UA127451C2 - Штам streptomyces fungicidicus для продукування ендурацидину та спосіб одержання ендурацидину - Google Patents

Abstract

Винахід стосується штаму Streptomyces fungicidicus для продукування ендурацидину, який має депозитарний номер ATCC PTA-122342. Крім того, даний винахід стосується способу одержання ендурацидину, який включає: культивування штаму Streptomyces fungicidicus у культуральному середовищі в умовах, достатніх для одержання ендурацидину, та виділення ендурацидину з культурального середовища.

Description

У даній заявці згідно зі ст. 35 Кодексу законів США 5 119(с) запитується пріоритет попередньої заявки на патент США рег. Мо 62/430455, поданої 6 грудня 2016 р., зміст якої у всій своїй повноті вводиться в даний опис за допомогою посилання.

Галузь, до якої належить винахід

Даний винахід стосується модифікованих ізолятів бігеріотусев Тшпаїісідісив, композицій, 775 містять ці ізоляти, і способів застосування таких ізолятів і композицій для біологічного синтезу ендурацидину (енраміцину). Даний винахід також стосується модифікованих ізолятів зігеріотусез Гшпаїісідісив, які біологічно синтезують ендурацидин і сприяють більш ефективному продукуванню енраміцину.

Передумови створення винаходу

Ендурацидин, також відомий як енраміцин і наявний у продажу як ЕнрадинФб відповідно до програми Охорони здоров'я тварин М5О, являє собою природний ліподепсипептидний антибіотик з 17 амінокислот, який біологічно синтезується і секретується бактерією Згеріютусев

Типдісідісив, тобто природним продуцентом ендурацидину.

Ендурацидин являє собою родову назву аналогів ендурацидину і включає ендурацидини А,

В, С ії 0. Цей пептид може бути виділений з ферментаційного бульйону, а в першу чергу міцеліїв, у вигляді суміші ендурацидинів А і В, які відрізняються одним атомом вуглецю в приєднаному ліпідному ланцюзі. За своєю структурою, ендурацидини відрізняються по С.12- або

Сіз-27, 4Е-розгалуженій молекулі жирної кислоти, зв'язаній амідним зв'язком з залишком аспарагінової кислоти, і присутністю множини непротеїногенних амінокислотних залишків, таких як ендурацидидин, 4-гідроксифенілгліцин, 3,5-дихлор-4-гідроксифенілгліцин, цитрулін і орнітин.

Ендурацидин має сильну антибактеріальну активність іп міїго і іп мімо, спрямовану проти грампозитивних мікроорганізмів широкого спектра, включаючи Сіовіпдіит рептгіпдепв, резистентний до метициліну біарпуіососсив айгейив (МКЗА) і резистентний до ванкоміцину

Епівегососсиз (МЕЕ). Ендурацидин інгібує біосинтез пептидоглікану бактеріальної клітинної стінки за допомогою утворення комплексу з позаклітинним ліпідом ЇЇ, тобто попередником клітинної стінки бактерій. Сайт утворення комплексу ліпіду І з ендурацидином відрізняється тим, що він розпізнається ванкоміцином і відповідальний за дію ендурацидину, спрямовану проти мікроорганізмів, резистентних до ванкоміцину. На даний час не існує якого-небудь документального підтвердження перехресної резистентності ендурацидину з будь-якими застосовуваними в клініках антибіотиками, а також немає ніяких даних про еволюційну, набуту або передавану резистентність. Завдяки відсутності якої-небудь відомої форми механізму передачі резистентності, відсутності біодоступності при пероральному введенні, низькій токсичності, а також значній антибактеріальній активності відносно Сіозійдішт 5рр., ендурацидин є ключовим антибіотиком для боротьби з ентеритом, що викликається клостридіями у свійської птиці.

Відповідно до цього, ендурацидин, при його введенні в корм свійської птиці, інгібує ріст бактерій, які викликають некротичний ентерит і порушення росту у свійської птиці. Ендурацидин також не має синдрому відміни. Крім того, ендурацидин є стабільним у кормі і у гранулах, може бути введений курям у дуже низькій дозі і не залишається в м'ясі і яйцях курей, оброблених цим засобом.

В останні роки був одержаний ряд штамів бігеріотусез Гшпадісідісив, які були модифіковані для підвищення ефективності цих продукуючих ендурацидин мікроорганізмів, наприклад зігеріотусез Тшпадісідісивє. В-5477 (ІБО-12439, АТОС-21013) і Бігеріотусев Тшпаїісідісив В-5477-т (ІРО-12440, АТОС-21014) |див., наприклад, патент США Мо 3577530, патент США Мо 3786142 і патент США Мо 44657711. Однак, необхідність подальшого поліпшення таких модифікованих ізолятів Єіеріотусе5 ТШИпаісідіси5 для продукування ще більш ефективних продукуючих ендурацидин мікроорганізмів залишається актуальною.

Будь-які цитовані тут документи не повинні розглядатися як вказівка на те, що ці документи стосуються "попереднього рівня техніки".

Суть винаходу

Відповідно до цього, даний винахід стосується нових модифікованих ізолятів бігеріотусев5

Типдісідісиє, які більш ефективно продукують ендурацидин. У деяких варіантах здійснення винаходу, модифікований ізолят бігеріотусев шпадісідісиз кодує один або більше, або всі з наступних білків: Огі2798, що має амінокислотну послідовність, яка на 95 95 або більше ідентична амінокислотній послідовності 5ЕО ІЮ МО':2 і в якій зберігається сериновий залишок у положенні амінокислоти 2; Огї386б6, що має амінокислотну послідовність, яка на 95 95 або більше ідентична амінокислотній послідовності «ЕО ІЮ МО:4 і в якій зберігається треоніновий залишок у положенні амінокислоти 124; 015175, що має амінокислотну послідовність, яка на 60 95 95 або більше ідентична амінокислотній послідовності ЗЕО ІЮ МО:6 і в якій зберігається сериновий залишок у положенні амінокислоти 91; і О5387, що має амінокислотну послідовність, яка на 95 95 або більше ідентична амінокислотній послідовності зЗЕО ІЮ МО:8 і в якій зберігається сериновий залишок у положенні амінокислоти 164. У деяких варіантах здійснення винаходу, модифікований ізолят бігеріотусев5 Тшпадісідісиє крім того: (ї) містить нуклеїнову кислоту, яка кодує Огі4755 і включає нуклеотидну послідовність ЗЕ ІЮ МО:9, замість нуклеотидної послідовності зЗЕО ІЮ МО:23; і/або (ії) не містить функціонального білка

Огіб82; і/або (ії) не містить функціонального білка Огі4868. У конкретних варіантах цього типу, відсутність функціонального білка Огї682 і/або відсутність функціонального білка Огі4868 обумовлена мутацією зі зсувом рамки зчитування в гені, який кодує білок Огіб82 і/або білок

Оп4868.

У конкретних варіантах здійснення винаходу, модифікований ізолят бігеріотусев5

Типдісідісиє кодує один або більше, або всі з наступних білків: Огі2798, що має амінокислотну послідовність, яка на 98 95 або більше ідентична амінокислотній послідовності ЗЕО ІЮ МО:2 і в якій зберігається сериновий залишок у положенні амінокислоти 2; Огї3866, що має амінокислотну послідовність, яка на 98 95 або більше ідентична амінокислотній послідовності

ЗЕО ІЮ МО 4 і в якій зберігається треоніновий залишок у положенні амінокислоти 124; Огі5175, що має амінокислотну послідовність, яка на 98595 або більше ідентична амінокислотній послідовності «ЕО ІЮ МО:6 і в якій зберігається сериновий залишок у положенні амінокислоти 91; ї 015387, що має амінокислотну послідовність, яка на 9895 або більше ідентична амінокислотній послідовності зХЕО ІЮ МО:8 і в якій зберігається сериновий залишок у положенні амінокислоти 164. У деяких варіантах здійснення винаходу, модифікований ізолят Бігеріотусев

Типдісідісиє крім того: (ї) містить нуклеїнову кислоту, яка кодує Огі4755 і включає нуклеотидну послідовність 5ЕО ІЮ МО:9, замість нуклеотидної послідовності «ЕЕ ІЮ МО:23; і/або (ії) не містить функціонального білка Огіб82; і/або (ії) не містить функціонального білка Огі4868. У конкретних варіантах цього типу, відсутність функціонального білка Огіб82 і/або відсутність функціонального білка Огі4868 обумовлена мутацією зі зсувом рамки зчитування в гені, який кодує білок Огіб82 і/або білок Огі4868.

В інших варіантах здійснення винаходу, модифікований ізолят бігеріотусев Гшпадісідісив кодує один або більше, або всі з наступних білків: Огі2798, що має амінокислотну послідовність,

Зо яка на 99595 або більше ідентична амінокислотній послідовності 5ЕО ІО МО:2 і в якій зберігається сериновий залишок у положенні амінокислоти 2; Огї3866, що має амінокислотну послідовність, яка на 99 95 або більше ідентична амінокислотній послідовності ЗЕО ІЮ МО:4 і в якій зберігається треоніновий залишок у положенні амінокислоти 124; Огї5175, що має амінокислотну послідовність, яка на 99 95 або більше ідентична амінокислотній послідовності

ЗЕО ІЮ МО:6 і в якій зберігається сериновий залишок у положенні амінокислоти 91; і Огі5387, що має амінокислотну послідовність, яка на 99595 або більше ідентична амінокислотній послідовності «ЕО ІЮ МО:8 і в якій зберігається сериновий залишок у положенні амінокислоти 164. У деяких варіантах здійснення винаходу, модифікований ізолят бігеріотусев Шпадісіадісив крім того: (ї) містить нуклеїнову кислоту, яка кодує Огі4755 і включає нуклеотидну послідовність

ЗБО ІЮО МО:9, замість нуклеотидної послідовності 5ЕО ІО МО:23; і/або (ії) не містить функціонального білка Огіб82; і/або (ії) не містить функціонального білка Огі4868. У конкретних варіантах цього типу, відсутність функціонального білка Огїб82 і/або відсутність функціонального білка Огі4868 обумовлена мутацією зі зсувом рамки зчитування в гені, який кодує білок Огіб82 і/або білок Огі4868.

В інших варіантах здійснення винаходу, модифікований ізолят бігеріотусев Гшпадісідісив кодує один або більше, або всі з наступних білків: Огі2798, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:2; О13866, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:4;

ОТ5175, що містить амінокислотну послідовність 5ЕБЕО ІО МО:6б; і ОпП5387, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІО МО:8. У деяких варіантах здійснення винаходу, модифікований ізолят Бігеріотусевз Тшпадісідісиє крім того: (ї) містить нуклеїнову кислоту, яка кодує Ог4755 і включає нуклеотидну послідовність 5ЕО 10 МО:9, замість нуклеотидної послідовності ЗЕО ІЮ МО:23; і/або (ії) не містить функціонального білка Огіб82; і/або (ії) не містить функціонального білка ОІї4868. У конкретних варіантах цього типу, відсутність функціонального білка Огіб82 і/або відсутність функціонального білка Огї4868 обумовлена мутацією зі зсувом рамки зчитування в гені, який кодує білок Огіб82 і/або білок Огі4868.

У споріднених варіантах здійснення винаходу, модифікований бігеріотусев ТШпаїісіаісив: (ії) містить нуклеїнову кислоту, яка кодує Огі4755 і включає нуклеотидну послідовність ЗЕО ІЮ

МО:9, замість нуклеотидної послідовності ЗЕО ІЮ МО:23; і/або (ії) не містить функціонального білка Огіб82; і/або (іїї) не містить функціонального білка Огі4868. У конкретних варіантах цього бо типу, відсутність функціонального білка Огіб82 і/або відсутність функціонального білка Огі4868 обумовлена мутацією зі зсувом рамки зчитування в гені, який кодує білок Огіб82 і/або білок

Оп4868.

У конкретних варіантах здійснення винаходу, модифікований ізолят бігеріотусев5

Типдісідісиє має імуногенні і/або фізичні, і/або генетичні властивості модифікованого ізоляту зігеріотусез Тшпадісідісиє, що має депозитарний номер АТСС РТА-122342. У більш конкретних варіантах здійснення винаходу, модифікований ізолят бігеріотусев Тшпдісідісиє являє собою ізолят, що має депозитарний номер АТСС РТА-122342, або потомство і/або похідне ізоляту, що має депозитарний номер АТСС РТА-122342. У спорідненому аспекті винаходу, усі модифіковані зігеріотусев Тшпадісідісиє згідно з винаходом також розглядаються як виділені модифіковані ізоляти бігеріотусез Гшпадісіаісив.

У даний винахід також входять набори праймерів, що мають нуклеотидні послідовності: зЕО

ІО МО:29 ї ЗО; 5ЕО ІО МО:31 їі 32; ЗЕО ІЮ МО:33 їі 34; 5ЕО ІЮ МО:35 і 36; ЗЕО ІЮ МО:37 і 38; 5ЕО

ІО МО:39 і 40; 5ЕО ІО МО':41 і 42; 5ЕО ІЮ МО:43 і 44; 5ЕО ІЮ МО:45 і 46; 5ЕО ІЮО МО:47 і 48; 5ЕО

ІО МО:49 і 50; і/або будь-які їх комбінації. Крім того, набори, які містять один або більше з таких наборів праймерів, також є частиною даного винаходу. Крім того, у даний винахід входить застосування цих праймерів в аналізі на ідентифікацію геному Зігеріюотусез Шпдісідісив згідно з винаходом.

Ці ї інші аспекти даного винаходу будуть більш зрозумілі з посиланням на Креслення,

Докладний опис і Приклади.

Короткий опис креслення

На кресленні показане положення 11 поліморфізмів на геномі 5. ПТШпдісідісиє ВМЗ8, використовуваних як маркери мутації для ПЛР-скринінгу, описаного нижче в Прикладах.

Докладний опис винаходу

Одержання вторинних бактеріальних метаболітів або натуральних продуктів для їх застосування в комерційних цілях, наприклад у медицині або сільському господарстві, пов'язане з такими проблемами як низькі виходи потрібного продукту 3 батьківського мікроорганізму/мікроорганізму дикого типу. В останні десятиліття, завдяки прогресу в розумінні природи біосинтезу натурального продукту стало очевидним, що продукування вторинних метаболітів може регулюватися і контролюватися декількома способами. У більшості випадків, гени біосинтезу бактеріальних природних продуктів, включаючи гени, відповідальні за утворення попередника, структурне збирання, модифікацію після збирання, ауторезистентність і регуляцію, утворюють кластери на бактеріальній хромосомі. Біосинтез природних продуктів може бути викликаний як позаклітинними, так і внутрішньоклітинними сигнальними молекулами, які взаємодіють зі специфічними регуляторами шляхів або плейотропними регуляторами, які регулюють продукування більше ніж одного продукту. Мутації, що відбуваються в будь-якому з цих регуляторних генів або систем, можуть підвищувати, знижувати або припиняти продукування антибіотиків.

Поліпшення штаму може відігравати визначену роль в економічно ефективному промисловому виробництві антибіотиків або інших вторинних мікробних метаболітів. Мутантні штами, здатні давати підвищені виходи конкретних метаболітів, можуть бути створені за допомогою випадкових мутацій, шляхом спрямованої дизрупції специфічних генів або шляхом введення гена(ів), який усуває порушення шляху біосинтезу. Було підтверджено, що генетичні маніпуляції регуляторних генів, а також генів біосинтезу для гіперпродукування специфічних вторинних метаболітів, являють собою ефективну і успішну стратегію поліпшення штамів актиноміцетів. У конкретному аспекті винаходу були ідентифіковані ключові кодуючі послідовності бігеріюотусевз Шпдадісіаісив, які, при їх модифікації і/або елімінації, дають ізоляти з поліпшеними властивостями, що дозволяють здійснювати біосинтез і/або продукування ендурацидину в комерційних цілях.

