UA120102C2 - АНТИТІЛО ДО CD79b І ЙОГО ЗАСТОСУВАННЯ - Google Patents

АНТИТІЛО ДО CD79b І ЙОГО ЗАСТОСУВАННЯ Download PDF

Info

Publication number
UA120102C2
UA120102C2 UAA201705517A UAA201705517A UA120102C2 UA 120102 C2 UA120102 C2 UA 120102C2 UA A201705517 A UAA201705517 A UA A201705517A UA A201705517 A UAA201705517 A UA A201705517A UA 120102 C2 UA120102 C2 UA 120102C2
Authority
UA
Ukraine
Prior art keywords
antibody
amino acid
acid sequence
sequence
zeo
Prior art date
Application number
UAA201705517A
Other languages
English (en)
Inventor
Ліпін Л. Сан
Липин Л. Сан
Івонн Мен-Йі Чен
Ивонн Мен-Йи Чен
Марк С. Деніс
Марк С. Денис
Жр. Ібенс Ален Ж.
Жр. Ибенс Ален Ж.
Ендрю Полсон
Эндрю Полсон
Original Assignee
Дженентек, Інк.
Дженентек, Инк.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=55022708&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=UA120102(C2) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Дженентек, Інк., Дженентек, Инк. filed Critical Дженентек, Інк.
Publication of UA120102C2 publication Critical patent/UA120102C2/uk

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • C07K16/2809—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against the T-cell receptor (TcR)-CD3 complex
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A61K47/68031—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug being an auristatin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6849—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a receptor, a cell surface antigen or a cell surface determinant
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/04—Immunostimulants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/21—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin from primates, e.g. man
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/31—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency multispecific
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/34—Identification of a linear epitope shorter than 20 amino acid residues or of a conformational epitope defined by amino acid residues
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/55—Fab or Fab'
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/60—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
    • C07K2317/62—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments comprising only variable region components
    • C07K2317/622—Single chain antibody (scFv)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Abstract

Винахід стосується виділеного антитіла до СD79b, яке містить СD79b-зв'язуючий домен. Також винахід стосується виділеної нуклеїнової кислоти, що кодує антитіло до СD79b, вектора, клітини-хазяїна, способу одержання антитіла до СD79b, імунокон'югата, фармацевтичної композиції та застосування антитіла до СD79b у виробництві лікарського засобу для лікування або сповільнення прогресування розладу клітинної проліферації або аутоімунного захворювання.

