Fig. 1) were compared.
  • BF-185 stains mainly senile plaques (wedge-shaped arrows)
  • BSB and Thioflavin S stain both senile plaques and neurofibrillary tangles Fig. 1 arrows.
  • BSB staining was performed by D.M.Skovronsky, B. Zhang, M.-P.Kung, H.F.Kung, J.O.
  • BF-185 left panel in FIG. 3
  • anti-A ⁇ antibody 6F / 3D immunostaining right panel in FIG. 3, right panel in FIG. 3 left panel
  • BF-185 was found to stain senile plaques (wedge-shaped arrows in FIG. 3) and diffuse senile plaques (circled in broken lines in FIG. 3) stained by anti-A antibody 6F / 3D.
  • BF-187 left panel in Fig. 4 and thioflavin S ( The staining properties of the right panel of FIG. 4 and the adjacent section of the left panel of FIG. 4) were compared. As shown in Fig. 4, BF-187 was found to stain senile plaques (wedge-shaped arrows) stained by Thioflavin S.
  • BF-188 Fig. 5, left panel
  • thioflavin S Fig. 5, right panel, adjacent section of Fig. 5, left panel
  • BF-188 was found to stain senile plaques (wedge-shaped arrows) stained by Thioflavin S.
  • BF-189 left panel in Fig. 6
  • thioflavin S right panel in Fig. 6, left panel
  • BF_189 was able to stain senile plaques (wedge-shaped arrows) stained by Thioflavin S.
  • BF-196 Fig. 7, left panel
  • thioflavin S Fig. 7, right panel, adjacent sections of Fig. 7, left panel
  • BF-196 stained mainly senile plaques (wedge-shaped arrows)
  • Thioflavin S stained both senile plaques and neurofibrillary tangles (Fig. 7 arrows). all right.
  • BF-196 left panel in Fig. 8
  • anti-A ⁇ antibody 6F / 3D immunostaining right panel in Fig. 8, right panel and Fig. 8 left panel
  • BF-196 was found to stain senile plaques (wedge-shaped arrows) stained by the anti-Aj3 antibody 6F / 3D.
  • BF_197 left panel in Fig. 10
  • anti-A / 3 antibody 6F Z3D immunostaining right panel in Fig. 10, right panel in Fig. 10 left panel
  • BF-197 was found to stain senile plaques (wedge-shaped arrows) stained by the anti-A j3 antibody 6F / 3D.
  • BF-201 left panel in Fig. 11
  • Thioflavin S in the Alzheimer's disease brain section
  • BF-201 left panel in Fig. 12
  • anti-A / 3 antibody 6F in brain sections of Alzheimer's disease patients
  • BF-201 is a senile plaque stained by anti-A / 3 antibody 6F / 3D (Fig. 1).
  • BF-214 (FIG. 13 left panel) and thioflavin S (FIG. 13 right panel, adjacent section of FIG. 13 left panel) were compared in Alzheimer's disease patient brain sections.
  • BF-214 was found to stain senile plaques (wedge-shaped arrows in Fig. 13) stained by Thioflavin S.
  • BF-215 (FIG. 14, left panel) and thioflavin S (FIG. 14, right panel, adjacent section of FIG. 14, left panel) in brain sections of Alzheimer's disease patients were compared. As can be seen from FIG. 14, BF-215 was found to stain senile plaques (wedge-shaped arrows) stained by Thioflavin S.
  • BF-227 left panel in FIG. 15
  • thioflavin S right panel in FIG. 15 and adjacent sections in the left panel in FIG. 15
  • BF-227 stained mainly senile plaques (wedge-shaped arrows)
  • thioflavin S stained both senile plaques and neurofibrillary tangles (Fig. 15 arrows). all right.
  • BF_227 left panel in FIG. 16
  • anti-A / 3 antibody 6F Z3D immunostaining right panel in FIG. 16 and adjacent sections in left panel in FIG. 16
  • BF-227 was found to stain senile plaques (wedge-shaped arrows in FIG. 16) and diffuse senile plaques (indicated by broken circles) stained by anti-Aj3 antibody 6F / 3D.
  • BF-231 Fig. 19, left panel
  • thioflavin S Fig. 19, right panel, and the adjacent section of Fig. 19, left panel
  • BF-231 was found to stain senile plaques (wedge-shaped arrows) stained by Thioflavin S.
  • the compound of the present invention was different in specificity from senile plaque and thioflavin S which stain both for senile plaque and phosphorylated amyloid j3 protein. From this, one use of the compound of the present invention is considered to be a selective staining agent for senile plaques in brain sections of Alzheimer's disease patients.
  • BF-185 and BF-227 also showed an affinity for diffuse senile plaques and stained vividly, indicating that they are useful for early diagnosis of Alzheimer's disease.
  • Table 2 shows the results of the acute toxicity test performed on each compound by the above method.
  • Table 3 shows the brain migration 2 minutes after intravenous administration of the test compound in mice.
  • the brain content 2 minutes after administration of the test compound was 3.9-19.0% ID / g.
  • the ability of PET or SPECT compounds for the central nervous system to migrate to the brain should be 0.5% ID / g or more. In that sense, the test compound is a compound having extremely high brain migration.
  • the compound BF-221 which is a typical example of the compound of the formula II of the present invention, was found to be highly specific for tau protein (arrow) unlike Thioflavin S. That is, with thioflavin S, proteins other than tau protein were well stained. With BF-221, proteins other than tau protein were hardly stained. Similar results were obtained for BF-240 and BF-255.
  • BF-221 stained a phosphorylated tau protein recognized by a phosphorylated tau protein specific antibody (pSer422). That is, it was found that the compound represented by the formula II of the present invention can be mainly used as a probe or a stain that recognizes tau protein, that is, a probe or a stain that recognizes neurofibrillary tangles.
  • BF—239, B Similar results were obtained for F_240 and BF-255.
  • the compounds for use in the diagnostic probe for A-accumulating disease of the present invention and the staining of A using the same, and the pharmaceutical compositions containing the compound of the present invention used for the treatment and prevention of A-accumulating diseases are currently the most important ones. It is extremely important in early detection, medical care, and prevention of intractable diseases such as Alzheimer's disease, which is one of the medical problems, and its applicability in the medical field is extremely large. Further, the compounds of the present invention are useful for early diagnosis of Alzheimer's disease and Tawapati.

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Abstract

　アミロイドβ蛋白が蓄積する疾患の診断、アミロイドβ蛋白の特異的染色剤、ならびにアミロイドβ蛋白が蓄積する疾患の治療および予防のための、アミロイドβ蛋白に対する特異性の高い化合物を提供する。また、本発明は神経原線維変化に対するプローブおよび神経原線維変化の染色剤も提供する。

Description

明 細 書
アミロイド蓄積性疾患のプローブ、アミロイド染色剤、アミロイド蓄積性疾患 の治療および予防薬、ならびに神経原線維変化の診断プローブおよび染色剤 技術分野
[0001] 本発明は、アミロイド ;3蛋白が蓄積する疾患の画像診断プローブ、詳細には陽電 子放出核種により標識されたプローブ、ならびに該プローブを含む画像診断用組成 物に関する。さらに本発明は、例えば、脳材料中のアミロイド ;3蛋白の検出 ·染色、例 えば、アルツハイマー病患者脳における老人斑の検出 '染色、ならびに蛋白の シ ート構造が病因または病因の一部となる疾患の予防および/または治療用の医薬 組成物にも関する。また、本発明は、神経原線維変化が病因または病因の一部であ る疾患の診断に有用な化合物、それを含む画像診断用組成物および神経原線維変 化の染色用組成物にも関する。
背景技術
[0002] アミロイドが蓄積する疾患には、体内の種々の器官や組織への不溶性原線維性蛋 白（アミロイド）の沈着を特徴とする種々の疾病があり、アルツハイマー病やダウン症 候群等が含まれる。このうち、アルツハイマー病 (AD)は現在最も治療の困難な疾病 の 1つとされており、正確な早期診断が望まれている。
[0003] アルツハイマー病（AD)は現在最も治療の困難な疾病の 1つとされており、正確な 早期診断が望まれている疾病である。アルツハイマー病は主として初老期から老年 期に起こる進行性の痴呆を特徴とする疾患である。病理学的には大脳の全体的な萎 縮、神経細胞の著しい変性と脱落、神経原線維変化と老人斑の出現を特徴とする。 アルツハイマー病に代表される痴呆の最大のリスクファクターは加齢であることが知ら れている。したがって、老齢人口の増加に伴う患者数の増加は、特に、高齢化社会と なっている日本、アメリカ、ヨーロッパ諸国において顕著であり、それに対する医療コ ストはこれらの国の医療システムを危機におとしめている。