Послідовність ДНК розміром в 116 тисяч пар основ, що походить від штаму 5. Гшпадісіаісив

АТСС 21013 дикого типу, який має кластер гена біосинтезу ендурацидину і його фланкуючі області, була вже описана в літературі (у патенті США Мо 8188245, який у всій своїй повноті вводиться в даний опис за допомогою посилання) і є в зепВапк Ірег. Мо 00403252. Як показано нижче, була визначена загальна геномна послідовність ВМ38-2 (АТС Мо. РТА-122342), і цю послідовність порівнювали з геномом дикого типу. Такий порівняльний аналіз дозволив ідентифікувати щонайменше 77 поліморфізмів або мутаційних відмінностей між геномами і провести відбір семи ключових відкритих рамок зчитування, які належать до поліпшених властивостей АТСС Мо. РТА-122342, як показано нижче. Однак, було несподівано виявлено, що жодна з цих семи ключових відкритих рамок зчитування не асоціюється з кластером гена біосинтезу ендурацидину і його фланкуючими областями хромосоми 5. Шпадісідісив. Однак, бо незалежно від цього, модифікація цих семи ключових відкритих рамок зчитування дозволяє полегшити конструювання нових модифікованих ізолятів бігеріотусез Типдісідісив за допомогою стандартної рекомбінантної технології, і ці ізоляти будуть мати властивості, порівнянні з властивостями вже відомих ізолятів, або навіть будуть мати набагато кращі властивості.

Використання термінів в однині для зручності опису жодним чином не повинно розглядатися як обмеження обсягу винаходу. Так, наприклад, термін "ізолят" включає один або більше таких ізолятів, якщо це не зазначено особливо. Використання термінів у множині також не повинно розглядатися як обмеження обсягу винаходу, якщо це не зазначено особливо.

Використовуваний тут термін "приблизно" є синонімом терміна "близько" і звичайно означає величину в межах двадцяти п'яти відсотків від зазначеної величини, якщо це не зазначено особливо, наприклад збільшення рівня продукування ендурацидину "приблизно" в 4 рази може означати збільшення продукування в 3-5 разів.

Використовувана тут одна амінокислотна послідовність є на 100 95 "ідентичною" другій амінокислотній послідовності, якщо амінокислотні залишки обох послідовностей є ідентичними.

Відповідно до цього, амінокислотна послідовність є на 50 95 "шдентичною" другій амінокислотній послідовності, якщо 50 95 амінокислотних залишків двох амінокислотних послідовностей є ідентичними. Порівняння послідовностей здійснюють по всій безперервній послідовності амінокислотних залишків, що містяться в даному білку, наприклад у порівнюваному білку або в частині поліпептиду. У конкретному варіанті здійснення винаходу, до уваги беруться також вибрані делеції або інсерції, які можуть якось інакше впливати на відповідність між двома амінокислотними послідовностями.

Відсоток ідентичності використовуваних тут нуклеотидних і амінокислотних послідовностей може бути визначений за допомогою алгоритму С, МасМУесіог (МасМесіог, Іпс. Сагу, МС 27519),

Месіог МТІ (Іпїоптпах, Іпс. МО), Охіога МоїІесшаг сСгоир РІС (1996) і СіІивіа! МУ, де параметри вирівнювання і параметри оцінки ідентичності використовуються за замовчуванням. Ці комерційно доступні програми можуть бути також застосовані для визначення подібності послідовностей з використанням тих же самих або аналогічних параметрів за замовчуванням.

Альтернативно, може бути проведений пошук за допомогою модифікованої програми Віабві в умовах фільтрації за замовчуванням, наприклад з використанням програми Ріеир СО (Сепеїййсв Сотриїег Стоир, Ргодгат Мапиаї! ог Ше (Са РасКаде, Мегзіоп 7, Мадізоп, УмМі5сопвіп) з

Зо параметрами за замовчуванням.

Використовуваний тут мікроорганізм, який "не містить функціонального" поліпептиду або в якому "відсутній функціональний" поліпептид (наприклад, Огіб82), являє собою мікроорганізм, який не експресує цей поліпептид і/або експресує модифікований поліпептид, природна біологічна функція якого складає максимум 10 95 від природної біологічної функції відповідного поліпептиду дикого типу, наприклад усіченого ферменту, який має ферментативну активність (наприклад, ферментативну ефективність, тобто Мтах/Кт) відносно його природного субстрату, де така активність становить максимум 10 95 від активності відповідного ферменту дикого типу, як було визначено шляхом проведення стандартного аналізу в тих же самих умовах. У конкретних варіантах здійснення винаходу, "відсутність функціонального" поліпептиду в мікроорганізмі еквівалентна відсутності конкретної біологічної функції цього поліпептиду.

Використовувана тут відкрита рамка зчитування, яка є "відключеною", була модифікована, наприклад, шляхом введення делеції в рамку зчитування, зсуву рамки зчитування, інсерції і/або точкової мутації, у результаті чого мікроорганізм, який містить "відключену" відкриту рамку зчитування, взагалі не експресує поліпептид, кодований відповідною рамкою зчитування дикого типу і/або експресує модифікований поліпептид, природна біологічна функція якого становить максимум 1095 від природної біологічної функції відповідного поліпептиду дикого типу. У конкретних варіантах здійснення винаходу, у мікроорганізмі, що містить "відключену" відкриту рамку зчитування, спостерігається відсутність конкретної біологічної функції поліпептиду, кодованого відкритою рамкою зчитування дикого типу.

Використовуваний тут термін "генний кластер" означає набір генетичних елементів, згрупованих разом на хромосомі, де білкові продукти цих кластерів мають споріднену функцію, таку як здатність здійснювати природний шлях біосинтезу продукту.

Консервативною заміною є амінокислотна заміна, яка, по суті, не впливає на активність (специфічність або афінність зв'язування) молекули. Звичайно, консервативні амінокислотні заміни включають заміни однієї амінокислоти на іншу амінокислоту з тими ж самими хімічними властивостями (наприклад, зарядом або гідрофобністю). У нижченаведеній таблиці представлені репрезентативні консервативні амінокислотні заміни.

Консервативні заміни Вихідний залишок Консервативні заміни залишок

Одержання модифікованого Бігеріотусе5 ГТипдісідісиє Придатні методи і матеріали для здійснення розкритих варіантів винаходу описані нижче. Крім того, здійснення розкритих варіантів винаходу може бути проведене з застосуванням будь-яких відповідних методів або технологій, добре відомих фахівцям. Деякі стандартні методи і технології згідно з винаходом описані, наприклад, у керівництвах ЗатрюогоокК еї аї., МоІесшаг Сіопіпу: А І арогаюгу Мапиаї, 2а ей., Соїд Оргіпд Нагбог І арогаїогу Ргев5, 1989; бБатьгоок еї аї., МоїІєсціаг Сіопіпа: А І арогайгу

Мапиаї, За єд., Соїд 5ргіпд Натог Ргев5, 2001; А!йзибеї єї аЇ., Сцтепі РгоїосоЇв іп МоїІесшаг

Віоіоду, Стеєпе Рибіїєпіпу Авзосіаїевз, 1992 (і Доповнення до видання 2000); А!,зирбеї еї аї., 5погі

Ргоїосоїв іп Моїесшаг Віоїоду: А Сотрепаїйшт ої Метод їот Ситепі РгоїосоЇ5 іп Моїіесшаг

Віоіоду, 4 ей., Мієу в Бопв, 1999; Напом апа І апе, Апіїбодієв: А І арогаїогу Мапиаї, Соїа бргіпа

Натог І арогаюгу Ргезз, 1990; Напом апа ІГапе, Овіпа Апіїбодіев: А І арогаюгу Мапиаї, Соїа зргіпд Нагбог І арогайогу Ргез5, 1999; і Кіезег Т., ВІБЬ М.О., Вийпег М.9., Спатег К.Р., апа Норуоса

Б.А.: Ргасіїса! Зперіотусез депеїїсв, допп Іппе5 Сепіге, Моглмісн Везеагсй Рак, СоІпеу, Могмісн

МНАА а ОН, Епадіапа, 2000.

Рекомбінантні експресійні плазмідні вектори бігеріотусез Шпдісідісиє можуть бути одержані для їх застосування з метою створення модифікованих ізолятів 5ігеріотусез Гшпадісідісив згідно з винаходом. У деяких варіантах здійснення винаходу, сконструйований рекомбінантний вектор зігеріотусев ІШшпдісідісиє містить щонайменше одну відібрану відкриту рамку зчитування зЗігеріотусев ТШпаісідісих. У деяких варіантах здійснення винаходу, сконструйований рекомбінантний вектор Сігеріотусев Тшпаісідісиє5 містить щонайменше одну відібрану відкриту рамку зчитування бігеріотусев Шпадісідісиє, експресовану під контролем промотору. В інших варіантах здійснення винаходу, промотором є сильний конститутивний промотор 5ігеріотусев, який сприяє посиленню продукування ендурацидину, якщо вектор експресується в штамі зігеріотусез Тшпдісідіси5. У деяких варіантах здійснення винаходу, відкрита рамка зчитування, замість власного нативного промотору, функціонально приєднана до гетерологічного промотору. Так, наприклад, вона може бути функціонально приєднана до конститутивного промотору, такого як сильний конститутивний експресійний промотор або індуцибельний

Зо промотор. У конкретних варіантах здійснення винаходу, сильним конститутивним промотором є ептЕ"р, що походить від продуцента еритроміцину, бЗасспагороїузрога егуїйптаєа. В інших варіантах, індуцибельним промотором є індуцибельний промотор тіострептону, їрА. В інших варіантах здійснення винаходу використовується система Р(піпА)-МИА (Негаї єї аї., Ргос Маї!

Асай Зсі ОБА., 101 (39): 14031-14035 (2004)| або промотор стрептоміцетів ЗЕ14. В інших варіантах здійснення винаходу використовується нативний промотор гена резистентності до апраміцину атВр. В інших варіантах здійснення винаходу використовуються Рників, Рісрезо і/або

Рпео5. У деяких варіантах здійснення винаходу, сконструйований рекомбінантний вектор містить відкриту рамку зчитування огі27 98, що включає нуклеотидну послідовність БЕО ІЮ

МО:1, і/або відкриту рамку зчитування огіб82, яка була "відключена".

Відповідно до цього можуть бути сконструйовані рекомбінантні штами бігеріотусев5

Типдісідісиє, здатні давати більш високі виходи ендурацидину в порівнянні зі штамом зігеріотусез Шпадісідісиє дикого типу. У деяких варіантах здійснення винаходу, сконструйований рекомбінантний штам 5бігеріотусев Шпадісідісиє містить щонайменше одну відібрану відкриту рамку зчитування 5ігеріотусез Гшпаїісідіси5, введену в хромосому і експресовану під контролем промотору, такого як сильний конститутивний експресійний промотор 5ігеріотусев, який сприяє підвищенню рівня продукування ендурацидину в сконструйованому штамі. В інших варіантах здійснення винаходу, експресія введеної відкритої рамки зчитування в бігеріотусевз Шпадісідісив індукується не власним нативним промотором, а гетерологічним промотором. Так, наприклад, вона може бути функціонально приєднана до конститутивного промотору, такого як сильний конститутивний експресійний промотор або індуцибельний промотор. У деяких варіантах здійснення винаходу, сильним конститутивним промотором є ептЕ"р. В інших варіантах здійснення винаходу, індуцибельним промотором є їїрА. У деяких прикладах використовується система Р(пйА)-МИК |див. вище| або промотор 5Е14. В інших варіантах здійснення винаходу, конститутивним експресійним промотором є атАр. В інших варіантах здійснення винаходу використовуються промотори Ригав, Рісрезо і/або Рпеов5.

У деяких варіантах здійснення винаходу, сконструйований штам містить відкриту рамку зчитування огі3866 5ігеріотусез Шпадісідісив. У конкретних варіантах цього типу, відкрита рамка зчитування огі386б6 функціонально приєднана до гетерологічного промотору. Так, наприклад, вона може бути приєднана до сильного конститутивного промотору, такого як еппЕ"р. В інших прикладах, відкрита рамка зчитування огі3866 функціонально приєднана до промотору їїрА,

ЗЕ14, атАр, Рнкв, Рісразо і/або Рпео5.

В інших варіантах здійснення винаходу, сконструйований штам кодує змінену відкриту рамку зчитування огі4868. Відкрита рамка зчитування огі4868 може бути відключена за допомогою інсерційної дизрупції, делеції в рамці зчитування, зсуву рамки зчитування і/або точкової мутації.

У деяких прикладах, відкрита рамка зчитування огі4868 відключена за допомогою делеції в рамці зчитування. Загалом кажучи, будь-яка внутрішня делеція рамки зчитування огі4868, через її дефект, повинна приводити до відключення функції огі4868. У споріднених варіантах здійснення винаходу, сконструйований штам включає дві, три, чотири, п'ять, шість, сім або більше відкритих рамок зчитування бігеріотусез Гшпадісідісив.

У деяких варіантах здійснення винаходу, модифікований ізолят бігеріотусев5 Шпадісіаісив походить від батьківського штаму дикого типу, такого як, але не обмежуваного цим, зігеріотусев Пшпдісідісиє, наявний в Американській колекції тканинних культур (АТСС) Мо. 21013. В інших варіантах здійснення винаходу, сконструйований штам бігеріотусевз Шпадісіаісив походить від стандартних мутантних штамів, таких як, але не обмежуваних ними, штами зігеріотусев Тшпдісідісив АТОС 31729, Зперіотусев Шпдісідісив АТСС 31730 і ЗМеріюотусев

Типдісідісиє АТСС 31731.

У деяких варіантах здійснення винаходу, рівень продукування ендурацидину щонайменше в 1,2 разу, наприклад щонайменше в 1,5 разу, щонайменше в 2 рази, щонайменше в 2,5 разу,

Зо щонайменше в З рази, щонайменше в 3,5 разу, щонайменше в 4 рази, щонайменше в 4,5 разу, включаючи, але не обмежуючись ними, в 1,2-10 разів, 1,2-4,6 разу і приблизно в 2-5 разів, перевищує рівень продукування ендурацидину в порівнянні зі штамом 5бігеріотусев гшпаїісідісив дикого типу.

У деяких варіантах здійснення винаходу, модифікований бігеріотусев Шпдісідісиє може бути сконструйований шляхом інтеграції рекомбінантної плазміди, що містить щонайменше одну відкриту рамку зчитування, яка підсилює продукування ендурацидину, у хромосому батьківського штаму бігеріотусез Гшпадісідісив. Інтегрований сполучений вектор може мати, або може бути сконструйований так, щоб він мав, сильний конститутивний промотор Зігеріотусев. У деяких варіантах здійснення винаходу, плазміда може не містити реплікону стрептоміцетів і може бути інтегрована в хромосому за допомогою гомологічної рекомбінації під дією одного сайт-специфічного кросинговеру. В інших варіантах здійснення винаходу, плазміда може бути присутня у вигляді вільної плазміди. У деяких варіантах здійснення винаходу, може бути сконструйований сполучений вектор, у якому плазмідна вставка має частково або повністю делетований ген, що представляє інтерес, і його фланкуючі області, які можуть бути інтегровані в хромосому після подвійної гомологічної рекомбінації за допомогою кросинговеру з утворенням мутанта, що має делецію в рамці зчитування.

Продукування ендурацидину з рекомбінантних штамів бігеріотусез їтипадісідіси5

Рекомбінантні штами бігеріотусев5 ТШпаісідісих5, що розкриваються в даній заявці, були використані для розробки способів одержання підвищених рівнів ендурацидину. Технічний прогрес у даній галузі дозволяє значно заощадити витрати, пов'язані з виробництвом ендурацидину. У деяких варіантах здійснення винаходу, спосіб одержання ендурацидину включає культивування розкритого тут рекомбінантного штаму 5бігеріотусев Гшпадісідісие в умовах, достатніх для одержання ендурацидину. В інших варіантах здійснення винаходу, цей спосіб також включає виділення ендурацидину з культурального середовища після культивування. В інших варіантах здійснення винаходу, спосіб також включає визначення антибактеріальної активності одержаного ендурацидину, наприклад, за допомогою ВЕРХ- аналізу або біоаналізу з використанням 5. аштеив АТСС 29213 або Васійі5 з,ибБійв АТСС 6633 з вказівкою мікроорганізмів.