Description

або сповільнення прогресування розладу клітинної проліферації або аутоіїмунного захворювання.
ПЕРЕХРЕСНЕ ПОСИЛАННЯ НА СПОРІДНЕНІ ЗАЯВКИ
ІО00О1| Дана заявка заявляє пріоритет Попередньої заявки на видачу патенту США Мо 62/088487, поданої 5 грудня 2014 року, яка включена до даного документу шляхом посилання в повному обсязі.
ПЕРЕЛІК ПОСЛІДОВНОСТЕЙ
0002) Дана заявка містить Перелік послідовностей, поданий в електронній формі у форматі
А5БСІЇ і включений до даного документу шляхом посилання в повному обсязі. Вказана копія
АЗСІІ, створена 2 грудня 2015 року, має назву РЗ32464М/О РСТзЗедиепсеї івііпо. їх, її розмір становить 43470 байт.
ГАЛУЗЬ ТЕХНІКИ
(0003) Цей винахід відноситься до анти-СО79Б антитіл, включаючи анти-СО79Б антитіла, що містять СОЗ-зв'язуючий домен (наприклад, анти-СО79р/СО03 Т-клітинозалежні біспецифічні антитіла (ТЗБ)), і способів їх застосування.
РІВЕНЬ ТЕХНІКИ
І0004| Порушення клітинної проліферації, такі як рак, характеризуються неконтрольованим ростом клітинних субпопуляцій. Вони є провідною причиною смертності у розвинених країнах і другою провідною причиною смерті в країнах, що розвиваються. Щорічно діагностують більше 12 млн нових випадків раку і 7 млн смертельних результатів внаслідок раку. За оцінками
Національного інституту раку, більш ніж півмільйона американців помруть від раку у 2013 році, що становить майже одну з кожних чотирьох смертей у країні. По мірі зростання чисельності населення похилого віку, одночасно виросла і захворюваність на рак, оскільки після сімдесяти років вірогідність розвитку раку є вищою більш ніж удвічі. Таким чином, догляд за хворими на рак представляє значне, зростаюче соціальне навантаження, яке постійно збільшується.
І0005| СО0О796 є сигнальним компонентом В-клітинного рецептора і діє як ковалентний гетеродимер, що містить СЮО79а (тобто, ІА або тбЬБ-1) і СО79р (тобто, др або 629). СЮО79р містить позаклітинний домен імуноглобуліну (4), трансмембранний домен і внутрішньоклітинний сигнальний домен, домен імунорецепторного мотиву активації на базі тирозину (МАТ). За допомогою проточної цитометрії поверхнева експресія СО796 була виявлена майже у всіх пацієнтів з неходжкінською лімфомою (НХЛ) і хронічним лімфоцитарним
Зо лейкозом (ХЛЛ). Богпап еї аї., Віооа 114(13): 2721-9 (2009). На додаток до своєї сигнальної функції, у випадку, якщо В-клітинний рецептор є поперечно зшитим, він націлюється на компартмент головного комплексу гістосумісності класу ІЇ, лізосомо-подібний компартмент, що є частиною представлення антигену класу ІІ В-клітинами.
І0006| Ця властивість біології СО79Ь робить його особливо привабливою мішенню для застосування кон'югату антитіло-лікарський засіб (АЛС), оскільки анти-СО795 антитіла інтерналізуються і доставляються у вказані лізосомальні компартменти, що, як відомо, містять протеазу, здатну вивільняти цитотоксичний лікарський засіб. Таким чином, були одержані кон'югати антитіло-лікарський засіб (АЛС), такі як гуманізоване анти-СО79р антитіло (гуманізоване ЗМ8), кон'юговане з монометилауристатином Е (ММАЕ) за допомогою розщеплюваного протеазою лінкера), яке продемонструвало клінічну ефективність при лікуванні
НХЛ. Див., наприклад, патент США Мо 8088378 і Мог5сппаизег еї а!., "4457 Ораагей Кезий5 ота
Рпазе Ії Вапдотігеда 5ішау (ВОМИГО5) ої Роіаїшгитар Медоїіп ог Ріпаїшгитар Медоїйп Рів
Вішхітаб іп Райепів м/їп НеїІарзеад/Веїтасіогу Моп-Нодакіп Гутрпота" 56" АБН Аппиа! Меевіїпд апа Ехрозйоп: ЮОесетрег 6-9, 2014. Незважаючи на успіхи в лікуванні НХЛ їі ХЛЛ із застосуванням терапевтичних засобів у формі анти-СО79Б АЛС, як і раніше існує незадоволена потреба у вдосконалених терапевтичних засобах для лікування пацієнтів з НХЛ і ХЛЛ, зокрема, із захворюванням, резистентним до терапії анти-СО79Б АЛС.
І0007| Нещодавно були розроблені імунотерапевтичні засоби на базі біспецифічних антитіл, які здатні одночасно зв'язуватися з антигенами на поверхні цитотоксичних клітин і пухлинних клітин, їз тим, щоб зв'язана цитотоксична клітина руйнувала зв'язану пухлинну клітину. Такі біспецифічні антитіла можуть володіти перевагами, наприклад, ефективності та/або безпечності, в порівнянні з кон'югатами антитіло-лікарський засіб. Таким чином, в даній галузі техніки існує незадоволена потреба у розробці ефективних біспецифічних антитіл для застосування при лікуванні раку.
КОРОТКИЙ ОПИС СУТІ ВИНАХОДУ
0008) У винаході пропонуються анти-СО79Б антитіла і способи їх застосування. Зокрема, пропонуються анти-СО79О антитіла, що містять СО79р-зв'язуючий домен і СОЗ-зв'язуючий домен.
Ї0009| В одному аспекті даного винаходу пропонуються анти-СО79р антитіла, причому бо антитіло містить СЮО79Б-зв'язуючий домен, що містить наступні шість гіперваріабельних ділянок
(НМА): (а) НМВА-НІ, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО: 5; (Б) НМК-Н2, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО І МО: 8; (с) НМК-НЗ, що містить амінокислотну послідовність БЕО ІЮ МО: 9; (4) НМК-І1, що містить амінокислотну послідовність зЕО ІЮ МО: 10; (є) НМВ-12, що містить амінокислотну послідовність 5ЕС ІО МО: 11; ї (3 НМВ-І3, що містить амінокислотну послідовність зЗЕО ІЮ МО: 12. 0010) У деяких варіантах реалізації винаходу СО79Б-зв'язуючий домен містить наступні шість НМЕ: (а) НМЕ-НІ, що містить амінокислотну послідовність БЕО ІЮО МО: 3; (Б) НМЕ-Н2, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО: 6; (с) НМК-НЗ, що містить амінокислотну послідовність БЕО ІЮ МО: 9; (4) НМК-І1, що містить амінокислотну послідовність зЕО ІЮ МО: 10; (є) НМВ-12, що містить амінокислотну послідовність 5ЕС ІО МО: 11; ї ( НМАК-І3, що містить амінокислотну послідовність зХЕО ІЮ МО: 12. У деяких варіантах реалізації винаходу анти-СО79р антитіло містить (а) послідовність УН, що володіє щонайменше 9595 ідентичністю послідовності з амінокислотною послідовністю 5ЕО ІЮ МО: 17, 21, 23, 25, 27 або 29; (р) послідовність МІ, що володіє щонайменше 9595 ідентичністю послідовності з амінокислотною послідовністю ЗЕО ІЮ
МО: 18, 22, 24, 26, 28 або 30; або (с) послідовність МН, описану в (а), і послідовність МІ, описану в (6). У деяких варіантах реалізації винаходу анти-СО796Б містить послідовність УН, наведену у
ЗЕБЕО ІЮО МО: 17, 21, 23, 25, 27 або 29. У деяких варіантах реалізації винаходу анти-СО79р антитіло містить послідовність Мі, наведену у ЗЕО ІЮ МО: 18, 22, 24, 26, 28 або 30. 0011) У деяких варіантах реалізації винаходу СЮО79Б-зв'язуючий домен містить наступні шість НМЕ: (а) НМЕ-НІ, що містить амінокислотну послідовність БЕО ІЮО МО: 4; (Б) НМЕ-Н2, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО І МО: 7; (с) НМК-НЗ, що містить амінокислотну послідовність БЕО ІО МО: 9; (а) НМВ-11, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО: 10; (є) НМВ-12, що містить амінокислотну послідовність 5ЕС ІО МО: 11; ї ( НМАК-І3, що містить амінокислотну послідовність зХЕО ІЮ МО: 12. У деяких варіантах реалізації винаходу анти-СО79р антитіло містить (а) послідовність УН, що володіє щонайменше 9595 ідентичністю послідовності з амінокислотною послідовністю ЗЕО ІЮ МО: 19; (Б) послідовність МІ, що володіє щонайменше 9595 ідентичністю послідовності з амінокислотною послідовністю ЗЕ ІО МО: 20; або (с) послідовність УН, описану в (а), і послідовність МІ, описану в (Б). У деяких варіантах реалізації винаходу анти-СО79р антитіло містить послідовність МН, наведену у БЕО ІЮО МО: 19. У деяких
Зо варіантах реалізації винаходу анти-СО79Б антитіло містить послідовність МІ, наведену у ЗЕО ІЮ
МО: 20.
ІЇ0012| У деяких варіантах будь-якого з анти-СО790 антитіл, СО79р-зв'язуючий домен зв'язується із ХЕО ІЮ МО: 63.
ЇО013| У деяких варіантах будь-якого з анти-СО79Б антитіл, анти-СО795 антитіло (наприклад, СЮО79Б-зв'язуючий домен) зв'язується з СЮО79Ь людини із Ка менш ніж близько 25
НМ для двохвалентного Ідс антитіла с двома плечима, наприклад, менш ніж будь-яке значення із близько 10 нМ або 5 нМ. У деяких варіантах реалізації винаходу Ка визначають методом
ВІАСОКЕ. У деяких варіантах реалізації винаходу Ка визначають за допомогою СО79Б, іммобілізованого з низькою щільністю. У деяких варіантах будь-якого з анти-СО79р антитіл, анти-СО79р антитіло (наприклад, СЮ79р-зв'язуючий домен) зв'язується із В-клітиною (наприклад, клітина ВАВ) з ЕСхо менш ніж близько 150 нг/мл для двохвалентного антитіла до з двома плечима, наприклад, менш ніж близько будь-якого значення із 100 нг/мл, 75 нг/мл або 50 нг/мл. У деяких варіантах реалізації винаходу зв'язування із В-клітиною визначають за допомогою сортування клітин з активованою флуоресценцією (СКАФ). У деяких варіантах будь- якого з анти-СО79Б антитіл, анти-СО7906 антитіло (наприклад, СЮО79р-зв'язуючий домен), яке зв'язується з СЮО79р людини, зв'язується із В-клітиною (наприклад, клітина ВОАВ) з ЕС5о менш ніж близько 1,5 мкг/мл для одновалентного формату (наприклад, анти-СО79Б біспецифічне антитіло, що містить СЮО79Б і СОЗ-зв'язуючий домен), наприклад, менш ніж близько 1 мкг/мл, 0,75 мкг/мл, 0,5 мкг/мл або 0,25 мкг/мл. У деяких варіантах реалізації винаходу зв'язування з В- клітинами визначають за допомогою СКАФ. 0014 У деяких варіантах будь-якого з анти-СО79Б0 антитіл, анти-СО79р антитіло є моноклональним, людським, гуманізованим або химерним антитілом. У деяких варіантах будь- якого з анти-СО79р антитіл, антитіло є антитілом дб. У деяких варіантах будь-якого з анти-
СОр79Б антитіл, антитіло є фрагментом антитіла, який зв'язується з СЮО79р. У деяких варіантах реалізації винаходу фрагмент антитіла є фрагментом Рабр, Рар'-5Н, Ем, 5сЕм та/або (Раб)». У деяких варіантах будь-якого з анти-СО79Б антитіл, антитіло є повнорозмірним антитілом. 0015) У деяких варіантах будь-якого з анти-СО79Б0 антитіл, анти-СО79Б6 антитіло містить мутацію сайту аглікозилювання. У деяких варіантах реалізації винаходу мутація сайту аглікозилування є мутацією із заміною.
0016) У деяких варіантах будь-якого з анти-СО79Б антитіл, анти-СО7906 антитіло володіє зниженою ефекторною функцією. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло містить мутацію із заміною по амінокислотному залишку М297, І 234, 1235 та/або 0265 згідно нумерації
ЄС. У деяких варіантах реалізації винаходу мутація із заміною вибрана з групи, що складається із М2970, М297А, І 234А і І235А або 0265А, згідно нумерації ЄС. У деяких варіантах антитіло містить мутацію із заміною М2970 по амінокислотному залишку 297, згідно нумерації ЄС.
Ї0017| У деяких варіантах будь-якого з анти-СО79Б0 антитіл, анти-СО79р антитіло є моноспецифічним антитілом (наприклад, двохвалентне антитіло з двома плечима).
ЇО018| У деяких варіантах будь-якого з анти-СО79Б0 антитіл, анти-СО79р антитіло є поліспецифічним антитілом. 0019) У деяких варіантах будь-якого із поліспецифічних антитіл, поліспецифічне антитіло містить СОЗ-зв'язуючий домен. У деяких варіантах реалізації винаходу СОЗ-зв'язуючий домен зв'язується з поліпептидом СОЗ людини або поліпептидом СОЗ яванського макака (супо). У деяких варіантах реалізації винаходу поліпептид СОЗ людини або поліпептид СОЗ яванського макака є поліпептидом СОЗєЄ людини або поліпептидом СОЗеє яванського макака, відповідно. У деяких варіантах реалізації винаходу поліпептид СОЗ людини або поліпептид СОЗ яванського макака є поліпептидом СОЗу людини або поліпептидом СЮОЗу яванського макака, відповідно.
І0020| У деяких варіантах будь-якого із поліспецифічних антитіл, СОЗ-зв'язуючий домен зв'язується з поліпептидом СЮОЗє людини з Ка 250 нМ або менше. У деяких варіантах реалізації винаходу СЮОЗ-зв'язуючий домен зв'язується з поліпептидом СЮОЗєЄ людини з Ка 100 нМ або менше. У деяких варіантах реалізації винаходу СОЗ-зв'язуючий домен зв'язується з поліпептидом СОЗє людини з Ка 15 нМ або менше. У деяких варіантах реалізації винаходу СОЗ3- зв'язуючий домен зв'язується з поліпептидом СЮОЗєЄ людини з Ка 10 нМ або менше. У деяких варіантах реалізації винаходу СОЗ-зв'язуючий домен зв'язується з поліпептидом СОЗє людини з
Ка 5 нм або менше.
Ї0021| У деяких варіантах будь-якого із поліспецифічних анти-СО79р антитіл, СО3- зв'язуючий домен містить наступні шість НМЕК: (а) НМК-НІ, що містить амінокислотну послідовність БЕО ІЮ МО: 45; (р) НМЕА-Н2, що містить амінокислотну послідовність зЕО ІЮО МО: 46; (с) НМА-НЗ, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО: 47; (4) НМА-І1, що містить
Зо амінокислотну послідовність 5ЕО 10 МО: 48; (ее) НМК-І2, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО: 45; і (1) НМВ-І3, що містить амінокислотну послідовність БЕО ІЮ МО: 50. У деяких варіантах будь-якого із поліспецифічних анти-СО79Б антитіл, СОЗ-зв'язуючий домен містить (а) послідовність МН, що володіє щонайменше 9595 ідентичністю послідовності з амінокислотною послідовністю ЗЕО ІО МО: 59; (Б) послідовність МІ, що володіє щонайменше 9595 ідентичністю послідовності з амінокислотною послідовністю ЗЕО ІО МО: 60; або (с) послідовність УН, описану в (а), і послідовність МІ, описану в (Б). У деяких варіантах реалізації винаходу СЮОЗ-зв'язуючий домен містить послідовність УН, наведену у 5ЕО ІО МО: 59. В деяких варіантах реалізації винаходу СОЗ-зв'язуючий домен містить послідовність МІ, наведену у З-ЕО
ІО МО: 60.
І0022| У деяких варіантах будь-якого із поліспецифічних анти-СО79Б антитіл, СО3- зв'язуючий домен містить наступні шість НМЕК: (а) НМК-НІ, що містить амінокислотну послідовність БЕО ІЮ МО: 39; (р) НМЕА-Н2, що містить амінокислотну послідовність зЕО ІЮО МО: 40; (с) НУВ-НЗ, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО: 41; (а) НУВ-І1, що містить амінокислотну послідовність 5ЕБЕО 10 МО: 42; (е) НМК-І2, що містить амінокислотну послідовність «ЕО ІЮО МО: 43; ї (І) НМК-І 3, що містить амінокислотну послідовність БЕО ІЮ МО: 44. У деяких варіантах будь-якого із поліспецифічних анти-СО796 антитіл, СОЗ-зв'язуючий домен містить (а) послідовність МН, що володіє щонайменше 9595 ідентичністю послідовності з амінокислотною послідовністю ЗЕО ІО МО: 57; (Б) послідовність М, що володіє щонайменше 9595 ідентичністю послідовності з амінокислотною послідовністю 5ЕО І МО: 58; або (с) послідовність МН, описану в (а), і послідовність МІ, описану в (Б). У деяких варіантах реалізації винаходу СЮОЗ-зв'язуючий домен містить послідовність УН, наведену у 5ЕО ІЮО МО: 57. У деяких варіантах реалізації винаходу СОЗ-зв'язуючий домен містить послідовність МІ, наведену у З-ЕО
ІО МО: 58.
Ї0023| У деяких варіантах будь-якого із поліспецифічних анти-СО79р антитіл, СО3- зв'язуючий домен містить наступні шість НМК: (а) НМК-НІ, що містить амінокислотну послідовність зЕО ІЮ МО: 51; (р) НУВ-Н2, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО: 52; (с) НМА-НЗ, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО: 53; (4) НМК-І1, що містить амінокислотну послідовність ЗЕ 10 МО: 54; (е) НМК-І2, що містить амінокислотну послідовність «ЕО ІЮО МО: 55; і () НМК-І 3, що містить амінокислотну послідовність БЕО ІЮ МО: бо 56. У деяких варіантах будь-якого із поліспецифічних анти-СО795 антитіл, СЮОЗ-зв'язуючий домен містить (а) послідовність МН, що володіє щонайменше 9595 ідентичністю послідовності з амінокислотною послідовністю ЗЕО ІО МО: 61; (Б) послідовність М, що володіє щонайменше 9595 ідентичністю послідовності з амінокислотною послідовністю ЗЕ ІО МО: 62; або (с) послідовність УН, описану в (а), і послідовність МІ, описану в (Б). У деяких варіантах реалізації винаходу СЮОЗ-зв'язуючий домен містить послідовність УН, наведену у 5ЕО ІЮО МО: 61. У деяких варіантах реалізації винаходу СОЗ-зв'язуючий домен містить послідовність МІ, наведену у З-ЕО
ІО МО: 62. (0024) У деяких варіантах будь-якого із поліспецифічних анти-СО79Б антитіл, значення ЕСобо, при якому анти-СО79Б антитіло спричиняє цитотоксичну дію на В-клітини, становить менш ніж близько 100 нг/мл, наприклад, менш ніж близько будь-якого із 50, 25, 20 або 15 нг/мл. У деяких варіантах реалізації винаходу цитотоксична дія на В-клітини є цитотоксичною дією на ендогенні
В-клітини. У деяких варіантах реалізації винаходу цитотоксична дія на В-клітин є цитотоксичною дією на клітинну лінію В-клітин, наприклад, клітинну лінію ВОАВ, клітинну лінію МУ5О-СІ СІ 2, клітинну лінію ОСІ-І у-19. У деяких варіантах будь-якого із поліспецифічних анти-СО79Б5 антитіл, значення ЕСво цитотоксичної активації Т-клітин анти-СО79р антитілами становить менш ніж близько 50 нг/мл, наприклад, менш ніж близько будь-якого із 25 нг/мл або 20 нг/мл. У деяких варіантах реалізації винаходу активацію цитотоксичних Т-клітин вимірюють як 96 СОб9- Ср25-
Т-клітин серед СО8-- Т-клітин.
Ї0025| У деяких варіантах будь-якого із поліспецифічних анти-СО790 антитіл, поліспецифічне антитіло є біспецифічним антитілом.
І0026| У деяких варіантах будь-якого із поліспецифічних анти-СО796 антитіл, (а) СО3- зв'язуючий домен містить домен Ес, причому домен Ес містить мутації із заміною 73665, І З68А,
Уу407М і М2970 згідно нумерації ЄС, і (Б) СО79р-зв'язуючий домен містить домен Ес, причому домен Ес містить мутації із заміною Т366УМ ії М2970 згідно нумерації ЄС. У деяких варіантах будь-якого із поліспецифічних анти-СО79Б5 антитіл, (а) СО79р-зв'язуючий домен містить домен
Ес, причому домен Ес містить мутації із заміною 73665, І З368А, у407М ії М297 згідно нумерації
ЄС, і 6) СО3-зв'язуючий домен містить домен Ес, причому домен Ес містить мутації із заміною тЗ6бум і М297 5 згідно нумерації ЄС.
І0027| У деяких варіантах будь-якого із поліспецифічних анти-СО79Б5 антитіл, анти-СО079р антитіло містить один або більше константних доменів важкого ланцюга, при цьому один або більше константних доменів важкого ланцюга вибрані із першого домену СНІ (СНІ), першого домену СНО (СН2), першого домену СНЗ (СНЗІ:), другого домену СНІ (СНІ»), другого домену
СНІ (СН2») і другого домену СНЗ (СНЗ»). У деяких варіантах реалізації винаходу щонайменше один з одного або більше константних доменів важкого ланцюга спарений з іншим константним
З5 доменом важкого ланцюга. У деяких варіантах реалізації винаходу кожен з доменів СНЗ: і СНЗ» містить виступ або порожнину, причому виступ або порожнина в домені СНЗ: розташовані у порожнині або виступі домену СНЗ», відповідно. У деяких варіантах реалізації винаходу домени
СНЗ.: ї СНЗ» зустрічаються на межі розділу між вказаним виступом і порожниною. У деяких варіантах реалізації винаходу кожен з доменів СН2ї і СНО» містить виступ або порожнину, причому виступ або порожнина в домені СН2ї розташовані у порожнині або виступі домену
СНеа», відповідно. У деяких варіантах реалізації винаходу домени СН2І: ії СН2» зустрічаються на межі розділу між вказаним виступом і порожниною. 0028) У цьому винаході додатково пропонуються виділені нуклеїнові кислоти, що кодують анти-СО79Б антитіло, описане у цьому документі. Крім того, пропонуються вектори, що містять виділену нуклеїнову кислоту, яка кодує описане у цьому документі анти-СО79р антитіло. У цьому винаході пропонуються клітини-хазяї, що містять вектор, який містить виділену нуклеїнову кислоту, що кодує описане у цьому документі анти-СО79Б антитіло. У деяких варіантах реалізації винаходу клітина-хазяїн є еукаріотичною клітиною-хазяїном. У деяких варіантах реалізації винаходу клітина-хазяїн є клітиною-хазяїном ссавця (наприклад, клітини
СНО). У деяких варіантах реалізації винаходу клітина-хазяїн є прокаріотичною клітиною- хазяїном. У деяких варіантах реалізації винаходу прокаріотична клітина-хазяїн є клітиною- хазяїном Е. соїї. У цьому винаході пропонуються додаткові способи одержання описаного у цьому документі анти-СО79Б5 антитіла, причому спосіб включає культивування клітини-хазяїна, описаної у цьому документі, в поживному середовищі.
І0029| Додатково, у цьому винаході пропонуються імунокон'югати, що містять анти-2079р антитіло, описане у цьому документі, і цитотоксичний агент.
Ї00З30| У цьому винаході пропонуються фармацевтичні композиції, що містять описані у цьому документі анти-СО79Б антитіла.
І0031) У цьому винаході пропонуються анти-СО79Б антитіла, описані у цьому документі, для бо застосування як лікарський засіб. У цьому винаході пропонується анти-СО79Б5 антитіло, описане у цьому документі, для застосування при лікуванні або з метою уповільнення розвитку проліферативного розладу В-клітин або аутоіїмунного розладу у суб'єкта, який потребує цього. У цьому винаході пропонуються анти-СО79Б антитіла, описані у цьому документі, для застосування з метою покращення імунної функції у суб'єкта з проліферативним розладом В- клітин або аутоїмунним розладом. У деяких варіантах реалізації винаходу проліферативний розлад В-клітин є злоякісною пухлиною. У деяких варіантах реалізації винаходу проліферативний розлад В-клітин являє собою лімфому, неходжкінську лімфому (НХЛ), агресивну НХЛ, рецидивуючу агресивну НХЛ, рецидивуючу уповільнену НХЛ, рефрактерну
НХЛ, рефрактерну уповільнену НХЛ, хронічний лімфоцитарний лейкоз (ХЛЛ), мілкоклітинну лімфоцитарну лімфому, лейкоз, волосатоклітинний лейкоз (ВКЛ), гострий лімфоцитарний лейкоз (ГЛЛ) та/або мантійноклітинну лімфому. У деяких варіантах будь-якого з проліферативних розладів В-клітин, проліферативний розладі В-клітин є резистентним до лікування кон'югатом анти-СО795 антитіло-лікарський засіб (наприклад, кон'югат анти-СО079р антитіло-лікарський засіб ММА). У деяких варіантах реалізації винаходу аутоімунне захворювання вибране з групи, що складається із ревматоїдного артриту, ювенільного ревматоїдного артриту, системного червоного вовчаку (ВКВ), хвороби Вегенера, запального захворювання кишечнику, ідіопатичної тромбоцитопенічної пурпури (ІТП), тромбоцитопенічного акроангіотромбозу (ТАТ), аутоїмунної тромбоцитопенії, множинного склерозу, псоріазу, ІдА нефропатії, ІДМ поліневропатії, міастенії гравіс, васкуліту, цукрового діабету, синдрому Рейно, синдрому Шегрена, гломерулонефриту, нейромієліту зорового нерва (НМ3) та ІдО невропатії.
ІЇ0032| У цьому винаході пропонується застосування будь-якого з анти-СО79р антитіл, описаних у цьому документі, для одержання лікарського засобу для лікування або уповільнення прогресування розладу клітинної проліферації або аутоїмунного розладу. У цьому винаході пропонується застосування будь-якого з анти-СО79р антитіл, описаних у цьому документі, для виробництва лікарського засобу з метою покращення імунної функції у суб'єкта з розладом клітинної проліферації або аутоїмунним розладом. У деяких варіантах реалізації винаходу розлад проліферації В-клітин є злоякісною пухлиною. У деяких варіантах реалізації винаходу розлад проліферації В-клітин являє собою лімфому, неходжкінську лімфому (НХЛ), агресивну
НХЛ, рецидивуючу агресивну НХЛ, рецидивуючу уповільнену НХЛ, рефрактерну НХЛ,
Зо рефрактерну уповільнену НХЛ, хронічний лімфоцитарний лейкоз (ХЛЛ), мілкоклітинну лімфоцитарну лімфому, лейкоз, волосатоклітинний лейкоз (ВКЛ), гострий лімфоцитарний лейкоз (ГЛЛ) та/або мантійноклітинну лімфому. У деяких варіантах будь-якого з проліферативних розладів В-клітин, проліферативний розладі В-клітин є резистентним до лікування кон'югатом анти-СО79Б антитіло-лікарський засіб (наприклад, кон'югат антитіло- лікарський засіб анти-«СО795 ММА). У деяких варіантах реалізації винаходу аутоїмунне захворювання вибране з групи, що складається із ревматоїдного артриту, ювенільного ревматоїдного артриту, системного червоного вовчаку (ВКВ), хвороби Вегенера, запального захворювання кишечнику, ідіопатичної тромбоцитопенічної пурпури (ІТП), тромбоцитопенічного акроангіотромбозу (ТАТ), аутоїмунної тромбоцитопенії, множинного склерозу, псоріазу, ІА нефропатії, ІДМ поліневропатії, міастенії гравіс, васкуліту, цукрового діабету, синдрому Рейно, синдрому Шегрена, гломерулонефриту, нейромієліту зорового нерва (НМ3) та до невропатії. 0033) У цьому винаході пропонуються способи лікування або уповільнення прогресування розладу клітинної проліферації або аутоїмунного розладу у суб'єкта, який потребує цього, причому спосіб включає введення суб'єкту анти-СО79Б антитіла, описаного у цьому документі. У цьому винаході пропонуються способи підвищення імунної функції у суб'єкта з розладом клітинної проліферації або аутоїмунним розладом, причому вказаний спосіб включає введення суб'єкту ефективної кількості анти-СО790 антитіла, описаного у цьому документі. У деяких варіантах реалізації винаходу проліферативний розлад В-клітин є злоякісною пухлиною. У деяких варіантах реалізації винаходу проліферативний розлад В-клітин являє собою лімфому, неходжкінську лімфому (НХЛ), агресивну НХЛ, рецидивуючу агресивну НХЛ, рецидивуючу уповільнену НХЛ, рефрактерну НХЛ, рефрактерну уповільнену НХЛ, хронічний лімфоцитарний лейкоз (ХЛЛ), мілкоклітинну лімфоцитарну лімфому, лейкоз, волосатоклітинний лейкоз (ВКЛ), гострий лімфоцитарний лейкоз (ГЛЛ) та/або мантійноклітинну лімфому. У деяких варіантах будь-якого з проліферативних розладів В-клітин, проліферативний розлад В-клітин є резистентним до лікування кон'югатом анти-СО79р антитіло-лікарський засіб (наприклад, кон'югат антитіло-лікарський засіб анти-СО795 ММАЕ). У деяких варіантах реалізації винаходу аутоїмунне захворювання вибране з групи, що складається із ревматоїдного артриту, ювенільного ревматоїдного артриту, системного червоного вовчаку (ВКВ), хвороби Вегенера, запального захворювання кишечнику, ідіопатичної тромбоцитопенічної пурпури (ІТП), 60 тромбоцитопенічного акроангіотромбозу (ТАТ), аутоїмунної тромбоцитопенії, множинного склерозу, псоріазу, ІА нефропатії, (ЧОМ поліневропатії, міастенії гравіс, васкуліту, цукрового діабету, синдрому Рейно, синдрому Шегрена, гломерулонефриту, нейромієліту зорового нерва (НМУ) та до невропатії.
І0034| У деяких варіантах будь-якого із способів анти-СО795 антитіло зв'язується з (а) молекулою СОЗ, розташованою на імунній ефекторній клітині і (б) молекулою СО79р, розташованою на В-клітині У деяких варіантах реалізації винаходу анти-СО79р антитіло активує імунну ефекторну клітину після зв'язування з (а) і (Б). У деяких варіантах будь-якого із способів, активована імунна ефекторна клітина здатна здійснювати цитотоксичну дію та/або апоптотичну дію на клітину-мішень.
ІЇ0035| У деяких варіантах будь-якого із способів, спосіб додатково включає введення суб'єкту антагоніста зв'язування по осі РО-1 або додаткового терапевтичного агента. У деяких варіантах реалізації винаходу антагоніст зв'язування по осі РО-1 є антагоністом зв'язування з
РО-1. У деяких варіантах реалізації винаходу антагоніст зв'язування по осі РО-1 є антагоністом зв'язування з РО-І 1. У деяких варіантах реалізації винаходу антагоніст зв'язування по осі РО-1 є антагоністом зв'язування з РО-1 2.
ІЇ0036| У деяких варіантах будь-якого із способів, спосіб додатково включає введення суб'єкту глюкокортикоїду. У деяких варіантах реалізації винаходу глюкокортикоїд є дексаметазоном.
ІЇ0037| У деяких варіантах будь-якого із способів, спосіб додатково включає введення суб'єкту ритуксимабу.
КОРОТКИЙ ОПИС ФІГУР
І0ОЗ81І Фіг. ТА-С ілюструють загибель ендогенних В-клітин під дією анти-СО79Б/СО3 ТЗБ (Т- клітинозалежних біспецифічних) антитіл, одержаних у форматі ВП або у вигляді біс-Раб (різні клони анти-СО79Б є спареними із клоном анти-СОЗ ОСНТ1м9). 200000 мононуклеарних клітин периферичної крові (МПК) інкубували в присутності або за відсутності анти-СО79р антитіл ТЗБ протягом 24 годин. Після закінчення інкубації кількість живих В-клітин підраховували шляхом гейтування по популяції СО19-/РІ-. Відсоток загибелі В-клітин обчислювали наступним чином: (кількість живих В-клітин без ТЗБ -- кількість живих В-клітин із ТЗБ)Хкількість живих В-клітин без
ТЗБ) " 100.
Зо І0О39| Фіг. 2А-О ілюструють загибель В-клітин і здатність анти-СО79р/СО3 біс-Рар (СО79р.АТ7Т/ОСНТІ1мо) до активації Т-клітин. А і В: 200000 МПК інкубували в присутності або за відсутності анти-СО7906 антитіла ТЗБ протягом 24 годин. В кінці інкубації, кількість живих В- клітин підраховували шляхом гейтування по популяції СО19-/РІ-. Відсоток загибелі В-клітин (А) обчислювали наступним чином: (кількість живих В-клітин без ТЗБ - кількість живих В-клітин із
ТЗБ)Ккількість живих В-клітин без ТЗ3Б) " 100; активацію Т-клітин (В) вимірювали шляхом гейтування по клітинам СОб6Уя/С025- в популяції СО8- Т-клітин. С і 0: 20000 клітин ВУОАВ і 100000 СО8 Т-клітин інкубували з анти-СО79Б ТЗБ або без нього протягом 24 годин. В кінці інкубації кількість живих В-клітин підраховували шляхом гейтування по популяції СО19-/РІ.
Відсоток загибелі В-клітин (С) обчислювали наступним чином: (кількість живих В-клітин без ТЗБ - кількість живих В-клітин із ТЗБ)Хкількість живих В-клітин без ТЗБ) " 100; активацію Т-клітин (0) вимірювали шляхом гейтування по клітинам СОбУч/С025-- в популяції СО8- Т-клітин. 00401 Фіг. ЗА-С ілюструють афінність одновалентного або двовалентного зв'язування різних клонів анти-СО790Б, виміряну методом СКАФ. Клітки ВОАВ інкубували з анти-СО790 антитілом (двовалентні антитіла з двома плечима) або анти-СО79Б/СО03 антитілом ТЗБ, як вказано, протягом 30 хвилин на льоду. Після закінчення інкубації клітини промивали льодяним буфером
СКАФ (1 х ФСБ, 295 БСА, 2 мМ ЕДТА), з подальшою інкубацією з міченим фікоеритрином (ФЕ) мишачим антитілом проти Їд людини (ВО ріозсіепсе Мо 555787). Аналіз методом проточної цитометрії проводили на аналізаторі ВО І 5К. Зв'язування антитіл виражали у вигляді середньої інтенсивності флуоресценції (СІФ)У флуорофору ФЕ. А: Афінність двовалентного зв'язування для клону анти-СО79Б6 2Е2 в порівнянні з афінністю одновалентного зв'язування анти-СО795 клонів 2Е2, 5М8м28 і 5М8пем (у вигляді ВУП ТЗБ); В: афінність зв'язування двовалентних анти-
СО07956 клонів СЮО79Б.Еб і СО79р.А7 в порівнянні із зв'язуванням одновалентних анти-СО079р клонів СО79Б.Еб6, СО79р.А7 і 5М8м28 (у вигляді біс--Рар або В-П ТЗ3Б); С: афінність двовалентного зв'язування анти-СО796 клону СО79Б.А7.м14 в порівнянні з одновалентним зв'язуванням анти-СО796 клону СЮО79р.А7.м14 (у вигляді ВУП ТЗБ). 00411 Фіг. 4А-В ілюструють вирівнювання (А) варіабельної ділянки важкого ланцюга (ЗЕО ІЮ
МО: 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27 і 29, відповідно, у порядку появи) і (В) варіабельної ділянки легкого ланцюга (ЗЕО ІО МО: 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28 і 30, відповідно, у порядку появи) варіантів антитіла СЮО79Б.
І0042| Фіг. 5А-В ілюструють загибель В-клітин і активацію Т-клітин і здатність анти- ср79в/сСоз тзЗБ (С079р.А7.м14, спарене із клоном анти-СОЗ 4005с або 38Е4м1). 200000 МПК інкубували в присутності або за відсутності анти-СО790 антитіла ТЗБ протягом 48 годин. Після закінчення інкубації кількість живих В-клітин підраховували шляхом гейтування по популяції
СО19-/РІ-. Відсоток загибелі В-клітин (А) обчислюють наступним чином: (кількість живих В- клітин без ТЗБ - кількість живих В-клітин із ТЗБ)/кількість живих В-клітин без ТЗБ) " 100; активацію Т-клітин (В) вимірювали шляхом гейтування по клітинам СО69:/С0025: в популяції
СО8: Т-клітин. 0043) Фіг. бА-В ілюструють загибель В-клітин і здатність анти-СО79Б/СО3 ТЗБ до активації
Т-клітин (СО79Б.А7м14/38Е4Мм1). 20000 клітин ВОАВ або УУБИО-0І СІ2 ії 100000 СО8в Т-клітин інкубували в присутності або за відсутності анти-СО790 антитіла ТЗБ протягом 48 годин. Після закінчення інкубації кількість живих В-клітин підраховували шляхом гейтування по популяції
СО19-/РІ-. Відсоток загибелі В-клітин (А) обчислювали наступним чином: (кількість живих В- клітин без ТЗБ - кількість живих В-клітин із ТЗБ)/кількість живих В-клітин без ТЗБ) " 100; активацію Т-клітин (В) вимірювали шляхом гейтування по клітинам СО69:/С0025: в популяції
СО8: Т-клітин. 0044 Фіг. 7А-С ілюструють цитотоксичну активність анти-СО79Б/СО3 антитіла ТЗБ (а7.м14р/38Е4м1) відносно В-клітин. 20000 клітин В лімфоми (як вказано) і 100000 СОв-- Т-клітин інкубували в присутності або за відсутності анти-СО790 антитіла ТЗБ протягом 48 годин. Після закінчення інкубації кількість живих В-клітин підраховували шляхом гейтування по популяції
СО19-/РІ-. Відсоток загибелі В-клітин обчислювали наступним чином: (кількість живих В-клітин без ТЗБ - кількість живих В-клітин із ТЗБ)/кількість живих В-клітин без ТЗБ) " 100. А. ілюструє криву «доза-відповідь» загибелі В-клітин для клітин ВАВ, М/УЗИ-ОІ СІ 2 ї ОСІ-І У-19, з клітинами
НТ як СО79р-негативним контролем; В-С. ілюструють загибель В-клітин при застосуванні 5000 нг/мл анти-СО79 ТЗБ (подвійний експеримент, середнє значення х стандартне відхилення (СВ)). 0045) Фіг. 8А-В ілюструють здатність анти-С0О79р/С03 антитіла ТБ (СО79р.А7.м14р/38Е4м1) спричиняти загибель В-клітин іп міго та іп ммо. Варіанти клітин ВОАВ (ВУЗАВ-С0796 АОС-К ОО Т1.1 ії ВОАВ-5М8м28хсЕ С0796 АОС-К Т1.2) були одержані з ксенотрансплантатів нечутливих ВОУАВ пухлин у лікованих анти-С0О790-МО-мс-РАВ-ММАЕ
Зо мишей. А. ілюструє криву «доза-відповідь» загибелі клітин ВОАВ іп міїго: 20000 клітин ВУОАВ або варіанту ВОАВ (як проілюстровано) і 100000 СО8-- Т-клітин інкубували в присутності або за відсутності анти-СО790/СО3 антитіла ТЗБ (СО79Б.А7.м14р/38Е4Мм1) протягом 48 годин. Після закінчення інкубації, кількість живих В-клітин підраховували шляхом гейтування по популяції
СО19-/РІ-. Відсоток загибелі В-клітин обчислювали наступним чином: (кількість живих В-клітин без ТЗБ - кількість живих В-клітин із ТЗБ)/кількість живих В-клітин без ТЗБ) " 100; В. анти- ср79р/С03 антитіло ТЗБ (СО79Б.А7.м14Б/38Е4м!1) запобігає росту пухлини ВОАВ іп мімо: клітини
ВОАВ ії МПК здорових донорів змішували та інокулювали мишам підшкірно, після чого їх лікували, як вказано. Об'єм пухлини вимірювали протягом всього дослідження до 42 днів.
ДЕТАЛЬНИЙ ОПИС ВАРІАНТІВ РЕАЛІЗАЦІЇ ВИНАХОДУ
Ї. ВИЗНАЧЕННЯ (0046) Термін «СО79р» у цьому документі позначає будь-який нативний СО79Б із будь-якого джерела, що належить до хребетних, зокрема ссавців, таких як примати (наприклад, людина, яванський макак (супо)) і гризуни (наприклад, миші і щури), якщо не вказано інше. В цьому документі СО79О людини також має назву «ор», «029», «ОМА225786» або «РКОЗ36249».
Приклад послідовності СЮО79р, що містить сигнальну послідовність, наведений у 5ЕО ІЮО МО: 1.
Приклад послідовності СО79р без сигнальної послідовності наведений у ЗЕО ІЮ МО: 2. Термін «Срт9р» включає «повнорозмірний» непроцесований СО79Б, а також будь-яку форму СО79Б, що є результатом процесингу у клітині. Термін додатково включає варіанти СО79Б, що зустрічаються в природі, наприклад, сплайсингові варіанти, алельні варіанти та ізоформи.
Поліпептиди СО79р, описані у цьому документі, можуть бути виділені з різних джерел, наприклад із різних видів тканин людини або інших джерел, або одержані рекомбінантними або синтетичними способами. «Поліпептид СО79р з нативною послідовністю» включає поліпептид із такою ж послідовністю амінокислот, як відповідний СЮО79р поліпептид, одержаний із природних джерел. Така природна послідовність поліпептиду СО79О може бути виділена з природних джерел або може бути одержана рекомбінантними або синтетичними способами. Термін «поліпептид СО79Б з нативною послідовністю» конкретно включає природні вкорочені або секретовані форми конкретного СЮО79Б поліпептиду (наприклад, послідовність позаклітинного домену), природні варіантні форми (наприклад, альтернативні сплайсингові форми) і алельні варіанти поліпептиду, що зустрічаються у природі.
І0047| Термін «кластер диференціювання 3» або «СОЗ» у цьому документі позначає будь- який нативний СОЗ із будь-якого джерела, що належить до хребетних, включаючи ссавців, таких як примати (наприклад, людина) і гризуни (наприклад, миші і щури), якщо не вказано інше, зокрема, наприклад, ланцюги СОЗє, СОЗУу, СОЗа і СОЗДВ. Термін включає «повнорозмірний» непроцесований СОЗ (наприклад, необроблений або немодифікований СОЗеє або СОЗУ), а також будь-яку форму СОЗ, що є результатом процесингу у клітині. Термін додатково включає варіанти СОЗ, що зустрічаються у природі, зокрема, наприклад, сплайсингові варіанти або алельні варіанти. СОЗ включає, наприклад, білок людини СОЗє (МСВІ Кеїбед Мо МР 000724) розміром 207 амінокислот і білок людини СОЗУу (МСВІ КеїЗед Мо МР 000064) розміром 182 амінокислоти. (0048) Терміни «анти-СО79р антитіло» і «антитіло, яке зв'язується із СЮО79р» позначають антитіло, яке здатне зв'язуватися з СЮО79Б із достатньою афінністю, таким чином, що антитіло є придатним як діагностичний та/або терапевтичний агент при націлюванні на СО79Б. В одному варіанті реалізації винаходу ступінь зв'язування анти-СО79Б антитіла з неспорідненим, не-
СО79Б білком становить менш ніж близько 1095 від зв'язування антитіла із СО795 за даними вимірювання, наприклад, методом радіоімуноаналізу (РІА). В деяких варіантах реалізації винаходу константа дисоціації (Ка) антитіла, яке зв'язується із СЮО790, становить х 1 мкМ, х 100
НМ, х 10 НМ, х 1 НМ, х 0,1 НМ, х 0,01 нМ або х 0,001 нМ (наприклад, 109 М або менше, наприклад від 109 М до 10-33 М, наприклад, від 109 М до 1073 М). У деяких варіантах реалізації винаходу анти-СО79Б антитіло зв'язується з епітопом СЮО79Б, який є консервативним для СЮО79Б різних видів. (0049) Терміни «анти-СОЗ антитіло» і «антитіло, що зв'язується з СОЮЗ» позначають антитіло, яке здатне зв'язуватися з СОЗ із достатньою афінністю, таким чином, що антитіло є придатним як діагностичний та/або терапевтичний агент при націлюванні на СО3. В одному варіанті реалізації винаходу ступінь зв'язування анти-СОЗ антитіла з неспорідненим, не-СОЗ білком становить менш ніж близько 1095 від зв'язування антитіла із СОЗ, за даними вимірювання, наприклад, методом радіоіїмуноаналізу (РІА). У деяких варіантах реалізації винаходу константа дисоціації (Ка) антитіла, яке зв'язується з СЮОЗ, становить х 1 мкМ, х 100 НМ, «ТЛО НМ, «1 НМ, є 0,1 нМ, х 0,01 нМ або х 0,001 нМ (наприклад, 102 М або менше, наприклад, від 109 М до 1073 М,
Ко) наприклад, від 109 М до 10-73 М). У деяких варіантах реалізації винаходу анти-СОЗ антитіло зв'язується з епітопом СОЗ, який є консервативним для СОЗ різних видів.
І0О50) Термін «антитіло» застосовується у цьому документі в широкому розумінні і включає різні структури антитіл, зокрема, але не обмежуючись цим, моноклональні антитіла, поліклональні антитіла, поліспецифічні антитіла (наприклад, біспецифічні антитіла), і фрагменти антитіл, до тих пір, поки вони виявляють бажану антигензв'язуючу активність. 0051) «Фрагмент антитіла» позначає молекулу, відмінну від інтактного антитіла, яка містить частину інтактного антитіла, що зв'язується з антигеном, із яким зв'язується інтактне антитіло.
Приклади фрагментів антитіла включають, але не обмежуючись цим, Ем, Раб, Раб", Рар'-5Н,
Каб')г; діатіла; лінійні антитіла; молекули одноланцюгових антитіл (наприклад, зсгм); і поліспецифічні антитіла, утворені з фрагментів антитіл.
ІЇ0052| «Клас» антитіла позначає тип константного домену або константної ділянки, що міститься у важкому ланцюзі антитіла. Існує п'ять основних класів антитіл: ІА, дО, ІДЕ, Ід і
ІОМ, причому деякі з них можуть бути додатково розділені на підкласи (ізотипи), наприклад,
Ідс, аг, Ідаз, ІДС, ІдАї і ІдА». Константні домени важкого ланцюга, що відповідають різним класам імуноглобулінів, називаються с, б, є, у і нм, відповідно.
ІЇ0053| «Виділене» антитіло є антитілом, яке було відокремлене від компонентів його природного оточення. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло очищають до чистоти більш ніж 9595 або 9995, за даними, наприклад, електрофоретичного (наприклад, 505-РАСЕ, ізоелектричне фокусування (ІЕФ), капілярний електрофорез) або хроматографічного способу (наприклад, іонообмінної або обернено-фазової ВЕРХ). Огляд способів оцінки чистоти антитіла, див., наприклад, у Ріайтап еї аї., У. Спготаїйодг. В 848: 79-87 (2007). (0054) Терміни «повнорозмірне антитіло», «інтактне антитіло» і «суцільне антитіло» у цьому документі використовуються взаємозамінним чином по відношенню до антитіла, що має структуру по суті подібну структурі нативного антитіла, або що містить важкі ланцюги, які містять ділянку Ес, визначену у цьому документі. 0055) Термін «моноклональне антитіло» у цьому документі позначає антитіло, одержане з популяції по суті гомогенних антитіл, тобто, окремі антитіла, що становлять популяцію, є ідентичними та/або зв'язуються з одним і тим же епітопом, за винятком можливих варіантів антитіл, наприклад, що містять природні або такі, що виникають в процесі виготовлення бо препарату моноклонального антитіла, мутації, причому такі варіанти звичайно присутні в мінорних кількостях. На відміну від препаратів поліклональних антитіл, що звичайно містять різні антитіла, спрямовані проти різних детермінант (епітопів), кожне моноклональне антитіло у препараті моноклонального антитіла спрямоване проти однієї детермінанти на антигені. Таким чином, модифікатор «моноклональний» вказує на характер антитіла як одержаного з по суті гомогенної популяції антитіл, і не повинен інтерпретуватися як такий, що вимагає одержання антитіла в будь-який конкретний спосіб. Наприклад, моноклональні антитіла для застосування у відповідності до даного винаходу можуть бути одержані за допомогою різних способів, зокрема, але не обмежуючись цим, гібридомним способом, способом рекомбінантної ДНК, способом фагового дисплею і способами із застосуванням трансгенних тварин, які несуть всі або частину локусів імуноглобуліну людини, причому такі способи та інші приклади способів одержання моноклональних антитіл описані у цьому документі.
ІЇ0056| «Гуманізоване» антитіло позначає химерні антитіла, що містять амінокислотні залишки нелюдських НУК і амінокислотні залишки людських ЕК. У деяких варіантах реалізації винаходу гуманізоване антитіло буде містити по суті всі із щонайменше одного і звичайно двох варіабельних доменів, у яких всі або в основному всі НМК (наприклад, СОК) відповідають ділянкам нелюдського антитіла, а всі або по суті всі ЕК відповідають ділянкам людського антитіла. Гуманізоване антитіло необов'язково може містити щонайменше частину константної ділянки антитіла, одержаного з антитіла людини. «Гуманізована форма» антитіла, наприклад, нелюдського антитіла, позначає антитіло, піддане гуманізації.
І0057| Термін «химерне» антитіло позначає антитіло, в якому частина важкого та/або легкого ланцюга одержана з конкретного джерела або виду, тоді як решта частини важкого та/або легкого ланцюга одержана з іншого джерела або виду.
Ї0058| «Людське антитіло» являє собою таке, що має амінокислотну послідовність, відповідну амінокислотній послідовності антитіла, продукованого в організмі людини або клітині людини або одержаного з нелюдського джерела із застосуванням репертуарів антитіл людини або інших послідовностей, що кодують людські антитіла. Із цього визначення людського антитіла конкретно виключено гуманізоване антитіло, яке містить антигензв'язуючі залишки, що не відносяться до людського антитіла. 0059) «Просте антитіло» позначає антитіло, не кон'юговане з гетерологічним фрагментом
Зо (наприклад, цитотоксичним фрагментом) або радіоактивною міткою. Просте антитіло може бути присутнім у фармацевтичній композиції. 0060) «Нативні антитіла» позначають існуючі в природі молекули імуноглобуліну з різними структурами. Наприклад, нативні до антитіла являють собою гетеротетрамерні глікопротеїни розміром близько 150000 дальтон, що складаються із двох ідентичних легких ланцюгів і двох ідентичних важких ланцюгів, зв'язаних дисульфідними містками. Від М- до С-кінця, кожен важкий ланцюг містить варіабельну ділянку (МН), що додатково називають варіабельним важким доменом або варіабельним доменом важкого ланцюга, і далі три константних ділянки (СНІ,
СН? ї СНЗ). Так само, від М- до С-кінця, кожен легкий ланцюг містить варіабельну ділянку (МІ), що додатково називають варіабельним легсим доменом або варіабельним доменом легкого ланцюга, і далі константний легкий (СІ) домен. Легкий ланцюг антитіла може бути віднесений до одного із двох типів, що мають назву капа (к) і лямбда (Х), на базі амінокислотних послідовностей їх константних доменів.
І00О61| Термін «варіабельна ділянка» або «варіабельний домен» позначає домен важкого або легкого ланцюга антитіла, який бере участь у зв'язуванні антитіла з антигеном. Варіабельні домени важкого ланцюга і легкого ланцюга (МН і МІ, відповідно) нативного антитіла, як правило, мають подібну структуру, причому кожен домен містить чотири консервативні каркасні ділянки (ЕК) і три гіперваріабельні ділянки (НУК) (Див., наприклад, Кіпаї еї аІ. Кибу Іттипо!оду, 6" ед.,
М.Н. Егеетап апа Со., раде 91 (2007)). Одного домену МН або Мі. може бути достатньо, щоб забезпечити антигензв'язуючу специфічність. Крім того, антитіла, що зв'язуються з конкретним антигеном, можуть бути виділені із застосуванням домену МН або У. антитіла, яке зв'язується з антигеном, для скринінгу бібліотеки комплементарних доменів Мі і МН, відповідно. Див., наприклад, Рогіоїапо еї аї., У. Іттипої. 150: 880-887 (1993); Сіатквоп еї аї., Маїште 352: 624-628 (1991).
ІЇ0062| «Каркасна ділянка» або «ЕК» позначає залишки варіабельного домену, окрім залишків гіперваріабельної ділянки (НУК). ЕЕ. варіабельного домену, як правило, складається із чотирьох ЕК доменів: ЕК1Т, ЕК2, ЕКЗ їі ЕК4. Відповідно, послідовності НМК і ЕК, як правило, з'являються у МН (або МІ) в наступній послідовності: ЕК1-НІ1(11)-ЕН2-Наг(І2)-ЕНЗ-НЗ(І 3)-ЕВА. 0063) Термін «гіперваріабельна ділянка» або «НМК» у цьому документі позначає кожну з ділянок варіабельного домену антитіла, послідовність («діляЯнкИи, що визначають 60 комплементарність» або СОК) та/або форми структурно визначених петель («гіперваріабельні петлі»), що є гіперваріабельними та/або які містять контактуючі з антигеном залишки («антигенні контакти»). Як правило, антитіла містять шість НМЕ: три у МН (НІ, Н2, НЗ) і три у М (1,12, 3). Приклади НМК згідно даного винаходу включають: (а) гіперваріабельні петлі в області амінокислотних залишків 26-32 (11), 50-52 (12), 91-96 (3), 26-32 (НІ), 53-55 (Н2) і 96-101 (НЗ) (Споїйіа апа І евК, У). Мої. Віої!. 196: 901-917 (1987)); (Б) СОК в області амінокислотних залишків 24-34 (І 1), 50-56 (І 2), 89-97 (І 3), 31-356 (НІ), 50- 65 (Н2) і 95-102 (НЗ) (Кабаї єї аї., Зедиепсез ої Ргоївїпв5 ої Іттипо/одісаї Іпіегеві, Бій Ей. Рибіїс
Неайй 5егуісе, Маїййопаї Іпзійшез ої Неанй, Веїпезаа, МО (1991)); (с) антигенні контакти в області амінокислотних залишків 27с-36 (І 1), 46-55 (І 2), 89-96 (І 3), 30-35Ь (НІ), 47-58 (Н2) і 93-101 (НЗ) (МасСаПшт еї а. У. Мої. Віої. 262: 732-745 (1996)); і (4) комбінації (а), (Б) та/або (с), зокрема амінокислотні залишки НМК 46-56 (12), 47-56 (І 2), 48-56 (І 2), 49-56 (І 2), 26-35 (НІ), 26-35Б (НІ), 49-65 (Н2г), 93-102 (НЗ) і 94-102 (НЗ).
Ї0064| Якщо не вказано інше, у цьому документі залишки НМК та інші залишки у варіабельному домені (наприклад, ЕК-залишки) пронумеровані відповідно до КарБбаї єї аї!., вище. 0065) В цьому документі термін «Ес» використовується для визначення С-кінцевої ділянки важкого ланцюга імуноглобуліну, яка містить щонайменше частину константної ділянки. Термін включає нативні послідовності ділянок Ес і варіантні ділянки Ес. В одному варіанті реалізації винаходу ділянка Ес важкого ланцюга (дО людини простягається від Субз226 або Рго230 до карбоксильного кінця важкого ланцюга. Однак, С-кінцевий лізин (І уз447) ділянки Ес може бути присутній або відсутній. Якщо не вказано інше, нумерація амінокислотних залишків ділянки Ес або константної ділянки наведена згідно системі нумерації ЄС, що також має назву індексу ЄС, як описано у КаБбаї єї аІ., Зедоепсе5 ої Ргоївіп5 ої Іттипоїодіса! Іпіегеві, Бій Ей. Рибіїс Неакн
Зегмісе, Маїййопаї Іпзійшез ої Неайй, Веїпезаа, МО, 1991. (0066) «Варіантна ділянка Ес» містить амінокислотну послідовність, яка відрізняється від нативної послідовності ділянки Ес наявністю щонайменше однієї модифікації амінокислоти, переважно заміни однієї або більше амінокислот. Переважно, варіантна ділянка Ес містить щонайменше одну заміну амінокислоти в порівнянні з нативною послідовністю ділянки Ес або з ділянкою Ес початкового поліпептиду, наприклад, від близько однієї до близько десяти замін амінокислот, і переважно від близько однієї до близько п'яти замін амінокислот у нативній послідовності ділянки Ес або у ділянці Ес початкового поліпептиду. Варіантна ділянка Ес згідно даного винаходу переважно повинна володіти щонайменше 8095 гомологією нативній послідовності ділянки Ес та/або ділянці Ес початкового поліпептиду, і, найбільш переважно, щонайменше близько 9095 гомологією вказаним послідовностям, більш переважно, щонайменше близько 9595 гомологією вказаним послідовностям.
І0067| «Консенсусний каркас людини» є каркасом, в якому представлені амінокислотні залишки у вибраних каркасних послідовностях МН або Мі імуноглобуліну людини, що найчастіше зустрічаються. Як правило, вибір послідовності МН або МІ. імуноглобуліну людини здійснюється з підгрупи послідовностей варіабельного домену. В цілому, підгрупа послідовностей є такою підгрупою, як наведено у Кабаї еї аЇ., бЗедиєпсе5 ої Ргоївіп5 ої
Іттипоїодіса! Іпієгев5і, РІШЩИ Еайоп, МІН Рибіїсайоп 91-3242, ВеШезаа МО (1991), моїв. 1-3. В одному з варіантів реалізації винаходу, у випадку МІ. підгрупа є підгрупою капа І, як наведено у
Кабаї єї а!., вище. В одному варіанті реалізації винаходу, у випадку МН підгрупа являє собою підгрупу ІІЇ, як наведено у КаБбаї єї а!ї., вище. (0068) «Акцепторний каркас людини» для цілей даного винаходу являє собою каркас, що містить амінокислотну послідовність каркаса варіабельного домену легкого ланцюга (МІ) або каркаса варіабельного домену важкого ланцюга (МН), одержаного із каркаса імуноглобуліну людини або консенсусного каркаса людини, як визначено нижче. Акцепторний каркас людини, «одержаний із» каркаса імуноглобуліну людини або консенсусного каркаса людини, може мати таку ж амінокислотну послідовність або він може містити модифікації амінокислотної послідовності. У деяких варіантах реалізації винаходу кількість модифікацій амінокислот становить 10 або менше, 9 або менше, 8 або менше, 7 або менше, 6 або менше, 5 або менше, 4 або менше, З або менше або 2 або менше. У деяких варіантах реалізації винаходу послідовність акцепторного каркаса людини Мі є ідентичною каркасній послідовності імуноглобуліну людини МІ. або консенсусній каркасній послідовності людини. 0069) «Афінність» позначає міцність загальної суми нековалентних взаємодій між одним сайтом зв'язування молекули (наприклад, антитіла) та її партнера по зв'язуванню (наприклад, антигену). Якщо не вказано інше, у цьому документі «афінність зв'язування» позначає справжню афінність зв'язування, яка відображає взаємодію 1:1 між членами пари, що зв'язується (наприклад, антитіла і антигену). Афінність молекули Х по відношенню до її бо партнера У загалом може бути представлена константою дисоціації (Ка). Афінність може бути виміряна звичайними способами, відомими в даній галузі техніки, включаючи описані у цьому документі. Конкретні ілюстративні і типові варіанти реалізації винаходу для вимірювання афінності зв'язування описані нижче. 0070) Антитіло із «зрілою афінністю» позначає антитіло, що містить одну або більше модифікацій в одній або більше гіперваріабельних ділянках (НУК) у порівнянні з початковим антитілом, що не містить таких модифікацій, причому такі модифікації приводять до покращення афінності антитіла до антигену.
ІЇ0071| «Зв'язуючий домен» позначає частину сполуки або молекули, яка специфічно зв'язується із цільовим епітопом, антигеном, лігандом або рецептором. Зв'язуючі домени включають, але не обмежуючись цим, антитіла (наприклад, моноклональні, поліклональні, рекомбінантні, гуманізовані і химерні антитіла), фрагменти антитіл або їх частини (наприклад, фрагменти Раб, Раб 2, 5сЕм антитіла, низькомолекулярні модульні імунофармацевтичні засоби (НМІФ), доменні антитіла, діатіла, мінітіла, 5сЕм-Ес, афітіла, нанотіла і МН та/або МІ домени антитіл), рецептори, ліганди, аптамери та інші молекули з ідентифікованим партнером по зв'язуванню.
І0072| «Ефекторні функції» позначають такі види біологічної активності, які відносять на рахунок ділянки Ес антитіла і які варіюють в залежності від ізотипу антитіла. Приклади ефекторних функцій антитіла включають: зв'язування С14 і комплементзалежну цитотоксичність (КЗЦ); зв'язування з рецептором Ес; антитілозалежну клітинно-опосередковану цитотоксичність (АЗКЦ); фагоцитоз; зниження активності рецепторів клітинної поверхні (наприклад, В-клітинний рецептор); і активацію В-клітин.
Ї0073| «Імунокон'югат» являє собою антитіло, кон'юговане з однією або більше гетерологічними молекулами, в тому числі, але не обмежуючись цим, цитотоксичний агент. (0074) Термін «цитотоксичний засіб» у цьому документі позначає речовину, яка інгібує або запобігає здійсненню функції клітин та/або спричиняє загибель або руйнування клітин.
Цитотоксичні агенти включають, але не обмежуючись цим, радіоактивні ізотопи (наприклад,
АТ, 81, 25, у, Ве"86, Де"88. пт! Віг12, рз2, рр! і радіоактивні ізотопи І и), хіміотерапевтичні агенти або лікарські засоби (наприклад, метотрексат, адріаміцин, алкалоїди барвінку (вінкристин, вінбластин, етопозид), доксорубіцин, мелфалан, мітоміцин С, хлорамбуцил,
Зо даунорубіцин або інші інтеркалюючі агенти), агенти, що інгібують ріст; ферменти і їх фрагменти, такі як нуклеолітичні ферменти, антибіотики; токсини, такі як низькомолекулярні токсини або ферментативно активні токсини бактеріального, грибкового, рослинного або тваринного походження, включаючи їх фрагменти та/або варіанти; і різні протипухлинні або протиракові агенти, описані нижче.
І0075| «Виділена» нуклеїнова кислота позначає молекулу нуклеїнової кислоти, яка була відокремлена від компоненту її природного оточення. Виділена нуклеїнова кислота включає молекулу нуклеїнової кислоти, що міститься у клітинах, які звичайно містять молекули нуклеїнової кислоти, причому молекула нуклеїнової кислоти знаходиться поза межами хромосоми або в локусі хромосоми, який відрізняється від її природного локусу у хромосомі.
І0076| «Виділена нуклеїнова кислота, що кодує анти-СО7906 антитіло» позначає одну або більше молекул нуклеїнової кислоти, які кодують важкий і легкий ланцюги антитіла (або їх фрагменти), включаючи таку(ї) молекулу(и) нуклеїнової кислоти в єдиному векторі або окремих векторах і таку(ї) молекулу(и) нуклеїнової кислоти в одному або декількох локусах у клітині- хазяїні.
І0077| «Виділена нуклеїнова кислота, що кодує анти-СОЗ антитіло» позначає одну або більше молекул нуклеїнової кислоти, що кодують важкий і легкий ланцюги антитіла (або їх фрагменти), включаючи таку(ї) молекулу(и) нуклеїнової кислоти в єдиному векторі або окремих векторах і таку(ї) молекулу(и) нуклеїнової кислоти в одному або декількох локусах у клітині- хазяїні.
І0078)| Термін «вектор» у цьому документі позначає молекулу нуклеїнової кислоти, здатну розмножувати іншу нуклеїнову кислоту, з якою вона зв'язана. Термін включає вектори як саморепліковані конструкції нуклеїнової кислоти, а також вектор, інкорпорований до геному клітини-хазяїна, у яку він був введений. Деякі вектори здатні спрямовувати експресію нуклеїнових кислот, з якими вони функціонально пов'язані. Такі вектори позначені як «вектори експресії».
ІЇ0079| Терміни «клітина-хазяїн», «лінія клітин-хазяїв» і «культура клітин-хазяїв» застосовуються взаємозамінним чином і позначають клітини, у які була введена екзогенна нуклеїнова кислота, включаючи потомство таких клітин. Клітки-хазяї включають «трансформанти» і «трансформовані клітини», які включають первинно трансформовані клітини 60 і одержане від них потомство, безвідносно до кількості пасажів. Потомство може не бути повністю ідентичним батьківській клітині з точки зору вмісту нуклеїнових кислот і може містити мутації. Мутантне потомство, яке виконує таку ж функцію або володіє такою ж біологічною активністю, щодо якої проводився скринінг або відбір початково трансформованої клітини, включено до цього винаходу.
І0О80| «Відсоток (95) ідентичності амінокислотної послідовності» відносно референтної послідовності поліпептиду визначається як відсоток амінокислотних залишків у послідовності- кандидаті, які є ідентичними амінокислотним залишкам у референтній поліпептидній послідовності, після вирівнювання послідовностей і при необхідності введення проміжків для досягнення максимального відсотка ідентичності послідовностей, без урахування будь-яких консервативних замін як частини ідентичності послідовностей. Вирівнювання з метою визначення відсотка ідентичності амінокислотних послідовностей може бути здійснене різними шляхами, які знаходяться в межах кваліфікації фахівця в цій галузі техніки, наприклад, із застосуванням загальнодоступних комп'ютерних програм, таких як ВІ А5Т, ВІ А5ЗТ-2, АГІСМ або
Медаїїдп (ОМАБЗТАК). Фахівці в цій галузі можуть визначити відповідні параметри для вирівнювання послідовностей, включаючи будь-які алгоритми, необхідні для досягнення максимального вирівнювання по всій довжині порівнюваних послідовностей. Для цілей даного винаходу, однак, значення 95 ідентичності амінокислотних послідовностей генеруються із застосуванням комп'ютерної програми для порівняння послідовностей АЇ ЇМ-2. Комп'ютерна програма для порівняння послідовностей АЇЇМ-2 була створена компанією Сепепієсі, Іпс., і початковий код був поданий разом з документацією для користувачів в Бюро реєстрації авторських прав США, Вашингтон, округ Колумбія, 20559, де він був зареєстрований (реєстрація авторського права США Мо ТХО510087). Програма АГІСМ-2 публічно доступна в
Сепепіес!, Іпс, Південний Сан-Франциско, Каліфорнія або може бути скомпільована із початкового коду. Програму АГІСМ-2 слід компілювати для використання в операційній системі
МІХ, включаючи цифрову ШМІХ М4.00. Всі параметри порівняння послідовностей задані програмою АГІСМ-2 і не варіюються.
ІЇ0О81| У ситуаціях, де АГІ2аМ-2 застосовується для порівняння амінокислотних послідовностей, 95 ідентичності амінокислотних послідовностей між вказаною амінокислотною послідовністю А і вказаною амінокислотною послідовністю В (може бути альтернативно виражений як те, що вказана амінокислотна послідовність А володіє або містить визначений 95 ідентичності амінокислотної послідовності з вказаною амінокислотною послідовністю В) обчислюють наступним чином: 100 помножити на дріб Х/у де Х є кількістю амінокислотних залишків, підрахованих у вигляді ідентичних збігів за допомогою програми співставлення послідовностей АГ ІОМ-2, в якій співставляють ЛіВ,а м є загальною кількістю амінокислотних залишків у В. Необхідно розуміти, що якщо довжина амінокислотної послідовності А не є рівною довжині амінокислотної послідовності В, то 90 ідентичності амінокислотної послідовності А з послідовністю В не буде дорівнювати 95 ідентичності амінокислотної послідовності В з послідовністю А. Якщо конкретно не вказано інше, всі значення відсотка ідентичності амінокислотних послідовностей, застосовувані у цьому документі, одержані, як описано в попередньому параграфі, із застосуванням комп'ютерної програми АСГІСМ-2.
