UA119985C2 - Мікроорганізм, який виробляє о-фосфосерин, та спосіб отримання о-фосфосерину або l-цистеїну з його застосуванням - Google Patents
Мікроорганізм, який виробляє о-фосфосерин, та спосіб отримання о-фосфосерину або l-цистеїну з його застосуванням Download PDFInfo
- Publication number
- UA119985C2 UA119985C2 UAA201700326A UAA201700326A UA119985C2 UA 119985 C2 UA119985 C2 UA 119985C2 UA A201700326 A UAA201700326 A UA A201700326A UA A201700326 A UAA201700326 A UA A201700326A UA 119985 C2 UA119985 C2 UA 119985C2
- Authority
- UA
- Ukraine
- Prior art keywords
- phosphoserine
- activity
- microorganism
- genus
- uvi
- Prior art date
Links
- 244000005700 microbiome Species 0.000 title claims abstract description 76
- BZQFBWGGLXLEPQ-REOHCLBHSA-N phosphoserine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)COP(O)(O)=O BZQFBWGGLXLEPQ-REOHCLBHSA-N 0.000 title claims abstract description 38
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims abstract description 23
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-Cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 title abstract description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims abstract description 92
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims abstract description 47
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims abstract description 44
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims abstract description 44
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 claims abstract description 18
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 18
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 48
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 claims description 35
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 claims description 29
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 23
- UCKMPCXJQFINFW-UHFFFAOYSA-N Sulphide Chemical compound [S-2] UCKMPCXJQFINFW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 102100021762 Phosphoserine phosphatase Human genes 0.000 claims description 6
- 108010076573 phosphoserine phosphatase Proteins 0.000 claims description 6
- 102100037579 D-3-phosphoglycerate dehydrogenase Human genes 0.000 claims description 5
- 108010038555 Phosphoglycerate dehydrogenase Proteins 0.000 claims description 5
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 claims description 5
- 102000030592 phosphoserine aminotransferase Human genes 0.000 claims description 5
- 108010088694 phosphoserine aminotransferase Proteins 0.000 claims description 5
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 101100385396 Schizosaccharomyces pombe (strain 972 / ATCC 24843) cka1 gene Proteins 0.000 claims 1
- 150000001944 cysteine derivatives Chemical class 0.000 abstract description 7
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 112
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 69
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 69
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 48
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 48
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 48
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 32
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 29
- 108010078791 Carrier Proteins Proteins 0.000 description 27
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 27
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 22
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 19
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 19
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 description 17
- 108090000301 Membrane transport proteins Proteins 0.000 description 17
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 16
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 15
- 102000003939 Membrane transport proteins Human genes 0.000 description 14
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 14
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 14
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 12
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 12
- 230000000875 corresponding effect Effects 0.000 description 12
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 12
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 12
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 11
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 11
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 11
- 230000009471 action Effects 0.000 description 9
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 9
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 102000018697 Membrane Proteins Human genes 0.000 description 7
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 7
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 7
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 7
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 7
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 7
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 6
- KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M Potassium hydroxide Chemical compound [OH-].[K+] KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 6
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 6
- 230000004044 response Effects 0.000 description 6
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 6
- 235000008331 Pinus X rigitaeda Nutrition 0.000 description 5
- 235000011613 Pinus brutia Nutrition 0.000 description 5
- 241000018646 Pinus brutia Species 0.000 description 5
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 5
- 230000008859 change Effects 0.000 description 5
- 238000000151 deposition Methods 0.000 description 5
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 5
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 5
- 230000006870 function Effects 0.000 description 5
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 5
- 230000009036 growth inhibition Effects 0.000 description 5
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 5
- 230000008569 process Effects 0.000 description 5
- 230000004952 protein activity Effects 0.000 description 5
- 238000005728 strengthening Methods 0.000 description 5
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 5
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 5
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 4
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 4
- 210000005056 cell body Anatomy 0.000 description 4
- 230000006801 homologous recombination Effects 0.000 description 4
- 238000002744 homologous recombination Methods 0.000 description 4
- 125000004435 hydrogen atom Chemical group [H]* 0.000 description 4
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 4
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 4
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 4
- 150000003573 thiols Chemical class 0.000 description 4
- 230000003313 weakening effect Effects 0.000 description 4
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 3
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 3
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 3
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 3
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108030001910 O-phosphoserine sulfhydrylases Proteins 0.000 description 3
- 108700026244 Open Reading Frames Proteins 0.000 description 3
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 3
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 3
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 3
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 3
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 3
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 3
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 3
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 3
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 3
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 description 3
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 3
- 125000003396 thiol group Chemical group [H]S* 0.000 description 3
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 3
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 2
- UKAUYVFTDYCKQA-UHFFFAOYSA-N -2-Amino-4-hydroxybutanoic acid Natural products OC(=O)C(N)CCO UKAUYVFTDYCKQA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LFLUCDOSQPJJBE-UHFFFAOYSA-N 3-phosphonooxypyruvic acid Chemical compound OC(=O)C(=O)COP(O)(O)=O LFLUCDOSQPJJBE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WUBBRNOQWQTFEX-UHFFFAOYSA-N 4-aminosalicylic acid Chemical compound NC1=CC=C(C(O)=O)C(O)=C1 WUBBRNOQWQTFEX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N Ammonia chloride Chemical compound [NH4+].[Cl-] NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 2
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101000992394 Homo sapiens Oxysterol-binding protein-related protein 5 Proteins 0.000 description 2
- 244000025221 Humulus lupulus Species 0.000 description 2
- 235000008694 Humulus lupulus Nutrition 0.000 description 2
- UKAUYVFTDYCKQA-VKHMYHEASA-N L-homoserine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCO UKAUYVFTDYCKQA-VKHMYHEASA-N 0.000 description 2
- QJPWUUJVYOJNMH-VKHMYHEASA-N L-homoserine lactone Chemical compound N[C@H]1CCOC1=O QJPWUUJVYOJNMH-VKHMYHEASA-N 0.000 description 2
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 102100032148 Oxysterol-binding protein-related protein 5 Human genes 0.000 description 2
- FGXWXKBOWJZCKN-LGDQNDJISA-N P(=O)(O)(O)OC[C@H](N)C(=O)O.O=C[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO Chemical compound P(=O)(O)(O)OC[C@H](N)C(=O)O.O=C[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FGXWXKBOWJZCKN-LGDQNDJISA-N 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L Sodium Carbonate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C([O-])=O CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N Sulfur Chemical compound [S] NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960004308 acetylcysteine Drugs 0.000 description 2
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 2
- 125000004429 atom Chemical group 0.000 description 2
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 2
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 description 2
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 2
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 2
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 2
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 2
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 2
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 2
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 2
- RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N glutathione Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(=O)N[C@@H](CS)C(=O)NCC(O)=O RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N 0.000 description 2
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 2
- 210000004209 hair Anatomy 0.000 description 2
- IPCSVZSSVZVIGE-UHFFFAOYSA-N hexadecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(O)=O IPCSVZSSVZVIGE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 2
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 2
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 2
- 150000007523 nucleic acids Chemical group 0.000 description 2
- 230000002018 overexpression Effects 0.000 description 2
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 2
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 2
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 2
- 238000010839 reverse transcription Methods 0.000 description 2
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 2
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 2
- 241000894007 species Species 0.000 description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 2
- 239000011593 sulfur Substances 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 239000012137 tryptone Substances 0.000 description 2
- 101710181757 1,2-dihydroxy-3-keto-5-methylthiopentene dioxygenase Proteins 0.000 description 1
- HMUNWXXNJPVALC-UHFFFAOYSA-N 1-[4-[2-(2,3-dihydro-1H-inden-2-ylamino)pyrimidin-5-yl]piperazin-1-yl]-2-(2,4,6,7-tetrahydrotriazolo[4,5-c]pyridin-5-yl)ethanone Chemical compound C1C(CC2=CC=CC=C12)NC1=NC=C(C=N1)N1CCN(CC1)C(CN1CC2=C(CC1)NN=N2)=O HMUNWXXNJPVALC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 100676-05-9 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)O1 OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LDXJRKWFNNFDSA-UHFFFAOYSA-N 2-(2,4,6,7-tetrahydrotriazolo[4,5-c]pyridin-5-yl)-1-[4-[2-[[3-(trifluoromethoxy)phenyl]methylamino]pyrimidin-5-yl]piperazin-1-yl]ethanone Chemical compound C1CN(CC2=NNN=C21)CC(=O)N3CCN(CC3)C4=CN=C(N=C4)NCC5=CC(=CC=C5)OC(F)(F)F LDXJRKWFNNFDSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PAWQVTBBRAZDMG-UHFFFAOYSA-N 2-(3-bromo-2-fluorophenyl)acetic acid Chemical compound OC(=O)CC1=CC=CC(Br)=C1F PAWQVTBBRAZDMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OSJPPGNTCRNQQC-UWTATZPHSA-N 3-phospho-D-glyceric acid Chemical compound OC(=O)[C@H](O)COP(O)(O)=O OSJPPGNTCRNQQC-UWTATZPHSA-N 0.000 description 1
- IJJWOSAXNHWBPR-HUBLWGQQSA-N 5-[(3as,4s,6ar)-2-oxo-1,3,3a,4,6,6a-hexahydrothieno[3,4-d]imidazol-4-yl]-n-(6-hydrazinyl-6-oxohexyl)pentanamide Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)NCCCCCC(=O)NN)SC[C@@H]21 IJJWOSAXNHWBPR-HUBLWGQQSA-N 0.000 description 1
- 101710094863 Acireductone dioxygenase Proteins 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- ATRRKUHOCOJYRX-UHFFFAOYSA-N Ammonium bicarbonate Chemical compound [NH4+].OC([O-])=O ATRRKUHOCOJYRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N Ammonium hydroxide Chemical compound [NH4+].[OH-] VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004254 Ammonium phosphate Substances 0.000 description 1
- 108020005544 Antisense RNA Proteins 0.000 description 1
- 241000239290 Araneae Species 0.000 description 1
- 240000005220 Bischofia javanica Species 0.000 description 1
- 235000010893 Bischofia javanica Nutrition 0.000 description 1
- ZOXJGFHDIHLPTG-UHFFFAOYSA-N Boron Chemical group [B] ZOXJGFHDIHLPTG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000511343 Chondrostoma nasus Species 0.000 description 1
- RGJOEKWQDUBAIZ-IBOSZNHHSA-N CoASH Chemical compound O[C@@H]1[C@H](OP(O)(O)=O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OCC(C)(C)[C@@H](O)C(=O)NCCC(=O)NCCS)O[C@H]1N1C2=NC=NC(N)=C2N=C1 RGJOEKWQDUBAIZ-IBOSZNHHSA-N 0.000 description 1
- 241000252185 Cobitidae Species 0.000 description 1
- 206010011224 Cough Diseases 0.000 description 1
- 101710088194 Dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- 241000255925 Diptera Species 0.000 description 1
- 101100284769 Drosophila melanogaster hemo gene Proteins 0.000 description 1
- 206010059866 Drug resistance Diseases 0.000 description 1
- 208000000059 Dyspnea Diseases 0.000 description 1
- 206010013975 Dyspnoeas Diseases 0.000 description 1
- 244000046038 Ehretia acuminata Species 0.000 description 1
- 235000009300 Ehretia acuminata Nutrition 0.000 description 1
- 229930091371 Fructose Natural products 0.000 description 1
- 239000005715 Fructose Substances 0.000 description 1
- RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N Fructose Chemical compound OC[C@H]1O[C@](O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 108010024636 Glutathione Proteins 0.000 description 1
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010020056 Hydrogenase Proteins 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- 101150040736 K12 gene Proteins 0.000 description 1
- 102000011782 Keratins Human genes 0.000 description 1
- 108010076876 Keratins Proteins 0.000 description 1
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- 235000019687 Lamb Nutrition 0.000 description 1
- OYHQOLUKZRVURQ-HZJYTTRNSA-N Linoleic acid Chemical compound CCCCC\C=C/C\C=C/CCCCCCCC(O)=O OYHQOLUKZRVURQ-HZJYTTRNSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N Maltose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N 0.000 description 1
- 206010048723 Multiple-drug resistance Diseases 0.000 description 1
- 101100498160 Mus musculus Dach1 gene Proteins 0.000 description 1
- 101100042271 Mus musculus Sema3b gene Proteins 0.000 description 1
- 244000004005 Nypa fruticans Species 0.000 description 1
- 235000005305 Nypa fruticans Nutrition 0.000 description 1
- 241000283965 Ochotona princeps Species 0.000 description 1
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 1
- QSLJIVKCVHQPLV-PEMPUTJUSA-N Oxandrin Chemical compound C([C@@H]1CC2)C(=O)OC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@](C)(O)[C@@]2(C)CC1 QSLJIVKCVHQPLV-PEMPUTJUSA-N 0.000 description 1
- CBENFWSGALASAD-UHFFFAOYSA-N Ozone Chemical compound [O-][O+]=O CBENFWSGALASAD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000021314 Palmitic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 1
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 1
- 201000007100 Pharyngitis Diseases 0.000 description 1
- 244000046052 Phaseolus vulgaris Species 0.000 description 1
- 235000010627 Phaseolus vulgaris Nutrition 0.000 description 1
- OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N Phosphorus Chemical compound [P] OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001377010 Pila Species 0.000 description 1
- 240000004713 Pisum sativum Species 0.000 description 1
- 235000010582 Pisum sativum Nutrition 0.000 description 1
- 241000514450 Podocarpus latifolius Species 0.000 description 1
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 244000046146 Pueraria lobata Species 0.000 description 1
- 235000010575 Pueraria lobata Nutrition 0.000 description 1
- 244000097202 Rathbunia alamosensis Species 0.000 description 1
- 235000009776 Rathbunia alamosensis Nutrition 0.000 description 1
- YASAKCUCGLMORW-UHFFFAOYSA-N Rosiglitazone Chemical compound C=1C=CC=NC=1N(C)CCOC(C=C1)=CC=C1CC1SC(=O)NC1=O YASAKCUCGLMORW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002105 Southern blotting Methods 0.000 description 1
- 241001415395 Spea Species 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- 235000021355 Stearic acid Nutrition 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- 235000019486 Sunflower oil Nutrition 0.000 description 1
- 102000003929 Transaminases Human genes 0.000 description 1
- 108090000340 Transaminases Proteins 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 241001377938 Yara Species 0.000 description 1
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 1
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 description 1
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 1
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 1
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001099 ammonium carbonate Substances 0.000 description 1
- 235000012501 ammonium carbonate Nutrition 0.000 description 1
- 235000019270 ammonium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 239000000908 ammonium hydroxide Substances 0.000 description 1
- 229910000148 ammonium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019289 ammonium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000000074 antisense oligonucleotide Substances 0.000 description 1
- 238000012230 antisense oligonucleotides Methods 0.000 description 1
- 208000006673 asthma Diseases 0.000 description 1
- 239000005441 aurora Substances 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N beta-maltose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 1
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 1
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 1
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 1
- 206010006451 bronchitis Diseases 0.000 description 1
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 1
- 235000013877 carbamide Nutrition 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 239000001569 carbon dioxide Substances 0.000 description 1
- 229910002092 carbon dioxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000004359 castor oil Substances 0.000 description 1
- 235000019438 castor oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 239000003240 coconut oil Substances 0.000 description 1
- 235000019864 coconut oil Nutrition 0.000 description 1
- RGJOEKWQDUBAIZ-UHFFFAOYSA-N coenzime A Natural products OC1C(OP(O)(O)=O)C(COP(O)(=O)OP(O)(=O)OCC(C)(C)C(O)C(=O)NCCC(=O)NCCS)OC1N1C2=NC=NC(N)=C2N=C1 RGJOEKWQDUBAIZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005516 coenzyme A Substances 0.000 description 1
- 229940093530 coenzyme a Drugs 0.000 description 1
- 239000003184 complementary RNA Substances 0.000 description 1
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 1
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 1
- 239000013601 cosmid vector Substances 0.000 description 1
- 125000000151 cysteine group Chemical group N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 description 1
- 229940127089 cytotoxic agent Drugs 0.000 description 1
- 239000002254 cytotoxic agent Substances 0.000 description 1
- 231100000599 cytotoxic agent Toxicity 0.000 description 1
- 239000013530 defoamer Substances 0.000 description 1
- KDTSHFARGAKYJN-UHFFFAOYSA-N dephosphocoenzyme A Natural products OC1C(O)C(COP(O)(=O)OP(O)(=O)OCC(C)(C)C(O)C(=O)NCCC(=O)NCCS)OC1N1C2=NC=NC(N)=C2N=C1 KDTSHFARGAKYJN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 229950006137 dexfosfoserine Drugs 0.000 description 1
- MNNHAPBLZZVQHP-UHFFFAOYSA-N diammonium hydrogen phosphate Chemical compound [NH4+].[NH4+].OP([O-])([O-])=O MNNHAPBLZZVQHP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000006073 displacement reaction Methods 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 210000005069 ears Anatomy 0.000 description 1
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 1
- 235000013312 flour Nutrition 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 235000011389 fruit/vegetable juice Nutrition 0.000 description 1
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 229960003180 glutathione Drugs 0.000 description 1
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 1
- ZEMPKEQAKRGZGQ-XOQCFJPHSA-N glycerol triricinoleate Natural products CCCCCC[C@@H](O)CC=CCCCCCCCC(=O)OC[C@@H](COC(=O)CCCCCCCC=CC[C@@H](O)CCCCCC)OC(=O)CCCCCCCC=CC[C@H](O)CCCCCC ZEMPKEQAKRGZGQ-XOQCFJPHSA-N 0.000 description 1
- 235000013882 gravy Nutrition 0.000 description 1
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 1
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 1
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 1
- 208000030603 inherited susceptibility to asthma Diseases 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 229910000358 iron sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- BAUYGSIQEAFULO-UHFFFAOYSA-L iron(2+) sulfate (anhydrous) Chemical compound [Fe+2].[O-]S([O-])(=O)=O BAUYGSIQEAFULO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 244000145841 kine Species 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 235000020778 linoleic acid Nutrition 0.000 description 1
- OYHQOLUKZRVURQ-IXWMQOLASA-N linoleic acid Natural products CCCCC\C=C/C\C=C\CCCCCCCC(O)=O OYHQOLUKZRVURQ-IXWMQOLASA-N 0.000 description 1
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 1
- 229960004452 methionine Drugs 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 238000013508 migration Methods 0.000 description 1
- 230000005012 migration Effects 0.000 description 1
- 229910000402 monopotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019796 monopotassium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- WQEPLUUGTLDZJY-UHFFFAOYSA-N n-Pentadecanoic acid Natural products CCCCCCCCCCCCCCC(O)=O WQEPLUUGTLDZJY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 210000002445 nipple Anatomy 0.000 description 1
- 125000004433 nitrogen atom Chemical group N* 0.000 description 1
- JCXJVPUVTGWSNB-UHFFFAOYSA-N nitrogen dioxide Inorganic materials O=[N]=O JCXJVPUVTGWSNB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000021048 nutrient requirements Nutrition 0.000 description 1
- QIQXTHQIDYTFRH-UHFFFAOYSA-N octadecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(O)=O QIQXTHQIDYTFRH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OQCDKBAXFALNLD-UHFFFAOYSA-N octadecanoic acid Natural products CCCCCCCC(C)CCCCCCCCC(O)=O OQCDKBAXFALNLD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000014593 oils and fats Nutrition 0.000 description 1
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000005985 organic acids Nutrition 0.000 description 1
- 125000001477 organic nitrogen group Chemical group 0.000 description 1
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 1
- 229960000464 oxandrolone Drugs 0.000 description 1
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 1
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 1
- PJNZPQUBCPKICU-UHFFFAOYSA-N phosphoric acid;potassium Chemical compound [K].OP(O)(O)=O PJNZPQUBCPKICU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052698 phosphorus Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011574 phosphorus Substances 0.000 description 1
- 239000013600 plasmid vector Substances 0.000 description 1
- 229920001522 polyglycol ester Polymers 0.000 description 1
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 1
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 1
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000037425 regulation of transcription Effects 0.000 description 1
- 230000009712 regulation of translation Effects 0.000 description 1
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 1
- -1 serine phosphoric acid ester Chemical class 0.000 description 1
- 238000010008 shearing Methods 0.000 description 1
- 208000013220 shortness of breath Diseases 0.000 description 1
- 229910052709 silver Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000003549 soybean oil Substances 0.000 description 1
- 235000012424 soybean oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 239000008117 stearic acid Substances 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
- 125000004434 sulfur atom Chemical group 0.000 description 1
- DHCDFWKWKRSZHF-UHFFFAOYSA-N sulfurothioic S-acid Chemical compound OS(O)(=O)=S DHCDFWKWKRSZHF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002600 sunflower oil Substances 0.000 description 1
- 235000013529 tequila Nutrition 0.000 description 1
- 230000005030 transcription termination Effects 0.000 description 1
- 241001515965 unidentified phage Species 0.000 description 1
- 235000013311 vegetables Nutrition 0.000 description 1
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 1
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 1
- 108700026220 vif Genes Proteins 0.000 description 1
- KUZYSQSABONDME-QRLOMCMNSA-N vintafolide Chemical compound C([C@H](C[C@]1(C(=O)OC)C=2C(=CC3=C([C@]45[C@H]([C@@]([C@H](O)[C@]6(CC)C=CCN([C@H]56)CC4)(O)C(=O)NNC(=O)OCCSSC[C@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CC[C@H](NC(=O)C=4C=CC(NCC=5N=C6C(=O)NC(N)=NC6=NC=5)=CC=4)C(O)=O)C(O)=O)N3C)C=2)OC)C[C@@](C2)(O)CC)N2CCC2=C1NC1=CC=CC=C21 KUZYSQSABONDME-QRLOMCMNSA-N 0.000 description 1
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 1
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 1
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 1
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P13/00—Preparation of nitrogen-containing organic compounds
- C12P13/04—Alpha- or beta- amino acids
- C12P13/06—Alanine; Leucine; Isoleucine; Serine; Homoserine
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/0004—Oxidoreductases (1.)