なお、我が国においてはアルツハイマー病患者数は約 100万人と推定され、今後 人口の高齢化に伴レ、その患者数は増大することが確実視されてレ、る。アルッハイマ 一病患者に力かわる費用は介護費用を含めると年間患者 1人当たり 250万円を超え ると考えられていることから、すでに我が国では 2兆 5千億円を超える社会経済的コス トを払っていることになる。アルツハイマー病において痴呆症状が顕在化する以前な レ、しはできるだけ早期に治療を加えることは、大きな医療経済的効果をもたらすこと はいまや世界の常識となっている。し力 現状ではこれらの段階のアルツハイマー病 を正確に診断することは極めて困難である。
[0004] 現在のアルツハイマー病診断方法は各種ある力 我が国においては長谷川式、 A DAS、 MMSE等の、アルツハイマー病が疑われる個体の認知機能の低下を定量的 に評価する方法が一般的であり、まれに画像診断法 (MRI、 CT等）が補助的に用い られている。し力しこれらの診断法では病気を確定するには不十分であり、確定診断 には生前における脳の生検 (バイオプシー）、死後脳の病理組織学的検査が必要で ある。このように、アルツハイマー病の診断法についても精力的な研究が行われてい るにもかかわらず、それほどの進歩がみられないでいる。多くの研究の結果、最初の 臨床症状が現れるかなり前 (長い場合は約 40年前）にはすでにアルツハイマー病特 徴的な神経変性が始まっていることが判ってきた。また同病においては患者を取り巻 く家族または臨床家が最初の臨床症状に気づいた時には、すでに脳内病理像は取 り返しのつかない状態まで進行していることが知られている。上述のような病状の進 行特性および患者数の激増を考え合わせると、アルツハイマー病の正確な早期診断 の必要性ならびに意義は極めて大きレ、。
アルツハイマー病の病理組織像は 2つの主徴に代表される。すなわち老人斑およ び神経原線維変化である。前者の主構成成分は /3シート構造をとつたアミロイド /3 ( A j3 )蛋白であり、後者のそれは過剰リン酸化されたアミロイド /3蛋白である。ァルツ ノ、イマ一病の確定診断はこれらの病理学的特徴が患者脳内に出現することをよりど ころとしてレ、る。
[0005] アミロイド /3蛋白はアルツハイマー病を包含するアミロイドが蓄積する疾患に特徴的 であり、密接な関連性を有している。したがって、体内、特に脳内で シート構造をと つたアミロイド /3蛋白をマーカーとして検出することが、アミロイドが蓄積する疾患、特 にアルツハイマー病の重要な診断方法の 1つとなる。アルツハイマー病をはじめとす るアミロイドが蓄積する疾患の診断を目的として、体内、特に脳内アミロイド /3蛋白に 特異的に結合し、これを染色する物質の検索が従来から行われている。かかる物質 としてはコンゴ一レッド (非特許文献 1参照）およびチオフラビン S (非特許文献 2参照 )、チオフラビン T (非特許文献 3)ならびにクリサミン Gおよびその誘導体（特許文献 1 および特許文献 2参照）等が知られているが、アミロイド /3蛋白に対する結合特異性 、血液一脳関門透過性、溶解度、毒性等の面から問題が少なくない。本発明者らは、 アミロイド /3蛋白に対して特異性が高 血液一脳関門透過性、溶解度が大き 毒 性が小さい等の特徴を有する種々の化合物化合物を見出している（特許文献 3、特 許文献 4、特許文献 5、特許文献 6および特許文献 7参照)。
[0006] 脳内蛋白が シート構造をとることによって、その蛋白自身が病因となる疾患が知 られてレ、る。 アルツハイマー病におレヽてはアミロイド 蛋白およびタウ蛋白が シー ト構造をとることによって、蛋白自身が病因または病因の一部となっていると考えられ ている。 Yanknerらはアミロイド 蛋白に シート構造をとらせることにより神経細胞毒 性を発揮することを初めて報告した（サイエンス、 245卷、 417-420ページ、 1989)。そ の後、多くの追試が行われ、 βシート構造をとつたアミロイド 蛋白力 神経細胞毒性 を有することが確認された。このように βシート構造をとつたアミロイド 蛋白、タウ蛋 白に神経細胞毒性がみられることから、その細胞毒性を抑制する化合物は蛋白自身 が /3シート構造をとることによって病因、または病因の一部となる疾患、例えばァルツ ノ、イマ一病の治療薬になりうることが示唆される。
[0007] これまでアルツハイマー病の研究あるいは生検または剖検試料を用いた診断等に は、アルツハイマー患者から脳切片を調製し、これを染色することが行われてきた。 従来の染色剤は主として、コンゴ一レッドまたはチオフラビン Sが用いられてきた。こ れらの染色剤はアルツハイマー病の 2つの病理学的主徴と言われる老人斑および神 経原線維変化の両者を染色するのが特徴である。
[0008] しかしながら、これまでのコンゴ一レッドまたはチオフラビン S等ではではびまん性老 人斑は染色できない。またこれまでの多くの報告においてもびまん性老人斑を染色 できる低分子有機化合物は見あたらなレ、。アルツハイマー病における老人斑の主成 分であるアミロイド ;3 (A ）蛋白は同病が発症する（痴呆症状が顕性化する）かなり 以前沙なくとも 10年以上前）に蓄積が始まると考えられており、この初期の蓄積像が びまん性老人斑と考えられている。したがって、びまん性老人斑を早期に検出するこ とにより、ァルツハーマー病の早期発見 '診断が可能になる。
[0009] したがって、アルツハイマー病をはじめとするアミロイド /3蛋白が蓄積する疾患の診 断、アミロイド /3蛋白の特異的染色剤、ならびにアミロイド /3蛋白が蓄積する疾患の 治療および予防のための、アミロイド /3蛋白に対する特異性の高い化合物に対する 必要性が高まっている。
[0010] アルツハイマー病のもう 1つの病理組織学主徴は神経原繊維変化およびその主構 成成分である過剰リン酸化されたタウ蛋白であるが、一般的にこれらはアミロイド 蛋 白よりは遅れて発現すると考えられている。しかし、神経原繊維変化はアミロイド 蛋 白に比し痴呆の程度とよく相関すると考えられている（Braak H and Braak E： Acta Neuropathol. 82卷、 239-259、 1991年。 Wischikら： In "Neurobiology of Alzheimer's Disease", 103-206， Oxford University Press, Oxford, 2001 )。
[0011] また、アルツハイマー病以外にタウ蛋白の脳内蓄積を主徴とする疾病（タウォパチ ィ）にはピック病、進行性核上性麻痺 (PSP)などがあげられる。
[0012] このようにタウ蛋白はアルツハイマー病を包含するタウ蛋白が蓄積する疾患に特徴 的であり、密接な関連を有している。従って体内、特に脳内で ;3シート構造をとつたタ ゥ蛋白をマーカーとして検出することが、タウが蓄積する疾患、特にアルツハイマー 病の重要な診断法の 1つとなる。
[0013] アルツハイマー病をはじめとするタウが蓄積する疾患の診断を目的として、体内、特 に脳脊髄液中のタウを定量する方法が 2、 3のグノレープから報告されている（非特許 文献 4および非特許文献 5参照）。しかし、非侵襲的にインビボでのタウを定量するこ とを目的としたプローブは世界的にみても全くみあたらない。
[0014] したがって、アルツハイマー病をはじめとする神経原繊維変化が病因または病因の 一部となる疾患の診断や治療のための、あるいは神経原繊維変化を染色するための 、神経原繊維変化に対する特異性の高い化合物に対する必要性が高まっている。
[0015] 一方、これまでアルツハイマー病の研究あるいは生検または剖検試料を用いた診 断等には、アルツハイマー患者力も得た脳試料の切片を調製し、これを染色すること が行われてきた。従来の染色剤は主として、コンゴ一レッドまたはチオフラビン Sが用 レ、られてきた。これらの染色剤はアルツハイマー病の 2つの病理学的主徴と言われる 老人斑および神経原線維変化の両者を染色するのが特徴である。
[0016] し力 ながら、これまでの多くの報告においても、神経原線維変化のみを染色でき る低分子有機化合物は見あたらない。
特許文献 1：国際特許出願 PCTZUS96Z05918明細書
特許文献 2：国際特許出願 PCTZUS98Z07889明細書
特許文献 3：特願平第 2000-080082号明細書
特許文献 4：特願平第 2000-080083号明細書
特許文献 5：特願平第 2001-076075号明細書
特許文献 6：国際特許出願 PCT/JP01/02204明細書
特許文献 7：国際特許出願 PCT/JP01/02205明細書
非特許文献 1：パチトラー（Puchtler)ら、ジャーナル'ォブ ·ヒストケミストリ一'アンド ·サ イトケ^ストリー (Journal of histochemistry and Cytochemistryノ、第 10卷、 d5頁、 19り 2年
非特許文献 2：パチトラー（Puchtler)ら、ジャーナル'ォブ ·ヒストケミストリ一'アンド ·サ イトケ^ストリー (Journal of histochemistry and Cytochemistryノ、第 77卷、 431へーシ 、 1983年
非特許文献 3：レバイン（LeVine)、プロテインサイエンス（Protein Science)、 2卷、 404 —410ページ、 1993年
非特許文献 4 :イシグロ（Ishiguro)ら、ニューロサイエンス 'レター（Neurosci. Lett.) , 2 70卷、 81— 84ページ、 1999年
非特許文献 5 :ィトウ（Itoh)ら、アナルズ 'ォブ 'ニューロロジー（Ann. Neurol.)、 50卷、 150— 156ページ、 2001年
発明の開示
発明が解決しょうとする課題
[0017] 本発明は、上記事情に鑑み、アミロイド /3蛋白に対する結合特異性、ならびに血液 一脳関門透過性が高ぐアミロイド /3蛋白が蓄積する疾患の画像診断プローブとして 使用できる物質を提供するものである。また本発明は、アミロイド 蛋白が蓄積する 疾患の画像診断プローブとして用いられる標識された力かる物質、ならびにかかるプ ローブを含む画像診断用組成物およびキットも提供する。さらに本発明は、脳材料中 のアミロイド /3蛋白、例えば、これを主成分とする老人斑の染色方法、ならびに蛋白 の /3シート構造が病因または病因の一部となる疾患の予防および Zまたは治療用の 医薬組成物も提供する。また、本発明は、アルツハイマー病やタウォパチ一の早期 診断に有用な化合物、それを含む画像診断用組成物およびタウ蛋白染色用組成物 も提供する。
課題を解決するための手段
[0018] 本発明者らは、上記課題を解決すベぐ鋭意研究を重ねた結果、式 1 (a)または I (b )に示す化合物またはその塩もしくは溶媒和物がアミロイド 蛋白に対して高い結合 特異性を有し、さらに血液-脳関門透過性も高いことを見出し、本発明を完成するに 至った。特に、本発明化合物はアミロイド /3蛋白を特異的かつ鮮明に染色することか ら、特にアルツハイマー病、ダウン症候群などの正確な早期診断を可能にするものと いえる。また、本発明化合物は血液-脳関門透過性も高いことから、生前における非 侵襲性の診断が可能となる。
[0019] すなわち、本発明は、
(1)アミロイド /3蛋白蓄積性疾患の診断プローブとして使用される、式 I： [化 1]
Figure imgf000007_0001
[式中、環 Aは 5員環または 6員環で、下記の構造:
Figure imgf000007_0002
または
[化 3]
Figure imgf000008_0001
または
[化 4]
Figure imgf000008_0002
を有し；
Xおよび Yは独立して Nまたは CHであり；
Zは 0、 S、 CHまたは N— C H であり；
2 p 2p + l
Gは Nまたは CHであり；
Jは 0、 S、 CHまたは N_C H であり；
2 q 2q+ l
pは 1一 4の整数であり；
qは 1一 4の整数であり；
Rおよび Rは独立して水素および炭素数 1一 4個のアルキルからなる群より選択さ
1 2
れ；
Rは水素、ハロゲン、〇H、 C〇OH、 SO H、 NH、 NO、炭素数 1一 4個のアルキ
3 3 2 2
ルおよびフエニルからなる群より選択され、
Rおよび Rは独立して水素、ハロゲン、 OH、 CO〇H、 SO H、 NH、 NO、炭素
4 5 3 2 2 数 1一 4個のアルキル、 O—炭素数 1一 4個のアルキル（ここに炭素数 1一 4個のアルキ ルはハロゲンで置換されていてもよい）、およびフエニルからなる群より選択される力 ； あるいは Rおよび Rは一緒になつて、ハロゲン、 OH
5 、 CO〇H、 SO H
3 、 NH
4 2、 NO
2
、炭素数 1一 4個のアルキル、 0-炭素数 1一 4個のアルキル（ここに炭素数 1一 4個の アルキルはハロゲンで置換されていてもよい）、およびフエ二ルカらなる群より選択さ れる 1一 4個の基により置換されていてもよいベンゼン環を形成し;ただし、 mが 0であ つて、 Rおよび Rが一緒になつてベンゼン環を形成する場合には環 Aはベンゼン環
4 5
でなく；
Dは NH、 S、 0、または CH = CHであり； Eは Nまたは CHであり；
mは 0— 4の整数であり、ただし、環 Aがベンゼン環である場合には mは 2— 4の整 数であり；
nは 0— 4の整数である]
で示される化合物またはその塩もしくは溶媒和物；
(2)老人斑および/またはびまん性老人斑に特異的に結合する（1)に記載の化合 物またはその塩もしくは溶媒和物；
(3) BF-185, BF_187、 BF_188、 BF_189、 BF_196、 BF_197、 BF_201、 BF— 214、 BF— 215、 BF—227および BF—231からなる群より選択される（2)に記載 の化合物またはその塩もしくは溶媒和物；
(4)標識されてレ、る（1)なレ、し (3)のレ、ずれかに記載の化合物またはその塩もしく は溶媒和物；
(5)標識が放射性核種である（4)に記載の化合物またはその塩もしくは溶媒和物；
(6)標識が γ線放出核種である（5)に記載の化合物またはその塩もしくは溶媒和 物；
(7) γ線放出核種が99 mTc、 mIn、 67Ga、 2< Τ1、 123Ιおよび133 Xeからなる群より選 択されるものである（6)に記載の化合物またはその塩もしくは溶媒和物；
(8)標識が陽電子放出核種である（5)に記載の化合物またはその塩もしくは溶媒 和物；
(9)陽電子放出核種が11 C、 13N、 150および18 Fからなる群より選択される（8)に記 載の化合物またはその塩もしくは溶媒和物；
(10) (4)ないし（9)のいずれかに記載の化合物またはその塩もしくは溶媒和物お よび医薬上許容される担体を含む、アミロイド 蛋白蓄積性疾患の画像診断用組成 物；
(11) (4)ないし（9)のいずれかに記載の化合物またはその塩もしくは溶媒和物を 必須の構成成分として含む、アミロイド 蛋白蓄積性疾患および/またはタウォパチ 一の画像診断用キット；
(12) (1)ないし（3)のいずれかに記載の化合物またはその塩もしくは溶媒和物を 含む脳試料中のアミロイド /3蛋白の染色用組成物；
(13) (2)または（3)に記載の化合物またはその塩もしくは溶媒和物を含む脳試料 中の老人斑および/またはびまん性老人斑の染色用組成物；
(14)化合物が BF— 185および BF—227からなる群より選択されるものである（13) に記載の染色用組成物；
(15) (1)に記載の化合物またはその医薬上許容される塩もしくは溶媒和物および 医薬上許容される担体を含むアミロイド /3蛋白蓄積性疾患の治療および Zまたは予 防用医薬組成物；ならびに
(16)疾患がアルツハイマー病である（15)に記載の医薬組成物
を提供するものである。
さらに本発明は、
(17)神経原線維変化を検出するためのプローブあるいは神経原線維変化の染色 剤として使用される、下式 II：
[化 5]
Figure imgf000010_0001
[式中、環 Aは
Figure imgf000010_0002
または
Figure imgf000010_0003
で示され；
R、 R、 X、 Y、 Z、 Gおよび Jは上記定義と同じであり；
1 2
Rはハロゲン、〇H、 COOH、 SO H、 NH、 NO、炭素数 1一 4個のアルキル、 O —炭素数 1一 4個のアルキル（ここに炭素数 1一 4個のアルキルはハロゲンで置換され てレ、てもよレ、）、またはフエニルであり；
kは 0— 4の整数を意味する]
で示される（1)に記載の化合物またはその塩もしくは溶媒和物；および
(18) BF— 221である（17)に記載の化合物
も提供する。
発明の効果