І0082| Термін «фармацевтичний препарат» позначає препарат, що має таку форму, яка забезпечує ефективний прояв біологічної активності активного інгредієнта, що міститься в ньому, і яка не містить додаткових компонентів, неприйнятно токсичних для суб'єкта, якому повинен вводитися препарат.
ІЇ0083| «Фармацевтично прийнятний носій» позначає інгредієнт у фармацевтичному препараті, який не є активним інгредієнтом, і, при цьому, є нетоксичним для суб'єкта.
Фармацевтично прийнятний носій включає, але не обмежується цим, буфер, наповнювач, стабілізатор або консервант.
І0084| «Ефективна кількість» агента, наприклад, фармацевтичного препарату, позначає кількість, ефективну для досягнення бажаного терапевтичного або профілактичного результату в необхідних дозах і протягом необхідних періодів часу. Ефективна кількість згідно цього винаходу може варіювати відповідно до таких факторів, як патологічний стан, вік, стать і маса тіла пацієнта, а також здатність антитіла викликати бажану відповідь у індивіда. Крім того, ефективна кількість є такою, при якій терапевтично сприятливі ефекти переважають будь-які токсичні або шкідливі ефекти лікування. У випадку профілактичного застосування відповідні або необхідні результати включають такі результати як усунення або зниження ризику, зниження тяжкості або відтерміновування в часі розвитку захворювання, включаючи біохімічні, гістологічні 60 та/або поведінкові симптоми захворювання, його ускладнення і проміжні патологічні фенотипи,
що виявляються в ході розвитку захворювання. У випадку терапевтичного застосування, відповідні або необхідні результати включають клінічні результати, такі як зменшення одного або декількох симптомів, що є результатом захворювання, підвищення якості життя того, хто страждає на захворювання, зниження дози інших лікарських засобів, необхідних для лікування захворювання, підвищення ефективності іншого препарату, наприклад, шляхом націлювання, уповільнення розвитку захворювання та/або збільшення тривалості життя. У випадку раку або пухлини ефективна кількість лікарського засобу може викликати відповідь у формі зменшення кількості ракових клітин; зменшення розміру пухлини; пригнічення (тобто, зниження до певної міри і переважно зупинки) інфільтрації раковими клітинами периферичних органів; пригнічення (тобто, зниження до певної міри і переважно зупинки) метастазування пухлини; пригнічення до певної міри росту пухлини; та/"або пом'якшення до певного ступеня одного або більше симптомів, пов'язаних із захворюванням. Ефективну кількість можна вводити в один або більше прийомів. Для цілей даного винаходу ефективна кількість лікарського засобу, сполуки або фармацевтичної композиції є кількістю, достатньою для досягнення профілактичного або терапевтичного ефекту, прямо або непрямо. Як прийнято розуміти в клінічному контексті, ефективна кількість лікарського засобу, сполуки або фармацевтичної композиції може бути або не бути досягнута в поєднанні з іншим лікарським засобом, сполукою або фармацевтичною композицією. Таким чином, «ефективну кількість» можна розглядати в контексті введення одного або більше терапевтичних агентів, і можна вважати, що єдиний агент вводиться в ефективній кількості, якщо в поєднанні з одним або більше інших агентів може бути досягнутий або досягається бажаний результат.
І0085| У цьому документі «лікування» (і його граматичні форми, такі як «лікувати» або «процес лікування») позначає клінічне втручання у спробі змінити природний хід подій в організмі індивіда, що підлягає лікуванню, яке може проводитися для профілактики або в ході клінічної патології. Бажані ефекти лікування включають, але не обмежуючись цим, запобігання виникненню або рецидиву захворювання, пом'якшення симптомів, зниження тяжкості будь-яких прямих або непрямих патологічних наслідків захворювання, запобігання метастазуванню, зниження швидкості прогресування захворювання, покращення або тимчасове полегшення патологічного стану і ремісію або покращення прогнозу. У деяких варіантах реалізації винаходу
Зо антитіла за винаходом застосовують для відтерміновування в часі розвитку захворювання або для уповільнення прогресування захворювання. (0086) У цьому документі «уповільнення прогресування» розладу або захворювання означає відтерміновувати в часі, перешкоджати, сповільнювати, затримувати, стабілізувати та/або відстрочити розвиток захворювання або розладу (наприклад, розладу клітинної проліферації, такого як рак). Вказане уповільнення може варіювати за тривалістю в залежності від анамнезу захворювання та/або суб'єкта, що підлягає лікуванню. Як буде очевидним для фахівця в цій галузі техніки, достатнє або значне уповільнення може в дійсності включати запобігання в тому значенні, що у індивіда не розвивається захворювання. Наприклад, пізню стадію раку, таку як розвиток метастазів, може бути відтерміновано в часі.
І0087| «Зменшувати» або «пригнічувати» означає здатність спричиняти загальне зниження, наприклад, на 2095 або більше, на 5095 або більше або на 7595, 8595, 9095, 9595 або більше. У деяких варіантах реалізації винаходу зменшувати або інгібувати може позначати ефекторну функцію антитіла, опосередковану ділянкою Ес антитіла, причому такі ефекторні функції конкретно включають комплементзалежну цитотоксичність (КЗЦ), антитілозалежну клітинну цитотоксичність (АЛСС) і антитілозалежний клітинний фагоцитоз (АЗКФ). 0088) «Хіміотерапевтичний агент» позначає хімічну сполуку, придатну для лікування раку.
Приклади хіміотерапевтичних агентів включають алкілувальні агенти, такі як тіотепа і циклофосфамід (СУТОХАМФ); алкілсоульфонати, такі як бусульфан, імпросульфан і піпосульфан; азиридини, такі як бензодопа, карбоквон, метуредопа і уредопа; етиленіміни і метиламеламіни, включаючи альтретамін, триетиленмеламін, триетиленфосфорамід, триетилентіофосфорамід і триметиломеламін; ацетогеніни (особливо булатацин «і булатацинон); дельта-9-тетрагідроканабінол (дронабінол, МАКІМОЇ Ф)); бета-лапахон; лапахол; колхіцини; бетулінову кислоту; камптотецин (включаючи синтетичний аналог топотекан (НУСАМТІМФЕ), СРТ-11 (іринотекан, САМРТОБАКФ)), ацетилкамтотецин, скополектин і 9- амінокамптотецин); бріостатин; калістатин; СС-1065 (включаючи його синтетичні аналоги адозелезин, карзелезин і бізелезин); подофілотоксин; подофілінову кислоту; теніпозид; криптофіцини (особливо криптофіцин 1 і криптофіцин 8); доластатин; дуокарміцин (включаючи синтетичні аналоги, КМУ-2189 і СВ1-ТМІ1); елеутеробін; панкратистатин; саркодиктіїн; спонгістатин; похідні іпритного нітрогену, такі як хлорамбуцил, хлорнафазин, хлорофосфамід, бо естрамустин, іфосфамід, мехлоретамін, гідрохлорид оксиду мехлоретаміну, мелфалан,
новембіхін, фенестерин, преднімустин, трофосфамід, іпритний урацил; похідні нітросечовини, такі як кармустин, хлорозотоцин, фотемустин, ломустин, німустин і ранімнустин; антибіотики, такі як енедіїнові антибіотики (наприклад, каліхеаміцин, особливо каліхеаміцин гама 11 і каліхеаміцин омега 11 (див., наприклад, Місоїаои еї аї., Апдем/. Спет Іпії. Е4Я. Епао!ї., 33: 183-186 (1994)); СОРЗ323, пероральний інгібітор альфа-4 інтегрину; динеміцин, включаючи динеміцин А; еспераміцин; а також неокарциностатиновий хромофор і споріднені хромофори хромопротеїнів енедіїнових антибіотиків), аклациномізини, актиноміцин, аутраміцин, азасерин, блеоміцини, кактиноміцин, карабіцин, карміноміцин, карцинофілін, хромоміцини, дактиноміцин, даунорубіцин, деторубіцин, б-діазо-5-оксо-І -норлейцин, доксорубіцин (включаючи
АОКІАМУСІМФ, морфолінодоксорубіцин, ціаноморфолінодоксорубіцин, 2-піролінодоксорубіцин, ліпосомальний доксорубіцин НСІ для ін'єкцій (СОХІЇ Ф), ліпосомальний доксорубіцин ТІ С 0-99 (МУОСЕТФ)), пегільований ліпосомальний доксорубіцин (САЕЇ УХФ) і дезоксидоксорубіцин), епірубіцин, езорубіцин, ідарубіцин, марцеломіцин, мітоміцини, такі як мітоміцин С, мікофенольна кислота, ногаламіцин, оливоміцини, пепломіцин, порфіроміцин, пуроміцин, квеламіцин, родорубіцин, стрептонігрин, стрептозоцин, туберцидин, убенімекс, зиностатин, зорубіцин; антиметаболіти, такі як метотрексат, гемцитабін (ЗЕМ7АКЗУ), тегафур (ШЕТОВАЇІ Ф), капецитабін (ХЕГОБАФ), епотилон і 5-флуорурацил (5-ЕУ); аналоги фолієвої кислоти, такі як деноптерин, метотрексат, птероптерин, триметрексат; аналоги пурину, такі як флударабін, 6- меркаптопурин, тіаміприн, тіогуанін; аналоги піримідину, такі як амцитабін, азацитидин, 6- азауридин, кармофур, цитарабін, дидезоксиуридин, доксифлуридин, еноцитабін, флоксуридин; андрогени, такі як калустерон, дромостанолону пропіонат, епітіостанол, мепітіостан, тестолактон; засоби, що пригнічують функцію наднирників, такі як аміноглютетімід, мітотан, трилостан; аналоги фолієвої кислоти, такі як фролінова кислота; ацеглатон; глікозид альдофосфаміду; амінолевулінову кислоту; енілурацил; амсакрин; бестрабуцил; бісантрен; едатраксат; дефофамін; демеколцин; діазиквон; елфорнітин; еліптиній ацетат; епотилон; етоглюцид; галій нітрат; гідроксисечовину; лентінан; лонідайнін; майтансиноїди, такі як майтансин і ансамітоцини; мітогуазон; мітоксантрон; мопідамол; нітраерин; пентостатин; фенамет; пірарубіцин; лозоксантрон; 2-етилгідразид; прокарбазин; полісахаридний комплекс
РБКФ (ОН Маїйшга! Ргодисі5, Юджин, Орегон); разоксан; ризоксин; сизофіран; спірогерманій;
Зо тенуазонову кислоту; триазиквон; 2,2,2"-трихлортриетиламін; трихотецени (особливо токсин Т- 2, веракурин А, роридин А і ангуїдин); уретан; віндезин (ЕІ ОІ5БІМЕФ, РІГОЕЗБІМФ)); дакарбазин; маномустин; мітобронітол; мітолактол; піпоброман; гацитозин; арабінозид («Ага-С»); тіотепа; таксоїд, наприклад, паклітаксел (ТАХОЇ Ф), модифікований альбуміном препарат наночастинок паклітакселу (АВКАХАМЕТМ) і доцетаксел (ТАХОТЕКЕФ); хлорамбуцил; б-тіогуанін; меркаптопурин; метотрексат; похідні платини, такі як цисплатин, оксаліплатин (наприклад,
ЕГОХАТІМФ) і карбоплатин; алкалоїди барвінку, які запобігають полімеризації тубуліну при утворенні мікротрубочок, включаючи вінбластин (МЕ ВАМФ)), вінкристин (ОМСОМІМФ)), віндезин (ЕГОІБІМЕФ, РІ ОЕЗІМФ) і вінорельбін (МАМЕЇ ВІМЕФ); етопозид (МР-16); іфосфамід; мітоксантрон; лейковорин; новантрон; едатрексат; дауноміцин; аміноптерин; ібандронат; інгібітор топоїзомерази КЕ5 2000; дифлуорметилорнітин (ОМЕО); ретиноїди, такі як ретиноєва кислота, включаючи бексаротен (ТАКОКЕТІМФ)); біфосфонати, такі як клодронат (наприклад,
ВОМЕРОБФ або О5ТАСФ), етидронат (СІОКОСАЇ Ф), МЕ-58095, золедронова кислота/золедронат (ДОМЕТАФ)), алендронат (ЕОБАМАХФ)), памідронат (АКЕОСІАФ), тилудронат (ЗКЕЛЮОФ) або ризедронат (АСТОМЕЇГ Є); троксацитабін (аналог 1,3-діоксоланового нуклеозиду цитозину); антисмислові олігонуклеотиди, особливо ті, які інгібують експресію генів у шляхах передачі сигналів, що беруть участь в аберантній проліферації клітин, таких як, наприклад,
РКо-альфа, Каї, Н-Ках і рецептор епідермального фактора росту (ЕСЕ-К); вакцини, такі як вакцина ТНЕКАТОРЕФ і вакцини генної терапії, наприклад, вакцина АГ ОМЕСТІМФ), вакцина
ГЕОМЕСТІМФ і вакцина МАХІОФ»; інгібітор топоіїзомерази 1 (наприклад, ГОЕТОТЕСАМФ); гткКН (наприклад, АВАКЕЇІХФ); ВАМ439006 (сорафеніб; Вауег); 50И-11248 (сунітиніб, ЗОТЕМТФ,
Ріїгеї); перифозин, інгібітор ЦОГ-2 (наприклад, целекоксиб або еторикоксиб), інгібітор протеасоми (наприклад, РБЗ341); бортезоміб (МЕ! САОЕФ); ССІ-779; типіфарніб (К11577); орафеніб, АВТ510; інгібітор ВсіІ-2, такий як облімерсен-натрій (ЗЕМАБЕМ5ЕФ); піксантрон; інгібітори ЕСЕК (див. визначення нижче); інгібітори тирозинкінази; інгібітори серин- треонінкінази, такі як рапаміцин (сиролімус, КАРАМОМЕФ)); інгібітори фарнезилтрансферази, такі як лонафарніб (ЗСН-6636, БАВАЗАВТМ); і фармацевтично прийнятні солі, кислоти або похідні будь-якого із вказаних вище; а також комбінації двох або більше із вказаних вище, такі як
СНОР, абревіатура для комбінованої терапії циклофосфамідом, доксорубіцином, вінкристином і преднізолоном; і БОЇ РОХ, абревіатура для лікування оксаліплатином (ЕГОХАТІМТМ) у 60 поєднанні з 5-ФУ і лейковорином.
І0089| Хіміотерапевтичні агенти, як визначено у цьому документі, включають «антигормональні агенти» або «ендокринні терапевтичні засоби», дія яких спрямована на регуляцію, зниження, блокування або пригнічення дії гормонів, здатних стимулювати ріст раку.
Вони самі по собі можуть бути гормонами, зокрема, але не обмежуючись цим: антиестрогени із змішаним профілем агоністу/антагоністу, включаючи тамоксифен (МОЇ! МАОЕХФ), «4- гідрокситамоксифен, тореміфен (БАКЕБЗТОМФ), ідоксифен, дролоксифен, ралоксифен (ЕМІЗТАФ) триоксифен, кеоксифен, і селективні модулятори естрогенових рецепторів (ЗЕКМ) такі як 5БЕКМ3З; чисті антиестрогени, без агоністичних властивостей, такі як фулвестрант (ГАБІ ОСОЕХФ) і ЕМ800 (такі агенти можуть блокувати димеризацію естрогенових рецепторів (ЕР), інгібувати зв'язування з ДНК, прискорювати обіг ЕР та/або знижувати рівні ЕР); інгібітори ароматази, включаючи стероїдні інгібітори ароматази, такі як форместан, екземестан (АКОМАБІМФ)), і нестероїдні інгібітори ароматази, такі як анастрозол (АКІМІСЕХФ), летрозол (ГЕМАКАФ) і аміноглютетімід, та інші інгібітори ароматази, включаючи ворозол (КІМІБОКФ)), мегестролу ацетат (МЕСАЗЕФ), фадрозол і 4(5)-імідазоли, агоністи лютеїнізуючого рилізінг- гормону, включаючи лейпролід (| ОРМКОМФ і ЕГПІЗАКОФ)), гозерелін, бузерелін і триптерелін; статеві стероїди, включаючи прогестини, наприклад, медроксипрогестерону ацетат і мегестролу ацетат, естрогени, такі як діетилстільбестрол і премарин, та андрогени/ретиноїди, такі як флуоксиместерон, трансретиноєва кислота і фенретинід; онапристон; антипрогестерони; супресори естрогенових рецепторів (СЕР); антиандрогени, такі як флутамід, нілутамід і бікалутамід; і фармацевтично прийнятні солі, кислоти або похідні будь-якого із вказаних вище, а також комбінації двох або більше із вказаних вище.
І0090) Термін «імуносупресивний агент», застосовуваний у цьому документі для позначення допоміжної терапії, позначає речовини, дія яких направлена на пригнічення або маскування імунної системи ссавця, що підлягає лікуванню. Вони можуть включати речовини, що пригнічують продукування цитокинів, знижують або пригнічують експресію аутоантигену або маскують антигени основного комплексу гістосумісності (ОКГ). Приклади таких агентів включають 2-аміно-6-арил-5-заміщені піримідини (див. патент США Мо 4665077); нестероїдні протизапальні препарати (НПЗП); ганцикловір, такролімус, глюкокортикоїди, такі як кортизол або альдостерон, протизапальні агенти, такі як інгібітор циклооксигенази, інгібітор 5-
Зо ліпоксигенази, антагоніст рецепторів лейкотрієну; пуринові антагоністи, такі як азатіоприн або мікофенолят мофетил (ММФ); алкілувальні агенти, такі як циклофосфамід; бромкриптин; даназол; дапсон; глутаровий альдегід (який маскує антигени ОКГ, як описано у патенті США Мо 4120649); антиідіотипові антитіла для антигенів ОКГ і фрагментів ОКГ; циклоспорин А; стероїди, такі як кортикостероїди або глюкокортикостероїди або аналоги глюкокортикоїдів, наприклад, преднізон, метилпреднізолон, включаючи 501 0О-МЕОКОЇ Є), метилпреднізолон натрій сукцинат і дексаметазон; інгібітори дигідрофолатредуктази, такі як метотрексат (перорально або підшкірно); протималярійні засоби, такі як хлорохін і гідроксихлорохін; сульфасалазин; лефлуномід; антитіла рецептора цитокіну або цитокінів, зокрема антитіла проти інтерферону- альфа, -бета або -гама, антитіла проти пухлинного некротичного фактору (ТМЕ)-альфа- (інфліксимаб (КЕМІСАЮСЕФ) і адалімумаб), проти ТМЕ-альфа імуноадгезину (етанерсепт), антитіла проти ТМЕ-бета, антитіла проти інтерлейкіну-2 (ІІ--2) і антитіла проти рецептора ІІ -2 та антитіла і антагоністи проти рецептора інтерлейкіну-6 (ІІ -6) (такі як АСТЕМКА "М (тоцилізумаб)); анти-Г ЕА-1-антитіла, включаючи анти-СО11а, анти-СО18 антитіла; анти-І 314 антитіла; гетерологічний антилімфоцитарний глобулін; антитіла рап-Т, переважно анти-СОЗ або анти- сра/СО4а антитіла; розчинний пептид, що містить ГЕА-З-зв'язуючий домен (М/О 90/08187, опублікована 7/26/90); стрептокіназу; трансформуючий фактор росту бета (ТОБ-бета); стрептодомазу; РНК або ДНК хазяїна; ЕК5О6б; К5-61443; дезоксиспергуалін; хлорамбуцил; рапаміцин; Т-клітинний рецептор (Сопеп із співавт, патент США Мо 5114721); фрагменти Т- клітинного рецептора (Ойпег вї аї!., Зсівєпсе, 251: 430-432 (1991); МО 90/11294; Іапеулау, Маїшге, 341: 482 (1989); ї МО 91/01133), антагоністи фактору активації В-лімфоцитів (ВАЕР), такі як антитіла проти ВАЕРЕ, антитіла проти ВЕЗ і антагоністи 7ТМЕ4 (огляд див. у МасКау апа МаскКау,
Тгепав Іттипої., 23: 113-5 (2002), а також див. визначення нижче); біологічні агенти, які перешкоджають проведенню сигналів хелперних Т-клітин, такі як антитіла проти рецептора
СбОр40 або ліганду СО40 (СО154), зокрема, блокуючі антитіла проти СО40-ліганду СО40 (наприклад, ЮОипе еї аї., Зсіеєпсе, 261: 1328-30 (1993); Монап еї аї., У. Іттипої., 154: 1470-80 (1995)) ії СТІ А4-ІД (РіпсК єї аїЇ., Зсієпсе, 265: 1225-7 (1994)); і антитіла проти Т-клітинного рецептора (ЕР 340109), такі як Т1089. Деякі переважні імуносупресивні агенти включають циклофосфамід, хлорамбуцил, азатіоприн, лефлуномід, ММФ або метотрексат. 0091) Термін «антагоніст зв'язування по осі РО-1» позначає молекулу, яка інгібує взаємодію бо партнера по зв'язуванню по осі РО-1 з одним або більше його партнерами по зв'язуванню,
таким чином, щоб усунути дисфункцію Т-клітин, яка виникає в результаті проведення сигналу по осі проведення сигналу РО-1, результатом чого є відновлення або підсилення функції Т-клітин (наприклад, проліферація, продукування цитокінів, цільова загибель клітин). У цьому документі антагоніст зв'язування по осі РО-1 включає антагоніст зв'язування з РО-1, антагоніст зв'язування з РО-1| 1 і антагоніст зв'язування з РО-І 2. (0092) Термін «антагоніст зв'язування з РО-1» позначає молекулу, яка зменшує, блокує, інгібує, виключає або перешкоджає трансдукції сигналу в результаті взаємодії РО-1 з одним або більше його партнерами по зв'язуванню, такими як РО-11, РО-І2. У деяких варіантах реалізації винаходу антагоніст зв'язування з РО-1 є молекулою, яка інгібує зв'язування РО-1 з одним або більше його партнерами по зв'язуванню. У конкретному аспекті антагоніст зв'язування з РО-1 інгібує зв'язування РО-1 із РО-І1 та/або РО-І2. Наприклад, антагоністи зв'язування з РО-1 включають антитіла проти РО-1, антигензв'язуючі фрагменти, імуноадгезини, химерні білки, олігопептиди та інші молекули, які знижують, блокують, інгібують, виключають або перешкоджають трансдукції сигналу в результаті взаємодії РО-1 з РО-1І1 та/або РО-І2. В одному варіанті реалізації винаходу антагоніст зв'язування з РО-1 зменшує негативний костимулювальний сигнал, що опосередкований або проводиться білками клітинної поверхні, експресованими на Т-лімфоцитах, опосередкований проведенням сигналу через РО-1, щоб зробити дисфункцію Т-клітин менш вираженою (наприклад, підсилення ефекторних відповідей на розпізнавання антигену). У деяких варіантах реалізації винаходу, антагоніст зв'язування з
РО-1 є антитілом проти РО-1. У конкретному аспекті антагоніст зв'язування з РО-1 являє собою
МОХ-1106 (ніволумаб), описаний у цьому документі. В іншому конкретному аспекті антагоніст зв'язування з РО-1 являє собою МК-3475 (ламбролізумаб), описаний у цьому документі. В іншому конкретному аспекті антагоніст зв'язування РО-1 являє собою СТ-011 (підилізумаб), описаний у цьому документі. В іншому конкретному аспекті антагоніст зв'язування з РО-1 являє собою АМР-224, описаний у цьому документі. (0093) Термін «антагоніст зв'язування з РО-І 1» позначає молекулу, яка зменшує, блокує, інгібує, виключає або перешкоджає трансдукції сигналу в результаті взаємодії РО-І 1 з одним або більше його партнерами по зв'язуванню, таких як РО-1, В7-1. У деяких варіантах реалізації винаходу антагоніст зв'язування з РО-І1 є молекулою, яка інгібує зв'язування РО-Ї1 з його
Зо партнерами по зв'язуванню. У конкретному аспекті антагоніст зв'язування з РО-11 інгібує зв'язування РО-Ї1 з РО-1 та/або В7-1. У деяких варіантах реалізації винаходу антагоністи зв'язування з РО-Ї7 включають антитіла проти РО-І1, антигензв'язуючі фрагменти, імуноадгезини, химерні білки, олігопептиди та інші молекули, які знижують, блокують, інгібують, виключають або перешкоджають трансдукції сигналу в результаті взаємодії РО-11 з одним або більше його партнерами по зв'язуванню, таких як РО-1, В7-1. В одному варіанті реалізації винаходу антагоніст зв'язування з РО-Ї1 зменшує негативний костимулювальний сигнал, що опосередкований або проводиться білками клітинної поверхні, експресованими на Т- лімфоцитах, опосередкований проведенням сигналу через РО-І1, щоб зробити дисфункцію Т- клітин менш вираженою (наприклад, підсилення ефекторних відповідей на розпізнавання антигену). У деяких варіантах реалізації винаходу, антагоніст зв'язування з РО-І1 є антитілом проти РО-11. У конкретному аспекті антитіло проти РО-І 1 являє собою Ууу243.55.570, описане у цьому документі. В іншому конкретному аспекті антитіло проти РО-І/ 1 являє собою МОХ-1105, описане у цьому документі. У ще одному конкретному аспекті антитіло проти РО-І1 являє собою МРОЇ 3280А, описане у цьому документі. У ще одному конкретному аспекті антитіло проти РО-11 являє собою МЕОІ4736, описане у цьому документі. (0094) Термін «антагоніст зв'язування з РО-І 2» позначає молекулу, яка зменшує, блокує, інгібує, виключає або перешкоджає трансдукції сигналу в результаті взаємодії РО-І2 з одним або більше його партнерами по зв'язуванню, таких як РО-1. У деяких варіантах реалізації винаходу антагоніст зв'язування з РО-1І2 є молекулою, яка інгібує зв'язування РО-12 з одним або більше його партнерами по зв'язуванню. У конкретному аспекті антагоніст зв'язування з РО-
Ї2 інгібує зв'язування РО-Ї2 з РО-1. У деяких варіантах реалізації винаходу антагоністи зв'язування з РО-Ї2 включають антитіла проти РО-12, антигензв'язуючі фрагменти, імуноадгезини, химерні білки, олігопептиди та інші молекули, які знижують, блокують, інгібують, виключають або перешкоджають трансдукції сигналу в результаті взаємодії РО-12 з одним або більше його партнерами по зв'язуванню, таких як РО-1. В одному варіанті реалізації винаходу антагоніст зв'язування з РО-Ї2 зменшує негативний костимулювальний сигнал, що опосередкований або проводиться білками клітинної поверхні, експресованими на Т- лімфоцитах, опосередкований проведенням сигналу через РО-І2, щоб зробити дисфункцію Т- клітин менш вираженою (наприклад, підсилення ефекторних відповідей на розпізнавання антигену). У деяких варіантах реалізації винаходу, антагоніст зв'язування з РО-І2 є імуноадгезином.
І0095| Термін «пухлина» позначає будь-який неопластичний ріст і проліферацію клітин, злоякісну або доброякісну, і всі передракові і ракові клітини і тканини. Терміни «рак», «раковий», «розлад клітинної проліферації», «проліферативний розлад» і «пухлина» у цьому документі не є взаємовиключними. 0096) Терміни «розлад клітинної проліферації» і «проліферативний розлад» позначають розлади, пов'язані з певною мірою аномальної проліферації клітин. В одному варіанті реалізації винаходу порушення клітинної проліферації є раком.
І0097| Терміни «рак» і «раковий» позначають або описують фізіологічний стан у ссавців, який звичайно характеризується нерегульованим ростом/проліферацією клітин. Приклади раку включають, але не обмежуються цим, карциному, лімфому (наприклад, лімфому Ходжкіна і неходжкінську лімфому, бластому, саркому і лейкоз).
І0098| Терміном «В-клітинний проліферативний розладі» позначаються розлади, які пов'язані з певною мірою аномальної проліферації В-клітин. В одному варіанті реалізації винаходу В-клітиннний проліферативний розлад є злоякісною пухлиною. (00991) «В-клітинний проліферативний розлад» включає хворобу Ходжкіна, зокрема хворобу
Ходжкіна з лімфоцитарним переважанням (ХХЛП); неходжкінську лімфому (НХЛ); фолікулярні лімфоми центральних клітин (ФІЦК); гострий лімфоцитарний лейкоз (ГЛЛ); хронічний лімфоцитарний лейкоз (ХЛЛ); волосатоклітинний лейкоз. Неходжкінська лімфома, зокрема, включає високодиференційовану/фолікулярну неходжкінську лімфому (НХЛ), мілкоклітинну НХЛ (МК-НХЛ); середньодиференційовану/фолікулярну НХЛ; середньодиференційовану дифузну
НХЛ, низькодиференційовану імунобластну НХЛ, низькодиференційовану лімфобластну НХЛ, низькодиференційовану НХЛ малих клітин з нерозщепленим ядром, генералізовану НХЛ, плазмоцитоїдну лімфоцитарну лімфому, мантійноклітинну лімфому, пов'язану із СНІДом лімфому і макроглобулінемію Вальденстрема. Лікування рецидивів вказаних ракових захворювань також включене. ХХЛП є видом хвороби Ходжкіна, що має тенденцію до частих рецидивів, незважаючи на опромінення або хіміотерапію. ХЛЛ є одним з чотирьох основних типів лейкозу. Рак зрілих В-клітин під назвою лімфоцити, ХЛЛ, виявляється поступовим
Зо накопиченням клітин у крові, кістковому мозку і лімфатичних тканинах. Уповільнена лімфома є повільно прогресуючим, невиліковним захворюванням, при якому середня тривалість життя пацієнта становить від шести до 10 років після численних періодів ремісії і рецидивів.
ІО100| Термін «неходжкінська лімфома» або «НХЛ» у цьому документі позначає рак лімфатичної системи, відмінний від ходжкінських лімфом. Ходжкінські лімфоми, як правило, можна відрізнити від неходжкінських лімфом за наявністю клітин Рід-Стернберга при ходжкінських лімфомах і відсутністю вказаних клітин при неходжкінських лімфомах. Приклади неходжкінських лімфом, включених у цей термін у цьому документі, включають будь-які, що можуть бути ідентифіковані як такі фахівцем в даній галузі техніки (наприклад, онкологом або патологоанатомом), відповідно до відомих з рівня техніки схем класифікації, таких як
Виправлена європейсько-американська схема лімфоми (ВЕАЛ), описана у Соог Айаз ої Сііпіса!
Нетаїйо!іоду, Тпіга Еайіоп; А. Місюг Нойргапа апа донп Е. Рейції (еав5.) (Нагсошг РибіївНегз І ітйеа 2000) (див., зокрема Фіг. 11.57, 11.58 та/або 11.59). Більш конкретні приклади включають, але не обмежуються цим, рецидивуючу або рефрактерну НХЛ, граничну високодиференційовану
НХЛ, НХЛ Стадії ШИ/М, резистентну до хіміотерапії НХЛ, лімфобластний лейкоз та/або лімфому прекурсорів В-клітин, мілкоклітинну лімфоцитарну лімфому, В-клітинний хронічний лімфоцитарний лейкоз та/"або пролімфоцитарний лейкоз та/або мілкоклітинну лімфоцитарну лімфому, пролімфоцитарну лімфому В-клітин, імуноцитому та/або лімфоплазмацитарну лімфому, В-клітинну лімфому маргінальної зони, селезінкову лімфому маргінальної зони, позавузлову лімфому маргінальної зони МАТ, вузлову лімфому маргінальної зони, волосатоклітинний лейкоз, плазмацитому та/або мієлому клітин плазми, високодиференційовану/фолікулярну лімфому, середньодиференційовану/фолікулярну НХЛ, мантійноклітинну лімфому, центральну фолікулярну лімфому, середньодиференційовану дифузну НХЛ, дифузну крупноклітинну В-клітинну лімфому, агресивну НХЛ (включаючи агресивну граничну НХЛ і агресивну рецидивуючу НХЛ), рецидивуючу після трансплантації або резистентну до трансплантації аутогенних стовбурних клітин НХЛ, первинну медіастинальну крупноклітинну В-клітинну лімфому, лімфому первинного випоту, низькодиференційовану імунобластну НХЛ, низькодиференційовану лімфобластну НХЛ, низькодиференційовану мілкоклітинну НХЛ з нерозщепленим ядром, генералізовану НХЛ, лімфому Беркітта, лімфобластний лейкоз та/або лімфому прекурсорів (периферичних) Т-клітин, лімфому та/або бо лейкоз дорослих Т-клітин, хронічний лімфоцитарний лейкоз та/або пролімфоцитарний лейкоз Т-
клітин, крупноклітинний гранулярний лімфоцитарний лейкоз, грибоподібний мікоз, та/або синдром Сезарі, позавузлову лімфому природних кілерів/Т-клітин (назального типу), Т-клітинну лімфому за типом ентеропатії, печінково-селезінкову Т-клітинну лімфому, підшкірну целюліт- подібну Т-клітинну лімфому, лімфоми шкіри (шкірні), анапластичну крупноклітинну лімфому, ангіоцентричну лімфому, Т-клітинну лімфому кишківника, лімфому периферичних Т-клітин (інакше не ідентифіковану) та ангіоїмунобластну Т-клітинну лімфому.
ІО10О11 «Індивід» або «суб'єкт» є ссавцем. Ссавці включають, але не обмежуються цим, домашніх тварин (наприклад, корів, овець, кішок, собак і коней), приматів (наприклад, людей і приматів, таких як мавпи), кроликів і гризунів (наприклад, мишей і щурів), В деяких варіантах реалізації винаходу індивід або суб'єкт є людиною. 0102) Термін «листок-вкладиш в упаковку» використовується для позначення інструкцій, що звичайно містяться у комерційних упаковках терапевтичних продуктів та містять інформацію щодо показань, застосування, дози, способів уведення, комбінованої терапії, протипоказань та/або застережень, що стосуються застосування таких терапевтичних продуктів. 0103) В цьому документі і в доданій формулі винаходу форми однини включають також множину, якщо з контексту явно не слідує інше.
ІО104| Посилання на «близько» значення або параметру у цьому документі включає (їі описує) варіації, що стосуються вказаного значення або параметру. Наприклад, посилання в описі на «близько Х» включає опис «Х». 01051 Необхідно розуміти, що аспекти і варіанти реалізації винаходу, описані у цьому документі, включають аспекти і варіанти реалізації, що «складаються із» та/або «по суті складаються із».
І. КОМПОЗИЦІЇ І СПОСОБИ
ІО106| У відповідності до одного аспекту винахід базується, зокрема, на анти-СО079р антитілах. У деяких варіантах реалізації винаходу запропоновані анти-СО79р антитіла, що містять СО79р-зв'язуючий домен і СОЗ-зв'язуючий домен. У деяких варіантах реалізації винаходу анти-СО79Б5 антитіла є Т-клітиннозалежними біспецифічними анти-СО79Б5 антитілами (Т3Б). Антитіла за винаходом з придатними, наприклад, для діагностики або лікування проліферативних захворювань В-клітин.
А. Приклади анти-СО79Б антитіл 0107) В одному аспекті винаходу пропонуються виділені антитіла, які зв'язуються з СЮО79р.
У деяких варіантах будь-якого із анти-СО79р антитіл, СО79р-зв'язуючий домен зв'язується із
ЗЕО І МО: 63.
ЇО1О08| У деяких варіантах будь-якого з анти-СО79Б антитіл, анти-СО795 антитіло (наприклад, СЮО79Б-зв'язуючий домен) зв'язується з СЮО79Ь людини із Ка менш ніж близько 25
НМ для двовалентного антитіла (9 з двома плечима. В деяких варіантах будь-якого з анти-
СОр79Б антитіл, анти-СО796Б антитіло (наприклад, СО79р-зв'язуючий домен) зв'язується з СЮ7О9р людини із Ка менш ніж близько 10 нМ. У деяких варіантах будь-якого з анти-СО79Б антитіл, анти-СО796Б антитіло (наприклад, СЮО79р-зв'язуючий домен) зв'язується з СЮО79р людини із Ка менш ніж близько 5 НМ. У деяких варіантах реалізації винаходу Ка визначають за будь-яким способом, описаним у цьому документі, зокрема, у прикладах. У деяких варіантах реалізації винаходу Ка визначають за методом ВІАСОКЕ. У деяких варіантах реалізації винаходу Ка визначають за допомогою СЮО79Б, іммобілізованого з низькою щільністю.
ЇО109| У деяких варіантах будь-якого із анти-СО79р антитіл, анти-СО79Б6 антитіло (наприклад, СО79Б-зв'язуючий домен) зв'язується з В-клітиною (наприклад, клітиною ВОАВ) із
ЕСзхо менш ніж близько 150 нг/мл для двовалентного антитіла | з двома плечима. У деяких варіантах реалізації винаходу значення ЕСво становить менш ніж близько 100 нг/мл. У деяких варіантах реалізації винаходу значення ЕСво становить менш ніж близько 75 нг/мл. У деяких варіантах реалізації винаходу значення ЕСво становить менш ніж близько 50 нг/мл. У деяких варіантах реалізації винаходу значення ЕСзо визначають за будь-яким способом, описаним в цьому документі, зокрема, в прикладах. У деяких варіантах реалізації винаходу значення ЕСзво являє собою середнє значення для будь-якого із 5 або 10 експериментів. У деяких варіантах реалізації винаходу зв'язування із В-клітиною визначають за допомогою СКАФ.
ЇО110| У деяких варіантах будь-якого із анти-СО79р антитіл, анти-СО79Б6 антитіло (наприклад, СО79Б-зв'язуючий домен), яке зв'язується з СО79р людини, зв'язується з В- клітиною (наприклад, клітиною ВОАВ) із ЕСзо менш ніж близько 1,5 мкг/мл для одновалентного формату (наприклад, біспецифічне анти-СО79р антитіло, що містить СО79Б- і СОЗ-зв'язуючий домен). У деяких варіантах реалізації винаходу ЕСво становить менш ніж близько 1 мкг/мл. У деяких варіантах реалізації винаходу ЕС5о становить менш ніж близько 0,75 мкг/мл. У деяких бо варіантах реалізації винаходу ЕСоо становить менш ніж близько 0,5 мкг/мл. У деяких варіантах реалізації винаходу ЕСзо становить менш ніж близько 0,25 мкг/мл. У деяких варіантах реалізації винаходу ЕСво визначають за будь-яким способом, описаним у цьому документі, зокрема, у прикладах. У деяких варіантах реалізації винаходу ЕСво являє собою середнє значення для будь-якого із 5 або 10 експериментів. У деяких варіантах реалізації винаходу зв'язування із В- клітиною визначають за допомогою СКАФ.
Антитіло СО79.А?7 і його варіанти
ІО111) В одному аспекті винаходу пропонується анти-СО79р антитіло, що містить СЮО79р- зв'язуючий домен, який містить щонайменше один, два, три, чотири, п'ять або шість НМК, вибрані з (а) НМЕА-НІ, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО: 5; (Б) НМА-Н2, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО І МО: 8; (с) НМВА-НЗ, що містить амінокислотну послідовність БЕО ІЮ МО: 9; (4) НМК-І1, що містить амінокислотну послідовність зЕО ІЮ МО: 10; (є) НМВ-12, що містить амінокислотну послідовність 5ЕС ІО МО: 11; ї ( НМАК-І3, що містить амінокислотну послідовність БЕ ІЮО МО: 12. У деяких варіантах реалізації винаходу НМЕК-НІ1 містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО: 3. У деяких варіантах реалізації винаходу НМАК-
НІ містить амінокислотну послідовність БЕО ІЮ МО: 4. У деяких варіантах реалізації винаходу
НМВ-Н2 містить амінокислотну послідовність 5ЕО І МО: 6. У деяких варіантах реалізації винаходу НМК-НЕ2 містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮО МО: 7. (0112) В одному аспекті винаходу пропонується анти-СО79р антитіло, що містить СЮО79р- зв'язуючий домен, який містить щонайменше одну, щонайменше дві або всі три послідовності
МН НУК, вибрані з: (а) НМЕ-НІ що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО: 5; (5) НМА-
Н2 що містить амінокислотну послідовність ЗЕБО ІО МО: 8; ії (с) НМК-НЗ що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО: 9. У одному варіанті реалізації винаходу, антитіло містить НМК-НЗ, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО: 9. В іншому варіанті реалізації винаходу антитіло містить НМК-НЗ, що містить амінокислотну послідовність зХЕО ІЮ
МО: 9, ї НМА-І 3, що містить амінокислотну послідовність ХЕО ІЮ МО: 12. У подальшому варіанті реалізації винаходу антитіло містить НМК-НЗ, що містить амінокислотну послідовність зХЕО ІЮ
МО: 9, НМВ-І3, що містить амінокислотну послідовність зЗЕО ІЮО МО: 12, Її НМА-Н2, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО: 8. В іншому варіанті реалізації винаходу антитіло містить (а) НМЕА-НІ, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО: 5; (Б) НМК-Н2, що
Зо містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО: 8; і (с) НМК-НЗ, що містить амінокислотну послідовність 5ЕБЕО ІО МО: 9. У деяких варіантах реалізації винаходу НМК-НІ містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО: 3. У деяких варіантах реалізації винаходу НМК-НІ1 містить амінокислотну послідовність БЕО ІЮ МО: 4. У деяких варіантах реалізації винаходу НУК-
Н2 містить амінокислотну послідовність БЕО ІЮ МО: 6. У деяких варіантах реалізації винаходу
НМВ-Н2 містить амінокислотну послідовність ЗЕ ІЮО МО: 7. В іншому варіанті реалізації винаходу антитіло містить (а) НМЕ-НІ, що містить амінокислотну послідовність ХЕО ІЮО МО: 3; (б) НУМВА-Н2, що містить амінокислотну послідовність БЕ ІЮ МО: 6; ї (с) НМК-НЗ, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО: 9. В іншому варіанті реалізації винаходу антитіло містить (а) НМЕА-НІ, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІО МО: 4; (Б) НМА-Н2, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО: 7; і (с) НМК-НЗ, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО: 9.
ІО113) В іншому аспекті винаходу пропонується анти-СО79Б антитіло, що містить СО79р- зв'язуючий домен, який містить щонайменше одну, щонайменше дві або щонайменше три послідовності МІ НУК, вибрані з (а) НМК-1І1, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ
МО: 10; (5) НУВ-І2, що містить амінокислотну послідовність зЗЕО ІЮ МО: 11; їі (с) НМЕА-І 3, що містить амінокислотну послідовність ЗЕ ІЮ МО: 12. У одному варіанті реалізації винаходу антитіло містить (а) НМК-11, що містить амінокислотну послідовність БЗЕО І МО: 10; (в) НМК-12, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮО МО: 11; ї (с) НМАК-ІЗ, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО: 12.
ІО114| В іншому аспекті анти-СО796 антитіло за винаходом містить СО79р-зв'язуючий домен, який містить (а) домен МН, що містить щонайменше одну, щонайменше дві або всі три послідовності МН НУК, вибрані з (ї) НУВ-НІ, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ
МО: 5, (її) НУВ-Н2, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО: 8, ії (її) НМА-НЗ, що містить амінокислотну послідовність, вибрану із ЗЕО ІЮ МО: 9; ії (Б) домен МІ, що містить щонайменше одну, щонайменше дві або всі три послідовності МІ НУК, вибрані з (ї) НМК-11, що містить амінокислотну послідовність ЕС ІЮ МО: 10, (і) НМАК-І2, що містить амінокислотну послідовність «ЕО ІЮ МО: 11, ї (с) НМА-І-3, що містить амінокислотну послідовність «ЕО ІЮ МО: 12. У деяких варіантах реалізації винаходу, НМЕА-НІ1 містить амінокислотну послідовність хЕО
ІО МО: 3. У деяких варіантах реалізації винаходу НМЕ-НІ містить амінокислотну послідовність бо ЗБО ІЮ МО: 4. У деяких варіантах реалізації винаходу НМК-Н2 містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІО МО: 6. У деяких варіантах реалізації винаходу, НМК-Н2 містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО: 7. (0115) В іншому аспекті винаходу пропонується анти-СО79Б антитіло, що містить СЮО79р- зв'язуючий домен, який містить (а) НМЕ-НІ, що містить амінокислотну послідовність хЕО ІЮ МО: 5; (Б) НУВ-Н2, що містить амінокислотну послідовність зЗЕО ІЮ МО: 8; (с) НМЕ-НЗ, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО: 9; (4) НМА-І1, що містить амінокислотну послідовність
ЗЕО ІЮ МО: 10; (е) НУВ-1І2, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО: 11; і (3 НМА-І З, що містить амінокислотну послідовність, вибрану із ЗЕО ІЮ МО: 12. В іншому аспекті винаходу пропонується анти-СО796р антитіло, що містить СО79р-зв'язуючий домен, який містить (а) НМА-
НІ, що містить амінокислотну послідовність 5ЕБЕО 10 МО: 3; (Б) НМК-Н2, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮО МО: 6; (с) НМЕК-НЗ, що містить амінокислотну послідовність
ЗЕО І МО: 9; (а) НУВ-І1, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО: 10; (є) НУВ-12, що містить амінокислотну послідовність БЕО ІЮ МО: 11; ї (у НМК-І3, що містить амінокислотну послідовність, вибрану із БЕО ІЮО МО: 12. В іншому аспекті винаходу пропонується анти-СО079р антитіло, що містить СОЮ79р-зв'язуючий домен, який містить (а) НМА-НІ, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО: 4; (Б) НМК-Н2, що містить амінокислотну послідовність
ЗЕО І МО: 7; (с) НУВ-НЗ, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮО МО: 9; (4) НМК-І1, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮО МО: 10; (е) НУВ-12, що містить амінокислотну послідовність зЗЕО ІО МО: 11; ії (3 НМЕ-1І 3, що містить амінокислотну послідовність, вибрану із
ЗЕО І МО: 12.
ІО116) В будь-якому з вищеописаних варіантів реалізації винаходу анти-СО79Б антитіло є гуманізованим. У одному з варіантів реалізації винаходу анти-СО79р антитіло містить НУК згідно будь-якого з вищеописаних варіантів реалізації винаходу, і додатково містить акцепторну каркасну ділянку людини, наприклад, каркас імуноглобуліну людини або консенсусний каркас людини.
ІО117)| В іншому аспекті анти-СО79Б0 антитіло містить послідовність варіабельного домену важкого ланцюга (МН), яка володіє щонайменше 9095, 9195, 9295, 9395, 9495, 9595, 9695, 97906, 9895, 9995 або 10095 ідентичністю послідовності з амінокислотною послідовністю ЗЕО 10 МО: 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27 та/або 29. У деяких варіантах реалізації винаходу послідовність МН, що володіє щонайменше 9095, 9195, 9195, 9295, 9395, 9495, 9595, 9695, 9795, 9895 або 9995 ідентичністю, містить заміни (наприклад, консервативні заміни), інсерції або делеції в порівнянні з еталонною послідовністю, причому анти-СО790 антитіло, що містить послідовність, зберігає здатність зв'язуватися з СО79Б. У деяких варіантах реалізації винаходу амінокислоти загальною кількістю від 1 до 10, були замінені, вставлені та/або видалені з БЕО ІЮО МО: 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27 та/або 29. У деяких варіантах реалізації винаходу заміни, інсерції або делеції здійснені в ділянках поза межами НМ (тобто, у ЕК). Анти-СО79Б антитіло необов'язково містить послідовність МН, наведену у 5ЕО ІЮ МО: 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27 та/або 29, включаючи посттрансляційні модифікації вказаної послідовності. В конкретному варіанті реалізації винаходу МН містить один, два або три НМЕ, вибрані з: (а) НМА-НІ, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО: 5, (р) НУВ-Н2, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮО МО: 8, і (с) НМА-НЗ, що містить амінокислотну послідовність зЕО ІЮ МО: 9.
ІО118)| В іншому аспекті пропонується анти-СО796 антитіло, причому антитіло містить варіабельний домен легкого ланцюга (МІ), який володіє щонайменше 9095, 9195, 9295, 93905, 9495, 9595, 9695, 9795, 9895, 9995 або 10095 ідентичністю послідовності з амінокислотною послідовністю 5ЕО ІЮО МО: 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28 та/або 30. У деяких варіантах реалізації винаходу послідовність МІ, що володіє щонайменше 9095, 9195, 91905, 92905, 9395, 9495, 95905, 9690, 9795, 9895 або 9995 ідентичністю, містить заміни (наприклад, консервативні заміни), інсерції або делеції в порівнянні з референтною послідовністю, причому анти-СО79р антитіло, що містить послідовність, зберігає здатність зв'язуватися з СО79р. У деяких варіантах реалізації винаходу
БО амінокислоти загальною кількістю від 1 до 10 були замінені, вставлені та/або видалені з ЗЕО ІЮ
МО: 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28 та/або 30. У деяких варіантах заміни, інсерції або делеції здійснені в ділянках поза межами НМК (тобто, у ЕК). Анти-СО79Бб антитіло необов'язково містить послідовність МІ, наведену у 5ЕО ІЮ МО: 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28 та/або 30, включаючи посттрансляційні модифікації вказаної послідовності. В конкретному варіанті реалізації винаходу МІ. містить один, два або три НУЕ, вибрані з (а) НМК-11, що містить амінокислотну послідовність БЕО ІЮ МО: 10; (в) НМЕК-12, що містить амінокислотну послідовність зЕО ІЮ МО: 11; ї (с) НМА-І 3, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО: 12. (0119) В іншому аспекті пропонується анти-СО79Б антитіло, причому антитіло містить УН, як в будь-якому з варіантів реалізації винаходу, наведених вище, і МІ, як в будь-якому з варіантів бо реалізації винаходу, наведених вище. В одному варіанті реалізації винаходу антитіло містить послідовності МН і МІ, наведені у ЗЕО ІЮ МО: 15 ії 5ЕО ІО МО: 16, відповідно, включаючи посттрансляційні модифікації вказаних послідовностей. У одному варіанті реалізації винаходу антитіло містить послідовності МН і МІ, наведені у 5ЕО ІЮО МО: 17 і БЕО ІО МО: 18, відповідно, включаючи посттрансляційні модифікації вказаних послідовностей. У одному варіанті реалізації винаходу антитіло містить послідовності МН і МІ, наведені у БЕО ІЮ МО: 19 ії 5ЕО ІЮ МО: 20, відповідно, включаючи посттрансляційні модифікації вказаних послідовностей. У одному варіанті реалізації винаходу антитіло містить послідовності УН і МІ, наведені у ЗЕО ІО МО: 21 і
ЗЕО ІЮ МО: 22, відповідно, включаючи посттрансляційні модифікації вказаних послідовностей. У одному варіанті реалізації винаходу антитіло містить послідовності МН і МІ, наведені у ЗЕО ІО
МО: 23 ї 5ЕБО ІЮ МО: 24, відповідно, включаючи посттрансляційні модифікації вказаних послідовностей. У одному варіанті реалізації винаходу антитіло містить послідовності МН і Мі, наведені у ЗЕО ІО МО: 25 і БЕО ІЮ МО: 26, відповідно, включаючи посттрансляційні модифікації вказаних послідовностей. У одному варіанті реалізації винаходу антитіло містить послідовності
МН ї МІ, наведені у БЕО ІО МО: 27 і 5ЕО ІЮО МО: 28, відповідно, включаючи посттрансляційні модифікації вказаних послідовностей. У одному варіанті реалізації винаходу антитіло містить послідовності МН ії МІ, наведені у 5ЕО ІЮО МО: 29 ії 5ЕО ІЮ МО: 30 відповідно, включаючи посттрансляційні модифікації вказаних послідовностей. 0120) В іншому аспекті винаходу пропонується антитіло, яке зв'язується з тим же епітопом, що і запропоноване у цьому винаході анти-СО79Б антитіло. Наприклад, у деяких варіантах реалізації винаходу антитіло, яке зв'язується з тим же епітопом, що і анти-СО79р антитіло, містить послідовність УН, наведену у ЗЕО ІО МО: 19, і послідовність МІ, наведену у ЗЕО ІЮ МО: 20. У деяких варіантах реалізації винаходу пропонується антитіло, яке зв'язується з епітопом в межах фрагмента СО79Б0, що складається з амінокислот ЗЕО ІЮ МО: 63. 0121) У додатковому аспекті винаходу анти-СО790 антитіло відповідно до будь-якого з вищеописаних варіантів реалізації винаходу є моноклональним антитілом, зокрема химерним, гуманізованим або людським антитілом. В одному варіанті реалізації винаходу анти-СО795 антитіло є фрагментом антитіла, наприклад, Ем, Раб, Раб", 5сЕм, діатіло або фрагмент К(аб)». В іншому варіанті реалізації винаходу антитіло є повнорозмірним антитілом, наприклад, інтактним антитілом ІДС1 або іншого класу або ізотипу антитіл, описаних у цьому документі.
Зо Антитіло 5М8.пему і його варіанти (0122) В одному аспекті винаходу пропонується анти-СО79р антитіло, що містить СЮО79р- зв'язуючий домен, який містить щонайменше один, два, три, чотири, п'ять або шість НМН, вибраних з (а) НМЕ-НІ, що містить амінокислотну послідовність зЕО ІЮ МО: 31; (Б) НМА-Н2, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО: 32; (с) НМК-НЗ, що містить амінокислотну послідовність БЕО ІЮ МО: 33; (4) НМА-І1, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:
ЗА; (ве) НМНВ-12, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІО МО: 35, і ( НМА-І-3, що містить амінокислотну послідовність зХЕО ІЮ МО: 36. (0123) В одному аспекті винаходу пропонується анти-СО79р антитіло, що містить СЮО79р- зв'язуючий домен, який містить щонайменше одну, щонайменше дві або всі три послідовності
МН НМУЕ, вибрані з (а) НМЕ-НІ, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО: 31; (в) НМА-
Н2г, що містить амінокислотну послідовність ЗЕБО ІЮ МО: 32; і (с) НМК-НЗ, що містить амінокислотну послідовність 560) ІЮ МО: 33. В одному з варіантів реалізації винаходу антитіло містить НМК-НЗ, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІО МО: 33. В іншому варіанті реалізації винаходу антитіло містить НМК-НЗ, що містить амінокислотну послідовність «ЕО ІЮ
МО: 33 ії НМК-ІЇЗ, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО: 36. В іншому варіанті реалізації винаходу антитіло містить НМК-НЗ, що містить амінокислотну послідовність зХЕО ІЮ
МО: 33, НУВ-І3, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮО МО: 36 і НМА-Н2, що містить амінокислотну послідовність ЗЕСО ІЮ МО: 32. В іншому варіанті реалізації винаходу антитіло містить (а) НМЕ-НІ, що містить амінокислотну послідовність 5ХЕО ІЮ МО: 31; (Б) НМА-Н2, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІО МО: 32; ї (с) НМАК-НЗ, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО: 33. (0124) В іншому аспекті винаходу пропонується анти-СО79Б антитіло, що містить СЮО79р- зв'язуючий домен, який містить щонайменше одну, щонайменше дві або всі три послідовності
МІ. НМЕ, вибрані з (а) НМА-11, що містить амінокислотну послідовність зЗЕО ІО МО: 34; (5) НМА-
Ї2, що містить амінокислотну послідовність 5ЕБО І МО: 35, і (с) НМК-І3, що містить амінокислотну послідовність 5Е0О ІО МО: 36. У одному варіанті реалізації винаходу антитіло містить (а) НМК-11, що містить амінокислотну послідовність 5ХЕО ІЮ МО: 34; (Б) НМК-12, що містить амінокислотну послідовність 5ЕС ІЮ МО: 35, ії (с) НМАК-ІЗ, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:36.
І0125| В іншому аспекті анти-СО79р антитіло за винаходом містить СО79р-зв'язуючий домен, що містить (а) МН-домен, який містить щонайменше одну, щонайменше дві або всі три послідовності, вибрані з МН НМК (І) НМЕ-НІ, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ
МО: 31, (ії) НУВ-Н2, що містить амінокислотну послідовність зЗЕО ІЮ МО: 32, і (ії) НМАК-НЗ, що містить амінокислотну послідовність, вибрану із БЕО ІЮО МО: 33; і (Б) Мі -домен, що містить щонайменше одну, щонайменше дві або всі три послідовності МІ. НУК, вибрані з (І) НМАК-11, що містить амінокислотну послідовність ЗЕ ІЮ МО: 34, (ії) НМК-І2, що містить амінокислотну послідовність «ЕО ІЮ МО: 35, ії (с) НМА-1І3, що містить амінокислотну послідовність «ЕО ІЮ МО: 36. (0126) В іншому аспекті винаходу пропонується анти-СО79Б антитіло, що містить СО79р- зв'язуючий домен, який містить (а) НМАК-НІ, що містить амінокислотну послідовність хЕО ІЮ МО: 31; (Б) НМВА-Н2, що містить амінокислотну послідовність зХЕО ІЮО МО: 32; (с) НМК-НЗ, що містить амінокислотну послідовність ЗЕ 10 МО: 33; (4) НМК-Ї71, що містить амінокислотну послідовність БЕО ІЮ МО: 34; (е) НМК-12, що містить амінокислотну послідовність зЕО ІЮ МО:
З5, і () НМА-1І 3, що містить амінокислотну послідовність, вибрану із БЕО ІО МО: 36.
І0127| В будь-якому з вищеописаних варіантів реалізації винаходу анти-СО79Б антитіло є гуманізованим. У одному з варіантів реалізації винаходу анти-СО79р антитіло містить НУК згідно будь-якого з вищеописаних варіантів реалізації винаходу, і додатково містить акцепторну каркасну ділянку людини, наприклад, каркас імуноглобуліну людини або консенсусний каркас людини. 0128) В іншому аспекті анти-СО79Б0 антитіло містить послідовність варіабельного домену важкого ланцюга (МН), яка володіє щонайменше 9095, 9195, 9295, 9395, 9495, 9595, 9695, 97906, 9895, 9995 або 10095 ідентичністю послідовності з амінокислотною послідовністю ЗЕО ІЮО МО: 37.
У деяких варіантах реалізації винаходу послідовність УН, яка володіє щонайменше 9095, 91905, 9295, 9395, 9495, 9595, 9695, 9795, 9895 або 9995 ідентичністю, містить заміни (наприклад, консервативні заміни), інсерції або делеції в порівнянні з еталонною послідовністю, причому анти-СО79Б6 антитіло, що містить послідовність, зберігає здатність до зв'язування з СЮО79Б. У деяких варіантах реалізації винаходу амінокислоти загальною кількістю від 1 до 10 були замінені, вставлені та/або видалені з БЕО ІЮ МО: 37. У деяких варіантах реалізації винаходу
Зо заміни, інсерції або делеції здійснені в ділянках поза межами НУК (тобто, у ЕК). Анти-С079р антитіло необов'язково містить послідовність МН, наведену у 5ЕО ІЮО МО: 37, включаючи посттрансляційні модифікації вказаної послідовності У конкретному варіанті реалізації винаходу МН містить один, два або три НМЕ, вибрані з: (а) НМА-НІ, що містить амінокислотну послідовність БЕО ІЮ МО: 31, (р) НМЕА-Н2, що містить амінокислотну послідовність зЕО ІЮО МО: 32, і (с) НУВ-НЗ, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО: 33. 0129) В іншому аспекті пропонується анти-СО79р антитіло, що містить варіабельний домен легкого ланцюга (МІ), який володіє щонайменше 9095, 9195, 9295, 93905, 9495, 9595, 9695, 9790, 9895, 9995 або 10095 ідентичністю послідовності з амінокислотною послідовністю ЗЕО ІЮО МО: 38.
У деяких варіантах реалізації винаходу послідовність МІ, що володіє щонайменше 9095, 91965, 9295, 9395, 9495, 9595, 9695, 9795, 9895 або 9995 ідентичністю, містить заміни (наприклад, консервативні заміни), інсерції або делеції в порівнянні з еталонною послідовністю, причому анти-СО79Б6 антитіло, що містить послідовність, зберігає здатність до зв'язування з СЮО79Б. У деяких варіантах реалізації винаходу амінокислоти загальною кількістю від 1 до 10 були замінені, вставлені та/або видалені із БЕО ІЮ МО: 38. У деяких варіантах реалізації винаходу заміни, інсерції або делеції здійснені в ділянках поза межами НУК (тобто, у ЕК). Анти-С079р антитіло необов'язково містить послідовність Мі, наведену у 5ЕО ІО МО: 38, включаючи посттрансляційні модифікації цієї послідовності. У конкретному варіанті реалізації винаходу МІ. містить один, два або три НУК, вибраних з (а) НМК-11, що містить амінокислотну послідовність
ЗЕО ІЮ МО: 34; (р) НУВ-12, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО: 35, ії (с) НМЕ-Ї З, що містить амінокислотну послідовність ФБЕО ІЮ МО: 36.
ІО130)| В іншому аспекті пропонується анти-СО79б антитіло, що містить УН, описаний в будь- якому з варіантів реалізації винаходу, наведених вище, і МІ, описаний в будь-якому з варіантів реалізації винаходу, наведених вище. У одному варіанті реалізації винаходу антитіло містить послідовності МН і МІ, наведені у ЗЕО ІЮ МО: 37 і 5ЕО ІО МО: 38, відповідно, включаючи посттрансляційні модифікації вказаних послідовностей.
ІО1311| Згідно іншого аспекту винаходу, анти-СО790 антитіло відповідно до будь-якого з вищеописаних варіантів реалізації винаходу, є моноклональним антитілом, зокрема химерним, гуманізованим або людським антитілом. У одному варіанті анти-СО79Б6 антитіло є фрагментом антитіла, наприклад, Ем, Раб, Раб, 5сЕм, діатіло або фрагмент Е(ар)». В іншому варіанті реалізації винаходу антитіло є повнорозмірним антитілом, наприклад, інтактним антитілом Ідс1 або іншого класу або ізотипу антитіл, описаного в цьому документі. 0132) У додатковому аспекті анти-СО79Б антитіла відповідно до будь-якого з вищеописаних варіантів реалізації винаходу, можуть володіти будь-якою з ознак, описаних у Розділах 1-7 нижче, окремо або в комбінації: 1. Афінність антитіл
ЇО133| У деяких варіантах реалізації винаходу константа дисоціації антитіла, запропонованого у цьому винаході, становить (Ка) х 1 мкМ, х 100 НМ, То НМ, 1 НМ, 01 НМ, - 0,01 нМ або х 0,001 нМ (наприклад, 108 М або менше, наприклад, від 108 М до 10-33 М, наприклад, від 109 М до 10-13 М).
І0134| В одному варіанті реалізації винаходу Ка вимірюють за допомогою аналізу зв'язування радіоактивно міченого антигену (РІА). В одному варіанті реалізації винаходу РІА здійснюють 3 версією Бар цільового антитіла і його антигеном. Наприклад, афінність зв'язування Раб для антигену вимірюють у розчині шляхом урівноваження ЕРар з мінімальною концентрацією (725І)-міченого антигену в присутності титраційної серії неміченого антигену, з подальшим захопленням зв'язаного антигену на планшеті, вкритому анти-Раб антитілом (див., наприклад, СПпеп еї аї., 9 Мої. Віої. 293: (1999) 865-881). Для встановлення умов аналізу, багатолункові планшети МІСВЕОТІТЕКУ (Тпегто Зсіепійіс) вкривають протягом ночі 5 мкг/мл блокуючого анти-Раб антитіла (Сарреї Габз) в 50 мМ натрій карбонату (рН 9,6), і потім блокують 295 (мас./об.) бичачим сироватковим альбуміном у ФСБ протягом від двох до п'яти годин при кімнатній температурі (близько 23"С). На неадсорбуючому планшеті (Мипс, Мо 269620), 100 пмМ або 26 пМ Г22І|-антигену змішують із серіями розведень цільового Рар (наприклад, відповідно до оцінки анти-МЕСЕ антитіла, Рар-12, у Ргевіа еї аІ,, Сапсег Вез. 57:4593-4599 (1997)). Далі цільовий Рар інкубують протягом ночі; однак інкубація може тривати і більший період часу (наприклад, близько 65 годин), щоб гарантувати досягнення рівноваги. Після цього суміші переносять на планшети для блокування та інкубують при кімнатній температурі (наприклад, протягом однієї години). Далі розчин видаляють, і планшет промивають вісім разів 0,190 розчином полісорбату 20 (ТУМЕЕМ-202) у ФСБ. Після висихання планшетів додають 150 мкл/лунку сцинтилятору (МІСКОЗСІМТ-20"М: Раскага), і планшети зчитують на гама-лічильнику
Зо ТОРСОШМТ" мМ (РаскКага) протягом десяти хвилин. Концентрації кожного Раб, які дають значення менше або рівне 2095 максимального зв'язування, відбирають для застосування в аналізах конкурентного зв'язування.
ІЇО135| У відповідності до іншого варіанту реалізації винаходу, Ка вимірюють (із застосуванням методу поверхневого плазмонного резонансу ВІАСОКЕ?Є. Наприклад, аналіз
ВІАСОВЕЯ-2000 або ВІАСОКЕ?-3000 (Віасоге, Іпс., Піскатауей, Нью-Джерсі) проводять при температурі 257"С з мікрочіпами СМ5, що містять іммобілізований антиген, при 10 одиниць відповіді (ОВ). В одному варіанті реалізації винаходу біосенсорні чипи з карбоксиметильованим декстраном (СМ5, ВІАСОКЕ, Іпс) активують М-етил-М'-(З-диметиламінопропіл)-карбодіїміду гідрохлоридом (ЕДК) ії М-гідроксисукцинімідом (МН) відповідно до інструкцій постачальника.
Антиген розбавляють 10 мМ розчином натрій ацетату, рН 4,8, до 5 мкг/мл (50,2 мкМ) перед інжекцією при швидкості потоку 5 мкл/хв до досягнення сигналу близько 10 одиниць відповіді (ОВ) зв'язаного білка. Після інжекції антигену вводять 1 М етаноламіну для блокування груп, які не прореагували. Для кінетичних вимірювань здійснюють інжекцію дворазових серійних розведень ЕаБб (від 0,78 нМ до 500 нМ) у ФСБ, що містить 0,0595 поверхневої-активної речовини полісорбату 20 (ТМ/ЕЕМ-20"М) (ФСБТ) при 25"С і швидкості потоку близько 25 мкл/хв. Значення швидкості асоціації (Коп) і швидкості дисоціації (Кої) обчислюють із застосуванням простої моделі зв'язування Ленгмюра із співвідношенням 1:1 (програмне забезпечення для оцінки
ВІАСОВЕХ, версія 3.2) шляхом одночасної апроксимації сенсограм асоціації і дисоціації.
Рівноважну константу дисоціації (Ка) обчислюють як співвідношення Кой/коп. Див., наприклад,
СнНеп еї аї., у). Мої. Вісі. 293:865-881 (1999). Якщо швидкість асоціації перевищує 106 М-1 с-1 у вищезгаданому методі поверхневого плазмонного резонансу, то швидкість асоціації можна визначати із застосуванням методу гасіння флуоресценції, в якому вимірюють підвищення або зниження інтенсивності флуоресцентного випромінювання (збудження (- 1295 нм; випромінювання - 340 нм, смуга пропускання 16 нм) при 257"С для 20 нМ антитіла проти антигену (форма Раб) у ФСБ, рН 7,2, в присутності зростаючих концентрацій антигену, за даними вимірювання за допомогою спектрофотометра, наприклад, обладнаного пристроєм для зупинки потоку (Амім Іпвігитепіб5), або спектрофотометра ЗІ М-АМІМСО"М серії 8000 (Тептозресігопіс) і кювети із перемішуванням. 2. Фрагменти антитіл
ІО136) У деяких варіантах реалізації винаходу запропоноване в цьому документі антитіло є фрагментом антитіла. Фрагменти антитіл включають, але не обмежуючись цим, фрагменти Раб,