- C12N9/0006—Oxidoreductases (1.) acting on CH-OH groups as donors (1.1)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/14—Fungi; Culture media therefor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/10—Transferases (2.)
- C12N9/1085—Transferases (2.) transferring alkyl or aryl groups other than methyl groups (2.5)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/10—Transferases (2.)
- C12N9/1096—Transferases (2.) transferring nitrogenous groups (2.6)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/16—Hydrolases (3) acting on ester bonds (3.1)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P13/00—Preparation of nitrogen-containing organic compounds
- C12P13/04—Alpha- or beta- amino acids
- C12P13/12—Methionine; Cysteine; Cystine
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y101/00—Oxidoreductases acting on the CH-OH group of donors (1.1)
- C12Y101/01—Oxidoreductases acting on the CH-OH group of donors (1.1) with NAD+ or NADP+ as acceptor (1.1.1)
- C12Y101/01095—Phosphoglycerate dehydrogenase (1.1.1.95)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y205/00—Transferases transferring alkyl or aryl groups, other than methyl groups (2.5)
- C12Y205/01—Transferases transferring alkyl or aryl groups, other than methyl groups (2.5) transferring alkyl or aryl groups, other than methyl groups (2.5.1)
- C12Y205/01065—O-Phosphoserine sulfhydrylase (2.5.1.65)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y206/00—Transferases transferring nitrogenous groups (2.6)
- C12Y206/01—Transaminases (2.6.1)
- C12Y206/01052—Phosphoserine transaminase (2.6.1.52)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y301/00—Hydrolases acting on ester bonds (3.1)
- C12Y301/03—Phosphoric monoester hydrolases (3.1.3)
- C12Y301/03003—Phosphoserine phosphatase (3.1.3.3)
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Virology (AREA)
- Botany (AREA)
- Mycology (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
Винахід стосується мікроорганізму з посиленою активністю поліпептиду, здатного до експорту О-фосфосерину (OPS), та способу отримання О-фосфосерину, цистеїну або похідної цистеїну із застосуванням цього мікроорганізму.
Description
Винахід стосується мікроорганізму, здатного виробляти О-фосфосерин, та способу отримання О-фосфосерину, цистеїну або похідної цистеїну із застосуванням цього мікроорганізму.
Ї-цистеїн, амінокислота, яка відіграє важливу роль у метаболізмі сірки у всіх живих організмах є застосованою не тільки у синтезі біологічних білків, як-то кератину волосся, глютатіону, біотину, метіоніну та інших сірковмісних метаболітів, але й також вона є попередником, потрібним для біосинтезу коферменту А.
Відомими способами отримання І -цистеїну із застосуванням мікроорганізмів є: 1) спосіб біологічного перетворення 0, І-АТС на І -цистеїн із застосуванням мікроорганізмів; 2) спосіб отримання І -цистеїну шляхом безпосереднього бродіння із застосуванням Е. соїї (ЕРОВ859628В;
МУада М апа ТакКаді Н, Аррі. МісгобріоІ. Віоспет., 73:48-54, 2006) та 3) спосіб отримання О- фосфосерину (далі позначено, як "ОР5") шляхом бродіння із застосуванням мікроорганізмів та перетворення ОРБ5 на І-цистеїн шляхом реакції ОРЗ з сульфідом під дією каталізатора О- фосфосерин-сульфгідрилази (далі позначено, як "ОРЗ5") |(Патент Кореї Мо 13810481.
Зокрема для отримання цистеїну із застосуванням способу 3) з великим виходом необхідно отримати надмірні концентрації сполуки-попередника ОР. У зв'язку з цим винахідники здійснили великі зусилля для виявлення прийнятного експортного фактора, який дозволяє здійснити безперешкодний експорт з клітин О-фосфосерину, утвореного здатним до експресії
ОРБ мікроорганізмом.
У цих умовах винахідники виявили два нових пов'язаних з виробленням ОРЗ поліпептиди,
Упп5 та МОЮ та підтвердили, що ОР5 може бути ефективно експортовано з мікроорганізму, який виробляє ОРЗ шляхом активування цих двох поліпептидів, тим самим закінчуючи цей винахід.
Отже, метою цього винаходу є отримання мікроорганізму, який виробляє ОР5 з підвищенням активності поліпептиду, здатного до експорту ОРБ5 порівняно з його ендогенною активністю.
Іншою метою цього винаходу є надання способу отримання ОР, який полягає у культивуванні мікроорганізму, який виробляє ОР5 у середовищі та у відокремленні ОРЗ від мікроорганізму, який його виробляє або від його культури.
Зо Іншою метою винаходу є забезпечення застосувань процесу вироблення або експорту ОР5 з допомогою поліпептиду.
Іншою метою цього винаходу є надання способу отримання цистеїну або його похідної, який полягає у а) виробленні ОРЗ культивуванням у середовищі мікроорганізму, який виробляє ОРБ, причому активність поліпептиду, здатного до експорту ОР5 є підвищеною порівняно з його ендогенною активністю та у Б) реакції ОРБ5, отриманого а) або в культурі, яка містить цю сполуку разом з сульфідом в присутності ОР5-сульфгідрилази або мікроорганізму, здатного до її експресії.
Новий поліпептид з амінокислотною послідовністю 5ЕО ІО Ме 1 або 5ЕО ІО Мо 2 за винаходом має відмінну ОР5-експортуючу здатність. Відповідно, у разі застосування нового поліпептиду за винаходом до мікроорганізму, здатного виробляти ОР5, це може призвести до великого виходу вироблення ОР5 та також може бути ефективно застосовано для синтезу І - цистеїну тощо.
Опис фігур.
На Фіг. 1 зображено графічну ілюстрацію результату вимірювань внутрішньоклітинної концентрації ОРЗ з допомогою високоефективної рідинної хроматографії (ВЕРХ) після усунення всього ОР, експортованого з культури рекомбінантного мікроорганізму за винаходом з покращеними функціями білків УПА5 та Маю.
У одному аспекті винахід стосується мікроорганізму, який виробляє ОРБ, причому активність поліпептиду, який має амінокислотну послідовність зЗЕО ІЮ Мо 1 або 5ЕО ІЮ Мо 2 та є здатним до експорту О-фосфосерину є підвищеною порівняно з його ендогенною активністю.
Як тут застосовано, термін "О-фосфосерин" (надалі позначено, як "ОР5") стосується естеру серину та фосфорної кислоти, який є компонентом багатьох білків. Зокрема ОР5 є попередником І-цистеїну та його може бути перетворено на цистеїн шляхом реакції з сульфідом під дією каталізатора ОР5-сульфгідрилази (надалі позначено, як "ОРБЗ5") (Патент
Кореї Мо 1381048). Відповідно, це є важливим фактором збільшення вироблення ОРЗ для отримання цистеїну, отже виникла потреба у розробці транспортерів, здатних здійснювати ефективну секрецію внутрішньоклітинного ОРЗ зі штамів, які виробляють цю сполуку.
Як тут застосовано, термін "поліпептид, що має активність до експорту О-фосфосерину" стосується мембранного білка, що має активність, яка полягає у експортуванні ОР5 у клітині до 60 її зовнішньої поверхні та особливо це може бути мембранний білок, який походить з Е. сої. У разі усунення пригнічення росту бактерій за наявністю надлишкової кількості ОР5 в клітинах Е.
Соїї було визначено два типи мембранних білків. Цими визначеними мембранними білками зі здатністю до експорту ОР5 були білок-транспортер УпИйЗ5 МЕ5, якій належав до надродини мембранних транспортерів (МЕ5) та мав амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ Мо 1 та білок- транспортер Ме9дВ МЕ5, який мав амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮО Мо 2. Відповідно за винаходом, терміни "транспортер Ме9В МЕ5" та "Ма" може бути застосовано взаємозаміно.
До першій перевірці у цьому винаході про ОР5-експортуючу здатність цього білка не було нічого відомо.
Додатково, цей поліпептид може бути амінокислотною послідовністю, наведеною, як ЗЕО ІЮ
Мо 1 або 5ЕО ІЮ Мо 2 та може включати, але без обмеження, мембранний білок, який має послідовність з принаймні 70 95 гомології послідовності до вищезазначених послідовностей, переважно принаймні 80 95, більш переважно принаймні 90 95 та більш переважно принаймні 95 95 гомології послідовності, допоки вони будуть зберігати власну ОР5-експортуючу здатність, яка є суттєво такою ж саме або еквівалентною ОР5Б-експортуючій здатності зазначеного поліпептиду. Крім того, очевидно, що варіанти цього поліпептиду з делецією, модифікацією, заміщенням або вставкою частини послідовності також повинні знаходитися в межах обсягу зазначеного винаходу, допоки вони є амінокислотними послідовностями, які мають ці гомології та ОРЗ-експортуючу здатність.
Також слід додати, що полінуклеотидна послідовність поліпептиду з ОРЗ-експортуючою здатністю може містити полінуклеотидні послідовності, що кодують амінокислоти, представлені послідовностями ЗЕО ІЮО Мо 1 або 5ЕО ІЮО Ме 2. Також слід зазначити можливість здійснення різних модифікацій кодуючої ділянки, але без змінення амінокислотної послідовності поліпептиду, беручи до уваги те, що основою кодонів, які переважно зустрічаються в організмах є виродження генетичного коду. Такою полінуклеотидною послідовністю може бути амінокислотна послідовність, наведена, як ЗЕО ІЮО Мо З або 5ЕО ІО Ме 4 та вона може містити, але без обмеження, нуклеотидні послідовності з принаймні 70 95 гомологією послідовності до цих послідовностей.
Як тут застосовано, термін "гомологія" стосується ступеню тотожності з заданою поліпептидною або полінуклеотидною послідовністю та цю величину може бути відображено у відсотках. Як тут застосовано, гомологічну послідовність, що має активність, однакову або подібну до активності певної поліпептидної або полінуклеотидної послідовності може бути визначено у вигляді "відсотка гомології". Цей відсоток гомології може бути підтверджено із застосуванням стандартного програмного забезпечення, тобто програмного забезпечення
ВІ А5Т 2.0, призначеного для обчислення відповідних параметрів, як-то кількості, тотожності та подібності або шляхом порівняння послідовностей з допомогою експериментів із застосуванням гібридизації по Саузерну та відповідні умови гібридизації для такого визначення може бути визначено з допомогою способу, добре відомого фахівцям в цій галузі (див., наприклад, нижче, у виданні затюогоок еї аї!., 19891.
У зразковому втіленні винаходу було підтверджено, що у разі посилення активних властивостей білка УП (ЗЕБЕО ІЮО Мо 1) або Ма (ЗЕО ІЮ Мо 2) у мікроорганізмі, здатному виробляти ОРБ, цей мікроорганізм, як було виявлено, набував відмінної здатності до експорту
ОРЗ порівняно зі штамом, в якому було посилено дію білка КПІВ (Публікація заявки на патент
Кореї Мо 10-2012-0041115) (позитивний контроль) або штамом, в якому було посилено активні властивості транспортерів надродини МЕ5 ЕтгО або Усар (експериментальна група). Білок
ВАВ є омембранним білком, який кодується геном (ПІВ та може експортувати гомосерин/гомосерин-лактон. Оскільки вже було підтверджено, що посилення активності ЕМВ у штамі, який виробляє ОРЗ призводить до збільшення ОР5-експортуючої спроможності цього штаму (Патент Кореї Мо 138104), його було застосовано, як позитивний контроль. У разі посилення активних властивостей білка КПІВ та білків винаходу УЗ та МОЮ у штамі, який
БО виробляє ОР5 було виявлено, що, відповідно, білок ЕЛІВ та білки винаходу УПИЗ5 та МАЮ демонструють відмінні здатності до експорту ОРЗ до білка ЕМПІВ. Також слід додати, що терміни "ЕтгО" та "Усар" мають відношення до транспортерних білків Е. сої, які належать до надродини
МЕЗ та кодуються, відповідно, геном етгО та геном усабр. Білки ЕтгО та усаб, які належать до транспортерів надродини МЕ5, які і білки УпйЗ та Маш, було застосовано, як експериментальну групу для перевірки можливого виявлення ОР5-експортуючих властивостей у інших білків, які також є транспортерами цієї надродини. В результаті було підтверджено, що білки ЕтгО та Усабр, на відміну від білків УпйЗ5 та МОЮ, не виявляють ОР5-експортуючих властивостей.
В той же час поліпептид за винаходом має ОР5-експортуючу здатність, тому у разі, коли бо активність цього поліпептиду є підвищеною порівняно з його ендогенною активністю у мікроорганізмі, який може виробляти ОР5, може бути досягнуто ефективне вироблення цієї сполуки.
Як тут застосовано, термін "вироблення ОР" стосується не тільки отримання ОР5 в клітинах штаму бактерій, але й також експорту сполуки у клітині до її зовнішньої поверхні, наприклад, у середовище та зокрема експорту ОР з внутрішньої частини до зовнішньої поверхні клітини.
Як тут застосовано, термін "ендогенна активність" стосується активного стану поліпептиду у мікроорганізмі, який знаходиться у природному, тобто немодифікованому стані.
Як тут застосовано, термін "посилення порівняно з ендогенною активністю" стосується збільшеної активності поліпептиду у мікроорганізмі порівняно з активністю цієї сполуки у власному природному стані та є поняттям, яке включає надання активності певному поліпептиду у мікроорганізмі, який не має активності певного поліпептиду.
Як тут застосовано, термін "посилення активності" стосується, хоча це не є специфічним обмеженням, не тільки демонстрації підвищеної (порівняно з природною функцією) дії, яка є наслідком збільшення активності самого поліпептиду, але й також і збільшення активності білка внаслідок збільшення активності ендогенного гену, ампліфікації ендогенного гену, спричиненої зовнішніми та внутрішніми факторами, переміщенням, модифікації або мутації промотора тощо.
Особливо посилення цієї активності може бути здійснено з допомогою певних способів, як-то, але без обмеження, спосіб збільшення кількості копій гена, що кодує в клітині цей поліпептид, спосіб змінення регуляторної послідовності цього гена, спосіб заміщення гена, що кодує цей поліпептид на хромосомі геном, що містить мутацію, привнесену для збільшення активності цього поліпептиду, спосіб введення модифікації у ген, який кодує на хромосомі цей поліпептид з метою посилення активності цього поліпептиду тощо. Ці способи збільшення активності може бути застосовано таким саме чином також для покращення активних властивостей інших поліпептидів за винаходом.
Зазначене вище збільшення кількості копій гена може бути виконано без особливого обмеження у стані функціонального зв'язування з вектором або шляхом вставки в хромосому клітини-хазяїна. Особливо цей спосіб може бути здійснено шляхом введення вектора, з допомогою якого полінуклеотид, який кодує білок за винаходом є функціонально приєднаним до
Зо клітини-хазяїна та який може бути піддано реплікації та функціонувати у цій клітині незалежно від неї; або шляхом введення вектора, до якого полінуклеотид, який кодує білок за винаходом є функціонально приєднаним та здатного здійснювати вставку цього полінуклеотиду у хромосому клітини-хазяїна у цій клітині. Вставку цього полінуклеотиду у хромосому може бути здійснено із застосуванням відомого у цій галузі способу, наприклад, шляхом гомологічної рекомбінації.
Оскільки вектор за винаходом може бути вставлено у хромосому шляхом гомологічної рекомбінації, він також може містити селективний маркер для підтвердження цієї вставки у хромосому. Цей селективний маркер застосовують для відбору трансформованої клітини, тобто з метою підтвердження вставки бажаного полінуклеотиду та крім того може бути застосовано маркери, здатні до надання прийнятних для відбору фенотипічних особливостей, як-то, але без обмеження, стійкість до дії ліків, потрібність у поживних речовинах, стійкість до цитотоксичних засобів, експресія поверхневих білків тощо. В умовах застосування цих селективних засобів лише клітини, здатні до експресії селективних маркерів можуть вижити або вони є здатними до експресії інших фенотипічних ознак, отже може бути легко здійснено відбір трансформованих клітин.
Зазначений вектор може бути конструкцією на основі ДНК, що містить полінуклеотидну послідовність, що кодує бажаний білок, функціонально приєднану до прийнятної регуляторної послідовності для забезпечення експресії бажаного білка у відповідному хазяїні. Ця регуляторна послідовність містить промотор, здатний до започатковування транскрипції, випадкову операторну послідовність для регулювання транскрипції, послідовність, що кодує прийнятний
МРНК-рибосомно-зв'язуючий домен та послідовність для регулювання транскрипції та трансляції. Після трансформації у прийнятній клітині-хазяїні цей вектор може бути піддано реплікації або іншій незалежній від генома хазяїна функції або цей вектор також може бути інтегровано у геном хазяїна.
Застосований у винаході вектор може не бути певним чином обмеженим, допоки він може відтворюватися у клітині-хазяїні та взагалі може бути застосовано будь-який відомий у цій галузі вектор. Приклади такого вектора можуть включати природні або рекомбінантні плазміди, косміди, віруси та бактеріофаги. Як фаговий або космідний вектор, наприклад, може бути застосовано вектори рУУМЕ15, М13, АМВІ 3, АМВІ 4, АІХІЇ, ЛАЗНІЇ, ЛХАРІЇ, НО, ЛИ, СпагопаА,
Спагоп21А тощо; як плазмідний вектор може бути застосовано вектори рВК, рис, рВішпезсгірн,
рРОЕМ, ртТ7, рес, рЕТ, тощо. Переважно може бути застосовано вектори рО7, рАСУС177, рАСУС184, рСІ, рЕССО117, рОсС19, рВК322, РМУМ118, рРесС1ВАС тощо.