[0021] 本発明は、アミロイド 蛋白に対する特異性が高ぐ血液 脳関門透過性が高ぐし 力も極めて安全性の高い化合物を提供する。さらに本発明は、神経原線維変化（お よびその主構成成分であるタウ蛋白）に対する特異性が高ぐ血液 脳関門透過性 が高ぐし力も極めて安全性の高い化合物を提供する。したがって、例えば、本発明 の化合物は、アルツハイマー病患者脳における老人斑および Zまたはびまん性老人 斑の染色剤、あるいは神経原線維変化の検出剤として有用と考えられる。また、本発 明によれば、本発明化合物を含む、アミロイド /3蛋白やタウ蛋白が蓄積する疾患の画 像診断用組成物およびキットが提供される。かかる化合物、組成物、またはキットを用 レ、ることにより、疾病の早期における正確な診断が可能となる。さらに本発明によれば 、アミロイド /3蛋白やタウ蛋白の蓄積が病因または病因の一部となる疾患の予防およ び Zまたは治療用の、本発明の化合物を含有する医薬組成物、ならびに本発明の 化合物を対象に投与することを特徴とする、アミロイド /3蛋白やタウ蛋白の蓄積が病 因または病因の一部となる疾患の予防および Zまたは治療方法も提供される。 図面の簡単な説明
[0022] [図 1]図 1はアルツハイマー病患者脳切片における BSB (上段パネル）、チオフラビン S (中段パネル、上段パネルの隣接切片）および BF— 185 (下段パネル、中段パネル の隣接切片）の染色性の比較を示す。 BF— 185は主として老人斑 (クサビ型矢印）を 染色したのに対し、 BSBおよびチオフラビン Sは老人斑および神経原線維変化（矢 印）の両者を染色した。
[図 2]図 2はアルツハイマー病患者脳切片における BF— 185 (左パネル）とチオフラビ ン S (右パネル、左パネルの隣接切片）の染色性の比較を示す。 BF— 185は主として 老人斑 (クサビ型矢印）を染色したのに対し、チオフラビン Sは老人斑および神経原 線維変化 (矢印）の両者を染色した。
[図 3]図 3はアルツハイマー病患者脳切片における BF—185 (左パネル）と抗 A j3抗 体 6F/3D免疫染色 (右パネル、左パネルの隣接切片）の染色性の比較を示す。 BF 一 185は抗 A j3抗体 6F/3Dによって染色される老人斑 (クサビ型矢印）およびびま ん性老人斑 (破線丸印内）を染色した。
[図 4]図 4はアルツハイマー病患者脳切片における BF— 187 (左パネル）とチオフラビ ン S (右パネル、左パネルの隣接切片）の染色性の比較を示す。 BF— 187はチオフラ ビン Sによって染色される老人斑 (クサビ型矢印）を染色した。
[図 5]図 5はアルツハイマー病患者脳切片における BF— 188 (左パネル）とチオフラビ ン S (右パネル、左パネルの隣接切片）の染色性の比較を示す。 BF— 188はチオフラ ビン Sによって染色される老人斑 (クサビ型矢印）を染色した。
[図 6]図 6はアルツハイマー病患者脳切片における BF— 189 (左パネル）とチオフラビ ン S (右パネル、左パネルの隣接切片）の染色性の比較を示す。 BF— 189はチオフラ ビン Sによって染色される老人斑 (クサビ型矢印）を染色した。
[図 7]図 7はアルツハイマー病患者脳切片における BF— 196 (左パネル）とチオフラビ ン S (右パネル、左パネルの隣接切片）の染色性の比較を示す。 BF— 196は主として 老人斑 (クサビ型矢印）を染色したのに対し、チオフラビン Sは老人斑および神経原 線維変化 (矢印）の両者を染色した。
園 8]図 8はアルツハイマー病患者脳切片における BF-196 (左パネル）と抗 A j3抗 体 6F/3D免疫染色 (右パネル、左パネルの隣接切片）の染色性の比較を示す。 BF 一 196は抗 A j3抗体 6F/3Dによって染色される老人斑 (クサビ型矢印）を染色した。
[図 9]図 9はアルツハイマー病患者脳切片における BF—197 (左パネル）とチオフラビ ン S (右パネル、左パネルの隣接切片）の染色性の比較を示す。 BF— 197は主として 老人斑 (クサビ型矢印）を染色したのに対し、チオフラビン Sは老人斑および神経原 線維変化 (矢印）の両者を染色した。
[図 10]図 10はアルツハイマー病患者脳切片における BF_197 (左パネル）と抗 A j3 抗体 6F/3D免疫染色 (右パネル、左パネルの隣接切片）の染色性の比較を示す。 BF— 197は抗 A j3抗体 6F/3Dによって染色される老人斑 (クサビ型矢印）を染色し た。
[図 11]図 11はアルツハイマー病患者脳切片における BF—201 (左パネル）とチオフラ ビン S (右パネル、左パネルの隣接切片）の染色性の比較を示す。 BF— 201はチオフ ラビン Sによって染色される老人斑 (クサビ型矢印）を染色した。
[図 12]図 12はアルツハイマー病患者脳切片における BF— 201 (左パネル）と抗 A j3 抗体 6F/3D免疫染色 (右パネル、左パネルの隣接切片）の染色性の比較を示す。
BF— 201は抗 A ;3抗体 6F/3Dによって染色される老人斑 (クサビ型矢印）を染色し た。
[図 13]図 13はアルツハイマー病患者脳切片における BF— 214 (左パネル）とチオフラ ビン S (右パネル、左パネルの隣接切片）の染色性の比較を示す。 BF— 214はチオフ ラビン Sによって染色される老人斑 (クサビ型矢印）を染色した。
[図 14]図 14はアルツハイマー病患者脳切片における BF— 215 (左パネル）とチオフラ ビン S (右パネル、左パネルの隣接切片）の染色性の比較を示す。 BF— 215はチオフ ラビン Sによって染色される老人斑 (クサビ型矢印）を染色した。
[図 15]図 15はアルツハイマー病患者脳切片における BF— 227 (左パネル）とチオフラ ビン S (右パネル、左パネルの隣接切片）の染色性の比較を示す。 BF— 227は主とし て老人斑 (クサビ型矢印）を染色したのに対し、チオフラビン Sは老人斑および神経 原線維変化 (矢印）の両者を染色した。
[図 16]図 16はアルツハイマー病患者脳切片における BF—227 (左パネル）と抗 A j3 抗体 6F/3D免疫染色 (右パネル、左パネルの隣接切片）の染色性の比較を示す。 BF— 227は抗 A j3抗体 6F/3Dによって染色される老人斑（クサビ型矢印）およびび まん性老人斑 (破線丸印内）を染色した。
[図 17]図 17はアルツハイマー病患者脳切片における BF-221 (左パネル）とチオフラ ビン S (右パネル、左パネルの隣接切片）との染色性の比較を示す。 BF-221はチォ フラビン Sによって染色される神経原線維変化（矢印）を染色した。
園 18]図 18はアルツハイマー病患者脳切片における BF-221 (左パネル）と抗リン酸 化タウ抗体 (pSer422) (右パネル、左パネルの隣接切片）との染色性の比較を示す。 BF-221は抗リン酸化タウ抗体 (pSer422)によって染色される神経原線維変化（矢印 )を染色した。
[図 19]図 19はアルツハイマー病患者脳切片における BF— 231 (左パネル）とチオフラ ビン S (右パネル、左パネルの隣接切片）の染色性の比較を示す。 BF— 231はチオフ ラビン Sによって染色される老人斑 (クサビ型矢印）を染色した。
発明を実施するための最良の形態
[0023] 本発明のアミロイド ;3蛋白が蓄積する疾患の画像診断プローブとして使用される物 質は上の一般式 Iで示される化合物またはその塩もしくは溶媒和物である。式 Iの化 合物のレ、くつかの例を表 1に示した。好ましい本発明化合物は BF— 185、 BF— 187、 BF— 188、 BF_189、 BF— 196、 BF— 197、 BF— 201、 BF_214、 BF— 215、 BF— 2 27および BF—231などであり、特に BF—185および BF— 227はびまん性老人斑に 対する特異性が高くアルツハイマー病の早期発見において有用である。さらに BF_ 227は脳からのクリアランスがすみやかである点でも好ましい。
[0024] 本発明の式 Iで示される化合物のうち、式 IIで示される化合物（上記（17)参照）また はその塩もしくは溶媒和物は神経原線維変化をよく認識し、神経原線維変化を認識 するプローブおよび神経原線維変化の染色剤として有用である。かかる化合物の典 型例は BF— 221である。また、 BF_239、 BF— 240および BF— 255も神経原線維変 化に対する選択性が高い。
[0025] 本発明の化合物は極めて毒性が低 脳移行性が高いものである点からも、有用 性が高い。
[0026] なお、表 1において、チオフラビン Tは β構造をよく認識する化合物として知られて おり、参考として掲載した。
[表 1-1] 表 1 アミロイ ド 蛋白を特異的に認識する本発明の化合物 （チオフラビ ン Τは参考として掲載）
Figure imgf000015_0001
[表 1-2] レ] ド ノレ レ] レ]
Figure imgf000016_0001
[表 1-3]
Figure imgf000017_0001
[表 1-4]
Figure imgf000018_0001
[表 1-5]
Figure imgf000019_0001
Figure imgf000020_0001
[表 1-7]
Figure imgf000021_0001
[表 1-8]
Figure imgf000022_0001
[0027] 以下、式 Iの化合物の置換基について詳細に説明する。さらに、式 Iの化合物の塩、 溶媒和物、誘導体、および標識方法などについても説明する。当業者であれば、こ れらの式 Iの化合物に関する説明を、式 IIの化合物について適宜あてはめることがで きる。
[0028] 本明細書において、「炭素数 1一 4個のアルキル」という場合、メチノレ、ェチル、プロ ピル、プチル、およびこれらの構造異性体を包含するものとする。本明細書において 「ハロゲン」という場合、フッ素、塩素、臭素およびヨウ素をいうものとする。
[0029] 環 Aは
[化 8]
Figure imgf000022_0002
または
[化 9]
Figure imgf000022_0003
または [化 10]
Figure imgf000023_0001
で示される 5員環または 6員環であり、環 Aが 5員環である本発明の化合物は脳から のクリアランスがすみやかである点で好ましい。
[0030] Xおよび Yは独立して窒素（N)または CHである。
[0031] Zは酸素（O)、ィォゥ（S)、 CHまたは N_C H であり、ここに pは 1
2 p 2p+ l 一 4の整数で ある。好ましレ、 pの値は 1である。
[0032] Gは Nまたは CHである。
[0033] Jは 0、 S、 CHまたは N_C H であり、ここに qは 1
p 2p + l 一 4の整数である。好ましい p
2
の値は 1である。
[0034] Rおよび Rは独立して水素および炭素数 1一 4個のアルキルからなる群より選択さ
1 2
れる。好ましい Rおよび Rの例としては水素、メチルが挙げられる。 Rおよび Rは同
1 2 1 2 じであってもよく、異なっていてもよい。
[0035] Rは水素、ハロゲン、〇H、 C〇OH、 SO H、 NH、 N〇、炭素数 1一 4個のアルキ
3 3 2 2
ルおよびフエニルからなる群より選択され、 H、 OHおよびメチルが好ましい。
[0036] Rおよび Rは同じであってもよぐ異なっていてもよぐ独立して水素、ハロゲン、 O
4 5
H、 C〇OH、 SO H
3 、 NH
2、 NO、炭素数 1
2 一 4個のアルキル、フエニルおよび〇 炭 素数 1一 4個のアルキル（ここに炭素数 1一 4個のアルキルはハロゲンで置換されてい てもよい）からなる群より選択される力 ；あるいは Rおよび Rは一緒になつて、ハロゲ
4 5
ン、〇H、 C〇OH、 SO H、 NH、 NO、炭素数 1一 4個のアルキルおよびフエニルか
3 2 2
らなる群より選択される 1一 4個の基により置換されていてもよいベンゼン環を形成し； ただし、 mが 0であって、 Rおよび Rが一緒になつてベンゼン環を形成する場合には
4 5
環 Aはベンゼン環でなレ、。好ましい Rおよび Rは水素、メチルおよび〇 ハロゲンに
4 5
より置換されていてもよいメチルもしくはェチルである。また、 Rおよび Rが一緒にな
4 5
つて上記の置換されていてもよいベンゼン環を形成する場合も好ましい。かかるベン ゼン環が〇Hで置換されてレ、る場合も好ましレ、。 [0037] Dは NH、 S、 Oまたは CHである。
[0038] Eは Nまたは CHである。
[0039] mは 0— 4の整数であり、ただし、環 Aがベンゼン環である場合には mは 2— 4の整 数である。
[0040] nは 0— 4の整数である。
[0041] 好ましい mの値は 1ないし 3であり、好ましレ、 nの値は 0または 1である。 nが 0以外の 場合、 R置換基は結合する環のいずれの位置に存在していてもよい。 2個以上の R
3 3 置換基が存在する場合、それぞれが同一であってもよぐまた異なっていてもよい。
[0042] また、化合物中の 2つの環の間に二重結合が存在する場合には、シス、トランス双 方の異性体が式 Iの化合物に存在しうる。
[0043] 式 Iの化合物の塩も本発明に包含される。式 Iの化合物中の窒素原子またはいずれ 力の官能基とともに塩が形成されてもよい。化合物中にカルボキシノレ基またはスルホ ン酸基が存在するような場合、これと金属との間に塩が形成されてもよい。かかる塩 の例としては、リチウム、ナトリウム、カリウムのごときアルカリ金属との塩、マグネシウム 、カルシウム、バリウムのごときアルカリ土類金属との塩等が挙げられる。式 Iの化合物 が水酸基を含む場合、その水素がナトリウム、カリウム等の金属となっている化合物も 、本発明に包含される。さらに、式 Iの化合物と金属塩とで形成される錯体 (例えば塩 ィ匕マグネシウム、塩ィ匕鉄のごとき金属塩とで形成される錯体）が存在する場合には、 これらも本明細書においては式 Iの化合物の塩に含めることとする。対象の体内にお いて式 Iの化合物の塩を使用する場合には、それが医薬上許容される塩であることが 好ましレ、。式 Iの化合物の医薬上許容される塩としては、例えば、塩素、臭素、ヨウ素 のごときハロゲン化物イオンとの塩、あるいはナトリウム、カリウム、カルシウムのごとき 金属との塩がある。力かる塩は本発明に包含される。また、式 Iの化合物の溶媒和物 も本発明に包含される。溶媒和物としては、水和物、メタノール和物、エタノール和物 、アンモニア和物等が挙げられる。対象の体内において式 Iの化合物の溶媒和物を 使用する場合には、それが医薬上許容される溶媒和物であることが好ましい。医薬 上許容される溶媒和物としては、水和物、エタノール和物等が挙げられる。本明細書 において、「本発明化合物」または「本発明の化合物」という場合、式 1 (式 IIの化合物 を含むことはいうまでもない）の化合物、ならびにその塩および溶媒和物を包含する のとする。
[0044] さらに本発明は、本発明の化合物、すなわち式ほたは式 IIで示される化合物の合 成のための前駆体として使用できる化合物も提供する。当業者は、力かる前駆体を、 目的とする本発明の化合物の構造力 容易に設計することができ、その合成をするこ とができる。あるいはかかる前駆体は市販されているものを修飾することによって得る こともできる。本発明の化合物の前駆体としては、 BF— 223 (BF_224の前駆体）、 B F-226 (BF—227の前駆体）、 BF—246 (BF—247の前駆体）、 BF—251 (BF—252 の前駆体）、 BF-253 (BF— 254の前駆体）などが挙げられる。
[0045] これらの前駆体に標識、好ましくは放射性標識を付しておくことが好ましぐ PET用 化合物の合成には18 Fにて、 SPECT用化合物の合成には1231にて標識しておくこと が好ましレヽ。例えば、 BF— 223、 BF— 226、 BF— 251、 BF— 253を18 Fで標識してお レ、てもよく、 BF— 246を1231で標識してぉレヽてもよレヽ。
[0046] したがって、本発明は、
式ほたは IIの化合物を合成するための前駆体化合物；
BF-223、 BF— 226、 BF_246、 BF—251および BF— 253からなる群より選択され る上記前駆体化合物；ならびに
標識されている、好ましくは18 Fまたは1231で標識されている上記前駆体化合物 も提供する。なお、標識位置や方法については式ほたは IIの化合物の標識に関す る説明を参照のこと。