Еар, Бар-5Н, К(аб)»г, Ем і 5сЕм та інші фрагменти, описані нижче. Огляд деяких фрагментів антитіл див. у Ниазоп еї аї. Маї. Меа. 9:129-134 (2003). Огляд фрагментів 5сЕм див., наприклад, у Рінскіпйп, іп Тпе Рпаптасоїоду ої Мопосіопа! Апіїродіє5, мої. 113, Нозеприга апа Мооге еєдб5., (5ргіпдег/-Мепад, Мем Мої), рр. 269-315 (1994); див. також УМО 93/16185; і патенти США Мо 5571894 і 5587458. Обговорення фрагментів Раб і Е(аб)», що містять залишки епітопу зв'язування з рецептором реутилізації і володіють збільшеним періодом напіввиведення іп мімо, див. у патенті США 5869046.
І0137| Діатіла являють собою фрагменти антитіл з двома антиген-зв'язуючими сайтами, які можуть бути двовалентними або біспецифічними. Див., наприклад, ЕР 404097; МО 1993/01161;
Ниазоп єї аї., Маї. Мед. 9:129-134 (2003); і Ноїїїпдег еї аї., Ргос. Май. Асай. 5сі. ОБА 90: 6444- 6448 (1993). Триатіла і тетратіла додатково описані у Нидзоп еї аї., Маї. Меа. 9:129-134 (2003).
ІО138| Однодоменні антитіла являють собою фрагменти антитіл, що містять весь або частину варіабельного домену важкого ланцюга або весь або частину варіабельного домену легкого ланцюга антитіла. У деяких варіантах реалізації винаходу однодоменне антитіло є людським однодоменним антитілом (Юотапії5, Іпс., Уолтхем, Масачусетс; див., наприклад, патент США Мо 6248516).
І0139| Фрагменти антитіл можуть бути одержані за допомогою різних методик, зокрема, але не обмежуючись цим, протеолітичним розщепленням інтактного антитіла, а також шляхом одержання рекомбінантної клітини-хазяїна (наприклад, Е. соїї або фагу), описаної в цьому документі. 3. Химерні і гуманізовані антитіла (0140) У деяких варіантах реалізації винаходу запропоноване у цьому винаході антитіло є химерним антитілом. Деякі химерні антитіла описані, наприклад, у патенті США Мо 4816567; і
Могтізоп еї аї., Ргос. Май). Асад. сі. ОБА, 81:6851-6855 (1984)). В одному прикладі, химерне антитіло містить нелюдську варіабельну ділянку (наприклад, варіабельну ділянку, одержану від миші, щура, хом'яка, кролика або приматів, таких як мавпа) і людську константну ділянку. В іншому прикладі химерне антитіло є «клас-світч» антитілом, клас або підклас якого був
Зо модифікований в порівнянні з батьківським антитілом. Химерні антитіла включають антигензв'язуючі фрагменти химерних антитіл.
ІЇО141| У деяких варіантах реалізації винаходу химерне антитіло є гуманізованим антитілом.
Як правило, нелюдське антитіло гуманізують для зниження імуногенності у людей при збереженні специфічності і афінності батьківського нелюдського антитіла. Як правило, гуманізоване антитіло містить один або більше варіабельних доменів, у яких, наприклад, НУК
СОК (або їх частини) одержані з нелюдського антитіла, а ЕК (або його частина) є послідовністю, одержаною з людського антитіла. Гуманізоване антитіло необов'язково міститиме щонайменше частину константної ділянки людини. У деяких варіантах реалізації даного винаходу деякі залишки ЕК в гуманізованому антитілі замінені відповідними залишками нелюдського антитіла (наприклад, антитіла, з якого одержані залишки НМК), наприклад, для відновлення або покращення специфічності або афінності антитіла. 0142) Гуманізовані антитіла і способи їх одержання описані, наприклад, в АЇтадго апа
Екгапвзоп, Егопі. Віовсі. 13:1619-1633 (2008), і додатково описані, наприклад, у Кіесптапп еї аї.,
Маїште 332:323-329 (1988); Ойцеєп єї аїЇ., Ргос. Маг! Асай. Зсі. БА 86:10029-10033 (1989); патентах США МоМо 5821337, 7527791, 6982321 и 7087409; Казптіїгі єї а!., Меїйодв 36:25-34 (2005) (описана пересадка ділянки, що визначає специфічність (ОСУ)); Радіап, Мої. Іттипо). 28:489-498 (1991) (описана «перекладка варіабельного домену»); БаїігАсдца еї аї., Меїносдз 36:43-60 (2005) (описана «перетасовка ЕК»); і О5роигп еї аї., МеїШос5 36:61-68 (2005) і КіїткКа еї а!., Вг. У. Сапсег, 83:252-260 (2000) (описаний підхід «керованого вибору» до перетасування ЕК). 01431 Каркасні ділянки людини, які можуть бути застосовані для гуманізації, включають, але не обмежуючись цим: каркасні ділянки, відібрані із застосуванням методу «якнайкращої відповідності» (див., наприклад, Зіт5 еї аї. 9. Іттипої. 151: 2296 (1993)); каркасні ділянки, одержані з консенсусної послідовності конкретної підгрупи варіабельних ділянок легких або важких ланцюгів антитіл людини (див., наприклад, Сагег еї аїЇ. Ргос. Май. Асад. Зсі. О5А, 89: 4285 (1992); і Ргезіа єї аї. 9У. Іттипої., 151: 2623 (1993)); зрілі каркасні ділянки людини (що містять соматичні мутації) або каркасні ділянки зародкової лінії людини (див., наприклад,
АІтадгто апа Егапбзоп, Егопі. Віозсі. 13: 1619-1633 (2008)); ії каркасні ділянки, одержані в результаті ЕК скринінгу бібліотек (див., наприклад, Васа еї аї., У. Віої. Снет. 272: 10678-10684 (1997), і Козок еї аї., У. Віої. Спет. 271: 22611-22618 (1996)). 60 4. Людські антитіла
(0144) У деяких варіантах реалізації винаходу запропоноване у цьому винаході антитіло є людським антитілом. Людські антитіла можуть бути одержані із застосуванням різних методик, відомих в даній галузі техніки. Людські антитіла в цілому описані у мап ріїкК апа мап де У/пкеї, бит. Оріп. Рпаптасої. 5: 368-74 (2001), і Її опрего, Сит. Оріп. Іттипої. 20: 450-459 (2008).
І0145| Людські антитіла можуть бути одержані шляхом введення імуногену в організм трансгенних тварин, який був модифікований для одержання інтактних людських антитіл або інтактних антитіл з людськими варіабельними ділянками у відповідь на антигенний стимул. Такі тварини звичайно несуть всі або частину локусів імуноглобуліну людини, що заміщають ендогенні локуси імуноглобуліну або які локалізовані поза межами хромосом або інтегровані довільно у хромосоми тварини. У таких трансгенних мишей ендогенні локуси імуноглобуліну в цілому є інактивованими. Огляд методів одержання людських антитіл від трансгенних тварин, див. у Гопрегу, Маї. Віоїесн. 23:1117-1125 (2005). Додатково див., наприклад, патенти США
МоМо 6075181 і 6150584, в яких описана технологія ХЕМОМОО5БЕТМ; патент США Мо 5770429, в якому описана технологія НимМмарФ; патент США Мо 7041870, в якому описана технологія К-М
МОИЗЕФ, і публікацію патентної заявки США Мо ОБ 2007/0061900, в якій описана технологія
МеІосімМоизефФ). Людські варіабельні ділянки з інтактних антитіл, що генеруються такими тваринами, можуть бути додатково модифіковані, наприклад, шляхом об'єднання з іншою людською константною ділянкою.
І0О146| Додатково, людські антитіла можуть бути одержані із застосуванням методів на основі гібридом. Описані клітинні лінії мієломи людини і гетеромієломи миші-людини для продукування моноклональних антитіл людини. (Див., наприклад, Ко2бог .). Іттипої., 133: 3001 (1984); Вгодеийг єї аІ., Мопосіопа! Апіїбоду Ргодисіоп Тесппіднез апа Арріїсайоп5, рр. 51-63 (Магсе! ОеккКег, Іпс., Мем/ МогКк, 1987); і Воегпег еї аї., У. Іттипої!., 147: 86 (1991). Крім того, людські антитіла, що генеруються за допомогою технології гібридоми В-клітин людини, описані у Ці еї аї.,, Ргос. Май. Асад. Зсі. ОБА, 103:3557-3562 (2006). Додаткові способи включають способи, описані, наприклад, у патенті США Мо 7189826 (в якому описане продукування моноклональних антитіл (ЯМ людини клітинними лініями гібридоми) і Мі, Хіапдаї Міапуїхиеє, 26(4):265-268 (2006) (описані гібридоми людини-людини). Технологія гібридом людини (Тгіота їесппоЇІоду) додатково описана у Моїїтег5 апа Вгапаїйеїп, Нізіоіоду апа Ніхораїйоїоду, 20(3):927-
Зо 937 (2005), і МоПтег5 апа Вгапаїєїй, Мефоаз апа Ріпаіпуд5 іп Ехрегітепіа! апа Сіїіпіса!
Рпаптасоіоду, 27(3):185-91 (2005).
І0147| Додатково, людські антитіла можна генерувати шляхом виділення послідовності варіабельного домену клону Ем, вибраної з бібліотек фагового дисплею, одержаних від людини.
Такі послідовності варіабельного домену в подальшому можуть бути об'єднані з бажаним константним доменом людини. Способи вибору людських антитіл з бібліотек антитіл описані нижче. 5. Одержані з бібліотеки антитіла (0148) Антитіла за даним винаходом можуть бути виділені шляхом скринінгу комбінаторних бібліотек щодо антитіл з бажаною активністю або видами активності. Наприклад, у цій галузі техніки відомі різні способи створення бібліотек фагового дисплею і скринінгу таких бібліотек щодо антитіл, які володіють бажаними характеристиками зв'язування. Такі способи описані, наприклад, у Ноодепроот еї аїЇ. іп МешШйоав5 іп МоїІесшаг Віооду 178:1-37 (О'Вгіеп еї аї., ей.,
Нитап Ргевз5, Тоїсула, МУ, 2001) і додатково описані, наприклад, у МсоСайегіу еї аї!., Маїшге 348:552-554; Сіасквоп еї аї., Маїшге 352: 624-628 (1991); МагїКз еї аї., у. Мої. Вісі. 222: 581-597 (1992); МаїК5 апа Вгадригу, іп Меїпод5 іп МоїІесшаг Віоіоду 248:161-175 (Іо, ед., Нитап Ргевв,
Тома, МУ, 2003); Зідни еї аї., У. Мої. Віо!. 3938(2): 299-310 (2004); І ее еї аї., у. Мої. Вісі. 340(5): 1073-1093 (2004); РеіПоизе, Ргос. Маї!. Асад. осі. ОБА 101(34): 12467-12472 (2004); і | ее еї аї., 9.
Іттипої. Меїйоавз 284(1-2): 119-132(2004). 0149) У деяких способах фагового дислею репертуари генів МН і МІ клонують окремо за допомогою полімеразної ланцюгової реакції (ПЛР) і рекомбінують випадковим чином у фагових бібліотеках, які потім можуть бути піддані скринінгу щодо антигензв'язуючого фагу, як описано у
М/іпег еї а!., Апп. Неу. Іттипої., 12: 433-455 (1994). Фаг звичайно показує фрагменти антитіл, у вигляді одноланцюгових Ем (5СЕм), Гар-фрагментів або фрагментів. Бібліотеки з імунізованих джерел забезпечують високоафінні антитіла до імуногену без необхідності конструювання гібридом. В якості альтернативи, може бути клонований «наївний» репертуар (наприклад, від людини), щоб забезпечити одне джерело антитіл до широкого діапазону чужорідних, а також аутоантигенів, без будь-якої імунізації, як описано у сгіннй5 еї аіІ., ЕМВО У, 12: 725-734 (1993).
Нарешті, наївні бібліотеки можуть бути одержані синтетичним способом, шляхом клонування ланцюга сегментів МУ-гена із стовбурних клітин та із застосуванням ПЛР-праймерів, що містять 60 випадкові послідовності, з метою кодування високо варіабельних ділянок СОКЗ і для перегрупування іп міїго, як описано у Ноодепроот апа Уміпіег, у. Мої. Віої!., 227: 381-388 (1992).
Патентні публікації, що описують фагові бібліотеки антитіл людини, включають, наприклад: патент США Мо 5750373 і патентні публікації США Мо 2005/0079574, 2005/0119455, 2005/0266000, 2007/0117126, 2007/0160598, 2007/0237764, 2007/0292936 і 2009/0002360.
І0150| Антитіла або фрагменти антитіл, виділені з бібліотек антитіл людини, у цьому винаході вважаються людськими антитілами або фрагментами людських антитіл. 6. Поліспецифічні антитіла 0151) У деяких варіантах реалізації винаходу запропоноване антитіло є поліспецифічним антитілом, наприклад, біспецифічним антитілом. Поліспецифічні антитіла являють собою моноклональні антитіла, що володіють специфічністю зв'язування у відношенні щонайменше двох різних ділянок. У деяких варіантах реалізації винаходу одна із специфічних ділянок зв'язування являє собою СО79р, а інша являє собою будь-який інший антиген. У деяких варіантах реалізації винаходу біспецифічні антитіла можуть зв'язуватися із двома різними епітопами СО79Б. Крім того, біспецифічні антитіла можуть бути застосовані для локалізації цитотоксичних агентів в клітинах, які експресують СО79Б. Біспецифічні антитіла можуть бути одержані у вигляді повнорозмірних антитіл або фрагментів антитіл.
І0152| В одному аспекті винаходу пропонуються виділені анти-СО79Бб антитіла, що зв'язуються з СЮО79Б і СОЗ (тобто, які містять СЮО79р-зв'язуючий домен і СОЗ-зв'язуючий домен).
У деяких варіантах реалізації винаходу одна із ділянок специфічного зв'язування позначає СОЗ (наприклад, СОЗє або СОЗу), а інша являє собою СО79Б. У деяких варіантах реалізації винаходу СЮОЗ-зв'язуючий домен зв'язується із поліпептидом СОЗ людини або поліпептидом
СОЗ яванського макака (супо). У деяких варіантах реалізації винаходу поліпептид СОЗ людини або поліпептид СОЗ яванського макака є поліпептидом СЮОЗєЄ людини або поліпептидом СОЗє яванського макака, відповідно. У деяких варіантах реалізації винаходу поліпептид СОЗ людини або поліпептид СЮОЗ яванського макака є поліпептидом СЮОЗу людини або поліпептидом СОЗУу яванського макака, відповідно. У деяких варіантах реалізації винаходу анти-СО79р антитіло містить СОЗ-зв'язуючий домен, який зв'язується з епітопом у межах фрагменту СОЗ (наприклад,
СОЗє людини), що складається з амінокислот 1-26 або 1-27 СОЗє людини. У деяких варіантах реалізації винаходу анти-СО79р антитіло є біспецифічним антитілом. У деяких варіантах
Зо реалізації винаходу анти-СО79Б антитіло є біспецифічним антитілом Іде.
ІЇО153| У деяких варіантах реалізації винаходу СОЗ-зв'язуючий домен зв'язується з поліпептидом СОЗє людини із Ка 250 нМ або менше. У деяких варіантах реалізації винаходу
СОЗ-зв'язуючий домен зв'язується з поліпептидом СОЗє людини із КА 100 нМ або менше. У деяких варіантах реалізації винаходу СОЗ-зв'язуючий домен зв'язується з поліпептидом СЮОЗЕ людини із Ка 15 нМ або менше. У деяких варіантах реалізації винаходу СЮОЗ-зв'язуючий домен зв'язується з поліпептидом СОЗєЄ людини із Ка 10 нМ або менше. У деяких варіантах реалізації винаходу СЮОЗ-зв'язуючий домен зв'язується з поліпептидом СОЗє людини із Ка 5 нМ або менше.
ІЇО154| У деяких варіантах будь-якого з вказаних поліспецифічних антитіл, наприклад, біспецифічне антитіло, яке зв'язується з СЮО79Б і СОЗ, містить СОЗ-зв'язуючий домен, причому
СОЗ-зв'язуючий домен містить гіперваріабельні ділянки (НМК) (а) НМК-НІ, що містить амінокислотну послідовність ЕС 10 МО: 39; (Б) НМК-Н2, що містить амінокислотну послідовність БЕО ІЮ МО: 40; (с) НМА-НЗ, що містить амінокислотну послідовність зЕО ІЮО МО: 41; (84) НМА-І1, що містить амінокислотну послідовність зЕО ІЮ МО: 42; (є) НМК-12, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО 10 МО: 43; їі (5 НМВ-ІЇ3, що містить амінокислотну послідовність 5БЕО ІЮО МО: 44. У деяких варіантах реалізації винаходу СЮОЗ-зв'язуючий домен містить (а) МН-домен, який містить: (ї) НМА-НІ, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ
МО: 39, (ії) НУВ-Н2, що містить амінокислотну послідовність зЗЕО ІЮ МО: 40, і (ії) НМАК-НЗ, що містить амінокислотну послідовність, вибрану із ЗЕО ІЮ МО: 41; і (Б) МІ -домен, який містить (Її)
НМВ-ІЇ1, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІО МО: 42, (і) НМК-І2, що містить амінокислотну послідовність ЕС 10 МО: 43, (її) НМК-ІЇ3, що містить амінокислотну послідовність ЗЕБЕО І МО: 44 У деяких випадках, СОЗ-зв'язуючий домен може містити варіабельний домен важкого ланцюга (МН), який містить амінокислотну послідовність, що володіє щонайменше 9095 ідентичністю послідовності з послідовністю (наприклад, щонайменше 9195, 9295, 9395, 9495, 9595, 9696, 9795, 9895 або 9995 ідентичністю з послідовністю) або що безпосередньо має послідовність ЗЕО ІЮО МО: 57, та/або варіабельний домен легкого ланцюга (МУ), який містить амінокислотну послідовність, що володіє щонайменше 9095 ідентичністю з послідовністю (наприклад, щонайменше 9195, 9295, 9395, 9495, 9595, 9695, 9795, 9895 або 9996 ідентичністю з послідовністю) або що безпосередньо має послідовність ЗЕО ІЮ МО: 58. В 60 деяких випадках СЮОЗ-зв'язуючий домен може містити МН-домен, що містить амінокислотну послідовність БЕО ІЮ МО: 57, і МІ -домен, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО: 58. У конкретному випадку, СОЗ-зв'язуючий домен може являти собою 4005с або його похідне або споріднений клон. 0155) Наприклад, у деяких варіантах реалізації винаходу анти-СО79Б антитіло містить (Її)
СОр79р-зв'язуючий домен, який містить НУК (а) НМЕ-НІ, що містить амінокислотну послідовність
ЗЕО ІО МО: 4; (Б) НУВ-Н2, що містить амінокислотну послідовність ФЕО ІЮ МО: 7; (с) НУВ-НЗ, що містить амінокислотну послідовність БЕ ІЮ МО: 9; (4) НМК-1І1, що містить амінокислотну послідовність БЕО ІЮ МО: 10; (е) НМК-12, що містить амінокислотну послідовність зЕО ІЮ МО: 11; ї 9 НМК-І3, що містить амінокислотну послідовність БЕО ІЮ МО: 12, і (ії) СОЗ-зв'язуючий домен, який містить НМК (а) НМЕ-НІ, що містить амінокислотну послідовність ХЕО ІО МО: 39; (б) НУВ-Н2, що містить амінокислотну послідовність 5ЕС ІЮ МО: 40; (с) НМК-НЗ, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО 10 МО: 41; (4) НМУВ-І1, що містить амінокислотну послідовність БЕО ІЮ МО: 42; (є) НМЕК-12, що містить амінокислотну послідовність зЕО ІЮ МО: 43; ї (Д НМАК-І3, що містить амінокислотну послідовність ЕС ІЮ МО: 44. В деяких варіантах реалізації винаходу анти-СО79Б антитіло містить () СО79р-зв'язуючий домен, який містить (а)
МН-домен, що містить амінокислотну послідовність БЕО ІЮО МО: 19 ї (Б) Мі -домен, що містить амінокислотну послідовність БЕО ІЮ МО: 20, ії (і) СОЗ-зв'язуючий домен, який містить (а) МН- домен, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ОО МО: 57 ї (Б) Мі-домен, що містить амінокислотну послідовність зХЕО ІЮ МО: 58.
ІО156| У деяких варіантах будь-якого із вказаних поліспецифічних антитіл, наприклад, біспецифічного антитіла, яке зв'язується з СЮО79Б і СОЗ3, СОЗ-зв'язуючий домен містить (а) НМЕ-
НІ, що містить амінокислотну послідовність ЗЕБЕО 10 МО: 45; (Б) НМК-Н2, що містить амінокислотну послідовність ЕС 10 МО: 46; (с) НМК-НЗ, що містить амінокислотну послідовність БЕО ІЮ МО: 47; (4) НМА-І1, що містить амінокислотну послідовність зЕО ІЮ МО: 48; (в) НМНВ-1І/2, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІО МО: 459; і () НМА-І-3, що містить амінокислотну послідовність ЗЕ ІО МО: 50. У деяких варіантах реалізації винаходу СОЗ3- зв'язуючий домен містить (а) МН-домен, який містить ї) НМАК-НІ, що містить амінокислотну послідовність БЕО ІЮ МО: 45, (ії) НМАК-Н2, що містить амінокислотну послідовність ЕЕ ІЮ МО:
Аб, і (ії) НМАК-НЗ, що містить амінокислотну послідовність, вибрану із БЗЕО ІО МО: 47; і (Б) МІ -
Зо домен, який містить (ї) НМА-11, що містить амінокислотну послідовність зЗЕО ІЮ МО: 48 (ії) НМА-
Ї2, що містить амінокислотну послідовність ЗЕБО ІО МО: 49 ї (ії) НМК-ІЗ3, що містить амінокислотну послідовність зЕО ІО МО: 50. У деяких випадках, СОЗ-зв'язуючий домен може містити МН-домен, який містить амінокислотну послідовність, що володіє щонайменше 9095 ідентичністю з послідовністю (наприклад щонайменше 9195, 9295, 93905, 9495, 95905, 96905, 97905, 9895 або 9995 ідентичністю з послідовністю) або що безпосередньо має послідовність ЗЕО ІЮ
МО: 59, та/або Мі -домен, який містить амінокислотну послідовність, що володіє щонайменше 9095 ідентичністю з послідовністю (наприклад, щонайменше, 9195, 9295, 93905, 94905, 9595, 9690, 9795, 9895 або 9995 ідентичністю з послідовністю) або що безпосередньо має послідовність ФЕО
ІЮ МО: 60. У деяких випадках СЮОЗ-зв'язуючий домен може містити МН-домен, що містить амінокислотну послідовність зЕО ІЮ МО: 59, і МІ -домен, що містить амінокислотну послідовність
ЗЕО ІЮ МО: 60. У конкретному випадку СЮОЗ-зв'язуючий домен може являти собою З8Е4У1 або його похідне, або споріднений клон.
І0157| Наприклад, у деяких варіантах реалізації винаходу анти-СО79Б антитіло містить (Її)
СОр79р-зв'язуючий домен, який містить НУК (а) НМЕ-НІ, що містить амінокислотну послідовність
ЗЕО ІО МО: 4; (Б) НУВ-Н2, що містить амінокислотну послідовність зЗЕО ІЮО МО: 7; (с) НМА-НЗ, що містить амінокислотну послідовність БЕ ІЮ МО: 9; (4) НМК-1І1, що містить амінокислотну послідовність БЕО ІЮ МО: 10; (е) НМК-12, що містить амінокислотну послідовність зЕО ІЮ МО: 11; ї (9 НМК-І3, що містить амінокислотну послідовність «ЕС ІЮО МО: 12, і (ії) СОЗ-зв'язуючий домен, який містить НМК (а) НМЕ-НІ, що містить амінокислотну послідовність ФЕО ІО МО: 45; (б) НУВ-Н2, що містить амінокислотну послідовність 5ЕС ІЮ МО: 46; (с) НМК-НЗ, що містить амінокислотну послідовність 5ЕБЕО 10 МО: 47; (4) НМК-Ї71, що містить амінокислотну послідовність БЕО ІЮ МО: 48; (є) НМЕК-12, що містить амінокислотну послідовність зЕО ІЮ МО: 49; і (дД НМК-І3, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮО МО: 50. У деяких варіантах реалізації винаходу анти-СО79Б антитіло містить (ї) СО79р-зв'язуючий домен, який містить (а)
МН-домен, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮО МО: 19, ї (Б) МІ-домен, що містить амінокислотну послідовність БЕО ІЮ МО: 20, ії (і) СОЗ-зв'язуючий домен, який містить (а) МН- домен, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІО МО: 59, і (Б) Мі-домен, що містить амінокислотну послідовність зХЕО ІЮ МО: 60.
ІЇО158| У деяких варіантах будь-якого із вказаних поліспецифічних антитіл, наприклад, бо біспецифічного антитіла, яке зв'язується з СЮО79Б і СОЗ, СОЗ-зв'язуючий домен містить (а) НМЕ-
НІ, що містить амінокислотну послідовність ЗЕБО І МО: 51; (Б) НМК-Н2, що містить амінокислотну послідовність 5ЕБЕО ІО МО: 52; (с) НМК-НЗ, що містить амінокислотну послідовність БЕО ІЮ МО: 53; (4) НМА-І1, що містить амінокислотну послідовність зЕО ІЮ МО: 54; (є) НМВ-І2, що містить амінокислотну послідовність зЕО ІЮ МО: 55; ії (Ю НМК-ІЗ, що містить амінокислотну послідовність ЗЕ ІО МО: 56. У деяких варіантах реалізації винаходу СОЗ3- зв'язуючий домен містить (а) МН-домен, який містить () НМК-НІ, що містить амінокислотну послідовність БЕО ІЮ МО: 51, (ії) НМАК-Н2, що містить амінокислотну послідовність ЕЕ ІЮ МО: 52 і (її) НМА-НЗ, що містить амінокислотну послідовність, вибрану із БЕО ІО МО: 53; і (5) МІ- домен, який містить (ї) НМА-11, що містить амінокислотну послідовність зЗЕО ІЮ МО: 54 (ії) НМА-
Ї2, що містить амінокислотну послідовність ЗЕБО ІО МО: 55, (ії) НМК-І3, що містить амінокислотну послідовність зЕО ІЮО МО: 56. У деяких випадках анти-СОЗ антитіло може містити
МН-домен, який містить амінокислотну послідовність, що володіє щонайменше 9090 ідентичністю з послідовністю (наприклад, щонайменше 9195, 9295, 93905, 9495, 9595, 9695, 97905, 9895 або 9995 ідентичністю з послідовністю) або що безпосередньо має послідовність 5Е0 ІЮ
МО: 61, та/або Мі -домен, який містить амінокислотну послідовність, що володіє щонайменше 9095 ідентичністю з послідовністю (наприклад, щонайменше 9195, 9295, 93905, 9495, 9595, 9690, 9795, 9895 або 9995 ідентичністю з послідовністю) або що безпосередньо має послідовність ЗХЕО
ІЮО МО: 62. У деяких випадках, СЮОЗ-зв'язуючий домен може містити МН-домен, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО: 61, і МІ -домен, що містить амінокислотну послідовність
ЗЕБЕО ІЮ МО: 62. В конкретному випадку анти-СОЗ антитіло може бути ОСНТІ.м9 або його похідним, або спорідненим клоном. 0159) Наприклад, у деяких варіантах реалізації винаходу анти-СО79Б антитіло містить (Її)
СОр79р-зв'язуючий домен, який містить НУК (а) НМЕ-НІ, що містить амінокислотну послідовність
ЗЕО ІО МО: 4; (Б) НУВ-Н2, що містить амінокислотну послідовність зЗЕО ІЮО МО: 7; (с) НМА-НЗ, що містить амінокислотну послідовність БЕ ІЮ МО: 9; (4) НМК-1І1, що містить амінокислотну послідовність БЕО ІЮ МО: 10; (е) НМК-12, що містить амінокислотну послідовність зЕО ІЮ МО: 11; ї 9 НМК-І3, що містить амінокислотну послідовність «ЕС ІЮО МО: 12, і (ії) СОЗ-зв'язуючий домен, який містить НМК (а) НМЕ-НІ, що містить амінокислотну послідовність ФЕО ІО МО: 51; (б) НУВ-Н2, що містить амінокислотну послідовність БЕО ІЮ МО: 52; (с) НМК-НЗ, що містить
Зо амінокислотну послідовність ЗЕ 10 МО: 53; (4) НМК-Ї71, що містить амінокислотну послідовність БЕО ІЮ МО: 54; (е) НМК-12, що містить амінокислотну послідовність зЕО ІЮ МО: 55; і (М НМК-ІЗ, що містить амінокислотну послідовність ЕС ІЮО МО: 56. У деяких варіантах реалізації винаходу анти-СО79Б антитіло містить (ї) СО79р-зв'язуючий домен, який містить (а)
МН-домен, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮО МО: 19, ї (Б) МІ-домен, що містить амінокислотну послідовність ЕС ІЮ МО: 20, ї (ії) СОЗ-зв'язуючий домен, який містить (а) МН- домен, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮО МО: 61, ії (Б) Мі-домен, що містить амінокислотну послідовність зЗЕО ІЮ МО: 62.
ІО160| У деяких варіантах будь-якого із поліспецифічних анти-СО79Б6 антитіл, анти-СО079р антитіло спричиняє загибель В-клітин з ЕСво менш ніж близько 100 нг/мл. У деяких варіантах реалізації винаходу ЕСво становить менш ніж близько 50 нг/мл. У деяких варіантах реалізації винаходу ЕСво становить менш ніж близько 25 нг/мл. У деяких варіантах реалізації винаходу
ЕСхо становить менш ніж близько 20 нг/мл. У деяких варіантах реалізації винаходу ЕСвхо становить менш ніж близько 15 нг/мл. У деяких варіантах реалізації винаходу загибель В-клітин є загибеллю ендогенних В-клітин. У деяких варіантах реалізації винаходу загибель В-клітин є загибеллю клітинної лінії В-клітин, наприклад, клітинної лінії ВОАВ, клітинної лінії М/5О-СІ СІ 2, клітинної лінії ОСІ-І у-19. У деяких варіантах реалізації винаходу ЕСво визначають за будь-яким способом, описаним у цьому документі, зокрема, у прикладах. У деяких варіантах реалізації винаходу ЕСзо являє собою середнє значення для будь-якого із 5 або 10 експериментів. У деяких варіантах реалізації винаходу ЕС5о являє собою середнє значення для будь-якого із 5
БО або 10 донорів. 0161) У деяких варіантах будь-якого із поліспецифічних анти-СО79Б5 антитіл, анти-СО079р антитіло в концентрації 5000 нг/мл спричиняє загибель щонайменше близько 6095 В-клітин. У деяких варіантах реалізації винаходу анти-СО79р антитіло в концентрації 5000 нг/мл спричиняє загибель щонайменше близько 8095 В-клітин. Анти-СО790 антитіло в концентрації 5000 нг/мл спричиняє загибель щонайменше близько 9095 В-клітин. Наприклад, у деяких варіантах реалізації винаходу В-клітини відносяться до однієї або більше В-клітинних ліній 50-СНІ -6,
Соннг, ВОАВ, МУ5И-ОІ С12, 5с-1, 50О-СНІ -8д аВАМТА-519, Ма!т-6, Катовз та/або ОСІ-І у-19. У деяких варіантах реалізації винаходу ЕСво визначають за будь-яким способом, описаним у цьому документі, зокрема, у прикладах. У деяких варіантах реалізації винаходу ЕС5о являє собою середнє значення будь-якого із 5 або 10 експериментів. У деяких варіантах реалізації винаходу ЕСзо являє собою середнє значення для будь-якого із 5 або 10 донорів. 01621) У деяких варіантах будь-якого із поліспецифічних анти-СО79Б5 антитіл, анти-СО079р антитіло демонструє ЕСвзо активації цитотоксичних Т-клітин менш ніж близько будь-якого із 50 нг/мл. У деяких варіантах реалізації винаходу анти-СО790 антитіло демонструє ЕСвхо активації цитотоксичних Т-клітин менш ніж близько 25 нг/мл. У деяких варіантах реалізації винаходу анти-
СОр795 антитіло демонструє ЕСво активації цитотоксичних Т-клітин менш ніж близько 20 нг/мл В деяких варіантах активацію цитотоксичних Т-клітин вимірюють за допомогою 96 Об. СО25--
Т-клітин в числі СО8 Т-клітин. У деяких варіантах реалізації винаходу ЕСзхо визначають за будь- яким способом, описаним у цьому документі, зокрема, у прикладах. У деяких варіантах реалізації винаходу ЕСзо являє собою середнє значення будь-якого із 5 або 10 експериментів. У деяких варіантах реалізації винаходу ЕСзо являє собою середнє значення будь-якого із 5 або 10 донорів. 0163) Способи одержання поліспецифічних антитіл включають, але не обмежуючись цим, рекомбінантну коекспресію двох пар важкого ланцюга-легкого ланцюга імуноглобуліну з різною специфічністю (див. Міїзїеіп апа СпцеїПо, Маїшге 305: 537 (1983)), ММО 93/08829, і Тгашпескег еї аї.,
ЕМВО 3. 10: 3655 (1991)) і конструювання «виступу-у-порожнині» (див., наприклад, патент США
Мо 5731168). Крім того, поліспецифічні антитіла можуть бути одержані шляхом конструювання ефектів електростатичного наведення для одержання Ес-гетеродимерних молекул антитіл (ММО 2009/089004А1); поперечного зшивання двох або більше антитіл або фрагментів (див., наприклад, патент США 4676980 і Вгеппап єї аї., бсієпсеє, 229: 81 (1985)); із застосуванням лейцинових зіперів для одержання біспецифічних антитіл (див., наприклад, КовієїЇпу еї аї.,.
Іттипої., 148(5):1547-1553 (1992)); із застосуванням технології «діатіл» для одержання фрагментів біспецифічних антитіл (див., наприклад, Ноїйпдег еї аї!., Ргос. Маї). Асад. сі. О5А, 90:6444-6448 (1993)); і із застосуванням димерів одноланцюгових Ем (5Ем) (див., наприклад,
Стибрег єї аї., У. Іттипої., 152:5368 (1994)); і одержанням триспецифічних антитіл, як описано, наприклад, у Тий еї аї. У. Іттипої. 147: 60 (1991).
ІО164| Додатково, до даного винаходу включені сконструйовані антитіла з трьома або більше функціональними сайтами зв'язування з антигеном, включаючи «осьминожі антитіла» (див., наприклад, ОЗ 2006/0025576А1). 0165) Антитіло або його фрагмент у цьому винаході додатково включає «Раб подвійної дії» або «ОАЕ», що містить антигензв'язуючий сайт, який зв'язується з СО79Б0, а також з іншим, відмінним антигеном (див., наприклад, 05 2008/0069820). 7. Варіанти антитіл
ІЇО16б6| У деяких варіантах реалізації винаходу включені варіанти амінокислотних послідовностей антитіл, запропонованих у цьому документі. Наприклад, може бути бажаним покращення афінності зв'язування та/або інших біологічних властивостей антитіла. Варіанти амінокислотної послідовності антитіл можна одержувати шляхом введення відповідних модифікацій в нуклеотидну послідовність, що кодує антитіло, або за допомогою пептидного синтезу. Такі модифікації включають, наприклад, делеції та/або інсерції та/або заміни залишків в амінокислотній послідовності антитіла. Будь-яку комбінацію делеції, інсерції і заміни можна ввести для одержання кінцевої конструкції, за умови, що кінцева конструкція володіє бажаними характеристиками, наприклад, зв'язування з антигеном. а) Варіанти із заміною, інсерцією та делецією
І0167| У деяких варіантах реалізації винаходу передбачені варіанти антитіл, що містять одну або більше замін амінокислот. Цільові сайти для мутагенезу із заміною включають НМК і ЕК.
Консервативні заміни наведені у Табл. 1 під заголовком «переважні заміни». Більш суттєві модифікації наведені у Табл. 1 під заголовком «ілюстративні заміни» і додатково описані нижче з посиланням на класи бічного ланцюга амінокислот. Заміни амінокислот можуть бути введені у цільове антитіло, а продукти піддані скринінгу щодо бажаної активності, наприклад, збереження/покращення зв'язування з антигеном, зниження імуногенності або покращення
АЗКЦ або КЗЦ.
Таблиця 1
Ше() 77771111 СешМасМекАа;Рпеснорлейцин./// Пе 77777771 їец(Ю 77777111 |норлейцинойе Ма; МесАвіРйе Пе 77777771
ІО168| Амінокислоти можуть бути згруповані, в залежності від загальних властивостей бічного ланцюга, таких як: (1) гідрофобні: норлейцин, Меї, Аа, Маї, Гей, Пе; (2) нейтральні гідрофільні: Суб, Зег, ТАг, Азп, Сп; (3) кислі: Авр, Си; (4) основні: Ні, Г ув, Ага; (5) залишки, які впливають на орієнтацію ланцюга: су, Рго; (6) ароматичні: Тгр, Туг, Ріє. (0169) Неконсервативні заміни призводять до заміни елементу одного з вказаних класів на елемент іншого класу. 0170 Один тип заміщеного варіанту включає заміну одного або декількох залишків гіперваріабельної ділянки батьківського антитіла (наприклад, гуманізованого або людського антитіла) У загальному випадку, одержаний(і) варіант(и), відібраний для подальшого дослідження, буде містити модифікації (наприклад, удосконалення) певних біологічних властивостей (наприклад, підвищена афінність, знижена імуногенність) відносно батьківського антитіла та/або володітиме деякими по суті збереженими біологічними властивостями початкового антитіла. Прикладом варіанту заміни є антитіло із зрілою афінністю, яке можна легко згенерувати, наприклад, із застосуванням фагового дисплею на базі методик дозрівання афінності, таких як описані у цьому документі. Якщо коротко, один або більше залишків НУК піддають мутації, причому варіантні антитіла відображують на фазі і піддають скринінгу щодо конкретної біологічної активності (наприклад, афінності зв'язування).
ІО171| Модифікації (наприклад, заміни) можуть бути здійснені в НМК, наприклад, для покращення афінності антитіл. Такі модифікації можуть бути здійснені у «гарячих точках» НУК, тобто, залишках, кодованих кодонами, які з високою частотою зазнають мутації в ході процесу соматичного дозрівання (див., наприклад, СпоуаНигу, Меїйоде Мої. Вісі. 207:179-196 (2008)), та/або залишках, які контактують з антигеном, причому одержаний варіант УН або Мі. тестують на афінність зв'язування. Дозрівання афінності в результаті конструювання і повторного відбору
Зо із вторинних бібліотек описане, наприклад, у Ноодепроот еї аї. іп Меїйоа5з іп МоїІесшціаг Віоіоду 178:1-37 (О'Вгіеп еї аї., ед., Нитап Ргев55, Тоїоула, МУ, (2001)). У деяких варіантах реалізації винаходу з дозріванням афінності різнорідність вводять у варіабельні гени, вибрані для дозрівання, за допомогою будь-якого з численних способів (наприклад, схильна до помилок
ПЛР, перетасування ланцюгів або олігонуклеотид-спрямований мутагенез). Далі створюють вторинну бібліотеку. Після цього бібліотеку піддають скринінгу для ідентифікації будь-яких варіантів антитіл з необхідною афінністю. Інший спосіб введення різнорідності включає НМЕ-
Зо спрямовані підходи, коли рандомізують декілька залишків НМК (наприклад, 4-6 залишків за один раз). Залишки НУК, що беруть участь у зв'язуванні з антигеном, можуть бути конкретно ідентифіковані, наприклад, із застосуванням аланін-сканувального мутагенезу або моделювання. Зокрема, мішенню часто служать СОК-НЗ і СОК-ЇІ З.
ІО172| У деяких варіантах реалізації винаходу заміни, вставки, або делеції можуть відбуватися в межах одного або більше НМК, за умови, що такі модифікації не спричиняють істотного зниження здатності антитіла до зв'язування з антигеном. Наприклад, консервативні модифікації (наприклад, консервативні заміни, запропоновані у цьому документі), які не зменшують значною мірою афінності зв'язування, можуть бути здійснені у НУК. Такі модифікації можуть, наприклад, можуть бути локалізовані поза межами залишків, що контактують антигеном з НМК. У деяких варіантах реалізації винаходу, у представлених вище варіантах послідовностей
МН їі МІ. кожен НУК залишається незмінним або містить не більше однієї, двох або трьох замін амінокислот. 0173) Відповідний спосіб ідентифікації залишків або ділянок антитіла, на які може бути спрямований мутагенез, має назву «аланін-сканувального мутагенезу», як описано у
Сиппіпднат апа МУеєїї5 (1989) Зсієпсе, 244:1081-1085. В цьому способі залишок або групу цільових залишків (наприклад, заряджених залишків, таких як Аг9д, Авр, Ні5, Гуз і (Ім) ідентифікують і замінюють нейтральними або негативно зарядженими амінокислотами (наприклад, аланіном або поліаланіном), щоб визначити, чи вплине це на взаємодію антитіла з антигеном. Додаткові заміни можуть бути введені в положеннях амінокислот, що демонструють функціональну чутливість до первинних замін. Як альтернатива або додатково, кристалічна структура комплексу антиген-антитіло допомагає ідентифікувати точки контакту між антитілом і антигеном. Такі контактуючі залишки і сусідні залишки можуть слугувати в якості мішені або можуть бути видалені як кандидати для заміни. Варіанти можуть бути піддані скринінгу для визначення наявності у них бажаних властивостей.
ІО174| Інсерції в амінокислотній послідовності включають злиття на аміно- та/або карбоксильному кінці, з довжиною, що варіює від одного залишку до поліпептидів, що містять сто або більше залишків, а також інсерції одного або декількох амінокислотних залишків усередині послідовності. Приклади кінцевих інсерцій включають антитіло з М-кінцевим
Зо метіонільним залишком. Інші інсерційні варіанти молекули антитіла включають злиття М- або С- кінця антитіла з ферментом (наприклад, для антитіло-опосередкованої терапії із застосуванням ферментів або проліків (АОТФП)) або поліпептидом, який збільшує період напіввиведення антитіла з сироватки.
В) Варіанти глікозилювання 0175) У деяких варіантах реалізації винаходу антитіла, запропоновані у цьому винаході, модифіковані для збільшення або зменшення ступеня глікозилювання антитіла. Додавання або видалення сайтів глікозилювання з антитіла зручно здійснювати шляхом модифікації амінокислотної послідовності таким чином, щоб створити або видалити один або більше сайтів глікозилювання.
І0176| Якщо антитіло містить ділянку Ес, то карбогідрат, приєднаний до неї, може бути модифікованим. Нативні антитіла, що продукуються клітинами ссавців, звичайно містять розгалужений, біантенарний олігосахарид, що, як правило, приєднаний за допомогою М-зв'язку до А5п297 домену СН2 ділянки Ес. Див. наприклад, Мугідні еї а. ТІВТЕСН 15:26-32 (1997).
Олігосахарид може містити різні карбогідрати, наприклад, манозу, М-ацетилглюкозамін (СІСМАс), галактозу і сіалову кислоту, а також фукозу, приєднану до СІСМАс у «стовбурі» структури біантенарного олігосахариду. У деяких варіантах реалізації винаходу модифікації олігосахариду в антитілі за винаходом можуть бути здійснені таким чином, щоб створити варіанти антитіла з деякими покращеними властивостями.
ІО177| В одному варіанті реалізації винаходу передбачені варіанти антитіла, що містять гідрогенкарбонові структури, позбавлені фукози, приєднаної (безпосередньо або опосередковано) до ділянки Ес. Наприклад, кількість фукози в такому антитілі може становити від 195 до 8095, від 195 до 65905, від 595 до 6595 або від 2095 до 4095. Кількість фукози визначають шляхом обчислення середньої кількості фукози в межах цукрового ланцюга на Азбп297, по відношенню до суми всіх глікоструктур, приєднаних до А5п297 (наприклад, комплексних, гібридних і структур із високим вмістом манози), наприклад, за даними вимірювання за допомогою мас-спектрометрії з часопролітною іонізацією лазерною десорбцією з використанням матриці (МАСОІ-ТОЕ), як описано у УМО 2008/077546. А5п297 позначає залишок аспарагіну, розташований поблизу положення 297 ділянки Ес (нумерація ЄС залишків ділянки
Ес); однак А5п297 також може бути розташований приблизно на ж З амінокислоти проти ходу 60 або по ходу транскрипції відносно положення 297, тобто, між положеннями 294 і 300, внаслідок незначних варіацій послідовності в антитілах. Такі варіанти фукозилювання можуть володіти покращеною функцією АЗКЦ. Див., наприклад, публікації патентів США Мо 05 2003/0157108 (Ргехіа, 3; 05 2004/0093621 (Куоула Накко Кодуо Со., ЦЯ). Приклади публікацій, що відносяться до «дефукозильованих» або «фукозодефіцитних» варіантів антитіл, включають: О5 2003/0157108; УМО 2000/61739; МО 2001/29246; 05 2003/01156145 ОБ 2002/0164328; 05 2004/0093621; 005 2004/0132140; 005 2004/0110704; 005 2004/0110282; 05 2004/0109865; МО 2003/085119; МО 2003/084570; УМО 2005/035586; МО 2005/035778; УМ/О2005/053742;
МО2002/031140; ОкКалакі еї аї. 9. Мої. Віої. 33671 239-1249 (2004); Матапе-ОНпикі еї аї. Віоїесн.
Віоепо. 87: 614 (2004). Приклади клітинних ліній, здатних до продукування дефукозильованих антитіл, включають клітини Гес13 СНО з дефіцитом фукозилювання білка (див. КіркКа еї аї. Агсй.
Віоспет. Віорпу5. 249:533-545 (1986); Заявку на видачу патенту США Ме 05 2003/0157108 А1,
Ргевіа, Г; Її УМО 2004/056312 А1, Адат»5 із співавт., особливо у Прикладі 11), і нокаутовані клітинні лінії, такі як клітини СНО з нокаутованим геном альфа-1,6-фукозилтрансферази, РОТ8 (див., наприклад, Матапе-ОНпикКі еї аї. Віоїесн. Віоєпа. 87: 614 (2004); Капаа, У. еї аї.,
Віотесппої. Віоепо., 94(4):680-688 (2006); ії УМО2003/085107).
І0178| Варіанти антитіл додатково оснащені розділеними навпіл олігосахаридами, наприклад, у яких біантенарний олігосахарид, приєднаний до ділянки Ес антитіла, розділений навпіл ІСМАс. Таким варіантам антитіл може бути властивий зменшений ступінь фукозилювання та/або покращена АЗКЦ. Приклади таких варіантів антитіл описані, наприклад, у УМО 2003/011878 (еап-Маїгеї із співавт.); патенті США Мо 6602684 (тапа із співавт.); і О5 2005/0123546 (Отапа із співавт.). Додатково запропоновані варіанти антитіл, які містять щонайменше один залишок галактози в олігосахариді, приєднаному до ділянки Ес. Такі варіанти антитіл можуть володіти покращеною функцією КЗЦ. Такі варіанти антитіл описані, наприклад, у
МО 1997/30087 (Раїс! єї аІ.); УУО 1998/58964 (Раї)сй, 5.); УХО 1999/22764 (Раї)м, 5.). с) Варіанти ділянки Ес 0179) У деяких варіантах реалізації винаходу одна або більше модифікацій амінокислот можуть бути введені у ділянку Ес антитіла, запропонованого у цьому винаході, тим самим формуючи варіант ділянки Ес. Варіант ділянки Ес може містити послідовність ділянки Ес людини (наприклад, Ідс1, Ідс2, ІдСЗ людини або ділянку Ес /Ідс4), що містить модифікацію
Зо амінокислоти (наприклад, заміну) в одному або декількох положеннях амінокислот. 0180) У деяких варіантах реалізації винаходу пропонується варіант антитіла, що володіє деякими, але не всіма ефекторними функціями, які роблять його бажаним кандидатом для тих галузей застосування, для яких має значення період напіввиведення антитіла іп мімо, тоді як деякі ефекторні функції (такі як комплемент і АЗКЦ) є непотрібними або шкідливими. Аналізи цитотоксичності іп о мйго та/або іп мімо можна проводити для підтвердження відновлення/виснаження активності КЗЦ та/або АЗКЦ. Наприклад, можуть бути проведені аналізи зв'язування з рецептором Ес (ЕСЕ), щоб гарантувати, відсутність зв'язування антитіла із
ЕСУК (і, таким чином, ймовірну відсутність активності АЗКЦ), але збереження здатності зв'язування із ЕсКп. Клітини, що головним чином опосередковують АЗКЦ, МК-клітини, експресують тільки ЕСКЦІЇ, тоді як моноцити експресують ЕСКЦІ, ЕскцЦІЇ ї ЕСКЦІ. Експресія ЕсК на гемопоетичних клітинах стисло охарактеризована у Табл. З на сторінці 464 в Камеїсі апа Кіпеї,
Аппи. Вем. Іттипої. 9: 457-492 (1991). Необмежуючі приклади аналізів іп мйго для оцінки активності АЗКЦ цільової молекули описані у патентах США Мо 5500362 (см., наприклад,
Неїївіго т, І. еї аІ. Ргос. Маг! Асад. 5сі. ОБА 83: 7059-7063 (1986)) і НеїїЇбігот, І еї аї., Ргос. Маг!
Асад. сі. ОБА 82: 1499-1502 (1985); 5821337 (см. Вгиддетапп, М. еї аї., У. Ехр. Мей. 166:1351- 1361 (1987)). В якості альтернативи, можна застосовувати методи нерадіоактивного аналізу (див., наприклад, нерадіоактивний аналіз цитотоксичності АСТІТМ для проточної цитометрії (СеПтесппоїоду, Іпс., Маунтін-Вью, Каліфорнія; і нерадіоактивний аналіз цитотоксичності
СуютТох 962 (Рготеда, Медісон, Вісконсин). Ефекторні клітини, придатні для таких аналізів, включають мононуклеарні клітини периферичної крові (МПК) ії природні клітини-кілери (ПК). В якості альтернативи або додатково, активність АЗКЦ цільової молекули може бути оцінена іп мімо, наприклад, на тваринній моделі, такій як модель, описана у Сіупез еї аї. Ргос. Маг! Асад.
Зсі. ОБА 95:652-656 (1998). Додатково можуть бути проведені аналізи зв'язування із СТд для підтвердження неспроможності антитіла зв'язуватися з С14 і, таким чином, відсутності КЗЦ активності. Див., наприклад, ТІФА зв'язування із Ст4 ії СЗс у УМО 2006/029879 ії УМО 2005/100402.
Для оцінки активації комплементу може бути проведений аналіз КЗЦ (див., наприклад, ба;7апо-
Запіого еї аї., У. Іттипої. Меїтоаз 202:163 (1996); Стадо, М.5. еї аї!., Віоса 101:1045-1052 (2003); і Стгадд, М.5. апіа М.). Суієппіе, Вісо4 103:2738-2743 (2004)). Додатково, можна провести визначення зв'язування із БоКп і кліренсу/періоду напіввиведення іп мімо із застосуванням способів, відомих в цій галузі техніки (див., наприклад, Реїкома, 5.В. єї аї., Іл. Іттипої. 18(12):1759-1769 (2006)). (0181) Антитіла із зниженою ефекторною функцією включають антитіла із заміною одного або декількох залишків 238, 265, 269, 270, 297, 327 і 329 в ділянці Ес (патент США 6737056).
Такі мутанти Ес включають мутанти Ес із замінами в двох або більше положень амінокислот 265, 269, 270, 325 і 327, включаючи так званий мутант Ес "САМА" із заміною залишків аланіну 265 і 297 (патент США Ме 7332581).
І0182| У деяких аспектах анти-СО790 антитіло (наприклад, анти-СО79р антитіло ТЗБ) містить ділянку Ес з мутацією М2970.
ІО183)| У деяких варіантах реалізації винаходу анти-СО79Б антитіло, що містить мутацію
М2970, містить один або більше константних доменів важкого ланцюга, причому один або більше константних доменів важкого ланцюга вибрані з першого домену СНІ (СНІ), першого домену СНО (СН2), першого домену СНЗ (СНЗІ:), другого домену СНІ (СНІ»), другого домену
СНІ (СН2») і другого домену СНЗ (СНЗ»). У деяких варіантах реалізації винаходу щонайменше один з одного або більше константних доменів важкого ланцюга спарений з іншим константним доменом важкого ланцюга. У деяких варіантах реалізації винаходу кожен з доменів СНЗ: і СНЗ» містить виступ або порожнину, причому виступ або порожнина в домені СНЗ: розташовані у порожнині або виступі домену СНЗ», відповідно. У деяких варіантах реалізації винаходу домени
СНЗ.: ї СНЗ» зустрічаються на межі розділу між вказаним виступом і порожниною. У деяких варіантах реалізації винаходу кожен із доменів СНО: і СНО» містить виступ або порожнину, причому виступ або порожнина в домені СН2ї розташовані у порожнині або виступі домену
СНеа», відповідно. У деяких варіантах реалізації винаходу домени СНаО: ії СН2» зустрічаються на межі розділу між вказаним виступом і порожниною. В деяких випадках анти-СОЗ антитіло є антитілом ІдДО1.
ІО184| Описані деякі варіанти антитіл з підсиленим або послабленим зв'язуванням із ЕскК. (Див., наприклад, патент США Мо 6737056; УМО 2004/056312 і ЗПпівїа5 еї аї., 9. Віої. Спет. 9(2): 6591-6604 (2001)). 0185) У деяких варіантах реалізації винаходу варіант антитіла містить ділянку Ес з однією або більше замінами амінокислот, які покращують АЗКЦ, наприклад, заміни в положеннях 298,
Зо 333 та/або 334 ділянки Ес (нумерація залишків ЄС).
І0186| У деяких варіантах реалізації винаходу в ділянці Ес здійснені модифікації, які приводять до змін (тобто, покращення, підвищення або послаблення) зв'язування з С14 та/або комплементзалежної цитотоксичності (КЗЦ), наприклад, як описано в патенті США Мо 6194551,
УМО 99/51642, і Ідихзодіє еї аї. У. Ітттипої. 164: 4178-4184 (2000).
І0187| Антитіла із збільшеним періодом напіввиведення і покращеним зв'язуванням з Ес рецептором новонароджених (БсКп), який відповідає за перенесення материнських ДО в організм плоду (Сиуег еї аї., 9. Іттипої. 117:587 (1976) і Кіт еї аї., у. Іттипої. 24:249 (1994)), описані в О5 2005/0014934А1 (Ніпоп із співавт.). Вказані антитіла містять ділянку Ес з однією або більше замінами, які покращують зв'язування ділянки Ес із РсКп. Такі варіанти Ес включають варіанти із замінами в одному або декількох положеннях ділянки Ес: 238, 256, 265, 2712, 286, 303, 305, 307, 311, 312, 317, 340, 356, 360, 362, 376, 378, 380, 382, 413, 424 і 434, наприклад, заміною в положенні 434 ділянки Ес (патент США Мо 7371826). Додатково, див.
Бипсап « Муіпієг, Маїште 322:738-40 (1988); патент США Мо 5648260; патент США Мо 5624821; і
УМО 94/29351 щодо інших прикладів варіантів ділянки Ес. а) Модифіковані цистеїном варіанти антитіл
ІО188) У деяких варіантах реалізації винаходу може бути бажаним створити модифіковані цистеїном антитіла, наприклад, «тіоОМАБб», у яких один або більше залишків антитіла замінені залишками цистеїну. В конкретних варіантах реалізації винаходу замінені залишки знаходяться у доступних сайтах антитіла. Шляхом заміни вказаних залишків на цистеїн, реакційноздатні тіольні групи, таким чином, розміщуються у доступних сайтах антитіла і можуть бути використані для кон'югації антитіла з іншими фрагментами, такими як лікарські фрагменти або фрагменти лінкер-лікарський засіб, з метою створення імунокон'югату, описаного у цьому документі нижче.
У деяких варіантах реалізації винаходу будь-який один або більше з наступних залишків можуть бути заміщені цистеїном: 205 (нумерація Кара) легкого ланцюга; А118 (нумерація ЄС) важкого ланцюга; і 5400 (нумерація ЄС) ділянки Ес важкого ланцюга. Модифіковані цистеїном антитіла можна згенерувати, як описано, наприклад, у патенті США Мо 7521541. е) Похідні антитіл 0189) У деяких варіантах реалізації винаходу запропоновані у цьому документі антитіла можуть бути додатково модифіковані для введення додаткових небілкових фрагментів, які 60 відомі в цій галузі техніки і є легкодоступними. Фрагменти, придатні для дериватизації антитіла,
включають, але не обмежуючись цим, водорозчинні полімери. Необмежуючі приклади водорозчинних полімерів включають, але не обмежуючись цим, поліетиленгліколь (ПЕГ), кополімери етиленгліколю і пропіленгліколю, карбоксиметилцелюлозу, декстран, полівініловий спирт, полівінілпіролідон, полі-1,3-діоксолан, полі-1,3,6-триоксан, кополімер етилену/малеїнового ангідриду, поліамінокислоти (гомополімери або статистичні кополімери) і декстран або полі(н-вінілліролідон) поліетиленгліколь, гомополімери пропропіленгліколю, кополімери поліпропіленоксиду/етиленоксиду, поліоксиетильовані поліоли (наприклад, гліцерол), полівініловий спирт і їх суміші. Поліетиленгліколь пропіоновий альдегід може забезпечувати переваги при виготовленні за рахунок його стабільності у воді. Полімер може мати будь-яку молекулярну масу і може бути розгалуженим або нерозгалуженим. Кількість полімерів, приєднаних до антитіла, може варіювати, при цьому, якщо приєднаний більш ніж один полімер, вони можуть бути однаковими або різними молекулами. Загалом, кількість та/або тип полімерів, застосовуваних для дериватизації, можуть бути визначені на підставі таких міркувань, як, але не обмежуючись цим, конкретні властивості або функції антитіла, які повинні бути покращені, чи буде похідне антитіла застосовуватися для терапії в певних умовах і т.д.
ІО190| В іншому варіанті реалізації винаходу включені кон'югати антитіла і небілкового фрагмента, які можуть бути вибірково нагріті під дією випромінювання. В одному варіанті реалізації винаходу небілюювий фрагмент є карбоновою нанотрубкою (Кат еї аї., Ргос. Маї!|.
Асад. бсі. ОБА 102: 11600-11605 (2005)). Випромінювання може мати будь-яку довжину хвилі і включає, але не обмежуючись цим, довжини хвиль, які не шкодять звичайним клітинам, але які нагрівають небілюювий фрагмент до температури, при якій гинуть клітини поблизу антитіла- небілкового фрагменту.
В. Рекомбінантні способи і композиції
ІО191| Антитіла можуть бути одержані із застосуванням рекомбінантних способів і композицій, наприклад, як описано в патенті США Мо 4816567. В одному варіанті реалізації винаходу пропонується виділена нуклеїнова кислота, що кодує описані у цьому документі анти-
СО79р антитіла. Така нуклеїнова кислота може кодувати амінокислотну послідовність, що містить МІ, та/або амінокислотну послідовність, що містить УН антитіла (наприклад, легкі та/або важкі ланцюги антитіла). У ще одному варіанті реалізації винаходу пропонується один або
Зо більше векторів (наприклад, векторів експресії), що містять такі нуклеїнові кислоти. У ще одному варіанті реалізації даного винаходу пропонується клітина-хазяїн, що містить таку нуклеїнову кислоту. В одному такому варіанті реалізації винаходу клітина-хазяїн містить (наприклад, була трансформована): (1) вектор, що містить нуклеїнову кислоту, яка кодує амінокислотну послідовність, що містить МІ. антитіла, і амінокислотну послідовність, що містить МН антитіла, або (2) перший вектор, що містить нуклеїнову кислоту, яка кодує амінокислотну послідовність, що містить МІ. антитіла, і другий вектор, що містить нуклеїнову кислоту, яка кодує амінокислотну послідовність, що містить МН антитіла. В одному варіанті реалізації винаходу клітина-хазяїн є еукаріотичною, наприклад. клітина яєчника китайського хом'ячка (СНО) або лімфоїдною клітиною (наприклад, клітина МО, М50, 5р20). В одному варіанті реалізації винаходу пропонується спосіб одержання анти-СО79Б0 антитіла, який включає культивування клітини- хазяїна, що містить нуклеїнову кислоту, яка кодує антитіло, як описано вище, в умовах, придатних для експресії антитіла, і необов'язкове виділення антитіла з клітини-хазяїна (або культурального середовища клітини-хазяїна).
І0192| Для рекомбінантного продукування анти-СО790 антитіла, нуклеїнову кислоту, що кодує антитіло, наприклад, як описано вище, виділяють і вставляють в один або більше векторів для подальшого клонування та/або експресії у клітині-хазяїні. Такі нуклеїнові кислоти можуть бути легко виділені і секвеновані із застосуванням звичайних методик (наприклад, із застосуванням олігонуклеотидних зондів, які здатні специфічно зв'язуватися з генами, що кодують важкі і легкі ланцюги антитіла). 01931 Відповідні клітини-хазяї для клонування або експресії векторів, що кодують антитіла, включають прокаріотичні або еукаріотичні клітини, описані у цьому документі. Наприклад, антитіла можуть продукуватися у бактеріях, особливо якщо немає необхідності у глікозилюванні та ефекторній функції Ес. Стосовно експресії фрагментів антитіл і поліпептидів у бактеріях, див., наприклад, патенти США МоМо 5648237, 5789199 і 5840523. (Див. також Меїподз» іп МоїІесшаг
Віоіоду, Мої. 248 (В.К.С. І о, ед., Нитапа Ргев55, Тоїбула, МУ, 2003), стр. 245-254, де описана експресія фрагментів антитіл в Е. соїї). Після експресії антитіло може бути виділене з бактеріальної клітинної маси у розчинній фракції і може бути додатково очищене.
І0194| На додаток до прокаріотів, еукаріотичні мікроби, такі як ниткоподібні гриби або дріжджі, є придатними хазяями для клонування або експресії векторів, що кодують антитіла, бо зокрема, штами грибів і дріжджів, шляхи глікозилювання яких були «гуманізовані», що забезпечує продукування антитіл з частково або повністю людським патерном глікозилювання.
Див. Сегподгоз5, Маї. Віотесп. 22:1409-1414 (2004), і Ії еїаї., Маї. Віотесп. 24:210-215 (2006). 0195) Крім того, придатні клітини-хазяї для експресії глікозильованого антитіла одержують з багатоклітинних організмів (безхребетних і хребетних). Приклади клітин безхребетних включають клітини рослин і комах. Були ідентифіковані численні штами бакуловірусу, які можна використовувати в поєднанні з клітинами комах, зокрема, для трансфекції клітин Зродоріега
Тгидірегаа.
І0196| Додатково, культури рослинних клітин можна застосовувати в якості хазяїв. Див., наприклад, патенти США МоМо 5959177, 6040498, 6420548, 7125978 і 6417429 (в яких описана технологія продукування антитіл у трансгенних рослинах РІ АМТІВООІЕ5 М),
ІО197| Клітини хребетних також можна застосовувати в якості хазяїв.. Наприклад, придатними можуть бути клітинні лінії ссавців, адаптовані до росту в суспензії. Іншими прикладами придатних ліній ссавцевих клітин-хазяїв є лінія ниркових клітин мавпи СМ1, трансформована 5М40 (СО5-7); лінія ембріональних ниркових клітин людини (293 або клітини 293, як описано, наприклад, у Сгапат єї аїЇ., У. Сеп МігоЇ. 36:59 (1977)); ниркові клітини дитинчати хом'яка (ВНК); мишачі клітини Сертолі (клітини ТМА4, як описано, наприклад, у МаїНег,
Віої. Нергод. 23:243-251 (1980); ниркові клітини мавпи (СМ1); ниркові клітини африканської зеленої мавпи (МЕКО-76); клітини карциноми шийки матки людини (НЕГА); ниркові клітини собаки (МОСК); клітини печінки буйволового щура (ВКІ ЗА); клітини легені людини (М/138); клітини печінки людини (Нер 02); клітини пухлини молочної залози миші (ММТ 060562); клітини
ТКІ, описані, наприклад, у Маїнег еї а!., Аппаї!5 М.У. Асай. Зсі. 383:44-68 (1982); клітини МКС 5; і клітини Е54. Інші корисні лінії клітин-хазяїв ссавців включають клітини яєчника китайського хом'яка (СНО), включаючи клітини ДГФР-СНО (паць еї аї., Ргос. Маї!. Асад. сі. ОБА 77:4216 (1980)); і клітинні лінії мієломи, такі як МО, М5О і 5р2/0. Огляд деяких придатних ліній ссавцевих клітин-хазяїв для одержання антитіл, див. наприклад, у Уа7акі апа Ууи, Мешйоа5 іп МоїІесшаг
Віоіоду, Мої. 248 (В.К.С. І о, єд., Нитапа Ргезз, Тоїоула, МУ), рр. 255-268 (2003).
С. Аналізи (0198) Анти-СО79Бр антитіла, запропоновані у цьому винаході, можуть бути ідентифіковані, піддані скринінгу або охарактеризовані за їх фізико-хімічними властивостями та/або біологічною активністю за допомогою різноманітних аналізів, відомих у даній галузі техніки. 1. Аналізи зв'язування та інші аналізи
І0199)| В одному аспекті, антитіло за винаходом тестують щодо активності зв'язування з антигеном, наприклад, відомими способами, такими як ТІФА, Вестерн-блотинг і т.п. (0200) В іншому аспекті можна застосовувати конкурентні аналізи для ідентифікації антитіла, яке конкурує з анти-СО79р антитілом, описаним у цьому документі, за зв'язування з СЮО79Б. У деяких варіантах реалізації винаходу таке конкуруюче антитіло зв'язується з тим же епітопом (наприклад, лінійним або конформаційним епітопом), з яким зв'язується описане у цьому документі анти-СО79р антитіло. Докладні приклади способів картування епітопу, з яким зв'язується антитіло, наведені у Моггі5 (1996) «Ерпйоре Марріпуд РгоїосоЇб5», іп Меїпоаз5 іп
Моїесшіаг Віоіоду мої. 66 (Нитапа Ргев5, Тома, М). 02011) У прикладі конкурентного аналізу іммобілізований СО79р інкубують у розчині, що містить перше мічене антитіло, яке зв'язується з СЮО79Б (наприклад, описане у цьому документі анти-СО79Б антитіло), і друге немічене антитіло, яке тестують щодо його здатності конкурувати з першим антитілом за зв'язування з СО79Б. Друге антитіло може бути присутнім у супернатанті гіобридоми. Для контролю іммобілізований СО79Б інкубують в розчині, що містить перше мічене антитіло, але не друге немічене антитіло. Після інкубації в умовах, що забезпечують зв'язування першого антитіла з СО79р, надлишок незв'язаного антитіла видаляють, а кількість мітки, зв'язаної з іммобілізованим СО79р, вимірюють. Якщо кількість мітки, зв'язаної з іммобілізованим СО79Б, істотно знижується в тестованому зразку, в порівнянні із контрольним зразком, це вказує на конкуренцію другого антитіла з першим антитілом за зв'язування з СО79Б.
Див. Напоуу апа І апе (1988) Апііїбодієв: А І арогаїогу Мапиаї сп.14 (Сода ріпа Нагбог І абогаїюгу,
Соїа 5ргіпд Натог, МУ). 2. Аналізи активності
І0202| В одному аспекті передбачені аналізи для ідентифікації анти-СО795 антитіл (наприклад, анти-СО79р/СО3 антитіла ТЗБ), що володіють біологічною активністю. Біологічна активність може включати, наприклад, здатність пригнічувати ріст або проліферацію клітин (наприклад, «цитотоксична» активність), здатність спричиняти загибель клітин, включаючи запрограмовану загибель клітин (апоптоз) або антигензв'язуючу активність. Додатково, запропоновані антитіла, що виявляють таку біологічну активність іп мімо та/або іп міїго.
0203) В деяких варіантах реалізації винаходу активність включає здатність підтримувати цитолітичну активність по відношенню до В-клітин та/або активацію цитотоксичних Т-клітин. У деяких варіантах реалізації винаходу анти-СО79Б6 антитіло (наприклад, анти-С0О790/С203 антитіло ТЗБ) за винаходом тестують щодо наявності біологічної активності у формі такої цитолітичної активності по відношенню до В-клітин та/або активації цитотоксичного ефекту Т- клітин за допомогою будь-якого із способів, описаних в цьому документі, зокрема, у Прикладах.