Як тут застосовано, термін ""-трансформація" стосується процесу введення клітині-хазяїну вектора, який містить полінуклеотид, що кодує бажаний білок, тим самим дозволяючи здійснення у клітині-хазяїні експресії полінуклеотиду, в якому закодовано цей білок. Слід зазначити, що для трансформованого полінуклеотиду не має жодного значення, чи його буде вставлено та розміщено у хромосомі клітини-хазяїна або чи його буде розташовано поза цією хромосомою, допоки буде зберігатися його експресія у клітині-хазяїні. Додатково цей полінуклеотид також включає ДНК та РНК, які кодують бажаний білок. Цей полінуклеотид може бути вставлено у будь-якій формі таким чином, що його може бути введено у клітину-хазяїна та отримано його експресію в цій клітині. Наприклад, цей полінуклеотид може бути введено у клітину-хазяїна у вигляді експресійної касети, яка є генетичною конструкцією, що включає, але без обмеження, всі необхідні елементи, потрібні для самостійної експресії. Звичайно ця касета може містити промотор, функціонально приєднаний до полінуклеотиду, сигнал закінчення (термінації) транскрипції, домен, який зв'язує рибосому та сигнал закінчення трансляції.
Експресійна касета також може існувати у вигляді здатного до самостійної реплікації вектора експресії. Зазначений полінуклеотид також може бути введено у клітину-хазяїна "як він є" та функціонально приєднано до послідовності, необхідної для його експресії у клітині-хазяїні.
Додатково, як тут застосовано, термін "функціонально приєднано" стосується функціонального зв'язку між промоторною послідовністю, яка започатковує та опосередковує транскрипцію полінуклеотиду, який кодує бажаний білок винаходу та вищезазначеною генетичною послідовністю.
Отже, модифікацію послідовності, яка регулює експресію для збільшення експресії полінуклеотиду може бути здійснено, але без особливого обмеження, шляхом викликання змінення в цієї полінуклеотидної послідовності 3 допомогою делеції, вставки, консервативного чи неконсервативного заміщення або їх комбінації таким чином, що це буде призводити до додаткового посилення активності послідовності, яка регулює експресію; або шляхом заміщення полінуклеотидної послідовності на полінуклеотидну послідовність з сильнішою активністю. Послідовність, яка регулює експресію може містити, але без особливого обмеження,
Зо промоторну, операторну послідовність, послідовність, що кодує домен, який зв'язує рибосому та послідовність, потрібну для регулювання закінчення транскрипції та трансляції тощо.
Замість власного промотора може бути застосовано сильний промотор, який може бути приєднано, але без обмеження, до верхнього кінця одиниці експресії полінуклеотиду.
Прикладами відомих сильних промоторів можуть бути промотор сі/1 (Патент Кореї Мо 06200921, промотор Іас, промотор ігр, промотор їгс, промотор їас, промотори РК та РІ з фага А та промотор ївї.
Крім того, модифікацію послідовності полінуклеотиду на хромосомі може бути здійснено, але без особливого обмеження, шляхом викликання змінення послідовності, яка регулює експресію послідовності цього полінуклеотиду з допомогою делеції, вставки, консервативного чи неконсервативного заміщення або їх комбінації що буде призводити до додаткового посилення активності полінуклеотидної послідовності; або шляхом заміщення (цієї полінуклеотидної послідовності на полінуклеотидну послідовність з сильнішою активністю.
Звичайно введення та посилення активності білка може збільшити активність або концентрацію відповідного білка порівняно до активності або концентрації природного білка або цих показників у штамі мікроорганізму на принаймні 1 Фо, 10 Фо, 25 У, 50 У, 75 905, 100 Уо, 150 Фо, 200 90, 300 У5, 400 95, або 500 95 та до максимального значення у 1000 95 або 2000 95, але без обмеження.
Як тут застосовано, термін "мікроорганізм, який виробляє ОРБ5" стосується прокаріотичного або еукаріотичного мікробного штаму, здатного виробляти ОРб5 та особливо стосується отриманого шляхом генної інженерії мікроорганізму, здатного накопичувати ОР5Б.
У зразковому втіленні винаходу мікроорганізм не має певних особливих обмежень, тобто це може бути будь-який прокаріотичний або еукаріотичний мікроорганізм, який може виробляти
ОРЗ у разі посилення активних властивостей поліпептиду з послідовністю 5ЕО ІЮО Мо 1 або 2 та переважно це є прокаріотичний мікроорганізм. Приклади такого мікроорганізму можуть включати штами мікроорганізмів, які належать до роду ЕвсПегісніа, роду Егміпіа, роду 5е!їтаїйа, роду Ргомідепсіа, роду Согупебасієйуцт та роду Вгемірасіегцт. Переважно цим мікроорганізмом може бути мікроорганізм, який належить до роду ЕзсПегіспіа та більш переважно це може бути
Е. соїї. Зокрема мікроорганізм, який належить до роду ЕзсПегісніа або роду Согуперасієгійт може виробляти ОРБ5 та І-серин, оскільки він містить білки ЗегА, бегС та зЗегВ, які є 60 ферментами шляху біосинтезу І!-серину |(Анйтей 7апоог, Сотриїайопа! апа Зтисишгаї!
ВіоїесппоЇоду доштпаї, мої. 3, 2012 Осіобег; Уепаїзсй МЕ еї а!., Ст Оріп Місгобіо!. 2006 дип; 9(3): 268-74; Реїег5-Мепаївси Р еїаї., Аррі Епмігоп Місгобріо!. 2005 Мом; 71(11): 7139-44).
Крім того, слід зазначити, що у мікроорганізмі, який виробляє ОРЗ може бути додатково послаблено активність фосфосеринфосфатази (ЗегВ) порівняно до її ендогенної активності.
Активність ЗегВ стосується перетворення ОРЗ на І -серин, отже мікроорганізм, змінений зі зменшенням активності ЗегВ має відповідну властивість, яка полягає у накопичуванні в ньому
ОРБ, отже він є корисним для отримання ОР5. 5егВ може бути білком, який має, але без обмеження, амінокислотну послідовність, представлену, як 5ХЕО ІЮ Мо 17 або 5ЕО ІЮ Мо 18.
Також 5егВ може містити амінокислотну послідовність, що має, але без обмеження, 80 95 або більше, переважно 90 95 або більше, переважно 95 95 або більше та більш переважно 99 95 або більше тотожності послідовності допоки вона виявляє активність егВ. Крім того, полінуклеотидна послідовність, що кодує 5егВ може мати полінуклеотидну послідовність, що кодує амінокислоти, представлені послідовностями ЗЕО ІЮ Мо 17 або ЗЕО ІО Мо 18.
З огляду на кодони, які є переважними для організмів для експресії зазначеного поліпептиду на основі виродження генетичного коду, може бути здійснено різні модифікації кодуючої ділянки цього полінуклеотиду без змінення його амінокислотної послідовності. Ця полінуклеотидна послідовність може бути амінокислотною послідовністю, представлену, як ЗЕО ІЮО Мо 19 або
ЗБО ІО Мо 20 та вона може містити нуклеотидні послідовності, які мають тотожність послідовності до неї, що складає, але без обмеження, 80 95 та переважно принаймні 90 95.
Як тут застосовано, термін "послаблення порівняно з ендогенною активністю" стосується зменшення активності білка порівняно з активністю цього білка у природному стані, включаючи усунення цієї активності.
Це послаблення є поняттям з посиланням на випадок, коли активність білка є зменшеною порівняно з активністю, яка спочатку притаманна цьому мікроорганізму та це зменшення є наслідком модифікації гена, який кодує цей білок тощо, посиланням на випадок, коли рівень загальної експресії білка є нижчим, ніж рівень загальної експресії білка, отриманий з природного штаму мікроорганізму внаслідок пригнічення експресії або трансляції гена, який його кодує, або на випадок, коли експресія гена не відбувається зовсім та випадок, коли експресія гена відбувається, але ген не виявляє активності.
Зо Це послаблення або інактивування активності білка може бути досягнуто з допомогою різних добре відомих в цій галузі способів, прикладами яких можуть бути спосіб заміщення гена, що кодує білок на хромосомі іншим геном з мутацією, яка призводить до зниження ферментативної активності, включаючи випадок усунення активності білка; спосіб модифікації послідовності, яка регулює експресію гена, що кодує цей білок; спосіб усунення гена, що кодує білок на хромосомі або частини цього гена; спосіб введення антисенсового олігонуклеотиду (наприклад, антисенсової РНК), який пригнічує механізм трансляції біль»а на мРНК шляхом комплементарного зв'язування з транскриптом розташованого у хромосомі гена; спосіб утворення структури, яка робить неможливим прикріплення рибосоми, тобто утворення вторинної структури шляхом штучного додавання послідовності Шайна-Дальгарно (50) та її комплементарної послідовності до переднього кінця 50 - послідовності гена, що кодує цей білок; застосування інженерії із зворотною транскрипцією (КТЕ), яке полягає у додаванні промотора, здатного до зворотної транскрипції на 3" кінці відкритої рамки зчитування (ОКЕ) відповідної послідовності тощо; а також включає, але без обмеження, застосування їх комбінацій.
Наприклад, спосіб усунення гена, що кодує білок на хромосомі або частини цього гена може бути впроваджено шляхом заміщення полінуклеотиду, що кодує ендогенний бажаний білок у хромосомі іншим полінуклеотидом або маркерним геном з частково вилученою послідовністю нуклеїнової кислоти із застосуванням вектора для вставки хромосом у бактерію. У зразковому втіленні усунення гена може бути здійснено шляхом гомологічної рекомбінації. Додатково, як тут застосовано, термін "частина", хоча й може змінюватися в залежності від видів полінуклеотиду, зокрема може означати ділянку, яка складає, але без обмеження, 1- 300 нуклеотидів, переважно 1-100 нуклеотидів та переважніше 1-50 нуклеотидів.
Додатково спосіб модифікації послідовності, яка регулює експресію може бути впроваджено шляхом викликання змінення послідовності, яка регулює експресію з допомогою делеції, вставки, консервативного або неконсервативного заміщення або їх комбінації, яке призводить до подальшого ослаблення активності послідовності, яка регулює експресію; або шляхом заміщення цієї послідовності послідовністю нуклеїнової кислоти з більш слабкою активністю.
Послідовність, яка регулює експресію містить промотор, операторну послідовність, послідовність, що кодує домен зв'язування рибосоми та послідовність, що регулює бо транскрипцію та трансляцію.
Додатково спосіб модифікації послідовності гена може бути впроваджено шляхом викликання змінення цієї послідовності шляхом делеції, вставки, консервативного або неконсервативного заміщення або їх комбінації, яке призводить до подальшого ослаблення активності білка; або шляхом заміщення цієї послідовності послідовністю гена, зміненою таким чином, що її застосування призводить до послаблення або до усунення цієї активності.
Також слід зазначити, що мікроорганізм, який виробляє ОР5 може бути мікроорганізмом з додатковим посиленням активних властивостей фосфогліцерат- дегідрогенази (ЗегА) або фосфосеринамінотрансферази (Зегс) порівняно з їх ендогенними активними властивостями. зегА є білком, здатним перетворювати 3-фосфогліцерат на 3-фосфо-гідроксипіруват та для застосування ЗегА може бути вжито ген дикого типу або варіант з усуненням відповідної реакції на серин. 5егс є білком, здатним перетворювати 3-фосфо-гідроксипіруват на ОРБ5Б. Відповідно, для вироблення ОРЗ може бути ефективно застосовано будь-який мікроорганізм з посиленими активними властивостями 5егА та/або Зегс.
Білок БегА може мати амінокислотну послідовність, вибрану з групи, яка складається з послідовностей 5ЕО ІЮ МоМо 21-26, але не обмежуючись ними. Послідовність зХЕО ІЮ Мо 21 є послідовністю білка ЗегА дикого типу та послідовності ЗЕО ІЮ МоМо 22-26 є послідовностями варіантів з усуненням відповідної реакції на серин. Додатково, до цих послідовностей може бути включено, але без обмеження, амінокислотні послідовності, які мають принаймні 80 95 тотожності власної послідовності до вищезазначених амінокислот, особливо принаймні 90 95, переважно принаймні 95 95 та більш переважно принаймні 99 95, допоки вони будуть виявляти активні властивості білка ЗегА дикого типу або варіанти 5егА з усуненням відповідної реакції на серин. Варіанти з усуненням цієї відповідної реакції є білками, отриманими внаслідок модифікації, введеної в ген, який кодує білок шляхом вставки, заміщення тощо, що тим самим дозволяє їм підтримувати активність внаслідок пригнічення відповідної реакції на серин або гліцин або які мають покращені власні активні властивості та ці варіанти з усуненням механізму відповідної реакції зараз вже є добре відомими (|Сгапі гА еї аї., У. ВіоЇ. Спет., 39: 5357-5361, 1999; ггапі гА еї аї., Віоспет., 39: 7316-7319, 2000; папі гА еї аї., 9. ВіоЇї. Спет., 276: 17844- 17850, 2001; Реїег5-Мепаїб5си Р еї аї., Аррі. Містобріо!. Віоїесппо!., 60: 437-441, 2002; ЕР Раї.
Мо. ЕРОЗ94З3687В1І.
Також слід додати, що полінуклеотидна послідовність, яка кодує білок ЗегА дикого типу або його варіанти з усуненням відповідної реакції на серин може бути полінуклеотидною послідовністю, що кодує будь-яку амінокислотну послідовність з групи 5ЕО ІЮ МоМо 21-26, але без обмеження ними. Внаслідок виродженності генетичного коду або враховуючи кодони, переважно застосовані організмами для експресії зазначеного поліпептиду може бути здійснено різні модифікації полінуклеотиду, які зачіпають його кодуючу ділянку без змінення амінокислотної послідовності цього поліпептиду. Такою полінуклеотидною послідовністю може бути, наприклад, будь-яка з полінуклеотидних послідовностей з групи 5ЕО ІЮ МоМо 27-32 та вона може мати нуклеотидну послідовність, яка має принаймні 80 95 тотожності до цих полінуклеотидних послідовностей та зокрема, але без обмеження, принаймні 90 95 тотожності.
Білок ЗегС може бути білком з амінокислотною послідовністю, наприклад, але без обмеження, представленою, як ЗЕО ІЮО Мо 33. Також слід зазначити, що ця амінокислотна послідовність, допоки вона буде виявляти активні властивості ЗегС, може включати амінокислотні послідовності, які мають принаймні 8095 тотожності послідовності до вищезазначеної амінокислотної послідовності, переважно принаймні 90 95, більш переважно принаймні 95 95 та більш переважно, але без обмеження, принаймні 99 95 тотожності.
Крім того, полінуклеотидна послідовність, що кодує білок ЗегС може бути послідовністю, що кодує амінокислотну послідовність, представлену, як ЗЕО ІЮО Мо 33. Внаслідок виродженності генетичного коду або враховуючи кодони, переважно застосовані організмами для експресії зазначеного поліпептиду може бути здійснено різні модифікації полінуклеотиду, які зачіпають його кодуючу ділянку без змінення амінокислотної послідовності цього поліпептиду. Такою полінуклеотидною послідовністю може бути, наприклад, послідовність, представлена, як ЗЕО ІЮ
Мо 34 та вона може мати нуклеотидну послідовність, що має принаймні 80 95 гомології до цих полінуклеотидних послідовностей та особливо, але без обмеження, принаймні 90 95 гомології.
Також цей мікроорганізм може бути мікроорганізмом із додатковим послабленням здатності до введення або до руйнування ОРЗ у клітині.
Як посилання для цього винаходу стосовно вмісту мікроорганізму, який виробляє ОРБ, на додачу до описаного вище також може бути застосовано інформацію, наведену у Патенті Кореї
Мо 1381048 або у публікації патентної заявки США Мо 2012-0190081.
У іншому аспекті винахід стосується способу отримання ОРБ5Б, який полягає у культивуванні бо мікроорганізму, здатного виробляти О-фосфосерин, в якому посилено активність поліпептиду з (с;
амінокислотною послідовністю 5ЕО ІЮ Мо 1 або 5ЕО ІОЮО Мо 2 та який є здатним до експорту О- фосфосерину у середовище. Також цей спосіб полягає у відокремленні О-фосфосерину від здатного виробляти О-фосфосерин мікроорганізму або призначеного для нього середовища.
Як тут застосовано, термін "культивування" стосується росту мікроорганізму у відповідним чином пристосованому середовищі. Процес культивування може бути здійснено у відповідності з відомими в цій галузі прийнятним середовищем та умовами цього процесу. Процес культивування може бути легко пристосовано для застосування відповідно до вибраного штаму будь-яким фахівцем в цій галузі. Ця культура може бути, наприклад, але без обмеження, культурою, яку підрощують в замкнутому об'ємі, культурою для безперервного культивування та культурою, яку отримують шляхом відбору.
У разі культивування рекомбінантного мікроорганізму зі зменшеною, порівняно з власною ендогенною активністю, активністю білка ЗегВ, середовище може додатково містити гліцин або серин через викликання потреби рекомбінантного мікроорганізму у серині. Гліцин може бути надано у вигляді очищеного гліцину, дріжджового екстракту, який містить гліцин або триптону.
Концентрація гліцину у середовищі звичайно складає 0,1-10 г/л та переважно 0,5-3 г/л. Серин також може бути надано у вигляді очищеного серину, дріжджового екстракту, який містить серин або триптону. Концентрація серину у середовищі звичайно складає 0,1-5 г/л та переважно 0,1-1 г/л.
Прикладами джерел вуглецю в середовищі можуть бути вуглеводи та цукри, як-то глюкоза, цукроза, лактоза, фруктоза, мальтоза, крохмаль та целюлоза; олії та жири, як-то соєва олія, соняшникова олія, рицинова олія та кокосова олія; жирні кислоти, як-то пальмітинова кислота, стеаринова кислота та лінолева кислота; спирти, як-то гліцерин та етанол; та органічні кислоти, як-то оцтова кислота. Ці джерела вуглецю може бути застосовано, але без обмеження, окремо або в комбінації. Прикладами джерел азоту в середовищі можуть бути органічні джерела азоту, як-то пептон, дріжджовий екстракт, підливи, солодовий екстракт, рідкий кукурудзяний екстракт (С5І) та бобове борошно; та неорганічні джерела азоту, як-то сечовина, сульфат амонію, хлорид амонію, фосфат амонію, карбонат амонію та нітрат амонію. Ці джерела азоту може бути застосовано, але без обмеження, окремо або в комбінації. Як джерело фосфору, культуральне середовище також може мстити, але без обмеження, дигидрофосфат калію, гідроортофосфат
Зо калію та відповідні солі, які містять натрій. Також культуральне середовище може містити солі металів як-то сульфат магнію та сульфат заліза та амінокислоти, вітаміни та відповідні попередники. Ці культуральні середовища або попередники може бути додано до культури, яку підрощують в замкнутому об'ємі, культури для безперервного культивування тощо.
Також може бути відрегульовано рН культури шляхом додавання певної сполуки, як-то гідроксиду амонію, гідроксиду калію, аміаку, фосфорної та сірчаної кислоти та це додавання здійснюють відповідним чином протягом культивування. Також протягом культивування може бути здійснено запобігання утворення бульбашок у середовищі з допомогою піногасника, як-то полігліколового естеру жирної кислоти. Також для підтримання аеробних умов у культуральній рідині до культури може бути додано кисень у газоподібному стані або газ, який містить такий кисень; відповідно для підтримання анаеробних або мікроаеробних умов можна знехтувати додаванням повітря або продути культуральну рідину газоподібним воднем, азотом або вуглекислим газом. Температура культури може складати 27-37 "С та переважно вона складає 30-35 "С. Культивування може тривати до отримання вироблення бажаного матеріалу та переважно воно триває 10-100 год.
Отриманий протягом культивування ОРЗ може за винаходом бути додатково відокремлено та очищено. Цю сполуку може бути відновлено з культури із застосуванням відомого в цій галузі прийнятного способу, відповідно за способом культивування, наприклад, але без обмеження, культивування в замкнутому об'ємі, безперервного культивування та культивування з отриманням культури шляхом відбору.
У іншому аспекті, винахід стосується вироблення та експорту ОР5 із застосуванням поліпептиду, який має амінокислотну послідовність ХЕ ІЮ Мо 1 або ЗЕО ІЮ Мо 2.