[0047] 本発明においては、アミロイド /3蛋白が蓄積する疾患における体内のアミロイド 蛋白（本明細書において「Α /3蛋白」または「Α /3」ともいう）にインビボにおいて特異 的に結合する式 Iの化合物またはその塩もしくは溶媒和物を、アミロイド /3蛋白が蓄 積する疾患の画像診断プローブとして使用する。本発明化合物により老人斑が鮮明 に染色される。本明細書における「Α βが蓄積する疾患」とは、 Α 蛋白の脳内蓄積 を主徴とする疾病をいい、 A 蛋白、すなわち老人斑をマーカーとして診断可能な疾 病としては、アルツハイマー病、ダウン症候群などがあげられる。
[0048] アミロイド 蛋白が蓄積する疾患の診断においては本発明化合物を標識したもの をプローブとして使用するのが一般的である。標識には、蛍光物質、ァフィ二ティー 物質、酵素基質、放射性核種等がある。アミロイド 蛋白が蓄積する疾患の画像診 断には通常、放射性核種で標識したプローブを使用する。当該分野においてよく知 られた方法により種々の放射性核種で本発明化合物を標識することができる。例え ば、 3H、 MC、 35S、 1311等は以前力 使用されている放射性核種であり、インビトロで の利用例が多い。画像診断プローブおよびその検出手段に求められる一般的要件 としては、インビボで診断できること、患者へのダメージが少ないこと（特に非侵襲的 であること）、検出感度が高いこと、半減期が適当な長さであること (標識プローブ調 製時間、診断時間が適当であること)等が挙げられる。そこで、最近では、高い検出 感度と物質透過性を示す γ線を利用した陽電子断層撮影法 (PET)または γ線放出 核種によるコンピューター断層撮影法（SPECT)が用いられるようになつてきた。この うち、 PETは、陽電子放出核種から正反対の方向に放射される 2本の γ線を 1対の 検出器により同時計数法により検出するので、解像力や定量性に優れた情報が得ら れるので好ましい。 SPECT用には99 mTc、 mIn、 67Ga、 201T1、 123Ι、 133Xe等の γ線 放出核種で本発明化合物を標識することができる。 "mTcおよび1231力 SSPECTによく 用いられている。 PET用には11 C、 13N、 15〇、 18F、 62Cu、 68Ga、 7¾r等の陽電子放 出核種で本発明化合物を標識することができる。陽電子放出核種のなかでも、半減 期が適当であること、標識しやすさ等の点から11 C、 13N、 150、 18Fが好ましぐ 18Fが 特に好ましい。放射性核種、例えば陽電子放出核種、 γ線放出核種等の放射線放 出核種での本発明化合物の標識位置は、式 I中のいずれの位置であってもよい。あ るいは環上の水素が陽電子放出核種、 γ線放出核種等の放射線放出核種で置換さ れてレ、てもよレ、。上述のごとく式 Iの化合物標識位置はレ、ずれの位置であってもよレ、 力 好ましい標識位置は化合物中のアルキル基および Ζまたはフヱニル環上である
。力かる標識された式 Iの化合物も本発明に包含される。例えば、本発明化合物を18
Fで標識する場合、側鎖のいずれかが18 Fで標識されていてもよぐあるいは環上の 水素が18 Fで置換されていてもよい。また例えば、 R— Rのいずれかに含まれる水素
1 5
を18 F等で置換してもよい。
一般的には、これらの核種はサイクロトロンまたはジェネレーターと呼ばれる装置に より産生される。当業者は、産生核種に応じた産生方法および装置が選択可能であ る。そのようにして産生された核種を用いて本発明化合物を標識することができる。
[0050] これらの放射性核種で標識された標識化合物の製造方法は当該分野にぉレ、てよく 知られている。代表的な方法としては、化学合成法、同位体交換法および生合成法 がある。化学合成法は従来から広く用いられており、放射性の出発物質を用いること 以外は通常の化学合成法と本質的に変わらない。この方法により種々の核種が化合 物に導入されている。同位体交換法は、簡単な構造の化合物中の3 H、 35S、 1251等を 複雑な構造の化合物中に移して、これらの核種で標識された複雑な構造の化合物を 得る方法である。生合成法は14 C、 35s等で標識した化合物を微生物等の細胞に与え てこれらの核種が導入された代謝産物を得る方法である。
[0051] 標識位置については、通常の合成と同様に合成スキームを目的に応じて設計する ことにより、所望位置に標識を導入することができる。かかる設計は当業者によく知ら れている。
[0052] また、例えば、比較的半減期の短レ、 "C、 13N、 15〇、 18F等の陽電子放出核種を用 いる場合、病院等の施設内の設置された (超)小型サイクロトロン力 所望核種を得て 、上記の方法により所望化合物を所望位置で標識して、即座に診断、検査、治療等 に使用することも可能となっている。
[0053] これらの当業者に公知の方法により、本発明化合物の所望位置に所望核種を導入 して標識することができる。
[0054] 本発明標識化合物の対象への投与は局所的であってもよぐあるいは全身的であ つてもよい。投与経路としては、皮内、腹腔内、静脈、動脈、または脊髄液への注射 または輸液等があるが、疾病の種類、使用核種、使用化合物、対象の状態、検査部 位等の要因により選択できる。本発明プローブを投与して、アミロイド /3蛋白への結 合および崩壊のための十分な時間経過後、 PET、 SPECT等の手段で検查部位を 調べることができる。これらの手段は、疾病の種類、使用核種、使用化合物、対象の 状態、検査部位等の要因に応じて適宜選択できる。
[0055] 放射性核種で標識された本発明化合物の用量は、疾病の種類、使用核種、使用 化合物、対象の年齢、身体的状態、性別、疾病の程度、検査部位等により様々であ る。特に、対象の被曝量については十分に注意する必要がある。例えば、 C, "Ν、 15〇、 18Fのごとき陽電子放出核種により標識された本発明化合物の放射能量は、通 常には、 3. 7メガべクレルないし 3. 7ギガべクレル、好ましくは、 18メガべクレルなレヽ し 740メガべクレルの範囲である。
[0056] また本発明は、本発明化合物を含む、アミロイド /3蛋白が蓄積する疾患の画像診 断用組成物を提供する。本発明組成物は、本発明化合物および医薬上許容される 担体を含む。組成物中の本発明化合物は標識されていることが好ましい。上記のご とき標識法は様々であるが、インビボでの画像診断用途には放射性核種 (特に11 C、 1 3N、 15〇、 18Fのごとき陽電子放出核種)で標識されていることが望ましい。本発明組 成物の形態は、その目的からすれば注射あるいは輸液可能な形態であることが好ま しい。したがって、医薬上許容される担体は液体であるものが好ましぐリン酸カリウム 緩衝液、生理食塩水、リンゲル液、蒸留水等のごとき水性溶媒、あるいはポリエチレ ングリコール、植物性油脂、エタノール、グリセリン、ジメチルスルホキサイド、プロピレ ングリコール等のごとき非水性溶媒があるが、これらに限らなレ、。担体と本発明化合 物との配合比率は、適用部位、検出手段等に応じて適宜選択できるが、通常には 10 万対 1ないし 2対 1の比率であり、好ましくは 1万対 1ないし 10対 1の比率である。また 、本発明組成物はさらに公知の抗菌剤（例えば、抗生剤等）、局所麻酔剤（例えば、 塩酸プロ力イン、塩酸ジブ力イン等）、バッファー（例えば、トリス—塩酸バッファー、へ ぺスバッファ一等）、浸透圧調節剤（例えば、グノレコース、ソルビトール、塩化ナトリウ ム等）等を含有してレ、てもよレ、。
[0057] さらに本発明は、本発明化合物を必須の構成成分として含む、アミロイド 蛋白が 蓄積する疾患の画像診断用キットを提供する。通常には、キットは、本発明化合物、 それを溶解する溶剤、バッファー、浸透圧調節剤、抗菌剤、局所麻酔剤等の各成分 を別個に、あるいはいくつかを一緒にしてそれぞれの容器に入れたものをひとまとめ にしたものである。本発明化合物は未標識であっても、標識されていてもよい。未標 識の場合、上で説明したような通常の方法により、使用前に本発明化合物を標識す ること力できる。また本発明化合物は凍結乾燥粉末等の固形として提供してもよぐあ るいは適当な溶媒中に溶解して提供してもよい。溶剤としては上述の本発明組成物 に用いる担体と同様のものであってよい。また、バッファー、浸透圧調節剤、抗菌剤、 局所麻酔剤等の各成分も上述の本発明組成物に使用するものと同様のものであつ てよい。容器は種々のものを適宜選択できるが、本発明化合物への標識導入操作に 適した形状とすることもでき、化合物の性質に応じて遮光性の材質のものとしてもよく 、あるいは患者への投与に便利なようにバイアル、または注射器等の形状とすること もできる。また、キットは診断に必要な器具類、例えば注射器、輸液セット、あるいは P ET装置に使用する器具類等を適宜含んでいてもよい。通常、キットには説明書を添 付する。
[0058] さらに、本発明化合物がアミロイド 蛋白に特異的に結合することから、本発明化 合物を未標識のまま、あるいは標識して、インビトロでのアミロイド 蛋白の検出、定 量等に使用することもできる。例えば、顕微鏡標本のアミロイド 蛋白染色、試料中 のアミロイド 蛋白の比色定量、あるいはシンチレーシヨンカウンターを用いたアミロイ ド ;3蛋白の定量等に本発明化合物を使用してもよレ、。
[0059] 先にも述べたように、コンゴ一レッドまたはチオフラビン S等ではアミロイド 蛋白お よび神経原線維変化の両方を染色するが、本発明化合物はアミロイド iS蛋白に特異 性が高い。したがって、本発明化合物は、例えば、アミロイド ;3蛋白蓄積性疾患の研 究あるいは生前または死後における診断等に有用であり、例えば、アルツハイマー 病患者脳の老人斑の染色剤として有用と考えられる。本発明化合物を用いた脳切片 の染色は通常の方法で行うことができる。さらに、コンゴ一レッドまたはチオフラビン S 等のごとき従来の多くの化合物ではびまん性老人斑を染色できなかった力 ァルツ ノ、イマ一病における老人斑の主成分であるアミロイド /3 (A /3 )蛋白は同病が発症す る (痴呆症状が顕性化する）かなり以前沙なくとも 10年以上前）に蓄積が始まると考 えられており、この初期の蓄積像がびまん性老人斑と考えられている。したがって、び まん性老人斑を早期に検出することにより、ァルツハーマー病の早期発見 ·診断が可 能になる。その点、実施例や図面に示すように、本発明の化合物はびまん性老人斑 も鮮明に染色するので、ァルツハーマー病の早期発見 ·診断にも極めて有用である
[0060] したがって、本発明は、本発明化合物またはその医薬上許容される塩もしくは溶媒 和物を含む脳試料中のアミロイド /3蛋白の染色用組成物、ならびに本発明化合物ま たはその医薬上許容される塩もしくは溶媒和物を必須の構成成分として含む、脳試 料中のアミロイド /3蛋白の染色用キット関する。さらに、本発明は本発明化合物また はその医薬上許容される塩もしくは溶媒和物を用いることを特徴とする脳試料中のァ ミロイド 蛋白の染色方法にも関する。
[0061] さらに上述のごとぐ シート構造をとつたアミロイド /3蛋白に神経細胞毒性がみら れることが判明している。力べして、本発明化合物は、蛋白自身が シート構造をとる ことによって病因、または病因の一部となる疾患、例えばアルツハイマー病の治療薬 になりうると考えられる。
[0062] したがって、本発明は、
式 (I)の化合物またはその塩もしくは溶媒和物を投与することを特徴とするアミロイド ;3蛋白蓄積性疾患の治療および/または予防方法；
式 (I)の化合物またはその塩もしくは溶媒和物を用いることを特徴とするアミロイド β 蛋白蓄積性疾患の診断方法；ならびに
アミロイド iS蛋白蓄積性疾患の治療、予防、または診断するための組成物を製造す るための式 (I)の化合物またはその塩もしくは溶媒和物の使用
を提供する。
[0063] 蛋白の /3シート構造が病因または病因の一部となる疾患としては、例えば、ァルツ ハイマー病やダウン症候群等が挙げられる。
[0064] 力かる医薬組成物の形態は特に限定されないが、液体処方が好まし 特に注射 用処方が好ましい。力かる注射用処方を脳内に直接注入することもでき、あるいは、 実施例 3にて示すように本発明化合物は血液/脳関門透過性が高いので、上記医 薬組成物を静脈注射または静脈点滴用に処方して投与することもできる。かかる液 体処方の調製は当該分野にて公知の方法で行うことができる。溶液の調製は、例え ば、本発明化合物を適当な担体、注射用水、生理食塩水、リンゲル液等に溶解し、 フィルタ一等で滅菌し、その後、適当な容器、例えば、ノ ィアルまたはアンプルに充 填する。また、溶液を凍結乾燥させ、使用時に適当な担体で再度溶液に復元するこ とも可能である。懸濁液の調製は、例えば、本発明化合物を例えばエチレンォキサイ ドにさらすことにより滅菌し、次いで、滅菌済み液体担体懸濁することにより行うことが できる。
[0065] 本発明化合物の投与量は、患者の病状、性別、年齢、体重等に左右されるが、一 般的には、体重 70kgの成人の場合、 1日あたり 0. lmgないし lg、好ましくは lmgな レ、し 100mg、より好ましくは 5mgないし 50mgである。一定期間かかる投与量で処置 を行レ、、結果により投与量を増減することができる。
[0066] さらに上述のごとぐ本発明化合物のうち、式 IIで示される化合物またはその塩もし くは溶媒和物はタウ蛋白に対する特異性が高ぐ神経原線維変化を認識するプロ一 ブ、あるいは神経原線維変化の染色剤として使用することができる。したがって、本 発明は、神経原線維変化の画像診断プローブとして使用される式 IIの化合物または その塩もしくは溶媒和物を提供する。
[0067] したがって、本発明は、
式 IIの化合物またはその塩もしくは溶媒和物を用いることを特徴とする神経原線維 変化を検出あるいは染色する方法；ならびに
神経原線維変化を検出あるいは染色するための組成物を製造するための式 IIの化 合物またはその塩もしくは溶媒和物の使用
を提供する。
[0068] 上記の神経原線維変化の検出または染色に用いられる好ましい本発明の式 IIの化 合物は BF— 221である。また、 BF_239、 BF— 240および BF— 255も神経原線維変 化に対する選択性が高い。
[0069] さらに本発明の化合物、すなわち式ほたは IIで示される化合物、その塩もしくは溶 媒和物はコンフオメーシヨン病の診断プローブとして、好ましくは、放射線放出核種に て標識された画像診断プローブとしても使用できる。さらに本発明の化合物はコンフ オメーシヨン病の治療および Zまたは予防にも効果を有する。したがって、本発明は コンフオメーシヨン病の診断用プローブとして使用される式ほたは IIの化合物また はその塩もしくは溶媒和物；
式ほたは IIの化合物またはその塩もしくは溶媒和物を含むコンフオメーシヨン病の 画像診断用組成物またはキット；
式ほたは IIの化合物またはその医薬上許容される塩もしくは溶媒和物および医薬 上許容される担体を含有する、コンフオメーシヨン病の予防および/または治療用医 薬組成物；
式ほたは IIの化合物またはその医薬上許容される塩もしくは溶媒和物を用いること を特徴とする、コンフオメーシヨン病の診断方法；
コンフオメーシヨン病を診断するための、式ほたは IIの化合物またはその医薬上許 容される塩もしくは溶媒和物の使用；
式ほたは IIの化合物またはその医薬上許容される塩もしくは溶媒和物を対象に投 与することを特徴とする、コンフオメーシヨン病の予防および/または治療方法；なら びに
コンフオメーシヨン病を予防および/または治療するための、式ほたは IIの化合物 またはその医薬上許容される塩もしくは溶媒和物の使用
にも関する。
[0070] コンフオメーシヨン病には、アルツハイマー病（老人斑、神経原線維変化）、レビー 小体病、パーキンソン病、ハンチントン病、球脊髄性筋萎縮症、歯状核'淡蒼球ルイ 体萎縮症、脊髄小脳変性症、 Machado-Joseph病、筋萎縮性側索硬化症、ダウン症 候群、進行性核上性麻痺、ピック病、 FTDP-17 (Frontotemporal Dementia and Parkinsonism Linkea to し nromosome 17)、 LNTD (Limbic Neurofibrillary Ί angle Dementia)、スダン好性白質萎縮症、アミロイドアンギオパチイ等が包含される。
[0071] 本発明の化合物は公知の物質、例えば市販物質から、公知の方法により合成する こと力できる。 目的とする本発明の化合物に応じて当業者は適宜、出発物質や合成 方法を選択することができる。以下に本発明の化合物である、 BF_185、 BF— 196、 BF— 197、 BF— 214、 BF— 225、 BF— 227、 BF— 215、 BF— 228の合成例を示す。
[0072] BF-185 の合成
[化 11]
Figure imgf000033_0001
y.88% y.quant.