У деяких варіантах будь-якого із вказаних аналізів активності, МПК можуть бути виділені із суцільної крові здорових донорів за допомогою розділення на Рісоїї. Зокрема, кров людини можна зібрати у гепаринізовані шприци і виділити МПК із застосуванням І ейсозер і РісоїЇ Радне
РіІя5. При необхідності, СО4 Т- і СОвж Т-клітини можна відокремити із застосуванням наборів мінепуї, відповідно до інструкцій виробника. (0204) Крім того, клітини можна промити середовищем КРМІ, що містить 1095 сироватки телячого ембріона (СТЕ), з додаванням СішамМах, пеніциліну і стрептоміцину, причому 50,2 млн суспендованих клітин поміщають на 96-лунковий планшет з О-донними лунками. Клітини можна культивувати у середовищі КРМІ 1640 з додаванням 10956 СТЕ при 37"С у зволоженому стандартному інкубаторі для культури клітин. Для проведення аналізів цитотоксичності по відношенню до клітин ВУАВ, 20000 клітин ВОАВ можна інкубувати протягом 24 годин з ефекторними клітинами у вигляді МПК людини або очищених Т-клітин у вказаних для аналізу співвідношеннях, у присутності різних концентрацій антитіл ТЗБ. Для проведення аналізів цитолітичної активності по відношенню до ендогенних В-клітин 200000 МПК людини можна інкубувати з різними концентраціями антитіл ТЗБ протягом 24 годин. 0205) Після культивування клітини можна промити буфером СКАФ (0,595 БСА, 0,0595 натрій азиду у ФСБ). Клітини можна фарбувати в буфері СКАФ, промити буфером СКАФ і суспендувати у 100 мкл буфера СКАФ, що містить 1 мкг/мл пропідій йодиду. Дані можна зареєструвати на проточному цитометрі ЕАСзСаїїбиг і проаналізувати із застосуванням Біом/уо.
Живі В-клітини можна відсікти, як РІ-СО19- або РІ-СО20- В-клітини за допомогою СКАФ, а абсолютну кількість клітин можна визначити при додаванні до реакційної суміші гранул флуоресцеїну ізотіоціанату (ФІТЦ) в якості внутрішнього контролю кількості імпульсів. 9о загибелі клітин може бути обчислений на базі необробленого контролю ТЗБ. Активовані Т-
Зо клітини можна знайти із застосуванням поверхневої експресії СО69 ії С025 із застосуванням анти-СО69-ФИТЦ і анти-СО25-ФЕ.
О. Імунокон'югати 0206) У винаході додатково пропонуються імунокон'югати, що містять анти-СО79Б антитіло, кон'юговане з одним або декількома цитотоксичними агентами, такими як хіміотерапевтичні агенти або лікарські засоби, агенти, що пригнічують ріст, токсини (наприклад, білкові токсини, ферментативно активні токсини бактеріального, грибкового, рослинного або тваринного походження або їх фрагменти) або радіоактивні ізотопи.
І0207| В одному варіанті реалізації винаходу кон'югат являє собою кон'югат антитіло- лікарський засіб (АЛС), в якому антитіло кон'юговане з одним або декількома лікарськими засобами, включаючи, але не обмежуючись цим, майтансиноїд (див. патенти США МоМо 5208020, 5416064 і Європейський патент ЕР 0425235 В1); ауристатин, такий як момометилауриностатинові фрагменти лікарського засобу ОЕ і ОБ (ММАЕ і ММАБЕ) (див. патенти США МоМо 5635483, 5780588 і 7498298); доластатин; каліхеаміцин або його похідне (див. патенти США МоМо 5712374, 5714586, 5739116, 5767285, 5770701, 5770710, 5773001 і 5877296; Ніптап єї аІ., Сапсег Вез. 53:3336-3342 (1993); и І оде еї аІ., Сапсег Вез. 58:2925-2928 (1998)); антрациклін, такий як дауноміцин або доксорубіцин (див. Кгаїх еї аіІ., Сиштепі Мед. Спет. 13:477-523 (2006); дейтгеу еї аї., Віоогдапіс 5 Мед. Спет. І енег5 16:358-362 (2006); Тогдом вї аї.,
Віосопі. Спет. 16:717-721 (2005); Маду еї аї., Ргос. Маї. Асай. 5сі. ОБА 97:829-834 (2000);
Биброму/снік еї аї!., Віоогд. 5 Мей. Спет. І ейегв 12:1529-1532 (2002); Кіпа еї аї., У. Мед. Спет. 45:А336-4343 (2002); і патент США Мо. 6630579); метотрексат; віндезин; таксан, такий як доцетаксел, паклітаксел, ларотаксел, тезетаксел і ортатаксел; триклотецен; і СС1065. (0208) В іншому варіанті реалізації винаходу імунокон'югат містить антитіло, описане у цьому документі, кон'юговане з ферментативно активним токсином або його фрагментом, включаючи, але не обмежуючись цим, ланцюг А дифтерійного токсину, незв'язуючі активні фрагменти дифтерійного токсину, ланцюг А екзотоксину (із Рзенидотопах аегидіпоза), ланцюг А рицину, ланцюг А абрину, ланцюг А модекцину, альфа-сарцин, білки Аїенигігез тогаїї, діантинові білки, білки Рпуїіаса атегісапа (РАРІ, РАРІЇ ї РАР-5), інгібітор Мотогаїса спагапійа, курцин, кротин, інгібітор Зараопагіа ойісіпаїйї5, гелонін, мітогелін, рестриктоцин, феноміцин, єноміцин і трикотецени.
(0209) В іншому варіанті реалізації винаходу імунокон'югат містить антитіло, описане у цьому документі, кон'юговане з радіоактивним атомом з утворенням радіокон'югату. Численні радіоактивні ізотопи доступні для одержання радіокон'югатів. Приклади включають А", 91, 25, о, ВНе!86, Де88. пт», Ві?2, ріг, рре2 і радіоактивні ізотопи Си. Якщо радіокон'югат застосовується для виявлення, він може містити радіоактивний атом для сцинтиграфічних досліджень, наприклад, їс99т або 1123 або спін-мітку для візуалізації методом ядерного магнітного резонансу (ЯМР) (також відомий як магнітно-резонансна томографія, МРТ), таку як знову йод-123, йод-131, індій-111, флуор-19, карбон-13, нітроген-15, оксиген-17, гадоліній, марганець або залізо. (02191 Кон'югати антитіла і цитотоксичного агента можуть бути одержані із застосуванням численних біфункціональних зв'язуючих агентів, таких як / М-сукцинімидил-3-(2- піридилдітіо)упропіонат (СПДП), сукцинімідил-4-(М-малеїнімідометил)циклогексан-1-карбоксилат (СМЦК), імінотіолан (ІТ), біфункціональні похідні імідоестерів (такі як диметиладипімідат НС), активні естери (такі як дисукцинімідилсуберат), альдегіди (такі як глутаровий альдегід), біс- азидосполуки (такі як біс(п-азидобензоїл)гександіамін), похідні біс-діазонію (такі як біс(пара- діазонійбензоїл)етилендіамін), діїзоціанат (такі як толуен-2,6-діїзоціанат) і біс-активні сполуки флуору (такі як 1,5-дифлуор-2,4-динітробензен). Наприклад, імунотоксин рицини може бути одержаний, як описано у МіенНа еї аїЇ., бсівєпсе 238:1098 (1987). Мічена карбоном-14 1- ізотіоціанатобензил-З-метилдіетилен-триамінпентаоцтова кислота (МХ-ОТРА) є прикладом хелатувального агента для кон'югації радіонукліду з антитілом. Див. УМО 94/11026. Лінкер може бути «розщеплюваним лінкером», який полегшує вивільнення цитотоксичного лікарського засобу у клітині. Наприклад, можна застосовувати кислотолабільний лінкер, чутливий до пептидази лінкер, фотолабільний лінкер, диметиловий лінкер або дисульфідвмісний лінкер (Снаїі вї а!І., Сапсег Рез. 52:127-131 (1992); патент США Мо 5208020).
І0211| Імунокон'югати або АЛС явно включені до цього винаходу, зокрема, але не обмежуються цим, такі як кон'югати, одержані з поперечно-зшиваючими лінкерними реагентами, включаючи, але не обмежуючись цим, ВМР5, М-(є-малеїнімідокапроїлокси)сульфосукцинімідний естер (ЕМКС), М-малеїнімідобутирилоксисукцинімідний естер (ГМБС), НВУ5, (сукцинімідил-4-(М- малеїнімідометил)циклогексан-1-карбокси-(б-амідокапроат) (АК-СМЦК), м-малеїнімідобензоїл-
Зо М-гідроксисукцинімідний естер (МБО), (4-(4-М-малеїнімідофенілумасляної кислоти гідразид (МФМГ), сукцинімідил-3-(бромацетамідо)пропіонат (СБАП), сукцинімідилйодацетат (СЙА), сукцинімідил(4-йодацетил)амінобензоат (СЙАБ), СМЦК, сукцинімідил-4-(п- малеїнімідофеніл)бутират (СМФРЕ), сукцинімідил-б6-(Імалеїнімідопропіонамідо)гексаноаті (СМПГ), сульфо-ЕМКС, сульфо-ГМБС, М-малеїнімідоундеканоїл-оксисульфосукцинімідний естер (сульфо-КМУС), сульфо-МБС, сульфо-СЙАБ, сульфо-СМЦК, сульфо-СМФБ |і (сукцинімідил-4-вінілсульфоніл/бензоат (СВСБ), які є комерційно доступними (наприклад, виробництва Ріегсе Віоїесппоіоду, Іпс., Рокфорд, Ілінойс, США).
Е. Способи і композиції для діагностики і виявлення
І0212| В одному аспекті анти-СО79б антитіла за винаходом придатні для виявлення присутності СО79Б у біологічному зразку. Термін «виявлення» у цьому документі включає кількісне визначення або якісне виявлення. У деяких варіантах реалізації винаходу біологічний зразок містить клітину або тканину. У деяких варіантах реалізації винаходу такі тканини включають нормальні та/або злоякісні тканини, яким властивий більш високий рівень експресії сОр79Б, ніж іншим тканинам, наприклад, В-клітини та/або пов'язані з В-клітинами тканини. 0213) В одному з варіантів реалізації винаходу пропонується анти-СО796 антитіло для застосування у способі діагности або виявлення. В додатковому аспекті пропонується спосіб виявлення присутності СЮО79Б у біологічному зразку. В деяких варіантах реалізації винаходу спосіб включає приведення біологічного зразка в контакт з анти-СО79р антитілом, описаним у цьому винаході, в умовах, що дозволяють зв'язування анти-СО790 антитіла з СО79Б, і визначення факту утворення комплексу анти-СО79р антитіла з СЮО79р. Такий спосіб може бути способом іп мійго або іп мімо. В одному варіанті реалізації винаходу, анти-СО79Б антитіло застосовують для вибору суб'єктів, придатних для терапії, із застосуванням анти-СО79р антитіла, наприклад, у випадках, в яких СО79БЬ є біомаркером для відбору пацієнтів. (0214) Приклади порушень клітинної проліферації, які можна діагностувати із застосуванням антитіла за винаходом, включають розлади В-клітин та/або розладу проліферації В-клітин, зокрема, але не обмежуючись цим, лімфому, неходжкінську лімфому (НХЛ), агресивну НХЛ, рецидивуючу агресивну НХЛ, рецидивуючу сповільнену НХЛ, рефрактерну НХЛ, рефрактерну сповільнену НХЛ, хронічний лімфоцитарний лейкоз (ХЛЛ), мілкоклітинну лімфоцитарну лімфому, лейкоз, волосатоклітинний лейкоз (ВКЛ), гострий лімфоцитарний лейкоз (ГЛЛ) і бо мантійноклітинну лімфому.
02151 Деякі інші способи можуть бути застосовані для виявлення зв'язування анти-СО079р антитіл з СО79Б. Такі способи включають, але не обмежуючись цим, аналізи зв'язування з антигеном, що добре відомі в даній галузі техніки, такі як Вестерн-блоти, радіоімунний аналіз,
ТІФА (твердофазний імуноферментний аналіз), «сендвічеві» імуноаналізи, аналізи імунопреципітації, флуоресцентні імуноаналізи, імуноаналізи із застосуванням білка А та імуногістохімію (ІГХ). 0216) У деяких варіантах реалізації винаходу пропонуються мічені анти-СО79Б антитіла.
Мітки включають, але не обмежуючись цим, мітки або фрагменти, що виявляються безпосередньо (такі як флуоресцентні, хромофорні, електронно-щільні, хемілюмінесцентні і радіоактивні мітки), а також частини молекул, такі як ферменти або ліганди, що виявляються опосередковано, наприклад, за допомогою ферментативної реакції або молекулярної взаємодії.
Прикладами міток є, але не обмежуючись цим, радіоізотопи З2Р, 140, 125І, ЗН і 191І, флуорофори, такі як рідкоземельні хелати або флуоресцеїн та його похідні, родамін та його похідні, дансил, умбеліферон, люциферази, наприклад, люцифераза світлячка и бактеріальна люцифераза (патент США 4737456), люциферин, 2,3-дигідрофталазиндіони, пероксидаза хрону (ПХ), лужна фосфатаза, бета-галактозидаза, глюкоамілаза, лізоцим, сахаридоксидази, наприклад, глюкозооксидаза, галактозооксидаза и глюкозо-б6-фосфат-дегідрогеназа, гетероциклічні оксидази, такі як уриказа і ксантиноксидаза, зв'язані з ферментом, який використовує пероксид гідрогену для окиснення прекурсору фарбника, такого як ПХ, лактопероксидаза або мікропероксидаза, біотин/авідин, спін, мітки бактеріофагу, стабільні вільні радикали і т.п.
Е. Фармацевтичні композиції
І0217| Фармацевтичні препарати анти-СО79р антитіла, описаного у цьому винаході, отримують шляхом змішування такого антитіла, що має бажаний ступінь чистоти, з одним або декількома необов'язковими фармацевтично прийнятними носіями (Кептіпдіоп'є Рпаптасеціісаї
Зсіепсез5 161 еййіоп, О5о0ї, А. Еа. (1980)) у вигляді ліофілізованих композицій або водних розчинів. Фармацевтично прийнятні носії, як правило, є нетоксичними для реципієнтів у застосовуваних дозах і концентраціях, і включають, але не обмежуючись цим: буферні речовини, такі як фосфат, цитрат та інші органічні кислоти; антиоксиданти, включаючи аскорбінову кислоту і метіонін; консерванти (такі як октадецилдиметилбензиламоній хлорид;
Ко) гексаметоній хлорид; бензалконій хлорид; бензетоній хлорид; фенол, бутиловий або бензиловий спирт; алкілларабени, такі як метил- або пропілпарабен; катехол; резорцин; циклогексанол; З-пентанол і м-крезол); низькомолекулярні (менш ніж близько 10 залишків) поліпептиди; білки, такі як сироватковий альбумін, желатин або імуноглобуліни; гідрофільні полімери, такі як полівінілпіролідон; амінокислоти, такі як гліцин, глутамін, аспарагін, гістидин, аргінін або лізин; моносахариди, дисахариди та інші карбогідрати, включаючи глюкозу, манозу або декстрини; хелатувальні агенти, такі як ЕДТА; цукри, такі як сахароза, маніт, трегалоза або сорбіт; солеутворюючі протиїіони, такі як натрій; комплекси металів (наприклад, комплекси 2п- білок); та/(або неіонні поверхнево-активні речовини, такі як поліетиленгліколь (ПЕГ). Приклади фармацевтично прийнятних носіїв додатково включають агенти для диспергування у інтерстиціальному просторі, такі як розчинні нейтрально-активні гіалуронідазні глікопротеїни (5НАБЕСР), наприклад, розчинні гіалуронідазні глікопротеїни людини РН-20, такі як гНиРН2го (НМУ ЕМЕХ-, Вахіеєг Іпіегпайопаї!, Іпс.). Деякі приклади 5НАБЕОСР і способи їх застосування, включаючи гНиРН20, описані в Публікаціях патентів США МоМо 2005/0260186 і 2006/0104968. В одному аспекті 5НАБЕОР об'єднують з однією або декількома додатковими глікозаміногліканазами, такими як хондроїтиназа. (0218) Приклади ліофілізованих композицій антитіл описані у патенті США 6267958. Водні препарати антитіл включають описані у патенті США 6171586 і МО 2006/044908, причому останні композиції містять гістидин-ацетатний буфер.
І0219| Препарати за даним винаходом можуть додатково містити більше однієї активної сполуки, якщо це є необхідним при конкретному симптомі, що підлягає лікуванню, переважно з додатковими видами активності, які не здійснюють несприятливого впливу один на одного.
Наприклад, на додаток до анти-СО79Б антитіла, може бути бажаним ввести в одну композицію, наприклад, додаткове анти-СО79р антитіло, друге антитіло, яке зв'язується з іншим епітопом на поліпептиді СО79Б, або антитіло, націлене на яку-небудь іншу мішень, таку як фактор росту, що впливає на ріст конкретного виду раку. В якості альтернативи або додатково, композиція може містити цитотоксичний агент, хіміотерапевтичний агент, цитокін, агент, що пригнічує ріст, антигормональний засіб та/або кардіопротекторний засіб. Такі молекули присутні в композиції у кількостях, ефективних для досягнення передбаченої мети. (0220) Активні інгредієнти можуть бути вміщені до мікрокапсул, які одержані, наприклад, 60 способами коацервації або міжфазної полімеризації, наприклад, гідроксиметилцелюлозні або желатинові мікрокапсули і поли(метилметакрилатні) мікрокапсули, відповідно, у колоїдні системи доставки лікарських засобів (наприклад, ліпосоми, альбумінові мікросфери, мікроемульсії, наночастинки і нанокапсули) або в макроемульсії. Такі способи описані у
Ветіпдюп'в РНаптасецшіїса! Зсієпсез 161й єайіоп, Озвої, А. Ей. (1980). (0221| Можуть бути одержані препарати пролонгованої дії. Відповідні приклади препаратів пролонгованої дії включають напівпроникні матриці із твердих гідрофобних полімерів, що містять антитіло, причому матриці представлені у вигляді формованих виробів, наприклад, плівок або мікрокапсул. (0222) Препарати для введення іп мімо, як правило, є стерильними. Стерильність може бути легко досягнута, наприклад, шляхом фільтрації крізь мембрани для стерильної фільтрації. б. Терапевтичні способи і композиції
І0223| Будь-яке із анти-СО79Б антитіл (наприклад, анти-СО79Б/СО3 антитіло ТЗБ), запропонованих у цьому документі, можна застосовувати у терапевтичних способах. (0224| В одному аспекті пропонується анти-СО795 антитіло (наприклад, анти-СО790/С03 антитіло ТЗБ) для застосування в якості лікарського засобу. У додаткових аспектах пропонується анти-СО79р антитіло (наприклад, анти-СО79р/СО03 антитіло ТЗБ) для лікування або уповільнення прогресування розладу клітинної проліферації (наприклад, ракового та/або проліферативного захворювання В-клітин)д. У деяких варіантах реалізації винаходу пропонується анти-СО790 антитіло (наприклад, біспецифічне анти-СО79Б/анти-СОЗ антитіло) для застосування у способі лікування. У деяких варіантах реалізації винаходу пропонується анти-СО79Б6 антитіло (наприклад, анти-СО79р/СО3 антитіло ТЗБ) для застосування у способі лікування індивіду з розладом клітинної проліферації, який включає введення індивіду ефективної кількості анти-СО79р антитіла (наприклад, анти-СО79р/СО3 антитіла ТЗБ). В одному такому варіанті реалізації винаходу спосіб додатково включає введення індивіду ефективної кількості щонайменше одного додаткового терапевтичного агента, наприклад, описаного нижче.
У ще одному варіанті реалізації винаходу пропонується анти-СО79р антитіло (наприклад, анти- сСр79р/С03 антитіло ТЗБ) для застосування з метою підсилення імунної функції у індивіда з розладом клітинної проліферації. У деяких варіантах реалізації винаходу пропонується анти-
СО796 антитіло (наприклад, анти-СО79Б/СО3 антитіло ТЗБ) для застосування у способі
Зо покращення імунної функції у індивіда з розладом клітинної проліферації, який включає введення індивіду ефективної кількості анти-СО790 антитіла (наприклад, анти-СО79Б/С03 антитіла ТЗБ) для активації ефекторних клітин (наприклад, Т-клітин, наприклад, СОв8- або СО4--
Т-клітин), розширення (збільшення) популяції ефекторних клітин та/або знищення клітини- мішені (наприклад, В-клітини-мішені). «Індивід», у відповідності до будь-якого з вищеописаних варіантів реалізації винаходу, може бути людиною.
І0225| В іншому аспекті винаходу пропонується застосування анти-СО79Б антитіла (наприклад, анти-СО79Б/СО3 антитіла ТЗБ) при виготовленні або для виготовлення лікарського засобу. В одному аспекті, лікарський засіб призначений для лікування розладу клітинної проліферації (наприклад, раку та/"або проліферативного розладу В-клітин). У додатковому варіанті реалізації винаходу лікарський препарат призначений для застосування у способі лікування розладу клітинної проліферації, який включає введення індивіду з розладом клітинної проліферації ефективної кількості лікарського засобу. У одному такому варіанті реалізації винаходу спосіб додатково включає введення індивіду ефективної кількості щонайменше одного додаткового терапевтичного агента, наприклад, описаного нижче. У додатковому варіанті реалізації винаходу пропонується лікарський засіб для активації ефекторних клітин (наприклад, Т-клітин, наприклад, СО4- та/або СО8вя- Т-клітин, розширення (збільшення)) популяції ефекторних клітин та/або знищення клітини-мішені (наприклад, В-клітини-мішені) в організмі індивіду. В додатковому варіанті реалізації винаходу лікарський препарат призначений для застосування у способі підвищення імунної функції у індивіда з порушенням клітинної проліферації або аутоїмунним розладом, який включає введення індивіду ефективної кількості лікарського засобу з метою активації ефекторних клітин (наприклад, Т-клітин, наприклад, СО8-- або СО4-- Т-клітин), розширення (збільшення) популяції ефекторних клітин та/або знищення клітини-мішені (наприклад, В-клітини-мішені). «Індивід», відповідно до будь-якого з вищеописаних варіантів реалізації винаходу, може бути людиною. (0226| В додатковому аспекті винаходу пропонується спосіб лікування розладу клітинної проліферації (наприклад, раку та/або проліферативного розладу В-клітин). В одному варіанті реалізації винаходу спосіб включає введення індивіду з такими розладами клітинної проліферації ефективної кількості анти-СО79р антитіла (наприклад, анти-С0О79Б/СО3 антитіла
ТЗБ). В одному такому варіанті реалізації винаходу спосіб додатково включає введення індивіду 60 ефективної кількості щонайменше одного додаткового терапевтичного агента, наприклад,
описаного нижче. «Індивід», відповідно до будь-якого з вищеописаних варіантів реалізації винаходу, може бути людиною. (0227) В іншому аспекті винаходу пропонується спосіб підсилення імунної функції у індивіду з розладом клітинної проліферації. В одному варіанті реалізації винаходу спосіб включає введення індивіду ефективної кількості анти-СО790 антитіла (наприклад, анти-СО79Б/С03 антитіла ТЗБ) з метою активації ефекторних клітин (наприклад, Т-клітин, наприклад, СОв- або сра4- Т-клітин), розширення (збільшення) популяції ефекторних клітин та/або знищення клітини- мішені (наприклад, В-клітини-мішені). В одному варіанті реалізації винаходу «індивід» є людиною. (0228) Анти-СО79Б антитіло (наприклад, анти-СО79Б/СО3 антитіло ТЗБ) відповідно до цього винаходу може бути застосоване, наприклад, у терапевтичних способах іп міїго, ех мімо і іп мімо.
В одному аспекті винаходу пропонуються способи пригнічення росту або проліферації клітин, іп мімо або іп міго, причому спосіб включає вплив на клітину анти-СО79р антитіла в умовах, що дозволяють зв'язування з СО790. «Пригнічення росту або проліферації клітин» позначає сповільнення росту або проліферації клітин щонайменше на 1095, 2095, 3095, 4095, 5095, 60905, т095, 8095, 9095, 9595 або 10095 і включає загибель клітин. У деяких варіантах реалізації винаходу клітина є пухлинною клітиною. У деяких варіантах реалізації винаходу клітина є В- клітиною. У деяких варіантах реалізації винаходу клітина є ксенотрансплантатом, наприклад, як показано в описі. (0229) В одному аспекті анти-СО79Б антитіло (наприклад, анти-СО79р/СО3 антитіло ТЗБ) за винаходом застосовується для лікування або запобігання проліферативним розладам В-клітин.
У деяких варіантах реалізації винаходу розлад клітинної проліферації пов'язаний із підвищеною експресією та/або активністю СО79р. Наприклад, у деяких варіантах реалізації винаходу, розлад проліферації В-клітин пов'язаний із підвищеною експресією СО790 на поверхні В- клітини. У деяких варіантах реалізації розлад проліферації В-клітин є пухлиною або раком.
Приклади розладів проліферації В-клітин, які можна лікувати антитілами за винаходом, включають, але не обмежуючись цим, лімфому, неходжкінську лімфому (НХЛ), агресивну НХЛ, рецидивуючу агресивну НХЛ, рецидивуючу сповільнену НХЛ, рефрактерну НХЛ, рефрактерну сповільнену НХЛ, хронічний лімфоцитарний лейкоз (ХЛЛ), мілкоклітинну лімфоцитарну
Зо лімфому, лейкоз, волосатоклітинний лейкоз (ВКЛ), гострий лімфоцитарний лейкоз (ГЛЛ) і мантійноклітинну лімфому. У деяких варіантах будь-якого із розладів проліферації В-клітин, розлад проліферації В-клітин є резистентним до лікування анти-СО79Б імунокон'югатом (наприклад, анти-СО79р ММАЕ імунокон'югатом). (0230) В іншому аспекті винаходу пропонуються фармацевтичні препарати, що містять будь- яке з анти-СО796 антитіл (наприклад, анти-СО79Б6Б/СО03 антитіло ТЗБ), описаних у цьому документі, наприклад, для застосування в будь-якому із описаних вище терапевтичних способів.
У одному варіанті реалізації винаходу фармацевтична композиція містить будь-яке із представлених у цьому документі анти-СО79р антитіл і фармацевтично прийнятний носій. У іншому варіанті реалізації винаходу фармацевтична композиція містить будь-яке з анти-СО795 антитіл (наприклад, анти-СО79Б/СО3 антитіло ТЗБ), описаних у цьому документі, і щонайменше один додатковий терапевтичний агент, наприклад, як описано нижче.
І0О231| В одному варіанті реалізації винаходу В-клітинні проліферативні захворювання включають, але не обмежуючись цим, лімфоми (наприклад, В-клітинні неходжкінські лімфоми (НХЛ)) і лімфоцитарний лейкоз. Такі лімфоми і лімфоцитарний лейкоз включають, наприклад: а) фолікулярні лімфоми, Б) мілкоклітинні лімфоми з нерозщепленими ядрами/лімфому Беркітта (включаючи ендемічну лімфому Беркітта, спорадичну лімфому Беркітта і неберкіттовську лімфому), с) лімфоми маргінальної зони (включаючи позавузлову В-клітинну лімфому маргінальної зони (лімфоми лімфатичної тканини, пов'язаної із слизовою оболонкою, ЛЛТС), вузлову В-клітинну лімфому маргінальної зони і селезінкову лімфому маргінальної зони), а) мантійноклітинну лімфому (ЛМК), е) крупноклітинну лімфому (включаючи дифузну крупноклітинну лімфому В-клітин (ДККЛ), дифузну змішаноклітинну лімфому, імунобластну лімфому, первинну медіастинальну В-клітинну лімфому, ангіоцентричну лімфому-лімфому легеневих В-клітин), ) волосатоклітинний лейкоз, 9) лімфоцитарну лімфому, макроглобулінемію
Вальденстрема, п) гострий лімфоцитарний лейкоз (ГЛЛ), хронічний лімфоцитарний лейкоз (ХЛЛ)-мілкоклітинну лімфоцитарну лімфому (МЛЛ), В-клітинний пролімфоцитарний лейкоз, і) новоутворення клітин плазми, мієлому клітин плазми, множинну мієлому, плазмацитому, та/або
Ї) хворобу Ходжкіна. (0232) У деяких варіантах будь-якого із способів розлад проліферації В-клітин є раком. У деяких варіантах реалізації винаходу розлад проліферації В-клітин являє собою лімфому, бо неходжкінську лімфому (НХЛ), агресивну НХЛ, рецидивуючу агресивну НХЛ, рецидивуючу сповільнену НХЛ, рефрактерну НХЛ, рефрактерну сповільнену НХЛ, хронічний лімфоцитарний лейкоз (ХЛЛ), мілкоклітинну лімфоцитарну лімфому, лейкоз, волосатоклітинний лейкоз (ВКЛ), гострий лімфоцитарний лейкоз (ГЛЛ) або мантійноклітинну лімфому. У деяких варіантах реалізації винаходу розлад проліферації В-клітин являє собою НХЛ, таку як уповільнена НХЛ та/або агресивна НХЛ. У деяких варіантах реалізації винаходу розлад проліферації В-клітин є уповільненою фолікулярною лімфомою або дифузною крупноклітинною В-клітинною лімфомою.
У деяких варіантах будь-якого з розладів проліферації В-клітин, розлад проліферації В-клітин є резистентним до лікування анти-СО79р імунокон'югатом (наприклад, анти-СО795 ММАЕ імунокон'югатом).
І0233| Антитіла за винаходом можна застосовувати в терапії як монотерапію або в комбінації з іншими агентами. Наприклад, антитіло за винаходом можна вводити разом із щонайменше одним додатковим терапевтичним агентом та/або ад'ювантом. У деяких варіантах реалізації винаходу додатковий терапевтичний агент Є цитотоксичним агентом, хіміотерапевтичним агентом або агентом, що пригнічує ріст. В одному з таких варіантів реалізації винаходу хіміотерапевтичний агент являє собою агент або комбінацію агентів, таких як, наприклад, циклофосфамід, адріаміцин, гідроксидаунорубіцин (доксорубіцин), вінкристин (Опсоміп"м), преднізолон, схема циклофосфамід, гідроксидауноміцин, Онковін (і преднізон/преднізолон (ЦГОП), схема циклофосфамід, гідроксидауноміцин і преднізон/преднізолон (ЦГП), схема циклофосфамід, вінкристин і преднізон (ЦВП) або циклофосфамід, Онковін і преднізон (ЦОП) або імунотерапевтичні засоби, такі як анти-СО20 (наприклад, КіихапФ) або анти-МЕСЕ (наприклад, Амавзііїп?т), причому комбінована терапія є придатною для лікування раку та/або В-клітинних розладів, таких як розлади проліферації В- клітин, включаючи лімфому, неходжкінську лімфому (НХЛ), агресивну НХЛ, рецидивуючу агресивну НХЛ, рецидивуючу сповільнену НХЛ, рефрактерну НХЛ, рефрактерну сповільнену
НХЛ, хронічний лімфоцитарний лейкоз (ХЛЛ), мілкоклітинну лімфоцитарну лімфому, лейкоз, волосатоклітинний лейкоз (ВКЛ), гострий лімфоцитарний лейкоз (ГЛЛ) і мантійноклітинну лімфому. У інших варіантах реалізації винаходу, наприклад, антитіло згідно винаходу може вводитися разом із щонайменше одним додатковим терапевтичним агентом. У деяких варіантах додатковий терапевтичний агент є хіміотерапевтичним агентом, агентом, що пригнічує ріст,
Зо цитотоксичним агентом, агентом, що застосовується для радіотерапії, антиангіогенним агентом, апоптотичним агентом, антитубуліновим агентом або іншим агентом, таким як антагоніст рецептора епідермального фактора росту (ЕСЕК) (наприклад, інгібітор тирозинкінази), інгібітором ЕСЕК/НЕКІ (наприклад, ерлотиніб (Тагсема"М)), інгібітором тромбоцитарного фактора росту (наприклад, Сіеемес!м (іматинібу мезилат)), інгібітором ЦОГ-2 (наприклад, целекоксиб), інтерфероном, цитокіном, антитілом, що не належить до анти-СОЗ антитіл за винаходом, таким як антитіло, що зв'язується з однією або більше із наступних мішеней ЕгЬВ2,
ЕтбВЗ, ЕтВ4, РОСЕВ-бета, ВіІу5, АРКІГ, ВСМА МЕСЕ або рецептором(ами) МЕСЕ, ТКАП/Арог, або іншим біологічно активним або органічним хімічним агентом. (02341 Крім того, у деяких варіантах реалізації винаходу способи можуть включати додаткову терапію. Додаткова терапія може бути радіаційною терапією, хірургічним лікуванням, хіміотерапією, генною терапією, ДНК терапією, вірусною терапією, РНК терапією, імунотерапією, трансплантацією кісткового мозку, нанотерапією, терапією моноклональним антитілом або комбінацією перерахованого. Додаткова терапія може проводитись у формі ад'ювантної або неоад'ювантної терапії. У деяких варіантах реалізації винаходу додаткова терапія полягає у введенні низькомолекулярного ферментного інгібітору або антиметастатичного агента. У деяких варіантах реалізації винаходу додаткова терапія полягає у введенні агентів, що обмежують побічний ефект (наприклад, агенти, призначені для зменшення частоти та/або тяжкості побічних ефектів лікування, такі як агенти проти нудоти і т.д.). У деяких варіантах реалізації винаходу додаткова терапія є променевою терапією. У деяких варіантах реалізації винаходу додаткова терапія є хірургічним лікуванням. У деяких варіантах реалізації винаходу додаткова терапія є комбінацією променевої терапії і хірургічного лікування. У деяких варіантах реалізації винаходу додаткова терапія є гама-опроміненням. У деяких варіантах реалізації винаходу додаткова терапія може полягати у роздільному введенні одного або декількох терапевтичних агентів, описаних вище.
ІЇ0235| У деяких варіантах будь-якого із способів, додатковий терапевтичний агент є глюкокортикоїдом. У деяких варіантах реалізації винаходу глюкокортикоїд вибраний з групи, що складається із дексаметазону, гідрокортизону, кортизону, преднізолону, преднізону, метилпреднізону, триамцинолону, параметазону, бетаметазону, флудрокортизону та їх фармацевтично прийнятних естерів, солей і їх комплексів. У деяких варіантах реалізації бо винаходу глюкокортикоїд є дексаметазоном. У деяких варіантах реалізації винаходу глюкокортикоїд є фармацевтично прийнятним естером, сіллю або комплексом дексаметазону. У деяких варіантах реалізації винаходу, глюкокортикоїд є дексаметазоном.
І0236| У деяких варіантах будь-якого із способів додаткова терапія включає анти-СО20 антитіло. У деяких варіантах реалізації винаходу анти-СО20- антитіло є ритуксимабом. У деяких варіантах реалізації винаходу анти-СО20-антитело є гуманізованим антитілом В-І у!1. У деяких варіантах реалізації винаходу гуманізоване В-Іуї антитіло є обінітузумабом. У деяких варіантах реалізації винаходу анти-СО20 антитіло є офатумумабом, ублітуксимабом та/або ібритумомаб тіуксетаном.
І0237| У деяких варіантах будь-якого із способів додаткова терапія включає алкілувальний агент. У деяких варіантах реалізації винаходу алкілувальний агент являє собою 4-(5-|біс(2- хлоретил)аміно|-1-метилбензімідазол-2-іл|бутанову кислоту і її солі. У деяких варіантах реалізації винаходу алкілувальний агент є бендамустином. 0238) У деяких варіантах будь-якого із способів додаткова терапія включає ВСІ -2. У деяких варіантах реалізації винаходу інгібітор ВСІ-2 являє собою 4-(4--2-(4-хлорфеніл)-4,4- диметилциклогекс-1-ен-1-іл|метил)піперазин-1-іл)-М-(З-нітро-4-(тетрагідро-2Н-піран-4- ілметил)аміно|фенілусульфоніл)-2-(1Н-піроло|2,3-б|Іпіридин-5-ілокси)бензамід і його солі. У деяких варіантах реалізації винаходу інгібітор ВСІ -2 є венетоклаксом (САЗ Мо 1257044-40-8).
І0239| У деяких варіантах будь-якого із способів, додаткова терапія включає інгібітор фосфоінозитид-3-кінази (РІЗК). У деяких варіантах реалізації винаходу, інгібітор РІЗК інгібує дельта ізоформу РІЗК (тобто, Р1І10б). У деяких варіантах реалізації винаходу інгібітор. РІЗК являє собою 5-флуор-3-феніл-2-((15)-1-"7Н-пурин-б6-іламіно)пропіл|-4(ЗН)-хіназолінон і його солі. У деяких варіантах реалізації винаходу інгібітор РІЗК є іделалізибом (САЗ Мо 870281-82-6).
У деяких варіантах реалізації винаходу інгібітор РІЗК інгібує альфа і дельта ізоформи РІЗК. У деяких варіантах реалізації винаходу інгібітор РІЗК являє собою 2-(3-(2-(1-ізопропіл-З-метил-1 Н- 1,2-4-триазол-5-іл)-5,6-дигідробензо Чімідазо(1,2-4111,4Цоксазепін-9-іл|-1 Н-піразол-1-іл)-2- метилпропанамід і його солі.
І0240| У деяких варіантах будь-якого із способів, додаткова терапія включає інгібітор тирозинкінази Брутона (ВТК). У деяких варіантах реалізації винаходу інгібітор ВТК являє собою 1-(3А)-3-(4-аміно-3-(4-феноксифеніл)-1Н-піразолоїЇ3,4-4|піримідин-1-іл|Іпіперидин-1-іл|проп-2-ен-
Зо 1-он і його солі. У деяких варіантах реалізації винаходу інгібітор ВТК є ібрутинібом (САБ Мо 936563-96-1). 0241) У деяких варіантах будь-якого із способів додаткова терапія включає талідомід або його похідне. У деяких варіантах реалізації винаходу талідомід або його похідне являє собою (85)-3-(4-аміно-1-оксо-1,3З-дигідро-2Н-ізоіндол-2-іл)іпіперидин-2,б-діон і його солі. У деяких варіантах реалізації винаходу талідомід або його похідне є лендалідомідом (СА Мо 191732-72- б).
І0242| У деяких варіантах будь-якого із способів, додаткова терапія включає одне або більше із циклофосфаміду, доксорубіцину, вінкристину або преднізолону (ЦГОП). У деяких варіантах реалізації винаходу додаткова терапія додатково включає анти-СО20-антитіло, описане вище (наприклад, СА-101 та/або Кйихап). 0243) У деяких варіантах будь-якого із способів додаткова терапія включає одне або більше із циклофосфаміду, доксорубіцину або преднізолону (ЦГП). У деяких варіантах реалізації винаходу додаткова терапія додатково включає анти-СО20-антитіло, як описано вище (наприклад, СА-101 та/або Кійшхап). У деяких варіантах реалізації винаходу додаткова терапія додатково включає кон'югат анти-СО79Б0 антитіла і лікарського засобу. У деяких варіантах реалізації винаходу кон'югат анти-СО790 антитіла і лікарського засобу являє собою анти-
Ср79р6-МО-ус-РАВ-ММАЕ. У деяких варіантах реалізації винаходу кон'югат анти-СО79Б5 антитіла і лікарського засобу являє собою описаний у будь-якому із 05 8088378 та/або 5 2014/0030280, які включені до даного документу шляхом посилання в повному обсязі. У деяких варіантах реалізації винаходу кон'югат анти-СО79Б антитіла і лікарського засобу є полутузумаб ведотином. У деяких варіантах будь-якого із розладів проліферації В-клітин, розлад проліферації В-клітин є резистентним до лікування анти-СО79Б (наприклад, кон'югатом анти-
СсОр79Б антитіла і лікарського засобу ММАЕ). У деяких варіантах реалізації винаходу кон'югат анти-СО79Б антитіла і лікарського засобу є полатузумаб ведотином. (0244| У деяких варіантах будь-якого із способів додаткова терапія включає антагоніст зв'язування по осі РО-1. У деяких варіантах реалізації винаходу будь-якого із способів додаткова терапія включає антагоніст зв'язування з РО-1. У деяких варіантах реалізації винаходу будь-якого із способів додаткова терапія включає антагоніст зв'язування з РО-11. У деяких варіантах реалізації винаходу будь-якого із способів додаткова терапія включає бо антагоніст зв'язування з РО-1 2.
І0245| У деяких варіантах будь-якого із способів антитіло за винаходом (і будь-який додатковий терапевтичний агент) можуть бути введені будь-яким придатним способом, включаючи парентеральний, внутрішньолегеневий та інтраназальний, і, якщо це бажано для місцевого лікування, в осередок ураження. Парентеральні інфузії включають внутрішньом'язове, внутрішньовенне, внутрішньоартеріальне, внутрішньоочеревинне або підшкірне введення. Введення може здійснюватися будь-яким придатним способом, наприклад, за допомогою ін'єкцій, таких як внутрішньовенні або підшкірні ін'єкції, зокрема, в залежності від того, чи передбачено короткочасне або постійне введення. До даного винаходу включені різноманітні схеми лікування, включаючи, але не обмежуючись цим, одне або більше введень у різних точках часу, введення болюсу та імпульсну інфузію. У деяких варіантах реалізації даного винаходу введення є підшкірним. (0246) Антитіла за даним винаходом можуть бути виготовлені, дозовані і введені за схемою лікування, відповідно до належної медичної практики. Фактори, що розглядаються в цьому контексті, включають конкретний розлад, що підлягає лікуванню, конкретного ссавця, що підлягає лікуванню, клінічний стан окремого пацієнта, причину розладу, ділянку доставки агента, спосіб введення, розклад введення та інші фактори, відомі практикуючим лікарям.
Антитіло не обов'язково складають з одним або більше агентами, які застосовуються на даний час для запобігання або лікування даного захворювання. Ефективна кількість таких інших агентів залежить від кількості антитіла, присутнього у препараті, типу розладу або лікування та інших факторів, описаних вище. Їх звичайно застосовують у тих же дозах і вводять такими ж способами, як описано у цьому документі, або в кількостях від близько 1 до 9995 дози, описаної у цьому документі, або в будь-яких дозах і будь-яким способом, що є емпірично/клінічно визначеним як придатний. (0247) Для профілактики або лікування захворювання відповідні дози антитіла за винаходом (при застосуванні для монотерапії або в комбінації з одним або декількома іншими додатковими терапевтичними агентами) будуть залежати від виду захворювання, що підлягає лікуванню, виду антитіла, тяжкості і характеру перебігу захворювання, від введення антитіла для профілактичних або терапевтичних цілей, попереднього лікування, клінічного анамнезу пацієнта, відповіді на антитіло і рішення лікуючого лікаря. Антитіло можна вводити пацієнту
Ко) один або більше разів.
І0248| Як загальна пропозиція, терапевтично ефективна кількість анти-СО79р антитіла (наприклад, анти-СО79р/СО3 антитіла ТЗБ) для введення людині буде знаходитись у діапазоні, наприклад, від близько 0,01 до близько 100 мг/кг маси тіла пацієнта, в один або декілька прийомів. У деяких варіантах реалізації винаходу антитіло застосовують у дозі від близько 0,01 до близько 45 мг/кг, від близько 0,01 до близько 40 мг/кг, від близько 0,01 до близько 35 мг/кг, від близько 0,01 до близько 30 мг/кг, від близько 0,01 до близько 25 мг/кг, від близько 0,01 до близько 20 мг/кг, від близько 0,01 до близько 15 мг/кг, від близько 0,01 до близько 10 мг/кг, від близько 0,01 до близько 5 мг/кг, або від близько 0,01 до близько 1 мг/кг на добу. В одному з варіантів реалізації винаходу анти-СО79Б антитіло (наприклад, анти-СО79Б/С0О3 антитіло ТЗБ), описане в цьому документі, вводять людині в дозі близько 100 мг, близько 200 мг, близько 300 мг, близько 400 мг, близько 500 мг, близько 600 мг, близько 700 мг, близько 800 мг, близько 900 мг, близько 1000 мг, близько 1100 мг, близько 1200 мг, близько 1300 мг або близько 1400 мг в 1 день 21-денних циклів. Доза може бути введена в один прийом або в декілька прийомів (наприклад, 2 або З прийоми), наприклад, у вигляді інфузії. При повторному введенні протягом декількох днів або довше, в залежності від стану, лікування звичайно повинно продовжуватися до тих пір, поки не відбудеться бажаного пригнічення симптомів захворювання. Одна типова доза антитіла буде знаходитись у діапазоні від близько 0,05 мг/кг до близько 10 мг/кг. Таким чином, одна або більше доз близько 0,5 мг/кг, 2,0 мг/кг, 4,0 мг/кг або 10 мг/кг (або будь-яка їх комбінація) можуть вводитися пацієнту. Такі дози можна вводити періодично, наприклад, кожного тижня або кожні три тижні (наприклад, таким чином, що пацієнт одержує від близько двох до близько двадцяти, або, наприклад, близько шести доз анти-СО79Б антитіла (наприклад, анти-СО790Б/СО3 антитіла ТЗБ)). На початку можна вводити вищу навантажуючу дозу, з подальшим введенням однієї або більше нижчих доз. Прогрес вказаного лікування з легкістю контролюється за допомогою загальноприйнятих методик і аналізів.
Н. Промислові вироби (0249) В іншому аспекті винаходу пропонується промисловий виріб, що містить матеріали, придатні для лікування, попередження та/або діагностики описаних вище розладів. Виріб включає ємність та етикетку або листок-вкладиш в упаковку на ємності або разом з нею.
Придатні ємності включають, наприклад, бутлі, флакони, шприци, пакети для в/в розчинів і т.д. бо Ємності можуть бути виготовлені з різних матеріалів, таких як скло або пластик. Ємність містить композицію, яка сама по собі або у поєднанні з іншим препаратом є ефективною з точки зору лікування, профілактики та/або діагностики стану, причому ємність може бути обладнана стерильним вхідним отвором (наприклад, ємність може бути пакетом для внутрішньовенного розчину або флаконом із пробкою, яку можна проколоти голкою для підшкірної ін'єкції).
Щонайменше один активний агент у композиції є антитілом згідно винаходу. На етикетці або листку-вкладиші в упаковку вказано, що композиція застосовується для лікування вибраного стану. Крім того, виріб може містити (а) першу ємність із композицією, що міститься в ній, яка містить антитіло за винаходом; і (Б) другу ємність із композицією, що міститься в ній, яка містить додатковий цитотоксичний або інший терапевтичний засіб. Виріб у відповідності до наведеного варіанту реалізації цього винаходу може додатково містити листок-вкладиш, на якому вказано, що композиції можна застосовувати для лікування конкретного стану. В якості альтернативи або додатково, виріб може включати другу (або третю) ємність, що містить фармацевтично прийнятний буферний розчин, такий як бактеріостатична вода для ін'єкцій (БВІ), фосфатно- сольовий буфер, розчин Рингера і розчин декстрози. Він може додатково містити інші матеріали, бажані з комерційної точки зору і з точки зору користувача, включаючи інші буферні розчини, розбавлювачі, фільтри, голки та шприци.
І0250| Необхідно розуміти, що будь-який з вищеописаних виробів може містити імунокон'югат за винаходом замість або на додаток до анти-СО79Б антитіла.
І. ПРИКЛАДИ
І0251| Нижче наведені приклади способів і композицій за даним винаходом. Необхідно розуміти, що можуть бути здійснені різні інші варіанти реалізації винаходу, з урахуванням загального опису, наведеного вище.
Приклад 1
Матеріали і методи
А. Генерація моноклональних антитіл (02521) Білок для імунізації мишей одержують шляхом тимчасової трансфекції векторів, що експресують Ес-мічений або Нібх-мічений позаклітинний домен (ПКД) СО7906 людини у клітинах
СНО. Білки виділяють із трансфікованих клітинних супернатантів на колонках з білком А та ідентичність білка підтверджують шляхом М-кінцевого секвенування. Десять мишей Ваїр/с
Зо (Спапез Кімег І арогайогіе5, Холістер, Каліфорнія) гіперімунізують рекомбінантним Ес-міченим або Ніб-міченим ПКД СО79р людини. В-клітини мишей, що демонструють високі титри антитіл проти імуногену СЮО79Б6 людини за даними прямого ТІФА Її специфічне зв'язування з клітинами
Катов, зливають із клітинами мишачої мієломи (Х63.А98.653; Американська Колекція Типових
Культур, Роквіль, Меріленд), як було описано раніше (Нопоо, -). 5. еї аІ., Нубгідота, 14:253-260 (1995); Копівг, С. єї аї!., Майте, 256:495-497 (1975); Егешпа, У. В. еї аї., У. Іттипої., 129:2826- 2830 (1982)). Через 10-12 днів супернатанти збирають і піддають скринінгу щодо продукування антитіл і зв'язування методом прямого ТІФА і СКАФ, як вказано вище. Позитивні клони, що демонструють найвище імунне зв'язування після другого циклу субклонування шляхом серійного розведення, розмножують і культивують для подальшої характеристики, включаючи специфічність по відношенню до СО79Б людини і перехресну реактивність. Супернатанти, одержані від кожної лінії гібридоми, очищують за допомогою афінної хроматографії (рідинна експрес-хроматографія білків Рпагтасіа (ЖЕХБ); Рпагтасіа, Упсала, Швеція), як було описано раніше (Ноподо, -. 5. еї аї.,, Нубгідота, 14:253-260 (1995); Копіег, а. еї аї., Майте, 256:495-497 (1975); Егешипа, У. В. еї аї., У. Іттипої., 129:2826-2830 (1982)). Далі очищені препарати антитіл піддають стерильній фільтрації (розмір отворів 0,2 мкм; Маїдепе, Рочестер, Нью-Йорк) і зберігають при 4"С в буферизованому фосфатом фізіологічному розчині (ФСБ).
В. Генерація ТЗБ (0253) Антитіла ТЗБ одержують як ІДО1 людини у вигляді повнорозмірних антитіл у форматі виступ-у-«порожнину, як було описано раніше (Аймуеї!Ї еф а). У. Мої. ВіоІЇ. 270: 26-35, 1997).
Напівантитіла екпресують в Е. соїї або клітинах яєчника китайського хом'яка (СНО), очищують за допомогою афінної хроматографії на Білку А і відповідну пару напівантитіл відпалюють іп міго, як було описано раніше (Зріев55 еї аїЇ. Маї. Віоїесппої., 2013). Якщо продукування антитіл
ТЗБ здійснюють у клітинах СНО, антитіло може містити мутацію з аглікозилюванням, наприклад, у положенні М297 (наприклад, М2970), таким чином, що антитіло М297ТЗ3Б буде варіантом із зниженою ефекторною функцією і буде нездатним ініціювати антитілозалежну клітинно- опосередковану цитотоксичність (АЗКЦ).
І0254| Після відпалу анти-СО79рБ/СО3 антитіла ТЗБ очищують методом хроматографії гідрофобних взаємодій (ХГВ) і характеризують за допомогою аналітичної гель-фільтрації, мас- спектрометрії та електрофорезу на поліакриламідному гелі. Очищені антитіла дають єдиний пік
(» 9995 сигналу) при гель-фільтрації з менш ніж 0,295 агрегатів. Гомодимери визначають за допомогою мас-спектрометрії.
С. Афінність зв'язування (0255) Афінність зв'язування для кожного із СОЗ/СО079р ТЗБ тестують за допомогою аналізу
Віасоге або СКАФ. Якщо коротко, для аналізів зв'язування Віасоге, СОЗбє людини іммобілізують на сенсорному чіпі Віасоге бегпе5 5 СМ5 із застосуванням набору для амінного сполучення з
Віасоге, а анти-СО79Б/СО3 антитіла ТЗБ або їх Раб варіанти пропускають в потоці над чіпом.
Для аналізів зв'язування СКАФ клітини ВОАВ (для В-клітинних антигенів) або інші вказані клітинні лінії інкубують з різними концентраціями ТЗБ при 4"С протягом 30 хвилин, після чого клітини промивають та інкубують із другим антитілом (анти-пиЇдсе-ФК; ВО Віозсіепсе) ще протягом 15 хвилин, після чого клітини знову промивають і готують для аналізу СКАФ. р. Аналізи загибелі В-клітин іп міго та активації Т-клітин (0256) Згенеровані анти-СО79рБ/СО3 антитіла ТЗБ тестують щодо їх здатності спричиняти загибель В-клітин та активацію цитотоксичних Т-клітин. Для таких аналізів МРК виділяють із суцільної крові здорових донорів за допомогою розділення на РісоїЇ. Якщо коротко, кров людини збирають у гепаринізовані шприци і МПК виділяють із застосуванням І ейсозер (Огеїпег Віо-опе, кат. Ме 227290Р) і РісоїЇ Радие Ріиз (ЗЕ Неайсаге Віозсіепсе5, кат. Ме 95038-168), як рекомендовано виробником. При необхідності Т-клітини СО4- і СО8- відокремлюють за допомогою наборів Мінепуї у відповідності до інструкцій виробника.
І0257| Клітини промивають середовищем КРМІ, що містить 10950 СТЕ, з додаванням
Сішамах (сірсо, кат. Мо 35050-061), пеніциліну і стрептоміцину (сібсо, кат. Мо 15140-122), і -0,2 млн суспендованих клітин вміщують на 9б-лунковий планшет з О-донними лунками. Клітини культивують в КРМІ 1640 з додаванням 1095 СТЕ (Зідта-Аїйгісй) при 377"С у стандартному зволоженому інкубаторі для культури клітин. Для аналізів загибелі клітин ВУАВ 20000 клітин
ВОАВ інкубують з ефекторними клітинами у вигляді МПК людини або очищених Т-клітин у вказаних для аналізу співвідношеннях у присутності різних концентрацій антитіл ТЗБ протягом 24 годин, якщо не вказано інше. Для аналізів загибелі ендогенних В-клітин 200000 МПК людини інкубують з різними концентраціями анти-СО79р/СО3 антитіл ТЗБ протягом 24 годин, якщо не вказано інше.
Зо (0258) Після культивування клітини промивають буферним розчином СКАФ (0,595 БСА, 0,0595 натрій азиду у ФСБ). Потім клітини фарбують у буферному розчині СКАФ, промивають буферним розчином СКАФ і суспендують у 10 мкл буферного розчину СКАФ, що містить 1 мкг/мл пропідій йодиду. Дані реєструють на проточному цитометрі ЕАСзСаїїриг та аналізують із застосуванням Ріомл)о. Живі В-клітини відсікають як РІ-СО19ж або РІ-СО20- В-клітини за допомогою СКАФ, а абсолютну кількість клітин визначають за допомогою додавання гранул
ФІТЦ до реакційної суміші як внутрішній контроль імпульсів. 95 загибелі клітин обчислюють на базі необробленого контролю ТЗБ. Активовані Т-клітини знаходять за допомогою поверхневої експресії СО69 ії СО25 із застосуванням анти-СО69-ФІТЦ (ВО, кат. Ме555530) і анти-СО25-РЕ (ВО, кат. Мо 555432).
О. Ефективність іп мімо (0259) 50 мишам 5СІЮО.БбО підшкірно вводять у правий грудний сегмент 5 млн ВОАВ-Їис анти-
С0р7906-МО-мс-РАК-ММАЄ клітин резистентної моделі Т1.1 Х1І у збалансованому сольовому розчині Хенка (ССРХ) в об'ємі 0,2 мл на мишу (не більше 200 мкл) або суміш 5 млн ВІАВ-Ійс анти-С07906-МО-мс-РАК-ММАЄ клітин резистентної моделі Т1.1 Х! і 10 млн МПК в ССРХ об'ємом 0,2 мл (не більше 200 мкл). Це дослідження є превентивним, тому інокуляцію та лікування проводять у 0 День.
І0260| У дослідженні було п'ять груп: 1) 5 млн ВОАВ-Ішс анти-С0О796-МО-мс-РАК-ММАЄЕ резистентних моделі Т1.1 Х1, основа, щотижня х2, в/в; 2) 5 млн ВОАВ-Ішс анти-СО79рБ-МоО-мс-
РАК-ММАЕ резистентних до моделі 11.1 Х1, 0,5 мг/кг анти-СО79 ТЗБ, щотижня хг, в/в; 3) 5 млн
БО резистентних до ВОАВ-Ішс анти-С0О790-МОС-мо-РАК-ММАЄЕ моделі Т1.1 Х1І ж 10 х 106 МПК (попередньо змішані), основа, щотижня хг, в/в; 4) 5 млн ВОАВ-Іис анти-С0О790-МО-мсо-РАК-ММАЄЕ резистентних моделі Т1.1 Х1 - 10 х 106 МПК (попередньо змішані), 0,5 мг/кг (анти-СО79 ТЗБ
СО079Б.А7 М14Б/38Е4м1), щотижня х2, в/в; і 5) 5 млн резистентних ВОАВ-Ійс анти-СО796-МоО-мс-
РАК-ММАЕ моделі 11.1 Х1, 8 мг/кг анти-С0796 ВОАВ- ШС-МО-МО-РАК-ММАЕ, одноразово, в/в.
МІК одержують з лейкоцитарної плівки донора, культивують протягом ночі в умовах без активації, вводять у вигляді суміші з клітинами ВОАВ. Введення всіх препаратів здійснюють в/в, у хвостову вену, об'єм - 0,1 мл (не більше 200 мкл). Пухлини вимірюють 1-2 рази на тиждень.
Вимірюють масу тіла 1-2 рази/тиждень до 14 дня після введення останньої дози. 1. Вибір плеча проти антигену СО795 анти-СО79Б-Т3Б
02611) Одержані кон'югати антитіло-лікарський засіб (АЛС) (наприклад, гуманізоване анти-
СО79р6 антитіло (гуманізоване 5М8), кон'юговане з монометиллауристатином Е (ММАЕ) за допомогою розщеплюваного протеазою лінкера), які у клініці продемонстрували свою ефективність при лікуванні НХЛ. Див. патент США Мо 8088378 і Мог5сппаийзег еї аї., «4457
Ордаїєа Везийбв ої а РНазе І Вапдотілеа Зщшау (ВОМИОГО5) ої Роїіаййлитаб Медоїйп ог
Ріпаїшгитабр Медоїйп Рій Нйихітаб іп Раїепі5 мйп НеїІарзед/Неїгасіогу Моп-Нодакіп Гутрпота» 56" АБН Аппиаї! Мевїіпд апа Ехрозіїйоп: Оесетрбег 6-9, 2014. (02621) На базі клінічного успіху анти-СО79Б6 АЛС було вибрано гуманізоване антитіло 5М8, в
Т-клітиннозалежному біспецифічному (ТЗБ) форматі, для проведення високого потенціалу цитотоксичності Т-клітин з метою знищення пухлинних клітин. Див. патент США Мо 8088378, який включений до даного документу шляхом посилання в повному обсязі. Анти-СОЗ (наприклад, ОСНТІ м9; див. наприклад, 2Ппи еї аї. Іпі. У. Сапсег 62:319-324 (1995))/анти-СО79р (наприклад, 5М8.м28) біспецифічне антитіло виступ-і-порожнина (В2П) одержують, як описано вище. Однак, у аналізах загибелі ендогенних В-клітин із застосуванням двох різних донорів, як описано вище, спостерігалася слабка активність біспецифічного ВМП ОСНТІ1.м9/5М8.м28 з точки зору знищення клітин: ЕСбво в для аналізі загибелі клітин становило 357 нг/мл і 120 нг/мл.
І0263| Друге анти-СОЗ (наприклад, ОСНТ1.М9)/анти-СО79р антитіло ТЗБ одержували із застосуванням 2Е2 як плеча анти-СО79р антитіла. 222 продемонстрував перспективність іп міго як анти-СО790 АЛОС. Див. наприклад, О520090068202, що включений шляхом посилання в повному обсязі. Крім того, СО79Б плече антитіла 5ЗМ8.м28 було модифіковане у спробі підвищити показники загибелі клітин (ЗМ8.пем/ (МН ЗЕО ІО МО: 37 і МІ 5ЗЕО ІЮ МО: 38)). Як показано на Фіг. 1А (аналіз загибелі ендогенних В-клітин) і Фіг. 18 (аналіз загибелі клітин ВАВ), біспецифічні антитіла ВП 5М8.м28/0ОСНТІ мо, біспецифічні антитіла ВП 5М8.пем/ОСНТІ1 мо, а також біспецифічні антитіла ВП 2Е2/0СНТІ1.м9 демонструють слабкі показники цитотоксичної активності відносно В-клітин. (0264| Моноклональні анти-СО796 антитіла були одержані, як описано вище. Два із цих анти-СО79Б антитіл (СО79Б.Е6 і СО79р.АТ) були додатково випробувані у вигляді біспецифічних анти-СО79Б/СО03 антитіл формату біс-Рар. Як проілюстровано на Фіг. 1С, в аналізі загибелі ендогенних В-клітин, біспецифічний біс-гарб СО79р.Е6/ОСНТІ1.м9 продемонстрував покращення
Зо показників загибелі клітин в порівнянні з біспецифічним ВП 5М8.м28/0СНТІ1 м9 (ЕСбво 33 нг/мл в порівнянні з 189 нг/мл). Крім того, як показано на Фіг. 1С, в аналізі загибелі ендогенних В-клітин, біспецифічні біс-гар СО79Б.А7/ЛОНТІ.М9 значно покращують показники загибелі клітин у порівнянні з будь-якими біспецифічними біс-гавб СО79р.Еб/ОСНТІ1.м9 або біспецифічними В2П
ЗМ8.м28/0СНТІ мо (ЕСво 12 нг/мл в порівнянні з 33 нг/мл і 189 нг/мл). Біспецифічні біс-Рар
СОр79р.А7/ОНТ1.м9 далі вивчали щодо загибелі ендогенних В-клітин і активації СО8-- Т-клітин із застосуванням додаткових донорів. Як проілюстровано на Фіг. 2А і С, в аналізі загибелі ендогенних В-клітин, як описано вище, біспецифічний біс-бар СО79Б.АТ7/ОНТ1.м9 у випадку двох різних донорів приводив до ефективної загибелі В-клітин з ЕСбо 7,0 нг/мл і 18 нг/мл, відповідно.
В той же час, як проілюстровано на Фіг. 2В і 0, в аналізі активації СОв- Т-клітин, описаному вище, біспецифічний біс-габ СО79р.А7Т/ОНТІ .м9 приводить до ефективної активації Т-клітин, що підтверджується 96 СОбУж СОр25- Т-клітин в числі СЮОвя Т-клітин, з ЕСвхо 17 нг/мл і 17 нг/мл, відповідно. (0265) Для того, щоб краще зрозуміти відмінність у загибелі В-клітин і активації Т-клітин різними плечима проти антигену СО79р у анти-СО790/СО3 антитілах ТЗБ, аналізували властивості різних плечей проти антигену СО79Б. В аналізі СКАФ з клітинами ВОАВ за зв'язування з СО79Б.А7 конкурував пептид АКЗЕОКУКМРКОЗАСЗНКІММОВ (5БО ІЮО МО: 63) розміром 21 амінокислота, який відповідає МНо-кінцю йпиСО79Юб, але не пептид
АКБЕОІ УРМРКОЗАСЗАКІММОЗ (5ЕО ІЮ МО: 64) розміром 21 амінокислота, який відповідає МНе- кінцю СО79р яванського макака (дані не показані). Це є аналогічним результатам 2БЕ2 і 5М8, описаним у 2пепо єї аІ. Мої. Сапсег Тпег. 8(10):2937-2947 (2009). Таким чином, епітоп на СО79р, схоже, не є відповідальним за відмінність у загибелі В-клітин і активації Т-клітин між
ЗМ8.м28/0ОСНТ1 мо, 2Е2/О0СНТІ1.м9 і СО79.АТ. (0266) Додатково оцінювали афінність зв'язування одновалентного і двовалентного анти-
СОр79Б антитіла для кращого зрозуміння їх внеску у загибель В-клітин, якщо він існує. Крім того, аналізували афінність зв'язування двовалентних анти-СО79Б антитіл і біспецифічних анти-
СОр79р/СО03 антитіл із застосуванням клітин ВОАВ. Первинні експерименти показали, що афінність зв'язування двовалентних анти-СО79р антитіл 5М8.м28 з двома плечима із клітинами
ВОАВ в показниках ЕСбхо, становить 0,04 мкг/мл, тоді як афінність зв'язування біспецифічних ваепП (5М8.м28/0СНТІ1.м9) із клітинами ВУАВ в показниках ЕС5о становить тільки 3,7 мкг/мл. бо Аналогічно, як проілюстровано на фіг. ЗА, афінність зв'язування двовалентних анти-СО79р антитіл з двома плечима 2Е2 з клітинами ВУАВ в показниках ЕС5о була значно вищою за афінність зв'язування біспецифічних Ве.П о анти-СО79рБ/СО3 антитіл (5М8.м28/0ОСНТІ1 мо,
ЗзМвпем/ОСНТІ1.м9 ії 2Е2/ОСНТ.м9). Афінність зв'язування додаткових анти-СО79 антитіл, сСОр79р.Еб6 ії СО79р.А7, аналізували у форматі двовалентного анти-СО790 антитіла з двома плечима, а також біс-Раб і біспецифічних ВП анти-СО79Б/СО3 антитіл. Як проілюстровано на
Фіг. ЗВ, афінність зв'язування двовалентного анти-СО79Б5 антитіла з двома плечима СО79.А?7 із клітинами ВУАВ у показниках ЕСвхо становила 0,31 мкг/мл. Афінність зв'язування біспецифічного біс-гар анти-С0О790/С03 (СО79Б.А7/ОСНТІ1.м9) з клітинами ВОАВ у показниках ЕСз5о була меншою, ніж для двовалентного анти-СО790 антитіла з двома плечима СО79.А7, але все ще була відносно високою і становила 1,4 мкг/мл. Афінність зв'язування двовалентного анти-СО79р антитіла з двома плечима СО79р Еб і біс-бар біспецифічних ВП анти-СО79Б/СО3 антитіл
ЗМ8.м28/0СНТ1.м9 ії С079р.Е6/СНТ1.м9, відповідно) з клітинами ВОАВ в показниках ЕСво була значно нижчою. На базі цих даних, одновалентна афінність зв'язування корелює із ступенем виснаження ендогенних В-клітин і 95 загибелі В-клітин. 2. Гуманізація плеча проти антигену СЮО79р (0267| Моноклональне антитіло СЮО79Б.А7 було гуманізоване, як описано вище. Залишки пронумеровані відповідно до КарБбаї єї аІ., зхедиепсез ої ргоїеіп5 ої іттипоїодісаї іпієгеві, БІЙ Еа,.,
Рибіїс Неайй Зегуісе, Маййопаї! Іпвійшевз ої Неайй, Веїпезаа, Ма. (1991). (0268) Варіанти, сконструйовані в процесі гуманізації СО79Б.А7, оцінювали у вигляді до.
Домени МІ. і МН мишачого СЮО79Б.А7 були вирівняні з МІ. капа ІІ людини (МІ К2) і консенсусними послідовностями підгрупи Ї МН людини (УНІ). Гіперваріабельні ділянки мишачих антитіл були сконструйовані у вигляді акцепторних каркасів МІ К2 ії УНІ. Зокрема, положення 24-34 (І 1), 50-56 (12) і 89-97 (І 3) із домену тиСО79р.А7 були пересаджені на МІ К2, і положення 26-35 (НІ), 50-65 (Н2) ї 93-102 (НЗ) з домену МН тиСО79Б А7 були пересаджені на УНІ.
І0269| У цьому розділі афінність зв'язування антитіла визначали за допомогою ВіАсоге"м
Т100. Якщо коротко, чіпи ВіІАсоге"М СМ5 категорії «для досліджень» активують реагентами 1- етил-3-(З-диметиламінопропіл)карбодіїмідом (ЕДК) і М-гідроксисукцинімідом (МН), відповідно до інструкцій постачальника. СО79а людини, злитий з реагентами Ес на С-кінці, об'єднують із чіпами. Для кращого забезпечення реакцій одновалентного зв'язування, у кожній проточній
Зо кюветі здійснюють іммобілізацію низької щільності «12 одиниць відповіді (ОВ). Для вимірювання уявної афінності антитіл, іммобілізують 370 ОВ антигену. Групи поєднання, що не прореагували, блокують за допомогою 1 М етаноламіну. Для кінетичних вимірювань, триразові серійні розведення антитіла вводять інжекцією в буфері ФСОБ-Т (0,0595 поверхнево-активної речовини Р2О у ФСБ) при 25"7С і швидкості потоку 30 мкл/хв. 10 мМ розчин гліцину, рН 1,7, застосовують як буферний розчин регенерації при швидкості потоку 30 мкл/хв протягом 1 хвилини (Копг). Значення швидкості асоціації і швидкості дисоціації (Кої5) обчислюють із застосуванням моделі зв'язування 1:11 Ленгмюра (програмне забезпечення ВіІАсоге"Мм Т100
ЕмаїІчайоп, версія 2.0). Рівноважну константу дисоціації (Ка) обчислюють, як співвідношення
Коп/Коп.
І0270| Гуманізований СОК трансплантат СО79Б.А7 (СО79р.А7.м1) не зв'язується із СЮ79р.
Таким чином, були одержані додаткові гуманізовані варіанти, щоб оцінити внесок верн'єрних положень мишачого каркасу у зв'язування. Шість додаткових легких ланцюгів (МІ 1: пересаджені
СОР я (36), МІ/2: пересаджені СОК ї- (У36І « 146С), МІ 3: пересаджені СОК я (І2М я УЗ361 146С), М 4: пересаджені СОК ї- (361 ж 1465), МІ 5: пересаджені СОК ж (12М ж 361 ях І 465),
МІ.6: пересаджені СОК « (І 465)) і сім додаткових ланцюгів (МНТа: пересаджені СОК ж (А9УЗ5),