У іншому аспекті винахід стосується способу отримання цистеїну або його похідної, який полягає у а) отриманні О-фосфосерину (ОРБ5) культивуванням мікроорганізму, в якому активність поліпептиду, який має амінокислотну послідовність 5ЕС ІЮ Мо 1 або 5ЕО ІЮО Мо 2 є підвищеною порівняно з його ендогенною активністю та який є здатним до експорту О- фосфосерину у середовище; та Б) у хімічній реакції О-фосфосерину (ОРБ), отриманого або в культурі, яка його містить з сульфідом в присутності О-фосфосеринсульфгідрилази (ОРБЗ5) або мікроорганізму, здатного до її експресії.
Як тут застосовано, термін "О-фосфосеринсульфгідрилаза" (надалі позначено, як "ОРЗ5") бо стосується поліпептиду, який каталізує реакцію, в якій відбувається надання тіолової (5Н) групи білка ОР5 для перетворення ОРЗ на цистеїн. Цей фермент спочатку було знайдено у бактерій
Аегоругит регпіх, Мусобасіепйут їшрегсціо5і5, Мусобасієгішт 5тедтаїййс5 та Тгіспотопав мадіпаїї5 (Міпо К апа Ізнікамжа К, РЕВ5 І еНегв, 551: 133-138, 2003; Витзв КЕ евї аї., У. Ат. Спет.
Бос., 127: 11602-11603, 2005). Додатково цей термін включає не тільки білок ОРБ55 дикого типу, але й також його варіанти, які містять делецію, заміщення, або додавання частини полінуклеотидної послідовності, що кодує ОРБ55, які виявляють активність, що дорівнює або перевищує біологічну активність білка ОР55 дикого типу, наприклад, цей термін включає білки
ОРБ5, зазначені у Патентах Кореї МоМо 1381048 та 1208267 та їх варіанти.
Сульфід, призначений для застосування у винаході може бути будь-яким сульфідом, наданим не тільки у твердій формі, яку звичайно застосовують в цій галузі, але й також у рідкій або газоподібній формі внаслідок різниці у рН, тиску та розчинності, отже його може бути перетворено на тіолову (ЗН) групу у формі, наприклад, сульфіду (57) або тіосульфату (520392).
Сульфід, призначений для застосування у винаході переважно може бути групою Маг5, Ман,
Н2а5, (МНа)25, або Маг252Оз, яка може надати тіолову групу до білка ОР5. В цієї реакції відбувається постачання однієї тіолової групи до однієї реакційної групи ОРЗ з утворенням одного цистеїну або його похідної. Сульфід в цієї реакції переважно додають з концентрацією 0,1-3 М та переважно ця концентрація складає 1-2 М на 1 М ОР5Б.
Спосіб винаходу також додатково полягає у відокремленні та очищенні цистеїну, отриманого у реакції протягом операції Б). В цьому разі бажаний цистеїн може бути відновлено шляхом його виділення та очищення з реакційного розчину із застосуванням прийнятної відомої в цій галузі реакції.
Також винахід стосується вироблення ОР5 у великому обсязі з отриманням цієї сполуки шляхом збільшення активності поліпептиду 5ЕО ІЮ Мо 1 або ЗЕО ІЮО Мо 2 у мікроорганізмі, який виробляє ОРЗ з наступною реакцією цього отриманого ОР5 з ОРБ5, яка призводить до ефективного отримання цистеїну
Отриманий таким чином цистеїн може бути синтезовано у різні види похідних цистеїну із застосуванням відомих у цій галузі реакцій хімічного синтезу шляхом модифікації атома гідрогену або а певної атомної групи.
Як тут застосовано, термін "похідні" стосується подібних сполук, отриманих шляхом
Зо хімічного змінення частини будь-якої сполуки. Звичайно цей термін стосується сполук, в яких атом гідрогену або атомну групу заміщено іншим атомом гідрогену або атомною групою.
Як тут застосовано, термін "похідні цистеїну" стосується сполук, в яких атом гідрогену або атомну групу у складі цистеїну заміщено іншим атомом або атомною групою. Наприклад, похідні цистеїну можуть мати таку форму, в якій атом нітрогену аміногрупи (-МНег) або атом сірки тіолової групи (-ЗН) у складі цистеїну має інший прикріплений до нього атом або атомну групу.
Приклади похідних цистеїну включають, але без обмеження, М-ацетилцистеїн (МАС), 5- карбоксиметилцистеїн (5СМС), Вос-Сувз(Ме)-ОН, (В)-5-(2-аміно-2-карбоксиетил)-І -гомоцистеїн, (А)-2-аміно-3-сульфопропіо- нову кислоту, О-2-аміно-4-(етилтіо)умасляну кислоту, З-сульфіно-Ї - аланін, Етос-Суз(Вос-метил)-ОН, селено-і -цистеїн, 5-(2-тіазоліл)-І -цистеїн, З-(2-тівніл)-Ї - цистеїн та 5-(4-толіл)-І -дистеїн. Цистеїн може бути легко синтезовано у М-ацетилцистеїн (МАС) шляхом реакції з адметилюючим засобом та у лужних умовах його також може бути синтезовано у 5-карбоксиметилцистеїн (ЗСМС) шляхом реакції з галооцтовою кислотою. Ці похідні цистеїну головним чином застосовують, як фармацевтичні матеріали для засобів, які зменшують або усувають кашель та для лікарських засобів, призначених для лікування бронхіту, бронхіальної астми, ларингофарингіту тощо.
Нижче винахід буде більш детально описано з посиланням на наступні приклади, які наведено тут лише з ілюстративною метою та які не призначено обмежувати цей винахід.
Приклад 1: Визначення транспортерів УПИ5 МЕ5 та ХедВ МЕ5.
Для визначення залучених до експорту ОР5 мембранних білків ЕбсПегіспіа соїї було здійснено скринінг бібліотеки геномної ДНК штаму К12 МУ/3110 (АТСС27325) ЕзеПетісніа сої.
В зв'язку з цим, для встановлення умов пригнічення росту Е. соїї внаслідок дії ОРЗ було побудовано базовий штам, який виробляє ОР5. Цей базовий штам для скринінгу був рекомбінантним мікроорганізмом, зміненим для зменшення активності ендогенної фосфосеринфосфатази (еп) в штамі дикого типу УУ3110 Е. соїї та він отримав назву "КОСМ11212Р" |гтакож він відомий, як "СА0О7-0012" див. Патент Кореї Мо10-1381048 та публікацію патентної заявки США Мо 2012-01900811. Із застосуванням здатного до вироблення
ОР5 штаму КОСМ11212Р було отримано оптимальні умови для скринінгу, в ході якого було виявлено досягнення пригнічення росту у разі культивування здатного до вироблення ОР5 штаму КССМ11212Р у середовищі, яке містило цю сполуку.
Потім було здійснено трансформацію штаму САО7-0012 плазмідами геномної бібліотеки
МУ3110 із застосуванням електропорації (мап дег Кеві еї а. 1999) та відібрано колонії, в яких було виявлено усунення пригнічення росту в умовах середовища, яке містило надлишкову концентрацію ОР5Б. З вибраних колоній було отримано плазміди та з допомогою сиквенсу було здійснено аналіз нуклеотидних послідовностей цих плазмід. В результаті було виявлено, що до усунення пригнічення росту в умовах середовища, яке містило надлишкову концентрацію ОРЗ залучено два мембранних білка Е. Соїї, визначених, як упи5 та тай, які є, відповідно, білком- транспортером УЗ, який належить до надродини мембранних транспортерів (МЕ5) з амінокислотною послідовністю ЗЕО ІЮО Мо 1 та нуклеотидною послідовністю 5ЕО ІЮ Мо З та білком-транспортером Уе9В МЕЗ5 з амінокислотною послідовністю 5ЕО ІЮО Мо 2 та нуклеотидною послідовністю 5ЕО ІЮ Мо 4 (Рао 55, Рашцізеп ІТ, Заіег МН (1998). "Мадог Тасійаюг 5ирегатіу." (Надродина мембранних транспортерів") Місгобіо! Мо! Віо! Кем 1998; 62(1); 1-34. РМІЮ: 95298851.
Приклад 2: Конструювання векторів упи5 та та з надлишковою експресією.
Для перевірки посилення ОРЗ-експортуючої здатності у разі збільшення активності білків- транспортерів УЛИ5 МЕ5 та Уе98 МЕ5, залучених до усунення пригнічення росту внаслідок дії
ОРБ у штамах, які виробляють цю сполуку, було побудовано вектори з надлишковою експресією кожного з цих генів. Також, оскільки винахідники підтвердили наявність збільшення концентрації ОРБ5 у разі посилення активності гомосеринового/гомосерин-лактонового транспортера КПІЇВ у штамі, який виробляє ОРЗ (Патент Кореї Мо 138104), цей штам з підсиленою дією ЕПІВ було застосовано, як позитивний контроль. Також було здійснено оцінку дії транспортерів ЕтгО з ефлюксною системою множинної стійкості до лікарських засобів та транспортерів Усабр, які також є мембранними білками Е. Соїї, що належать до надродини МЕ5, до якої також належить транспортер МасВ. Цю оцінку було здійснено таким саме чином, як і для білків УПА та МОЮ. В цьому прикладі, фрагменти гена упи5 (ЗЕО ІЮ Мо 3, обліковий номер 63473), що кодує транспортер Мп МЕ5 та фрагменти гена та (5ЕО ІО Мо 4, обліковий номер 62077), що кодує транспортер Ме9В МЕ5 було отримано шляхом ПЛР із застосуванням геномної ДНК УУЗ3110, як матриці.
Праймерні послідовності, застосовані для побудови векторів з надлишковою експресією для
Зо кожного з генів мембранних білків наведено у Таблиці 1 нижче.
Таблиця 1 оте Г-ААосТт ААоАТолтоАоосоеост 71776773 РоСРВУвНВ 771 ААоСтІТСАТТоСоСоСТоСТтІТ | 8 о бАТАТСАТОАССТТАСААТОСТОЯС. | 9 КЦз(
Слід зазначити, що реакцію ПЛР для упн5 було здійснено із застосуванням праймерів ЗЕО
ІО МоМо 5 та 6, тоді як реакцію ПЛР для тай було здійснено із застосуванням праймерів 5ЕО ІЮ
МоМо 7 та 8. Праймери, застосовані в цих реакціях ПЛР було побудовано на основі інформації про ген К12 УУ3110 (обліковий номер бази даних послідовностей СепВапк АР 003471), депонований в базі даних послідовностей МІН СепВапК та про оточуючі нуклеотидні послідовності.
Додатково з допомогою ПЛР-реакцій було здійснено ампліфікацію фрагментів генів "ПІВ, етго та усабр із застосуванням відповідних праймерних пар, наведених в Таблиці 1 вище.
Кожного з ампліфікованих фрагментів гена було оброблено ферментами рестрикції ЕсовУ та Ніпац та клоновано у сайти рестрикції ЕсоВМ та Ніпап вектора рес -РгпіВ, який містив промотор (РІВ) гена гпїВ Е. сої), вставлений у вектор рес 1920 (обліковий номер бази даних
СепВапк АВ236930). Таким чином було відповідно побудовано вектори рес -РгйІВ-гпІВ, рої -
РітІВ-упп5, ро -РІІВ-та, ро -РІВ-етгО та рСГ-РІНІВ-усаб0.
Приклад З: Конструювання штаму з посиленою активністю транспортера Упй5 МЕ5 та транспортера уед9В МЕЗ та оцінка його здатності виробляти ОР5Б.
Приклад 3-1: Конструювання штаму з посиленою активністю транспортера УпИЗ5 МЕЗ та транспортера Хе9Вв МЕЗ5 із застосуванням штаму САО7-0012 та оцінка його здатності виробляти
ОРБ.
Кожну з п'яти видів побудованих у Прикладі 2 плазмід було введено у штам САО7-0012, який виробляє ОР, після чого було здійснено оцінку здатності виробляти ОР5 отриманими штамами.
Для цього кожен штам нанесли на чашку з твердим середовищем ІВ та культивували протягом ночі в інкубаторі при температурі 33 "С, після чого кожним з цих культивованих штамів інокулювали 25 мл відтитрованого середовища, наведеного у Таблиці 2 нижче, яке потім інкубували 40 год. в інкубаторі при температурі 34,5 "С зі швидкістю перемішування 200 об/хв.
Отримані результати наведено у Таблиці 3.
Таблиця 2 вНн11111г1111111111111687сИс2
Таблиця З
ОБ) 562 нм г/л г/л сСАО/-0012/рСІ-РТІВ-усаб | 37. | ...ЙюЮюЮюЙ33 5 ющ КБ | 098 2 2Ф «(
Як видно з наведеної вище Таблиці 3, серед випадків додаткового введення у штам САО7- 0012 Е. сої генів мембранного білка Е. соїї, відповідно в тих штамах, які мали посилену дію генів
ГІВ, етгО, або усаО було виявлено значне збільшення вироблення ОР5 порівняно з штамом
СА0О7-0012 та зокрема у штамах з посиленою дією білків УПЛй5 та Ма було виявлено принаймні 150 95 збільшення концентрації ОР5. Навпаки, застосування в експериментальній групі штамів з підсиленою дією генів ЕтгО та сао не призвело до появи будь-якого збільшення концентрації ОРБ.
Штам, позначений, як "САО7-0012/рсіІ -РІТІВ-упи5", який отримав назву "ЕзсПепгісніа сої
САО7-0266 (САО7-0266)», депонований у Корейському центрі культур мікроорганізмів отримав 9 грудня 2013 року визнання від міжнародного органу по депонуванню згідно до Будапештської угоди про міжнародне визнання депонування мікроорганізмів для цілей патентної процедури під реєстраційним номером КОСМ11495Р.
Штам, позначений, як "САО7-0012/рсіІ -РіпІВ-таю", який отримав назву "САО7-0267 (САО7- 0) 0267)», депонований у Корейському центрі культур мікроорганізмів також отримав 9 грудня 2013 року визнання від міжнародного органу по депонуванню згідно до Будапештської угоди про міжнародне визнання депонування мікроорганізмів для цілей патентної процедури під реєстраційним номером КССМ11496Р.
Приклад 3-2: Конструювання штаму з посиленою активністю транспортера УЗ МЕЗ та транспортера Уе9Вв МЕЗз із застосуванням штаму з посиленою активністю білків 5егА та 5егс та оцінка його здатності виробляти ОР5Б.
Дії генів мембранних білків Е. соїї було додатково перевірено із застосуванням штаму САО7- оо22/рсі -Риті-ЗегА((336М)-(АВ5)5егс, який виробляє ОРЗ (Публікація заявки на патент Кореї
Мо 10-2012-004111) з посиленими активними властивостями ферментів /О-3- фосфогліцератдегідрогенази (ЗегА) та З3-фосфосеринамінотрансферази (ЗегС), як шляхів біосинтезу ОРБ. Отримані результати наведено нижче у Таблиці 4.
Таблиця 4
Споживання
Шкам Оптична густина ГЛЮКОЗИ О-фосфосерин (00) 562 нм (г/л) (г/л)
САО7-0022/рсіІ -Риті-бегА(СиЗ3З6М)- вв5)Бег 30 21 2
САО7-0022/рсіІ -Риті-бегА(СиЗ3З6М)-
ВВ) Зего-РІВ-ПІВ 32 28 2.8
САО7-0022/рсіІ -Риті-бегА(СиЗ3З6М)-
ВВ) Зего-РІВ-упи5 28 26 1.0
САО7-0022/рсіІ -Риті-бегА(СиЗ3З6М)-
ВВ) Зего-РітіВ-таю 21 21 35
САО7-0022/рсіІ -Риті-бегА(СиЗ3З6М)-
АВ5)Зег-РІТІВ-етгО 33 23 2.3
САО7-0022/рсіІ -Риті-бегА(СиЗ3З6М)- за 28 19
АВ5)Зег-РІТІВ-усар '
Як видно з наведеної вище Таблиці 4, було знову підтверджено, що серед штамів, отриманих шляхом додаткового введення генів мембранних білків Е. сої у штам САО7- 0022/рсСіІ -Риті-5егА"(с336М)-(8В5)5егС, штами з посиленими активними властивостями білків
УЗ та Ма за винаходом та штам з посиленими активними властивостями білка ЕПІВ (позитивний контроль) виявили збільшене, порівняно з отриманим на основі Е. соїї штамом
СА0О7-0012, вироблення білка ОРЗ. Зокрема штами з посиленими активними властивостями білків УпИ5 та МаЮ за винаходом виявили принаймні 145 95 збільшення концентрації ОР5, що було подібно до результатів, наведених у вищезазначеній Таблиці 3. На відміну від цього, штами з посиленими активними властивостями білків ЕптО та Усар виявили зниження концентрації ОРЗ відносно контрольної групи.
Приклад 3-3: Конструювання штаму з посиленою активністю транспортера УПИ5 МЕЗ та транспортера МХедВ МЕ5 в залежності від сили промотора та оцінка його здатності виробляти
ОРБ.
Додатково з метою перевірки впливу збільшення сили промотора на підвищення експортної здатності було здійснено порівняння з контрольною групою мембранних білків УПп5 та МОЮ зі збільшеною концентрацією ОРБ, отриманих в результаті додаткового введення генів упи5 та та у штам САО7-0022/рсіІ -Риті-ЗегА ((3336М)-(К85)5егС із застосуванням промотора ігс (Рігс), який є сильнішим, ніж промотор ПІВ (РгпІВ).
Кожен фрагмент генів УпИЗ та та було оброблено ферментами рестрикції ЕсоВМ та
Ніпа!Ш та клоновано у сайти рестрикції ЕсоВМ та Ніпаї!й вектора рСіІ-Рік-СЕР, який містив промотор їїс, вставлений у вектор рСіІ 1920. Таким чином було відповідно побудовано плазміди рСІ-Рік-упи5 та рес -Ріго-таїюЮ. Далі кожну з отриманих плазмід було застосовано у реакції
Зо ПЛР, як окрему матрицю з парами праймерів 5ЕО І Ме 15 та 5БО ІО Мо 16 та отримані внаслідок цього молекули було оброблено рестриктазою Ніпаїй та потім клоновано у сайт рестрикції Ніпа!ї вектора рСІ -Риті-БегА(си336М)-(А8В5)5его.
Таблиця 5
Штам Оптична густина Споживання О-фосфосерин (О0) 562 нм (г/л) (г/л) сло Оа/рСІ Реті- Вега (0336М)-(ВВ5)его- іго-упнз
САО7-0022/рсіІ -Риті-бегА(С336М)-(ВВ5)5его-
Рітсо-таю '
В результаті, як видно з наведеної вище Таблиці 5, у разі збільшення експресії мембранного білка Е. соїї внаслідок посилення дії промотора було спостережено принаймні 150 95 збільшення виходу порівняно з контрольною групою та принаймні 120 95 збільшення порівняно з групою, в якій було застосовано промотор ІВ.
Приклад 3-4: Конструювання штаму з посиленою активністю транспортера УПИ5 МЕЗ та транспортера ХедВв МЕЗ5 в залежності від сили промотора на хромосомі та оцінка його здатності виробляти ОРЗ.
Додатково з метою перевірки впливу заміни промоторів для генів упи5 та та сильнішими промоторами на хромосомі на покращення експортної спроможності було здійснено оцінку здатності до вироблення ОР5 шляхом побудови відповідного штаму із заміщенням власного промотора промотором с/1 |Патент Кореї Мо 0620092). Введення промотора с)/1 у хромосому Е. соїї було здійснено з допомогою загальноприйнятного способу, як описано нижче. Для заміни на хромосомі власних промоторів генів упиє та та було здійснено трансформацію здатного до вироблення ОР5 штаму САО7-0022/рсі -Риті-ЗегА"((336М)-(КВ5)Зегс (Патент Кореї Мо 138104) побудованим рекомбінантним вектором та з допомогою гомологічної рекомбінації було здійснено заміщення власних промоторних послідовностей цих генів вищезазначеною промоторною послідовністю у складі цього вектора, що призвело до вставки у хромосому промоторної послідовності с/1.