У деяких варіантах здійснення винаходу, ендурацидин одержують з використанням бо розкритого тут штаму бігеріотусев шпаісідісиє в умовах ферментації, описаних раніше для одержання ендурацидину ІНідазпіде еї аї., 9. Апіїбіої. 21:126-137 (1968)). Після одержання, сполуки можуть бути очищені і/або проаналізовані за допомогою ВЕРХ-аналізу. Методи одержання ендурацидину і збирання цієї сполуки з культурального середовища можна знайти в патенті США Мо 4465771, який у всій своїй повноті вводиться в даний опис за допомогою посилання.

У конкретних варіантах здійснення винаходу, розкритий тут ізолят бігеріотусев Шпадісіаісив згідно з винаходом культивують у бульйоні з триптону і сої (Т5В) на шейкері (такому як шейкер, що працює на 225 об./хв. і при 30 "С протягом 48 годин), а потім переносять у середовище для продукування ендурацидину (ЕРМ, див. нижче Таблицю 1) на визначений період часу проведення безперервної ферментації, наприклад щонайменше на п'ять днів і до одинадцяти днів, включаючи 5, 6, 7, 8, 9, 10 або 11 днів безперервної ферментації. У більш конкретних варіантах здійснення винаходу, одержання ендурацидину з використанням штамів дикого типу і їх похідних здійснюють в автоматичних ферментерах.

Таблиця 1

Склад середовища для одержання ендурацидину (ЕРМ) (рН 6,7)

Мманегоїї 11111111

Таблиця 2

Список послідовностей

Л ц. ЗЕО І Відкрита рамка 11111111 АТО Мо РТА-Т22342 | - | (Б | мутв577 76 | 71115175... | АА | 20 | (Б Опбі75 | АА 78 77771111 оп5387. | АА | 22 | -- Оп5387 | АА 779 |... оп4755..ЩЙ | МА | 23 | Опа755 | мА

АА означає амінокислотну послідовність; МА означає послідовність нуклеїнової кислоти.

Біологічний депозит

Культури нижченаведеного біологічного матеріалу були депоновані в нижченаведеному

Міжнародному депозитарії: Американської колекції типових культур (АТСС) 10801, Опімегейу

Вошемаг), Мапабззаб5, Ма. 20110-2209, ЦШ.5.А. в умовах, що задовольняють вимоги

Будапештського договору.

Даний винахід буде більш очевидним з посиланням на нижченаведені необмежувальні приклади, які представлені як репрезентативні. Нижченаведені приклади наводяться для більш повної ілюстрації переважних варіантів здійснення винаходу. Однак, ці приклади жодним чином не повинні розглядатися як обмеження обсягу винаходу.

Приклади

Приклад 1

Модифікований ізолят бБігеріотусез Типаїісідісив

Одержання біомаси бБігеріотусев5 Шпдісідісиє для її застосування з метою біосинтезу ендурацидину

Ферментація бігеріотусе5 Тпдісідісниє може бути проведена в глибоких промислових ферментерах резервуарного типу, що пройшли санітарну обробку і забезпечені системами моніторингу і контролю рН, температури, кисню, аерації і струшування. Кожну ферментовану партію 5. ппдісідісиє беруть з охарактеризованої і регульованої робочої посівної маточної культури для продукування, що зберігається в охоронюваному приміщенні в умовах низьких температур. Процес ферментації здійснюють у три стадії з наступним проведенням додаткової обробки, описаної нижче.

Стадія

Робочі посівні культури, що містять 107 -1079 спор/мл, можуть бути використані для ініціації продукування партій ферментації. 1-5 посудин з замороженою посівною культурою, що зберігається при низькій температурі, виймають і або розморожують на лабораторному столику або поміщають на водяну баню при 28-32"С поки вміст посудин не розморозиться.

Розморожену(і) культуру(и) асептично переносять в 800-1000 мл стерильної води, що зберігається при кімнатній температурі, і обережно перемішують для ресуспендування культури.

Стадія ЇЇ

Ресуспендовану культуру асептично переносять у посівне середовище. Посівне середовище складається з глюкози (0,5 г/л), декстрину (2,5 г/л), рідкого кукурудзяного сиропу (1,0-4,0 мл/л), соєвого порошку (3,0 г/л), сульфату амонію (0,25 г/л), монофосфату калію (0,13-0,54 г/л),

Зо сульфату заліза (0,00-0,5 г/л), гідроксиду калію (0,13 мол/л), осадженого карбонату кальцію (1,5 г/л), протиспінювального агента на основі кремнію (0,1 мл/л) і води, що додається в достатній кількості. Середовище стерилізують при 125 "С протягом 45 хвилин, а потім охолоджують до 28 "С. Об'єм середовища регулюють з використанням стерильної води до одержання потрібного робочого об'єму. рН доводять до 6,6-6,8. Робочі параметри промислового посівного циклу включають: температуру інкубування 28:22 "С, внутрішній тиск 0,5-1,5 кг/см?, швидкість аерації 2-4 Нм3/хв. і швидкість перемішування приблизно 80 обертів на хвилину, залежно від розміру і конфігурації посудини. Потім проводять моніторинг рН і споживання кисню і моніторинг в'язкості, але ці параметри не регулюють. Культивування здійснюють протягом 50-60 годин, а потім переносять в основний ферментер для одержання культури. В'язкість у момент перенесення повинна становити в межах 350-600 сП, а рН повинен становити «6,0, при цьому споживання кисню повинно збільшуватися. Посівну культуру асептично переносять в основне середовище для ферментації з метою завершення циклу ферментації.

Стадія ПІ

Склад середовища в основному ферментері для одержання культури включає: кукурудзяне борошно (13,0-15,0 мас./об. 95), кукурудзяне глютенове борошно (3,0-6,0 мас./об. 95), борошно з насіння бавовнику (0,3 мас./об. 95), рідкий кукурудзяний сироп (0-0,6 об./об. 95), хлорид натрію (0,3 мас./об. 95), сульфат амонію (0,25-0,6 мабс./об. 95), молочну кислоту (0-0,5 об./об. 95), хлорид цинку (0,01 мас./об. 95), сульфат заліза (0,0-0,02 мас./об. 95), гідроксид калію (0,20-0,5 об./о6. 95), сульфат кальцію (0,0-0,5 мас./об. 95), осаджений карбонат кальцію (0,5 мас./об. 95), альфа-

БО амілазу (0,056 мабс./об. 95), гідроксид калію (0,05 об./06. 95), соєву олію (0,5-2,0 об./об. Об), протиспінювальний агент і достатню кількість води. Інгредієнти додають у зазначеному порядку.

Воду додають до інгредієнтів аж до введення альфа-амілази, а потім одержану композицію нагрівають до 8 0 "С протягом 15 хвилин для того, щоб фермент розкладав складні вуглеводи.

Після цього додають інші інгредієнти, рН доводять до 6,6-6,8, і додають достатню кількість води.

Середовище стерилізують при 125 "С протягом 45 хвилин, охолоджують до 2 8 "С і додають воду в кількості, достатній для досягнення бажаного робочого об'єму.

Вміст ферментера для посіву переносять в основне середовище для ферментації, і у ферментері створюють наступні умови: температура 28 "С, швидкість аерації 40 Нмз/хв., внутрішній тиск 0,5 кг/см2 і швидкість аерації, еквівалентна швидкості, установленій приблизно бо на 1,85 кВт/м3. Робочі умови змінюють через дві години після початку циклу ферментації шляхом доведення рівня розчиненого кисню до 12,75 м.ч., підвищення швидкості аерації до 50

Нм3/хв. і збільшення внутрішнього тиску до 0,7 кг/см-. Після цього, швидкість аерації, внутрішній тиск ії швидкість перемішування коректують для гарантії того, що рівень розчиненого кисню не буде визначальним для обмеження швидкості У культуру додають стерильну воду, якщо в'язкість підвищується до точки, при якій спостерігається обмеження рівня розчиненого кисню.

Протягом усього циклу, ретельно регулюють піноутворення для запобігання забрудненню або відтоку культури. Приблизно через З години після збільшення кисню, що подається, починають здійснювати регулювання рН. Протягом усього циклу ферментації здійснюють регулювання і/або моніторинг наступних параметрів: рн, аерації, розчиненого кисню, СО», в'язкості, чистоти, швидкості перемішування, внутрішнього тиску і залишкового цукру. До припинення росту бактерій, рН підтримують на рівні 6,8, а потім його можна змінювати аж до збирання. Типовий цикл ферментації складає 220-300 годин. Культура вважається готовою для збирання, якщо активність при біоаналізі перевищує 5000 мкг/л, рН підвищується до 7,5 або більше, в'язкість зменшується, а споживання кисню припиняється. Культуру після ферментації збирають шляхом нагрівання культури до 70 "С протягом 30 хвилин для інактивації бактерій, а потім зібрану рідину охолоджують до 25-28 76.

Наступна обробка

З біомаси видаляють воду, після чого біомасу сушать, а потім формують у попередню суміш.

Приклад 2

Ефект оптимізації продукування ендурацидину штамом бігеріотусез падісіаісив

В останні роки було досягнуте збільшення виходів шляхом обробки батьківського штаму (як зазначено в Таблиці 3). Штам ВМ38-2 (РОТ-122342) дає найбільш високі виходи ендурацидину.

Штам був оптимізований шляхом обробки СЗАВ-453 (АТСС 3172 9) з використанням ряду обробок з використанням методів культивування і фізичних методів.

Таблиця З

Збільшення виходу бігеріотусез Шпадісідісив В-54577

Посилання: Патент 4465771; АРК 14, 1984, Модаті еї. аї.,

АТСС 21014 . (баншерозюнтий 0577 оленя 1

АТСС 31729 .

АТСС 31731 М-метил-М'-нітро-М-нітрозогуанідин-м- (Раніше не розкритий) методів культивування і фізичних методів

Посилання: Патент 4465771; АРА 14, 1984, Модаті еї. аї.,

ТаКкеда Спетіса! Іпдивзілевз, Ца., ОзакКа, Ударап.

Посилання: Патент 3577530, 4 травня, 1971, для АТСС 21388. 1. АТСС 21013: вихідний штам 5ігеріотусев5 Тшпдісідісиє В-5477 дикого типу, депонований

ТаКеда. 2. АТСС 21014: мутант, одержаний шляхом у-опромінення штаму В-5477 і позначений як В- 5477т, депонований ТакКеда. 3. АТСС 31729: мутант, одержаний шляхом УФ-опромінення штаму В-5477 і позначений як

САВ-453, депонований ТакКеда. 4. АТОС 31730: мутант, одержаний шляхом культивування В-5477 на агарових планшетах, що містять м-фтор-ОІ -тирозин (МЕТ); мутант, позначений як Еті-36-3, депонований Такеда. 5. АТСС 31731: подвійний мутант, одержаний шляхом обробки САВ-453 спочатку М-метил-

М'-нітро-М-нітрозогуаніліном, а потім м-фтор-ОЇ -тирозином (МЕТ) з одержанням мутантного штаму, позначеного як Еті-2-140 і депонованого ТакКеда.

6. АТСС 21388: штам, близькоспоріднений штаму бігеріотусев5 Шпдісідісиє (5. тасгозрогеив) і депонований Здпцірр 5 5опв.

Нижче представлені енраміцини в порядку зниження виходу біосинтезу від найвищого до найнижчого:

АТСС Мо. РТА-122342»АТСС 31731»АТСС 31730»АТСС 31729»АТСС 21013 АТСС 21014.

Примітним є те, що кількість одержаного ендурацидину АТСС РТА-122342 більше ніж у два рази перевищує кількість наступного по продуктивності ізоляту і більше ніж в 12 разів перевищує кількість ендурацидину в порівнянні з батьківським штамом дикого типу.

Приклад З

Геномний аналіз ізолятів 5ігеріотусев Типаісідісив

Був проведений порівняльний геномний аналіз штаму бігеріотусез Гшпадісіаісив дикого типу,

АТСС 21013 (8-5477), і похідного штаму згідно з винаходом, ВМ38-2, який включав області навколо кластера гена біосинтезу ендурацидину (енраміцину).

Було ідентифіковано всього 77 варіантів послідовностей ДНК, що відрізняються по ефектах модифікації фізичними методами і методами культивування батьківського штаму В-5477.

Інформація, одержана в результаті геномного аналізу, дозволила провести швидке і остаточне порівняння штамів шляхом відбору 11 репрезентативних варіантів, розташованих по всьому геному ВМ38-2, як маркерів мутації (див. креслення). Для кожного з маркерів мутації були сконструйовані ПЛР-праймери, які ампліфікують фрагменти ДНК, що містять сайти мутації, для наступного секвенування і порівняння (див. Таблицю 4).

ПЛР-праймери, націлені на маркерні області, були використані для аналізу п'яти штамів, продукуючих енраміцин, і одного близькоспорідненого штаму, наявного в АТСС, включаючи штами дикого типу і мутанти, депоновані ТакКеда, і ці штами порівнювали зі штамом ВМ38-2. У

Таблиці 5 систематизовані результати і представлені ДНК-сигнатури для 11 маркерів мутації.

Таблиця 4

Набори ПЛР-праймерів (з їх відповідними ЗЕО ІЮ МО), використовуваних для ампліфікації 11 маркерів мутації, розташованих на геномі 5. їипдісіаісиє ВМЗ8

Послідовні . . .

Маркер ЗЕО Послідовність . . . Розмір мут. Моди ПО МОР, ВМ38-2 | Праймер ) ЗЕСпраймерів | родукту» (п.0.) саАСаАтТаСсСАТ

АСТасСтТтТаАТСА

СТаТтТтСААССТО

СААпАССАСОАС смвасСсдасАаатто

ССАСИаТСАДСАА сасААдаТоаАСс

АТОАССОАСААС

СасАТСТИаТТос тСАТССсЯТОССОаС татасасаАтатс

СсаАСадтассСАА садСадтассАТ

Таблиця 4

Набори ПЛР-праймерів (з їх відповідними ЗЕО ІЮ МО), використовуваних для ампліфікації 11 маркерів мутації, розташованих на геномі 5. Типдісідісиз ВМЗ38

Послідовні . . .

Маркер ЗЕО Послідовність . . . Розмір мут. Моди ПО МО ОР, вМм38-2 | Праймер | ЗЕОпраймерів /родукту» (п.о.)

АСТасСтТтТаАТСА тастастатоаА

АсаАдд,свастас саАаТоСаАдас астоаабААСА вАаСАСАСадас аСТАСССССТСАТ

АПААаТАСаааА

АСТасСтТтТаАТСА 7 Маркер мутації Мо.; х Очікуваний розмір ПЛР-продукту; хШтам дикого типу (МУТ): АТСС 21013.

Таблиця 5А

Аналіз з використанням маркерів мутації для депонованих штамів Зігеріотусез Типдісідіси5 у порівнянні з АТСС Мо. РТА-122342

Батьківський тес

Маркер АТСС 21013 В- 21014 АТСС АТОСС АТОСС АТОСС РТА- мутації Мо. БАТ7 в- 21388" 31729 31730 31731 122342 5477т 11 | м | м | м | м | Ул | м | м ( 72 | мМ | м | м | м | м | м | м ( 73 | м | Ум | м | м | м | м Її м ( 4 | м | м | м | м | м | м | м ( | мМ | Ум | м | м | м | м Її м ( 76 | м | Ум | м | м | м | м Її м ( 77 | мМ | м | м | м | лм | м | м ( 78 | м | Ум | м | м | м | м | м ( 79 6 6ЮДЩ| мМ | Ум | м | м | м | м | м ( 710 | м 1 м | м | м | м | м | м іч ГГ м м | Ум | м | Ум м. м /

МЛ відповідає батьківському штаму дикого типу;

М відповідає мутованій послідовності РТА-122342; "Штам 5. тасгозрогецй5, близькоспоріднений штаму 5. Рипадісідісив.