МНІБ: пересаджені СОМ ї- (К71М ї- А935), МНІс: пересаджені СОМ ж (М67А ж Іб9Ї ж К71М ж
А9УЗ5), УНТа: пересаджені СОК ж (М67А «ж Іб9Ї ї- К71М «Т7З3К ж АУ35), МНІе: пересаджені СОК я (М67А ж К7/1М ї- А9УЗ35), МНІГ пересаджені СОК «ж (169Ї ї- К71М ж АЗ9З35) і МНІТд: пересаджені
СОВ -- (М67А -- Іб9І)) були сконструйовані і об'єднані, щоб згенерувати варіанти, наведені у
Табл. 2. На базі афінності вказаних варіантів, У36бІ і 146С в легкому ланцюзі, мабуть, є ключовими верн'єрними залишками миші. Несподівано, при заміні амінокислоти в положенні 46 на серин, щоб уникнути застосування вільного цистеїну, афінність варіантів з цією зміною різко покращувалася. У важкому ланцюзі, М67А, Іб9Ї, К7/1М ії А935 також сприяли зв'язуванню з
СО79рБ; однак К71М, схоже, виявився ключовим верн'єрним залишком миші на базі даного аналізу мутацій. Всі наведені значення афінності у Табл. 2 є значеннями уявної афінності на базі двовалентного зв'язування ІдсС із СО79Б, іммобілізованим при низькій щільності, із приблизно одновалентним зв'язуванням. Див. Табл. 2 нижче.
Таблиця 2 сортові? нМІтрансплані МІ Ме ММ м мб а трансплантатЗв'язування /- НПО 320 НМ 13. Відсутнє мо ко (яй 001000101 о ін Ще) нПпОо 3800 нм теме | дб вою 101 31 1 по нпОо 7050 нм 8нМ
У Ще) нПпО 20 нм 116 нм 5 НМ 5 НМ 23 нм
Гм овмо см лм о лі7нм | ввнМ а НМ 4 НМ вмію о 8 НМ 20 нм посли ННЯ НОЯ ННЯ ННЯ БОР: ЧО НОВЕ с в НМ 39 НМ
Після ННЯ ПОН ННЯ НАННЯ Р ННЯ БАР ня 16 нм 68 НМ
І0271| Афінність зв'язування додатково тестували за допомогою аналізу СКАФ. Клітини
ВОАВ інкубували з різними анти-СО79р антитілами протягом 30 хвилин на льоду. Після закінчення інкубації клітини промивали льодяним буфером СКАФ (1 х ФСБ, 295 БСА, 2 мМ
ЕДТА), з подальшою інкубацією з міченими ФЕ мишачими антитілами проти ЇдДс людини (ВО ріозсіепсе Мо 555787). Аналіз методом проточної цитометрії проводили на аналізаторі ВО І 5.
Показники двовалентного зв'язування виражали як середню інтенсивність флуоресценції (СІФ) флуорофору ФЕ. Зв'язування сСпПСО79р.А7, пиСО79Б.А7Т.м12 і пиСО79р.А7Т.м14 з клітинами ВОАВ, що містять люциферазу, відбувалося із ЕСвзо 124 нг/мл, 400 нг/мл і 68 нг/мл, відповідно.
І0272| Афінність зв'язування гуманізованого СО79.А7.м14 в одновалентному (« двовалентному форматах вивчали, як описано вище. Як проілюстровано на Фіг. ЗС, значення
ЕСво для одновалентного СЮО79.А7.м14 (у форматі ТЗБ ВП СО79.А7 .м14/40055с) становить 220 нг/мл, тоді як ЕСзо двохвалентного СЮО79А7.м14 з двома плечима становить 46,8 нг/мл.
І0273| Гуманізоване антитіло СЮО79.А7.м14 випробовували в умовах термічного стресу (402С, рН 5,5, 2 тижні) і аналізу із застосуванням 2,2'-азобіс(2-амідинопропан)гідрохлориду (ААРГ).
Зразки піддавали термічному стресу, щоб імітувати стабільність протягом терміну зберігання продукту. Буферний розчин у зразках замінюють на 20 мМ розчин гістидину ацетату, 240 мМ сахарози, рН 5,5 і розбавляють до концентрації 1 мг/мл. Один мілілітр зразка піддають стресу при 40 С протягом 2 тижнів, а другий зберігають при -70 «С як контроль. Потім обидва зразки розщеплюють із застосуванням трипсину для одержання пептидів, які можуть бути проаналізовані методом рідинної хроматографії (РХ)-мас-спектрометрії (МС). Для кожного пептиду у зразку, час утримування реєструють за даними РХ, а точну масу з високим розрізненням та інформацію щодо фрагментації іона пептиду (інформація про послідовність амінокислот) реєструють за допомогою МС. Хроматограми екстрагованих іонів (ХЕС) одержують для пептидів, які представляють інтерес (нативні і модифіковані пептидні іони) з наборів даних у вікні х 10 мд, причому піки інтегрують для визначення площі. Відносний відсоток модифікації для кожного зразка обчислюють шляхом поділу (площі модифікованого пептиду) на (площу модифікованого пептиду плюс площу нативного пептиду) і множення на 100.
Зо (0274) Як було показано, МУЗ33 у СОБ-НІ і Мб62 у СОК-Н2 СО79р.А7.м14 були чутливими до окиснення (окиснення М/33 збільшується на 73,795, а окиснення Мб2 збільшується на 648965).
Варіанти антитіл СЮО79р.А7.м14 були вивчені щодо визначення можливості зниження потенціалу окиснення, без впливу на зв'язування із пиСО79р. У варіанті СО79Б.А7.м14Б6 дані потенційні проблеми окиснення були усунені шляхом модифікації вказаних ділянок для відповідності консенсусному МНІ людини (МУЗ3У, Мб62К, Кб4с і О6550). Дані зміни не впливають на афінність зв'язування з СО79р. Дані не показані. 3. Вибір плеча анти-СОЗ3-ТЗБ проти антигену СЮО79р
І0275)| Проаналізований вплив спарювання СОЗ-зв'язуючого домену на ефективність анти-
Ср79Б антитіла ТЗБ з точки зору загибелі В-клітин. Антитіло анти-СО79р.А7.м14 випробовували в комбінації з різними зв'язуючими доменами анти-СОЗ антитіла, включаючи 4005с і З8Е4мМ1. 200000 МПК інкубують у присутності або за відсутності анти-СО79Б/СО3 антитіла ТЗБ протягом 48 годин. Відсоток загибелі В-клітин на Фіг. БА обчислений наступним чином: (кількість живих В- клітин без ТЗБ - кількість живих клітин із ТЗБ)/(кількість живих В-клітин без ТЗБ) " 100.
Активацію Т-клітин, проілюстровану на Фіг. 5В, вимірювали шляхом гейтування по клітинам
СО69/Сб025: в популяції СЮО8 Т-клітин. Як проілюстровано на ФігМ. 5А і В, В8П
СОр79рБ.А7.м14/40055с продемонстрували слабку активацію СО8-- Т ії низький відсоток загибелі ендогенних В-клітин. У додаткових експериментах (дані не показані), анти-СО79р/СО3 антитіло
ТБ (ВП СО79р.А7 .м14/4005с) продемонструвало Есзо від 1,1 до 2,3 нг/мл для активації СОвж
Т, і ЕСво 2658 і 288 нг/мл для загибелі ендогенних В-клітин з використанням двох різних донорів.
На відміну від цього, як проілюстровано на Фіг. 5А і В, анти-СО790/СО03 антитіло ТЗБ (ВП
СОр79р.А7.м14/38Е4м1) продемонструвало значно кращу активацію СО8- Т-клітин і відсоток загибелі ендогенних В-клітин з ЕСхо 15 нг/мл для загибелі ендогенних В-клітин, в порівнянні з вап сСр79р.А7.м14/4005с. У додаткових експериментах (дані не показані), анти-СО79Б/С03 антитіло ТЗБ (ВП СО79р.А7.м14/40055с) продемонструвало ЕСво 401, 14, 1,5, 10, 12 і 16 нг/мл для загибелі ендогенних В-клітин з використанням шести різних донорів.
І0276| Додатково, активність анти-СО79Б/СО03 антитіла ТЗБ (ВП СО79рБ.А7.м14/4005с) з точки зору загибелі В-клітин і активації Т-клітин була вивчена на клітинних лініях ВУОАВ і МУЗИ-
РІ СІ2, як описано вище і в позначеннях до Фіг. 6. Як проілюстровано на Фіг. бА і В, анти- ср79р/С03 антитіло ТЗБ (ВП СО79Б.А7.м14/4005с) продемонструвало значну активацію СО8ч-
Т і відсоток загибелі В-клітин з ЕСзо 85 нг/мл для загибелі В-клітин ВОАВ і 82 нг/мл для загибелі
В-клітин МУ5БО-БІ С12. Значення ЕСво для активації СО8- Т-клітин у випадку В-клітин ВАВ і
М/50И-0І СІ 2 становило 18 і 39 нг/мл, відповідно.
І0277)| Активність анти-СО79р/СО3 антитіла ТЗБ (ВП СО79рБ.А7.м14р/4005с) з точки зору здатності спричиняти загибель В-клітин випробовували на різних клітинних лініях, як описано на
Фіг. 7А-В. Клітинна лінія НТ являє собою клітини, що не експресують СО79Б. Відсоток загибелі
В-клітин обчислюють наступним чином: (кількість живих В-клітин без ТЗБ - кількість живих В-
Зо клітин їз ТЗБ)Хкількість живих В-клітин без ТЗБ) " 100. Як проілюстровано на фіг. 7А, значення
ЕСвхо на кривій «доза-відповідь» загибелі В-клітин для клітин ВОАВ, М/5О-0БІ СІ2 ї ОСІ-І У-19 становить 8,87, 2,63 і 17,41 нг/мл для загибелі В-клітин ОСІ-Гу-19, ВАВ ї УУЗО-0І С12, відповідно. Фіг. 7В ілюструє значну загибель В-клітин при концентрації анти-СО79/СО3 антитіла тЗБ (ВП СО79р.А7.м14р/38Е4м1) 5000 нг/мл на численних клітинних лініях (два екземпляри, середнє значення х стандартне відхилення (СВ)).
І0278| Варіююча ефективність одержаних біспецифічних антитіл ТЗБ проти СОЗ і СО79р підкреслює критичний і непередбачуваний внесок обох плечей антитіла в генерацію типового
ТЗБ, що володіло б високою ефективністю. 4. Ефективність іп міго та іп мімо проти резистентних до анти-СО796-МО-мс-РАВ-ММАЕ В- клітин
І0279| Цитотоксичну активність анти-СО79Б/СО3 антитіл ТЗБ (СО79Б.А7.м14Б/38Е4м1) відносно В-клітин іп міїго і іп мімо додатково випробовували на резистентних до анти-СО79р-МоО- мое-РАВ-ММАЕ В-клітинах. Варіанти клітин ВАВ (ВУАВ-С0796 АОС-Е Т1.1 ії ВОАВ-З5М8М28УсЕ
СбО0795 АОС-К Т1.2) були одержані з нечутливих ксенотрансплантатів пухлин ВОАВ у резистентних до анти-СО0О796-МО-мс-РАВ-ММАЕ В-клітин лікованих мишей. Як проілюстровано на Фіг. 8А, анти-С0О79рБ/С603 ТЗ3Б (СО79Б.А7.м14Б/38Е4м1) було високоефективним по відношенню до ВОАВ, як і анти-С0О790-МО-мс-РАВ-ММАЄЕ на резистентних ВОАВ клітинах, спричиняючи загибель клітин іп міго. Крім того, як проілюстровано на фіг. 88, анти-СО79Б/С03 антитіло ТЗБ (СО79Б.А7.м14Б/38Е4м1) запобігає росту резистентних до анти-СО790-МО-мс-РАВ-
ММАЕ пухлин ВОАВ іп мімо.
І(0280| Хоча вищеописаний винахід був описаний з певною мірою детальності шляхом ілюстрацій і прикладів з метою ясності розуміння, опис і приклади не слід розглядати як обмежуючі об'єм винаходу. Вміст всіх джерел патентної і наукової літератури, процитованих у цьому документі, включений шляхом посилання в повному обсязі.
Прекурсор, СО790 ВРІАВКАСОЕТ УМКМНнСУММ5А БОМУБУМІМКО ЕМОЕМРОСІК людини; обліковий |! ЕКЯаВМЕЕБО номер МЕБІАТІ ТІ СІВРЕОМОІМ єСООКсММТе ЕмУОасСатеЕ!
МР 000617.1; ВУМОЕ5ТІ АО 1 сигнальна І КОВМТІ кра ПМІОТІ ГІ ГРЕПМРІЄС ГОоКрОоБКАСаМ послідовність - ЕЕОНТУЕСІ 0 амінокис-лоти 1-28 ІБОТАТМЕОІ МТ АТО ЕМКУ БМАЕНРСООЄ
Зрілий СО790 АВ 5ЕОВУВМРКОа 5АСЗАМО5Р АВРІАВНКНОЕТ УКМНнСУММ5А людини, без БОМБ КО сигнальної ЕМОЕМРОСІК 1ТЕКОАМЕБЕБО МЕБІ АТ ТІ /сІВРЕеЕОМИМ послідовності; ЕСООКСММТ5 2 амінокислоти 29- ЕМУОССаТЕЇ. ВУМОЕ5ТІ АО І кОм Ка ПМІСОТІ ГИ 223 ГРЕПМРІЕС
ГОКООБ5КАОМ єЕЄЕОНТУБОГО І0ОТАТУЕОІ МТ АТаєЕМКМ
ЗМаЕНРООЕ
СО79р.А?, ТУ ММ
Ср79р.А7 м14
Ср79р.А7 м15
Ср79р.А7 м18 З
Ср79р.А7 м19
Ср79р.А?7 м20
Ср79р.А?7 м21
НУВ-НІ1
НУВ-НІ1 дея тех ееню
НУВ-НІ1
СО79р.А?, МІОРБОБЕТНУМОМЕКО
Ср79р.А7 м14
Ср79р.А7 м15
Ср79р.А7 м18
Ср79р.А7 м19
Ср79р.А?7 м20
Ср79р.А?7 м21
НУв-Ннаг
НУв-нНаг
Ето К унвнння НС нНУв-Наг являє собою К або СО), та Хлявляє собою О або о.
СО79р.А?, ЗАЕ
Ср79р.А7 м14
СОр79р.А7 м146
Ср79р.А7 м15
Ср79р.А7 м18
Ср79р.А7 м19
Ср79р.А?7 м20
Ср79р.А?7 м21
НУВ-НЗ
СО79р.А?, кБзОоБИ рерактмі м
Ср79р.А7 м14
СОр79р.А7 м146
Ср79р.А7 м15
Ср79р.А7 м18 10
Ср79р.А7 м19
Ср79р.А?7 м20
Ср79р.А?7 м21
НМУВ-1 1
СО79р.А?, ГМ5КІ 05
Ср79р.А7 м14
СОр79р.А7 м146
Ср79р.А7 м15
Ср79р.А7 м18 11
Ср79р.А7 м19
Ср79р.А?7 м20
Ср79р.А?7 м21
НУВ-І2
СО79р.А?, МОСТНЕРОТ
Ср79р.А7 м14
СОр79р.А7 м146
Ср79р.А7 м15
Ср79р.А7 м18 12
Ср79р.А7 м19
Ср79р.А?7 м20
Ср79р.А?7 м21
НУВ-І З
Варіабельна ЕМО МОБІАЕУККРОАБУКУЗСКАЗИаУТЕТ5УМІНМУНКОАРООСІ. ділянка важкого! ЕМЛОМУ ланцюга ІМРаАБаМТММАОКРОСАМТІТАОТ5ТОТАМІ ЕІ 55І В5БЕОТАМУУСА 13
КОНІ (Мн) ВЕОММ соті МТУ
Варіабельна РІММТОТРІ БІ РУИТРЕОРАБІЗБСНОЗОБИЇ НОМ ОМ МІ ОКРО ділянка легкогої ОБРОГІ. ланцюга ІМ Я5МААБаМРОНЕЗававато вті КІЗАВМЕАЕОМа УМ СОСАЮ 14
К2НІ (Мі) ЕРЕТЕа
ОатТкКМЕїК
СОр79р.А?7 Мн ОМОЇ ООРОМЕЇ МАРОАБУКІ БСКАБОМТЕТ ТУ ММ УВОВРОО аг ОМ
СМІОРБОБЕТНУМОМЕКОКАТІ ТМОКОЗОЗТАМІОЇ МІ Т5ЕОБАМУ 15
УС5А5
ГАРМСОСТІ МУЗА
СО79р.А?7 Мі ОМУМТОТРІ ТІ 5МТІБОРАБІЗБСКОЗОБИ ОБрОакКТМІ ММ ОВРа
ОБРКОЇ.
ІМ МБКІ ОБОМРОВЕТавБаватовЕтІ КІЗАМЕАЕОЇ асМУУСУООЗТН 16
ЕРОТЕ саааткКіІ БІК
СО79р.АТ. ЕМО МОБИАЕУККРОАБУКУЗСКАЗИахХТЕ т ТУ ММ УКОАРОО м14 Мн ВІ ЕУМ/Ла
МІОРБОБЕТНУМОМЕКОНВАТІ ТМОТ5Т5ТАМІ ЕІ 551 АВ5БЕОТАМХУУ 17
С5АБІ
АРУСОСТІ МТУ
СО79р.АТ. РІММТОТРІ БІ РУТРІОРАБІЗБСКОЗОБІИ ОБрОакКТмІ МУ ОКРС м14 мМ ОБРОБІ
ІМГМ5КІ О5аМРОВЕЗабБазато вті КІізЗАМЕАЕОМа УУУСЖХУОЦОЯТН 18
ЕРОТЕ сОатТКкМУгєїК
СО79р.АТ. ЕМО МОБІАЕУККРОАБУКУЗСКАЗИаУТЕТТУУМММУКОАРИОСа м14р Мн ГЕмМОаМ
ІОРБОБЕТНУМОКЕОСВАТІ ТМОТ5Т5ТАМІ ЕІ 55І ВБЕОТАМУУС 19
ЗАБІГ АБ ма,датітУв5
СО79р.АТ. РІММТОТРІ БІ РУТРІОРАБІБСКОЗОБІИ ОБрОакКТтТмІ МУ Г ОКРО м14р М ОБРОБІ ЇЇ
М У5КІ О5БОМРОВЕЗаБабзатор ЕТ КІЗАМЕАЕОМСОУУУСТОСТН 20
ЕРОТЕРОа
ОатТкКМЕїК
СО79р.А?Т. ЕМОЇ МОЗСАЄЕУККРОАБУКУЗСКАБОМ ТЕ ТУУММУМАОАРОО
М15 Мн СІ ЕУЛО
МІОРБОБЕТНУМОМЕКОВАТІТМОТ5ТБЗТАМІ БІ ЗБ А5ЕОТАМУУ 21
С5АБІА
ЕМ/ВаОСТІ МТУ55
СО79р.А?Т. ОМУМТОТРІ БІ РУТРООРАБІЗСКЬЗОБИ ОБОСКТМІ МУ ОКРО
М15 М ОБРОБІ
ІМ БК оБОУРОНЕЗОаБОЗОТОРТКІЗАМЕАЕОУСУУУСЬМ ООЇТН 22
ЕРОТЕО
ОатТкМЕїК
СО79р.А?Т. ЕМОЇ МОЗСАЄЕУККРОАБУКУЗСКАБОМ ТЕ ТУУММУМАОАРОО
М18 Мн СІ ЕУЛеМ
ІОРБОБЕТНУМОМЕКОВАТІТМОКЗТТАМІ БІ БІ АБЕОТАУМУС 23
ЗНБІ АРМ состімМтУ55
СО79р.А?Т. РІММТОТРІ Б РУТРООРАБІЗСКЗБОБІЇ ОБОСКТМІ МУ/Л ОКРО м18 М ОБРОБ!
У УБКГОоБОаУРОВНЕЗОБИаБОТОРТІКІЗАМЕАЕОМСОУУУСЬМОСТН 24
ЕРОТЕ сОаТкМЕїК
СО79р.А?Т. ЕМОЇ МОЗСАЄЕУККРОАБУКУЗСКАБОМ ТЕ ТУУММУМАОАРОО
Мм19 Мн СІ ЕУЛО
МІОРБОБЕТНУМОМЕКОВАТІ ТМОКЗТОТАМІ БІ 551. 85ЕОТАМУУ 25
С5АБІА
ЕМ/ВаОСТІ МТУ55
СО79р.А?Т. ОМУМТОТРІ ЗІ РУТРООРАБІЗСКВЗОБИ ОБОСКТМІ МУ ОКРО
М19 Мі. ОБРОБ пи МЗКГОоБОаМРОАЕЗОЗОБОТОРТІКІЗАМЕАЕОМОУУУСМУОСТ 26
НЕРОТЕ сОаТкМЕїК
СО79р.А?Т. ЕМОЇ МОЗСАЄЕУККРОАБУКУЗСКАБОМ ТЕ ТУУММУМАОАРОО м20 Мн СІ ЕУЛО
МІОРБОБЕТНУМОМЕКОВАТІТМОТЗТЗТАМІ БІ 55І АЗЕОТАМУМС 27
ЗНО.
АРУСОСТІ МУТУ55
СО79Б.А7м20 Мі | ОІММТОТРІБЕ РУТРЕОРАБІЗСКЗБОБІИЇ ОБОСКТМІ МУ/Л ОКРО
ОБРОБІ.
ІМ БК оБОУРОНЕЗОаБОЗОТОРТКІЗАМЕАЕОУСУУУСЬМ ООЇТН 28
ЕРОТЕ сОаТкМЕїК
СО79р.А7 м21 Мн. | ЕМО МО5БОАЕУККРОАЗУКУЗСКАБЗОМ ТЕТ ТУММММУУАОАРОО
СІ ЕМ
СМІОРБОБЕТНУМОМЕКОАМТСТМОТЗТЗТАМІ БІ 55 АЗЕОТАМУ 23
УА
З'АРМСОСТІ МТУ
СО79Б.А7м21 Мі | ОІММТОТРІБГРУТРЕОРАБІЗСКЗБОБІИЇ ОБОСКТМІ МУ/Л ОКРО
ОБРО
ЗИМ ЗК ОоБаУРєРОВЕЗОЗОЗОТОРТІКІЗАУЕАЕОМОУУУСМУОС ЗО
ТНЕР
ОТЕСОСТКУЕЇК
НУВ-НІ1 нУвВ-наг нНУв-НнЗ
НУВ-І1
НУВ-І2
НУВв-ІЗ
ШО со
ГЕМУМаЇї
ГРОСООТМУМЕІЕКОАЕТІЗАОТЗКМТАМІГОММ5І ВАЕОТАМУУСТ 37
АВМУРІНВІ- руУсостімМтУ55
ЩО пен
КАРКГІ.
ІМААНКІ СНЕМРЗНЕЗОЗОЗО ТОБІ ТІ ОРЕОБАТУУСООБМЕ З8
ОРІТЕВ
ОатТкМЕїК
НУВ-НІ1 нувВ-наг нНУв-НнЗ
НУВ-І1
НУВ-І2
НУВв-ІЗ
НУВ-НІ1 нувВ-наг нНУв-НнЗ
НУВ-І1
НУВ-І2
НУВв-ІЗ шо
ЕУЛСОУЛУ
РИВРОМТКУМЕКЕКОАВАТІТАОТ5ТОТАМІ ЕІ 551 А5ЕОТАМУМСАН 57 рБУЗМУУ грУмаоаті мтУ55
ШО с
СОРРКІ
ПУМАЗТАЕБОУРОНЕЗОБОБЗОТОЕТІ ТІ ОАЕОМАМУУСТОЗЕЇ 58
ІГАтТЕво
СТКМє ІК ша
ЕУЛСОУЛУ
РЕМОМТКУМЕКЕКОАМТІТАОТ5ТОЗТАМІ ЕІ! З5ІАБЕОТАМУМУСАНОЇ 59 вУБАХУУ грУмаоаті мтУ55
ЗВЕ4МІ Мі. РІММТО5РОЗВІ АМ5І СЕВАТІМСКЗВЗОБИЇ МЗАТАКММІ АМ/МООКР
СО5РКЦІ
УМ ТЗТАКВОМРОВЕЗО5О5СТОЕТІ ТІЗБІ ОЛЕОМАМУУСКОЗНІЇ. вВТРЕсОстТ
КМЕЇК
ОСНТІМО Мн ЕМОЇ МЕЗОСОІ МОРООБІ ВІ БЗСААБОУЗЕТОУТМММ/МВОАРОКО
І ЕММА.
ІМРУКОМ5ТУМОКЕКОВЕТІЗМОКЗКМТАМІ ОММЗІ ВАЕОТАМУМС | 61
АНЗОаМУ
СОБОМУЄрУМ СОСТІ УТУ55
ОСНТІМо Мі РІОМТО5РББІ БАБМООЮВМТІТСВАБОВІВММІ ММ/УООКРОКАРКІ.
Пух
І ЕЗаОМРОВЕЗавЗазатоуті ТІЗЗІ ОРЕОГАТУУСООСМТІ РУУТЕ б2
СОоОСТКІ ЕК
АВЗЕОВУВМРКО5ЗАСЗВІМО5
АКЗЕОЇ УРМРКОБЗАСЗВІМО5
УК Т ВЕНУ хви ни
ПЕК ІОАН ШИ КИЙ чав СЕМЕН, ЇВ. СА ВТ, «ур ЕТ СОТ АНТ ТРдА Т стем ТЕ пива «ах ВЗА ВО «ІК: кіжІм и Кф поко и І «Мах венами, сх УА кіув аміни «Зв де 7 «їіТ0е кабевктй БарОля Я. «вій 1 кій» Кінсх у рин дек чн «ІМ Но шарізви кава 3 ум Іва м дує ка оку ложе З У пох не нн НН НН ваха не дав дів вка цу дкФф у ве оОКик УМ уки Ма вжв Сук ЖуХ 1 су їй Ух
МУК пев муху ЩО З ох сх ух ЗАВ а у пошу ід токах СЕ ее ст век зва Бек діа ек су вк о Уа век оте це тер Був дів зує Ме лад з пк о В КУ хіку 131 В Ух. Бо жа стокзуї т ку том іі їжи у до Дек же Й СК йапоБіз ав Ко Зап сІ Без ув ба осів Бук хін ага МЕ ом у кп
З В 55 суму ло Во ЯН с Хо ла боту сію тм с (іх ЖИ дужих о ек, мах оса ак ам Бех зи аа ЖК бжнЮ твх сажа АЖ Бе Аа С ВВЕ ог г. о пи пу ЗИ
ТУ: дае, їх жує Я Сбскиу ке Ех Ук. ик, ак ї ж УТ й КУ Ту ж сажа зії зво Ав біАшж бів те КНе отв бой ів МБбБосжВ вел дав Жах ВЕ 5 То 5 й рен я НН ск скжк п х ож я БА ик Ху сх коту Ух Уч ій ВА БЕЖ БА ОБУ СУ Еш тТвк іч їни ВЗ Уві мех іхк ІН сг . 85 за з стіх я аїр, З їх пух Ток беч о милу ро тм 7 ож щи сту Ж р т тв ви Мед и зм ЖЕ їАМ БК АВ ЖК оХеа Му о бвжюЮ ху Зав АХ похухх чт Як
МО 05 ЕЖНЕУ
С Ул хх ФК ж єю ке Су шує Ж ух ПИ хх поши СКК: ятотих ге уж з. воБОка сх Сх
Меж зів сів отвк Бе оїши Пів їТв фа ке сі: 165 Уа вхо тів Ева зе 14 тмЕ 115 185 КУ
Ул Ті божуке Мом У чих зу. тує Яукує Хом Усту г. 2 пд ЕХ їі 501 ща хх їжч ве Цецч блв Був Аве дз Беж Був Бів зіу ме ів шій Вер онув ва 135 145 - о сук «кг чи хо Кох гу ше зи ке Ме бак о 4 ох ож сих тую січ пі Бей ов їж Яви вів Тв вів те тує міЗз йвюе о їіїа 5 їБа зле іш у сере Мом божу БИК у ли Ки тич. Фо удо ух тм дю У КК с Же
УА ЖК Бе ТХ ТВЕ Ту СД УФ МК ТЕ шпаки ді Те їйЗхЗз ів ЖК ве Не 175 гля м мож АХ КАМ аз й і ЧУ
ХЛ ох А мим
Ж АТАК сао Твхуєи З жах кій пра варіння ха» ще пи лю ж ще паж дж Жоух, ще буду, ож жа или ж ку
Віа йхба пек оси веб ол ТтУх йо дза БЕ Був ож Бех Дід КУ дех ї їх ко Ух прагну м п дж фі щомут дк ТЛО В зе боки: ха и ха їзк ве вхщ ов тк; жів мех Бк вх ска їЗе АК о Ака БУВ дка о Зіж ре Тих тп Зк зе ки й КІ аю Кох Джо МУ дю силоси х ЧК Мою кут си га ко я ж тУвЕ Був меж НІ сув Те Ме АБИ МОЖ Вів Зах за Ат Ме меж УКВ
За Я 45 т пору уєх гоже Ша КИТ, дит - У у ох мок: МИ шт Козу кг Тов с Косвмх Ук
Пам охув Буш БІ Бала Ме де шлю а Бхек осаю иа жа ЖЕ ем п
ЩЕ «й жо Ж жи ше Ка ЖЖ ди фа ж ку и дух х. вмію Уч
Був піш ду Ме: си сш бак бл ап; хвж їшиа Але ЖАЄ бе ЩЕ
ВЕ ТЕ ТЕ БВ жлвеу тім іх хлах м 3 Ялта х тхї ох сан Міхту схем гу
Тіз щіп ЩІУ Лів Аха вла Зі: вер Анй сіу хі тТУК ВН був от ФВ па ах 5 т що У ти ЖЖ хх. хяжт ау шою Ж ух. те хау я шо уххетх ПЛЮ уж У о Ж т. тв СУ Ав дат так Бех жав У ТУуК Вів біж був у тех ша ем м 105 о х «ух. ук Й ж пу ж Кох що жУломо Ж Же кх Ж. Кк «З ж йо Уві Мат От Бе» Бех тв еа дій біз Бе; бев о шій ке ва Жах
ІЗ їх 125 пн бек Два ту Те Бі Ще її бін о йвх їжне би ле Ж Змі ВН
ШМК БЖ ЖК ТАЖНИ Зх БА Ба ЖИЛУ ОХ ОБЖК ХМК ССО Х ХК МИ ха ха змі Кае
ЦЯХ зай
Аа Мша 50 хе т Мп бу Ти з лову иа сх ох Хмм й щ- Фу Ток ща зе хін Уві бжое Ге КМе Беб фей Бей бе ув зво йвроБиж Був Ва тя їв ї5а їв
Ух Хе г шо их шен ЩЕ дю Туя Новин оич су хе ж ду ся Руки мі Мет Ом бір бас Кіа Ту теж піч 01» б) др їз Авромій ЖТВЕ 155 го їх
М мо сяк ую г, с по йо лах у, «о ежчі Мука тлу та як Жлущо ще дів ЖВх ук біз йно Щі УдУ тн Бей веу тв сіУ сіб ха Був Тв
І55 їі85 її сення Я о ен пт ж хе У, гКЯ "7 зек Уві БіУ сій Вів Буб зі пій оз
«дум ї
ТОМ ОО
ФОТО 3 В
ЖАВ ОО Я кл Кауце доки БАХ
Альо нн ОН «ЕМ По УМ ІКНІ «ІД
Маску гу ї-й
ММ 1 зу жі. ДЖ ее
ФУ буму нт що Мефеіи поем офі пеки дм
ПА КОДЕК Х КО Мами МУ ЧІ ТЕКИ ЗМИТИ ККУ
З ЖІНМмугнд" «Зх З серуд у Мих дижі В
ТИЖ ОТеЕ Тов Же да
І 5 штрих ї ха а са иа ж М шт ст еВ МЕЛОЕ зи ве ни І о не о ие ХУВУ ЧИХ ДЕЗІМІОСЕМВА ХНАУ
СИЛ ок М Х
ОК теме ти хі ДМ уже
ФО басма тести о Мету мих мМ жи а Ци ко ому хе ім. ва мВ р жи ІМ МБ М СА ДОВМОМККО Ю сина нМиМ пеайжмух са У й «ай» 4 спра ух ср ус Му ко - тпжоОТУК бух Ма ВЕ 1 І нях. я
МЕЧ и КТ Я є
ФА
«Б У уки
Ми ХУЛОНКНХ
З Ж Уйаєтухлуть їх Ми іІ М хх «ал. ЩЕ На ІБН меч
ЧА ех я
КО ьо шкаркв ув жов КЕ ІМО во нс Но НН іти «Ще ; ПІБЛОМУЖЕКЬ то МИ ВИ УЖ ЗНХЕ ХИММвИДОКНОиИИКОІ сим Чиви Зам іже Де чай» ВАРЕНЕ пет зу ч«шаж Ж Б
Ул б зж- Мі У ром пух ххх пт на ст «РУХ
ЕВ рве ху сли ме киш МмІВИ КАТЕ
ЕВ щх
МО кн я ЗКУ ех скуті юк ве мале т у интуИХ о ско си шини ії хх мит сухі нМ дек ПКМУ В Би М ІМК кю ВВЕ МаННМХ У КУА ДИВНЕ Х х
Ве ви мнрючнах м ВоерівнНаннІі З введеним ш5о За ВНА ях до варіан жном пон щх" акту М кан: по рух ук брхух де Ж
Ти опуюк ЖквОоМмеЄ ВІ 4 - їх їх сов ЯК с чаКИаМ 5 ше ту чад 1
ФЛ рю. ТО із кий БівоК
ЕМ БИК МОЛ ДОК УК ях сте чех
УТ омдокчМ «ЕРИ Де юеУ ооо ни НН В НН НН ПЧ ня
Ба и ТПЕАКЬОКИ зе щем ЩИТУЧНУХ поиска сипати щНиМ
ПІ ЮХ
«ВІВ» в
КУ ее я чужих їйхрує у. перу хи ярах КА у х кт са ж Ж зу зем вх Ази око Зак АВ ех савотвж Вів Тек яв Ох Ме вне Був ї Кк їх 4
А З їй 15 оком
НА
«ВО? ск аж я як ЛЯ оті жи ІМК
ТЛ о луку ги уки Ким и шщЕшЯВа шили Ие «ШІЇМХ
СТИХ пух ж ЯКІМ
Ек Й дтукви сп хо зум пихи У Й рих рії прі ие я мимо ходи СК КАМ А Нм ОО КК БИТВІ ТЕХН ІІТ А В СЛАБКУ СЕУ ПАНУНЯ
ПМГ кН - ща м т пу їв що су жу (М У т чук ди в Тех БУ
Ме хІв Аве Бо Зак Ар Бек сі Тих НЯ тує АВ За дев Бе ЗМ 1 5 5 М щі У каз В шлю т х
Ук КІ «як Вуди селен нн и но
ІВ Церучния пелет Й «ВВЕ» ноя сек ймиити ак Ал МЖК рани и В На у и пай ІІ МміІКИи с ОМ шим КОЛА щоВинчУКУ спи трапліх «Ех о А ЩО Б шити мк ІД т Де
Зм ви ДУМУ ОМ шт ую в їй
Бе В ИН
Кен Фоктука шо сп вжожеху у.
ЖЕ ХІІ о УКВ «КИ слрею чаю Ед ВУ «еко ВАМКАТУ шли ких У
Ем аву ААВІ хай євиМмиВа ж УМА"
КПК ВДЕ чи МУКИ шок АК, 474 чим рКТУ. я
АК Халат А ка. ех З жи,
ЗЕМ ЗАМ з ких гу
КУ ших сойлютох моменту «ект ВІБС МКАС ха ГІ: екю гезУчітькісилале с Мк хів УєЕ с пах зі аиу ля турі мої чашок примати с маю нм ММК, ІЛ УЖНММ У КОЗЛА ММК МУК а чу маш сим ва с восвівнинНні воцавитемиі кове жанікх а мас переко ш пеМАКимнна З наведе Мм жавних ккд жо З зи пику Кк с
ХМ О ВЕ ТА ЖИТЕЛ ТЕМА ИНА
«ах й
Яку дохту руту жк му ку У Му М міх Ку У ря се сх посжкн
Ми їїе АвроБхз бех Авробех ів так нів ТУЮ АБ СТ Ме РЕ еВ у є п їх 1 5 їй ї5
Кк
ТЕ
«Хід» З пл х
ЕМ 4
ФО я пи
КАН КАК ее ше сірих В ек о, «із» шсуцна воліли» «тка «Здвіх шт пмуемеУЙ г тд А ВЖЕ ВЛ .
Мои на и Ин НН АНЯ зе я КОМ МАИХЬ хе ДИЛИ ВБЛучнихх моно сиУр: ми жетишннМНиХ
ТТ иМлЛЕ ках З ву Ти Аза вне «ска АЖМІ ОТАК ОК МІ 3 1 4
ЩА 1 «В ие КО
АМКУ сша ен ха АК «вій Штуучма маслі елвь кашах
СКК м
ТУДИ МЖК сенс ее НН В Не «кри Ів шк ДИМ се «ОМ ЦИ КМ ЧЕИВ А ФМІН БЛОК Ма ШИТИ
ТТН
СЛСЖЕЧьКУ чок. ко ВН ен. тяж ох с ема 7 Сема бод з - З фік щу ПТ Хол р тиж З оеххл ше
Ду БЖ ХМЕ ідо ша МЕ ЕЕ аж МЕ ау М У ЛЕ Ух же Вт х Ех мк чк х З в 15
ВІ 1 крятя ту Ей
А
«ВІйУ Відок шт ие сти Ми пох чих «кА ПЖУМНА ПОСЛІДОВНЕ сут ев худ ВЕК че гпоммінищ се зомлнои дувсчви поснідожнеіх симтечннамя питне «Я то фо В шу тож УЖ, яких лих мені У За же Бе авроЗех
Н к ху А ТІ «Рі 15
КО : «Іі а
Коль позою «шій ранох ка нн НН «Ед речи посвлдовність сту «аВИе «ие А шжервий кій ук МимЕика сх «бпис штУуМнОхм ОС ЛІЛСОВМОМИВІ Я СУПЕСЕЄТКЯНАИ паихиме сей ча Те змету ек» я ДЯ х о ТУ нич т чу їЖр'ші сю жах ній бле Ж сЯа Ах 4 5 жу що ах 15 турах З «і 113 сій Міла и дю умо тихих их у нев ж ії КЕЗШЕНК ХТАВНА ТИХА У КЗ ЕН КК гуд хи ано Ня хик и МУЖА сло страт пу м курса т бум зок х ЇХ ик я єкскдзх тах В ши КИ ШКМА КК се ЖОВ Вуж КЕМУуХУАОВмнуХ их МВС И
МІХ ТМ
«ам 1 їх: ЗУ 2 хх рук З ж юки іа Ж З. ха «о Жозе м дк же ох шпім Уві іп о бесй Ма жи Бех Бі Аіа сів чаї Бе Був Бжеа щі ва х 5 16 їх
Фома ЖАВ Ж Зако ших ти ж що дру сяду юр Ку ДАО ткож дим хе ес УА Був Уві Бак Буд бу Віз хек СОУ ЖуХ тВу вве такое Жук зх чк їй хо У ху
Му У л Що и ве і му у и сліз Ук Я ков я зу. т жи-у Х їх ліз Ві то) УЗ ув ів дЬа вх зву ів пах Без сів хв тів
У М Оожрюх М жа М ЗУ МО ККК КА ку Я ММ ки КЕ ЖК с Тх
Мі пи ті дит и і бак о їїах во ру ех тб ді шли сах ве пе Жжв ЇХ АВ о Бже шоу Щек ху два Хв дело тех Бев сУв ВАВ
Б Ек о т Кк: три ях га в Тим тре, Б яухфня Жук У ее пе ЕК, хе Ь. ТЕ ся пі він Ака Уві Жак тів тТве до дер ота Бех отв Бек ТЕ Аїа Жук а т що сошки Ж стадію шк бив то дуби ак МА ли Мом іх су Міхюм ЗУяуе гчхкох їжМИи ії Бе йде Взк це ака дек жзіж вве жйх дра Уві тТУХК Тех Су ск ЖИ це
Зх по 5
Бе хи пух Мб р їх їли ул сф Томи Зло в Ех ла по іа жст Клея вв о ТУХ жЖжЕ важ вів Ку Тв Бей шах таг чУаї де Ба шк АВ зах іп 125 11 «ВЕ» 14 ит
ЖЕ АК АК
«ВІЙ НЕД «ЕКЗ ЗКеучна мощі ши
КА мя м схе
ХОДА ДВЕЮНЯ пло, од жест и а І а а ни м ах пу. ил емрмаеей сх ме ШоУуЗНОХМ посилав еІВоІ СУПУ ЖЖХМУМиВ
ПОМ ІНІХМ ДІ ханкх тк а; кавове я шоу ок пече пі и м мя а Фе Ж Тдркіуюх Зк сИща дімує «Ух зро іє Маї Ме так осів тТвж гхо бе меж Без ко ду ТВЖ Бк й КУ 2 тати СВОТОх нн о о на Феккує сли Ж ку МУ Хе Фк мм спав виз Вів ше її Хах Су БІВ Бе вки Ма йех ПУ Мед Беж бах ле ї5 ха
Се 3» ех ММ Мн ох таж сх ск ми ВХ хи Межа в ТкЯ У как шаУ ей ЖБК тТеЖ ід АЕН Ти тек се сі ру о ви їм у. Ох УДК
КЗ: Я Се
Хе Пашко Улемі Ум «ФХухаює Ж ежуї ШО Ва Шум Що он ОК сх я ду жу Ех орні
Ева Їм) Лев ллє ТУс бе Бі бек бе» Ба дів ве су УВА вка
Ба й
Мо фун Ку поши с бул зх бик о кі ря сбже Ж; ж хи УК нь хв оакса ве зах бі Бк біт ЕК СІ т ЖВЕ зе ше жНх евовув ск зх - г
Жах З ту 5 жу т я их фігує ПЧіуио сбчужіу КУТ Уж АЛ ек вже УМА ФІ Аз БІ АВ Уа ЗУ Уві ТУ ТУЮ СУВ Чі ще дів
У й м
В за 5
Зк уч Ж жк баки МИ У сх г тах юю оююов, мої пу да Ст с хіє чі Бе Бхо ББе ЗКЕЖ ВК шу Оп Зам я іх КУ чвар цУ я зах де хе
ЕЖеО 145 115 аа ДК «вії 13
КН ПІ хи
Акт ЗМИВ яю тт, Хідух тут т ючих т и В их «ше Пе чнв ПОМ ОДНІ
БУКя ожили льнья У у м ах Джері
У бла У щиХ пло пити МІ Ухл имя. Уж я Уж, хз УМ М Мк ож аннакя
МЕ СПЮММУВЕЦ схо Ок шумних пошили: пи чНиМ
ЕМАЛЛЮ Де еаїних 5 яй их ко ХК кава и Не ХК жк, 2-х та т: УЖ КУ Жчих джятих їх ьшя спав Уві сій Бей ев Бій вже біб У бі ев ЗВ) Ак кт ось ІВ х р 5 хх
А й в З кашки ЩЕ жи соя сажа сухатех сома КО бо шукає хх СУ уде МЕечю рми МІУ МИ жи пік
Бек Уді Був їв Бак Сув був дів кв сію ве ЖЖ вне жвХ ваЖ ух «к щі за я 5 ; З ги шо он фея Ки жи їх жит іже СБУЇ 43 Фі р док хе зе їкроМех да Тхв Уві вка дій ка БЕ: цію пів пі Ба бю ТЕв її18 тут, «у п
ОТ СУ Б
-х Кн ак ур уких х «кут Межкчм ДИТу пФняе СМ кх свя Кум СУ НН пі МеВ охіє Аввоехо жеЖ дв ощеж Бів те нів Тух див жав Ве ее «8 ЗЕ м
Б жу Ж кю ра Ку жопу фа хв вух Ффозкі арх шк Мк ЗИ В тая ее вве Бук Віз Жак Без Тк о Ущі Авробев ше же оЖеК ТБ вка тех
У КУ 75 за тло фі жу с шуїт шує Укр Ж ПИ оду У, К со Зх хе бек образи тах тів Я ї-ю БМ Бех Бе) бло ех пів даю бех Аїв Уді пукотук СжВ ца чи Зк сих жи ам жо хх и Тука і и, т дог ач Н 45. Зв их дж
Бех ах ет ев олія пе ТІВ пі ож бі ТВ Бей; Уже ЖВКЕ уза мех й зак т: їй ія Іа
КУН
«кі х 36
ОО жу я 1 12 і Му вче «Ей ВілциВ. : о йде іх х газ ож А «ВЕЖА рве щий ОСНОВІ вв. су де
АДЖЕ со пох сиджу ВМТ,
Адм, ДЕК
ОДИН Мусимо уко ім спеуУє ую пугадюуй уми квии М х о хижа ти КАШ жк ЕІИМиМЕЬХКаА оц УЧНЮ ПОХОДИ ЗАТ
ІОХЛ УЧ ІКНВКН
Сн що «апом ів се, дж ж жи м ме и М о пе Кошужя я Тшуує ШУ ев очну
АвиоУді Уа Мак Твх сів Яйх ВКО без ЖК і ак У жви щі іх ї зх з їЗ
Ек чех МН т я кт, (Є зжх. лу ану ще ОЙ о НК ня. хх ух
Сів БЖОо дія Бех ге Бех аз Еш Ух мат сви веж ямі ех два ОБЕ ув че що
Ж ТЗ За
Ух жди оку я и шу ук Жук фік том ан к гудки і че
АврвосьУ мУв ТВ ТУ Пец да оБкв пен їди сбіп1оВа вхо піт ій Вих жу кК ж Ех Ко Ж у зум. Ток У Сб го КН А Мк хи ж Кат же пт Сузокеи Хі Теж їювь Маф дек пу дей вв дек су чаї Бе а 5 ва
Мавродка Ве тн соЇІж Вюхо сум бек пі» ТвЕ дае БВе Жех зе бу Ків
БЕ р ТУ що си дес т їх сх Ух Удоф о Ме соя чук У ху я зх чек ос ТЗ» зо діа бе Арі зі Уві ЛУК ТЕ Су тв ОКІВ ОО
НУ За ще фени, чим Уж их, Ух ГКУ кх, їтк ник вн У жу т Ся У ех УМ, г. жа
Тв ОНій гне хо ів ТК ОБ б ів Ах тв БЖ фр зма ТІВ Був руках зх зи ще КУ МКК
Аня Й
Дреш ще
А» ТІ «вій» Білою
Фетр Зичу чут тим ет «Ай ШЕУ ХМІЛЬ ОВНІКЕРЕ «Вк» сл ли ЧІ ЧИ, кидіх ФММ «За еймщміиий же ОК ву помониновномокл ою супами ни й подане нлаля
Ка я
М фати Ж Ех Фа Ж АН К УЖ г ЩО Ж сажа Ж сь па ста аж іни Мах вав оБеяг СПжу Аза 0305 ВХ Був Буй Би бу вів ї У її їх
Сум ли о парі Жду сах Ж За Вам зору Труд Бнйи ЧИ Ва пу кет Уві їв І Зак остув Був діа Вех Біу ТеЕ тт Ре ТвВж ЖаЖ о тТух
За За З
КУ «М БУ дез Ми ве ех МА ази ту ох фе жх зи хх о Кт пу кВ. же
Ттрожес Вер тив Маї дб бля діа вхо башж мапи їм ОБ тт Уте
Зх Бе 5 іт Мет їїе Авборхо ек Вао ех сію їх Вів Тух Аза Ота Ме БАе
То жа Вч до я Жкма опр хе ко Ук у іх В. ук бер З тк ув яв Вге вів Тс Ба тТВЕоМжі Аза жнж ба тв Бек тве від стух ях ї Ук ке З щО ке ТЕ З
Гостух 25 Жзуї ох бо ще ра Мк КА о о Я ек сх соку и їх слі їн; Бех ет їм аку охек сі ав Так А Б тек тую Сув пк КЕ Зх я я Я се о щу ЗУ а Жокхух ЩО що фах Пе ЖАТ ТА В ан оно Нд Ух Мах ху сту цет Деу Бек цею Аа ве Бер щі во піж ТНК еп УВІ їх Уві Ех и щея уче хе вже 116 пах як х «Ех 18 пеорячих «Кі їх ше у я п пух ша МАК, «ії Щеузнва Бенлліщ вить «Ох вач зи дя. с ДЖ
КК Кухгзхуяудіих г о їх о ше а рих. козу січе рідин хї гелю мімуюї кто в Уевся тпшмМмахкн ост шоп ШИТуЯВІМ ФОМІН МЕ ХМК ЗИ
ДИМУ ПЕНКТхХ ку ОХ хе й хи Кіх їх дк пит Кв М Вже бик юю Стошжк: А ЗК БК с юри хх
Аве хів Уві Мес их щі их Бук иа пек шен о Бже уві тТнж БЖО МАХ х 5 1 вк пк ше мо Шу Сук еижхеую Можемо Ше Міда 1 є; о куж Тік БУ фах Сех ші Вико ві Бех КО шеК ОПпжЕ Буш беж Бек осіб Вт Бевз цем Ве ее в й да боту їх хх ах о бля оці х оку Мои тую! ПИ кю ізо ку и Се Кк їмбчУ шОЖ МЕ жк ТК о бем двбОТЕБвО МІ дез мом Еко АЖ КО ВХ
Зх а 45 заці «ет сх кі Ж шко Убити м їх Шеияеє Може Лижі Вк Суху ТУ «ВЕ ук, вс); віз йес Без її теє бе УВІ Щек Ст Сей ар дек щіж чаї жа о 5 5е бх жа у. Жчизиж О щ ду «Ля ж Си гаму ся М жа рохви я 5х Бе ому ск кожух Же є
Аз Аа ББе оКає сію Бек сце бек ау Жах Аврожне ЖВк їв бум Яке
Ах 7 ТЕ НЕО
ФЕдоА сдх КАО У ЦО о ях рен їх ту хау. мя Меру. лує х" Ох
ХМ в Уха маш В ша В Уа мА ша Ух УЖ СжЖВ їх вів Су а Зо ЗБ мічах Я еко тим Ту Ох лу ж ухва ік тож АЮ їн жк бумще
Жвт ід бін ккоО Бій жк оква бів піб біж Жах птж о маї БА Дів Був
М ТКУ 316 не УЖ ту «ВО 15 «ії 11
НУ у. МИ ху ух хх дк ДЕКО ЖК шк ух. Треки а мих ик КИ и, «Ж інже ФИЗИВІ ДОВ «МТ.
М
«ЕІ Хе юЮют
ЗА Унів су ямі зши У лами МАЕ тиху зУєУі и В мВ см СМАК
Жак й ОРОЕЛЖМОСТЮ МІ МО ЖУМТЕНИ МНКУуНУх ПК КАМ В мМ Тими
ВІДІ лет «пах. 15 ха жу Ура тт Ж ОЧНІ патч ни луг беру У ві: зів Ууда біб Бей; беї ій Бех ШАХ Аа сім о Уді ма оБув ККОо Бі дія х їх ЗЕ 15
ФІ ХХ е ша ен пл хо дує БЖ Кутах УМ яю ЖК Юм я що дяки
Бек Маі ув Уві Хек жа Був Віа бет З5у бух СВК БЕ Тих ТВ тех : Же КБ за у п тлу У фуд Ук Св житя Крук туї пек хро ЖІ у туту КД пух Меї ний Жув Уі хе пл вм БжО сж мій ші БПем о соло ут Ще
КЗ СИ ак шу ба Ср ко сажа Же ож ще «хи Ки я пов Ку». ШК п як піж мех зів о пво ко Жех Ар меж се ик бів лук дев зх уд Ба
ЗУ Тх 55 вів вії Ат Ада тнє Б ТвКОчАї Вае ТвХ Жех бїнк дер тв дів тує еВ З ТУ Зі іх га лом ох я їх ря КУН хз. Лк Жов ж дО ужа ук же
Хей! бій Пен Бек Бек Бей дя кех зів вав ТВЖ Але чаї ук тую су
ЧЕ в сх М г мотлоху: М о убір пи т жи тк смгі: Тр хг тру хви Акоа пес пе; Віз вне тсвоБіх сія сіЖ тнпж іммбе Ма ОЖвх Ма ех і5З їн 110 шеж сплю зи «віх з «аїїх 1 «ЕЕ вл. 7 «ах Вірна зр аж
Баня шЕТЕТЮ я ее кА ДВКЕуАО «Ти знпреміка ст оп шум чх ом девностії ситет й пилом» я хо р -ї м дани іх я ттую уч г. шезяи Ди ме ЛИЖ МІруУє БУ пух
Зв о Біз стві меж вже пла Жак риє Хей янж Бем о Буз Заї твх ко су : З їй 5
УКЛ ау сууех до плеч Му З нн А НН шик Х жонтну й сек іп овко Аз Бех їІ6 Ве СУБ Був Бех Хе О3ік (3 Беб Бей Акро вне 2 ах що
Хе їі Тих бек Мово жі ду р куу тям їла: Фе ти ще (1 чк 1 й
ВН ож Ж БЕ ОКА ХЖЖК МКМ А ЖКе мем ом Ок мук же малу сл ІМиК
ЗЕ 40 5 порож жо фо ОК оч жом що мох чи т би ри ша те
Бкз бій дак ев ті ТУ Бом щі Бех був ер ву Векобкв уві вка
З а б с фун Мр ду кру ми ях ту Ки хм сеї» ЧУ фі Тло т г
Аве дкч іш бех піт Зах ЗК ве ціжЖ Ту Аве ББе Тк ім Був хле цк ККУ ТЕ КВ паж ха оче гХ я зва жу У тих Мхжуах спхк м тки туя: ик жк ших виє чУщі з вів ше Ва КОМА Ж УТ Тут ЖЕ ОСуй Зв оо щі ек Жея ЕЕ печією морів ЖОх прям ж Ин ЗК ге я «УЖ СИ Ж та що Ух гу сг уп нів Же вхо Ом Жвк Жце Фіж ОІа Сьж ЖаК оба УА сл ба жа
МЕ 155 ЖІ «кій ж ай. їля 357 «ії 115 таїйх Кіпр «АЖ ПОУЧНОМ МОКІЯ ст я се м дай д?ераное «ви» гпремутна є «Опис нервах паолаедовностві пимжетнениВ
БОМ
«ах й
БО Кт, соня У дхіт хи м че НИ ке не ня щу, її 1 пз чай пів би Чаї пів ше о1У Ба Бій ті Був був БЕЗ ху Ва ї х їп ї5 ск ха тики дух ск 2. Хажи А до пн х буди ЧУ я шу КИ хе Ки бух век чі руш УА Бех Се бе Вк век су тує ЖАХ БО ТВХ тв Ух
Зк че її зв Ж їй ттв Ме ака о жев таї вага бій пів Вже сі ше Зі Бевз 515 ТК 118
З С ж вок вщ ж х жже бии боуки М р фу тя поукію по г зам ак к» бі» ми: їі дев Бо Еш дя: дек а ТВ дає Жук дей ів оМек БКа хх пе нок м е зожжо вх Хотин Ж шо ММує о То Фе Мк дош Ер ук дію пу ПА рух ож пуйхх же ойнвр ко Вів Уа сви Твх МаАї ар отТву Бек ЖЕ шк ТНК вла фФуУк слоки у от М зт Се 5 У з НКУ в ати. ек ШУ: їх сах ЗШ їжа ім їв Бех ЕК ЗВО БО Бех 3 Варотах Аа очах бук ЖУК буд ях З ях щоет Вк Ще пев дія БВбе о тесювь Щі йія ТУ ть дз ува вх шві Бах ще БЕ Б2Х Бе діа туз тЖжев оба пів о їУукУ ЖвЕ беб оУва твЕ МБ Бех зм пе чі ї5а 05 116 шум
КУМ. ахлу ок, бух «вік я «и БРБИЩУХ я А МОУ НО ЛІНЬ ВОВНИ СТЬ хх «им пжаумаа : Ї тм біса істо схо ДЕК тибутд му ТММ рвали ско цм
Ходи 7 А ЛЖТ я, ро ан кВ зн и с а сви а п а в п и и В р а пла попінпилеиде»
апа щу й й
Мах хи туї иа снах сх ех. у. Оу жи. Я - иа да же уж М ви Ома ув Ма ТК ОБУ ЖЕК Ви ее беж Зфячю кта УВЕ ввю рує у й їй дк ния їх Бо. їй тк п Фбкуї Фах Кі пуху дж Том «ов хх іх болуух Т. шк мем. чав вка лів шк де ше СА Бже ех век за ак їла пес ав бах й щи но
КУ ях 3 хж т со Жкук Мр Ніж б оезую Мах уі му Мхжра тку ду у ху ук жу п же Ме ля уч
ЗагоЗіу пт ТЕ ФуУК фем о Ави тЕв бе інм БІВ Муюшо Був і БВ оюех де ке ще ї5 ща ДТ
ЕТ ті шик Тоіх У я з «ПК г жуки з у Св: мету хм хх вхо бі Щек Пес жі чек ве уві ше Був ке лу ек щу ті жо
Б щ що хг Мочат ХУїУгВ ев «рах см вх Куц ТФрео йхух їЗЕкке Лю жа Ж ки КО вв о АкЧ о гвпе меж ОБУ ше ес КУ тво А Бе Жвх о бев Був іш
Ж "ех Ус сх
У їй Не ко
Кия УМ ут 2 крок Ко пи її со. жу ок хи аж ми ск хім прхе. ку жах.
Зак вхЗ Шах щіб вів би ар оуві слу УЖІ Туж Жук те жжБо ІВ БУ
Ба що КБ си ХК їзжх чи Кліо и и Кф, ик у ж. ку г ро цч я ее У Поу тиж ів вБЕ ЗК 15 їх ве бу Са піУ ТОК цу о хві ши ків цуй їі Ех 116 «іо» 23 суч я кві 11
МУ т уки «ВІ Баплох
ЖИ Дю поко ми мі че с тей дя АМС КМ ТАКУ КАХ ХМК КК аа «ЛИ; сх ета дови ХИЖИХ . и кт Мі Н їх ММ штУчех М Мч іх помпу о
ТИМ пу милеюи зо КОН автюмиІ Мі пі нен иснева Ме евовечнем.
ДОЛІ УКеОЮе «пк туту кара и ку хх Сх хр що аю хижих туї ее Уожетк жом о жи же ті х їх ша ки мне Мало б ех Слу Мі єв жа Був де Бик жу ВІ й й - «4 я 1 5 І Є 15
Шу хв и ше не ни іх ло Між схе іх бі Му од вет чай бук ав ваг Сея Був ойна век о щАш ЖЕ Ти РР УНК КАК ТУ Х ах Е. "Кї
М їх Кан шк дк ж споєхлую зх КОЖ дя С їжхению ЕУї жі «ха ж є Мем рем
ТЕ Мо дан тк уаї вгоа бів віз Бе Зі пів» о сіжЖ Бех бо бер ті ях 48 5 піку Бек же ви БО ає Ар Зек жім Жак Між Жук два бій о мек ка що С и ож кх пе фе що. ж ши Оу 3 су ож Мом Зх У арка, ММ ж: ом. МЕ ув ваш до вів ТМ імен отвж Маї двОао»ув мех жах шек тах Аді жУХ ту за тя не с т. ки ни НОЯ и склях х сх, ЗММая Ах ХЕ бли Можу. ЕУюо
Бав'бс а бо Беау Бах їж вх дО Ма А ту вів ах УЖЕ Ух Же й ще А
Фу меча бо т ожзух МО су покер Ко їж мя кожи, ат Вс век бви дія де тТкросіУ ій Зі ВЕУ пе очі тек Уві Ват ле з зу по 55 ТЕ ех ше жа «вії ЕЕ сне Шон
АЖ УТІК Й сере нн не жа АШ ШЩЮчЧМИ ПИШИ КДЦ рр «Вих хх Дейл
ХМ стцуюмівкм з омОмиє ЩТУуЗНОХ поліо вносії пинтеичнеВ подхлаеттнк» «Ом 8
У ре Ук ан нь на ие АНА Су ог лУух ЛЕО Еа ду Мі тх аврвоїїін зах бек Ук пів тТвВЕ Бус їв Жах ен о бжо тлі ТВ Бк бу ї 5 а її г Там Вт ог М зу ло туги Став юю Си Жох ши що щік шк огко йо Бех їіжшж Бех суд бе бек Бек збій дек Бев обер Деробаеє ки Би т ж шт щи г пух сет СК би ЖаМ ВЖУ лю їв Тож (1 ток ух и її щук двр ому жав Тех тТУЖ ММ Аа ТкшШ ім) цез сук пев ве сік ПІ ех
Ей й р с 5 пк С и НЬУ я тую ху Р «у ток и стаж Ку (Я зу ву дних
БЖ Але жнУук Бей фа ук Мей ах БеЖЕ уз на йзе Бех бі ТвУ ВХ
БО 5 а йши вмУ ШМико Мах у (лік фухм гої Шев ж КУ ду Ми ра Фуко бід ж
Ер окт вве Зек офі ше зу ех шу Твх вер ойве ЖАЄ Бецо бе ле с за чк пе рн КУ т во -ї А са сна Кия лба вух сля. ж КУ х. Ж Яма сту уж п ге т хх
Зак дк ов ою 81 січ вав аз щі УЖІ Тех тує бже Тв да З1у 85 зи 5 су чо чі ож стих, їх: ТУ Ж лк ріж о тя це та Ж ххх твЕ ЕВ Вуз ре Ав оте Бе Бі Бій ЗажЖ теж Б Уущі Б тів Був м Ба 1 шві ах жа БЕХ
ЕЕ Іов «РУ ручна посліровма ють
Бе сей джерел туту, штуки хи сао обміні: зиндіарі:х рю тими вЯсю пив ске дн сви» примі жка зе ків штемни У ОО ЛідсвНистЕ: свити и пеки они» 5 т. у 53 у хг пу Фа ММ Ві із г бок: Хм Ж вки іх ців тай бій се У 01 бек ЩіУ Віш бів Уа бив Був Би лу Віз ї Я ха зщ 1 т її М - -- тої с озаиУ р с духи жу ту с мує ЛЬ су ру ЖІ бує ЧО М зах Уві Бук чаї шШеж Сук Беж вай екон же ТУЖ Жвх в тТВЖ Твх сржх зи 25 Зо стеку М о щу М хв» ик ж І ку Кн Кі я сф А х кю Мак Ав тк узі вх и діа ва осв віп а інн Ше жже ТІВ - а 45 га хх тлу Вергу. их си що хенд спі УМ АСУ Соя - я я
АЖ Мет хів оба яко Беж дай Бех бій тк ВІів'ЇшК Ази сф Ме ЕВа
З 55 ЕЕ
Рожик йкя хх хошо Міхов уує фі а Ох в би Су Мб Кт Зоо ж
Бук Яворозку Аів Так дез бнж УМІ Вр ому бак отвк ех Те Аї Ук
В за КБУ Бе тож» «13 ї0 хм Кум и ує був Щщамех сах ко З, де Ме ю й Ум ло срок муха жк
Кей ові бе ех бек щез лю овак жа аа Жак вів Ус тує ек Се щу За се ки у їх то юр рю т сх Пух Ж хх Ми у зе ФСсух ех АхХИ бек веб оАта Бе тка іт сій ціЖж вк їх та твкКоОМаї Бех 2 055 ТІВ «ВіпПп» ЗЕ
Ж З пюЕАЗИ ХК
ФСУ п ргуюи й
Ед ША УК
УК лю о злу. зим В жи мк жим, «Ех ЦИМ БУДКИ чиїх «ие м ДжежНео хх йтуцупаі мий сх жопу печі ун смій и фунт м и в пу сьо во, па в п в вв м І Кв в в о З В Всю з во НО я
ПТН ВИДУ
Ша зЗд каачи 25 зхуу їй ста ОК пером ШУ сф Туди Кам ФУ шк Ж піду в вк Ли жк
ХвроМаї УЮ Ме Тек ів ТБ БЕО їні Ще о беб ж У тТвж ко зу 1 уки т стаж Хе Ж М тТорже Махує кує ТУ бо тах ск де жу сій Бк бів Ж їіє век су птн Бек ше Зо ек бе) Бей барах
Ми 25 35 печу біжу був Мох дк жк ше бен кт ши ач дух 1 го Му
АввоотУ БУ ТВЖ Жук без два ЖЕ Бевз зах ша Був бе шАж и Ошех їв за ї5
КУ тод м то т Ж ко ЖЕ ток 47 ух «вхо Жимхе Ха «кож їж, Ух Ж
ВЕБ ОБЛ ех НМ їв ех ва Уві Бек був фей Бе яжх піЖ УВА жо 5 я щи щ Кг сфе: Хек т пое їх» дух їУТ о ко йо р Чаумо ба лам ті ща Акеа Рбж Бех сбіу Бек обі Зах Піх ЖЕ Аве Ве вк без в Те
УЗ КЕ: ІХ щ
К з їх чок пи Ек. є УЧ у їх Умка хуксх Мгачау Ту р цех дта Маі біб Ат біз Ява Мат піє Маї РУЕ Ту СЖВ ЖКроОсВВ БЕ
М З х зе Мі Мох ет у спам х гія 3 и аМ рр тихев ЗАЗ 1 т х» ех твху Ві БлБ жо сів жТвх жЖбв сбЕж піб ку Бл пев о ха ма о хМе був ви й х їпо їа5 ЗІ
БУ еНО ща са вч ОТ. 7 «ії ІЗ «В ВклОоюх «фах цреучна после авньх «каиА
ШК ко стек рм «а даже | Й т: г Ж Му Ум Мом хх МЕН РИН МК х п тиж ліоижміжеа - «(МО НшУчНаХ МІЯ НоВНМУКа х СЕ
ММ МТО КМ ДУ. Й сайт У
МАМ КЕ 2 о я пі діа ї Ук зе) таі дій дер іч Віз ОБ: чаї От ів БЕ ІУ ді віз уві бій без та1ї Бі бек щіж Вів пі чаї був муж БЕ чку
Ї Б що КУ т кл Міо іх: ЗМКоує сі м гу: що а тах ба ба си У хв' яви іє то ви ВВЕ ЗКУ вк ве кет жа був сні Бех сув Був Віз Бек Фе Бе Тв ВВЕ ЕКх й ТУ т ї Бочка
Кк 5 Зо
Й Ка й ч ом. ТУх ко тиху ті пргечух, х ит Кох уч) Вів ів іш Бей щих ОА хі
У Мет ЗваЗ ТК Мал АХ ше БІВ КИ із пів ТЕЖ ЄМ ЗАХО ХК й м
КЗ БУ в і т м 5. ку бли ве Ін
Кк ;. -к жо МК ще дю НЕ ЗДО та Бі Ук АБИ Бл ВВ СЕ лі Бек гі вер ВкКо ет ве о шНнЖ 30 жВК ОВіВ ТУ щи й Я М й зе ще 5
Не ма м : Ух Е т се НН и На 1 МК я же жи хі Деу Му Да Нм м. Му За Оле пив ойкр йха дів Жвх Бе тв і вервОжак ВУ Є ах Тк ОО Є мк ке ЛО зе я 8
У БЕ сі а 55 ге і ї жо ЕН 3 че ба тех ух т. а Мк Ті х. р уми дл Ме рок ік а стеж сичу Ук пев сіб бею ек Веб о ху вах піч Зв Звк Ва Мах тек о ту В
ЩІ ;5 г т аг а с. я Фут КК ха ух зе) тим трах хе м Аа аж лев діа на ТХв між бів о ші ТЕЖ Бевз май Жак Уа Бех ше аа В «и» 1
Ази Ен кий Балл «БЖ Вк жчмя ТИМ ІДеВнІг и
ЕВ
ЕЛ ООН сажу фе жк с ВМ Мини х носнЕтевногвіе сурми «Ж У ІТИ ЖК о ЖК МХКМсУ ШЕВУМВІК ЕМО КАМИНАНКИХ АО ЕВ ї
ПОТЕН
В ЗЕ
«щих й : Ку та руб чаї тк овуу йіу п г ; Ж дахах зе ів аю ее Те: ре бр "ККОо ма ШИК ОВК й дВв ІА баї же тТБжЖ щі о тВж КО Бо яву Сей Ко У: й ; й й 1 ї5 х ж 3» по Се жає стаж ба Ху кру Ж Дожхух ща У е ? Е щі пе ї як ні Їх Н А я тю Х Кеж» СеЖЕХ НО АЯ ЕФ, 53 жжхмежуУ ЖУК бів ву віз дес бів Бек сжа пт ошеє Бех зав йеу ев їх Із
КЗ хх за ке е п - ж Ух їозхамо ж анхх У би 1 й ж схожа жо, ску хе мо Кк саме МІУ я -а цім БК «о За дах вве спіу Був Хв Теж їм: два же їн Бей Зі БУК ЖЖ У
ЗЕ ча У.
Ухутж сі зу буме Тай жі суха тех КЕ. беж Ж Ж як т ЄСКзу м ще
Бхоб жав дек ж іа Ек їні Уві вес МУ без ВБрОоВеЕ БУ Уа ВЕ
Б Бе б х ба їЗеш моху Фах ул яу иа й хх М хх дюсхх Шфхму СП яю То жи зви акч пе БК сім йшеБк оБЕе шаж СТУ ах Ве Бе ТВ їі бум 116 ще Зк я ще р 5 КУ ХУ хх ді у хх Уа ВоМа що ун чини не и и ту т х
Бех Ак Ух пла АХа пів бо Уа сту Маї тую тужх ув кв ОБ Ух г ЗИ З тхія ух ЖЕ о ЛУЮНи, Суми КА срах пе й ку ун М тових ух лих кх г. зуши хак нів ше Бхо Ав же Бва ма ОБ ОМ ТВ Бу ма зів ХЗе рук тн тик тя ща 105 ВК шою за «и ше оц че У хи Блиак «ЕТ Шеечна пчосплідовна сть «ЕК нка я ет КИ ше пр тух ду яю У О куужи ит суми мети ку куми пектину як ут «ЕХ пу КВ се ЖОМЧМИ ШшЕУМВОХ МОНО Фе нНИ
ПЕД ПеНРИМа. «в З
Ех рт ру жк Фшю хи кенкух КЗ ж но у НЕ Я чн чи
Бі же іп без ов біб ак ощшіж БЕЗ о ЄЗ) таЗ Бз буд Буре олу Ах
Н Кк 1 щ
А рая 4 А чи ую Ж Жзуші хг 0 де жує Зах моді дл ри пу Мф м Сер св Ме
Хек Уві Бек Маї Ше Сувз бе» Дія Бек ошішж Тек Тех ОжБе Тв ЖвК ТЕ сег зк зи ха 25 ЗВ
Мірж, Ме фот бу охо кт ік Ха дуету у їх хм та КІ тм їж Мис Аве жжЖро ув вив ба Аа Ву ку БІ їх фа са о шЕЮО Те
Б їк ся 4: ми і жене си С о ше Є ут ПІ Ма маю й 3 АБУ і мес їі База БК беж Ба Бех б1ч ЗХ Ніз Тук Зв сій Має ББа
ЗЕ За І товуш Мух де бущу З УК ую оо м хащі дух. Зо кни пух бек В В до хи пу вже вка чаї ЖЕ їх Жех ма3і вар ЧБх даже ХВ їех реж Ва ту
У ти 5 Ві пою Ж я форумі дж ки. Мо Жожеме Жук КУ х Уа ки рт сію режи
Ми Бій ве цк Зак лем вх Бек ші Ави ото Аба УА тує тек суВ
У За 5
Шар Аве ал тих МІ Мін сту Їх їмо й чи р та ад ЗЕ се зах Акч паб ої Аїа Бав отТгр міх бм жім ЖВЕ без) Зах ЖД Ох Зі шВх ї1по їцп5 310 зах шу А А «ій» ЗО кіт китів 113
КК МИЛОМ жк Ат о шучни пово хе М
СИЛ гів є
Еш ПЕЖО
ФА Кажу и ше Ех миті рити веду кий пет а ме зах «ЕЖИМ пПоММАаАСЕКа сте опис нумо шин енНяМмИ ка її Му Еручних
У СКК ен ЗО поякя Ст Мир Фін Уруат ку МУ Жевтку схожі вхждю у - їхуєих дк ке пу тА барв Хі твк мех тео чіл Ках Же фе Бек ре: рБкб Уді твЕорКОо Фу
Я Кк Її ро
А й БУ А 31 ш іч во ЯК и же. «ска диню се ДОН ДО с Кая пів вхо Дів ЕХ ЇКе хех був Був бек бат 01 бек без фей й Мжх що 25 за ххх ук жк Ж. ж ко хх зи. Шудаяую те Ух дим же пику ит жк Му
АВК ХУ бува тТВх жук о їмуз ат тк ем Бема Бе ЖК іт щи ех зх С е
Ко З с
А в и НН а Де т даже СТ ах сток: фу аа Кк и Тужх, пЕже Зі бак рев Хі Хо Беца умі шех мух Хичх дво еко ОвіЖж хаї Бхе о ук що
Я теж Маг 1 ІшіУ (пЯ я Ж ик чеку ою ДМ КЕ тему ОТ вних дво одкч кве ших сі ах Ба Зак ОКЖ аг вир БВ Жпе фимх фе ті дО. - схе
Зх МК 15 пе пкля ще мар ать но Б й ду Зк мі тех Мем МЕ чума Ху Дню
ВХ АКОа Уггі жа: йно іх ват судах БЖ МА ЖУК ЖжЕ СУВ ТЕрошам жу я що 35
Уртуує 323 біс) бух зх фак КУ щен Мои Ко ках ЖХ ит. Ж у ж ожегх тах бів ба Був осів ЖК ББе шу «да лу Тих Мже Уаї свое бив кт Зм м
ПЕ їч5 318
Але НЯНІ ше 3 деку чи» Кк «іл пілох «иа шсеучна пеньок
БУ хай» шевуани кит гпонмХтид ее «йдво щУМчнІй проипаднансостії «сниселичний доидсиде «му Ні ода мед т пи
БЗакожжЕ жк жа КІ в. е ї с їх ств ря ки ЗУ «ЕТ «18» Бімох хи Ка Мт цнв ПОЛЮВАТИ кМХІе
Зо и А ШКО
СИМ УПІНОМА МА сх уми жу послідовно хХ: сиМтетнеМиИ
МОН ще 3 сх "1 ОЧНУ час ов о лід я Ша НЯ що сі: хіба ко чі сту плу леротех Ажа Тук Бан об Зіж Бе Бух ї р їв к : 5 їй їх
ТЕЖ
Кк й муху «ВІ В
СВІ Ви хх А АКА
СИЛІ Кк Чех овуєтя сек Ех ІК м на, «А ДИХ Му чом
Со щем хи ук хт ук их кайіх писмєне ее НН НН НН НК пеадахнх сту «де КПА мс я ом НебБучинх тилаіповномукіЗ сиве тмУний
ТРЕКИ пф жк ух 3. ж ую зу пихи жа тв БхО їхеа дже З АВ ЖТуХ : 5 хо У туз сх хи І ків - хиїї» 15 ин КН
Бий 3 Х ОО ЖЕК ТУК, «и йеемсни те цеї повіти жи КМучнних ТІ ДВА СЕ
ХК
«Ж ІМ ДИН
Ж КОНЯМ Ко є ЖОМІЦНІ ККУ ЧчМ ТМ ОуНЕмоКллої ІМ Е УЮ ВИХН,
ПУ ККЕ гай з «а З й АН ЯК г сис божа ик ок реж хх Сх КеУ бу жо т лох зуз вів бек сів бебо Узі во ТУХ айви бі дво пак не ре ода 4 х 35 Ук ї 5 15 15
ХМ у
Кок о «ЖіїМ 7 : туру, ТЕ поч тва ДАХОМ
Ж х пса поки Возу і р -ат шШТтуУМНа ТОМ КОМІ «ВО» пк М шия мету хх М ДОК
СдеЛАНеьХ ХХ юмржка її му зе о схуі фути пики михухж і Фіви хИ Вк Є пе ми «их. ПИиМмЕЖщ ох «пив с ВИБУХИ ивхї сира хиЗнНниє
МЕТУ щю «мим А хІа вів ойке пев без І щи лав вив вЕщ ми зим АХ Зх ї не
ЕКО 36 са З ж х
ШКТ пет ру ТО зичу Й
ЕЕ ДНО ех хім що туту ху ях
ТУЮ ВУБучмиа ПИЛ ДІЛА КЕ: кут «ах хиЕшА джем
Юля Хуєтчудті ії Міпе т о ка юитеких. уміти мейх сім ІТК «І утіх Умка три К хи пика с хи Кук ІОН Умль я ЗЕМ Кеш та вяхх - шви мли «цих ЗК с З и и не го Тс Ще голу ТК
Піп ошів Век Ава З) Аз» БЕК їла ТВЕ ша? еле ор
ЕК КА
МЕ и М си хи ми КИ Е «ЕТ Пуучма полі повні тУю» «Вйух
ХЕ я и ан кА ДЖЕК зал ЦИМ КА є жАЛИИМО ЩТУМмМХХ После дишнсомем ситуа.
ІН Тату ; «хх Я «пам 7 її їх о ЧИЯ жк л ех о АН УК у Лошжі МЕ ЖЖ ку. уча в ху. Мк зх УВІ ім Без'уєи: сів жає ші» Зі Біж шее У бів ке пі пу ї Е її 5 ї х І 15
Фея Ж чен х ча сх х т бу а ММ ОБУ УМ, феодовя о Худо Може нт Мей Ах їжу Бек сша віз ів ех сі ЖЖжХ ТВ На Бак о Мев жук 2 з За фін ща Чуюутих ЗІ Щ ОУН АНІ ЗК Фу Жах махи ко Же я Мт ек ж аж мав КК Мах дюЕд сів вла ки пу дж іхУю ще їх у ЖЖ Уві
Зо з «Е тав ра їх Ж ду» гл. о я моху зубр СА ху В в Кк х У кіу БК же без Бхє віж БУ ЩіУ ВОЮ Твж Бах Тек ащУ 0 Ті вве ще щи це
У Бе ВЕ товщ іх фе фр: у жу шик ЩО б адує Має ох т м 535 зу ххх иа БУ ка ве Те був ше Аза вв о Тви ек ев дво тв вла теЕ ва 0 5 З токах є хг хм ра сом Моск ту ан ее Нв ши НН о ШК ей Пі Ме Аа Бек о беу ДЕЗ вів Би ав жк дів ба Тек отБУє Сух
Ка Х в; У Х. сома де, Ж ща шу жо Мою, ї ре сах бух хх хо Мем то ве овкаЧ Ак. Уа БЖ діє де Бен оввротек ЖКвошАт а ок тв їх маг де ОКУ іп 185 Тай їв рик їж Слиз шу чаї тво уві ме щЕх 315 «Ва В
ИТЖИТЮОя, п сова ана Я «ЕВ ВІДНІ ки Прус точ ДЕН трун
Би ел УМ м, вд, БЕ кеш ДЕН
ИЙ У ПуМЛНЬОя ЖЕД НВР ВЖИВУ ЮХ Ж ОМВО Ми
ТОЖ ще г а
Ух В
Фе г зх ве у и у, Ху Ту Сбизе ау Т -Е. о Ех Фу: Храл Кх з вав о тів ія Ме Тву осів ех Бхє щеж Бех Бе веж бів мек Мак 19 1 5 ї6 35 ще Фурса УЖ п ТК її я кім ж хм що щем УК, суху що Вшх сраку й
Жар ака аї ТВк і Ах Су ув Аїн Жех Зв Беж Узі ввр отут Ар ж уч Ще й 25 З п ух даху ОЮбЖ стоезк й Фр жх. су нн Гоа позжшк о ик сожх о пожекх До ух іш вав ех ве Меч о же тк пів ій Буф м пі Бтун Ві Бе зе її БЖ 35 СИ ЗиЗ таж Жоюрухє Кому Ж су буку дл Ж гуси фокукю Уміти є ххх іх ик
Був дец їй Хі Туж ЛІВ ліз йка Кум Би ФІ Аа бу баї Вк ех а ще ЗУ
Щщжчу М; Ст б зх дахах ФА КМ о ку су св їх Кік кю тещу Кун Фут дея Ка беж БіУ Бек сі Яну Зі ТК Аве ве Так ем Же їі Ба:
Ж Ж их ЖЖ ню В ж пери с холку й зх їх У ву ог К ек ме І ЖЕО Зі дви ее вів ФТВЕ тек бує був сівощів век Вав ка Ух ух ща З с жк ухжи ства ТИМ : Ух з гефрях са тара и яку хіх ка вже Бхосеєя тв Бе ім щів Бу так ву У біз Ті Шев к-т ох зай
ВО , 105 Кая «км Я «ВІїМ
Ка ЩЕ лях
АЖ ДЛАЦІК
Рух піди ту тУиу жи ту ху им жк пе чна лі ДОНУ
ГО хі чит МЖеТМУНО ту ПИ МУКщ т КИ ВВЕ ККАЛ «БТ КМ МН пюре вия «Ах З хг бич хи пед вві ТУЮ тТУух дів ІН ї Кк ки» якіх їз
СТУК С Я три
Мая ії» МУЛ «а шжУзна ПОБИВ «Ие «ЗМІ руде шк джере се Р жівчув У жо сс ей іже уки ФУ Вуха их ст КІ им В дела У кі ех ІМ ожини пом ил песо есиУх живете жиЗииМ центи «ах 4 ще прик Миж кю ух тож с тах зх жує Ж тує ЖК 11 тних іх гГлущ туї тів тух вто щіу ва біт Аве ТВ Буш Хук одна обі уж ЕМ Був ї ч ї8 ї5 не
Сеник ск
ХА ШИ ЖЕ
«ау зи схе 18 т ту, ЕЛ. жо
СЕ ЕМО Х
«Й ПРЕ НЯ пог Х ОВ М
УМ ТЕХ
Сени
НО миска ші ДЕК ОашНИХ кий лпЕиМміка ст вОиВо пбжузної пені мовнекхї сни енанне
ЧК»
лих ї ї
Км. 31 хау дак Те Од щту бік чи ХМ ко дк:
АвивоВех ТУ хек АВ Тук ТЖЕ ОДе даю щмЕ х ї кг 1 5 ЕЕ каш ях «Вії 17 ха о Кая жк БИК
ШМК ФіхМлках зе уки Юди ша диву пом На НО Ух длутютух
КК ени
КТ се ТЕхх бак АК О «ГОМ бука ль хто жу ЮУтЦИт ппклях ті Ух о и: кусати УМ жо крупки ее ЖИМ МИ ОО ЖХАЮІКМО НЕМАЕ ТОНИ КО КК ЖУКИ
ГБ ТЕБЦИ
Б ЗУ хІЩАНІМ КЕ и хх сх стаж же ОК еф ж: ох. шо У у ще уки: ХЖУюках чи оку си т пк теж тот х ро ї сх х Ух хх Я х соя Ух почи сх -х Ко «хх пуг Же Бек ія шевк емо вбив Бех ва тв Вч су ва жук ХМ р й г Ех: ще лк
Ак» 7 «ВІ 4 «Ж
Ко чн ж М ІОК
ХЕ НСЖУ: НІКИ МИ жк ам ДІМ 2 жук кА сх ФЕНИ мисом птн тмУОМИНИтх пак ерм я й МДЛКНЯХОЮ КИМ сно КН ВИК УЧЕНІ КМ БОКІВ оОЮ КЕКС ЕИ КВУ МИХ
ДЕТПИЛи у АТ шві зт Хо КЖУдущи пу муку дж те вів шк жИиХх Ах мли БЕХ
А ра
Кдоява 4 та и м Ж сера я М МЕ бло кї ЗмихсіУ и сети ВК УЖ ему хх У ТУ чим НО ЛО ІВ «ЗЕ»
КЕН Фіви ж х Увач, хи ДЕКУЕЖИВУКО
Му уми пе хх вих пити пі пуща є помірні Мі
Ху и ДОС ЮК о КК ІТ КЕН ГИ СЛУХ ЛУКИ КИ КИЗАКТ и
ПЕК Х
«о 4 :
Ох уч ТВ, сли УК с
Мак ОошжЕв он ре хін фе дощ ТВЖ
ХМ ме сл ра ви хе вх їх В жи
ЄЮ их ході кя БЕнок
Коль м АН фо Я Зх «ШУМ шеучня зЗопизлювВністЕ суки
УЖНЖ си ДЖЕМ ВО я х хи УКОМеМИ Ме с ЖОМИЯЄЬ ЦИБУчУЄЮ ІМСМІІ ДЕН УИй х хКМНВЕ ИМЯ
Все НКВ ек ой ку 5 хара аа сам Мт Му ЕМ ПА З пе ід КУ. ще В
Х НАУ пече х «цк 45 ку
МАЮ уж ТК жуки я тк АМОМІЖ
ЖЕ Мкдахдутівтю с учахезлі й яких Косик, «Ах КУ чВІЮ ККН ХМК ТУ они «ки
ФК худа ді ючи мих «СТЕЖКА М мере
ТЛ пусумакді в лі фета в хіжци поко оку х гшрихк сову «ЕЙ ЕН хо НУО щишчнВсОМ посли вное синам ме К : Ол УК УТ УЖ ЕК чЧМНАВ
ТЕХН У. «ай ак каво» 5 "Юучую Сію сю Шкцедхо їх зо що щу ху су т ухі бах Ме ля фе Ки Ж хх
КжВ око жк Вже ший дай ее дав МК Бе тех аж зі Ка МНЕ БУ ч В її Е ї їк КЗ; 15 ще ж «пійх 4 кто ши КВ
Коочь кі ож шк ВЕН ОМК
Мох Пфитутуєтих сізузут ії пуд
М МЕ МЗищ мно ие. уза х чих кві джере» ее учи чужий сісти кання Он НК сукуп кіп ожі «ЕЛ япримікки т хви Ву мч ХРІН у ох ОМАР ЧЕМ пЕЛІТМДЮ сну дл «ані: й; пом Ган іже Мих ди ТЕ с жк в ом Ту
ВЕ су УжЖх хиах МЕ КшЕ жУх ВН Ку ПУЕ я : її
Ки ш Х гніту ад ке В ча чор
ПК вка З пт хАКдк МЛМКОК ша ат Шжучна пасли сум, «УМ
ТК. трати «их док КУТІ еВ крівлі зриоеніУх трі вночі приктаищений
ККД: ІМ МмахЖМ -н М щу чМА КРОМКИ ОМУ ХУ КМУ МУ
ПЕТ ККОІВ
КЕ Ух «каник В
У ух кі кр КМ ду ум дух Ж дух сік хви Мі ММ йому бу Ве Піх ЖощІ був как как жів шко цен се оавОа ве вк ЩТвж БЕ Буш ЕВ ДУХ Бе
Е т за ІВ ше лаз пух т, ; «від» 4З крук
Овен кр и жі ї окр я и КН шлю ух. прали тич У миті ха шШТучня понптладсно сть
САН
БО ку Кх одн хи о едіх дверна кодек ик А НН НК НН схкат км пили тки У тиша В КИМ Тк те КІМ МО ЕМО Еш ЕН о НЕ КЕ КН,
ПУХ хи а капи В аж о. «ла ж КОХ, гля їжр бак ме тв АК БУВ БЕ х З «ак ЧИ п їх В
ХА Ох «ій ЩпідоК «ВІЗ» Шечма пені лови
ЗТ ач
ЖЖ КМ
КК ттАщидм их ТЦ хішшоких ДЖЕННЯ шк ЕЕ БЮММА ТК с Сх КІЧМиХХ МІРИ НИМ ДПК Я
ПЕТ лх -еагугу щи «капи ВО бохаху Саху М «рі Ж шко ж Ку» з і М х Ух сх с фуд муш ах мех кре Кі син х ДЕ що «Щи ЖЕ «ах Бл! кул упо : : еВ В Уч пПІМОЯКА ХМ ХУТіх (УТЕ ЖЖ жа сутки тт що КАН «й сориміка зе жом кум послілевисаваї сна м и о вн п СО КУ С ОО о ВМ В ЕН В ЗК У В А о Се Есе
ПЕТЕР М» кава Б ук мах Но жу г пу ТУЮ Жих Ме: дви 8 х
Уест я
ОБО УК, й ну НК «вах «туту щЬІ пу «ий Луки Х ки Ну посліді єть я
СІ з'якве зр хе М ЛУЖНИМ вм втік и з фам пучноОх вила емо: ее пермннія хе о УМА МО с ЖК ХЖЕБУ НА МТА МІСТ я ОО КОХ ЖУК ЯМУ
ЗІРКИ Ех
ЕК долу
ВИКО Ме
Ух яки: ск мух пихи пд вуж иа Ми ді нн су. ж ох ХУ То с їм ів йди шко жЖк був СКУ УВК ек ТВ Тек дай ів Був Вла-ьЕВ. ї хх 38 їі зве
ЗовЕ прут кт
КМ У ла ж о код еру ож
УЖ и ШОК. ше рух Пінахтуюту йо плив тА гм а я МІХ МВА НІКА ЦНС сеМх ха пжерена : | : пещення ; пужерих. ПО ТЗ пев сим им не ПІНА в и ох ВОМ дивує поплив ов р Он
ЖАН МЮУ с БОНН деКУЧНУХ ТОБ
ОХ ЕКО АТХХ
Кс сша дк Ку пік сіни Шок ча х Аж ЖУЖ тую Біт дв ВЕК Вщр жк Теж ВН дев Ма
ЗвВЕж Кв тую Тук ЗКУ бе ВЕЖ вир БЕ Ту із я, т Ж г К зок і КУ КЕ в ве і в пі ким ла «ав 3 во ра ж ря В ик
ТИМ цена ОН ев окУ «и ВО ТУ ИЗД ОВК ХУ ня
ДС ПВ | певний
Й й сеоуи рел пор УКЛОї Сп КОИ ЕН с шому : ЖЕК хе ОВК ОУ ВБИВ ВИ МІД МІМКлої СРО У «ЕД МЕМ ве хе ФО ККУ ВО
Пан «Ам а | й ї В. у. КЕ ко й реч
Н г щі же ж вав Тек ів ІВ ех ЩІ а ее х та г АВи ех дж йлв нак сп Ве В ; їв не і Б В «а ск т «ШІ ЛИМОЯ ж «іш БЮ
ЗЛЕ п яххютьх в ХрлЕ т едак «ЕМ Шеечна Осло кь пу уча «Оу «ЕЕ
СТЮ пржжио хо жи ! що й век з «Мамо штучне послами вії смнчимуихНн «ВИМ я ПМК є Щомнмо штучною В З тех
ЯН кН ЗУ : ха 51 похже ї ЗМ шу АК ЇМ ща НЕ
ЖЖ ТВжЖОКеЄ дк Ма май ОК 4 Е
К Кк. стук ЩЕ
Ум Я тн «ШТ З и нь оон «кій Віпож са реоцная голі т «І Щтенна голі доВнХ ся «пЯух шли ик парні ШИЯ «ШІ ж Тан я троп зНадноиві: пиржевннх
В пами с оМвиХ цеБучНюМ ТОПКА; ЯМ
ОЕМ КПК А ВВ с ЖІ КЕ
Пе КТКАТ хан п : ух Тамру Ху стеутрю ВИ.
З с Оу. зпожиах Бей виб жу ких ші см соку ВВи ОЖжлХх Бей Ку г і З кдд ж
ЕЕ
«ЕТ ЕВ ет ОМ
СИ ше ВХ по жк тА т их
Її худі их
СТУ жах пні насе ши МВ ТЗОВ ке а Й ж МЕН | девнттії поимтевицний пк руна що хіх МІ ЕВ. РМЗ КЕ Мем ше ТІМ ви сх шу ру
ТЗОВ ТУ ДУХ сайт н З жом шию у у : г. жук Ех а гола ук АЮ т дан и Ж ик ка шия уж с. - З піз жві Ов офси Мазі щі бак іу діа ій Уві бух бив вка СІ Вів х ху я
І 5 І 15 15 сиру 3, точ ше нау Ше - бик їх Мох ї т Ж До вх. -к ех уві був сбаї Бюю Сея був дів Зех піу ЖтхХ ФЕЖ вне ТВЕ дБ ВУХ г зи зі а ж щу
З о Я же ки се. УЗ мне фіржи, хх и Уж дк плоті ВЖК шу Ук ле
ТУ ЖІ ніш тер в вже іа вів ВК ОПІіУ ща біт Бе б о тТквотів пк ок й ж ща 5
ФК жк ки Б а Уха ЕВ и ах ков Сея ток сухих ж КИ У «гук.
ЗА ЖЕш о дде ушк БО КУ Те щі бенх о хпжЖ о БУВ Теж АБ од БУВ Ве що Х Б тіхжех хх о йо лу жк тот подат тА с зу п г о МІ пжк ОМ о уже іже МУ Ах Аза ви Мей так Вів вав жа Шекотах ВЕК ОТву Аза тух ке ке: рн :
МТ І зв яв
Же ях ох Фо а АННА жа Ком. є аж їх ак ть х. СУ - г. беж сіб зеа Бех Фех ме Ва Бек Бір Аго ТЕ ОВУ ві Жук беж сже
У же ще щу пух Міфи ба: маку щоку ха тує ЖК; хе ч схо ТММ Шемедя пк очи дів вгз зе Зех тТук ех Аве ТуХ Тк ББЖ ве ВХ Тквобрж аква у щу ак мо кЖеки м ЗІ пику схуї. 3 Мф БАЛ ЄМ Шу
ТВх Бек Уущі Тс маї ех Зах 115 кам ЗИ роза «Вії 115 сій Вінок кОречеья т Ух: хх. овен у их
УА АЙ Вр ОТО МУК. шт как
ЕЕ М драм еле лик бум Ум ще се пуд мо УхІ и Хелм е я Жак сзчиди т, У
ВКА ЕКО ХК ее КН УВІ МЖК А ММА МУ НЯМУВА І Худ и ТК Я ми пемхіщевия «ацое ЗЕ до тлу За сю МІК ях 23 у вус Ме око беж Мі щооищі Жухіх бо ах
Аве їі маї бе ЖВу пів век КО Вар Бек їм Вів ЗВУ ек фено»
Н К- 38 ї5
ГКУ ж хе тім СЕ А ЯШКех Тож хх шк ШТ ро ам тд Же ща ноу а ки а них ів вен СУ БУ ет ех Бе БаБЄ без ем Бе миє мой як щ; хі КУ Кк й сиг, яко ши М охушю шу їсуля Ж обо муя Цим їмо жмх Злвущшо Жее тла тп шо тп вже Був аа жк Бех Юа жк бух ОМ БМ ву Жео БІ щі
Жюшлич іа СХ жк іже Жоачіз ши хе су ТЯ дю МУМє Що Гоща ре о Хе хе вка Кров бе їхні Ті Тех тхв зів Бак тиж да мі Бах ск Мах
КІ А Ії в Зх ве
Бо во дес бе Бех БЖУ шШес обіу Важ ку ЖХАХ Ав ОоБЕе ТВ Ббешо те
ІБ КО У на г х Турок су худ рю СК жу
З Ну ТЗ ІДУ Те СІ хх що зі Ж іо до . ХЕ МАЯ я МК ик. ке
Хіш Бах ху Ба Біб зів Фі вва ма до У коту ув та
Я ях вк 85 ща З
З з з т ; схе е Ток Пр я й сет - са тв на сі пів щі БЕК ша чні Бі ів ія пет овле дію беи йЕЗз Так ге бів вів ошіж зве ва ста Ох і їУх ла
По М Кох ії 195 як ях шву
ЕМО Ж Я жжГяМ Віа
ЕМ Шеемна песни лу
СНІ стр спри «Ех АХ ЖЕКи» й Е пло ї іт т куме пенучм їх спон рови ія сивий «иа примітка с окон шу чех рми нев і: сим
З ІНАНІЛО ЕК
Ей» В вк ак ен: й Й вк ще
Е о х тр іа піоб таї зле лу вто пі віз
У ГИ ах з. ЧИ 221 ОЗ С оОЖухе сх І х. ЗД Уа у ї УВ КОМУ КУ ІЗ пів ож біда бео Уа піп Зах КУ діа пла уг у у ЗА
Її х 15 ї5 ї і Кл х 3 г. я с ж Ум такою вх Мат су х : пев чі ето бек був ді Зеве йпіз ше таж ОБЛ ЗК Ока КУМ ек чаї пу Ущі Бек сен ув фа пек бі ве ТВ
І КІ 8 М
Ах К що х яку. ток поту сах
Кн пк у с іх тома тв фЕе тів
КК З МА вн чад ке ли о аівсвксе спі а іа ха СКК
Ужк ке МАж ЖЕ тах АКе а ахвовкО па х х. а ї й пк жи 5
КІ З їх . о и, дрож бук: х хз з : т перу ма бух бе і ба Дін
Удскя- я ес бах о й Ух БА ВштУ вити ювЖАО СФЕ В змову І сФіж Жжв тів Тук Руз Сів: ва о ВБев йвеа тТпг ох у ? У
За щк о 5 ЩО ге у рУШеЯ ку х х . зЗотбтвиЕ ет оству Щек вк дів ток г : проба ве Їфестни Вів ВЕротвк бат Тву ек Тв дів оте їжа дві вхо ча ЖВе Хфестни ві о ввр ща ок ку ЗЕ Ж й з го З 5 тип віщує тки се пах тром їв УВК тек пох Су ї х Шеє їв соАка Щек оЗін Аве же кв УЗ оту по
Ї. -Ех од чех ее хода хиМК хх дО СХ х і і. ї їжа сії їм Бех швж Її два шк х ях ї у це дя З 5 ща Е - х. Чім Ук поту в ту у ї В зе ок Чоки Ж т буУх Крок Мі шу
Я 2. се Ж ТЕ Щек Ве беж жи ше вах бух ТК Му З вла вхч дев аж ТЕЖ щБеК Ме тек УЖ ї е в
Й Не зп їх
Щ55 хо ї з чи ре ХЕ жу ПіК жЖни Бепошах Так ОоУвЕ шех Бек ж кВ БІ кам 1 «ази МіпОх «Ех Попучщдо си мана денс
Кор ня хх «15 поживну й пкт ШЖЕНИТя ву ї ж дейлідиєшеетла пидтатимиий туту йтужіхєв ії ме то ЩИХ премлЕфНіІЗХ ОІД АЖ ЛО ІМЕНЕМ «ВЕ ПСИ со оМ штучне ПО полін уМ ме «кап ка ші 5 й ц пло жи кл мч
Е - й и че сет ба діа Ущі ех Бембі 2 ї пазу бух АЖ ЇМУЄ ж Е Ух є КК с5 пі Уві Мес тТвЕ оці шек о бус АЮ обаЄ їзи АТа У З ав жі УщВа Ме тТМвЖо їм меж Бус АЖ ХЕ й га Ук - х 1 АХ
ХМ. - Е т пох з 23 - ех. їов Жау цеху І фас ум; ви див ех сін вх 5ів Тих хів ази Ст Би Беж ошек сій бяЄ вес Бен оАев БЕХ й у чх пр ха ех І
З Е кох Жак хода В тр Ук дія ів ев бра й ї- г те вто тви вк Бе бЕпочжк їз вів тю тує піз Пій бе Кко ПІ бів т , й
Зк ЕчЯ й х СУ. є соту Миска кА і їх с. г. ї Н т се ТЕР Жии ах ту дра ме дар обі А, шНХ ЕКО Бук їх; хац ста УЖЕ тхВ хм ОХ ЖБУ ДЕ Ух м МЕ у в БЕК х у сктех «шу каш їх ку ад пишу Сі Твтовдте ре вЕ їж Бе вхо во вжо Жре йеЖ Сіш Зако ех Сі ТВговат ре тиж фев 7 В ке жов же зо
ЕК Ка хни тав (ху «ех що їх щодхує т т жк вм дх зві дій Ущі пек тех Ст їли БІВ їів Бек БЕХ пе піє Бі 3 дв оуУві ДІ Уущі З жк БЕХ С ДУ. Оля чия За щи; зе зо 5 сь ї п пром мах. Мт: Мі ме вх и хіх На рук маЩї у іш пев
Бе газ бів їж; ака ТВ Ве Бі зів шаж те вує Мах КОХ ух п хУук сів : вхо Ох ВЕ
ЖЖ У дез не ве
За и Док шу тута ЖЕ дія лиш ШАТИ Х
ЕІ ЦуучнА ПОСИЛ ЬНОВМНОСТЕ ких «ВКА дЖери й | : почи я сша очної пивлінавинесві: сдуихетизний «ШЕ суміш жа с Ос штечної посблідевнокті: сбимтетиУний
ТММ УИКМх чапшам ві ниж : їдї ов о бевиа МВ їм пек ху ші О31У їм ЖДЕ ОМів БкО бі БІх
Зам Маі жав вец Ма Ооа Бек жі щі у г МД Е ту У . СЯ її 5 щ- : їх. г сг. су 3 Жук ї5у тк дк, Тоні Кк ут яв вій чну і Жук бак жін ТЗ пію жук аж їм) ВУ ви ща Су іа Вій ме спіуУ Жук озК Ера жо мАаД ху гг сах за
М хх од дж де АК : дути кю жомета «їх їм а ух а,
Жовк Ме два Тк УВІ джт ак овха Рус ху ув ою і; бу жур ме
Що м КО Й й сх г
З 35 5 : У У ям Уа: х Х их тех мі Яну ВУ Зі хх ту з осуУУх, ее кю. УЖ. ху. Те. ех іще з г. 533 ее Туші КМЗ ів їсгах ті два ВО тух ув сіж Уві цес твх Тех Аве опа Луже
ЩО цк щу у х. х я : їх «5 вх КЗ ку
Жов ; А гу фа стру ща в-5 бе да їв ви отТви ВІ пух
Муз вкроджч Ве Жак Ха Жак тек Ав Бу вах Був лю ї: ТУ :5 їй ІВ Б
ОЗ КК. а і : т Кік Ядщ кп діє Бім Аве тну Віа Зі Чую фук св еп сів ща Заоа Зекх Беа Акш ой Ба ЗЕ тВву Ха УщУ ЖуУх ї У ХО ск Кох : ча Зо Ж з шх г о тсую УК я ЩО вух «ха лк: Жуки теж то піс дей дату дух трУж рук КБУ Ав» Уві ТЕ ві вхо Бех пу Теж ТУ Бу вва Бех АнурУ ТЕТ ГУ й ще те З
У ах 1
М БК: 118 зАВНЕ У Ті зх сі тм Же іх Ю.О у у. тіж хів Зі ВХ Бер ві ТИ чав Бех пЕу ке ту
ІК тео «ШНМ и
Ім ВЕ
НЕ ЧУ тиці 7 парк ДЛ ху кві Вілож вл А Ач сини
КК КБУ ТЕМУ ЛЕНІ КМ ча ши Ж «ВИТ джеми «ей примі тже о жІжехУ дикУухинох нон всвниїї ширини
ТОМІ ТУВМИХх ож Ек. зу «ІННУ» ва х х п хм є в уд фун ла сиди Тож дак ж повзає ху хх вве» їі Бім Ме жЖАЮ а мех ККО ес беж бе ех біз бак Ущі щіу а й зх їх ке 5 хх я йагч щлч хв и Б Чет цк юкач І Шк УТ х од дкї ду ча
Авровту Мах их 18 твЕ се ака Віа Бек ців ява їів Ак дж тех зт ЗЕ ла хм З В тод х Мне тла ух й сожхсхо фіни ШУ хе Ж Туди Хо з ША ххх це Ав Те бух см біт Бк БкО щі БЖ Ат же жа зб пе їж з5 ах Би що я пткиїе сюрує Мф ує ху В усе сот сс ік т жене бу Ж вна бе хе
Тух Тук ТЕ оех дк бо зі озеж Зі Уві бтБ Бех Аа Ре Бек Бім : ки дк ми ї3їхк сива й сто у У М Ж М ем ух Темі ж ее
Бек БЖ Бак очію тик Аве теж ЖЕ ей Жах бе мет шаг емо ах те
Б НУ 2 ЩЕ
З схбу УМХ їж ба бу руч их и Р ях дер свою фор Жах м
Бі же ле доб такотТее ТЕЖ ду ів ов сля да ти бем яна Тир
У 1 вч шк Чо ШОУ поко ам РУХ я У я т жуки ко чо и Ху Ж че Ват 5 ша ше Жак МЕ МЕ хм ех ТУХ З в Км ше БУ пащі -авухм і жи МАК
Как Зах щі фриз В втік ке
Ж Цмин после внА ше рук жан ори тік т таж ЛЖВ пет К: їй х. хх «ж, зт вия. жи у жив ЄМ суха «ЕЕ Кр тю ж жи ПЕВ Х МОЛЬ А Пане
МІВірЕнлух
БХТьВ ту. «НІМ ка хв ди я ди жи сфужух пі іх. бус Ж ху шкі Ж у схе МУ дів дк же за лЕрозУє! тТЕЖЕ Ах Ав окКує МУ Ж жежЖ іл сор Мах
К не ЗЕ 3 З А ке поміч товщ ще ел суку
Кф ії5 тжв ік Зеу чиіп ка ки Штучна слі овні ик «Ві пере «Кай люриміска ж «СНІМЄ штучноах послідовні сире вачний «аа» 84 діа Був йек біз Во фе) бук ке а» то був пі пек ойіва сш Щек ака лів тк ошщівй щеж