Далі кожен штам нанесли на чашку з твердим середовищем ІВ та культивували протягом ночі в інкубаторі при температурі 33 "С, після чого кожним з цих культивованих штамів інокулювали 25 мл відтитрованого середовища, наведеного у Таблиці 2 вище, яке потім інкубували 40 год. в інкубаторі при температурі 34,5 "С зі швидкістю перемішування 200 об/хв.
Отримані результати наведено у Таблиці 6 нижче.
Таблиця 6
Оптична | Споживання 5в2 НМ (г/л) (г/л)
САО7-0022:Рес)1 упив/рсі -Риті-БегА"(с336М)- ввВ5)5ег "
Як видно з Таблиці б вище, у разі збільшення експресії кожного мембранного білка на
Зо хромосомі було також спостережено збільшення виходу аж до 130 95 порівняно до контрольної групи.
Приклад 4: Підтвердження ОРБ5-експортуючої функції транспортерів УЗ МЕЗ та Хед9вВ
МЕ5.
Після вилучення всього експортованого в середовище ОР5Б було здійснено збір всіх клітин з отриманих у колбах зразків з підтвердженим у Прикладі З виробленням ОР5Б та отримані клітини було зруйновано. Як негативний контроль, в цих дослідженнях було застосовано штам САО7- 0022/рсї -Риті-ЗегА "((3336М)-(КВ5)5егС без посилення дії мембранних білків, а також було застосовано зразки штамів САО7-0022/рсіІ -Риті-5егА"(с336М)-(АВБ5)ЗегО-Рігс-упиЗ та САО7- оО22/рсі -Риті-ЗегА((336М)-(АВ5)ЗегО-Ріго-таю з посиленням дії мембранних білків УПА5 та
Маю. Внутрішньоклітинну концентрацію ОР було виміряно з допомогою високоефективної рідинної хроматографії (ВЕРХ) та отримані результати наведено на Фіг.1.
В результаті, як видно на Фіг.1, у досліджуваних штамах з посиленням дії білків УПй5 та
МО за винаходом було виявлено зниження внутрішньоклітинної концентрації ОРЗ на 30-40 95 порівняно з контрольною групою та тим самим було підтверджено те, що білки Упй5 та МАЮ відіграють певну роль в експорті ОРЗ до зовнішньої поверхні клітини. Відповідно було підтверджено, що посилення дії білків Упй5 та Ма може призводити до безперешкодного експорту ОРЗ у клітині до її зовнішньої поверхні, тим самим збільшуючи здатність клітини до вироблення цієї сполуки.
Фахівцеві в галузі, до якої має відношення цей винахід слід з вищезазначеного зрозуміти про можливість втілення цього винаходу в інших особливих формах без змінення його технічних концепцій або суттєвих характеристик. У зв'язку з цим слід зазначити, що вказані тут зразкові втілення винаходу наведено лише з ілюстративною метою та їх не треба тлумачити, як обмеження суті винаходу. Навпаки, винахід призначений охоплювати не тільки зразкові втілення, але й також різні варіанти, модифікації, еквіваленти та інші втілення, які можуть бути частиною його суті та обсягу, як визначено в доданій Формулі Винаходу.
ВКДНАННЯ ПЕПОНУВАННЯ ВІКРОСРРБАНІЗУНА
Сійжев чейплжедантг Корперейнин РЕВПИСКА ПРО СТРИщМАННЯ У ВЯПАЛКУ
СІДЖЕН ЧЕЙЛДЖЕДАНЕ ЦЕНТЕ, ПЕРВІСНОГО ДЕПОСНУБАННЯ, з50 ПОНГХСРО. випана зідне з Правипоам о 77 БЕЖ нНАРСЛНИМ
РЕСПУБЛІКА КОВЕЯ вказаним у нНиЖжНИ частені даної сторінки
Розпіинавальне посипання, приєвоєна Беєєтраційним номер, присвоєне
КАкоосрганям, ниазане у ПОЗІ вне. супроволжунанея: грі науковим списом
Гі запропонованим таксонамічним пожначанниявх інесбхане вдатити хрестові
Даним Міжнародним сюоган лю депоневанняз пимимване мікосорсненям, вказаний ж воза
Назва: Коренський центи хильтур Підпис) ооОи МЕ, екран нізав зповнодаженоних представляти
Вдоеся: ов БД МеєнародниМм орган по даепонунанню, аа
Совдемунту
З Зпдна з ГПржанлом БО) цю датою є дата отримання статусу ві межнаюводного срозну ле депонуваннкк у випадку, яжще яжля стривання статуєю ва міжнародного сугану по депонуванню пепонування вне провепено Зпднз з Будаепешнським договором, та воно перетворюється в депонування зідно з Будалпештськивм доповором, то цію датою є дата отримання мірзвртаніяму Міжнародним сегпаном по депонування.
Бпанк Р
БУЛАДЕШНТСЬКИЙ ДОГОВІР ПРО МІЖНАРОДНЕ саджей Чейплужеданг Коппореншн РОБПЛИСКА ПРО СТРИМАННЯ У ВИПАДКУ
СІДЖЕН ЧЕЙЛДЖЕДАНГ ЦЕНТР, ПпЕРВЮНЧОГО ДЕПСНУВАЕННЯ,
З ДОВГЕ, виланяа зпдно 3 Праевипом о 853 МІЖНАРОДНИХ
РЕСПУБЛКА КСОВЕЯ нвижЗНИМ У НИЖН частині даної стоавнки
Розпізнавальна посилання, присноєна Реєстраційний номен, приєвоєнни
ДЕПОЗИТ ОРОЖЕ МІЖНАРОДНИМ ОРГАНОМ ПК
Евспепюта соб САЙТАХ ДЕЛСЮНУНАННЕЮ
СОМИ а
Мвоопрганом, вказвНиИМ у розді! віче супроводжеуванся.
Сі внуковикм олюисок 1 запропонованим тавсономеним позначенням інНеосбхілне відвнтити хрестиком
Даним Міжнародний орган по депонування приймає мжрозргланізм, аказання у роз
Назва Корейський центр культур г цдплис зЗеоби ЕК, викрадені Упавноваженоцих) представляти вдвеса кр Б Міжнародний рн опо даелонуванню, або ча, ондженав- ета уповноважено их) посадовових в особм еВ бодемунгу
СЕЖН Тра ДЕ дата: 5 грудня 21 р.
Респуйлюя Корея
З Згійно з Правинлом Б.аце нею датою дата отаишання статусу вій міжнародного сргену по депонуванню; у внпадку, яацюе після стримання статусу вій міжнацводного опфане по депонуванню депонування вне пюоведено східна з Будапештським даовором, та овоча перетворюється в депонування зідно з Будапештським договором, то цЕшюш датою є дата отримання ажросрганяму Міжнародним сровнем пло депонуванню.
Бланк ВР
Єдина сторінюа
«ій» КА УХЕЙНЧЕТАМ КОРПОКЕМЩН «Те» АікрОосоганям, яки висобаай Себосфосврин, та спос штвимання с еашвосерину ОО і-цнстене з мого Застосувинням. «В» ОБАТВІЯВ «ТЯ» Корані є. «вв Я «Вії» «5 «еїе Беспегпепів ей «дих кайік пептид «жа» СТОК «ЖИ транспортер ув Ме, вл
З й те К са З ох з. ха їх» Ж ххх ж діа - йоєжа ХК 534
МегЕтео СВ ко Мав Аа 3 то Аз во Аво НУ зви Ага Бе Ави івнАпу Ве Уві Баг пе ма Ве ре деп Ре Ав ет Ту іен Те
Не Сію Ме Кт ен Аа В бен: Р ЗУ Ту щі Бе жо а Ме
З Зо 5
СУ Бе Жег Аа Єва Твоя СТУ ви а! Пе Бебібец Са Туга що 55 о діа Тнеіжи її ео бег А т Р НЕ АВ Оу Аг Тут ів Аза жагу
СУ го увів Ме У Узі ие Му ев ую ту Су Ре ре яма т Ха у а сви жо й: чн ях У т сс: С -е ІУ
Су еи іх Тує бе т Аза сь беу Тег Ада агі ви Бгто Уві Не а т ТО щас цес цем ву мер був ви ву ли че не ке сб пе сх сів 140 155 де бве ва Су Тк Су ще тт бер тт су ман У ма ма СНУ
Бех еи Нв Не Ту Агу ві Пе бее То Ави Су Пе Уві ТКУ
Тай їж 155 1
Су Аа КЯеХ Аа ВЕ З, Авіа Мо Вена су зві Узі бРне Тук Нів Ттр
Су Су Бе си із сви Ада ге Бе Не ле Су маг Ав ви Уві їВа 185 Не діа ів ев А Ве без Аго КО ТУ ЧА уз Аа Кг ув СМУ т а В іуз Рез дез Ро Єва Ага Аа мае СТУ Аг Уві ттв ей Буг у 1 1 КО
МЕТА Кецч Аз мен Аба маг Аів іх Ре слу У бе Абе тв Не
Не текіла Тут Ази А і же Су Тер АВ Су Аа ма а ка
Тем Пр ге юне сне Спеа Аа Ре Уві Су его вв Га на Рух у ут Пика
ЩО -Б5 Ж
Ап СУ Бо Ак впу Не Су Сб і во Аа ма Аа Ме Ве Су еле еВ еВ
Бек же СМ Це Пе СУ Бе зи Бех М хв; маю Аква Те Ме вто
КЗ г,
ЖгрмМег Ав і у Не су Уві а я ів Се Аа сі ема ек ву маг бе Рг АВ ес УВІ Уві Вів Уч і ке ід Уві бтє т Не
Ав Сп Ну иа А Бер имеа ТР Гу Ту Уві Не Мер лою ем сна мем а; мВ ве іх Рто ви Ай СТУ во У Ме дек то Ав слу 355 що 5
ВЕБ ма Пе бут бе АВ АВ АН СТУ я Уві Аа Ме ма бе
Мав ец т ТтрАВ ен у Ак Кто Кто лю М УЖ РО сне зва зай 395 щЮ
Аза мае бог ег
«12» Євопенсвна «ай «аа се транспостею че Ве, Ме де Тв авіа че Аве За Тк Аа То С ер тер бе ув лка
Рне Су Ре бе Мей Сп Заг есе ТВ ТВ Це Уві лат Пе Аа я 5 ЗО ів Кто ее МИ Абв і б Св С КН Вес то ве Не ес Бе ме У Не чі ек Тук Мага Тег че Аба Уві меє део то Ага
Заг біб їпвіво Аа ар іє М СНУ Уві Ат ем пе бе Бе Ти
Аа Бе і Бе Твір СУ Зеєбео Біне бух Абе Беру
ТегЕее Аква шо ен бек ан Ана Аго Ада бер ми БМ Усі Су Ку 16 5 ЕК
Дів МН Ме узі ето УВЕСИе ее бе Тег УВЕ Ме уз Не ЩЕ ге
Ага Со Зе Тує Ме АВ Ав Мет РБе уві Твгсео о ОЗ СЯА
УВУ г ев ек ЗУ гола ев му Сну ви бе Уві о Тег
Аве тп в тт Бе бе уеу Не дви Ме Бу масну Не ев та НЕ 175
Ку Кі КА я З тк 5 Кк дух Кох зе ах Каси Бе Ве я в су дів Ів Аа 15 бац ви Бец Мей Єто Ав Тег Те ме Ту
ТО 185 Ще
Ага АТ Не яр ви ба СПУ Бе ен ес ес Ага У Су Бе АВ 1 ка Ко
Майн тів Авіви Авр СУ Зегізв Сб Пе СТУ ву бег бо їац тн Не Аа Сну ж Уа іх Увагу Уа УА ев ма ен муть ря ск Бе хх Ге Ка р а Как 240
Та іви во нів Ав Уа Ави Ав бом ер Аа б ео бе бЗегіео ув ми Реве Ага ТвгачО ги Бие вк ев у бен Аж СМ заг РНа дід се Ага Не Су бю ЄМУ Мегі ви Бгто бе Ме ТР Бнз ля Ре ви
М Во «В (А Пе бу ец Сну бе З го бе Мів Аж Су б яна Ле НОЯ Ме:
Бгто Мей ві ко КНУ Бег Мей СМу М Ку Ага Бе Уа УБ и Уві зо5 Зо 15 ЗО
УВА ат не су Туга го віє Уві АЯа Те ТГК іш бегі ви Уві Пгівц бен бів Ме т те Аа бе бе Су тр
За З ЗО
ТУгТуб уві Кв Ро бе уві дво бе оц іп у Мега Ава Баг
ТВА Рва шен бе Ме Аа ТП бю Піно ув во бе то дар доки В км бу оз ХХ, Зі кв Жде ПК сх сук ЯК Кік ЖЕ Вр хх дам ец Ана м баг Кну ел сег іх сені са Ме пе АЛЕЯ з щем ще АйеЕ баг не сну У! Тег Не Абе С во бе вн ст бек ЄКе я ее 1 кзіу Без Ні М Бе Уві вер Бегозщ Тт тт зи Ту У Ре
Б ие Же:
Ме Туг Те Ттр ме Мет Айеї Ав Св Ме Ме лів сви Кто ів Ейе че 0 ай
Ве ра іа бло уві ето Ап Аво Тит НІ Суп Ам УвбАН Це Баг ех дк ще а о ВО
Ага Ага ув Аг ГА В 455 47 «дії» ЗВ «ій» ДК «їй» Євсненетнв ос «де»
«Ве уУуБНЕ «Як З аезжесвас сюспівосова вооссосюсв засеоаноє поса дедезивіє 5 ісіатнцвся щимаас сцесвоєв сіовосвня пас сосна 1 осо сова ви дае зоасаоснеї пдосводає дичаевоє то сесавий шоссвосі зсіовосовс осів снопа сома шк сом тв УВК ОКО аа уча Ве тачки иий ВЕК сееаиа Ех речей ЕЕ одесосовна взасос сисоціча подо недаосве кодом м сідисдосво пайвассоє своуссі пбсвісносс беабес осо ЗО паса деозсюся исососоз ізо содавоЗас шеаспаю 380 ссчиазові ееана зосоцічасо сце МезНове пайсосое 5 содазсоціва ваоссаціаа зиосавассю сюосаще децсоцннх ооо ща івчеїщівея Іза сос дома, осассоса кодеца! соосвее та зісзезе паюасує вказа даси спевоВе часов т адсоюо понос сома нпоссвасо всавазося Иодлє ВО
Дах сивих хі сх жі жене чу плуга ай лу ей ма пучки Є ТІ позасотна давача Спас заз ансо сосни ооо ее зюнессоз саме! мое вазососіс сосзасзаав особою моху у - же оче А їх т зх «з сх. х ЕН чезсоасва сузовее ша ові пебовона доза аосасюс ТО оряВісвсо Тайасюас пе ссана вававаасоос сесосввое сасс то кока у и и КУ ВК посооссві сасаа 1515 «ер в «ії» 16 «їй» ДНК «ев ген
«ие» Е1БЕВНО «ви» пий «Ой аідасаєданс йсосоасою сассостою сазйове Моїсоєст свосною КО ашседісзе довсеюсас свіссівано всодоюсіє ссісвнавює дсавадосіє 120 пока окіє само сва! осасанніє знання акосюво соосчою тва віосксею ссадеююєю осююєтсвс вевооєюю носа інстесс я десвісоіює ота состсав Мерсссс Ніссроснс дсідвнсозае 300 сюмоеіви садове верес дасосєоєда ювшешеє опісзосвоа ЗБ
Пересодюйсня Теракт наст севайеннтесю; сс ствсвея ОО
Насосадіє ваціодатсс поїде! сезнсосісо дсосісюсі оціорецівс 0 Я8о дсвісоідає воду Шовіснвс айссооюо дсанаюсосовіюдоє 06 вевносьи гваксссаа сіасвосе саозозссоне оснеуасі сюосонан 0500 наносоз сзоноос досоціавба воссюосоє юсососсаа заводів що дайвісос сосідвода Ідсадюєсів сісдсвано осріодіоюс всюоюєй 72о
Івієщеве водосавав аесавссо осссіюнсв дова піосоваєя ВО одбассім састюююєсі дасододени Пезссодас піейсосно досеюне ОО сссщеюа сассдоти ссідсвевя одссісдон сюсосорін ісвідсодою 900 сувювіва ісосдвнвої оснодсаоє моровеа засрзеног остзсвоюю 98 підавісосї пройаксо ісеооінсю фіадовасся сосідос дюдеюаю 090 всесоно найесає сососієюь оостюіс асочносе оно ТО піасваво поява сібдвозеці пежмеюса Шевнсвссс пасе шщеана 1740 онсісссоя зегнисізоє дазсвноове заседесіце несе івеенане 01209 дієвдсцєа асаосодсас сасасвавос пісбаюеасвосюстадсзеесю 001359
Новісвісв сссносозс опознн оссвовоме ссавсомасдевіснзнає 1300
Фаостий спос овавя авоцдвососо са 116
«10» й «ЯЗ» штучна песпудовниь «де» «ШИЯ» праймер амилливкаці Ууле я комету вс РТВ ува двіневес ссдааоєсві ве ча «Оз о «Ве «Кей» праймер дитя амемнемкац четех у хонетеукцію вику «з 5 вассинав дае содосі Ко «ші я ск Ук жк ме. зії" АК «Ей штучна после Внет» «ВЖК «ші» прваймеюв для зма аці Ве У конетемкцію вен «НО «ее В «їі» о «їй ДЯК «1» штучна гпюслідсенить «ВА «ас» ПЮВИМЕЮ Для МЛН ОН у конепоуюцію во «о» 8 зашенеМ здсцсвисо й ке: «ВН З
«їй» ДЕ «ій» штучна посльмханіють «р» праймер для амиленкації иа у конструкцію рої «Ричка «а В завіса ссбазавато відо а «ай» ЦК «ее штучна посліуденніств
Я
«ОО» праймер для ампмнмкації би у констоукцію вовче. сах 0 «й» ДНК «ей ручна поси еНть ви «ей» праймею для амимзнакації ето ху констуюцию дова чаю пдвізсоюз завоосваво зазедюва «В «ії» і «їй» ДНК «кі» ручна послу «ва «и» праймею ди змллинюзції етно я конструкцію росі В яти са Ти ззоснва зодоосює со и «ав 1 «їй ДНК «1» штучна послюджнить хумум пк чи сік є сехік на хм КО ЗК з КТК УС «аж» праймер див амплюркецї усаю у конструкцію ре тВІВуса - я см гід юх. жезл; ле тк Ка дввісзки ссвсоннас ссацесю й «ій» їй «13» штучна посліденніють шик вм : ; Я
Щ х сенкан мк су везе т ун мз ия АКМ ЯКЕ еи «ий» праймер дя випннреції уео ж конструкцію всі усво «а Я пт зазсчнає водішсвя соц Щ «її» я «ие штучна посгдевність «ек прайвнер для вмлирікації вектора вот гени ух конструкцію робив аву, РАЧВ-гани «ак ТО з задсноово ссіснсосі зйвсое щі «М» У? бурж зе «з ДНК «ЕТ» зутучма посиуцвннтів
ЗИ ; вух гнадійквкця ягня зливі умі «НО гемо у КеачетТем каяй» пПраннеко для амилиюкації рекет гани у конструкцію х ко нуту й шукхий" УКВ км
ВС сти ве аву ьвего, Ртнібтени кан» В
Й в. с о Ко а зженаке насоса ве що «ЖЕ її Кк АВ «їй» ВОК «ЯЗ беогулевасіегтм діб
«ак» «иа пептид «ем Т.А «М Її
Ме дек був бег дів ви Ал Ні СНО Те Пе Уві АБ Уві Тв СИ і х ЩО 15 ми Ве Суп Ап ою его сно Пе ів Сни бе ми ва ЄВУ СМ чих гону ж