Таблиця 5В

Мутації, об'єднані з ВМ38-2 або використовувані як маркери для порівняння за допомогою ПЛР 565966, | МТ | М | М' | М Її м Її 4 607443 | М | мМ | м | м Ї м Її 608938 | МТ | м | м | м Ї м Її 890965 | МТ | М | М'Ї М Ї м Її о 2ге8Б2ів6 | УТ | Мт | М | мМ | м' Її 2387796 | УМ | Мт | Мт | м | м ' Її 7 2387801 | МТ | Мт | Мт | мМ | м ' Її 7 2659327 | МТ | М | М | м Ї м Її 2900485 | МТ | М | М | м Ї м Її 2963171 | МТ | Мм' | м | м | м ' Її 1 о зи475г2 | МТ | М | м | м Ї м Її о Зи64639 | МТ | Мт | Мт | мМ | м Її в 5358400 | МТ | М | мМ | м Ї м Її ( 8391492 | МТ | М | М | м Ї м Її 5428632 | МТ | Мт | Мі | м Її м Її 8556837 | МТ | М | М | м Ї м Її Р 3607398 | МТ | М | М | м Ї м Її «фур 3651914 | МТ | М | м | м Ї м Її 85743503 | МТ | М | мМ | м Ї м Її 3823662 | МТ | М | М | м Ї м Її 4046322 | МТ | Мт | Мі | м ЇЇ м Її / 458534 | МТ | М | М | м Ї м Її 4225769 | МТ | М | М | м Ї м Її 4187 | мМ | м | м | м ЇЇ м ' Її ( Ф Ж ( о 4а294357 | М | М | М | м Ї м Її о азб5аї | МТ | м | м | м ЇЇ м ЇЇ юю 4449891 | УТ | Мт | мМ' | м | м ' Її 6 4450937 | М | М | м | м Ї м Її 4458773 | М | М | м | м Ї м Її 4462128 | УМ | М | м | м Ї м Її о алтвмів | УМ | м | м | м Її м Її ( 4954366 | МТ | Мт | М' | м Її м Її 4989329 | МТ | М | М | м Ї м Її 5259346 | УТ | Мт | М' | мМ | м ' Її / 5340994 | МТ | М | М | м Її м Її 5 5349716 | МТ | м | МмМ' | м ' Її м Її з 57577 | мМ | м | м | Ум Її мої о 5Я0ОвББОЇ | МТ | Мт | Мт | Мі | м Її 2 5947737 | М | М | мМ | м Ї м Її вав | МТ | м | м | м Ї м Її ( 6бабозі | МТ | м | м | м Ї м Її 67035003 | М | м | м | м Ї м Її 6706989 | М | м | м | м Ї м Її тав | УМ | мі | мг | м | м ' Її! 89

МЛ відповідає батьківському штаму дикого типу;

М відповідає мутованій послідовності РТА-122342.

У Таблицях 5А-5В ідентифіковані генетичні відмінності між батьківським штамом (АТСС 21013 В-5477) і вже описаними штамами. Більшість з цих уже описаних штамів являють собою похідні штамів АТСС 21013 В-5477, які були одержані шляхом модифікації методом культивування і/або фізичним методом. Найбільш явні генетичні відмінності були виявлені для

ВМ38-2 (АТСС Мо. РТА-122342). Очевидно, що праймери, представлені в Таблиці 4, можуть бути також використані для точної ідентифікації відмінностей ВМ38-2 (РТА-122342) від інших штамів бігеріотусез Гшпадісідісив і/або близькоспоріднених штамів бігеріотусез зр.

Приклад 4

Аналіз відібраних мутацій в 5. пшпдісідхсиз ВМ38-2

Промисловий штам 5. Шпаісідісиє АТСС Мо. РТА-122342 був одержаний шляхом проведення повторних раундів мутагенезу з наступним відбором мутантів, продукуючих високі рівні енраміцину. Для одержання інформації про мутації, введені в штам АТСС Мо. РТА-122342, який може давати підвищені рівні енраміцину, була визначена загальна геномна послідовність

АТСС Мо. РТА-122342, і цю послідовність порівнювали з її попередником 5. Типаїісідісиє дикого типу. Цей порівняльний аналіз дозволяє ідентифікувати щонайменше 77 поліморфізмів або мутаційних відмінностей між двома геномами. Несподівано була виявлена тільки одна відмінність в області хромосоми, що несе кластер гена біосинтезу енраміцину. Така відмінність полягала в заміні одного нуклеотиду в гені епаб. Мутація нуклеотиду С на Т 6,260,317 у гені епаС приводила до заміни кодону СТС на кодон СТТ, за умови, що мовчазна мутація знаходиться в кодонах для лейцину. Тому, малоймовірно, що ця мутація відіграє значиму роль у явному збільшенні виходу енраміцину, продукованого ВМ38-2. Відсутність інших мутацій у кластері гена енраміцину вказує на те, що хромосомні заміни, відповідальні за збільшення виходу енраміцину, продукованого ВМ38-2, можуть зберігатися в плейотропних (не специфічних до визначеного шляху) регуляторних елементах або в загальних регуляторних генах, розташованих у будь-якій ділянці геному.

Було виявлено, що декілька регуляторів відповіді в актиноміцетах впливають на біосинтез природного продукту більше ніж по одному шляху. Ключовим прикладом є локус арзАТтАг, присутній у кластері гена СОА 5. совєїїсоїої, який кодує двокомпонентну систему передачі сигналу, аналогічну системі, присутній у кластері гена біосинтезу енраміцину на 5. тШпдісіаісив.

Було показано, що фосфорилована форма АБ5Аг інгібує продукування антибіотика завдяки безпосередньому порушенню експресії специфічних для шляхів регуляторів кластерів гена біосинтезу СОВА, актинородину і ундецилпродигіозину. Мутації, які інгібують кіназну активність

АрзАг, підвищують рівні продукування антибіотика. Інший приклад плейотропної регуляції

Зо спостерігається в 5. сіамшідегиє, де ген ссаВ, присутній у кластері цефаміцину С, кодує регуляторний білок, що регулює продукування цефаміцину С і клавуланової кислоти.

Мутації в геномі АТС Мо. РТА-122342, які можуть з найбільшою ймовірністю підвищувати виходи енраміцину, можуть бути присутні у генах, які, як було передбачено за допомогою біоіїнформаційного аналізу, кодують регуляторні продукти, включаючи продукти, які можуть мати плейотропні регуляторні властивості Нижче представлені приклади передбачуваних регуляторних генів, ідентифікованих у геномі 5. Тшпдісідісиє ВМ38-2, який має мутаційні відмінності в порівнянні зі штамом 5. Шпдісідісиє дикого типу |мутаційні відмінності в кожному з нижченаведених прикладів показані відсутністю зірочки, а відмінні/пропущені/вбудовані нуклеотиди показані жирним шрифтомі|.

Порівняння послідовностей онб82: було передбачено, що цей ген кодує регуляторний білок у сімействі Тея(К, що містить домен, який зв'язується з ДНК, що має спіраль-виток-спіраль (НТН). Додатковий о вбудований у гомополімерний ланцюг, індукуючий зсув рамки зчитування.

тишу палю Шити Ми и Ми в пити им т МИ МОТИВ УМ ЗИ я МИ Ж Жити М УМ мит В и ФК Ж Щи жи тити

МЛ. ТІ я ЛЕШЬя. УМА ТУ ли МИ ІЛ и КК МКК ЩЕ ПИ М КИ ПК,

МЕ БИ ВК ви КО ОК З а НО

Що ЖОЖ В Ой Ж МВ жо ох ж ж ожом Во жо ох Ах Ж ЖАХ що ЖЖ ум ож о до ж Ж в ж ж оком кож вк ж хх тиру то шлю нн А

КМУ жі ШІ УМХ МИ ім Я МИМО ФК ММ АЛУТОО УХА ХХ ММ МУ ММ Ж УК ШУКАТИ ММА УМО

ХК ХИТ УЖЕ ЖИМ и и МОМУМЖОМ МК УМІВ ІМ ТИМ У МОТИВ КИ ЖИ ММ УМ МИ КМ ЛІ МУКИ МЕТ, У. хвоя і док доход КС же й Ж ЖАЛО Ж ДЖ Ж ню Ат ВК хв кож ов док В ЖК ж ж шу ск о др ТПУ КИ и М ЕК ЕРИ ХМК у МИ КИ МИ ЖИТ Ж Ж и ЖК ти КЕ и Кун и и

СВИТИ М ою хю СМ іде юю КУТУ МЕ и МИ А СУТІ МУКИ ТУ КИТИ УК ММК ик ЕМ МА Хо йо шІДОЯ пр о В В и В о НН

ЖІ ООЗЛХ БИТИ КИ ЖК Бус КІ ПМ МИСУ КЛІК МОЖ ДМ ШК 7 поко жхожою жов хх жк кока ЖАВ ЖИВ КС ХК хо Кк жк В дю кВ ха кА ше їмо лю умо поретнунІ у ук у и ди дити и ум Я т І м щи

ЖМКоЙ СМ ж хх СМОКХ п КК УК т КАТ КМУ КК ЕТ А В ТЕ МКМ А У АККЛАКМ Ж ЧИ УК МІ ТЕ УК АТ МИТИ У МУ КЕДИ Я А

ЩЕ БК ЕТ МТ М о МЕ КИ ТІМ ТТ ШК В КОМИ ТАКЕ

КСВ ОК ЗАЛИ СВ ДОС КО Ж Ж ОО СЖ ОО Я КО ВО ЖАН ДО ААУ КОШТ ей Ж Ат В жо КАСА ЩО ЮК пміМ. яд ПЕТТІ КА ПА АВК НМ ККАЛ ТМ

ТТ БВ ПЕТРОМ МІНИ ММК КИ М ОВ АШ АТМ ТЕНТ т ВО юоЖоВ жу дик фо жо ЖЖ кА ФО ХО В око ХО КОЖ ж в ж ЖЖ жо ож т фо ж ок АЕС Фокс ШО пятою Іти я Мини и и ВИК ТИ МДЖ И и ХИТ В УМІТИ МИТ ИТИ Й КМ М КИ Кт Кк ХМК И и их

ЛИЙ ПК ТИХ ШЕЛМСИ. МАМИ КК РДА МИ М ТММ ТЛ. Ми умо МАУ МИТ КААДВИ ВМ І 1ЛИЖМО МОК ДИМОМ Ши и ДОТИ

УА ОМ ТАКУ У ШИ МЕ ЖУК и иЙ д дои МУКИ М ДМ М М УМ

І пов ожож я жо ж ожоло ж жо ож оЖов ою кож я жом дожо ж жо жоюсл ОЖОМ МО деж ож ох жо ж жом ст до ож хе Ж оМ ож ВВ

ВМ чи ПАНИ ЕЕ ІА ВИ ТК ЕМ М я че дО т ГІд ти мити ТА МУ ик жен п ми тв Ки ТИ М ли ВК тиТе

ХА ОМ МитедУх уми МОХ ЖЕЖМ. І ЖУК ли Ки ММ ОКИх М, КУТУ КМ Кому ІМ дл. ЕМВ ІА УЖЖМ ТІ

КОТОМ дю ОК ЖЖ ЮК Ж МК КОЖ М т Ж пом ко ЖЖ ЯК СНО МОМ ш ЖОМОоК СВ ЖУж ою ох тю дк А Ж с КК вила. Я; СЮТОНУВК ТЕ В ОТО М ОК ВОІВ ВЕТО ОН ОК С мико ех що мини в и МИ Лу ри и нику лим КК ДИ им КК рр ил вт тк

БЖ ОМИює мае ТКА ти ї М ІК р Ми ПИ КА ЛАЛНИ ДІДА ДТ КМ М МОР КИДКА фо ДО ОХ дю о ж ж дО ДО ФОМИ жом В ФОМОХ юю ШКО А ОСЖ ВОД К т ФО кох шо дж и ЖК КВ кю м

ЗМмайох ах ПЕТ ТК МК ВОК КЛОУН ят ба ПОТОКИ ОКО ОО ОК УМОВНІ . Ж осли МО ЖЖ ЖЕ Ки Си КО фо ЖЖ ОКО Ж КОВО ХО КМ и Кох АСВ ДН хх жу р ку пиво ло подих а а о А вв Я

ПШЕУЮМ хо МИХ. РАКИ ЛУКА УКІММ Ми юи ДМК М КИМ КОТИ АМІНИ ММ Мч МАЛИМИ МКМ МИТ А тт ййо ПОВІОВОДНСВОТ ВОК ооо Котов В й ки в не и и и в в ЕК

ММ Во ПМ ЕЛ ПА ЕЕ КВН ЕМ ПДАА ТИКИ йо Вилки и п ие им Ди КТ ІК ТІМ МК у ВЕ ДИМ и МИ КМУ М МИ

Що дОж ЖЖ КО ЖЖ ми ВО ХК ОМ Ж ЖАХ СО ОК т дО АВ ЮК ки В жОЖО А КОХА Ж Ж Ю АСК ФО ХОЮ ЖОВ ЖК В жОКЖя

Бмхво о БНО ПЕКУН ЕК КК КУ КК ОВЕН нов ІТК у шо ПИЛА КЕ НИК У М НИ КИ АК М АВМ ІМТ т ФМ Ж Ж ОТОЖ Ж я М Ох ЖАХ СК Жов ХО ЮК ОКА Ж КОКО Ж ЮК АЙ В ЮК оя сю ДОКОА СЮ ж ки АСВ ВО ЮА ТО

ЗМИН.ї вид пи кс ни и я ес и ок в не ОМ я БЕ ПТ КОВКИ Вуд КЛІ ГА

ХІТ

І м он С З В и п і п В В В о в в п М В

У 682 трансльований генний продукт

УМО ТОККІАМАТВрУ АСОМ У МК АСПО АЮ УЮ ТУ КВОТ ВОВИХ

ДІА ЯКИМ ОА пу Ай хитрі мМашт вимити

Ром, Тут У ЖІ ТА В ух т ту ве м к у т ЇВ ДОЛІ СМ у мит гу ти м м и ІІІ УК ХК мими жумі хитрі КТ ТИ п ул йх Ше МЛ БКИчІ М МЕДИ МАУ ДАМ КУ вто ол буд тре мех В мот МІК тот Оті І И М пали ІТ ТТ ЮК ХО ТиС БУКО ТІ МОДУ.

ШехтхвІіс МАМИ Ха ЛК М В МА ІІІ ЛЕ МК АП ЛЮ ПИКУМ 1 ИВААМАІХ К д ИА ТАМ МИ жу ую яю, жк кла у і маш ши МОМ у »ВМ38.2 682 трансльований генний продукт

ТИМ ІТ ОД М ВИМ и ТІВ МЕ о КТ КМ МЕ ТІ МК о Ж

ДЕ т, . - ' - - оп2798: було передбачено, що цей ген кодує ДНК-зв'язувальний регулятор транскрипції в сімействі МигЕ/Крік. Цей ген містить домени спіраль-виток-спіраль (НТН) і цукор-ізомерази

ЇБІ5). Мутація С на А приводить до заміни Су на 5ег.