Claims (90)

ФОРМУЛА ВИНАХОДУ
1. Виділене антитіло до СЮО79Б, яке містить СЮО79р-зв'язуючий домен, що містить наступні шість гіперваріабельних ділянок (НУК): (а) НУВ-НІ, що містить амінокислотну послідовність зЗЕО ІЮ МО: 5; (б) НУВ-Н2, що містить амінокислотну послідовність зЗЕО ІЮ МО: 8; (с) НУВ-НЗ, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮО МО: 9; (а) НУВ-11, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО: 10; (є) НУВ-12, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО: 11; і (У НУВ-І3, що містить амінокислотну послідовність зЗЕО ІЮ МО: 12.
2. Антитіло до СЮО79Б за п. 1, яке відрізняється тим, що СОЮ79р-зв'язуючий домен містить наступні шість НМЕ: (а) НУВ-НІ, що містить амінокислотну послідовність зЗЕО ІЮ МО: 3; (б) НУВ-Н2, що містить амінокислотну послідовність зЗЕО ІЮ МО: 6; (с) НУВ-НЗ, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮО МО: 9; (а) НУВ-11, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО: 10; (є) НУВ-12, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО: 11; і (У НУВ-І3, що містить амінокислотну послідовність зЗЕО ІЮ МО: 12.
З. Антитіло до СЮО79Б за п. 1, яке відрізняється тим, що СО79Б-зв'язуючий домен містить наступні шість НМЕ: (а) НУВ-НІ, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО: 4; (б) НУВ-Н2, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО: 7; (с) НМА-НЗ, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО: 9; (а) НУВ-11, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО: 10; (є) НУВ-12, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО: 11; і (У НУВ-І3, що містить амінокислотну послідовність зЗЕО ІЮ МО: 12.
4. Антитіло до СО79БЬ за п. 2, яке відрізняється тим, що містить (а) послідовність УН, що має щонайменше 95 95 ідентичність послідовності з амінокислотною послідовністю ЗЕО ІЮО МО: 17, 21, 23, 25, 27 або 29; (б) послідовність МІ, що має щонайменше 95 95 ідентичність послідовності з амінокислотною послідовністю 5ЕО ІЮО МО: 18, 22, 24, 26, 28 або 30; або (в) послідовність МН, як в (а), і послідовність МІ, як в (Б).
5. Антитіло до СЮ79БЬ за будь-яким із пп. 3-4, яке містить послідовність МН ЗЕО ІЮО МО: 17, 21, 23, 25,27 і 29.
6. Антитіло до СЮО79Б за будь-яким із пп. 3-5, яке містить послідовність МІ 5ЕО ІО МО: 18, 22, 24, 26, 28 або 30.
7. Антитіло до СЮО79Б за п. 3, яке відрізняється тим, що містить (а) послідовність МН, що має щонайменше 95 95 ідентичність послідовності з амінокислотною послідовністю 5ЕО ІЮО МО: 19; (Б) послідовність М, що має щонайменше 95 95 ідентичність послідовності з амінокислотною послідовністю 5ЕО ІЮ МО: 20; або (с) послідовність МН, описану в (а), і послідовність МІ, описану в (Б).
8. Антитіло до СЮО79Б за будь-яким із пп. З або п. 7, яке містить послідовність МН 5ЕО ІЮ МО: 19.
9. Антитіло до СЮО79Б за будь-яким із пп. З або 7-8, яке містить послідовність МІ ЗЕО ІЮ МО: 20.
10. Антитіло до СЮО79Б за будь-яким із пп. 1-9, яке відрізняється тим, що СО79р-зв'язуючий домен зв'язується з БЕО ІЮ МО: 63.
11. Антитіло до СЮО79БЬ за будь-яким із пп. 1-10, яке відрізняється тим, що СО79р-зв'язуючий домен зв'язується із СЮО79р людини із Ка менш ніж близько 25 нМ для двовалентного антитіла з двома плечима Ідс, наприклад, менш ніж близько будь-якого з 10 нМ або 5 нМ.
12. Антитіло за будь-яким із пп. 1-11, яке відрізняється тим, що СЮ79р-зв'язуючий домен, який зв'язується із СО79Б людини, зв'язується з В-клітиною із ЕС5о менше 1,5 мкг/мл в одновалентному форматі, наприклад, менш ніж близько 1 мкг/мл, 0,75 мкг/мл, 0,5 мкг/мл або менш ніж 0,25 мкг/мл.
13. Антитіло до СОЮО79р за будь-яким із пп. 1-12, яке відрізняється тим, що антитіло до СЮО79р є моноклональним, людським, гуманізованим або химерним антитілом.
14. Антитіло до СОЮО79р за будь-яким із пп. 1-13, яке відрізняється тим, що антитіло до СЮО79р є антитілом Ід.
15. Антитіло до СОЮО79р за будь-яким із пп. 1-14, яке відрізняється тим, що антитіло до СЮО79р є фрагментом антитіла, який зв'язується із СЮО79р.
16. Антитіло до СЮО79Б за п. 15, яке відрізняється тим, що фрагмент антитіла до СЮО79Б являє собою Раб, Баб'-5Н, Ем, зсЕм та/або (Баб)г2 фрагмент.
17. Антитіло до СОЮО79р за будь-яким із пп. 1-14, яке відрізняється тим, що антитіло до СЮО79р є повнорозмірним антитілом.
18. Антитіло до СЮО79БЬ за будь-яким із пп. 1-17, яке відрізняється тим, що антитіло до СЮО79р містить мутацію сайта аглікозилування.
19. Антитіло до СЮО79Б за п. 18, яке відрізняється тим, що мутація сайта аглікозилування є мутацією із заміною.
20. Антитіло до СЮО79БЬ за будь-яким із пп. 1-19, яке відрізняється тим, що антитіло до СЮО79р має знижену ефекторну функцію.
21. Антитіло до СЮО79БЬ за будь-яким із пп. 1-20, яке відрізняється тим, що антитіло до СЮО79р містить мутацію із заміною по амінокислотному залишку М297, І 234, 1235 та/або 0265 згідно нумерації ЄС.
22. Антитіло до СО79БЬ за п. 21, яке відрізняється тим, що мутація із заміною вибрана із групи, що складається з М2970, М297А, І 234А і І 235А або 0265А, згідно нумерації ЄС.
23. Антитіло до СЮО79Б за п. 21, яке відрізняється тим, що антитіло містить мутацію із заміною М2976 по амінокислотному залишку 297 згідно нумерації ЄС.
24. Антитіло до СО79р за будь-яким із пп. 1-23, яке відрізняється тим, що антитіло до СЮО79р є моноспецифічним антитілом (наприклад, двовалентне антитіло з двома плечима).
25. Антитіло до СО79р за будь-яким із пп. 1-23, яке відрізняється тим, що антитіло до СЮО79р є поліспецифічним антитілом.
26. Антитіло до СЮ79Б за п. 25, яке відрізняється тим, що поліспецифічне антитіло містить СОЗ-зв'язуючий домен.
27. Антитіло до СОЮО79Б за п. 26, яке відрізняється тим, що СОЗ-зв'язуючий домен зв'язується з поліпептидом СОЗ людини або поліпептидом СОЗ яванського макака (супо).
28. Антитіло до СО79Б за п. 27, яке відрізняється тим, що поліпептид СОЗ людини або поліпептид СОЗ яванського макака є поліпептгидом СОЗє людини або поліпепгидом СОЗє яванського макака, відповідно.
29. Антитіло до СО79Б за п. 27, яке відрізняється тим, що поліпептид СОЗ людини або поліпептид СОЗ яванського макака є поліпептидом СОЗу людини або поліпептидом СОЗу яванського макака, відповідно.
30. Антитіло до СО79Б за будь-яким із пп. 26-29, яке відрізняється тим, що СОЗ-зв'язуючий домен містить наступні шість НМЕ: (а) НУВ-НІ, що містить амінокислотну послідовність зЗЕО ІЮ МО: 45; БО (б) НУВ-Н2, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮО МО: 46; (с) НМА-НЗ, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО: 47; (а) НУВ-11, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО: 48; (є) НУВ-12, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО: 49; і (У НУВ-І3, що містить амінокислотну послідовність зЗЕО ІЮ МО: 50.
31. Антитіло до СО79Б за будь-яким із пп. 26-30, яке відрізняється тим, що СОЗ-зв'язуючий домен містить (а) послідовність МН, що має щонайменше 95 95 ідентичність послідовності з амінокислотною послідовністю ЗЕО ІЮ МО: 59; (Б) послідовність МІ, що має щонайменше 95 95 ідентичність послідовності з амінокислотною послідовністю ЗЕО ІЮ МО: 60; або (с) послідовність МН, описану в (а), і послідовність МІ, описану в (Б).
32. Антитіло до СО79Б за будь-яким із пп. 26-31, яке відрізняється тим, що СОЗ-зв'язуючий домен містить послідовність УН, наведену у ЗЕО ІЮ МО: 59.
33. Антитіло до СЮО79Б за будь-яким із пп. 26-32, яке відрізняється тим, що СОЗ-зв'язуючий домен містить послідовність МІ, наведену у ЗЕО ІЮ МО: 60.
34. Антитіло до СО79Б за будь-яким із пп. 26-29, яке відрізняється тим, що СОЗ-зв'язуючий домен містить наступні шість НМЕ: (а) НУВ-НІ, що містить амінокислотну послідовність зЗЕО ІЮ МО: 39; (б) НУВ-Н2, що містить амінокислотну послідовність зЗЕО ІЮ МО: 40; (с) НМА-НЗ, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО: 41; (а) НУВ-11, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО: 42; (є) НУВ-12, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО: 43; і (У НУВ-І3, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО: 44.
35. Антитіло до СЮО79БЬ за будь-яким із пп. 26-29 або п. 34, яке відрізняється тим, що СОЗ3- зв'язуючий домен містить (а) послідовність МН, що має щонайменше 95 595 ідентичність послідовності з амінокислотною послідовністю ЗЕО ОО МО: 57; (Б) послідовність МІ, що має щонайменше 95 95 ідентичність послідовності з амінокислотною послідовністю ЗЕО ІО МО: 58; або (с) послідовність УН, описану в (а), і послідовність МІ, описану в (Б).
36. Антитіло до СЮО79БЬ за будь-яким із пп. 26-29 або пп. 34-35, яке відрізняється тим, що СОЗ3- зв'язуючий домен містить послідовність УН, наведену у ЗЕО ІО МО: 57.
37. Антитіло до СЮО79БЬ за будь-яким із пп. 26-29 або пп. 34-36, яке відрізняється тим, що СОЗ3- зв'язуючий домен містить послідовність МІ, наведену у ЗЕО ІЮ МО: 58.
38. Антитіло до СО79Б за будь-яким із пп. 26-29, яке відрізняється тим, що СОЗ-зв'язуючий домен містить наступні шість НМЕ. (а) НУВ-НІ, що містить амінокислотну послідовність зЗЕО ІЮ МО: 51; (б) НУВ-Н2, що містить амінокислотну послідовність зЗЕО ІЮ МО: 52; (с) НМА-НЗ, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮО МО: 53; (а) НУВ-11, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО: 54; (є) НМЕА-12, що містить амінокислотну послідовність зХЕО ІЮ МО: 55; і Ко) (У НУВ-І3, що містить амінокислотну послідовність зЗЕО ІЮ МО: 56.
39 Антитіло до СЮО79Б за будь-яким із пп. 26-29 або п. 38, яке відрізняється тим, що СОЗ3- зв'язуючий домен містить (а) послідовність МН, що має щонайменше 95 595 ідентичність послідовності з амінокислотною послідовністю ЗЕО ІО МО: 61; (Б) послідовність МІ, що має щонайменше 95 95 ідентичність послідовності з амінокислотною послідовністю ЗЕО ІО МО: 62; або (с) послідовність УН, описану в (а), і послідовність МІ, описану в (б).
40. Антитіло до СЮО79БЬ за будь-яким із пп. 26-29 або пп. 38-39, яке відрізняється тим, що СОЗ- зв'язуючий домен містить послідовність УН, наведену у ЗЕО ІЮО МО: 61.
41. Антитіло до СЮО79БЬ за будь-яким із пп. 26-29 або пп. 38-40, яке відрізняється тим, що СОЗ- зв'язуючий домен містить послідовність МІ, наведену у ЗЕО ІЮ МО: 62.
42. Антитіло до СЮО79Б за будь-яким із пп. 25-41, яке відрізняється тим, що поліспецифічне антитіло є біспецифічним антитілом.
43. Антитіло до СЮО79р за будь-яким із пп. 25-42, яке відрізняється тим, що антитіло до СЮО79р спричиняє загибель В-клітин з ЕСво менш ніж близько 100 нг/мл.
44. Антитіло до СО79Б за п. 43, яке відрізняється тим, що загибель В-клітин є загибеллю ендогенних В-клітин або загибеллю лінії В-клітин, наприклад клітинної лінії ВУОАВ, клітинної лінії МУ5И-СІ СІ 2, клітинної лінії ОСІ-Ї у-19.
45. Антитіло до СЮО79р за будь-яким із пп. 25-44, яке відрізняється тим, що антитіло до СЮО79р спричиняє активацію цитотоксичних Т-клітин із ЕСхо менш ніж близько 50 нг/мл.
46. Антитіло до СЮО79БЬ за будь-яким із пп. 26-45, яке відрізняється тим, що (а) СОЗ-зв'язуючий домен містить домен Ес, причому домен Ес містить мутації із заміною 73665, І З68А, У407М і МмМ297 згідно нумерації ЄС, і (5) СО79р-зв'язуючий домен містить домен Ес, причому домен Ес містить мутації із заміною ТЗ36бУМ і М2970 згідно нумерації ЄС.
47. Виділена нуклеїнова кислота, що кодує антитіло до СО79Б за будь-яким із пп. 1-46.
48. Вектор, що містить виділену нуклеїнову кислоту за п. 47.
49. Клітина-хазяїн, що містить вектор за п. 48.
50. Спосіб одержання антитіла до СО79БЬ за будь-яким із пп. 1-46, який включає культивування клітини-хазяїна за п. 49 у поживному середовищі.
51. Імунокон'югат, що містить антитіло до СЮО79р за будь-яким із пп. 1-46 і цитотоксичний агент.
52. Фармацевтична композиція, що містить антитіло до СО79Б за будь-яким із пп. 1-46. бо
53. Антитіло до СЮО79БЬ за будь-яким із пп. 1-46 для застосування як лікарського засобу.
54. Антитіло до СО79Б за будь-яким із пп. 1-46 для застосування з метою лікування або сповільнення прогресування В-клітинного проліферативного розладу або аутоїмунного розладу у суб'єкта, який потребує цього.
55. Антитіло до СЮО79БЬ за будь-яким із пп. 1-46 для застосування з метою покращення імунної функції у суб'єкта з розладом проліферації В-клітин або аутоїмунним захворюванням.
56. Антитіло до СЮ79Б за будь-яким із пп. 54-55, яке відрізняється тим, що розлад проліферації В-клітин є раком.
57. Антитіло до СЮ79Б за будь-яким із пп. 54-56, яке відрізняється тим, що розлад проліферації В-клітин являє собою лімфому, неходжкінську лімфому (НХЛ), агресивну НХЛ, рецидивуючу агресивну НХЛ, рецидивуючу сповільнену НХЛ, рефрактерну НХЛ, рефрактерну сповільнену НХЛ, хронічний лімфоцитарний лейкоз (ХЛЛ), дрібноклітинну лімфоцитарну лімфому, лейкоз, волосатоклітинний лейкоз (ВКЛ), гострий лімфоцитарний лейкоз (ГЛЛ) та/або мантійноклітинну лімфому.
58. Застосування антитіла до СЮО79Б за будь-яким із пп. 1-46 у виробництві лікарського засобу для лікування або сповільнення прогресування розладу клітинної проліферації або аутоїмунного захворювання.
59. Застосування антитіла до СЮО79р за будь-яким із пп. 1-46 у виробництві лікарського засобу для покращення імунної функції у суб'єкта з порушенням клітинної проліферації або аутоїмунним захворюванням.
60. Застосування за будь-яким із пп. 58-59, де порушення клітинної проліферації є раком.
61. Застосування за будь-яким із пп. 58-60, де розлад проліферації В-клітин являє собою лімфому, НХЛ, агресивну НХЛ, рецидивуючу агресивну НХЛ, рецидивуючу сповільнену НХЛ, рефрактерну НХЛ, рефрактерну сповільнену НХЛ, ХЛЛ, дрібноклітинну лімфоцитарну лімфому, лейкоз, ВКЛ, ГЛЛ та/або мантійноклітинну лімфому.
62. Спосіб лікування або уповільнення прогресування розладу клітинної проліферації або аутоїмунного розладу у суб'єкта, який потребує цього, причому спосіб включає введення суб'єкту антитіла до СЮО79БЬ за будь-яким із пп. 1-46.
63. Спосіб підсилення імунної функції у суб'єкта з порушенням клітинної проліферації або аутоїмунним розладом, який включає введення суб'єкту ефективної кількості антитіла до СЮО79р Ко) за будь-яким із пп. 1-46.
64. Спосіб за будь-яким із пп. 62-63, який відрізняється тим, що порушення клітинної проліферації є раком.
65. Спосіб за будь-яким із пп. 62-64, який відрізняється тим, що розлад проліферації В-клітин являє собою лімфому, НХЛ, агресивну НХЛ, рецидивуючу агресивну НХЛ, рецидивуючу сповільнену НХЛ, рефрактерну НХЛ, рефрактерну сповільнену НХЛ, ХЛЛ, дрібноклітинну лімфоцитарну лімфому, лейкоз, ВКЛ, ГЛЛ та/або мантійноклітинну лімфому.
66. Спосіб за будь-яким із пп. 62-65, що додатково включає введення суб'єкту антагоніста зв'язування по осі РО-1 або додаткового терапевтичного агента.
67. Спосіб за будь-яким із пп. 62-66, що додатково включає введення суб'єкту глюкокортикоїду.
68. Спосіб за п. 67, який відрізняється тим, що глюкокортикоїд є дексаметазоном.
69. Спосіб за будь-яким із пп. 62-68, що додатково включає введення суб'єкту ритуксимабу.
1009. нн А ВАП(ЗМВУСВЮСНТІМВ) во4 7 ВП (ЗМалемСНтіМВ) -7 ВВП (ЗЕ2ЛОСНТ1хВ) Ж во Ех м 40 у ГІ кі ща 85 20 / а й я ЕВ; й сл ие жани й де - Ме В ще уче цк фур тт ще
0.04 1 100 10000 нгми ФА е- ВАГЗМВУ2ВЄНТТУВ) во «й ВЯГ(ЗМВЛеМИЮСНтТІМВ) ОД ВапізЕ2сСНт хв) Фо во
Не. в : г 5 мо рій ще щЩ що в я ш денс КА не ра ча с шк НН нин
0.04 1 100 10000 нг/мл г В
-- Бюлер (СО79Б ЕБЛІСНІУ9) т «й - Білаб (СО796АТЛІСНТ УЗ) ЕОО801 1473- вапузмвугвлєнтіхв) шо 70 ода в га 4 що бо х й З до - : А ва шо 30 , "п о ""иа/ що 70 : і Е ЖК 4 го чо- ш ЩЕ се вв ; г в стае ВИ 5 Ж 0 о де -10
0.01 1 100 10000 нг/мп г С
Е во. ай т 793 У 2 во. в ФО 504 Н зо. я ШО 205 з Я с 104 ов нефенн Віо-таВ (СО79Б.АТЛОСНТ ХВ) Ки | хизнилч и ще о ообурееенттттттттяттититтттттттт тат ттттяттттяттиттнкт няня 001 о 1 10 100 3000 10000 нгіми ФГ А мя ОО - шо 18 ее? Ре 464 я я | ві вола ц о 124 Ей С ії 4 85 Я о Я о Кі неофрчни Біс-ТаВ (СО796.АТЛІСНТ ХВ) од Кі нори чор пивна нава вивів ванни
5. а | Фон 5 да ві 1 10 100 3000 10000 нг/мл г еВ
80 г бо е ФІ 40 й ЖИ Ф
520. 7 В о ни я -а ' пф БіТаЮ (СОТ9р.АТОСНТМО)) ге ее і -30
0.04 пі 1 10 100 3000 шімп Фіг ес Его а Га Десни ж 18 и ве Фе 8 - (165 я і) г 14 2 в 10 а Б 8 Я с Я 8 Ф 7 я і 22 - пнфен Біютао (СО79БАТОСНТУВ)) о жк я чі до ЕЙ: по 04 1 10 100 1000 нг/ми ФІГ 2
«ев ВП (ЗМВУ2ВСНТІМВ) 3 401) -- ВАГ (ЗМапем уСНт мо) -й-ВАП(БОСНТІУВ С. -р-антисОт9в 2Е2 | дея ЗО р 9 2о / ря Ка й ші й но 468 ра . а ,а Що ще вн до я сс сину сети о
0.01 01 і 10 мкг/мл ФІГ ЗА вооі ен ВАП(ВМЕУОВЮСНТМО) сін Біс-тар (СОТ9В.ЕБ/ЛОСНТ 18) Мо М-- «анти СО79в ЕВ ри ій воб3 7 Віс-ар(СОТ9вАТСНТІТУВІ М дп 1 -5р-антСО79Б А / ш 9 / 6 лоо- ія 2500 / / т / ; 200 У /й м Ж ш! М зк й, вл 1 10 100 т000 30000 1о00О0о антитіло (нг/мл)
ФГ. ЗВ й іч ; Н - Ку нм ВВ (СО7965.А? м14/40О5с) 3400 пуд у я 4 нене днти-СІЗ796.АТ Я ше дн Я Як-то "у 1200 Б сю Б З г Ка й в й в 3000 я а / ї й 7 8 800 / Е тк г Я 500 "-: Я ад ще я я хе ще й я Є Ов й У осссссой Я похо ес м А 04 1 10 100 1000 106000 7100000 - ц ; ТЗБ нг/мл) ФІГ Зо ,; « сСнщИЯ НИ сг А "ФА миті ї ї у , Кк - І БУВР, АЙ Вавіабеальна ділянка важкого памцюна седхктии ООН РОН мне Нумеремо жи 32345575 рБипнмМм п міжшМмшІм мо мм м ми ю юНІ ЕВ: У ХЕ 559 КхУ2хАВ 325551: 15593:85и5 кс ЕВ НЕ НЕ М УНЕ ЕН ВДЕ З В ЗЕ З М ХЕ В а м НВ В У ЕВ СооАІімЯ їх 929052 АЕХУ 68 5КУВСЕ ВЕ МУАКУУХхок сПіоВАТУ МВ ВЗ 35505035 хх авт кт ОТ хви хв УК ти НДУ нн 1 СбвАЇ 8729052 АВ т кВ; хтв га сітуІЖИАНИ;яог НИ ї М пруамАту КЗ х55 АХ хх бак УЗ тт тт» НИ і сомеАтн 875080 АВ т кв УхтТискАВаУ ХР тТІУІхИАЕНКХУяХхХ З пе вт кн ЗО В В В З М М В В ВЕ ЗЕ В В З НУ ТІВ ххх сова 27:55 3538 7 8 хатку ХІвнинтухх ФН Яд
: с ення БошшШШ22020 МЕЖ і ПМК учня пен МЛ КВВ Н ШИ | г гаку пра Нумерація за Майлі 4344 415 ши: ВЗ ше жі 434 Вами пів і 15475583 55 515 та ОМ УЮ зни коні дак кни нипимикнн Ккал М ик к ГКУ . пили ПА ' їчУІ щ 15 хі1к 585: ділах устьтіт СБВАХ 55 ПЕ т о ТВ т кН З НЕ НЕ Я ел ту» АХ 55 1ПЦЕ т ста РП ЕВ да нен я ха бо т ЖЕ РОГЕТЕСЕ СЯ те о СТЕ СоРмаАатУ вих «ікфіію в ЕВЕР ВР ЙО ВЕВІК Ж КВТ поті нів егоп А їх м і Вів: віх вої вів ті ЗЕ ТЕТЖТЕ ВІ Пе ІБР шик ке р Де В Іра вух В « жі шві іє віці ві НЕЕНЕИКНЕКРНЕЖЕН й. сповввуанян бе таКІСІВІ в БИ віжівр тів фін віх БІ РУ ГЕУТВРВІВІ З 2 я кВ ТК АЖ топік тів: ! івсфінтіх ТЕТ ТІ? -3 р а ЕОжЮЮ Сп А що зіжртівр у ів в хх, мими а ИН пет атататкх Н сова етоттвнииь Е пев еко ват МЕН 8757 со ти й талію ох»; Ті ік кт БО ВІЛ? Піт лак та м сртовАТУВ ФлекжІФВВ ПО 5 віх різ в ери вх и НО сова ке. в оя каві тіж РЕЯ ФІЖІАІТІМ Ті 3 85 ЗЕ СОТОБАТ УТ звізжхпівлій ті й ЗБИВ КУ ЕНН вікі ім Півня сії крук Кт зх еінізіві г ік в в віхою ті НЕК тр хіх Віка Е ще СОтБАТУЮ пп їккі НН нм М 5 ВІТ ТІК ФІВЕВІХ ДИН: ІХІЧрВря хат ять ок повин вии ІПТ ІВ ФІВЕІХ ФіБіІВІ Тіт НА тати сов 08 18 іга в вах тру ою, ІІІ іт, АТМ з їв ж І вікі тів рії щей БЕН НЕЯ БИ вівізітї х хів зт її чів віз з в тів гін о ія; Н ЕК тІхі В т я їн АХ х в'я вт; ІФ ВІВ віхою оі 215155 статі, кві "Піг іо ззвгататькі щі У м ПН і Каву о На От СЛ, ше МЕТКИ Муюерація за Каца ХД ВЛя 8 85 ВЕ винен яко ЖІ ще 8: В Ва щі м я ех КД Ве ВІ 85 85 КОЖ ВА Я 55 МО один коні окиве 7 ВК як 5 ФІ 5) ЗІ со ЗБ 0 ХО учУМмцх ху п таку вовк ЗОНУ ме це ВЕ ОБРА ко й ве т Кох п їз Кк ул нене с - Іра БЕ ОА т її: ІтЖУ в ГКУ хатах сон ку хо й НЕ ТЯ Ж КІКЕКІВ 5 Ж г х їх 5 со | приво вишиванок по пев п? зу х півні КК А ТЕХ 5 «жк вт т ее вії: гоу тів: кої: з ля : х те сівівів Н т я за не ИН З З МН хх 5 5 - хз как ктуутНх кт ге - кп зд ху хх пііві: Н м пана я СпвАТНА хх А Ж У ХХ ПІН ЕІВ х ХА т: Ех 5 ши п и ни ВИ У ст іт: си: Пер узттесіввві Н з Вк хх її т 5 о ОВ й У СВІЖІ 5 5 тк б о: т ж В 8 со : ува ши Ті : м Б х т и Б ту Я л. СОТ АТ УО Б ва У ХІІІ і гії Зо ВИ ЗМ НЕ А ка три я я з 1 ка жхатаг» ема о п ПН : зу й хз. ее Ін ни НН ЗЕ НЯ ТБ 5 Н и в СовАТУМ ств Ж ІБР КІя ХХ ГУЧНІ нн ни НКУ с ії иптоватттсвкі тот ват 5 тіж г ок и не Б КА ах ЗЕ и ІН и
ФГ. з й - « У х 1 й : ВГ. В е зе 7 хв, с ГУ Кк г 7 ще х ТВОЯ, Кожне я : ЕН МАШИН діяча легкого й Іа лег Кого паНциНе ко панцина дня сна Нукеуеця ж для ТИМ кру МЕМ і ваші ті, нн о ізн г ее нок ни ї кон н : М г кош їй вхо хх І І их м 1: ХЕ й ших ще п у Щ М 53 5 й х виодАнА мокко ІЕМ Ж І ХЕ ЕТ ТВ її ки. тпимаду ІЛ ЕУмЕЕ МОНЕ ВЕ НН дохо ох яиительреВих зетеАУ Затв хї7551:3::355:5 1 вит ВИВНнВВНКМВ чужу я 7 м ка І ОО со ТУ ; В Ох КУ х У З х стік мовах ма 21555 МІ: о АВ ЕТ я ііі: зе ма 21535555 МУ 38:52:52: "тт ни й хт53ї5АкхЗ с: і 3 8 пл га шви спаду ставо й "її ккіІЗз2:23255:1 НІ 2 8 Б 0 ЖЕ Бім (и СПАче Анна ПІК т 5585551 «іхкіх їх Й І х МЕМ Е У МЕТ чужу з хТк 0723 688785 х3сНІх А ШЕУ ЕЯ зиетіюиих Молю я хх вах: 5 ИН хх їв: а відвіз т хів Н суда ФУ вто сг 5515253 РО ІТ Т ів ких рт Й - лих 7 тхір ЗІБ В охо х 3 «їжі? їх фі хїУ3 1чТІч: ум дкні вт хутзттзао25хЕКІ в Б пок ом иііж у МІ ВІМ ПОТ АЇ чі піз: зх: 255І15с2Ні: 50,1 і МК МНЕ ТУГУ У нії пт ":.:: хів: ІК я о а зії ЕНН сей ЗУ тсгвгз3заваАв:шкНІЇ З хо ІФІВЕ В т ЦІВ «іх Б; хх 4 Й | | вхо со шШезтіт хв? 1 Ж БІК З 8 Моє їі х хі кі Н хіх ХІіІМ СКЗ: АТА БІК Б зви; з хх во ВМ еНіх У ІВ в пев АТ І их 22551521: 5:35 РОБІН У БЕЗЕ теки 228 5:355:2 ск вд до охо з іа ве: сома ати: 8і хі в: 555: 17 1 5 ох ПР З Іа НІ х сікіж ИЙ горда: віти ті вих "За ха8: 53553 піт іниа лив ХігКхз2зкц25:ї А ххх іа мені тів ці Бах х еіміх ЇХ ХО БХІ МІХ У МІВРЕЖІМ: ші 55,1. ЕІ БРЕБУ У БИЖІМ ціка я в ов а вах ви : х Ці з дії» т хі жі 18 ЦИ БІТ ТТ МІК я Гени
ЧУГ. яв круту києх ВВЕ пвЗ вив внианивспавкиамипвеивми мими м ка ага ххх 05ВХІК УВУ тех КІВ ЕН т ДЕН В З М ВЕ З В В В В КЗ ЗК З В І М В ВЕ ВЕ В Оптведтіяо ВВ БІК «8: ато кт: 5258: сотмевАтенЕ вх ві ОВ: іо» ка 5 УКХ МОТУВАТМЕО У Ж Б ФУ вІВТЬ Я вія ї їх ї ВІВ З ЕВ ЕЕ З Ве ВЕ В ПН З НЕ ЗНЗ ЕМО В ЕЕ ІІ» о 5ЕР оо атятВкІвхх СОН Нусмецекхна і ож Мми не ши вм я м Би НЕВІМ М УВО ся 3 їх: зт 4 мя їв ах її Уж ОО АХ я й ЗО ох т ІБ БІТ: з ЩІ кос Пра з Кк ПО ях псотоватя хх хг ВУ т ко ТЕМІ а кову вх СОМПОАТНЮ 5 Ж зт 8 5 хх ФВ ВІК З віз ко ваз кв пОтжАРН Х в вт РУ ЦО ТІВ В Не 2 5 вх 5 т хх сова їх хо т 3 у хх гііа ік о х кір з ії т хз кт ботавАтй хх жит у сом ві ув в фо в т х м хх їх з : Нав АгУЄ А В вх я ток х СІЗО 2 ВІВ В КИТ 8 в хв Б т в 5 х ФГ Я Ху мож
704 о ВЕПИСОТОВ АТ УМО) х во- ТТ ВАПИ(СОТ9В.
А? У 14/3ВЕУ) в я и З 40 / о 20 / о щоОло А о Го о ра ЩО вк ж, І и ни ин а цк о бо о Ф З ще 0 о -20 0 1 10 100 1000 10000 нгімли ФІГ БА Ж 404 о ВаП(СОТОЮ.
А м14/4005с) гг -- ВЯП СО79Б АТ м 14/ЗВЕЯМ) г 35 ре ни з с 304 7 с 25 / Фо 20 / «3 і 154 / се / с / с 10 в хх / 554 ра тая 1 10 100 1000 10000 нг/мл ФГ 5
90 зе» ВОАДВ сення МУЗА ВО нн ето шо 70 Мн дн-й Е во я я м я зе Е Фо 50 У 2-40 з, Ж 30 я хо й, з і 4: о и Дня о шш- сесоддвннн Й, б су ууууттттттиттт тії с -10 - -20 01 З з1а чо 1000 10000 неМмл ФО БА Же ід їх ЄІ жо 1004 нон ВШАВ Ж водія ворс Реляд айоденнимі ю ВО- тн ще й а? о яв 715 Ка й 50 и І Я . со БО о що 40 ВАШУ, б) Й ей ще де» ж З 20 нини о мя 105 Кі Собі о 04 1 10 100 1000 10000 нгімА
ФІГ.
тео ДІАВ -к- НТ 108 нення СЗСІ-Їу-19 рей МБОЮСЬОЇ ж их уветтвсттВ х як де е Во я 77 х ке б Я З -к Я їх ВУ Моя Фа дО Ге Й "20 я А ох ря Дос увсжодутту 0 ших пининІннииннЛллжлнЛл нн ж лЛ лЛлЛ Лола лоном ваювававан -20- - 0 1 то 300 1000 т10000 вгішмл
ЯНГ. ТА с ке нк Донор МИ У ОА і І: БОМ ї ств НО т Щ ВХ я х ноя со . -- ; СК НК . Ки о М ВИК . Ге ши. СОН: Е Б МОУ СО оз т с. ВО ОХ В
Щі . ще ОХ МУ ЗВХ 3 5 ОКУ ОА У с . -кх ОО КК ЗК СКК КЕ щи ОХ ПАК . В ПК З КЕ до КЕ КК о о . їв ОН ЗБ КО о ях ШИ. с. . о о КО СУ ОА УК ВМ Ж ди МОХ ТОК ПУ 0 БО У 0 КЕМК ШИ ШЕ по 40 я еВ Б І |. ЗНИК ТК Км ОО ОО ОХ У МК ПЕ
- . ОО ТУ М ЗАСН ІК КОЖ їх КОН ХЕ СОКУ Кн ЗХ МК ОХ есХ КУ Є з . о С В М ОКО о У ; о п ЗК ХО НУ УМХ УМ У АНА ьу-Е ВО І ОО КО ЗО ЗО ШІ. МОЯ 0 ЕЕ ЩО МОН У З о 4 БО; НУ ех КО ОМ ою ох ПЕКИ КК Й НО УК КОКО УКЕУ КУ ОО КА ЗО сх о і Я ОВ МК о ДО де Ве ЖОВ МА ш С о ЗИ ВУ ЕВ У БО о ши ОО ОХ КАК СХ ЩО ОО о . щ МО 0 І щі ; п ЗК п А О хи ЕК Мен Я о У Сх пе мо С І КО й що УКХ Ок ОХ в 0 -- Кк ху ста те М ще є : : У ц ц сообчккю ! : : г їй З 3 «і й ге їй й щ о : - Зх га а й ще Кз Б Е х ві а р - 5 2 в ех я Не Ф б - Є о го ще Донор Ме й | Довною Ме Ще ОХ ЗУ
0. З жк чщІ по Б шо КЕ ОКО мя ОП Я м КУ Шо -уд х МО ЖИМ МОЗ ККУ Ух УЖЕ С . я КК У ТУЯ ХВ СО А Я же . п Ка КО СОУ ЕК КА . о г АХ УЖ у Жотх НИК ЕМ Ус 3 ша. Б ОХ ща Б Б о НО 1 вп ББОЯ ОО А КО ОК й й. . Бо БО се БО В й. с ій ш ММ ОБ МОМ КК БЕК ЛАК КК ж й ни ОБО КО ОО о М КОЖ ФУ у М Ж А ЕЛЕ КОХ ОХ ЗО о . іс щі БО Б ОО ШЕ щ ух Я ОК ПООАМІ БеКИО ВУ шо. . : їй . ш ЕК ОХ В КК КЕ БО Ж 89 ще І Ко ох АК УК КК ХК ОКХ Ко на пе а с в ЗО ШО ще п БІ й З НЯ ММ ОСЛО НИщеУ Ме КОНІ КО БО Б о ШІ Щ У с т ав. ОК КО ш ш. с
З». ЗШ В Б Хм БЖ ЩО ТЕМ ще ШК КБ ОХ ШУ КОКО АХ ККЯ ВИС Х ХВ ще ще ОО МКК МОМ 0 ВО КК ХО КО ші. й ТКА У КЕ БО о НЄ БО . . 2 ЕК КК КИ ТЕ ВО У о х С В КО нео ЩО я ш. СО БО БО ОБОХ М КВ Я п з КІ БО ТОК ему Ме ПІ ОО В З . . ї ОО ВА ГО СХ СОКІ АХ ЗБ ВУ 4д СО КО ВИ ЗОН НВ КЕ С: де І: о.
в. и Кх Кк нео ККУ ТИХІ МИХ до КМУ ЗШ іп КБ СМ 0 БОМ ОО ОО .
й. Ше БНО БО М Ко де ці | її І о Я СОКУ КК ЗО ВН, хо Коня ки М ОО вм ВИ КЕ не с ; БО БО Б Ко що БА Бо ш БЕН 0 БО п ік В СО о ча - 7 МОВ КЕ ОХ, З о о ще М Год т ЗО: ДИ ЗО Я ТО ту ки «5 7 жу що В ре ле є г З їх У х ФУ Ф ще І З ; сла А їй ен ж ни; с ОЇ ; Ні а ї ю і а: ї з ; х М жк З т з зе Х їй а - я їх в І їв хе ФГ те
UAA201705517A 2014-12-05 2015-12-04 АНТИТІЛО ДО CD79b І ЙОГО ЗАСТОСУВАННЯ UA120102C2 (uk)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201462088487P 2014-12-05 2014-12-05
PCT/US2015/063902 WO2016090210A1 (en) 2014-12-05 2015-12-04 ANTI-CD79b ANTIBODIES AND METHODS OF USE