СН У Ав во й ми Су Тут бе Ро Ав мВ ще Кр ле сет
За о «5
СУ ув ар Ага Бгто слу Ма ТЕ Дів Ав ве ре де Уві ев бег із Аве си Уві сли Узі без Аво Уа спи сій бе Ме ее дк СИж вне ема ей Аа А не У Сму Ме А Ето СНО ло че З йо що в:
Те уд ть Ве СУ бе Те Авю тт Се ії ух а мів СМу СА бнае 103 Ес а чу у С ев со Тв я си Зег бег вл Рез Ато баг 125
МР Нв Ві УВУ Уві це му вар ето М Аве А ен А а аг Ала Нв СУ СМ ТМ во ов вер Гук Ав Аа Ап Пе Аво Тг 145 1 т55 15що
Пе Ат у Не Заг Авор Гуг то Уві ЕР бзіу ем осно бец ув ма
ТЕ уві бтолив Уві Заг Ого се сту бу спо а мес Ана ув Аа ва їв5 90 зер Ав ав ви Те Баг с Сер Аа Уві лев Не а (Не Си АЧО т 2 Це
БессньісвівчАщА В ОегіфзАівц У ух Не Аве Су лав о 1 Ко
Бест бе бе 7 су С Уві Не сно Месіеи віз Ав Ні Аів
Кий о че 4
Сівіує Сн Ада Со Уві ліва Айва Ма! Тв ін Ага ів Ме Ага Су
Св іецаАщо Ве ємо Снм Заг во Аг і Ат мя ух Ав ме Ада
СнжівиАввАв ЕН УВІ недо с НАВ вн а пе Зв ев
ТВЕРКО Сл ов Ага Те ТВ Ве Ате Трх ец ла Ат МЕ СУ Гук щ ща ю
ЄМО ТЕ АіЗ Уві ма! ес СУ Се Ме бе СИ і ови ЄМО Су Га
Ав сн ем Со ес Азре тує У Ага А АЛ Те ее СЮ Ве зе 53 З35
М Ав З ув во й СЯ ки мен ГР СМу Був Не Уа! АВ
Аа дів уз КІВ СИ Мне фею сш Меие лів а яю ет СПУ Мей
Кух Ме рони Тег ві Аа М СУ АЗОТУ Ада Авп Аво Не Ар а та З
Мегіви Заг Ав Аа СУ во СНе Уві Аа Бе дп Ав і ув Бк дід
З З КЕ Б
Кеш єни Пе ан пу Бег Уві ан МН то Бе ви Адо Су ца Ся 415 ув: ба мів Ме ММ У Ме ес Ага АБ Ло Пе Авг цею Аа АБО
Се Се Авр су ТР ВВЕ Ні Лера Я ВНЗ еоз Тв Ащиа А
За я Ах «ее В «ті» Ех «яій» білок кате Бвемелета сої «жі» пептид круту, ж жуть, се БАК «яра» Ффогфесерннфосфатаза, вет «а 18
Ме РИЗАЖА Не ТВ То Суб Ав ви то в Авр ма бе беи ТО
1 5 ї8 т5
Рг іх ав бо б ец Бег ів Зег сх АЮ СТИ Уві Ме то аю дар
Тег Ні Аа СОУ Аг мет сх то ем се ук СУ Ап Су ви вав
За «о че
Ку си Ате ана Те СМ Кут бін Ме в ме Кано У Дів Аа Ме Уві 50 ще що
Не маг Аа Аа Тр су на С Аа Туг СНп ма йе лу бе а
Ск ет во Те Аа Ап вів ТВА Се АВ НВ СВІ Ага МА Ге во що ща
Вар Ав Рто цем сну ув Це Рго Нв ем ато Те Рез Су бе тю 105 о мГец У Ми Аюр Мей Ащрю сте ТВе Аа Бе ми Не ми су Пе дер 155 15
Сів пе а ув цею Абе слу ТУ му СЮ АКТ ча Айва си МВ ГВх
ЕК 145 140
СИ АТО Аа МЕ Аго СЛУ СМ Мем во Ре нг Ав Заг Цен Аго баг 145 то 155 їво ла уж Аа Гн ее ув Су АК Аве Аа Ам Ме бе мив Си Ма г се лав ке ет Кер Ме Різ ану бе т іп іо мі ви ук
Ме см г Кец сту Тро бух аг А пе вів бек і Му Ре Тв ве ре дів Спо Турів Арі ен Аг іви Те А Уві м а Ав ВІ ви сне Ме Ме Аве сну Був КНе тк су баг ма Пе
СіуУ Ахо Пе УВЕАзо вів ОЗ я ув Аа був ТК ву ТАг Аг оц ща ро діа Сбо ЄМ Ту ОН Бе Бе бо Аа Ми Тег ман дя Не СНУ йБр що 2 Кн; слу Кіа Авп ар мен Бгто Ве Не і ув Аа Ада Су бева СЯУ Не Аа 278 З 25
ТугНів діх ув РТ 1 ук Ві Ави СНИ | за Аа СМ ча Те Не Ат
Ні Аж Ар во Мен сМу уві Ба ув Це і ви Заг у ах ее
Св ух «ее То «М «а» сСогуєесвовалий спаси «вах «щаїз тен «Шед (ТАТИ «тихе ин есеринешесатааа щей
ВЕВОТОЯВ семою асаіасаса зує уза сесії що завісосвяо завісвсюа зсдвадеє всосвораце осв авооя 180 спссююво щЩатсовової пвасоцава дассдоєсва зів сс 18
ВОСоЕоВї сезствана цеха похо песо! срссовє 24 поза осо видові зезссюаое чиночасве соісвосася КВ
Ччассіасю всю поса са сад ном осзодава ЗО
Км сх во ях ХХ ве КА СКК ШЕ Ж ве оса ссоціюсюсо ЯсНоссві оноМоа поза сознов ЕВ т нс: х с КК Ж ЕЕ МАВ їх - зсопокнаа осо шовацвсс зрос зсозвишосва сВцовоноє Я
МУ Ка М 5 УА МКУ і: зпедюмюка чсося ссославює доостааає паза ас кесодов в зевасса пана засос зазусосна сосна сіє БИ ; фу вух очекеів все хекут кре : уки хг зжноюшсевз сцанов сснени осо но вправо ОБ нОос ве сте х З уче ит. 4 Такі З ах ре З ау павуки хі ш. уча фо Ста йсовною аносасоМ даною дедоюена аоноасовс восісесося за ж смфожк, : сх се охув сек. ; вв В КО шиювадоаву своє досвунеюї даосуїдеця ечоваєе сідаю НТ зпацяцюю юсоціавосв щас Носетей щезає пове В зазопісасю сома нов асідасоссї ожосососв осасоа ес аосеаве ЗИ
З Я ких сих, -. й КУ кн ВУ иКИ Шен фут -і ; ик В с г сао зоосзавесзє щадне помошевіссвацізй зааваіча во х. семи учи А-Е ом фФелювуафечзизучує крезуєтикучса Я Вечканево кутка гав КУМ чия шовопоце пащосоє вссавеаси вудяаюєь дае овео тки сювссоса зосоюмсосоав авапеюзЗи зассососю совводева несе ТО пон озе спавнсе ссбазацви осв аос озовиозо векощоще 1143 звідвсвісі ана садом ооо смсвасах давуссіев 1800 сщазооаца носове Меса сасссвиєс ісчасуао ово 1560 зишошовВі схосовоза заовмею зо анзоз аздзсдосве шесвосє Не онссейса ссвецєств а та «еще 0 зно со всеїваєсв посі сцессссі дача хвою цоцею Я снсачза сема асогейосев сшвзанасо ясосавоюєв оса Не «асщіно дув зсаіанаоза сіна зарессаоеє свадсше то про ж хе Кт то ремревечи х пр т и а и кн ж сях т Я осотюсоою шачоанос соуссіюєюс седазоай яса ооо са о їчх о ех ря сфе зукух Ясуг ву ие ух среди тоди фрези ее пеки и іх шонсвсоз ссосасооос асзсоссю всссассоває сосацєюоа мис со ЗО сим аз носової псосвесоса поема Мзен сосна ав
СОН КОТ ВОСКЦВОЮХ МОЦЯ С- НЕ СК, шНЮ ТУ НЕ КЕ ДКС «КУ чесаїєсвоз Новака! азам оссааасюю сопе своею 0050 зсодааеа созвасющеє сашеоючас павссцамй Масодюєав стподевоє СЕ со щосза сусщаваци сосюассює зайанеюе засзосіцез аванс 540 ссосювеє садосиває осзасююо сісзвоєюою азасосюцо сере ОО сувхй кує стару еи фодехк КК гуму овичих Кекрчзума вид КВ спуск ЗК асозйоєсі ссдвовоєм ом осідає гдсосоасва осівсоюєю що ахосозюо зоссваюа зе модасодоюа запас саше та оосозвсесо озсососа пасвзазосо зазасоюа седсскоє сарай та завнісссоцео шоссе союасов деодаюово сс зосоеме еВ звацзеодоасво засосові осізесві вссозшесва засезаюва зашоцдсоєв З пісвостоє дісвоцзоюва сс азацо пансюа сво свосоваві ВО седан зва «їй» білок «шій Кеснейснія со сих кумів пентид киев БНО, «Ше» ней «НК хі
МесАЇш У У Баг ем мі уя Аво уя Ме ма Не | я бе Ві 1 5 10 т
Си Сі Уві Ніз сив Гуз А се Си Бебі Аг Ав Аза СНУ Туг
Тева ПОС юне нів і че У А і ец Ав Аво Сів су ву ув а а яв
Св ег бе лез Аво Ав Мі бе Ме Су би го Бек АТО ТТ Мів ва -к дпа во Ка, БК збе т сли Аяв Уві Ме Ав АБ АВ СТИ р ув ем ав Ана Пе сну
Во ТО Та ВО
Суз БНе Сув Ме У ГНгдав сп Уві Азов і ши Аво Аа дів АВ ув ще що Еко
Ага Сі Не Рг уві БЕ деп Ав Рео Ре Заг Авп ТВ Агоу Зевг зі
ЕН ще та дів біси Уві бе СНУ Бім вс ам ес ву мав АТ СНУ МЕ Ро 125 155 со Ав Ази дів і уз Ада Нв Аг СТУ ма! Ттро ба ув ви Ав Аа т 135 14о
Сх Зег Ре Ми Аа Ага Су уз дув ем Су Ме Пе Зк Ту Су 145 о їБВ 153 нів Пе сму Тв Сн бе сх Це Ге Аа ЄЮ кн бе слу Ме Ге
Уві туге тут Ах Ме Сп Аж Ку Мен бо де СТУ Ави АВ ТНК 18 1955 Не зо сла УВС Мі ес ЗегАво ер бец еп Ме: хе Аво чі ма! аг
Кеш Мі мМ Ето СН Ава го Бег їтк ув Ав Ме Меб (у Ав і ух тій 15 кед с пе бек і ви Мегі у то СПУ Бег ен і во Не Авп айе аг АгО
СУ Пре Уві Ар Не то Аа ев же Аве АН і ец Аа бе ув аа о -35
Ні бе ва Су Ага Аа Не кар Уві Не та Кг Ою Ро Ка ТЕ
Ал сег Аво ро Бе Пе Вег то ер Суб Січ Ре Аве лав Уві ей ев бу то Ніз Не Сму Сну Зег Тит ОВ а Абв СН СН Ав Це
Сів УВА СНУ ув і во Не ув Тук Ме Аво Ав СМу ЕН
Тегрец сег Аа УВІ бел ба Рез с заг бегіен Рез ец МЕ ЄМУ 3 З
ОА А е Ме Нів Не Ні СПО Ази Алі БО Су Уа і ви ТП
За ве За дів ев А ув Ме бе Ав Со си КУ УВІ бл Ме Аа а Км
Тк ви и ТА Кнеу Ав са Не МУ Тук МЕ ві Не Аве Ве СВО
ЗО згв ЗИ але дев уві дів СІ ув Дів дви СМ Ан МЕ Був Аа Ка
Вт Су Тег Не аг АВ Аг во ет ще ве «ії» 5 «и1й цручна послідевність «ее «Ши ПЗ Воскова доогеназа (КОН дак
Але має А Аа СВУ Ага ет Уві Мі ен Не Ав Ажо ух Севи АВ
Я 5 т 15 си бек Те Узі АерАві ви Су Мер Аа Уві сне МВ Аа ТР Ма! дар се Ру Ап Ага то Сни ер во Аврора Уві уз сі а Аво
За Се 45 я Се се ВИ Агор ег Аа ТРОЕМ мен Ар АВ СО ма Пе Ав як ЗО
Аа Ав Ро Ав Месії ув Ме Уа Сну уз Аа СУ ВЕ СУ Ген Ах ва та Те ва
Ап уві Ав Не то Аа Аа Теж Со Ай су Ві Мі У ків вав 5 що 55
Авто ве бег Ази 6 ів бег Ав Ст Со в Ада Ве Бег во 30О 05 но зву во ет ТР АБа Авто Сів Не Ро Аз Дів дво Ав ТЕ ец ма
МН су СН їв Муз Ага мн Зеє Ре Ав слу УС Ве Ре Му 133 ен 1580 мув Те ма СУ Не мі Су Міра Му На Не бабу КИ Бена Мбце Ана
Са ла ан аа Ма ВБе си Те те де ма АВ Ту аао РяЗ Ту 173 1
Аза Ап то Ма Ап Ав Дів Си і ер деп мВ Ми ви Уві Си бе 183 185 Ва
Авр і ву Ме! бег Аві Бег АБО Не Уві Тег бе Ніж і а Бгто ув
Тег ув Со Тен Ай Ку Ме Бр Аве Ада Сп бе че Ав ув бот 1 15 28 зів В Се пе бе Не Ав АВ АВ АСУ СУ ви в яр
ЗВ хі й біс у М Є В» Біт "ям; А іа
З ЗВ АВ ев АВ Ар А Ме Сль Зет СЛУ Нів Не Агу Сну Ада
СУ не Ав ді Ту бег Пе і то був Пе Аве бе б і ву Ява
В «ВЕ 20 ів ее и ма ув У вт Ро ів дво Сну Афа дах Тк М
Св Ав СН вар А АВ Сх Пар УЗ АВ Аво Бех УЗИ рев бе іа без а з с ее Ум Ана вар Уві Аяв УВО ОВ СНУ СНУ зо5 Зо ся зо ма В Сну См уз уві АНЯ УВІ Тто Мег мерів АТ ув ек 8 ЖЕ 335
С ем ей Аа Су ув во Уа АЗОВ АВ АВ Яга Має жег Не СИ
М ке ЗМО ві со Аз Ага СНУ Со Се бен Заг Со т м Аво Абе ви Сму
Меи бе Ав уві АпО СНУ Цеи Ре ет Сву Ме Не со СО ще Уви
Тв ве яв Ап Аа Ко Аа На Ав ЄМО Со Ага СНУ Сем ко Пе.
БЗег а у Тчголви Бегс вне а Тег нів их Заг ме о сл
Ма ув ма Пе Те сіу Заг у Абе Зег А Те Уві ма Се Ач як же З
Сем Тв ее НО Ат УБЕ СН і Ух Не ТР? АгО Бе Аа ОВ Ал 4 «й ща сту дев дер ви Ат Ага СИН СХ Бе дал ву Ре ме сим Туг ТЕ
Я Б яща
Аврома те СНУ Аа Сем се те ма сну Пе Був бе сту Аа яма «55 «ато «5 чяо жим Зк В ж КК тен Кі се Кен Кох г Ки їх а, са дез и
Су Ме ди пе С Аа Ада Ана бе Тег сю АОС же СЛУ Ар «85 а 5
Спу Ав Уві во Ме еп Ага ча си бегвів ма! Зак Си і жо ща БО 56 сив Ав єю Бе Ап Ар Сни Бе СУ Ав тв бет ВБве Сх Уві дер «ий» ЛЮК «ей штучна послідовність
«вийе Гм хоОог нео тла гідрогеняза 1 дельта! Бек» дет
Мега сна вал МУ га го уві ча ен Це ів ен ув Мем й ї В ЕЕ Ів сим а Те УВІ Авр ечЧа ви СК ла Аа У ни ме Аг Тир Уві
За 25 зв
У ша А зва у чо А АТ КК С і ец ви яз Аа чату СНО АВ Аз аінівціви уві Аа бегА те те ме Авроаца ста Уві ев Ав
Ав АВ его Аамі вні ув Пе ві У Апу Ав ЄМу УВЕ СЛУ ву Ар
Ах уві дер ів Кто вів ча Ті с Аа сік ві МН М Ан дет
Ав Рг) Пре бе Авлойе Між Зв Аа був СМо Не Аза Ме дет дви о 15 о
Кави Заг ТВг АВ АТО с Бе то А Аа лою вів Те ав Аг 120 15К
СН МУ СО Тв ув Яма Яни ме Ба деп су Уві Си Це Ре Су ув Тк маг су Пе ча смУ на сну Мів Пе су п ву Ра АВ 145 10 т 150
Ка Аго бе Ве На Ре СНО Те те: Ве Удома Буг во Бгто тут
Ар Аа го Ав Аг Аа Аа Спа бен Авт Уві СН бе УВО бек з18О 185 190
Авром цви Ме БегАго зег ар Бе ма Ту Ме міх іх Ро ув
Я ок з их й Ка ак с. лк ДІ хе т; іх В го я
Тегі в Те Ав сту Ме Рене Аво А Ми Мер Гец А Ку бах
Гуз ж СКУ Со Ше Не Че ані Ав аа Аг СНУ Му ви М Ар
Сир з Аа мес Аа Авраама Ве мою маг СПУ Ні Не Ага ЄМУ АВ
СЧуу Ріе лав ма! Тек Бег Тег Спо го Сує ТРАВ его їв Бе ув его с ма У ВЕ Те го Міз зем СУ Ада ба ТР Во ів АВ ін Аве і АВ СУ тт АВ У АВ Ахр аг Уа і еціув
Я КО КЕ
Акта емо Су См Ріє ма Ада лавра Уві Аня маг ет СНУ СПУ же З16 ЗІБ Зео
Ат УВС СЮ ОО М АЇв У Те Ме Азову Аа «кі» ва «вій» штучна послідовність ка «рай ТО восфотіцераденаврогеназа ПЗЗВУ; ЗАЗ «а» а
Ме йія ух Уві Шегі ви (Мн і хв варів Ме і уз Мне і ен во ма со сну Уві НЕ СНО ув Ав ме СО баг ее Ага вда Ада су Тут
Ко У Зо
ТВгАви пе б Бе Нів був Су ема беи йаро во См СИ ен дев
Се бег Пе Аве Аа Аа Ні Не не чу це Агорн АБО ТМ НЕ і ео Те СО Ава Уві Ме Аап АВ АТ СУ був ви ВЕ Аз Пе сту
Суз ве Су бе СУ ТЕ АБО ОА Уві Азов ву Азов Аа Аа г уа га Су бе Без Узі ЄБе Ав Аа Кт не Бег Аква Те Аг бе Уві
На КН Не
Ан 'єми це ві Не се схо ей ец ері ес Ага СИХ УВЕта
ЕК ХО їі»
Со Вів деп АВ ув Аа КН Ага СУ Ма Кто АВА ув Це Ана Ав 1 5 148
СЯ бБег не Си АВ Аг Є ув ух бе Сну Пе Не СМУ Бук СМе
Мів пе Су Те а Мем су Ме бе Абе 3 жег ем Су Ме! Тут 155 ЗУ Та
ЗА Ту? Біне ТукАжр Бе Со ви бух ів те во СНУ А ви Аа Тв чо 185 155
Сип Уа Си ня ев Веб лерієніки Ап Ме сег Ав У У Бех і міх Уві то СМи Ав та Бабкін ви Меї ме СПУ Аа Її ух ати 1 -е
С Не бегіви Мефіуз Кз су бегівенці ее Нейжпл Аве ЗЕ АК еВ йо я а
Силу Тегоуві Уві Ав Ве то Ав ви Су Аврама ви Аа ех і ув шах ж «ще
Не ецч АВ ЗУ Аів Аа Пе Ако УВЕ Єва Рез Та сно РО Аа ТЕ деп мегАЯв то РНе Тв? Заг Рг це ув БЮ Ре АЗОВ Уа Сем
ТЕ ВО 85 бе те бе іа Пе сну СУ Ве Те спо сою Ада си бю щи Це
С ем с У Абе і і зе ви Пе ув Туг Зегдао Ам ОР Бег
ІК КЕЮ 15 ще
Тніво Бе Ав Уві Аа Не Бо 5; Мам без Бгто аю Ні Уд
За КК 35
СХ Ато Ага бе Ме Нв Ще Нів 300 Ав йо Б СУ АВ бе Те
Діаіви йди ух Це Пе дів См сно Му уві дви Це АідАба СО
ЗБ ЗО 355
Туга сне Тк мен Арх Спи Ме спу Туг уві уві Ве Акр Не см
АівАО ие Уві Аів у Куб Ав во іп Аа МН уз Аа Не аа З 98 що
Ето Сну ТА Пе Арго віз Аг ем ви Тут яв 1 «ее яю «її» а «ій» лок «и» цтучна поспідоаноть
«пух «аа» ому ератве иропеная (З ЗВУ, СТУ Зе а азу СИЛ
Ме Аіує УВІ Заг і ем з і уз Аво фує Пе фу Ме ки бе мі
З Су У НВ НА ув Ав ем мно ее бе Але Ада ема Ну Тег
ТЕгАВА НЕ СМ не НЯ ув СТУ Ав в во вар АВИ СНИ СН Бе ув
Ка 40 «8 сна Ваг пе до бо Ада Нв бе Не у ви Ага баг Ага ТАг НВ іа Тег олЬ Аво ма Не лап АВ Ав ЄМ Був ей УВА Ве СУ
Ста не Су Ме СНУ ТЕ Аза п У Аве бе парів Ав АВ ув дл му Ве Бгто ма не вела то на Бе дав ТИг Аг Мег ма
В СО ев Уді бе СМ СИ бен вне ів ен о Сну ВІ бо
Сни Ах Ав Ав і жо Аа Мі ак СУ МВ тр Аяпі ув ес Вів Ав
КМУ Шег ба СЛ Ада Ано СЗУ Був бує бан Св 1 Те САУ Тег СНУ т45 то 15 185 ів Ще НУ Те и ев СНУ Не вв Аа СНО ее бео Су Ме Туг
УВІ ТугРне Тут Аво бе с Авп ув ви то Сво У Ап Ада ТЕ в а Сі Нв бен Зег Аве ісец Аза Ме бБегАвр УВЕ Ма бе іеи Нів уві Кто Сни Аве то Бег Тв ух Ак Ме Ме єму АВ ув ай Ж Кн зві Пе ет яр Мей в ув бо Сх ня і взі ее ах дів Заг АГ
СМЖ Тег уд УЖ Ажрв пе то із о Су яр Аа ео Аа ег ув.