МАМ ТИ ТКА ти УМ АММММ МКММ ол о ААУ ОМ. БИ УМ І ОСТ ЛИТВА МОМ хх м ТК ФАК МУ МКМ МИ М Зк ПОМИТ КВК и Ж КИ ФДМ КМ ОІВ у МУ ОХ я ОЖ о хх ШОЖ Ж ЖЖ в жо кох ЖЖ Ж ШО ЖК ю ж оюоюо шО КОЮ дО Ж Ж Ж КИЖКОХ ДОК КК ит Ж як дя ОК п шо лосжхмха а Кн В А ІМ

ОІВ ДИМ тату м Му МІД І А ДУ Кит и В КИ ДИТИ Ду

ОВ Ош АСВ СЮ КО м жи ки и КК ою жо жив ЖИ ки и хи жо си ЖК ДАМ ЖЖ Ю АТ т СК В хо лу ле Ух Й ту меми у МУЗИ МКМ ди и ит Лу КИ пЕ и Й Й МИ и Ух КИ дж шко и МИКИТЮК ТИМКІВ, КУМ ММ МЕ ВИ ИМЯ

Мч м жо ож я ех Ж жом ж ве ж ж ж щем жом В йо В жо ЖОож У жо о жо ох жом и ож Жов іх З

ТК ТИ жі Б ТК ик вит КЛИМ ю КІЛ Тк КО ХЕ М ИМТН МТЄ МА И МТ ВОЮ МИ ТТКТИК ОНН

Вт лика ТЕХ МИ МИТИ м пу ЕТ ТІК ТК т МИ и МЕТИ шЛіИТ лю МИТ Й

ЖАВ АДАМ АВ ЖАВ ЖИВ КТ АВМ АЮ АХА АЛЮШОЖХ У АЮ ДАЮ АЮ ЮА

ММ ЯК Ки ДМК МД КЛИМ КИ. ЖАТИ МАХ КМ ОО БАМОМЛЯМИ ОП КМ КАМИ ще суч еп я Иув оку ту и ТИНИ МОТЛОХ ит мох г СІ ММ МІМ ХОМ КМ УМ АМКУ КМ У КМТ КУ МКУ

КОЖ АК КВК ЖК КВ ж и ж АК КО ЖК КК КК ки. ООН ВОК им АСК СЖ КМ Кк ко ж НК т Смт «хх В ВИК Ди ВИ І ДЕ ТЕ дити ту

Кот жо ПІКИ КЛИМ ТИШУ ГОЛІ ШУШ УТ К УМ МИТ мимо Ух Ух МЖК УМІТИ шОж о ШО ЖОдеф АТІ ОКХ ЖАХ КАК Ж БОКС ЖК ЖК кя КК ХМ дО АНІ ДО АСК ЖК АЛЖ ХК ДК КС я ЯКО КК Кк

ТОЛК ТУ уко КуУМоХХ Кіш і КУМ Мих уми иш М МУК ІМ УК ДУТИ я Ж КУКИ УЮ УВІ

ЖЕО их ММК ММ КУ КУ УКХ МУ куки БУХТИ ЦІМ ЗА ІМ ЗІ Ж МУ М уую. МОВИ ши КУМ шожоХ фодей шОЖОХ фОАСИ ШОК ВО ХОА ШО КОКО КОХ ФОЖОЯ Фом ох шої ю док шт ж хз Вк ж Ка х кА Ах

ПТИЛІ У я и ТЛЮЮ ки МИ к и ИиУИ КІЛИШУМ МАЮ ГТУМ ГУМУ МУШУ ВИМ КК ним КМ М ХК и М пи стік рн и и ОК

ЖЖ о ги шими ми М ІМ СМ ИУУИ МОЇ МТ Мих МАМ ий И и КІ ДУМИ МИМО Є ПЕК шожой хек ДОКОЮ Фо КОМ КОЮ ко и М КК яю МОЮ Д КОЖ ЮК ОМ КК м хх ох ж Ж ки КОХ ль гум шик види яки и им і вити ти Ки и

ПРИ и ОО МАХИ ВАМИ У ПД Ки и М МКМ ММА МИТА М ТММ у ВИМ Ти КИМ МОДИ МКК ММИНМХє пит ск доти кити ит тм ит Ми ЖЕ КЕ Ки и КУКИ

МО ча мо і и А НН

КДЖ Ж дю як кож ж же кож ек хо У жом що жойгощоя еВ жти мО Ж шо жо жо ю хе ж А СД Ж кож КО АОД Ж СХ ж т ох. шим щи и и в В и НО КИ тА КМ ТИМИ В ДОКИ ОМ и ММ І М МОХИ МУ К. 1х МІЙ ЖИ КК УК У

ФодОж ВОЮ я «ко дох дов ХОМ жом дож ою дО жем до же» В ЖОМ ДОЖОЄ ож ж ФОЖОЖ ЖшОжеМ пою ж ж Си ЖОя ЖЖ АОС Ж КО ЖЖ так сту стук КМУ Ви и п Кри Е ДИ те и КМТ Е ЕЕ КЕ иКЕ І демо ож ЖЖ жк я жо те же деки ох ЖОю жоЖж АО1 ошожся що жо ЖЖ КОАС Ю ЮК ОА Ж п фон ВАТ пШИЛОЇТ хо КО ТІК ТИЖ ТІ По КИ КИ МАМИ АЖ КОХ М ЛІК ГТУ КМ уми м цями ші У ІКТ ЕМ МАДВУ КІН И ИН ПИ и МИТИ М ПНІ МО Ти я 1 КА КА КК ТИ дк шо ки Шо ШОЮ МО фож ж о жожет мом ох дО Кок дою СМ Ж АСЮ ЖК ДОХОД Ж ю АСК Ж КО ДОА ДОК М Ж дл я шт Ой КМ АТМ ЕТ М МИКИТЮК ОМ КА ЕТ ВА КІ

Мк ОСТ ІВ кими КІ ВАМ ТУ ЧИТИ М НИК МН КК УМ МН М КТ ТИЧ МИТИ У УМ Те и Тя се и в А в в а и В пен тю пох МК в НИ а НВ В дек доли в АЙ ХО ХК ДАМ ШОЮ ЕКО ДОЛЬ Км ко кож й ЩО дж М дохо дол ЖД Жох жу вих ее АВК хх

ПМ ХУ ЛИ з п ЗІ ІМК р СТА те ІТМУДТІГЮМаМо Х

ВАТИ ЦК ТІК хм п Мити ОГИДУ ТЛ У КИ теми У Ех ІІ У У;

Мол тм ил ло МІ УМХ кАМУУ

ПМК КІ шу М ОЇ я ТАМ КМ МЛ УМА МОДОЮ МАКЕТ МК а ММ пл АТМНИ МАМИ

ОПТ М МКК МА М ОЛУЖУМ М ТХ з кшивт у меми мес ти тк фо Мо й домом том Де ТИЖ плн таких Кто УК МИХ рок тек є ух

І в МЕ: З КК ВО Кт ТЕМ І ВТК МІ ОТ а и М Я 1

УКХ ІЖЕТ ВИТ ХК Ж т Ми «ЖЖ МИ ММК МІ МАХ

Клум плит ИиУ ик тика тур ог плит ша БИ КО МІ ТІ ТАТА МНТУ ЕТ ТУ ІТ хаскі М КИ МКК У До иа ММ АТ Мах В БЖ ДЕ ФВ КК Ми пох хх міхи: 354

МОСТИ БЕЕСНАТТОКВІАНЕМУуКАААПУ ЕТ Ка пОо г В

УКВ УДЕАКА ЕТО АКА МОСК АКУМАПРВЕЧУВОВОК

МІМІКУ ЕАЛАЛОВНОГАТЕАВКУ НОВЕ МІНІ ПОДА ВАСАВАСІСРВІ

ЕНЕЕЕЧСУЮВІІНАКЕТОТУУТУАОЗРЕАВУА В ОБРАВ УСТОС КОТА ВМІ ОВУ,

КАМОПОСКСОАОСВНОКЕКОУдаВАВ НО КО ІВ Мои. . я ' я - :.: оИ3866: було передбачено, що цей ген кодує ДНК-зв'язувальний регулятор відповіді в сімействі Отрк. Цей ген містить домен КЕС, який приймає сигнал від сенсорного партнера у

Н " Н " ся двокомпонентних системах, і домен "крило-спіраль" (УНТН), характерний для регуляторних білків-антибіотиків Бігеріотусез (ЗАКР). Мутація С на А приводить до заміни Аїйа на ТНг. вмІМ,й ЕК ТЕМИ КАНВИ М ОН КА МИ ЕП ДАК ТЛ МТ шех о сулу дою мим мими ди КМ КАК Ж и Кит Ву А ЖИ т пи ж В М ех МКУ жу ов меш ит

ХОДІ ММ МА по ЕМ Ж КАМ и МВ МО МК МИ У ВМІВ АТМ ТКУ. 7 жОоДож я жожею т жОоЖж о шеох З ОЖОеХ фОож од ожо щож отож ЮК мож жо жов можем жов Ж ож жов дж м мож же що жо

ВИКО. ЖЕ ТИХ ПІКЕТ КАТ ИНА

Ж ЗКУ КЕ ТОКАКВ ЕК И КК АММАММ ТЛКТ ЛИН ОКУ

Щ ШОК ДОА ФА ЖИЛИ ФО т ДАК ЖИ ЖЖ ОВ ЖИ КОВО ХА Я ди КОЖ фо ФОКОСК ФСК ФОКНЮ ОК ДЖ КЕ ВО КК К КА тиж т стро, в Ан Кв

МОХ. ЩО ЛИХ ТЕМАМИ КМУ ТММ У. УК. КУ ВАМ МАК ТЛІ ДУМИ и и КМИМ. МИ ХК ХХ щшт З АСК А КВИТКУ АД ОКХ ЕХ 7 ОКО дою фо М ж АОСФОКОСК М ХУЖ В ЖК у ЖК Ж Мою Ж юю Же ож М шок ж ож ж ЖОВ жехК я жо Х ож жо жою ох

Мін. дЕШЕ МЕ ВОНИ КОМ ЕН МІК КАМ КМ

Мт лав ВЕ КН А я В ЕК ав о ВН З ВН

Що офис ев шох СВ ДОЮ де дО Мк В жо ж ОКО дод ж кю Кох ж В АЮ КК ж Ж ю ю Кок шал я ВЕУ КУТИ КК В ЕК КИ КТ М ІКТ

ЖАХ МКК ДИТИ УМ Хо УПЦ Й КМ учи ИЙ КУКИ ПКМУ МЕТИ ПОХИЛІ У 1УЖУ ЗХ ВОК МІ

Що оф ей ЖОюЖЮ ся юки Мо к к КЖ К жоЖ ж КооииВ МУЖ Х ЖОЖ М же ЖОВ Ж ово кож кох Мох км ямІв.д ЗБЕ ХЕ КИ КК КАТА С ООК пико чи копи нти иа МИТ М тич жит де УТ ТИ мит и Ки т и КИ ти их я

ЖККО ДТ МЕМ МА Мих УМ МИМО МИ У МУЖИК ММА СМ АЛ МИШИМИ ЗИ АСМІЙММУЬИТ Я МТУ ри ВКМ 7 жо кожи. в КОВІ Я ЖОАМК ШОЖОК жи Ж У юСВ Жш ДОК КС В кий Ж фо ДК ЖОВ СК В й СК о юоВ кож ою коКОоК

Майо їх ПОТАЛУ КТ МКК плям ра о на а на о а АН ОНИ

УК Ту паж ПА МИ ІДАЙ І Ки МУ МДЕ МК Мт т КМ КМНХ ОМ м МЕ А МО ІЛ МУ АЛЮМО Х

АЮ КОЖ МИ КСВ ЖЖ АКТА МЖК КИ оси ЖОВ С Ж осх ж Ж ВК Ж ох хо ЖЖ ок же в ож ЖЖ же Ж Комо х вжи. ЗЕ ЕДТА АК КИ АК В КВ ТИ

ХТО ЦТ тлшКу ХК. З МТД ТМ ХК КМ ХА МОМ МОЛ ТМАИЛЕЖУІМАУКІ УЧ МУКИ ШТ МИ МИТ ВМ ВІ ШМД. п хом ож ож ою Же дж Ж Ж ОКс ох б ЖОоМ Жж спожи и ок о Кл КО КО КОЖ Ж Ж ю Кя

ПОЗВОЯ ОСА ПІН КМ КТ МИ ОМ НК КА У КІ ВАМИ

Ж ії СІМ МИНА ММА КНУ ЕМ ИЙ

Що ША КОЖ ж ков Ж жоАСЮ СЮ ОКОЮ КОЖ М хх ДО жк ко кт кв кв ких

ЖИМ іт. Щі СИНЕВИР МОКН МУЕТКПИМН КУ НУКХ

МОЙ: ПАЛИТИ МВА КВК АК М КК ВОК ТОМИ ЕТ МД КОКО 7 дж сю ж юю ож кож ож Ж Сю кож кою Ж Жеж кА Ж М КК В Ж ЛИЖ В Ж ж жо кю ВУ Кох

ВМ, ЗМИВ ВИТУДІНОЖИ ВМС КОМУ КВ КЕДИ ТТ ТІК ТИ У ОНА КМ КН му дже АІЕМУТИАІТ МДУ ТІ ОД ИКІТУ В МАТ ІМ КМТ що ож Ме жи ЖК Ж ОКОМ Ж ой жом Я Же ЖК ЛОЖОК ХОМ Ж СО Х МО мВ Ж КОЖ СКК Ж жов ж жом жо ох

Ід ЕК ВІДМІНОК ВО КН АД АВК жу авеЕ Мету КЕ ТО ЖАН КО ТОП ВАДА ВИ ПУЛ ВОК ЦАЙМИ

Що дове кт в жо жов жо домо ОМС Хол жк а Ж ОХ СОКОМ ЖОХ шОбОю шою в жом дом в Ж ож хе жо ж кА В хв ж щМж Ал ДЕ ФЕНИ ТиКу ВАИКу ТАК МИТТОВА ІІ МК і рок САЛАТНИК УЮ ТВ РЕВЕ Б МОВО: / шов хх кожою ж кі шо жк ую хе дм кох »М/Т 3866 трансльований генний продукт

ЕДЕМ АКТОЕЕНТКТЕВГТОМАЛОТАУСРУКЮТИЬМУ ПАБАТО АТ КАУТВКВ КИ

Мис ЕНІіОАЦООУМУЮСМВОВУ СЕК ВОБиМУрУ МАННА У АД ТНН У

АКЕТІІУ ОХ АКТВАУ БЕКОНА МОСКИВИВАМАВОУ АВК ТО СМЕУ КАС ОМУВТ

ЕМІЛЛВЕБАДОСТУ ОБОКІДЕПУМИУВВКОТВУ СУ рВо НТК ОСВІВТУВОКУКЬЕ

В оО1БЕС ІВ ОІВ »вМ38.2 3866 трансльований генний продукт я ти АЛ ТЕМ МІТКУ гів ока и УДО я хтів уд мо уд ЛАНИ ь пи ХО МУ ду ит я тис МК І МР БТІ ІК ІТ О Млтк ТК СИ А КОТИ Ку ВИТ

МЕМ УюИУМ А МЛУДУТКА ГО Мт лю БЛЕМ моміс мл ТАКТУ у ТИ Ку

УЧИ ЦИ ТУ ТУГА ТУТ ПА І ТУ ТИ ТД пух ду ОТ КІ Ж ОД ХО ГУБИ шт ТІМ АТ 1 М М МК КМ МЕМ М МБ І М А ІК ІК ФІ КАТ КА ТИ

МК Уу МІ ж АХ КІМ Ох в лю Кл дами ГТК М У ТОК АМКУ МИ М КИ ІКАО

УЛАС КТ ПА УК жу ик Кизим ут М У зи ж. Мои у у жук Кт Ку КН УК С ВТІМ

ПЕК ума лу Мі М мли МИ ММА ІТ ЦК КБ М УВУ АТМ

КУ джут ті УК у АТМ УП у ТАК МІ ПИВА ХІД М ВАТА Мт ІЛИК ДМК ПО КЛІ ХА

УЖЕДЖИУТ ТТ ТтУєт ДОМ лу Ух отут Ж КІФ УК и жу іх ЖІ І Ти гу утоми КВ ев ву тити хи те