Publications (1)

Publication Number Publication Date
UA120102C2 true UA120102C2 (uk) 2019-10-10

Family

ID=55022708

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
UAA201705517A UA120102C2 (uk) 2014-12-05 2015-12-04 АНТИТІЛО ДО CD79b І ЙОГО ЗАСТОСУВАННЯ

Country Status (34)

Country Link
US (2) US9975949B2 (uk)
EP (1) EP3227336B1 (uk)
JP (2) JP6802158B2 (uk)
KR (1) KR20170086549A (uk)
CN (1) CN107108739B (uk)
AR (1) AR102918A1 (uk)
AU (2) AU2015358325A1 (uk)
BR (1) BR112017011326A2 (uk)
CA (1) CA2966362A1 (uk)
CL (1) CL2017001408A1 (uk)
CO (1) CO2017006740A2 (uk)
CR (1) CR20170230A (uk)
DK (1) DK3227336T3 (uk)
EA (1) EA201790984A1 (uk)
ES (1) ES2744540T3 (uk)
HK (1) HK1243102A1 (uk)
HR (1) HRP20191584T1 (uk)
HU (1) HUE045216T2 (uk)
IL (1) IL251970B (uk)
LT (1) LT3227336T (uk)
MA (1) MA40938A (uk)
MX (1) MX2017007049A (uk)
MY (1) MY188799A (uk)
PE (1) PE20170953A1 (uk)
PH (1) PH12017500877B1 (uk)
PL (1) PL3227336T3 (uk)
PT (1) PT3227336T (uk)
RS (1) RS59203B1 (uk)
SG (1) SG11201704449VA (uk)
SI (1) SI3227336T1 (uk)
TW (1) TWI713480B (uk)
UA (1) UA120102C2 (uk)
WO (1) WO2016090210A1 (uk)
ZA (1) ZA201703167B (uk)

Families Citing this family (33)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
ES2579323T3 (es) 2007-07-16 2016-08-09 Genentech, Inc. Anticuerpos anti-CD79B e inmunoconjugados y métodos de uso
AU2008276128B2 (en) 2007-07-16 2013-10-10 Genentech, Inc. Humanized anti-CD79b antibodies and immunoconjugates and methods of use
CL2009000062A1 (es) 2008-01-31 2010-05-14 Genentech Inc Anticuerpo humanizado anti cd79b; con modificaciones de cisterna libre; inmunoconjugado que contiene dicho anticuerpo y una droga; polinucleotido que codifica el anticuerpo; vector, celula huesped; composicion farmaceutica y uso de dicha composicion para tratar cancer, preferentemente linfomas.
DK3736292T3 (da) 2013-12-17 2024-07-22 Genentech Inc Anti-CD3-antistoffer og fremgangsmåder til anvendelse
GB201412659D0 (en) 2014-07-16 2014-08-27 Ucb Biopharma Sprl Molecules
GB201412658D0 (en) 2014-07-16 2014-08-27 Ucb Biopharma Sprl Molecules
AR101846A1 (es) 2014-09-12 2017-01-18 Genentech Inc Anticuerpos anti-cll-1 e inmunoconjugados
EP3689910A3 (en) 2014-09-23 2020-12-02 F. Hoffmann-La Roche AG Method of using anti-cd79b immunoconjugates
AR102918A1 (es) * 2014-12-05 2017-04-05 Genentech Inc Anticuerpos anti-cd79b y métodos de uso
US10501545B2 (en) 2015-06-16 2019-12-10 Genentech, Inc. Anti-CLL-1 antibodies and methods of use
AR105026A1 (es) 2015-06-16 2017-08-30 Genentech Inc ANTICUERPOS MADURADOS POR AFINIDAD Y HUMANIZADOS PARA FcRH5 Y MÉTODOS PARA SU USO
GB201601075D0 (en) 2016-01-20 2016-03-02 Ucb Biopharma Sprl Antibodies molecules
GB201601077D0 (en) 2016-01-20 2016-03-02 Ucb Biopharma Sprl Antibody molecule
GB201601073D0 (en) 2016-01-20 2016-03-02 Ucb Biopharma Sprl Antibodies
MX2019005438A (es) 2016-11-15 2019-08-16 Genentech Inc Dosificacion para tratamiento con anticuerpos bispecificos anti-cd20 / anti-cd3.
AR115360A1 (es) 2018-02-08 2021-01-13 Genentech Inc Moléculas de unión al antígeno y métodos de uso
US11078276B2 (en) 2018-10-03 2021-08-03 Nepenthe Bioscience LLC Anti-CD79 antibodies and their uses
WO2020092467A1 (en) * 2018-10-30 2020-05-07 Board Of Regents, The University Of Texas System Anti-cd79b antibodies and chimeric antigen receptors and methods of use thereof
CN111116745B (zh) * 2018-11-01 2022-10-14 上海新理念生物医药科技有限公司 抗CD79b抗体、其药物偶联物及其应用
BR112021014420A2 (pt) 2019-01-28 2021-09-21 Tuojie Biotech (Shanghai) Co., Ltd. Anticorpo anti-cd79b, fragmento de ligação ao antígeno do mesmo e uso farmacêutico do mesmo
AU2020275415A1 (en) * 2019-05-14 2021-11-25 Genentech, Inc. Methods of using anti-CD79B immunoconjugates to treat follicular lymphoma
MX2022009044A (es) * 2020-01-22 2022-08-11 Shanghai Senhui Medicine Co Ltd Conjugado de farmaco de derivado de eribulin, metodo de preparacion y aplicacion del mismo en medicina.
AU2021317378A1 (en) * 2020-07-27 2023-03-09 Tuojie Biotech (Shanghai) Co., Ltd. Anti-CD79B antibody-drug conjugate, and preparation method therefor and pharmaceutical use thereof
EP4263600A1 (en) 2020-12-18 2023-10-25 Century Therapeutics, Inc. Chimeric antigen receptor systems with adaptable receptor specificity
TW202302648A (zh) * 2021-03-12 2023-01-16 美商健生生物科技公司 Cd79b抗體於自體免疫治療應用之用途
KR20230160874A (ko) * 2021-03-24 2023-11-24 얀센 바이오테크 인코포레이티드 CD79b, CD20 및 CD3을 표적으로 하는 삼중특이적 항체
AU2021443318A1 (en) * 2021-04-30 2023-09-07 F. Hoffmann-La Roche Ag Dosing for combination treatment with anti-cd20/anti-cd3 bispecific antibody and anti-cd79b antibody drug conjugate
CA3231174A1 (en) * 2021-08-02 2023-02-09 Innovent Biologics (Suzhou) Co., Ltd. Anti-cd79bxcd3 bispecific antibody and use thereof
WO2023028612A2 (en) 2021-08-27 2023-03-02 Board Of Regents, The University Of Texas System Anti-tslpr (crlf2) antibodies
CN114891123B (zh) * 2022-06-09 2024-02-09 北京美康基免生物科技有限公司 一种基于CD79b人源化抗体的嵌合抗原受体及其应用
WO2024033362A1 (en) * 2022-08-08 2024-02-15 Atb Therapeutics Humanized antibodies against cd79b
WO2024081806A2 (en) * 2022-10-12 2024-04-18 Health Research, Inc. Heterogeneity of human cd79 and synergistic enhancement of antitumor activity by co-targeting of cd79b and cd79a in the therapy of b cell tumors
CN118271439A (zh) * 2022-12-29 2024-07-02 深圳泽安生物医药有限公司 抗CD79b抗体及其用途

Family Cites Families (134)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
IL47062A (en) 1975-04-10 1979-07-25 Yeda Res & Dev Process for diminishing antigenicity of tissues to be usedas transplants by treatment with glutaraldehyde
US4665077A (en) 1979-03-19 1987-05-12 The Upjohn Company Method for treating rejection of organ or skin grafts with 6-aryl pyrimidine compounds
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
US4737456A (en) 1985-05-09 1988-04-12 Syntex (U.S.A.) Inc. Reducing interference in ligand-receptor binding assays
US4676980A (en) 1985-09-23 1987-06-30 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Target specific cross-linked heteroantibodies
US6548640B1 (en) 1986-03-27 2003-04-15 Btg International Limited Altered antibodies
IL85035A0 (en) 1987-01-08 1988-06-30 Int Genetic Eng Polynucleotide molecule,a chimeric antibody with specificity for human b cell surface antigen,a process for the preparation and methods utilizing the same
WO1988007089A1 (en) 1987-03-18 1988-09-22 Medical Research Council Altered antibodies
US5770701A (en) 1987-10-30 1998-06-23 American Cyanamid Company Process for preparing targeted forms of methyltrithio antitumor agents
US5606040A (en) 1987-10-30 1997-02-25 American Cyanamid Company Antitumor and antibacterial substituted disulfide derivatives prepared from compounds possessing a methyl-trithio group
IL85746A (en) 1988-03-15 1994-05-30 Yeda Res & Dev Preparations comprising t-lymphocyte cells treated with 8-methoxypsoralen or cell membranes separated therefrom for preventing or treating autoimmune diseases
FI891226A (fi) 1988-04-28 1989-10-29 Univ Leland Stanford Junior Reseptordeterminanter i anti-t-celler foer behandling av autoimmunsjukdom.
DE68913658T3 (de) 1988-11-11 2005-07-21 Stratagene, La Jolla Klonierung von Immunglobulin Sequenzen aus den variablen Domänen
WO1990008187A1 (en) 1989-01-19 1990-07-26 Dana Farber Cancer Institute Soluble two domain cd2 protein
ES2062519T5 (es) 1989-03-21 2003-07-16 Immune Response Corp Inc Vacunacion y metodos contra enfermedades originadas a partir de respuestas patogenicas mediante poblaciones especificas de linfocitos t.
DE3920358A1 (de) 1989-06-22 1991-01-17 Behringwerke Ag Bispezifische und oligospezifische, mono- und oligovalente antikoerperkonstrukte, ihre herstellung und verwendung
AU652540B2 (en) 1989-07-19 1994-09-01 Xoma Corporation T cell receptor peptides as therapeutics for autoimmune and malignant disease
CA2026147C (en) 1989-10-25 2006-02-07 Ravi J. Chari Cytotoxic agents comprising maytansinoids and their therapeutic use
US5208020A (en) 1989-10-25 1993-05-04 Immunogen Inc. Cytotoxic agents comprising maytansinoids and their therapeutic use
US5959177A (en) 1989-10-27 1999-09-28 The Scripps Research Institute Transgenic plants expressing assembled secretory antibodies
US6075181A (en) 1990-01-12 2000-06-13 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
US6150584A (en) 1990-01-12 2000-11-21 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
US5770429A (en) 1990-08-29 1998-06-23 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
DK0564531T3 (da) 1990-12-03 1998-09-28 Genentech Inc Berigelsesfremgangsmåde for variantproteiner med ændrede bindingsegenskaber
US5571894A (en) 1991-02-05 1996-11-05 Ciba-Geigy Corporation Recombinant antibodies specific for a growth factor receptor
WO1992022653A1 (en) 1991-06-14 1992-12-23 Genentech, Inc. Method for making humanized antibodies
GB9114948D0 (en) 1991-07-11 1991-08-28 Pfizer Ltd Process for preparing sertraline intermediates
US7018809B1 (en) 1991-09-19 2006-03-28 Genentech, Inc. Expression of functional antibody fragments
US5587458A (en) 1991-10-07 1996-12-24 Aronex Pharmaceuticals, Inc. Anti-erbB-2 antibodies, combinations thereof, and therapeutic and diagnostic uses thereof
WO1993008829A1 (en) 1991-11-04 1993-05-13 The Regents Of The University Of California Compositions that mediate killing of hiv-infected cells
CA2372813A1 (en) 1992-02-06 1993-08-19 L.L. Houston Biosynthetic binding protein for cancer marker
DE69329503T2 (de) 1992-11-13 2001-05-03 Idec Pharma Corp Therapeutische Verwendung von chimerischen und markierten Antikörpern, die gegen ein Differenzierung-Antigen gerichtet sind, dessen Expression auf menschliche B Lymphozyt beschränkt ist, für die Behandlung von B-Zell-Lymphoma
US5635483A (en) 1992-12-03 1997-06-03 Arizona Board Of Regents Acting On Behalf Of Arizona State University Tumor inhibiting tetrapeptide bearing modified phenethyl amides
US5780588A (en) 1993-01-26 1998-07-14 Arizona Board Of Regents Elucidation and synthesis of selected pentapeptides
CA2163345A1 (en) 1993-06-16 1994-12-22 Susan Adrienne Morgan Antibodies
US5773001A (en) 1994-06-03 1998-06-30 American Cyanamid Company Conjugates of methyltrithio antitumor agents and intermediates for their synthesis
US5789199A (en) 1994-11-03 1998-08-04 Genentech, Inc. Process for bacterial production of polypeptides
US5840523A (en) 1995-03-01 1998-11-24 Genetech, Inc. Methods and compositions for secretion of heterologous polypeptides
US5731168A (en) 1995-03-01 1998-03-24 Genentech, Inc. Method for making heteromultimeric polypeptides
US5869046A (en) 1995-04-14 1999-02-09 Genentech, Inc. Altered polypeptides with increased half-life
US5712374A (en) 1995-06-07 1998-01-27 American Cyanamid Company Method for the preparation of substantiallly monomeric calicheamicin derivative/carrier conjugates
US5714586A (en) 1995-06-07 1998-02-03 American Cyanamid Company Methods for the preparation of monomeric calicheamicin derivative/carrier conjugates
US6267958B1 (en) 1995-07-27 2001-07-31 Genentech, Inc. Protein formulation
GB9603256D0 (en) 1996-02-16 1996-04-17 Wellcome Found Antibodies
US6171586B1 (en) 1997-06-13 2001-01-09 Genentech, Inc. Antibody formulation
AU757627B2 (en) 1997-06-24 2003-02-27 Genentech Inc. Methods and compositions for galactosylated glycoproteins
US6040498A (en) 1998-08-11 2000-03-21 North Caroline State University Genetically engineered duckweed
ATE419009T1 (de) 1997-10-31 2009-01-15 Genentech Inc Methoden und zusammensetzungen bestehend aus glykoprotein-glykoformen
US6610833B1 (en) 1997-11-24 2003-08-26 The Institute For Human Genetics And Biochemistry Monoclonal human natural antibodies
WO1999029888A1 (en) 1997-12-05 1999-06-17 The Scripps Research Institute Humanization of murine antibody
US6194551B1 (en) 1998-04-02 2001-02-27 Genentech, Inc. Polypeptide variants
DE69937291T2 (de) 1998-04-02 2008-07-10 Genentech, Inc., South San Francisco Antikörpervarianten und fragmente davon
DK2180007T4 (da) 1998-04-20 2017-11-27 Roche Glycart Ag Glycosyleringsteknik for antistoffer til forbedring af antistofafhængig cellecytotoxicitet
KR20060067983A (ko) 1999-01-15 2006-06-20 제넨테크, 인크. 효과기 기능이 변화된 폴리펩티드 변이체
US6737056B1 (en) 1999-01-15 2004-05-18 Genentech, Inc. Polypeptide variants with altered effector function
EP2275541B1 (en) 1999-04-09 2016-03-23 Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. Method for controlling the activity of immunologically functional molecule
PT1222292E (pt) 1999-10-04 2005-11-30 Medicago Inc Metodo para regulacao da transcricao de genes exogenos na presenca de azoto
US7125978B1 (en) 1999-10-04 2006-10-24 Medicago Inc. Promoter for regulating expression of foreign genes
US7504256B1 (en) 1999-10-19 2009-03-17 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Process for producing polypeptide
JP2003516755A (ja) 1999-12-15 2003-05-20 ジェネンテック・インコーポレーテッド ショットガン走査、すなわち機能性タンパク質エピトープをマッピングするための組み合わせ方法
DE60031793T2 (de) 1999-12-29 2007-08-23 Immunogen Inc., Cambridge Doxorubicin- und daunorubicin-enthaltende, zytotoxische mittel und deren therapeutische anwendung
EP1272647B1 (en) 2000-04-11 2014-11-12 Genentech, Inc. Multivalent antibodies and uses therefor
EA013224B1 (ru) 2000-10-06 2010-04-30 Киова Хакко Кирин Ко., Лтд. Клетки, продуцирующие композиции антител
US6946292B2 (en) 2000-10-06 2005-09-20 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Cells producing antibody compositions with increased antibody dependent cytotoxic activity
US7064191B2 (en) 2000-10-06 2006-06-20 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Process for purifying antibody
US6596541B2 (en) 2000-10-31 2003-07-22 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods of modifying eukaryotic cells
PT1354034E (pt) 2000-11-30 2008-02-28 Medarex Inc Roedores transgénicos transcromossómicos para produção de anticorpos humanos
NZ592087A (en) 2001-08-03 2012-11-30 Roche Glycart Ag Antibody glycosylation variants having increased antibody-dependent cellular cytotoxicity
US20110045005A1 (en) 2001-10-19 2011-02-24 Craig Crowley Compositions and methods for the treatment of tumor of hematopoietic origin
AU2002337935B2 (en) 2001-10-25 2008-05-01 Genentech, Inc. Glycoprotein compositions
US20040093621A1 (en) 2001-12-25 2004-05-13 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd Antibody composition which specifically binds to CD20
AU2003236017B2 (en) 2002-04-09 2009-03-26 Kyowa Kirin Co., Ltd. Drug containing antibody composition
WO2003085107A1 (fr) 2002-04-09 2003-10-16 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Cellules à génome modifié
ES2362419T3 (es) 2002-04-09 2011-07-05 Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. Células con depresión o deleción de la actividad de la proteína que participa en el transporte de gdp-fucosa.
EP1498491A4 (en) 2002-04-09 2006-12-13 Kyowa Hakko Kogyo Kk METHOD FOR INCREASING THE ACTIVITY OF AN ANTIBODY COMPOSITION FOR BINDING TO THE FC GAMMA RECEPTOR IIIA
EP1498490A4 (en) 2002-04-09 2006-11-29 Kyowa Hakko Kogyo Kk PROCESS FOR PREPARING ANTIBODY COMPOSITION
JP4832719B2 (ja) 2002-04-09 2011-12-07 協和発酵キリン株式会社 ＦｃγＲＩＩＩａ多型患者に適応する抗体組成物含有医薬
US20090068178A1 (en) * 2002-05-08 2009-03-12 Genentech, Inc. Compositions and Methods for the Treatment of Tumor of Hematopoietic Origin
CA2488441C (en) 2002-06-03 2015-01-27 Genentech, Inc. Synthetic antibody phage libraries
US7361740B2 (en) 2002-10-15 2008-04-22 Pdl Biopharma, Inc. Alteration of FcRn binding affinities or serum half-lives of antibodies by mutagenesis
PT1572744E (pt) 2002-12-16 2010-09-07 Genentech Inc Variantes de imunoglobulina e utilizações destas
WO2004065416A2 (en) 2003-01-16 2004-08-05 Genentech, Inc. Synthetic antibody phage libraries
US7871607B2 (en) 2003-03-05 2011-01-18 Halozyme, Inc. Soluble glycosaminoglycanases and methods of preparing and using soluble glycosaminoglycanases
US20060104968A1 (en) 2003-03-05 2006-05-18 Halozyme, Inc. Soluble glycosaminoglycanases and methods of preparing and using soluble glycosaminogly ycanases
AU2004242846A1 (en) * 2003-05-31 2004-12-09 Micromet Ag Pharmaceutical compositions comprising bispecific anti-CD3, anti-CD19 antibody constructs for the treatment of B-cell related disorders
EP1688439A4 (en) 2003-10-08 2007-12-19 Kyowa Hakko Kogyo Kk HYBRID PROTEIN COMPOSITION
EP1705251A4 (en) 2003-10-09 2009-10-28 Kyowa Hakko Kirin Co Ltd PROCESS FOR PRODUCING ANTIBODY COMPOSITION BY RNA INHIBITION OF FUNCTION OF $ G (A) 1,6-FUCOSYLTRANSFERASE
SG10202008722QA (en) 2003-11-05 2020-10-29 Roche Glycart Ag Cd20 antibodies with increased fc receptor binding affinity and effector function
BR122018071808B8 (pt) 2003-11-06 2020-06-30 Seattle Genetics Inc conjugado
WO2005053742A1 (ja) 2003-12-04 2005-06-16 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. 抗体組成物を含有する医薬
JP5128935B2 (ja) 2004-03-31 2013-01-23 ジェネンテック， インコーポレイテッド ヒト化抗ＴＧＦ−β抗体
US7785903B2 (en) 2004-04-09 2010-08-31 Genentech, Inc. Variable domain library and uses
EP2360186B1 (en) 2004-04-13 2017-08-30 F. Hoffmann-La Roche AG Anti-P-selectin antibodies
BRPI0510883B8 (pt) 2004-06-01 2021-05-25 Genentech Inc composto conjugado de droga e anticorpo, composição farmacêutica, método de fabricação de composto conjugado de droga e anticorpo e usos de uma formulação, de um conjugado de droga e anticorpo e um agente quimioterapêutico e de uma combinação
TWI380996B (zh) 2004-09-17 2013-01-01 Hoffmann La Roche 抗ｏｘ４０ｌ抗體
CA2580141C (en) 2004-09-23 2013-12-10 Genentech, Inc. Cysteine engineered antibodies and conjugates
JO3000B1 (ar) 2004-10-20 2016-09-05 Genentech Inc مركبات أجسام مضادة .
PL1874821T3 (pl) 2005-04-26 2013-09-30 Trion Pharma Gmbh Kombinacja przeciwciał i glikokortykoidów do leczenia raka
EP1957531B1 (en) 2005-11-07 2016-04-13 Genentech, Inc. Binding polypeptides with diversified and consensus vh/vl hypervariable sequences
US20070237764A1 (en) 2005-12-02 2007-10-11 Genentech, Inc. Binding polypeptides with restricted diversity sequences
JP2009536527A (ja) 2006-05-09 2009-10-15 ジェネンテック・インコーポレーテッド 最適化されたスキャフォールドを備えた結合ポリペプチド
WO2008027236A2 (en) 2006-08-30 2008-03-06 Genentech, Inc. Multispecific antibodies
EP2066349B1 (en) 2006-09-08 2012-03-28 MedImmune, LLC Humanized anti-cd19 antibodies and their use in treatment of tumors, transplantation and autoimmune diseases
US20080226635A1 (en) 2006-12-22 2008-09-18 Hans Koll Antibodies against insulin-like growth factor I receptor and uses thereof
CA2683370C (en) 2007-04-03 2022-12-13 Micromet Ag Cross-species-specific binding domain
PL2155788T3 (pl) 2007-04-03 2013-02-28 Amgen Res Munich Gmbh Swoiste międzygatunkowe bispecyficzne czynniki wiążące
CN100592373C (zh) 2007-05-25 2010-02-24 群康科技(深圳)有限公司 液晶显示面板驱动装置及其驱动方法
AU2008276128B2 (en) * 2007-07-16 2013-10-10 Genentech, Inc. Humanized anti-CD79b antibodies and immunoconjugates and methods of use
ES2579323T3 (es) 2007-07-16 2016-08-09 Genentech, Inc. Anticuerpos anti-CD79B e inmunoconjugados y métodos de uso
JP5490714B2 (ja) 2007-11-28 2014-05-14 メディミューン，エルエルシー タンパク質製剤
HUE028536T2 (en) 2008-01-07 2016-12-28 Amgen Inc Method for producing antibody to FC heterodimer molecules using electrostatic control effects
CL2009000062A1 (es) 2008-01-31 2010-05-14 Genentech Inc Anticuerpo humanizado anti cd79b; con modificaciones de cisterna libre; inmunoconjugado que contiene dicho anticuerpo y una droga; polinucleotido que codifica el anticuerpo; vector, celula huesped; composicion farmaceutica y uso de dicha composicion para tratar cancer, preferentemente linfomas.
CN101939847B (zh) * 2008-02-08 2012-04-25 三洋电机株式会社 太阳能电池模块和太阳能电池
JP6022444B2 (ja) 2010-05-14 2016-11-09 ライナット ニューロサイエンス コーポレイション ヘテロ二量体タンパク質ならびにそれを生産および精製するための方法
AU2011286024B2 (en) 2010-08-02 2014-08-07 Macrogenics, Inc. Covalent diabodies and uses thereof
KR101891845B1 (ko) 2010-11-10 2018-08-24 암젠 리서치 (뮌헨) 게엠베하 Cd3-특이적 결합 도메인에 의해 유발된 악영향의 예방
BR122016016837A2 (pt) 2011-05-21 2019-08-27 Macrogenics Inc moléculas de ligação a cd3; anticorpos de ligação a cd3; composições farmacêuticas; e usos da molécula de ligação a cd3
PE20141521A1 (es) 2011-08-23 2014-10-25 Roche Glycart Ag Moleculas biespecificas de union a antigeno activadoras de celulas t
AU2013288932A1 (en) 2012-07-09 2014-12-11 Genentech, Inc. Immunoconjugates comprising anti - CD79b antibodies
JP2015523380A (ja) 2012-07-09 2015-08-13 ジェネンテック， インコーポレイテッド 抗ｃｄ７９ｂ抗体を含む免疫複合体
EP2885002A4 (en) 2012-08-14 2016-04-20 Ibc Pharmaceuticals Inc BISPECIFIC ANTIBODIES REDIRECTED AGAINST T CELLS FOR THE TREATMENT OF DISEASES
JOP20200236A1 (ar) 2012-09-21 2017-06-16 Regeneron Pharma الأجسام المضادة لمضاد cd3 وجزيئات ربط الأنتيجين ثنائية التحديد التي تربط cd3 وcd20 واستخداماتها
US10968276B2 (en) 2013-03-12 2021-04-06 Xencor, Inc. Optimized anti-CD3 variable regions
US10131710B2 (en) 2013-01-14 2018-11-20 Xencor, Inc. Optimized antibody variable regions
ES2775207T3 (es) * 2013-02-26 2020-07-24 Roche Glycart Ag Moléculas de unión a antígeno activadoras de linfocitos T biespecíficas específicas para CD3 y CEA
WO2014153164A1 (en) 2013-03-14 2014-09-25 The California Institute For Biomedical Research Targeting agent antibody conjugates and uses thereof
AU2014236769B2 (en) * 2013-03-15 2018-09-27 Amgen Inc. Heterodimeric bispecific antibodies
CA2913069A1 (en) 2013-05-28 2014-12-04 Numab Ag Novel antibodies
DK3736292T3 (da) 2013-12-17 2024-07-22 Genentech Inc Anti-CD3-antistoffer og fremgangsmåder til anvendelse
KR20160089531A (ko) 2013-12-17 2016-07-27 제넨테크, 인크. Pd-1 축 결합 길항제 및 항-her2 항체를 사용하여 her2-양성 암을 치료하는 방법
PL3177643T3 (pl) 2014-08-04 2019-09-30 F.Hoffmann-La Roche Ag Dwuswoiste cząsteczki wiążące antygen aktywujące komórki T
AR102918A1 (es) * 2014-12-05 2017-04-05 Genentech Inc Anticuerpos anti-cd79b y métodos de uso
AR105026A1 (es) 2015-06-16 2017-08-30 Genentech Inc ANTICUERPOS MADURADOS POR AFINIDAD Y HUMANIZADOS PARA FcRH5 Y MÉTODOS PARA SU USO
US10501545B2 (en) 2015-06-16 2019-12-10 Genentech, Inc. Anti-CLL-1 antibodies and methods of use

Also Published As

Publication number Publication date
MA40938A (fr) 2017-10-11
IL251970A0 (en) 2017-06-29
WO2016090210A1 (en) 2016-06-09
MX2017007049A (es) 2018-05-02
MY188799A (en) 2022-01-04
CN107108739A (zh) 2017-08-29
PE20170953A1 (es) 2017-07-13
PL3227336T3 (pl) 2019-11-29
US20160159906A1 (en) 2016-06-09
US9975949B2 (en) 2018-05-22
HRP20191584T1 (hr) 2019-11-29
HK1243102A1 (zh) 2018-07-06
IL251970B (en) 2021-12-01
US10941199B2 (en) 2021-03-09
PH12017500877A1 (en) 2017-11-06
CR20170230A (es) 2017-11-07
SG11201704449VA (en) 2017-06-29
CO2017006740A2 (es) 2018-01-05
EA201790984A1 (ru) 2018-05-31
DK3227336T3 (da) 2019-09-16
PT3227336T (pt) 2019-09-09
JP2018505849A (ja) 2018-03-01
JP6802158B2 (ja) 2020-12-16
CL2017001408A1 (es) 2018-01-05
AR102918A1 (es) 2017-04-05
ES2744540T3 (es) 2020-02-25
JP2020168006A (ja) 2020-10-15
LT3227336T (lt) 2019-09-25
ZA201703167B (en) 2021-03-31
SI3227336T1 (sl) 2019-10-30
KR20170086549A (ko) 2017-07-26
TW201636366A (zh) 2016-10-16
EP3227336B1 (en) 2019-07-03
CN107108739B (zh) 2022-01-04
TWI713480B (zh) 2020-12-21
US20180327492A1 (en) 2018-11-15
RS59203B1 (sr) 2019-10-31
PH12017500877B1 (en) 2017-11-06
AU2021232717A1 (en) 2021-10-14
BR112017011326A2 (pt) 2018-07-31
CA2966362A1 (en) 2016-06-09
EP3227336A1 (en) 2017-10-11
AU2015358325A1 (en) 2017-05-25
HUE045216T2 (hu) 2019-12-30

Similar Documents

Publication Publication Date Title
UA120102C2 (uk) АНТИТІЛО ДО CD79b І ЙОГО ЗАСТОСУВАННЯ
TWI786054B (zh) 人類抗體、醫藥組合物、及其方法
AU2013306390B2 (en) Antibodies and vaccines for use in treating ROR1 cancers and inhibiting metastasis
UA120753C2 (uk) Біспецифічне антитіло до сd3 та cd20
UA128387C2 (uk) Антитіло до lag3
JP2021151263A (ja) シアリル−Ｌｅｗｉｓ ａに対するヒト抗体をコードする核酸
US20220396627A1 (en) Anti-siglec-9 compositions and methods for modulating myeloid cell inflammatory phenotypes and uses thereof
UA121112C2 (uk) Антитіло до ox40 та його застосування
US11066471B2 (en) Antibodies to MICA and MICB proteins
WO2016133059A1 (ja) Ｆｓｔｌ１を利用した抗がん剤・転移抑制剤およびその併用剤
US20200131266A1 (en) Methods of treating cancer using antibodies and molecules that immunospecifically bind to btn1a1
US20230348603A1 (en) Anti-vsig4 compositions and methods for modulating myeloid cell inflammatory phenotypes and uses thereof
EP3814379A1 (en) Methods of treating cancer with a combination of an anti-pd-1 antibody and an anti-tissue factor antibody-drug conjugate
US20220396632A1 (en) Anti-psgl-1 compositions and methods for modulating myeloid cell infalmmatory phenotypes and uses thereof
US20220251233A1 (en) Anti-cd53 compositions and methods for modulating myeloid cell inflammatory phenotypes and uses thereof
US20220289840A1 (en) Antibodies To Cell Adhesion Molecule-Related/Down-Regulated By Oncogenes (CDON) And Uses Thereof
WO2023076989A1 (en) Methods of treating cancer with a combination of an anti-pd-1 antibody and an anti-cd30 antibody-drug conjugate
KR20220113685A (ko) 항-pd-1 항체와 항-조직 인자 항체-약물 접합체의 조합을 사용하여 암을 치료하는 방법