Figure imgf000033_0002
y.95%
y.95%
LiOH.H20
Figure imgf000033_0003
y.85% y.82%
Figure imgf000033_0004
rt 3h y.quant. y.86%
Figure imgf000033_0005
10
y.68%
2の合成
l (5g、 30mmol)および (Boc) 0 (9. 9g、 45mmol)にテトラヒドロフラン（10ml)をカロ 一 2
え、 60°Cで 15時間攪拌した。反応液の溶媒を減圧留去し、得られた結晶を酢酸ェ チル Zn—へキサンより再結晶して £ (7g、 88%)を無色結晶として得た。
m. p. : 149-151°C
の合成
2 (2. 9g、 l lmmol)のテトラヒドロフラン（30ml)溶液をアルゴン雰囲気下
一 60。Cに冷却し t_ブトキシカリウム（1. 5g、 13mmol) /テトラヒドロフラン（10ml)を 1 5分要し滴下し、同温度で 1時間攪拌した。— 20°Cに昇温しヨウ化メチル（2. 37g、 1 7mmol)のテトラヒドロフラン（10ml)溶液を 5分要し滴下し一 20°C—室温で 1時間攪 拌した。反応液に酢酸ェチル、水を加え有機層を分取した。有機層は、飽和食塩水 で洗浄後、乾燥して、溶媒を留去し、 3 (3. lg)を油状物として得た。本品は、そのま ま、次工程に用いた。
4の合成
3 (3. lg、 l lmmol)のテトラヒドロフラン（50ml)溶液に水素化ホウ素ナトリウム（4. 2 g、 l lOmmol)を加え 50°Cに加温しメタノール（18ml、 440mmol)を 1時間要し滴下 した。反応液を氷冷しアセトン（22ml)を 5分で滴下し、同温度で 30分攪拌した。反 応液の溶媒を減圧留去し、残渣に酢酸ェチル、水を加え、有機層を分取した。有機 層は、水、飽和食塩水で洗浄後、乾燥して、溶媒を留去し、残渣をシリカゲルカラムク 口マトグラフィー（溶出溶媒： n—へキサン/酢酸ェチル =4 : 1一 1： 1)で精製し 4 (2. 5 g、 95%)を油状物として得た。
APCI-MS m/z : 255 [M+NH ]+
4
5の合成
4 (2. lg、 9mmol)の塩化メチレン（25ml)溶液に二酸化マンガン（3. 9g、 45mmol )を加え室温で 18時間攪拌した。不溶物をろ別し、ろ液を減圧濃縮し残渣をシリカゲ ルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒: n—へキサン/酢酸ェチル =4： 1)で精製し互 (2 g、 95%)を油状物として得た。
APCI-MS m/z : 253 [M+NH ]+
4
6の合成
5 (1. 5g、 6. 4mmol)のテトラヒドロフラン（10ml)溶液にトリェチル 4—フォスフオノク ロトネート（2. 4g、 9. 6mmol) /テトラヒドロフラン（2ml)、合成ゼォライト A—4ビーズ（ 8g)、水酸化リチウム 1水和物（0. 4g、 9. 6mmol)を加え 18時間加熱還流した。反 応液を氷冷後、セライトろ過しろ液を減圧濃縮し残渣に酢酸ェチル、水を加え、有機 層を分取した。有機層は、水、飽和食塩水で洗浄後、乾燥して、溶媒を留去し、残渣 をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒: n—へキサン/酢酸ェチル = 6： 1)で 精製し旦（1. 8g、 85%)を油状物として得た。
IR (Neat) 2977、 2932、 1703、 1625cm"1
APCI-MS m/z : 349[M+NH ]+
4
Zの合成 6 (1. 8g 5. 4mmol)のエタノール（10ml)溶液を氷冷し、 4N 水酸化ナトリウム溶 液（2ml 8mmol)をカ卩え、室温で 3時間攪拌した。反応液の溶媒を減圧留去し残渣 に水 40mlを加え溶解しジェチルエーテル 40mlにて洗浄し、水層を 5%クェン酸で P H4— 5に調整した。生じた固体をろ取、水洗後、減圧乾燥した。固体を酢酸ェチル Zn-へキサンより再結晶して Z(l. 3g 82%)を黄色結晶として得た。
m. p. : 172— 174 C IR (Nujol) 2566 1709 1679cm"1
APCI-MS m/z : 302[M-H]"
8の合成
7 (0. 77g 2. 5mmol)のジメチルホルムアミド（15ml)溶液に WSC 'HC1 (0. 59g 3. 0mmol)、 H〇BT (0. 4g 3. Ommol)を加え、室温で 18時間攪拌した。反応液 に 2—ァミノフエノール（0· 83g 7. 6mmol)のジメチルホルムアミド（5ml)溶液を加 え、室温で 3時間攪拌した。反応液に酢酸ェチル、水を加え有機層を分取した。有機 層は、水、飽和食塩水で洗浄後、乾燥して、溶媒を留去し、残渣をシリカゲルカラムク 口マトグラフィー（溶出溶媒： n キサン/酢酸ェチル =4 : 1-2 : 1)で精製し旦（1. 0 g 100%)を固体として得た。
APCI-MS m/z : 395[M+H]+
9の合成
8 (0. 98g 2. 5mmol)のテトラヒドロフラン（20ml)溶液にジイソプロピルァゾジカル ボキシレート（0. 60g 3. Ommol)、トリフエ二ノレホスフィン（0. 78g 3. Ommol)を 加え 60°Cで 5時間攪拌した。反応液の溶媒を減圧留去し残渣をシリカゲルカラムクロ マトグラフィー（溶出溶媒: n キサン/酢酸ェチル = 10： 1-6 : 1)で精製し、得られ た結晶を酢酸ェチル Zn キサンより再結晶して £(0. 81g 86%)を橙色結晶とし て得た。
m. p. : 123— 124 C IR (Nujol) 1694 1629cm—1
APCI-MS m/z : 377[M+H]+
inの合成
9 (0. 70g 1. 9mmol)の塩化メチレン（15ml)溶液を氷冷し、トリフルォロ酢酸（2. 5ml)をカ卩え、同温度で 1時間攪拌した。反応液を 10%炭酸カリウム水溶液（50ml) に注ぎ 5分攪拌後、酢酸ェチル 50mlをカ卩ぇ有機層を分取した。有機層は、水、飽和 食塩水で洗浄後、乾燥して、溶媒を留去し酢酸ェチル Zn—へキサンで再結晶して 1 0 (0. 35g、 68%)を赤色結晶として得た。
m. p. : 143— 144。C、 IR (Nujol) 3330、 3292、 1583cm—1
APCI-MS m/z : 277[M+H]+
[0073] BF- 196 ( )の合成
[化 12]
Figure imgf000036_0001
ll(411mg, 2.75mmol)および文献法1)により合成した 12(430mg， 2.75mmol)のジメチル スルホキシド (3 ml)溶液に、室温撹拌下 50%(w/w)水酸化ナトリウム水溶液 (1.0 ml)を 加え、室温で 1時間撹拌した。反応液に水を加え、室温で 15分撹拌し、析出物をろ取
、水洗した。粗結晶をエタノールで再結晶し、 13(554mg, 70%)を黄色結晶として得た m.p. ： 158— 160。C、 IR (Nujol) 1606, 1559 cm—1, APCI-MS m/z:288 [M+H]+ 1) Boga, C, Vecchio, E. D., Forlani, L., Todesco, P. E.; J. Organomet. Chem., 2000, 601， 233.および
Sawhney, I" Wilson, J. R. H.; J. Chem. Soc. Perkin Trans. 1, 1990， 329.
[0074] BF- 197 ( )の合成
[化 13]
2
Figure imgf000036_0002
14(426mg, 3.20mmol)および文献法1)により合成した 12(500mg， 3.20mmol)のジメチル スルホキシド (3 ml)溶液に、室温撹拌下 50%(w/w)水酸化ナトリウム水溶液 (1.2 ml)を 加え、室温で 1時間撹拌した。反応液に水を加え、室温で 15分撹拌し、析出物をろ取
、水洗後、減圧乾燥した。粗結晶をエタノールで再結晶し、 15(529mg, 61%)を黄色結 晶として得た。
m.p.： 183— 185°C、 IR (Nujol) 1629, 1581 cm APCI-MS m/z:272 [M+H] 1 ) Boga, C , Vecchio, E. D. , Forlani,し. , Todesco, P. E. ; J. Organomet. Chem. 2000, 601， 233.および
Sawhney, I. , Wilson, J. R. H. ; J. Chem. So Perkin Trans. 1 , 1990， 329.
BF- 214 (IS)の合成
[化 14]
Figure imgf000037_0001
12
IIの合成
ジイソプロピルアミン (0.60ml, 4.23mmol)のテトラヒドロフラン (10 ml)溶液に
雰囲気下、 -60°C以下で 1.5M n-ブチルリチウム/ n-へキサン溶液 (2.81ml， 4.23mmol) を滴下し、除々に 0°Cまで昇温した。次に- 70°C以下で 16(0.52ml, 4.23mmol)のテト ラヒドロフラン (6 ml)溶液を滴下し、 - 78°Cで 1時間撹拌した。同温で、文献法 ϋにより合 成した 12(600mg, 3.84mmol) )のテトラヒドロフラン (5 ml)溶液を滴下し、同温で 30分、 0 °Cで 30分、室温で 1時間撹拌した。反応液に冷水を加え、酢酸ェチルで抽出した。抽 出液を水洗後、乾燥し、溶媒を減圧留去した。残さをシリカゲルカラムクロマトグラフィ 一 (n-へキサン/酢酸ェチル =4/1一 3/1)で精製し、得られた結晶に n-へキサンを加え て粉碎し、 17(463mg, 46%)を淡黄色結晶として得た。
m.p.： 107— 112。C、 IR (Nujol) 3150, 1649, 1578 cm-1, APCI-MS m/z:268
[M+H]+
1 ) Boga,し. , Vecchio, E. D. , Forlani, L. , Todesco, P. E. ; J. Organomet. Chem. , 2000, 601， 233.および
Sawhney, I. , Wilson, J. R. H. ; J. Chem. So Perkin Trans. 1 , 1990， 329.
の合成
17(463mg, 1.73mmol)のジクロロメタン (10 ml)溶液にトリェチルァミン (1.06ml, 7.62mmol)を加え、氷冷撹拌下、メタンスルホユルク口ライド (0.29ml, 3.81mmol)を滴下 し、同温で 10分、室温で 1時間撹拌した。反応液に冷水を加え、酢酸ェチルで抽出し た。抽出液を水洗後、乾燥し、溶媒を減圧留去した。残さをシリカゲルカラムクロマト グラフィー (n -へキサン/酢酸ェチル =5/1— 2/1)で精製後、酢酸ェチル /n -へキサン で再結晶し、 18(254mg, 59%)を黄色結晶として得た。
m.p.： 164— 166°C、 IR (Nujol) 1623, 1573， 1549 cm"1, APCI-MS m/z:250
[M+H]+
[0076] BF-225 の合成
[化 15]
^r-NH2 + oHc^ —— - OH S八剛 YNy- S i剛
12 19
文献法1)により合成した 12 (640mg, 4.1mmol)と 2—ァミノフエノール (469mg, 4.3mmol)を 外温 150°Cで無溶媒で 1時間攪拌した。反応液を室温まで冷却後、ジォキサン 40mlと 二酸化マンガン (3.56g, 41mmol)を加え 100°Cで 1時間攪拌した。反応液を熱時セライ ト濾過し、温テトラヒドロフランで洗浄した。濾液を減圧濃縮し残渣をシリカゲルカラム クロマトグラフィー（酢酸ェチル -へキサン =4 I 6)で精製した後、酢酸ェチル /n- へキサンで再結晶し、 19(352mg, 35%)を結晶として得た。
m.p.： 160— 161°C、 IR (Nujol) 1625, 1565 cm— APCI-MS m/z:246 [M+H]+ 1) Boga, C, Vecchio, E. D.， Forlani,し， Todesco, P. E.; J. Organomet. Chem., 2000, 601， 233.および
Sawhney, I., Wilson, J. R. H.; J. Chem. So Perkin Trans. 1， 1990, 329.