НИжККЕ І: 1 ат хм ж І УМ ТИТА ММ

Кума ху ВЕК Х МИТОМ УМ МИ ДМ ЖІН УК МлА КЖХ Ж мЕ М ТХ ДІ МАУ ТЛ КК ОТ т Та ли чт, пику дочко г М, оп4755: було передбачено, що цей ген кодує фактор РНК-полімерази сигма-70 сімейства шій пт ТРК середо А о у ди вто МУ ли и ДИВО М КК ти дими

ТОК ВОЮ ТО УВУМИ МИМО КІН ЕК ріВАМиКА ДАІ КК тя ї ХХ ХО и КМ ДЖ У ККУ ЛИ М КИ МК АХ ЛАТ КОХ ЕМ МА шох жо шОАО Ж ЖУок ЖАЄ ЖАВ ЖОМОВ шо В ою ож дО ШОАСВ ОЇ ХО Ж Ок хо шою хо ОФОХО й ко КОЮ оМош шої жк додою с до пив тлй ши пет тк пою Ки М ше УТ ТИ дух г и Му КМ МИ и ММА

ПС ех ЛИХ ДУ Аа ВИМ А ки ТИ МЕЧ ААУ ВИМ АЛ ВК ХК КИТА А.М І КУН їх ат уд ЕК Ми Мити Ми и МІ вия и В МЕ УА В М ВИТКИ РЕ ке тхУМ.УкУчТи дАИИУМУ И АІІ ЖЖ КМ И МИ АДУМ АМІИУИ МИ МИ ТАТ. 1

ДАЮ домов мож шо АХ шОАСХ ЖоОКой фо ою пожом я ШОКОВ ЖОК ох юю шк г п ж жом кою ж км щоки мМ ЛОТ ПМ КМ МТК М ЕЕ ВЕ М ДОК ДИ типОаАшА ТІМ п ТА ТК АД А Ду кЕМ у Ми шУо долу п в А и и и и

ХА ОО СИХ КЕЛИХ ЕХО М КТ І ЛИМиКМ ХИММ МОК ВК КА МВТ УМІТИ М КМ ВКМ ж жо Ж ж шок ож ж Ко ок ж жо ж ж ож Ж М ЖЖ жк ЖК ж жом ок хм жах Ж

ММ ЯТЬ кю ЛЮТА ВОД ТО АД ШІМ К еШНКИ АКиК А ШИШК М ТК МКМ АК КМИНУ пит а Химич в Ву и ЕЕ м УТОМИ МИТИ Ки У жу МІ ПЕКТИ у І Еки ВИ

Ж РО ТИМ я КИ МАУ ІМ Ж ММ КМТ ТУ УМО ВЕК НК МКК АК ЕЖМ У ММ УМХ ГИКИхи

Жожие Ж оКод ж до дж ж в дом Ох ЕОМ Ж ОМОЖСУ дО ЖЖ Ж ОКою КО юою шо Комо ож ою дою ю хо ях пили її алих ун А КН и и а А ау

ШО М кю МІ хоумнУ КУМ УКА уми КИТ УНК В ТМуКууя МИТИ. АМІНИ ИМИ КД и. ММ ММ КИ ПЕ ТК як ОТУТ Б т ха дк и МАЕ М ї Ід, І МЕМ ІА ДОМИ ТИКИ М. ШТ Ми КМ КІМ хок ом ж ою жом ово м ж жо Жов жою в же фохох ов жом ожеМ шожоМ В ожок ою АВ ОК ЖК ою М АСК ЖД кю мадотщцо ещи ока и ан А Нв й ни

МТМО 5 хх Фут и МД ти М МИ у МИ ХМ. и МПА: МИ им. СУКИ МІНИ ИМ МИ М. ХК МОТИВУ ЕЕ мам дстлує МЕ из МК ТЕ ки Кит ик и Йди щити кит

КАТЮ ЛУ МІ МІ ІМ и А ЦИ ВИ ВЕКИ В и еІ К ИИ о ВИМ жо жо х ж кож В жом ож М жо ж ож о жох ж жо Ж ж ж ХК ЖОВ од ож У лож хо код ЖК Ж ом мож ов жо шівдлЬО 7 шко Гек вЕ ку и у Ек ут им ЕК Ем тику ТЕ и ди

ШКТ их КТ ТКО МІЖ ІККАМКИТИ ММ АМИК АМИ АМКУ УМІТИ КМУ КК КАК ТИХ

ЦО ДЕ, гід ди и ву ди ЕЕ ви т ут в вия в ривки

МА ОО ЛО ТОРИ ЛИ Ж ЕК КК УК ти КИМ Ми р МИМО УМ нУХ КІ УК КД

ШОЖ Ж АЮ ШОК ОЮ ФОАСЮ ЮОАОВ КОКО ДОК ХОАОЖ КОЖ ОСК Ж Ж Ж КОЖ ТОЖ СЖ ОА Ж КОЮ БОЖОЮ Ж ОК ОК жож я жом ок Км прик им а в вн АН

МОХ єю ТЛ ШОЛОМ ММК ВО и В 1 ЖК ДІ ХІД МЕМ ХК ОКХ ОО ММ, МЕМ МИ ЦД ШТ пд дому, УЗИ УА ТИ ЕМ ТИМ Му и МИТИ КОЗИ и Ми УК М Усе ут и Ми и Ми Три хи,

АС ММ ТА ЕЖМИ КК ЛІНКУ М КМ КИМ АЛ НМУ ВКМ ТУ КЛУНОК МУ І МК ПУХ А КУКИ ОККО МО

ЖЖ ОЖОХ ж Жов ШОЮ ДОЮ ЖохсФфож ок о жох ож о ВО Же тож о ож ОМ хо ох ко жом ох жом ЖОоЖ щех ох в ДОК дж ж хо кох щи шо хо НИКИ до ду ТУ и и и и и МОМ и МИ КУМ МИ Ин МК м и у КИ КК или ух

ШИЛО ТІВ Те КУЛАК МОМ дити ме КУПЕ УЦУМ КАМИ МІК МО ЗИ УМ АЖ В МЕККА по хі Мк Ж ик кю КИ КК ДЕ ТИВ ТИВ ДИНИ ТИХ Ж еИ ик кут Мам Ви ик син и ек ЗАМ МЕЧТТИ ЦИМИ А КЕ У А КЕИМ ММ У КМ ММ лиВикиВе КУИКМЕч А ММЬ ХНУ

КОЖ ОМ Ж Ж же Ж Ж ож ЖЖ х Ж жОож ше Ж ож от У ЖЖ ВОЮ ЮК Ж Кк ж ке п ке КК КМ дІВМІ СВТ МО ТК, еМмімжихи мим ВО ВК Кі ДУХ

ПМ у КІМ МАША ЗАД ЗКУ КО пали др що пути ВЕК Ку х

УКОСИ МІРНУ МК КУЖВ. ДАТА ЕК І ВІ деко ко Кох жо тлі Де МЕТИ КУскІВ МА ЦИ Те Ж я ПИ МОМ УМ Мити СЕКТИ ВУ ки у Утім МДЖ Кк уки

ВІДІ ОшкК ІЛ ИЛІЛЕ Т ТІТУ Т ТКТ У КІПТ ТІ І ТАЖТ И КЕАК К , зем ЕиптА ММ МОТЛОХ ММ ТЦ МТ ІЙЯ КО ПАМ М МІ СИЛИ Й МОКІЯ МУК М ВТК МА МК Іо ГКУ КІМ

У отолюгІх Ко тт люті ТАЖА ТЕТ сю КІМ ТЕ ДУТИ ЖІ ІВ У ЕЕ І М СЕМІЗІВСЮ Є ШМИМ ЗУ КРЕ ІНВ Дт КВ я ЕК Сули РК

БАКІВ УуТ АЮ У УТІК У У У ММК І І М МАМА Ку у НК ІБК Аа м ви КІ ОТ ма іх м вті Еш кими в жмут КИ Ю Жуи МОВ кл их м Ек КК жи ПЛ Екшн дит, Фати. так ІХТІ рт УЮ ІТ ЦИ Ж КЕ ТИ и ВИ Спи у ТЯ У ВІТ ЕІ КІ ВІЛ тлцх

МОМ ДУШЕМ лом М пи М ЮТЬ І ММ М ча М М ДМК кт ее М ККАЛ Би м МКУ и ТИ ОК МВ ГКУ БелАтА т Мира та дії

АЙ ІЗУ хоп Ж 1 нн нн в в в НН НН

МІК ІПН КІ КД В рі ЖІ ПИ ДИ ОМ дахи У МОХ МУ АЛ МІЛЬ ЖУК КУМОМАК Мія ОМ М КАЗКИ М У ЕМ У МТМ ЕК ЇХ уста хм ум ту кт ик х ку ЖІ МУК ли У КУТУ Ту буму А и: ЕЕ ТЕ Ки М ДА ТЕ. тик их иАК

ПОТАП мо КИ тм КК ЕД ШК ТИ и ТЕ ТК у БИК ТЛ Ед у

Мету м Клум І УМ ті Хо мМ МП Кок КК дк ПАМ МАЯ ТХ хаІАхуУІТ фо ХІТ ПУТІ ВІ В ти мит дир ФМ М МОМ жука го жук М Ум г мк кути и кути я

МЕДІ МД Та Оу У Том у Му ШТ АКТ КАЛІ ЗІРКИ ГИ М ДЛ ЕТ о штг

УМХ АТ АТА ЛІМИ БНО КОД ЕИ МИ МОХИ МОМ Ли ТАКІ КІФ КИ ТИ ІЗ Я МД ІЕМ КІ ВИ кА ги. і

Види Ко оп4868: було передбачено, що цей ген кодує білок регуляції транскрипції. Цей ген містить домен прийому сигналу КЕС, який приймає сигнал від сенсорного партнера у двокомпонентних системах. Делеція (видалення С) у послідовності тандемних повторів приводить до мутації зі зсувом рамки зчитування.

М . ІЕЕ БИКА ЕК ТКА МКМ АТ -т о. Ме ВИШКИ М ТМ НИ ГО НКТ ЛА,

БМРБ.х аВЕЕ СТІКАТИ ВА ВАВ ТО КА КК хт дае пе в маш. 48ЕВ ПЕТ А САТ ВВ ВО ЕВ ит аж СОТОК ДІКЕНКАЕ КНМА ВДОВЕ А ТИЖКВІ де СПТОСОО ВМС ВТО оте Ав Ж тю тет

Вс. ЗХ ПЛ Ж ВАН КОМІ ЕД ІБ ПРА М шт авеВ СУДОВУ А кит МВТ ЕК І »УУТ 4868 трансльований генний продукт милим Тл ВИТ п мурал ати

УЗА ДЗК ОМ АОХЛХВЦІІ Є УИИИМКЕУА ДОУКІАИ МОМУМИ Ти КИ УМ В МАК ДУ М ДИ М М ТАМИ М КМТ

РОТ ВЕМавс МОХ ВУСА КВАС КК Ж ОБЛ ЕТИЕТУХ Ли КУ

УУТАНІКАССВВВРАСОАВрІНОМСЮЕКУ ГАК БЖ ТООМО Те »вВМ38.2 4868 трансльований генний продукт мив тин дами Кл тУтми ВІ З ВЕ Стоун мує

КУТ ЖИМ ТІМ ЕК ТАДІКАЛИНОМЕІТ МІ ТАКТСКУВКА ВК АТ ТВЕЕУХ

Ук АСАЛИВМЕККОИТиСАВ ВИКРУТОК ОС. оп5175: було передбачено, що цей ген кодує білок регуляції транскрипції гістидин-кінази.

Цей ген містить домен прийому сигналу КЕС, який приймає сигнал від сенсорного партнера у двокомпонентних системах. Мутація С на Т приводить до заміни Рго на зег. шмавию 575 АЕРО АОИМДААТАТИ ОВО ТУТ АТО ВОК МИТИ

БУВ й Зх АДМ ТОАК МИ ВАМ АТ ЛЕКАЛ ОВ А ВИН МК пиво ВІТ ПАКЕТ ТИКИ ККАЛ ВМ КИ КОКО ТУТ ОСИ КК АВМ тові х ПАМ ВО КИ ЕК, геуте дя Теле у ЕМ ЕД

ВилВос ПЗВ ТОЛК ЛІТО ЛА ТАКИ КИ АКОТ КЕ ЕОМ я ЕВ ХІСАТСТ ВОСКОВИМ ОТО ВО ВОСЛС АСВ ТОЛК ТАСОВЖНЯЯ 7 ОСТ ЖЖ шо жойо ж ЕВ оди Кий ЖК ю шою шо тиИ ЖОМСОЮ Ж КО хо хи же жо жокии о ж КО ки В кс ВЖК писктюоб ут ук глину и КК НА ИХ іх КИ Ех КЕ КИ и ИН я ту МИ итиих

МІХ У Моя МЕТА УК ЕМ ЛИКУ ЕМ Ме ТМ УК ММ МКМ ХУ Ми КК ДУ МИС МЕЧ НТУ АК т літу ІПТ ЕТАЛОНИ КЛ ОКТАВИ т шою Ж Ж В од жо жо в дою жо юО М Жов ко ЖОВ жоМ в ЖоК хо ох ою мою ж Ж жк Ж оЖ ом ою МОВОЮ ЖК Ж Жою вм оя Вт ПИТВО ДМ ОТО АЖО ВАЛІВ ТОЮ ОО ВВС ПОС ВОК

ЗН УК К ІК ЛУМКАШЛТ МА АЛАКО МК АКК М МОНУ КТ КИМ КПБА

Щі Жорж одож о Дом ое ожош ЖОВ ай ж ож Ж ОККО хек ж жо жк ЖК ЖЖ ЛОЖОК ОВ ож жо ж що Ух зіва до тк причи Кут УВІ КИМ ТИ В ВИ ву М КУКИ ку ри МИ мух

МТУ М БОЖІ т А КІНА МОиХК ЗИМ Ти УПМ МТ У ЕЕ ГК и КУ КАТЮ ШЕ. ЛУКИ ММиУЮ У ХК УУ

У СІЙ МЕМ ИМЕНИ ОМ КИ ДАНИМ и МЕ и В

ЖОЖ ж ж ж ЖОЮОф ЖЖ в жом ОО жов кож т жом Осю ОВ Ка жо ж кою в Кам жом Ж жо ок Ж Ж ж Код як мех опа п в НИ

БУХ ж ЛЕКАЛ КМ МХт о КУ Тю Тих Ул ик ВИМ УМ ММ У МИ КИМ УМ КУ УТ им и УЖ В ВУ Я М ИК. ЯТМЛХ што Зтлх ПЕПТОДАПЕТТ ВС ТИ І АТАК ОВК ОВО ВМ

ДОШОК ЮК Же КО фо коя ЖЖ юю СВ Ж дк АВ ЖАВ К ОД Й КОЖ ж и ШО КОЖ Ж ко Ж юки М ЖОАСКЮ Ж ВК

УМ ут МА ІВ те КОЖ КИТИ УМК А МОЛНЯКОМЕМ УМ ИТИММ УК ККУ ТИ УК УУ Ки КЮ А У ГУИ КМИНУ ЧТ и МАМИ те ост мл, убитих МИ ек жит ЕТ МУ ои и и Ми и тили мит узи ж линии М

КЛІ и МАМИ ММК АК АВМ МТК ММ МУ ШК и КУМ ХУ А МА. ВБІМУМИМІМВ МЖК Х 7 У ЕМ а и в Ж З с і В Ж М ОО В І НН и НК о и и и В А В В НЕ ВЕ В ЕЕ пецик.Ух ПІ ПИЛИ ОКХ ПТК ЕК МІК КО У ТА МИ ДУМКИ КО МЛМ шт ОВ СЕК М ТЕМ АМІАК АЗК КЛ ТЕ . ож ож о мом сю жом св жи Ж ж ж жо жом жеЖ шо жо мо Жов Жож жом Ж ков жо жо жо хом ох во жо жек от жо Ж КОХ шити .200ОІЛЬ шк Алі ХЕ Та вшк я