Мі ес Айва У Аа АЧа Бе Ар уві ме Без ТТ и Вт Аа Те
ЗВО 25 ета
Да ше Аве го Ба Тв ан Рез іео сує Зв бе дер лет ув еш
ТБ ЩО е85 їв тек то не Ле СНУ Є Зег ПЕ Ба Ав сни СЮ би Пе
КУ Бек Ст УВІ Ма Су ув гео Бе ув Буг сн дво яп Су Щег
Тв во Бех дів уві Ап БЕме Рг СПб Уві Бі еи БТ во Ні ма
Ме З 335
УВА АлІ і ви МЕЧ і: Ме ке Со ви ло Без му У ео Тег
ЗА АБ а дідів жатіуз Не Ме Ав Со С СУ Уа Ав Ле Аза Ада ій
Туббви сів Тв Бек Ав Сі Ме КИ Гук м ві Пе йоца й СТ
З Я Ь
Зо та З
Аве сі Ар ма АВ СВІ ув Ав мем с АВ Ме уз Аа Ме
ЗВ5 ЗО За з
Бгто му Тег пе Ата АВ АТа ем ем гуг у - ка і а щі «жів В «аз 1 «й білок «б» втучна посліовнить «роде «и» Сосни вот дрогеноза ЗМ, МОЗ зе З30У, а
МегАвіув Уч багі ви Со ув Аз у бе ух Бе ен цез Уві
З У Е ; 7 й Но 15 сим му Уві нів з у лів бе іч Зеківо Ат А АВ Су Пе о т За
ТвгАва Пе Си КБе Ні іже СУ Аз ви дер Ар СМи СМ ве і ов
З а 45 (Зм Баг Це Ага Аяр дів бе бе Пе Су ен Ага Заг аву Те Нів
Кеш тес Ав Уві Не ен Ав ія С Був во м АМО е СТу шує Мне ув Ме су Те Аа ів Уві Авріви Ар ів АВ А же
Во ва ЗУ да См Ще Кто м вне вам Аа то БРе бегадви Тпг Ага Бе Уді 10 105 о вів січ ес ві не сік ін ев безівцієн і ви Ан у ві его 115 15о 155
См Аа Ас Лів Гея Ав Мі Але се Уві Тез Аяв ув ви Ав Аа 1 135 190
У ек Ре СНО Аза Аа СНУ Був ме бе слу Пе Не СНУ Туг ЄМ
Мі Бе чу Тег сна ен Му Ме і ец АН СМО Зегі ев СНУ Меї Гух
ЕН ЕК
Мі Ту вне Тут Аво Че спо Ав був бе то ви ОЗ Ав ма Тв во 185 180
Са УВС МЕ мо З Дав це еу Ав Мега Ар Уві ма аг 198 ВО го ів не У т си дя го Заг НГ ує ЕЙ Ме МЕН СНУ Ма ув
Син Пе бегі с Ме ув Ру Су См ви ви бе Аза Аа г
Су Тек лає Уві Авю Пе го Ав ее ух дер АВ ення ек ух
Нів ву Аз Силу Абе Аз Не зо маг Не го Пе о буз Ада т вг
Ази ЗБ Аве бло Бе Пегозак бго бва Сук Сів Кбе Авю Ава ув ї во їви ТНе Рез Мі5 Ке Су СЛУ а Тр сп М АВ ОА 3 Ап Не 2 Кене Кв
Си ви Си Уві Аа Сну че о бе ух Туг Жег Аво бе се Се 305 мо МВ ЗА
Теги Вег А У Ази Ре кто Сми УВІ его то ей мів Уа зей в КЕ см му Ап їв Ме ів їн Мі Со АВ Аа ба сту Уві Бе ПВе
ЗО че ЗО
ВізієвАєті та йе Не Аа Сію Сп сну Ма Ази Не Аа Ака С
ТЯ во бе ТВ Бег Ав Са МеКоху Ту Яен щі Пе Ав Не СНИ то ато ЗНО віз Ар Ар УВІ Аа Сім уз ів Бе Аа Ме ух Ав 1
Зо З За ща
Кто СТУ Тее Ме бра ів Аа ес ем Тег «05 о «Ян я «вад» «жі» Тен сажжж БАЗ «Не шу паазадасос овес кою свас доапасесся все паса тав чаша ео яцаасаа вааножає віссдсцаю оссасВоя спасе то їсосоцнюює ялшеюв возом засоссасво ваааицо! сосна а вигадав г Неві сазана сепесвав сени Зав сененіа ісдозасвах совооицає сооаево содсваанео сооВісссе БІ ца пЕавов сассБою зажасцецє ююносоз поси осовасію З сосідета едооооці десодавесо зашзевава сосвсовіо сабосаае Зао завеваслю соц ен іазасосоє досзазавиає мосівюв содетсец яко «танці сосвайосо сапсююе зам поза ВасНи ща пебапоував асеесіоє зсоосаво оса овес йсбессю 0805 ско е ик учи У Кук фечкця духу кивии тю КВК ичуо яку Б іст Зк «щас овеа саше Ффарсадцаца жесоссве свавазнну БО ази ссночае авданеи;: асіанноави сесцовце ца йая юпоцоє тай зашевіюо шоманес засос овівсосісво созосзавов осо даЗ ТО зездсавюз возвнеоє аводавассу дсдассва осувієсян несса о сова! ірасавооі сонсюдесу совсзсено ссосмповасісваосааюоюа 0500
«адцаЗаа ооо асом авапожеа ваесюв сваоєв ОБО
Кеж З З сур. же Ж» зВежекучкквих Кука ке их сх. гу ай гри зоовсею сююваєй сосозавціє шнсеосво шов чего ТО звюсасвіює всоваавасою юопочеме сівсшеє даасвааа спопоса у ТО вх: ще 2 МСЕ ОХ Ох х ха ке сваодесвеа своє поз свое сосок база яд аножано заезссозеда зиасойосє цдезвазавове щевооева паза м 12050
ВСЯМО зефесєтя заесенцює ще СЕЗ в сеовоадінеса жуносос неосюво гва таза ей» зциечна послань «аа С амюфогтцерндаарогеназа ОЗОКІ Меч за В зідлессвов аюоспосціює понесе вієсковиа зеснососа пса що пасосзєво вас осаої волоссі досновос двесівассю сосвовнео 1 кизашсво Казовавоє совок ско сой сєінесвє висце 1 чакневеєя ссотасосо наснозає вошіедо вівсобосо доассносяє «4 авеодйсася есосше слова зосцієвще На возе зосовос ОО авізисвої ссцснуюа зсвсосвай нквоє щас ісоссваме ЗО ссасиюю ащсоаєце догово є завоює ау свое ой свавнєс пааавасі соцінеціє веиподес асеновієв вне а «адецієне сосшица дасевесая дбосізов аснасзс ааосеої 540 «вес ацсщазеве чною де дові зосваново ссписдас що персвоса Новсспос івадассвао пвезовею сою овідсосавею БО ще ажи ссвадавово ссвовсвіс віссю сечо сс Те зада ще дайознес пого вкщсоевв поса ТВ іїзсевссоо вососмасве ие поповац шесесвоці То що сешасвю псесиіво оазадатє савдаютюиі созцасюа само ВО ді мдннтса вросостр достат сбннююв; сумозномессоюннй Ве сзезідоєсо зазаоюойос шіорою озісіюрсіс поваоспсоп іст 0 1О2о посезросно ісоясрокос гесвоієвює зповодбо водовхнео севосиює ОВО тосоувоєтско су вустсе поситвоє шстш сесію о'мете сова 149 девоавосо Насоді савоцеосї сдсзнас заозооою сідає 0 150Ю ісоуідваєке ссозасінца дісіднасі свссунося ссбдсаос! свадеюан 01960 воїдосвосо осозцвосоє васбуйсі вопюсонує сюсістов носова 0326 зацамесос дсаюканою соріююєсю сабсідорсо серзоооє даассвяшс ЗВО сідоеснаєв сиюсдсгоє осв зоїаосуво дтассазас сонне СО посвісвеса раросіює дода слоосідвов зозоворе соусмнеєву ТОВ вкосідецку пеестосоє фсістраа дассіюенн сідавтсве сосідвово 1580 «Ті ЩО мазоссвов відассовє ооіаоо вісрссова аосноєсюся діесесй БО пасососво даоіюєвої золою досновоу дпосівассу сосадансві 220 снежогеє Нзадовацє довсвсаю скоіевм спевассвс юдеї 00ОС18О засднйоасе ос сасіденосі досві посвасое сопаєсює 0ЖЮ вайойсасї содсікнца доасосван кстюютює шуклесвує соссвевиє ЗО сажсоюво сщеца засос зпоснасу вшсбасцє гасу но воїдерюєь вдсюуазою! вої й песолодею аосіонккю соубсюеє 500 ненсзеся Неесснсос веадчассаво давасісву всещеа щодсацє «5 сна ссозаоееюні позови веазоцою сов сонце тео адсаце нюсіюанє сабссснє соісасейс зідососюс нею 0О78О івсіосвосю засспосає юною Нойсвоці вескзоо ізнощасі я ісзішсісв воцсосівос юдедаогс веососо совасоі Мосооюює 0 ВБО соосоцосо воза нос овен вес аа це «з 0 «їй» ДНК «кій» штучна послідовність
ЕК
«ви» СА фехроглнювдедестенажа ПЗУ: де оам) я З віддсаввов віссю деззцасааоа збаващше шоу водсуюсає що сазавоцсое щозазосо ісцідсво зобасвося зозеовай носевецеє 128 педсюнимо відвасанй завада: віссзсоаіз сссясйсяі содесдсоя ЗО соціо сідаю зувсовумє васцососво аанеасю состнюове 054О лева юдовасвав ссацочая ся сддсвавосо садоноссо о
Векнався сасодне завіеєсцеве сіобссою восжмнові осоваєю ЗО сідєасівї всосооові досодавосє авідсівано сосвосціа сова 420 завсшокоє судецейм ювавсвсоє скусневаяою еіаові суден яю саізноюта соснова сайоїає озаєюсіво огеоінно! насе не дасайцаня візавсідсс псбюосваєс дссасісвою зсзосвейоюаосю 80Ю сідав сода сеацєтююм сбассацаця воює сосками ще зішеосдеця вацаване яобажзано сосоцєнве пила ав процес ое то одівсюгюю юдаейсе дососів? дешеоосюю совосазасв ісюссодеє ОО 78О пецасався восіанссс засоудаассо псрвссавів дод носан аєсіесю 00 В
З Фо ум кчфичв ж кину рекет ЕК тачку іх им сова ісдаєваво сснсінсо севсасацю восопсорає веде Б й В дохколеленея хи. со ще лож сук сука фун ху кое сег звернете сові сесомлеавєс Мспсіюснс поводноз есе 00СОЖО лу Ким и тр я У аа ме не Ан уки са Сех Е. КУ Я Я ому ших їх ї г. ВУЖ зюеасвес всозаавсся есоссоо сазосмеєос васвяаа! спссосО В ТО як. уверх как дуй до лекчуєви квт ХуКей фс рев кВ фа пееує ху уки ху гонку КЗ савдаЗсзєв вознсосоюо зовано свазонося ссовавцю ЗИ аВ 11 зване звассоасза азасоносе завлавоозо юсаоєваї ввааасіи 150 щі «в ел Виза вен Б вх Ж седодвеся нозсосоов Оса аа 185 «Еш В ше ух ща Нв Клей «Вій зитучна гсогидовнть «ее» кеВ ЯМІ «ща З
Ки ото КІ Жуков жЕфея жи ие сказ ск ея кеВ» ее круки СІК ЕК УВУ ще весна носа завадесває збзаце ее а водо що ше схичуву» В ре ее уаичсвк ие еф ки туєчику саги Е рик КЕ Ву ук . -е я саваадвсцю шеозаносі вошево ообасвова асжеооцвав сзевавоюе 1 іоссоіносе знлевимуа зовеоюниє засусосено зовано! сосмюе 240 тафЕсу вики св бух ФК мису ух, ик к живити жи фут и ско дек и Ко уче зе впсвине камненсвая севоонов! сов содсвеааосю соовеосев ОВ їту пютут лу плюс ач их тимусу уки В Вечеч ль зи дачінасо свссопсіс ааарясдеоє ойбосой восюєа кисовас А: уче ие Музи уче уже Ут вивих ке Кук Ву гео иветвея КеКУ КЕ Ко т ЕЕ сосен дес! осссозавоє вамосіваво сцєзесою сао ває чо засни сопе Мина с сс аааВвас Моб сосен зви заз со щенсвеоо дес шеотаа соц ве своя состава сайомеє завісосіюєд дае наст мо су фохЖея кожи Ток ру керй коню о дих ие усе ижж КИ соя дей Кук ку ЗТ пашназва зно ос ссішоосвас посада асо пеасс ОО села а каб злив з и сек жу УК ск ут свучур учи хую (ля му фр, дя сідванеса песен пецієсе сбвесвожуа вес сваааанне оІ оавенноз шозанеос соссвиої ващсосев ковосвався кода ща
ККУ МАС КЕН МЕ РЕ М ЕЕ МЕ КЕ А АХ МОБ МЕЖА ї ср ус м УВ лу виник мкс Уч кути ско скихуУкВл ко иусуйує слу гнид нем ЗИ КНУ пооосвиє винос сс додассааа всоса засо ЩО смів а ідасвае себоїасо ссасвсано соосісовсеоовазся 000 пеароаоваа боро це асепосоеоі вва зав са а Бе авсасвою сонні ссоддавціє осєюсяє баовецнщі ою 00 укузу коти у ЩА З ивек Кс ря БЕЗЕ ВО ї. р У 3лед виною водна горе себе ганок: Кон есОВа 1080 свадосаєа зезшосоє все сзазенеся сссвозцо баба ТО зпеавч) зазосзасза зезсозноасо дезазазезе шШезоодєеваї звати 12.0 пездаїся Модедесоз носа ва 185 о Ук сдувпк стану
ЗЕ Я МУ х ЗЕ ОК С МАДАЯК У хх «ей» ручна посгдевність веж «еейк ВВА ОКУ НВО віесвавсо іо сюва пазаовсвая анааоче зскмаза возсоісве 5 сававчасос щшезаацеє ісесвО азйеасасоз возісчааО ісесвааоце 180 рати а а и шУЕ ср. шини ЕВ. прив ваними чих й сучка суки КУ уч Вк ЗК цсОсо возавосвай ваза вссоцсові сосаєнс сдоссююоа 1 есасих вницасюв аожооає весолососво зааазова! сосаноює КО кинсвщіа косзвасава сосен! серозна содсазазед содоесов ЗО сшфнОсн Оеосцесе Зссоспааосє замеаза сесаосве сенс ває 4-й о Ке Ов їх хх з МУ Кк ї Е- ЦИ СХВхХ ке МИ их тести ви Енея теку кручі ие си су кох Кук каф уємуК ку ха КУ я хе ер завоював сопе шазосцсюю пасазаваою юс содової ЗВО сасвнкеца сосвануоо сабо пваносюа свої чесні У аа жк ви узи ев тати овекия Жуки: ХВ В Уха сви ЕК декани аю ЦО еВ Меса СВК мас ПЧ ока руно т жехе ки Х руси мк пори сус сфе кити серия кет ЕХ сшвавюв цедВшео овцсюсві шеосвовов вісооїссає саван що засос задано вставав ссспдсюве щешайав щей 750 давнє юоавнес сзсасмив саоовсюю созосаавоз ооо до т78о сит у я кчух ХК УСОУ ЕМ УК хи си екв кв фо пу в уже фев кине З Я
Зедосанез асоессю васусєевосо всовосваа дода осо 540 со ав ісштасвасої сспеюювесо ссаеєвсвна зоодоцчає вада со о свопацеан юдоссеца вопйоооооє ваеусв моБаота свв 5 зашесі соцаасй сосодаацію юосідосих ішсвсзце сус 12 щеосвснес возававова шосе саскнцо засаа спосо 1 жеосвомсс зазавоу шоссе кізасндес з асаааа се Е семшомса зсмезосоє зозаемс сваеспоюо сосвомова мама 1140 анЗжане заоссовеоя засне даазаазосос шозовсваї дек т сенинасов есе Мен асіза зай «ах З «вія лак «ай Квсеелонія єс «КУ х «їх Вептив хай" Зекенросевинию а вопвлровсмтреснімаміотвне ери, М «Ме 33
Ме АВ ОЗ Не Бе Ап Бе бек бек СИу по ія Мей бе Бк Аа і 5 та 15 тах у ух
К ке З
СМУ ТР Зв а Меси маг Зах Бе Ака Сх Гу о аа Не сил
УВА СВО Ми Аа С 1 у Аво КН Аг Ав жо Цен еп УВі то хек ди З Емі Зб Ес й і я Кі їв их ВІ ще ке Аа тугу мае Ре був Ні у СНУ СЛУ Ав і В РНа
Аа Аа Уа РКО бе Авл бе бен Су бар ех Тве Тек ів Авр Ту
ВО щ 93
У: з ше я Ж кує 7. й ги ху Ж ях 3 Вих ух. ти бу Хоб х.