[0077] BF_227 ( )の合成
[化 16]
Figure imgf000038_0001
£1の合成
文献法 2)により合成した 20(14.7g, 98mmol)をジメチルホルムアミド (80 ml)に溶解し、氷 冷撹拌下 60%水素化ナトリウム（4.7g， 118mmol)を数回に分けて加え、クロロメチノレメ チルエーテル (lO.Og, 124mmol)を滴下し、室温で 2時間撹拌した。反応液に冷水を加 え、酢酸ェチルで抽出した。抽出液を水洗後、乾燥し、溶媒を減圧留去した。残さを 減圧蒸留して 21(16.7g, 84%)を無色油状物として得た。
b.p： 133— 134。C(7mmHg)、 IR (Neat) 1619 cm— APCト MS m/z: 194 [M+H]+
2) Fujita, . , Koyama, K. , Inagaki, Y. ; ynthesis, 1982， 68.
^の合成
21(3.18g, 16.46mmol)および文献法 ϋにより合成した 12 (2.57g, 16.46mmol)をジメチル スルホキシド (18 ml)に溶解し、室温撹拌下 50%(w/w)水酸化ナトリウム水溶液 (6.0 ml) を加え、室温で 18時間撹拌した。反応液に飽和塩化アンモニゥム水溶液（ 20ml)、水 を加え、酢酸ェチルで抽出した。抽出液を水洗後、乾燥し、溶媒を減圧留去した。残 さを酢酸ェチル /n-へキサンで再結晶し、 22(4.04g, 74%)を橙色結晶として得た。 m.p.： 112— 113。C、 IR (Nujol) 1625, 1567 cm— APCI- MS m/z: 332 [M+H]+ 1 ) Boga, C , Vecchio, E. D. , Forlani, L. , Todesco, P. E. ; J. Organomet. Chem. , 2000, 601， 233.および
Sawhney, I. , Wilson, J. R. H. ; J. Chem. So Perkin Trans. 1 , 1990， 329.
の合成
3) 22(2.53g, 7.63mmol)のジクロロメタン (25 ml)溶液に、氷冷撹拌下、トリフルォロ酢 酸 (17.5 ml)を滴下し、室温で 40分撹拌した。反応液を、飽和炭酸水素ナトリウム水溶 液で pH 9とし、酢酸ェチルで抽出した。抽出液を水洗後、乾燥し、溶媒を減圧留去 した。残さをシリカゲルカラムクロマトグラフィー (酢酸ェチル)で精製後、酢酸ェチル /n -へキサンで再結晶し、 23(1.63g, 74%)を黄色結晶として得た。
m.p.： 263— 264°C、 IR (Nujol) 1625, 1575 cm APCI-MS m/z:288 [M+H]+ の合成
4) 23(800mg, 2.78mmol)、 2-フルォロエタノール (0.359ml, 6.13mmol)およびトリフエ ニルホスフィン (1.607g, 6.13mmol)をテトラヒドロフラン (20 ml)に懸濁し、室温撹拌下、 ボキシレート (1.206ml， 6.13mmol)を滴下し、室温で 17時間 撹拌した。反応液の溶媒を減圧留去し、残さをァミンシリカゲルカラムクロマトグラフィ 一 (クロマトレックス (登録商標) NH) (トルエン)で精製後、酢酸ェチル /n -へキサンで再 結晶し、 24(600mg,65%)を黄色結晶として得た。
m.p.： 151— 153°C、 IR (Nujol) 1631 , 1567 cm APCI-MS m/z:334 [M+H]+ BF_215 ( i)の合成
[化 17]
Figure imgf000040_0001
Figure imgf000040_0002
の合成
300mlの反応容器にアルゴン気流下、 DCC 16.5g (0.08mol)、乾塩化メチレン 160 mlを仕込み、室温で N-ァセチルグリシン（25) 9.4g (0.08mol)を加えた。
1時間室温で強撹拌した後、ジメチルァミン（2M in THF) 40ml (0.08mol)を 5分間で 滴下した。その後、室温で 21時間撹拌させた。反応混合物をろ過し、不溶物を除去し た。溶媒留去後、残渣に酢酸ェチルをカ卩えて析出した不溶物をろ過して除き、再度 溶媒留去し、 8.52gの 2-ァセチルァミノ- Ν,Ν-ジメチルァセトアミド（26)を得た。このも のをこのまま次工程に用いた。
収率 73.6%
1の合成
200mlの反応容器にアルゴン気流下、トリフエニルホスフィン 10.9g (0.042mol)、乾 塩化メチレン 87mlを仕込み、室温で臭素 2.13ml (0.042mol)の乾塩化メチレン 18m 1溶液を 10分間で滴下した。滴下後、 40分同温で撹拌させた後、 Triethylamine 14. 4ml、 2-Acetylamino-N,N-dimethylacetamide (26) 5.0g (0.035mol)の乾塩化メチレ ン 35ml溶液を一度に加えた。その後、 1時間加熱還流させ、室温に戻して 3時間撹 拌させた。反応混合物に n—へキサン 140mlをカ卩え、析出した結晶をろ過して除いた 。ろ液を減圧濃縮し、残渣を減圧蒸留して 1.8gの 5-ジメチルァミノ- 2-メチルォキサゾ ール (27)を得た。
収率 40.8%
^の合成
50mlの反応容器にアルゴン気流下、ジイソプロピルアミン 1.6g (0.016mol)、乾 THF20mlを仕込み、 _60°Cに冷却した。 _50°C以下で n_ブチルリチウムへキサン溶 液（1.58mol/L) 10.2mlを 10分間で滴下した。 15分間撹拌後、 _65°C以下で 5_ジメチ ルァミノ- 2_メチルォキサゾール（27) l.Og (0.0079mol)の乾 THF6ml溶液を 45分間 かけて滴下した。滴下後、 25分間撹拌し、クロ口リン酸ジェチルエステル 1.4.g ( 0.0081mol)を _65°C以下で 25分かけて滴下した。 その後、同温で 1時間撹拌した。 反応混合物に水 20mlをカ卩え、酢酸ェチル抽出、飽和食塩水洗浄し、無水硫酸ナトリ ゥムにて乾燥後、溶媒留去し、 1.72gの 5-ジメチルァミノ- 2- [(ジエトキシホスフィエル) メチル] -ォキサゾール（28)を得た。このものをこのまま次工程に用いた。
収率 83.0%
^の合成
300mlオートクレーブに 2-メチルベンゾォキサゾール（14) 57.0g (0.428mol)，N，N-ジ メチルホルムアミドジメチルァセタール 66.3g (0.556mol)、乾 DMF62.6gを仕込み 、アルゴンガス充填し、 72時間 140°Cで加熱撹拌させた。反応混合物を冷却後、氷 水 500mlに注カ卩し、酢酸ェチル抽出、水洗、無水硫酸ナトリウム乾燥後、溶媒留去し た。得られた残渣を n -へキサンにて洗浄し、 57.7gの（2-ベンゾォキサゾール _2 -ィル -ェテュル） -ジメチルァミン（29)を得た。
収率 71. 6%
の合成
300ml反応容器に（2-ベンゾォキサゾール -2-ィル-ェテュル） -ジメチルァミン（29) 6 .22g (0.033mol)、 THF80mlを仕込み、水 80mlを力 Qえた。これを 10°C以下に冷却 し、過ヨウ素酸ナトリウム 21.2g (0.099mol)を加えた。 10分間同温にて撹拌した後、 室温に戻して 2時間撹拌した。反応混合物を水 300mlに注加し、不溶物をろ過して 除去した。有機層を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和食塩水で洗浄し、無水硫 酸マグネシウムにて乾燥後、溶媒留去した。得られた残渣を n-へキサン/酢酸ェチル = 1/1にてシリカゲルカラム精製し、 0.90gのべンゾォキサゾール -2-カルボアルデヒ ド (30)を得た。
収率 18.5%
iの合成
200ml反応容器に アルゴン気流下 5-ジメチルァミノ- 2- [(ジエトキシ-ホスフィニル) メチル] -ォキサゾール（28) 1.61g (0.0061mol)、乾 THF70mlを仕込み、 60%水素 化ナトリウム（油中） 0.245g (0.0061mol)を 10分間かけて添カ卩した。 30分間撹拌した 後、ベンゾォキサゾール -2-カルボアルデヒド（30) 0.9g (0.0061mol)を 15分間かけて 添加した。その後、 12時間撹拌させた。反応混合物を氷水に注加し、酢酸ェチルに て抽出、飽和食塩水洗浄し、無水硫酸ナトリウムにて乾燥後、溶媒留去した。残渣を n -へキサン/酢酸ェチル = 1/1にてシリカゲルカラム精製し、 620mgの一次精製品を 得た。
収率 39.8%
これを n-へキサンにて懸濁洗浄して 350mgの 2-[2_ (5 -ジメチルァミノォキサゾール -2-ィル） -ェテュル]-ベンゾォキサゾール（31) を得た。
収率 22.5%
BF-228( )の合成 [化 18]
Figure imgf000043_0001
の合成
100mlの反応容器にアルゴン気流下、ジイソプロピルアミン 4.56g (0.045mol)、 乾 THF15mlを仕込み、 _70°Cに冷却した。 _50°C以下で n_ブチルリチムへキサン 溶液（1.58mol/L) 28.5ml (0.045mol)を 15分間で滴下した。 80分間撹拌後、 -65°C 以下で 2,4,5-トリメチルォキサゾール（16) 2.5g (0.022mol)の乾 THF 50ml溶液を 3 0分間かけて滴下した。滴下後、 30分間撹拌し、クロ口リン酸ジェチルエステル 3.98 •g (0.023mol)を- 60°C以下で 30分かけて滴下した。その後、同温で 1時間撹拌した。 反応混合物に水 25mlを加え、酢酸ェチル抽出、飽和食塩水洗浄し、無水硫酸ナトリ ゥムにて乾燥後、溶媒留去し、 2.86gの 4,5-ジメチル -2- [(ジエトキシホスフィエル)メ チル] -ォキサゾール (32)を得た。
(純度 80%)
このものをこのまま次工程に用いた。
収率 42.1 % (純度換算）
Mの合成
500ml反応容器にアルゴン気流下 4，5 -ジメチル- 2_ [(ジエトキシホスフィニル)-メチル トォキサゾール 2.5g (0.0081mol :純度換算）、乾 THF70mlを仕込み、 60% 水素 化ナトリウム（油中） 0.323g (0.0081mol)を 10分間かけて添カ卩した。 10分間撹拌し た後、 4-ジメチルアミノシナムアルデヒド（33) 1.42g (0.0081mol)を 10分間かけて添 カロした。その後、 2時間撹拌させた。反応混合物を氷水に注加し、酢酸ェチルにて抽 出、飽和食塩水洗浄し、無水硫酸ナトリウムにて乾燥後、溶媒留去した。残渣を n-へ キサン/酢酸ェチル = 10/1→5/1にてシリカゲルカラム精製し、 940mgの一次精製 品を得た。
収率 43.2%
これを n-へキサンにて懸濁洗浄して 510mgの 4，5-ジメチル _2-{4-(4 -ジメチルァミノ フエニル) -ブタ -1,3-ジェニル}ォキサゾール（34)を得た。
収率 23.5%
次に本発明化合物のスクリーニング方法について説明する。本発明化合物のなか にはチオフラビン T法では蛍光波長がチオフラビン Tと重なるためにスクリーニングが 不可能なものがあった。それらの化合物については以下の新規スクリーニングを導入 した。
(1)アミロイド 蛋白（ペプチド研より購入）はリン酸緩衝液 (ρΗ7· 4)で溶解し 37°C で 4日間放置した。
(2)同緩衝液に溶解したコンゴ一レッド 50 μ 1を 96穴マイクロプレートに分注した（ 最終濃度 0. 1 μ Μ)。