МЕ. І Во ІН т ХО ою жо б лов ою сю мот »УМТ 5175 трансльований генний продукт

МУсЕАКТУТЛЕОИНАНЕВІВАТІ СУКА КАТАТИ ЛЛУАОМЕ

СОМИ ТаАЛІКЕНЕВТВІ ВІТИ ТАТМИСеНиТЕОАлОММИТІ Кого ВАК УЮУЮУ

Мох ОивЕ мМ КАН КСАКАЮОМ АВК АКЕААЕВОВЕКВИ ЕКОЛО КИ

КУКА ЕАКОТ ОМЕЛИ У ОМ ЕУМ РОБ ТО МО

»ВМ38.2 5175 трансльований генний продукт

МУКАХ ВУС Ка БАКУ АП ОКЕАСЕАСЬТОАУТТОИЧОМО

МІНЕТ АНІ КВНЕВТВОІРІІЕТВІМНИоННТв Во А Ар ВКОоБЕуБКАКУНУ КУ

ОМ МОСЕ и МВт м ВМ АСУ ВИННА ДОМІ

АДАМА ВАТ ОАВЕ УТОМИ ОМ 1 ІБ, оп5387: було передбачено, що цей ген кодує регулятор транскрипції в сімействі МегЕ. Цей . ' - - - . ген містить ДНК-зв'язувальний домен НТН и домен КЕС, який приймає сигнал від сенсорного партнера в двокомпонентній системі. Мутація А на С приводить до заміни Туг на зег. тимоЗшО хо пом

ТЕЖ Мовою см

ТКУ УМА А дно М ЗДМУ Ми ПУ КД М АК В МИШКА НИ КИ М ІДУ КУ шт від тим ТО В ОН ВВА ОС

Жовсжох же во ще са Аж ше жд Ж Ж ЖК Ж ЖЖ ШУ ДОП ЖЖ Ж Ж АВ Я ШО КЕН АО КОВО ЖК ЖОВ КОЖ АЮ ХХ тав юш 7к ЖУ

ПЕРІОЮМ у і ОСЗЙОШЙ а а Кк ан ЕК КК тету мМ

ЖЖ ШЕ:

ФК КИ и я мими и Тр Ж хво КИ и У КК ВИ и Ж жи жк и Ж КО ев Кк и ето

ЗАМКА МАШІ КН и МІ ТИ М МЕЖА ХК Ж М У и ЕМ МК У Ж и ми АТО ММ

ЖЖ ЖЖ жо ж ЖЖ ЖК ЖЖ ож жо р Ж Ки Ж КОЖ ИН ЖК ЖЖ Ж жо ОО Ж ЖИ ХО Ж КС ЖОВ ж ж КО ЖЖ еедю мок тджу т

ІК : Кт м ЕІ пе в АНА нн А А

ШИМИ А ТИ ВАК КИ А МАНАНА ДИС В ЦИМУ Хо ли А ти т МЕ ДК КА Дню Кк ПД А УМ щи ость п жом сту и кити, ВИМ Ж яю МОСТИ и нику щи ди МУ ПИ КИ КИ КИ І КИ ик КИ Ку и ую т ду и и и ик М в в В НН и в В КУ

ШОВ ЖОЮ жом сок о жош жо жо Фо жо кож Сж Ж во ВО Св Ожожо жо жо ж Ж кс ж ож ож кож ОВ ОСЖ С Ж Ж ОО жо шо жо ож ок ож КО тка ж футьєьт

Ви ОМ демони иа М тм у ж пи мкм и Ж и вим думу м МИХ и их п КЕ т ші ОТИТ ПЕКИ ВК М КО ФО в КК КИТ КО

ЖК. ово кеди РЕШТ ЕТ Ер то ТЕ ТК ОДИН жожожеЖО дю ж М Ж ож Овод КО ЖОСв ОО ож ж ек дО в ож дк ж ойнжо Ж жо о жо КО жо йод ОВ Ж ж ДК юю

УТ то що Со,

ТИМ ОВК куми ху МЕ ЕЕ пику и и вики ДА В У тие рЕ м Кир их

ЗКУ ДЕ ИЙ А пи ТИЙ УАД МАЛЮК Мити Я КЕ МК МАМИ КОЛ ЖАХИ ТУ Ко Тми ВИТ У МУЖИК МИТИ ТЛ и їх ху. пе дуття

Їх ТАТАМИ пе Мис дж ж ПИ Ж Ж до Ку Мои ми крик Ши Кумитнитежи, пу ие хи МИ ку м у и ж дит Ух шо мк Кк КОЖ КОЖ Ж ож Жож ж ж Од ож Од Же жодиж ж ок М ЖЖ ЖК жо ДОЖ Ж Ж Мовою вок КК ож ко кох в в ен м Аа а А А

Ем А ІД КІ АН ВИ и КАНА М НК ли м М у ВИК ДИВА КОХ зи І

У ООШшОА

Ки потр вд рми ВОМ В, МКК В, КИМ Етно УК М ДЕ ня ТриА МКК дТИМтК и В, НТК лу КИМ УУЛИЙИю КИ ТУ УЖ Ух лик МЕ, ЖОМУ. БУ ЦУ У, х

ШОК ОХ ЖК ою СВ ЖСсжоВ С жоЮ дохо жо КОЮ ДО ож Ж ДОЩУ М ОК МК МОЖ ЖЖ Ж ож ожосж же КОЖ о жОж Ж Ж ож ов жо Ж ще жк жо

НН я

ХМІЛЬ о ТРА вин А КН аа ни нн А а и МВ ди Мед ми ДАІ Ід ми Ми ми Му Мити ММ НД МИТИ МИТИ ЗМК МУКИ МУ ЖУКИ МАХ по под хх МОНО

А о АК о НН НОВА и в В

УХА ММУЙУМ ТУ умі МУ ММ миики А МИ МОУ ВУЛИКИ и У М Ки им МИХ И кекке кю ж ЖОВ ОЖ ж ожож ж ож Ж ЖЖ дО Ж дж КС ди ккд КК кю дО ОЖк жо ЖОЖООО КОЖ Ж ЖЖ ЖОй А СДОХО Ж ЖЖ ДУ щМмли й ЗК: теп и КК и М КАЖЕ ЧИ КК КИ МЕ р и ви живе МЕ ІА и ія

Б нн зим пит ДК ЕК ІТ т. Можї п ТК, ОМ ЕК

ОПТ и иа МИ Ин ДК Ж І ІК В КИ КН ДО ТИТА ВНТ

ШОЇ

«МИІ1ЙВУ МКК. Ми. МИ. УК ЖУК УК УК ПЕ КА А МИ КУМ УК КУТУ М МИХ КИ ДО КОКОТУТІ МИТ дожожо й жо ж Ж яю дО де доки Ж ЖК ЖК КИМ жо ЄТИ В ЮА Ж АТА Ж кю Ж КК жо ка по хі оюеи

Шк пе ло МОЩІ шМЛ.ТХВ є АТХ

То ЕЕ КА му КЕ КД КК ДУ Ж ВИ МИТ ДЕ ВИК

ВН рок киш шити ПИТ Тк ВОВК Ди" поді У МАЛЕ М ОТ КТ,

РЕА СУМИ ТИКИ КИТИ А Мити УК АТТИ ДИМИТЬ МИЙКА МИ КМ КОСА и и ДЕК ДИНА МИХ ях

ПДК ек ечННя ща ООп: пери умів ув Ед ум ВВК МВК

Пт сих ВАДИ Ди ДМ МТ М М ЕН М ПІ,

ПД, МИ КИ ни ки АВ ух АКММи Д УМИИ Вдини МЖХ я М КИМ ним ММ УМ КК кит

У ож ож юю

ХА Ж АТ ЖК А ЖЖ МОЖ ОД Я Ж ОО Ж КОКО шо Є лою ж Кок жо жо ФО ОКОМ ЖЖ КОЖ Ж ЖоЖ схо сит во щ кру ут А в ІВ М нини міні ШЕУ

Ж їх ПИТИ у МД ЕМ М КК КД поді

Ля коужочич ми их м кими ИЙ мий Кум ПКУ ти им имя. КИ ХВ сек кі зи лІЛуИХ шОТИТІтТ МС ЕЕ ХІТИ Кп пи Мі уу АГ МІБГЕИУ 531

У М ЕМ ММ КИ КМ У, КОМ ЕТ АКА А МІ ІК ММ КІ шож ХО ов ко ков ю ЖК кю кю хв ех КК кот ких ках

ХІТ ТМ ТО ОМ От тт р ІЗ АТАК МІРІ ВМ ІТТ чит п ВК Ой тет Кат в ТВ КВІВДтіт т жі пуд ом ті т тю

МОУ МЕ и І КИ АМІНИ АВК МЕ Р И ПТ

ПІЖАМИ Ме ие ХАТІ МИЛИ ТУ М ЗІКА ТАМ а М ОМ У у лад ГЕ ОУХ тних МІХ ТЯ т ОЇ бжтосеФУто мМ ГУК ХІМ Хо ХІД СК ТТ віхою у ги ЗІ ЖЖ у дк пт ФК тім тує ж ж ско

КИМ І Іо ІДдЕМ стадом гмуюІ тими ми укл мати гм АХ «АВК ІЯМА ЙО КМ А МОХИ ІТКЮМ М КТ ЬЦМ ВИ М ГОМ хм Х ТММ Ме ТА Ва М ПМИТЬМ ПМ МБ ЛІВИХ Є ТИ ОМ. Ал А УХХ тету М у УуТ М І У МІХ КК МОМ Кия Мор М Ме М тк КУ УЖ Буг кт и Кеищ Ж тих УК ТУ КТую У М У У Ат килиму МТ КА МТМ ІІ ДЮ

ТИ АСЬМ ТИ МІМІОТАФУЦЙ М іх ТУЮ ФАТУ ДТ ШТАТ ХО МТКідУХ МО А ОСХ ДН ДМА М СТАТІ КУ ІМ КО КУМ

МОВО АЖ ЖМА сля

УуптідІЛЇМУ фл ДІ у

МУДШАТАМИОВЬО М ААУ СЮ КОМА ОСТКВСОУ У ВУММЕОКОСЬ САКЕ В коБЕйсвіБИ ТУ лавка вУ УМА УКИ У КАНОНІВ ЕІ ВІ АМ

БОКВОКІТАВЕАСУНІВКАСАЕТАВІВЕТОМОВРОТУВМЕМТІТЕНООАВНЕОВІМ ЯКІВ я ТЕКХ сяЕ ТтР ОА М

Очевидно, що всі розміри основ або амінокислот і всі величини молекулярної ваги або молекулярної маси наводяться тут для опису нуклеїнових кислот і поліпептидів згідно з винаходом і мають наближені значення для стандартних варіантів вимірювання.

ПЕРЕЛІК ПОСЛІДОВНОСТЕЙ

«110» Іпіегуєї Іпіегпаїйопаї! В.М.

Іптегмеї Іпс. 2аргізКкіє, Т. Маїк «120» Модифіковані ізоляти 5ігеріотусев ЕРипдісідісиз і їх застосування -1305» 24130 -150» 62/430,455 -1515 2016-12-06 -1605» 50 «170» Раїепінп мегвіоп 3.5 «21051 «2115» 843 «212» ДНК «213» зеріотусез Тшпаісідісив «4005» 1

После ПХ БИ СИМ В била НЯНІ пл Мати ТО шоу орав СИЛА Ул.

ТУТ ИВОМО овал що прали оси НЕК «-21052 «2115» 280

«212» БІЛОК «213» зеріотусев Тшпаісідіси5 «40052 ша га олія бУКЮ СПБ Аза АфдовУБ МАВ Мія Вко бе Зі даром Бо

Мама. зна М. КК ів іє МА мА ЖЕ су Сех Вій ие дер Тпх Ав

Сув о віа сто Ме сем тн віх бта Зав іш їж біз Та Ми См АЮ

Ж іш ЖЕ А т: під пі т Вол вче КУ ПИ Ла ро і У Кт май В Тит Кіл «2105 З «2115 759 «212» ДНК «213» зеріотусез Тшпаісідісив «4005 З дру ПІТДТА слдома Дек сх ЛУКИ МОУТЕЯ МІ.ОтА У ПУ 7 Пл Н Ти СЕ ХХІ КИ ЕЕ АТУШ срасать ел СИМ тла. пихи веувас тот зл «2105» 4 «2115 252 «212» БІЛОК «213» зеріотусез Тшпаісідісив «4005» 4 тТВї ім пек о бвие біє Мей Ха оамиз о Бак Не Мах Мем Бе Уві єм

Що пре ноя ТВ дер дк Бе даролув Мія ва їв дер УЩІ МеБ о УЩ Ка

Уні вЕпоНі Рі Вих ів бет Зі ож ві Вже АЛ ОВ ДАІ Ні ві. шіт дій Уа маш УвВю дій Би іш Але біл мазі б вт А яв КМУ

«2115» 678 «212» ДНК

«213» зеріотусез Тшпаісідісив «4005 5

«21056 «2115» 225

«212» БІЛОК 213» зігеріотусез Тшпаісідісив «4005 6

МА - у МЛ с г Кк мч : и и то То пит, пок Мини МО Жим ст прим, пІж м м Ки УВА БЮ УДК КИМ ДИ ДИЛИ фиплА дит. ОМУДІК дея ВМ УВ Код укл т слі тоже той щі сх года тд Су т Жодне йо СТЮ Люди бно юку АЮ ТИ МВ тлі Мн

Хо ЩО дО дея Му ТИХ ко ЖИТІ: УЛ 14. ЛА дю Тихі Її хи 0 У 7 шуч ЛИ жо люк. Лю Мх

МІ Мах ХУ ХИТ МО хо ЛІДА типоді ОЙ. Ди АЖ ОЖУТОп ди УДО ММлВе ТОМУ м дя ОТ щен пл ше 4 щогоа Кк 1 то то п М м яю па ло ті пли ТЕ КЕ с. пи б з Тих

МТК МОЮ чильї Од КОМІ хг КТ и тат гий ВС СУТю я ВХ Ас у и ГОБичКОЯ ох мяч З пе ли СМР Мел али 113 ши СІ: ЩО вухом дм т г АК Пт БИ ЖИТИ тор ех шкі м лов о ймкощ ХК Комду му ш АХТлУ ЯМУ М уд АКТ ТАМ ЖУКИ МИ ОО У ДУ

У хї п п 1 КД ту сіні ГУ ФА ЗУ ЕМІЛЬ се. щкш ЗІ Пп й І мТл Ада їх пт ве, п Пік Ді м СМ А що ут под М Тло Кін у Тихе фожт ДІ ДАВ СИ КІЗ чол Фони, ях

Теж їли тою Мун ТТ Хек Щикж сллчї т ЛІ ит Тл тую му НК

АЛО Ж, щи мул І М мМ УЧ ка МОМЖЛЕ МА АТМ ВИЛИТИ Ах по МУ зх У ЕТ зх

Вл М УЧ

Шешори ЛОЮ тя їГаш; дюютрв ЇЛИ (іти Ми що тиші Тамтіх ум сх боту Луї мо ел Юм ті пропция хол осях яд «ля з т ціх