Уві Ар Ав У Буг Мр Ав Аа баг Аз Ве бу ЗА Був ув що 5 НЕО
Те Суб Те Ого АБ Мазі Рие Аяр віз уро ай т ЯН Авр с еиу
Ага Ав Уві уз го Мей Ат СЮ Тер Се Кви Заг Азр Ав АВ АВ 155 135 1
Те Ме ів Туг Сув Рго Ап Єно Те Пе Авр Сі» Ве Лів Пе дер см Тк ТО дво Ве Сну Аа АБО жа Уа? Уві на ліа Авіа Бра Баг
Засн івієм бегАгтр рн Пе дев уві Кег Аа Ту Сну ув йеа то 185 15
Тег Ан су Ав Ка Кубай Ве Су Без Ав СЛУ Мем Твг Оля
Ще ув Со Варісцівц Су ув А Ап бе ма Су Р бог о 15 КІ
Не і вино ує Сет В ве аа яр аа су ж Ме ве да Ту шк Ка ша 3 чо бо Те еве Аве Тер Ту | вх бог Су і о ме МН і ув тв ви хв А ВАВАИ СНУ СТУ Уа АНа с МЕН Аа ув Не дал сни па ух
АвВоОщшівєніви Те в Ві Пе йзо Ази Ве Аво бе Тугб Ага вп
АВ УВІ ЛІВ і ув Ада Адм Ага маг Ато Ме деп узі б ве єсмвп ви
Віза ема ем Аве кух ео бе бе мм сн бек Ре Ай АВ сСпу бе НА і ви ув СМу Ні Ако б уві Сму СТУ Ме? бла Аз
Бегбе Гуг Ап Аа МОТО во ЗВО СУ Мі дев Ай мо ТНг Аз за За 35о
Бре ме ув си Не сі Ат иа НІВ Су
БЖ З
«ж» «ій» ДНК «Ж» Евснепення сої о «ві» пен ке ТА ТОМВ)
ЗК ож крик ку чики ки и сі ка теку и ім г же кі ад «ее фо вОсеринеєвидроконтовоннаммотрансюерива зе. «Ки да сбужу: счкутте доку тут ейахике стик Яхти з езуетвуисвивя пвх се о зоогсава са зонної сосен вес саце соб що овозесває ззозвасоса сова асом сесія завас аа ти сассоющеса задане сазеваов заоЗзааоюся поза ісдсаВи тва спав ссіовасів свгмована пес соеовосом соовао аза засув осо меооцця ввиносяос сиза и ацесою Зо невесцосе сзаоссю іззадааосо зазазааєі певспосваа с ас ЗБ чисзваа сома шще ес со знаацесва ев воза ай зване спяімасВ найососо аавазоса ее соосасе ЗВО свавасоєсва яспофоовс вовною птооесвеь асп васевней. ЗО іосцієвза Мозсцісва сової сівашазсо споососося заавааце ОЗ
Засссдаю зеосоцасваї соцовеци особа щебовева засо БК песо оце ца забоса ссвасоас зозосюса зевасасу Це седесоас Мосс ісгатово? сіуомсіва зайесеав восоунасвс "БО сФшазсю вазенава заеавмсви спшннссво васюсіва есе Ва оазасазе асасов сзавасев зсваваде зосжевоа ваша пов песо меси доросиуас азейомйос божа оса БО зЗасоневв сасцчезаза іжясоо пососсоза озон ча ває то солей кздевовеві сезавоею асзовонсв вза сова то сасодіна З
Claims (12)
1. Мікроорганізм, здатний виробляти О-фосфосерин (ОРБ), в якому (а) активність поліпептиду, що має амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮО МО: 1 або 5ЕО І МО: 2 та є здатним до експорту О-фосфосерину, є підвищеною порівняно з його ендогенною активністю; і (р-1) активність фосфосеринфосфатази (ЗегвВ) додатково послаблена порівняно з її ендогенною активністю, і/або (р-2) активність фосфогліцератдегідрогенази (ЗегА) або фосфосеринамінотрансферази (Зегс) додатково посилена порівняно з його ендогенною активністю, де мікроорганізм належить до роду ЕзсПегісніа, роду Ету/піа, роду бетайма, роду Ріоуїдепсіа, роду Согуперасіепит або роду Вгемірасіепит.
2. Мікроорганізм за п. 1, де мікроорганізмом, здатним виробляти О-фосфосерин, є ЕвзсНегісніа сої.
З. Застосування мікроорганізму, в якому активність поліпептиду, що має амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО: 1 або 5ЕО ІО МО: 2 і здатний експортувати О-фосфосферин, посилено порівняно з його ендогенною активністю для вироблення О-фосфосерину (ОРБ), де мікроорганізм належить до роду ЕзсПегісніа, роду Еплміпіа, роду бетапйа, роду Ргоуідепсіа, роду Согуперасіегит або роду Вгекмібасіепит.
4. Застосуванню мікроорганізму за п. З, в якому в мікроорганізмі активність фосфосеринфосфатази (5егвВ) додатково послаблена порівняно з його ендогенною активністю, і/або активність фосфогліцератдегідрогенази (ЗегА) або фосфосериноамінотрансферази (5егс) додатково підвищена порівняно з його ендогенною активністю.
5. Застосування за п. 3, де мікроорганізмом є Е5сПепстпіа со).
6. Спосіб продукування О-фосфосерину (ОР5), що включає: культивування мікроорганізму, здатного виробляти О-фосфосерин, в якому активність поліпептиду, що має амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО: 1 або 5ЕО ІЮ МО: 2 та здатного до експорту О-фосфосерину, підвищена, у середовищі; та відокремлення О-фосфосерину від мікроорганізму, здатного виробляти О-фосфосерин, або від середовища для нього.
7. Спосіб за п. б, де в мікроорганізмі здатному виробляти О-фосфосерин, активність фосфосеринфосфатази (ЗегВ) додатково послаблена порівняно з її ендогенною активністю, ілабо активність фосфогліцератдегідрогенази (ЗегА) або фосфосериноамінотрансферази (5егс) додатково посилена порівняно з їх ендогенною активністю, де мікроорганізм належить до роду ЕвзсНепісніа, роду Епміпіа, роду бетайцна, роду Ргомуідепсіа роду Согуперасіепит або роду Вгемірасіепит.
8. Спосіб за п. 6, де мікроорганізмом, здатним виробляти О-фосфосерин, є ЕзсПегістіа сої.
9. Спосіб вироблення цистеїну або його похідної, що включає: а) вироблення О-фосфосерину (ОРБ5) шляхом культивування мікроорганізму за п. 1 або 2 в середовищі; і Б) реагування О- фосфосерину (ОР), виробленого в а) або в культурі, що містить його з сульфідом у присутності О-фосфосеринсульфогідролази (ОРЗ5) або мікроорганізму, здатного експресувати його.
10. Спосіб за п. 9, де сульфід є принаймні одним, вибраним з Маг5, Мабн, (МНа)25, Нео5 та Маг52Оз.
11. Спосіб за п. 9, в якому в мікроорганізмі, здатному виробляти О-фосфосерин, активність фосфосеринфосфатази (Зегв) додатково послаблена порівняно з її ендогенною активністю та/або активність фосфогліцератдегідрогенази (ЗегА) або фосфосеринамінотрансферази (Зегс) додатково посилена порівняно з її ендогенною активністю.
12. Спосіб за п. 9, де мікроорганізмом є ЕзспПегіспіа со). Мікроортанізм, який вироебняє О-Восфосерин, та спосіб отримання Сікисросеврину або «цистеїну з його застосуванням. 120564 100964 : зашне яд й і і й я й Я Я а й в с як ша п /// шк дове ! и Й внутойиньоклітинна концентрація СИ
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| KR1020140104670A KR101677328B1 (ko) | 2014-08-12 | 2014-08-12 | O-포스포세린 생산 미생물 및 이를 이용한 o-포스포세린 또는 l-시스테인 생산 방법 |
| PCT/KR2015/008336 WO2016024771A1 (ko) | 2014-08-12 | 2015-08-10 | O-포스포세린 생산 미생물 및 이를 이용한 o-포스포세린 또는 l-시스테인 생산 방법 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| UA119985C2 true UA119985C2 (uk) | 2019-09-10 |
Family
ID=55304343
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| UAA201700326A UA119985C2 (uk) | 2014-08-12 | 2015-08-10 | Мікроорганізм, який виробляє о-фосфосерин, та спосіб отримання о-фосфосерину або l-цистеїну з його застосуванням |
Country Status (11)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US10323262B2 (uk) |
| EP (1) | EP3181685B1 (uk) |
| JP (2) | JP6570617B2 (uk) |
| KR (1) | KR101677328B1 (uk) |
| CN (1) | CN106795485B (uk) |
| AR (1) | AR102049A1 (uk) |
| ES (1) | ES2753413T3 (uk) |
| RU (1) | RU2663726C1 (uk) |
| TW (1) | TWI654305B (uk) |
| UA (1) | UA119985C2 (uk) |
| WO (1) | WO2016024771A1 (uk) |
Families Citing this family (13)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR101677328B1 (ko) * | 2014-08-12 | 2016-11-18 | 씨제이제일제당 (주) | O-포스포세린 생산 미생물 및 이를 이용한 o-포스포세린 또는 l-시스테인 생산 방법 |
| KR101694632B1 (ko) * | 2015-09-11 | 2017-01-10 | 씨제이제일제당 (주) | 신규 ｏ-포스포세린 배출 단백질 변이체 및 이를 이용한 ｏ-포스포세린, 시스테인 및 이의 유도체의 생산방법 |
| JP2018023356A (ja) * | 2016-08-04 | 2018-02-15 | 三洋化成工業株式会社 | 有用物質の生産方法 |
| KR101825310B1 (ko) | 2016-12-29 | 2018-03-15 | 씨제이제일제당 (주) | O-포스포세린을 생산하는 에스케리키아 속 미생물 및 이를 이용한 o-포스포세린 또는 l-시스테인을 생산하는 방법 |
| US20230127940A1 (en) * | 2020-06-09 | 2023-04-27 | Cj Cheiljedang Corporation | O-phosphoserine export protein variant and method for producing o-phosphoserine, cysteine, and derivatives thereof using the same |
| FR3112549A1 (fr) * | 2020-07-20 | 2022-01-21 | Arkema France | Procede ameliore de synthese de mercaptans fonctionnalises |
| KR102414743B1 (ko) * | 2020-09-09 | 2022-06-29 | 씨제이제일제당 주식회사 | 신규 o-포스포세린 배출 단백질 및 이를 이용한 o-포스포세린, 시스테인 및 이의 유도체의 생산 방법 |
| CN115197954A (zh) * | 2021-04-14 | 2022-10-18 | 上海凯赛生物技术股份有限公司 | 用于发酵生产1,5-戊二胺的重组dna、菌株及其用途 |
| KR20220163754A (ko) * | 2021-06-03 | 2022-12-12 | 씨제이제일제당 (주) | 신규한 YhhS 변이체 및 이를 이용한 O-포스포세린, 시스테인 및 이의 유도체의 생산방법 |
| KR20220166947A (ko) * | 2021-06-11 | 2022-12-20 | 씨제이제일제당 (주) | 신규한 MdtH 변이체 및 이를 이용한 O-포스포세린, 시스테인 및 이의 유도체의 생산방법 |
| KR102654301B1 (ko) | 2021-06-23 | 2024-04-04 | 씨제이제일제당 주식회사 | NADH:quinone 산화환원효소의 발현이 조절된 재조합 미생물 및 이를 이용한 O-포스포세린, 시스테인 및 이의 유도체의 생산방법 |
| KR20230103229A (ko) * | 2021-12-31 | 2023-07-07 | 씨제이제일제당 (주) | O-포스포세린 생산 미생물 및 이를 이용한 o-포스포세린 또는 l-시스테인 생산 방법 |
| WO2023182322A1 (ja) * | 2022-03-23 | 2023-09-28 | 東レ株式会社 | ３－ヒドロキシアジピン酸および／または３－オキソアジピン酸を生産するための遺伝子改変微生物および当該化学品の製造方法 |
Family Cites Families (12)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE19726083A1 (de) | 1997-06-19 | 1998-12-24 | Consortium Elektrochem Ind | Mikroorganismen und Verfahren zur fermentativen Herstellung von L-Cystein, L-Cystin, N-Acetyl-Serin oder Thiazolidinderivaten |
| JP3997631B2 (ja) | 1998-01-12 | 2007-10-24 | 味の素株式会社 | 発酵法によるｌ−セリンの製造法 |
| KR100620092B1 (ko) | 2004-12-16 | 2006-09-08 | 씨제이 주식회사 | 코리네박테리움 속 세포로부터 유래된 신규한 프로모터서열, 그를 포함하는 발현 카세트 및 벡터, 상기 벡터를포함하는 숙주 세포 및 그를 이용하여 유전자를 발현하는방법 |
| CN101715490B (zh) * | 2007-04-06 | 2014-02-05 | 协和发酵生化株式会社 | 谷胱甘肽及γ-谷氨酰半胱氨酸的制造方法 |
| WO2009116566A1 (ja) * | 2008-03-18 | 2009-09-24 | 協和発酵キリン株式会社 | 工業的に有用な微生物 |
| RU2458981C2 (ru) * | 2010-03-04 | 2012-08-20 | Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт "Аджиномото-Генетика" (ЗАО АГРИ) | Способ получения l-цистеина с использованием бактерии семейства enterobacteriaceae |
| WO2012053794A2 (en) * | 2010-10-20 | 2012-04-26 | Cj Cheiljedang Corporation | Microorganism producing o-phosphoserine and method of producing l-cysteine or derivatives thereof from o-phosphoserine using the same |
| KR101381048B1 (ko) | 2010-10-20 | 2014-04-14 | 씨제이제일제당 (주) | Ｏ-포스포세린 생산 균주 및 이로부터 생산된 ｏ-포스포세린으로부터 ｌ-시스테인 또는 이의 유도체의 생산방법 |
| KR101404376B1 (ko) | 2011-12-15 | 2014-06-11 | 씨제이제일제당 (주) | 신규 ｏ-포스포세린 설프하이드릴라아제를 이용하여 시스테인 또는 이의 유도체를 생산하는 방법 |
| KR101493154B1 (ko) * | 2013-05-10 | 2015-02-13 | 씨제이제일제당 (주) | 신규 ＲｈｔＢ 단백질 변이체 및 이를 이용한 Ｏ-포스포세린의 생산방법 |
| KR101525663B1 (ko) * | 2013-05-10 | 2015-06-04 | 씨제이제일제당 (주) | 신규 ｏ-포스포세린 배출 단백질 및 이를 이용한 ｏ-포스포세린의 생산방법 |
| KR101677328B1 (ko) * | 2014-08-12 | 2016-11-18 | 씨제이제일제당 (주) | O-포스포세린 생산 미생물 및 이를 이용한 o-포스포세린 또는 l-시스테인 생산 방법 |
-
2014
- 2014-08-12 KR KR1020140104670A patent/KR101677328B1/ko active IP Right Grant
-
2015
- 2015-08-10 JP JP2017507849A patent/JP6570617B2/ja active Active
- 2015-08-10 CN CN201580043665.3A patent/CN106795485B/zh active Active
- 2015-08-10 RU RU2017105865A patent/RU2663726C1/ru active
- 2015-08-10 WO PCT/KR2015/008336 patent/WO2016024771A1/ko active Application Filing
- 2015-08-10 US US15/329,921 patent/US10323262B2/en active Active
- 2015-08-10 UA UAA201700326A patent/UA119985C2/uk unknown
- 2015-08-10 ES ES15832358T patent/ES2753413T3/es active Active
- 2015-08-10 EP EP15832358.4A patent/EP3181685B1/en active Active
- 2015-08-11 AR ARP150102593A patent/AR102049A1/es unknown
- 2015-08-12 TW TW104126219A patent/TWI654305B/zh active
-
2019
- 2019-04-25 JP JP2019084701A patent/JP6807976B2/ja active Active
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| KR20160020050A (ko) | 2016-02-23 |
| EP3181685A1 (en) | 2017-06-21 |
| WO2016024771A1 (ko) | 2016-02-18 |
| JP6807976B2 (ja) | 2021-01-06 |
| TW201612319A (en) | 2016-04-01 |
| AR102049A1 (es) | 2017-02-01 |
| CN106795485A (zh) | 2017-05-31 |
| EP3181685A4 (en) | 2017-12-27 |
| JP6570617B2 (ja) | 2019-09-04 |
| TWI654305B (zh) | 2019-03-21 |
| CN106795485B (zh) | 2020-10-30 |
| ES2753413T3 (es) | 2020-04-08 |
| US20170260556A1 (en) | 2017-09-14 |
| KR101677328B1 (ko) | 2016-11-18 |
| JP2017528126A (ja) | 2017-09-28 |
| RU2663726C1 (ru) | 2018-08-08 |
| JP2019150038A (ja) | 2019-09-12 |
| EP3181685B1 (en) | 2019-08-14 |
| US10323262B2 (en) | 2019-06-18 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| UA119985C2 (uk) | Мікроорганізм, який виробляє о-фосфосерин, та спосіб отримання о-фосфосерину або l-цистеїну з його застосуванням | |
| Fedorov et al. | Phytosymbiosis of aerobic methylobacteria: new facts and views | |
| Mellor et al. | Legume nodule biochemistry and function | |
| Drider et al. | Genetic organization and expression of citrate permease in lactic acid bacteria | |
| BR112020003867A2 (pt) | polinucleotídeo que tem atividade de promotor, vetor, micro-organismo do gênero corynebacterium, métodos de produção de uma substância-alvo e preparação de uma composição fermentada, e, composição fermentada. | |
| CN110325642A (zh) | 产生l-氨基酸的棒状杆菌属微生物和使用其生产l-氨基酸的方法 | |
| Geddes et al. | The mechanism of symbiotic nitrogen fixation | |
| CN108949661A (zh) | 一种产o-琥珀酰-l-高丝氨酸重组大肠杆菌及其应用 | |
| CN107099548A (zh) | 提高大豆转化效率的方法 | |
| CN106459888A (zh) | 产生腐胺的变异菌株和使用其的腐胺产生方法 | |
| CN107075465A (zh) | 阿魏酸转化为香草醛的方法 | |
| Stacey | The Rhizobium-legume nitrogen-fixing symbiosis | |
| CN106164249A (zh) | 用于基于蔗糖的改善精细化学品产生的修饰微生物 | |
| CN107653249A (zh) | 一种大麦钙调蛋白基因HvCAM1及其耐盐应用 | |
| Jing et al. | The small and large subunits of carbamoyl-phosphate synthase exhibit diverse contributions to pathogenicity in Xanthomonas citri subsp. citri | |
| UA116989C2 (uk) | Біосинтетичний ген uk-2 і спосіб поліпшення продуктивності uk-2 з використанням такого гена | |
| CN106755062A (zh) | 使用磺酰脲类除草剂水解酶基因作为选择标记物的转化方法 | |
| US20240060098A1 (en) | Amycolatopsis strains for vanillin production with suppressed vanillic acid formation | |
| CN114438102B (zh) | 一种草莓乙烯响应FaERF13基因及其在改变草莓果实成熟期的应用 | |
| CN108587996A (zh) | 高产聚γ-谷氨酸的工程菌及其构建方法与应用 | |
| ES2626277T3 (es) | Gen que transmite resistencia al peróxido de hidrógeno y un método para utilizar el mismo | |
| UA127451C2 (uk) | Штам streptomyces fungicidicus для продукування ендурацидину та спосіб одержання ендурацидину | |
| UA127452C2 (uk) | Бактерія streptomyces fungicidicus та спосіб одержання ендурацидину в штамі streptomyces fungicidicus | |
| CN106701800A (zh) | 一种出芽短梗霉聚酮合成酶基因及其应用 | |
| JP5164093B2 (ja) | イネの病原菌に対する抵抗性を高める方法及び病原菌耐性イネ形質転換体 |