(3)アミロイド /3蛋白 100 μ 1ずつを添加（最終濃度 5 μ Μ)し、 30分間放置した。
(4)同緩衝液に溶解した被験化合物を 100 μ 1ずつ添加（最終濃度 10マイクロ Μ) し、 60分間放置した。
(5)蛍光マイクロプレートリーダー（モレキュラーデバイス社製、 fmax)を用いて、あ らかじめ測定してあった、最適励起および測定波長で測定した。
(6)被験化合物とアミロイド /3蛋白とコンゴ一レッド共存下の蛍光度を A、被験化合 物とコンゴ一レッド共存下のそれを B、被験化合物とアミロイド /3蛋白共存下のそれを C、被験化合物単独のそれを Dとすると被験化合物の β構造認識度は以下の式で算 出した。
被験化合物 /3構造認識度（％) = { (Α-Β) / (C-D) } X 100
(7)この β構造認識度が大きいほど被験化合物はアミロイド ;3蛋白に対する結合特 異性が高いといえる。
[0081] 次に発明化合物のアルツハイマー病患者脳切片上での染色性試験について説明 する。
(1)病理学的にアルツハイマー病と確定診断された患者および正常高齢者の、側 頭葉または海馬における脳標本を使用した。標本は共同研究先である福祉村病院 力も提供を受け、患者遺族から研究目的での使用に対する承諾を得てレ、る（ビーェ フ研究所倫理委員会許可 No. RS— 99一 02)。
(2)パラフィン包埋された脳組織は厚さ 6 μ ΐηあるいは 8 / mで薄切し、スライドダラ ス上に伸展、乾燥させた。パラフィン脳切片はキシレン 10分 X 2、 100%エタノール 1 5分 X 2、 95%エタノール 分 X 2、流水洗 10分の順で脱パラフィン化した。
(3)本発明化合物による染色の前処理として、リポフスチンによる自己蛍光を除去 する処置を行った。はじめに、脱パラフィン化した切片を 10%ホルマリン溶液に 60分 間浸漬し、 PBSで 5分間洗浄した後、 0. 25% KMnO溶液に 90分間浸漬した。 PB
4
Sにて 2分間 X 2回洗浄した後、 0. 1 % K S O /シユウ酸溶液中に約 30秒間浸し、
2 2 5
さらに PBSにて 2分間 X 3回洗浄を行った。
(4) 50%エタノールに溶解した 100 μ M本発明化合物溶液を約 150 μ 1滴下し、 1 0分間反応させた。水道水中に 5回つけた後、 50%エタノールに 3— 5回つけて速や かに分別を行レ、、その後 PBSに 60分間浸漬した上、 Fluor Save
Reagent(Calbiochem)で封入し、蛍光顕微鏡（Nikon,Eclips E800)を用いて鏡検した。 画像はデジタルカメラ（Plaroid PDMCII)にて撮影した。
[0082] 免疫染色は以下のように行った。
(a)アミロイド 蛋白の免疫染色方法：
(1)脱パラフィン後、蒸留水中で 2分 X 2で洗浄を行レ、、ィムノペンにより組織を囲 んだ後、蟻酸を約 150 μ ΐ滴下し、室温で 5分間静置した。水道水で 5分間洗浄した 後、冷 PBS_Tween20に 2分間浸漬し、その後、 0. 05%トリプシン溶液を約 150 μ 1 滴下して、 37°C、 15分間反応させた。
(2)氷浴中、冷 PBS— Tween20で 5分間 X 2回洗浄した後、ブロッキング用血清を 2滴滴下して、 37°C、 30分間反応させ、余分な水分を除去した後に、アミロイド 蛋 白の特異抗体である 6F/3D (DAKO社、 1： 50希釈）を約 150 μ 1滴下して、 37。C、 1時間反応させた。
(3)さらに冷 PBS_Tween20で 2分間 X 5回洗浄した後、抗マウス IgG (H + L)、ャ ギ、ピオチン結合溶液を 2滴滴下して 37°C、 1時間反応させ、冷 PBS— Tween20で 2分間 X 3回洗浄した上で ABC溶液（ストレプトアビジンービォチン一ペルォキシダー ゼ複合体溶液）を 2滴滴下して、 30分間静置した。再び、冷 PBS— Tween20で 2分 間 X 3回洗浄した後、 DAB溶液（20mlの 0. 05molZlトリス塩酸緩衝液に DAB 10 mgを溶解し、使用直前に 3%過酸化水素水 100 μ ΐを添加）を約 150 μ ΐ滴下して、 十分な発色を得たのち、蒸留水で 1分間洗浄し、反応を停止させ、封入後、鏡検した (b)神経原線維変化の免疫染色方法
(1)神経原線維変化の免疫染色は以下のように行った。脱パラフィン後、蒸留水中 で 2分 X 2で洗浄を行レ、、ィムノペンにより組織を囲んだ後、 3%過酸化水素水（メタノ ールで希釈）を約 150 μ 1滴下し、室温で 10分間静置した。
(2)冷 PBS_Tween20に 5分間 X 2回洗浄した後、ブロッキング用血清を 2滴滴下して 、 37°C、 30分間反応させた。余分な水分を除去した後に、リン酸化タウの特異抗体で ある pSer422 (Wako Phosphorylated Tau Immunohistostain Kit 299-57301)を 2滴滴 下して、 4°C、 1晚反応させた。
(3)翌日、冷 PBS_Tween20で 2分間 X 5回洗浄した後、抗ゥサギ IgG,ャギ，ピオチン 結合溶液を 2滴滴下して 37°C、 1時間反応させ、冷 PBS-Tween20で 2分間 X 3回洗浄 した上で ABC溶液（ストレプトアビジンービォチン一ペルォキシダーゼ複合体溶液）を 2 滴滴下し、 30分間静置した。
(4)再び、冷 PBS_Tween20で 2分間 X 3回洗浄した後、 DAB溶液（20mlの 0.05mol/l トリス塩酸緩衝液に DAB lOmgを溶解し、使用直前に 3%過酸化水素水 100 μ ΐを添加） を約 150 μ 1滴下して、十分な発色を得たのち、蒸留水で 1分間洗浄し、反応を停止さ せ、封入後、鏡検した。なおブロッキング用血清、抗ゥサギ IgG,ャギ，ピオチン結合 溶液、 ABC溶液は Phosphorylated Tau Immunohistostain Kit (Wako 299-57301)に含 まれるものを使用した。 [[00008844]] 以以下下にに本本発発明明化化合合物物のの特特性性にに関関すするる試試験験方方法法をを説説明明すするる。。
((AA))急急性性毒毒性性試試験験
本本発発明明化化合合物物のの急急性性毒毒性性ををママウウススをを用用いいてて静静脈脈内内投投与与でで検検討討ししたた。。 CCrrjj :: CCDD11系系 雄雄性性ママウウススをを一一群群 44匹匹ととししてて使使用用ししたた（（各各群群のの平平均均体体重重はは 3311—— 3322ggででああっったた））。。各各化化 合合物物はは IINN HHCC11、、ポポリリエエチチレレンンググリリココーーノノレレ 440000、、蒸蒸留留水水のの混混合合液液にに溶溶解解、、ままたたはは DDMM SS〇〇にに溶溶解解後後、、蒸蒸留留水水ににてて希希釈釈しし、、尾尾静静脈脈をを介介ししてて投投与与しし、、以以後後 77日日ままでで観観察察ししたた。。
[[00008855]] ((BB))脳脳移移行行試試験験
脳脳移移行行性性のの測測定定はは下下記記のの手手順順にによよっったた。。
ママウウススにに本本発発明明化化合合物物をを静静脈脈内内投投与与しし、、イインンビビボボににおおけけるる脳脳移移行行性性をを測測定定ししたた。。
((11))ママウウススはは 3300—— 4400gg ((77週週齢齢、、 nn== 33))のの SSiicc：： IICCRR ((日日本本 SSLLCC))をを用用いいたた。。
((22))被被験験化化合合物物はは 11NNHHCC11、、ポポリリエエチチレレンンググリリココーールル 440000、、 DDMMSSOOのの混混合合液液でで溶溶解解 、、 DDMMSSOOままたたははエエチチルルアアルルココーールルでで溶溶解解後後、、精精製製水水ににてて希希釈釈ししてて、、尾尾静静脈脈よよりり注注入入 しし、、投投与与よよりり 22分分後後ににエエーーテテルル麻麻酔酔下下でで腹腹部部大大動動脈脈かかららへへパパリリンン処処理理注注射射筒筒をを用用いい ててのの採採血血、、脳脳のの採採材材ををおおここななっったた。。
((33))血血液液はは採採血血後後 44°°CC、、 1144,, OOOOOOrrppmmでで 1100分分間間遠遠心心しし、、上上清清をを血血漿漿ととししてて-- 8800°°CCでで 保保存存ししたた。。脳脳 ((小小脳脳をを含含むむ））はは採採材材後後-- 8800°°CCでで保保存存ししたた。。
((44))使使用用時時ににはは血血漿漿はは溶溶解解後後、、精精製製水水でで希希釈釈ししたた後後、、ココンンデディィシショョニニンンググししたた CC1188 固固相相抽抽出出カカーートトリリッッジジ（（bboonndd eelluuttee CC1188、、 220000 mmgg、、 VVaarriiaann))にに添添加加ししメメチチルルアアルルココーールル ににてて溶溶出出ししたた。。ままたたはは溶溶解解後後ジジェェチチルルエエーーテテルル ZZシシククロロへへキキササンン混混合合液液ををカカ卩卩ぇぇ震震盪盪 ししたた後後、、遠遠心心しし油油層層をを分分注注ししたた。。
((55))脳脳はは使使用用時時ににはは凍凍結結ししたたまままま湿湿重重量量をを測測定定しし生生理理食食塩塩水水をを加加ええ、、ホホモモジジェェナナイイ ズズをを行行っったた。。ホホモモジジヱヱネネーートトをを 1100分分間間遠遠心心しし、、上上清清ををココンンデディィシショョニニンンググししたた CC1188固固相相 抽抽出出カカーートトリリッッジジにに添添カカ卩卩しし、、メメチチルルアアルルココーールルににてて溶溶出出をを行行っったた。。ままたたはは湿湿重重量量をを測測 定定後後ジジェェチチルルエエーーテテルル//シシククロロへへキキササンン混混合合液液をを加加ええホホモモジジネネーートトしし震震盪盪ししたた後後、、遠遠 心心しし油油層層をを分分注注ししたた。。
((66))高高速速液液体体ククロロママトトググララフフィィをを用用レレ、、、、吸吸光光おおよよびび蛍蛍光光をを検検出出ししたた。。
((77))血血漿漿、、脳脳そそれれぞぞれれににつついいてて、、投投与与量量にに対対すするる血血漿漿ももししくくはは脳脳内内のの被被験験化化合合物物 * [0086] 以下に実施例を挙げて本発明を具体的に説明するが、これらの実施例は本発明を 何ら限定するものではない。
実施例 1
[0087] mi はアミロイド、 s άを に f忍 するィ ¾である
上記のアミロイド 蛋白を特異的に認識する化合物のスクリーニング方法により、表 1に示す化合物が見出された（チオフラビン τは参考として掲載)。化合物の構造に ついては表 1参照。本発明の化合物の β構造認識度はチオフラビン τよりも高い傾 向を示した (表 1)。
[0088] 次に、アルツハイマー病患者脳切片におけるこれらの化合物の染色特異性につい て調べた。
アルツハイマー病患者脳切片における BSB ((trans,trans)_l_ブロモ—2, 5—ビス— (3—ヒドロキシカルボ二ルー 4—ヒドロキシ）スチリルベンゼン）（図 1上段パネル）、チォ フラビン S (図 1中段パネル、上段パネルの隣接切片）および BF—185 (図 1下段パネ ル、図 1中段パネルの隣接切片）の染色性を比較した。図 1に示すように BF— 185は 主として老人斑（図 1クサビ型矢印）を染色したのに対し、 BSBおよびチオフラビン S は老人斑および神経原線維変化（図 1矢印）の両者を染色することがわかった。なお 、 BSB染色は D. M. Skovronsky, B. Zhang, M.-P. Kung, H. F. Kung, J. O.