ЗТ НІЙ Ме МХЮИ

Толі и іти им Лу у демо Ж 71: АТ их Й. і МІУ ру ту сх

ІАЕ ЖАЛА ОО МИТ пеиЩЕ Бад КР доечмі 8 щрожхА міРА лим МО БТ: Тл увА АЛІ

Вл А ях

Мипся Д1Х хати М. ІКІЩИ. ХІМ я МІМІЙ ли дО А ФІ ИСІ КЕ АЛ ЖАКА ЖК. лу клі

АУБ «БУХ АХ

ОКО МІ де сх БО ди де б Ши и ЗХ Юм ЛШ Хр ЗУ ДО дипИ осли синь т - т ния УМ Ян вх . а. гл. леї я г. т о. тт, тк дю ші ЛИШ ІК ЮА сю ЦИМ ФА ІЧ зі худ РлЖтУ ЖК ут лиш ожВа ми КАМЮ Ки тА У ТІ МЕМ ю жИШ ХО я ЛОМ сл М КО СУМ ТОК Ап МАТ

КУН

«213» зеріотусез Тшпаісідісив «4005 7 ппатоуосоею авогосєщо сЯюєкоетсет дваспеорьою дсофаснвносюя Фриз И «2105 8 «2115 193 «212» БІЛОК «213» зеріотусез Тшпаісідісив «400» 8

Мис їли йеробі іє бою Біє іш й блю вів бу бкюш Тем іо боки «2105 9 «2115 549 «212» ДНК 213» зігеріотусез Тшпаісідісив «400» 9 щісмкнМміяею версти ва им еуєть омааєпитм мі ОВУ судо ше 210510 «2115 182 «212» БІЛОК «213» зеріотусез Тшпаісідісив

«4005 10

Од пе ЖАХ сві: бвЯсо ФЮЬ УА Ку «2105 11 «2115 769 «212» ДНК «213» зеріотусез Тшпаісідісив «4005 11

«2115» 46

«212» БІЛОК «400» 12 а т ТК «210513 «2115» 504 «212» ДНК

«213» зеріотусез Тшпаісідісив «4005 13 шли у СЛІЗ ШМдІІ ХМ дивини дим уд ШІ ум М ши кенК ше супи кланів Фран рем нх Кер шнисой пи вн мли ї5о лили пише: села Іромлєраамі Фета писана ї5О шити тм бскст Зло ОВК шлам вну ЕЕ олуюи) ОКО ШЕЛЛІ НН плуга лихтрт Кир рисих. скрути: КІМ Е т Іра атЯкИ роралН п поезіях сотню ср хнІцижн пломіцсвуаня ФммідеїмМ: Плов Му Б пусти плисти масив мно аапироФнит ст. плов ДРУ вх пи ншусшшиюио слані иу расами сп дод орли пд сим шли іо шо повара глава и ит «2105» 14 «2115 167 «212» БІЛОК 213» зігеріотусез Тшпаісідісив «400» 14 миї де бр Буре Улі ТУ іш нжУ Вів бе Вій йо Міс вля дія вч : в М їх дів бу ТУю бе бимі Пед біб чаї дій рю фі бу Аж бжмо дій їж йшг ЕТ Мя дж т фжек ТНтТ о йда шуй спі бую АЙ УМ йо УДІ УВІ

Я СН ль

БЖ о Аді бігом лЛюмих Зщиол Му. Ми Ббщобазь йерпо дв ЗІ ЗУ ТАх Луг лот

ВН Мк й вв ОЇ Ті шу Ар бів Мет би ке їі їні: нь Бім УК о дУч Узі пи т ТТ ки сУув вів Му зе); йед дів Вів шу Кіз дар Увю хе фе Бе Мед злі вх зи з твЖ ДАІ флош ою сті сід дю ЛЬ пі. Лют ї1в Пи Му Ме: Дал ПИ І у . тів . й полу І хв 7

«211» 843

«212» ДНК «213» зеріотусез Тшпаісідісив «4005» 15 «210516 «2115» 280

«212» БІЛОК 213» зігеріотусез Тшпаісідісив «400» 16

ХдшУКоО Тло І ою учи: Юм ХА у щу Млмуг ЛК ОТ що божу Змій ТУТ ел я Ум т поркх ке чи м. УТой чу м. мода То ех ше ХОЛ -ї 4 в Зохочу т

Фі лом юю додіхл МК ХЕ СМ Еюю ж юю щУЄТУ 01 ле. ТД лопух хапиої

Мам мук ОдІ ЖК ОБУ ЛАМИ УМО ЩОЦІ ТІ УВА. ЕІ полі. З шюД. КИ Кипшед о ям И

МИ МАО ха М І ТА ЗТ ЮА пижма ВІКО РИ вет ФА Ма г ДІ,

Пт ЛЖуТю Мом яУлох лнн рикю ДКТЬ тТоаах Мних Кам ІД Тр М жи М Я тку, поля

УТ и ТЕ ІІ

ЖОМУ ями МЕ ХЮ Му жк МЕ МА ОИ мем УЮ УТ мем ших. ЛЯ ЯМІВІЕ лим АХ ХО и оЮ ХК зп ж МЕ т

Жуламо лише: сб М про 21. УМ оию СТО лм. з о«мліІ ЩО ВЧ БІ т ошет ФА 10. ШТ У ЗО тіиМгі

РК чо ла ЩА жк «МДЕ ХОМ Ма УТ Ю Ул ТКА Кал пе Ем КК ТА ХМ ІА хг зл» х яхт шт МУ МЛ пан ВО СИ ВМО ДТУТО ИД К мІі ЖАТИ шу ЛЕ УК М СЕЖАТЯ ЛЕ ЛІ ШІ ТП ОЦК

Ще юю Ти Мои ля Чорт пн: учні Ох То ох пото МИ Лодих Мото Тих том зх пок тп ДИ ЖИ СЕ лІ КАМ Тл й Кол до ОЛЕ Д. І Х ЕТ АЛІ ма ле литі ІЯЖМІД мо ит о нн р нн в НН Но в НН НН нн в А в НО Я яв МЕЧА їх ши БК КИЖХ ал кажи чния Ж х ОК оч хх а ем и Ех ТЕХ

Од ВЕ я

ФО ни Ту « я Ошн МО тт Тату шо ния ие Лоти ТЛ ть Поляки мя о учні

Блю пе Й Же Ол ОУН ями ВІ ДУШ ом ши жу диплі КИМ БМК ДО БОЖІ лИКчу

ОК долу ХО їх Пр ТУ фл учи У. ТТ Три чия тю и, ІКТ ПО, ІДИ уки ТО, КТС пошти Мих А

СА підт Сацеї йфл пур о фах сюди ДИ гео сома СИМ би М ро ШО тлу сплю ФК КІ ху Бе ваня

«2115» 759

«212» ДНК

«213» зеріотусез Тшпаісідісив

«400» 17

«210518

«2115 252

«212» БІЛОК 213» зігеріотусез Тшпаісідісив «400» 18

Тищіі: Км ать ТА ро ЕК пт хі 8 до тлу: уд Ат; ую Жужклту лю: ЧІ СИМ ж

Ух, С пох. тІХ или МІ се и. и ті І 42 І не рі ли те пи тк І 5: Мивує ЛИЖ ГІ МИМО Що фу т СИ пл хищіІ ША шкі Сб тт її м У

ВАМ ОЖАЬ вл см ОО АЖ М ЕКО СМІХ МІД мем жа ЩІ ШО ССрал жа ОЖАТ М

Ул пІЇ Пл

Ялом Ж ОЩДОЇ то ля сжт Т мту Хеану ДотЖА 171 1 ойихдо Мих ЛИ стодит 071 1 КОЛ нива ше нач СЕК яки пл шо ж шОДОМИ ями дя ше пл МАХ ПИ А пе тю

У ТУТ м пи и. ОЦ хід таж Тон Фк Кошжх тла пі Посла тету Теми їй яйцю шо шию кІЛМО ОТКОІХ ІШЛИ дій ОФЛОКР дтД ЖІ КУ 1 АЛ РУДОлЛІЬ дош Мем МІЖ МАМО МО У ММ

ША Да ЧІВКО АХ ДОК жят ло пилу ОІАЖЙ ОХ Се у ОА ЕК М дом САОАОЄВО ИО МА СЕУ ММК о хИМИ о МОЛІ ОМ шу пі ря

У пт. З хоби. Вдио гТодщаї Шуює Міс пожтту ФУ: 7; кю АТ Лу будує Ха ло ев шле мВ. дО мищиМ МЖК ші мед ЕІ в: ФІ стр КВ ВЕЖ жа ю я ху А,

КІ ШІ м паті БМ Ти бут АЮ до гугл дю до дам АСМУХ Паулі ФУ до слу Ши. ТМ ФуЕК ОПЛОТ К : жк Щит тую тот щодо дожеую СТ 1 жу були Ж тУх Бош ше их Хулетч Фу 171

УМА ТУ ЖЕ А ОМ У С У шА Люл яКОТІ ШЕ ЮК ФІ Ю. У Хе ОКХ ТІ М у лофт: хи Зодлх

ОТ шини и

МИ полі ОЛУДАТЬ СИ мкА гУЛІЄ хх М ТУ и ФМ до людЮ лим КМ хиду ММ Ж ХМ тд ц щи хо, тошту тоди ОЇ у Ми ЛО ж ТТ діФу: Три 7 Ти 0 Аоджтю МОБ ФЛ: трі мимо Из А мч

МЕТІД ОЙ МАМУ удо ХА АИПХЬО УЮ АЖ ло: ЯХІЮТ ТО хм типи ОБИМШ ОХ ЖК А ТК хи. яму я

Ту Аню ТИ юн І ки тру Хот Хо шию ПУЕ Хан МЕ ХО М ин о НН

А ЖЕ и и Ух жа МАЛ АТХ МТМ Мото МАМ Ми хо МашИ те АСУ ЯМИ ЛИХИХ поші хх плит тоб ТІ Ше: 00 Ще пот дн я ЗМК жн и Тодьзя 0 Шлає юю Су шхк тот по п Ка п, ї щот в ки шк ко зи Ух по ку х Ух У шию в тити РІ ЖУК 7 у и КС шМу бл Лу щої ех титр и пугуйх

ЖК жом УКХ ЖД КА Ю ТУШ ІІ МУ. ЗАХО САМ ОМ ОА ЗЛОЮ УА МУ ЯК ЛО МОТс

«2105 19 «2115 678 «212» ДНК «213» зеріотусез Тшпаісідісив «4005 19 «2105» 20 «2115» 225 «212» БІЛОК «213» зеріотусез Тшпаісідісив «400» 20

Зб пак Ст зп ЇВ лещат й жаль липа ЗУмао жор Мина РА фек ЕМО

-2105 21

«2115 582

«212» ДНК

«213» зеріотусез Тшпаісідісив «4005» 21 спасти витшслеооас сети я вбсаносту возпосєювя акт ооо да шодо ск Оса спосталани бошавиВоЮ шлатеиио зако мінІву ях «2105 22 «2115 193 «212» БІЛОК «213» зігеріотусез Тшпаісідіси5 «4005» 22

Ві бБію ТВ Ак Буд дат М Мді їв Зах бод У ДАак М Бут. ші У 35 Я 5

«2105» 23 «2115 549 «212» ДНК

«213» зеріотусез Тшпаісідісив «4005» 23 о пиві сова вавно Споціооаа песо воним: япілхиинаини спилкцВоВОс пи «210» 24 «2115 182

«212» БІЛОК «213» зеріотусез Тшпаісідісив «400» 24

«2105 25 «2115 768 «212» ДНК «213» зеріотусез Тшпаісідісив «4005 25 аа сшекситиях пис вир од всдеі порами КЕсрашмосмат ТЕО зносом смола пооасокоєлеІ сасоудтпя трудовою ть пет 1 спав бом у Тут ЕЛ ОФИС КИТИ За прукшадссце спонук ляюу сито свеоя оп шепимУют сммІмоми фшлизорУєит БЕ «2105» 26 «2115 255 «212» БІЛОК «213» зеріотусез Тшпаісідісив «4005» 26

Може ТьКІр о Їнюл буку БЖ кр» Бо Аза ж бик пе бек ех Аа Ева по

Пезх бою бан; іш дл Мет бик ів Жах бід ко Мід реа дич лув о Ущх джа бійж Тах ем дв о тьУу вів їм вка дій ів Чаї до йзю спе Ага ті кт ТМ лів г» біб Бео дат Аза ла Маю АДЯЮ ОЛЬ Їм ів Ах

Св Мем обер обі йівобявм ко Ай Люби двх сім бу їн) Еко бах -2105» 27 «2115 505 «212» ДНК «213» зеріотусез Тшпаісідісив «4005» 27

-2105» 28 -2115 168

«212» БІЛОК

«213» зеріотусез Тшпаісідісив

«400» 28 вто Дам вк ВЕ ОМНІ Тв На ніж Мрж о веє АХ ОА шу Баш тло Ки

«-210» 29 «2115 20 «212» ДНК 213» Штучна послідовність «2020» «223» праймер «400» 29 -2105» 30 «2115 20 «212» ДНК 213» Штучна послідовність «2020» «223» праймер «400» 30

ІМ спи Ж «-2105 31 «2115 20 «212» ДНК 213» Штучна послідовність «2020» «223» праймер «4005 31 «-2105 32 «2115 20 «212» ДНК 213» Штучна послідовність «2020» «223» праймер «4005» 32

«210» ЗЗ3 «2115 20 -212» ДНК 213» Штучна послідовність «2020» «223» праймер «400» ЗЗ3 «-210» 34 «2115 20 -212» ДНК 213» Штучна послідовність «2020» «223» праймер «400» 34 «210» 35 «2115 20 -212» ДНК 213» Штучна послідовність

Зо «2020» «223» праймер «400» 35 «210» 36 «2115 20 «212» ДНК 213» Штучна послідовність «2020» «223» праймер «400» 36 -2105» 37 «2115 20 -212» ДНК 213» Штучна послідовність «2020» «223» праймер «400» 37

-2105» 38 «2115 20 «212» ДНК 213» Штучна послідовність «2020» «223» праймер

«400» 38 «2105» 39 «2115 20 «212» ДНК 213» Штучна послідовність «2020» «223» праймер «400» 39 пористий я хто Ішораа що «-210» 40 «2115 20 «212» ДНК 213» Штучна послідовність «2020» «223» праймер «400» 40 «2105» 41 «2115 20 «212» ДНК 213» Штучна послідовність «2020» «223» праймер «400» 41 пи «-2105 42 «2115 20 «212» ДНК 213» Штучна послідовність «2020» «223» праймер «400» 42 во ВОК шо онуВ мо

«-210» 43 «2115 20 -212» ДНК 213» Штучна послідовність «2020» «223» праймер «400» 43 «-210» 44 «2115 20 -212» ДНК 213» Штучна послідовність «2020» «223» праймер «400» 44 о ОН у тапяесю «-2105» 45 «2115 20 -212» ДНК 213» Штучна послідовність

Зо «2020» «223» праймер «400» 45 «-210» 46 «2115 20 «212» ДНК 213» Штучна послідовність «2020» «223» праймер «400» 46 «-2105» 47 «2115 20 -212» ДНК 213» Штучна послідовність «2020» «223» праймер «400» 47

«2105» 48 «2115 20 -212» ДНК 213» Штучна послідовність «220» «223» праймер

«400» 48 «2105» 49 «2115 20 «212» ДНК 213» Штучна послідовність «220» «223» праймер «400» 49 прик УВ іль лица кА 2105 50 «2115 20 «212» ДНК 213» Штучна послідовність «220» «223» праймер

Claims (2)

4005» 50 ФОРМУЛА ВИНАХОДУ

1. Штам бгеріотусевз шпдісійїсиз для продукування ендурацидину, який має депозитарний номер АТСС РТА-122342.

2. Спосіб одержання ендурацидину, який включає: культивування штаму сігеріотусез шпдісіаїсив за п. 1 у культуральному середовищі в умовах, достатніх для одержання ендурацидину, та виділення ендурацидину з культурального середовища. Зв ПЕВНЕ ОКА КВ деко Денне нвіеневння: ЖК пон Денне нн нен вне во Ворони фе ен, ен овнх фіг. 1