Trojanowski, V. M.-Y. Lee, Pro Natl. Acad. So USA, 97, 7609 (2000)の方法に よった。
[0089] アルツハイマー病患者脳切片における BF—185 (図 2左パネル）とチオフラビン S ( 図 2右パネル、図 2左パネルの隣接切片）の染色性を比較した。図 2に示すように BF -185は主として老人斑（図 2クサビ型矢印）を染色したのに対し、チオフラビン Sは老 人斑および神経原線維変化（図 2矢印）の両者を染色することがわかった。
[0090] アルツハイマー病患者脳切片における BF— 185 (図 3左パネル）と抗 A β抗体 6F /3D免疫染色（図 3右パネル、図 3左パネルの隣接切片）の染色性を比較した。図 3 に示すように BF— 185は抗 A 抗体 6F/3Dによって染色される老人斑（図 3クサビ 型矢印）およびびまん性老人斑（図 3破線丸印内）を染色することがわかった。
[0091] アルツハイマー病患者脳切片における BF—187 (図 4左パネル）とチオフラビン S ( 図 4右パネル、図 4左パネルの隣接切片）の染色性を比較した。図 4に示すように BF —187はチオフラビン Sによって染色される老人斑（図 4クサビ型矢印）を染色すること がわかった。
[0092] アルツハイマー病患者脳切片における BF—188 (図 5左パネル）とチオフラビン S ( 図 5右パネル、図 5左パネルの隣接切片）の染色性を比較した。図 5に示すように BF —188はチオフラビン Sによって染色される老人斑（図 5クサビ型矢印）を染色すること がわかった。
[0093] アルツハイマー病患者脳切片における BF—189 (図 6左パネル）とチオフラビン S ( 図 6右パネル、図 6左パネルの隣接切片）の染色性を比較した。図 6に示すように BF _189はチオフラビン Sによって染色される老人斑（図 6クサビ型矢印）を染色すること 力 Sわ力つた。
[0094] アルツハイマー病患者脳切片における BF—196 (図 7左パネル）とチオフラビン S ( 図 7右パネル、図 7左パネルの隣接切片）の染色性を比較した。図 7に示すように BF -196は主として老人斑（図 7クサビ型矢印）を染色したのに対し、チオフラビン Sは老 人斑および神経原線維変化（図 7矢印）の両者を染色することがわかった。
[0095] アルツハイマー病患者脳切片における BF— 196 (図 8左パネル）と抗 A β抗体 6F /3D免疫染色（図 8右パネル、図 8左パネルの隣接切片）の染色性を比較した。図 8 に示すように BF— 196は抗 A j3抗体 6F/3Dによって染色される老人斑（図 8クサビ 型矢印）を染色することがわかった。
[0096] アルツハイマー病患者脳切片における BF—197 (図 9左パネル）とチオフラビン S ( 図 9右パネル、図 9左パネルの隣接切片）の染色性を比較した。図 9からわかるように BF-197は主として老人斑（図 9クサビ型矢印）を染色したのに対し、チオフラビン S は老人斑および神経原線維変化（図 9矢印）の両者を染色することがわかった。
[0097] アルツハイマー病患者脳切片における BF_197 (図 10左パネル）と抗 A /3抗体 6F Z3D免疫染色（図 10右パネル、図 10左パネルの隣接切片）の染色性を比較した。 図 10に示すように BF—197は抗 A j3抗体 6F/3Dによって染色される老人斑（図 10 クサビ型矢印）を染色することがわかった。
[0098] アルツハイマー病患者脳切片における BF-201 (図 11左パネル）とチオフラビン S ( 図 11右パネル、図 11左パネルの隣接切片）の染色性を比較した。図 11に示すよう に BF— 201はチオフラビン Sによって染色される老人斑（図 11クサビ型矢印）を染色 することがわ力つた。
[0099] アルツハイマー病患者脳切片における BF—201 (図 12左パネル）と抗 A /3抗体 6F
Z3D免疫染色（図 12右パネル、図 12左パネルの隣接切片）の染色性を比較した
。図 12に示すように BF—201は抗 A /3抗体 6F/3Dによって染色される老人斑（図 1
2クサビ型矢印）を染色することがわ力つた。
[0100] アルツハイマー病患者脳切片における BF-214 (図 13左パネル）とチオフラビン S ( 図 13右パネル、図 13左パネルの隣接切片）の染色性を比較した。図 13からわかるよ うに BF— 214はチオフラビン Sによって染色される老人斑（図 13クサビ型矢印）を染 色することがわかった。
[0101] アルツハイマー病患者脳切片における BF-215 (図 14左パネル）とチオフラビン S ( 図 14右パネル、図 14左パネルの隣接切片）の染色性を比較した。図 14からわかるよ うに BF— 215はチオフラビン Sによって染色される老人斑（図 14クサビ型矢印）を染 色することがわかった。
[0102] アルツハイマー病患者脳切片における BF—227 (図 15左パネル）とチオフラビン S ( 図 15右パネル、図 15左パネルの隣接切片）の染色性を比較した。図 15からわかるよ うに BF— 227は主として老人斑（図 15クサビ型矢印）を染色したのに対し、チオフラビ ン Sは老人斑および神経原線維変化（図 15矢印）の両者を染色することがわかった。
[0103] アルツハイマー病患者脳切片における BF_227 (図 16左パネル）と抗 A /3抗体 6F Z3D免疫染色（図 16右パネル、図 16左パネルの隣接切片）の染色性を比較した。 BF— 227は抗 A j3抗体 6F/3Dによって染色される老人斑（図 16クサビ型矢印）お よびびまん性老人斑 (破線丸印内）を染色することがわかった。
[0104] アルツハイマー病患者脳切片における BF—231 (図 19左パネル）とチオフラビン S ( 図 19右パネル、図 19左パネルの隣接切片）の染色性を比較した。図 19からわかるよ うに BF-231はチオフラビン Sによって染色される老人斑（図 19クサビ型矢印）を染 色することがわ力つた。
[0105] これまでのアルツハイマー病患者脳切片を染色する染色剤は主として、コンゴレツ ドまたはチオフラビン Sが用いられてきた。これらの染色剤はアルツハイマー病の 2つ の病理学的主徴と言われる老人斑および神経原線維変化の両者を染色するのが特 徴である。
[0106] 本発明化合物は、図 1に示したように老人斑に対する特異性が高ぐ老人斑および リン酸化アミロイド j3蛋白に両者を染色するチオフラビン Sとは特異性が異なっていた 。このことより、本発明化合物の 1の用途として、アルツハイマー病患者脳切片おける 老人斑の選択的染色剤としての使用が考えられる。
[0107] 特に、 BF-185および BF-227はびまん性老人斑にも親和性を示し、これ鮮明に 染色したので、アルツハイマー病の早期診断に有用であることがわかった。
実施例 2
[0108] 実施例 2 急性毒性試験
次に各化合物について上記方法により行った急性毒性試験の結果を表 2に示す。
[表 2]
表 2 本発明の化合物の急性毒性試験の結果
Figure imgf000051_0001
[0109] 一般にヒトでの PET撮影にはポジトロン標識および未標識化合物の総投与量として 、 1 X 10— 12から 1 X 10— 5mg/kgの単回静脈内投与が用いられ、多くはの場合、 1 X 10— 10 から 1 X 10— 7mg/kgの静脈内投与が用いられる。これらの化合物の静脈内投与時の最 大耐量と PET撮影時に必要な総化合物量をみてみると、両者の間には少なくとも 10 万倍以上の開きがあることから、これらの化合物は PET撮影用のプローブとしては極 めて安全性の高レ、化合物と考えられる。
実施例 3
Figure imgf000052_0001
表 3にマウスにおける被験化合物静脈内投与 2分後の脳移行を示した。 被験化合 物投与 2分後の脳内含有量は、 3.9— 19.0 %ID/gであった。
中枢神経系を対象とした PETまたは SPECT用化合物の脳移行性は、 0.5%ID/g以 上あれば十分と考えられてレ、る。その意味で被験化合物は極めての脳移行性の高 い化合物である。
[表 3]
表 3 本発明の化合物の静脈内投与 2分後の脳移行 〔マウス）
Figure imgf000052_0002
実施例 4
[0111] 実施例 4 本発明ィ h合物の神経原繊維変化染色十牛
図 17に示すように、本発明の式 IIの化合物の典型例である化合物 BF— 221は、チ オフラビン Sとは異なり、タウ蛋白（矢印）に対して特異性が高いことがわかった。すな わち、チオフラビン Sではタウ蛋白以外の蛋白もよく染色された力 BF— 221ではタウ 蛋白以外の蛋白はあまり染色されな力 た。 BF— 240、 BF-255についても同様の 結果が得られた。
[0112] 図 18に示すように、 BF-221はリン酸化タウ蛋白の特異的抗体（pSer422)により 認識されるリン酸化タウ蛋白を染色した。すなわち本発明の式 IIで示される化合物は 主としてタウ蛋白を認識するプローブあるいは染色剤として、すなわち神経原線維変 化を認識するプローブあるいは染色剤として使用できることがわかった。 BF— 239、 B F_240、 BF—255についても同様の結果が得られた。
産業上の利用可能性
本発明の A 蓄積性疾患診断プローブ用化合物およびそれを用いた A の染色、 ならびに A 蓄積性疾患の治療および予防に使用される本発明の化合物を含む医 薬組成物等は、現在最も重要な医療上の問題の 1つであるアルツハイマー病等の難 病の早期発見、医療および予防において極めて重要であり、医療分野における利用 可能性は極めて大きい。また、本発明の化合物はアルツハイマー病やタウォパチ一 の早期診断に有用である。

Claims

請求の範囲
[1] アミロイド iS蛋白蓄積性疾患の診断プローブとして使用される、式 I：
[化 1]
Figure imgf000054_0001
[式中、 Aは 5員環または 6員環であり、下記の構造:
[化 2]
Figure imgf000054_0002
または
[化 3]
Figure imgf000054_0003
または
[化 4]
Figure imgf000054_0004
を有し；
Xおよび Yは独立して Nまたは CHであり；
Zは 0、 S、 CHまたは N— C H であり；
2 p 2p + l
Gは Nまたは CHであり；
Jは S、〇、 CHまたは N_C H であり；
2 q 2q + l
pは 1一 4の整数であり；
qは 1一 4の整数であり；
Rおよび Rは独立して水素および炭素数 1一 4個のアルキルからなる群より選択さ れ； Rは水素、ハロゲン、〇H、 C〇OH、 SO H、 NH、 N〇、炭素数 1一 4個のアルキ
3 3 2 2
ルおよびフエニルからなる群より選択され、
Rおよび Rは独立して水素、ハロゲン、 OH、 CO〇H、 SO H
3 、 NH
2、 N〇、炭素
4 5 2 数 1一 4個のアルキル、 0_炭素数 1一 4個のアルキル（ここに炭素数 1一 4個のアルキ ルはハロゲンで置換されていてもよい）、およびフエニルからなる群より選択される力 ； あるいは Rおよび Rは一緒になつて、ハロゲン、 OH
4 5 、 CO〇H、 SO H
3 、 NH
2、 NO
2
、炭素数 1一 4個のアルキル、 0_炭素数 1一 4個のアルキル（ここに炭素数 1一 4個の アルキルはハロゲンで置換されていてもよい）、およびフエ二ルカらなる群より選択さ れる 1一 4個の基により置換されていてもよいベンゼン環を形成し；ただし、 mが 0であ つて、 Rおよび Rが一緒になつてベンゼン環を形成する場合には環 Aはベンゼン環
4 5
でなく；
Dは NH、 S、 0、または CH = CHであり；
Eは Nまたは CHであり；
mは 0— 4の整数であり、ただし、環 Aがベンゼン環である場合には mは 2— 4の整 数であり；
nは 0— 4の整数である]
で示される化合物またはその塩もしくは溶媒和物。
[2] 老人斑および/またはびまん性老人斑に特異的に結合する請求項 1記載の化合 物またはその塩もしくは溶媒和物。
[3] BF— 185、 BF— 187、 BF— 188、 BF— 189、 BF— 196、 BF— 197、 BF— 201、 BF—
214、 BF— 215、 BF—227および BF—231からなる群より選択される請求項 2記載の 化合物またはその塩もしくは溶媒和物。
[4] 標識されている請求項 1一 3のいずれ力 1項記載の化合物またはその塩もしくは溶 媒和物。
[5] 標識が放射性核種である請求項 4記載の化合物またはその塩もしくは溶媒和物。
[6] 標識が Ί線放出核種である請求項 5記載の化合物またはその塩もしくは溶媒和物
[7] y線放出核種が99 mTc、 mIn、 67Ga、 201Τ1, 123Ιおよび133 Xe力らなる群より選択さ れるものである請求項 6記載の化合物またはその塩もしくは溶媒和物。
[8] 標識が陽電子放出核種である請求項 5記載の化合物またはその塩もしくは溶媒和 物。
[9] 陽電子放出核種が11 C、 13N、 150および18 Fからなる群より選択される請求項 8記載 の化合物またはその塩もしくは溶媒和物。
[10] 請求項 4ないし 9のいずれか 1項に記載の化合物またはその塩もしくは溶媒和物お よび医薬上許容される担体を含む、アミロイド 蛋白蓄積性疾患の画像診断用組成 物。
[11] 請求項 4ないし 9のいずれか 1項に記載の化合物またはその塩もしくは溶媒和物を 必須の構成成分として含む、アミロイド 蛋白蓄積性疾患の画像診断用キット。
[12] 請求項 1ないし 3のいずれ力 1項に記載の化合物またはその塩もしくは溶媒和物を 含む脳試料中のアミロイド iS蛋白の染色用組成物。
[13] 請求項 2または 3に記載の化合物またはその塩もしくは溶媒和物を含む脳試料中 の老人斑および/またはびまん性老人斑の染色用組成物。
[14] 化合物が BF-185および BF-227からなる群より選択されるものである請求項 13 記載の染色用組成物。
[15] 請求項 1記載の化合物またはその医薬上許容される塩もしくは溶媒和物および医 薬上許容される担体を含むアミロイド /3蛋白蓄積性疾患の治療および Zまたは予防 用医薬組成物。
[16] 疾患がアルツハイマー病である請求項 15記載の医薬組成物。
[17] 神経原線維変化を検出するためのプローブあるいは神経原線維変化の染色剤とし て使用される、下式 Π :
[化 5]
Figure imgf000056_0001
[式中、環 Aは
Figure imgf000057_0001
または
[化 7]
Figure imgf000057_0002
で示され；
R、 R、 X、 Y、 Z、 Gおよび Jは上記定義と同じであり；
1 2
Rはハロゲン、〇H、 COOH、 SO H、 NH、 NO、炭素数 1一 4個のアルキル、 O
6 3 2 2
一炭素数 1一 4個のアルキル（ここに炭素数 1一 4個のアルキルはハロゲンで置換され てレ、てもよレ、）、またはフエニルであり；
kは 0— 4の整数を意味する]
で示される請求項 1記載の化合物またはその塩もしくは溶媒和物。
[18] BF— 221、 BF— 239、 BF— 240および BF—255からなる群より選択されるものであ る請求項 17記載の化合物。
[19] 請求項 1記載の化合物またはその塩もしくは溶媒和物を投与することを特徴とする アミロイド 蛋白蓄積性疾患の治療および/または予防方法。
[20] 請求項 1記載の化合物またはその塩もしくは溶媒和物を用いることを特徴とするアミ ロイド /3蛋白蓄積性疾患の診断方法。
[21] アミロイド /3蛋白蓄積性疾患の治療、予防、または診断するための組成物を製造す るための請求項 1記載の化合物またはその塩もしくは溶媒和物の使用。
[22] 請求項 17記載の化合物またはその塩もしくは溶媒和物を用いることを特徴とする 神経原線維変化を検出あるいは染色する方法。
[23] 神経原線維変化を検出あるいは染色するための組成物を製造するための請求項 1
7記載の化合物またはその塩もしくは溶媒和物の使用。
[24] 化合物が BF— 221、 BF_239、 BF— 240および BF—255からなる群より選択される ものである請求項 22または 23記載の方法または使用。
[25] コンフオメーシヨン病の診断用プローブとして使用される請求項 1一 9、 17または 18 のいずれ力 4項に記載の化合物またはその塩もしくは溶媒和物。
[26] 請求項 1一 9、 17または 18のいずれ力 4項に記載の化合物またはその塩もしくは溶 媒和物を含むコンフオメーシヨン病の画像診断用組成物またはキット。
[27] 請求項 1一 9、 17または 18のいずれ力 4項に記載の化合物またはその医薬上許容 される塩もしくは溶媒和物および医薬上許容される担体を含有する、コンフオメーショ ン病の予防および/または治療用医薬組成物。
[28] 請求項 1一 9、 17または 18のいずれ力 4項に記載の化合物またはその医薬上許容 される塩もしくは溶媒和物を用いることを特徴とする、コンフオメーシヨン病の診断方 法。
[29] コンフオメーシヨン病を診断するための、請求項 1一 9、 17または 18のいずれ力 1項 に記載の化合物またはその医薬上許容される塩もしくは溶媒和物の使用。
[30] 請求項 1一 9、 17または 18のいずれ力 1項に記載の化合物またはその医薬上許容 される塩もしくは溶媒和物を対象に投与することを特徴とする、コンフオメーシヨン病 の予防および/または治療方法。
[31] コンフオメーシヨン病を予防および/または治療するための、請求項 1一 9、 17また は 18のいずれ力 1項に記載の化合物またはその医薬上許容される塩もしくは溶媒和 物の使用。
[32] 請求項 1一 9、 17または 18のいずれか 1項に記載の化合物を合成するための前駆 体化合物。
[33] BF_223、 BF_226、 BF_246、 BF—251および BF—253力らなる群より選択され る請求項 32記載の前駆体化合物。
[34] 標識されてレ、る請求項 32または 33記載の前駆体化合物。
[35] 18Fまたは1231で標識されている請求項 32ないし 34のいずれ力 4項に記載の前駆 体化合物。
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