CN111748025B - 一种褐鲳鲉抗菌肽leap2及其应用 - Google Patents
一种褐鲳鲉抗菌肽leap2及其应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN111748025B CN111748025B CN201910231875.5A CN201910231875A CN111748025B CN 111748025 B CN111748025 B CN 111748025B CN 201910231875 A CN201910231875 A CN 201910231875A CN 111748025 B CN111748025 B CN 111748025B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- leap2
- antibacterial
- sebastes
- antibacterial peptide
- peptide
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 239000003910 polypeptide antibiotic agent Substances 0.000 title claims abstract description 63
- 241001481818 Sebastes Species 0.000 title claims abstract description 29
- 101000972357 Homo sapiens Liver-expressed antimicrobial peptide 2 Proteins 0.000 title abstract description 6
- 102100022685 Liver-expressed antimicrobial peptide 2 Human genes 0.000 title abstract description 6
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 claims abstract description 6
- 229940124350 antibacterial drug Drugs 0.000 claims abstract description 5
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims abstract 2
- 108700042778 Antimicrobial Peptides Proteins 0.000 claims description 23
- 102000044503 Antimicrobial Peptides Human genes 0.000 claims description 23
- 241000630524 Taractes rubescens Species 0.000 claims description 19
- 239000003674 animal food additive Substances 0.000 claims description 6
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 claims description 4
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 claims description 4
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 claims description 3
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 abstract description 22
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 abstract description 15
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 abstract description 14
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 abstract description 13
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 abstract description 10
- 241000589614 Pseudomonas stutzeri Species 0.000 abstract description 9
- 201000007336 Cryptococcosis Diseases 0.000 abstract description 8
- 241000221204 Cryptococcus neoformans Species 0.000 abstract description 8
- 241000132114 Sebastiscus marmoratus Species 0.000 abstract description 6
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 abstract description 6
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 abstract description 6
- 241000186226 Corynebacterium glutamicum Species 0.000 abstract description 5
- 241000233866 Fungi Species 0.000 abstract description 5
- 241000191967 Staphylococcus aureus Species 0.000 abstract description 5
- 230000003385 bacteriostatic effect Effects 0.000 abstract description 4
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 abstract description 3
- 244000052616 bacterial pathogen Species 0.000 abstract description 3
- 241000192125 Firmicutes Species 0.000 abstract description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 16
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 14
- 241000347488 Silurus Species 0.000 description 11
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 10
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 10
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 9
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 description 9
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 9
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 8
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 8
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 8
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 8
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 8
- 238000000034 method Methods 0.000 description 8
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 7
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 7
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 6
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 6
- 241001233037 catfish Species 0.000 description 6
- 239000006143 cell culture medium Substances 0.000 description 6
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 6
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 6
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 6
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 5
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 5
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 5
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 5
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 5
- 239000000047 product Substances 0.000 description 5
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 5
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 5
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 4
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 4
- 210000004738 parenchymal cell Anatomy 0.000 description 4
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 4
- 241000193755 Bacillus cereus Species 0.000 description 3
- 244000063299 Bacillus subtilis Species 0.000 description 3
- 235000014469 Bacillus subtilis Nutrition 0.000 description 3
- 241000222122 Candida albicans Species 0.000 description 3
- 206010059866 Drug resistance Diseases 0.000 description 3
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108700026244 Open Reading Frames Proteins 0.000 description 3
- 241000589517 Pseudomonas aeruginosa Species 0.000 description 3
- 241000589540 Pseudomonas fluorescens Species 0.000 description 3
- 241000607762 Shigella flexneri Species 0.000 description 3
- 241000191963 Staphylococcus epidermidis Species 0.000 description 3
- 241000607272 Vibrio parahaemolyticus Species 0.000 description 3
- 230000009471 action Effects 0.000 description 3
- 238000000246 agarose gel electrophoresis Methods 0.000 description 3
- 229940095731 candida albicans Drugs 0.000 description 3
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 3
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 3
- 230000036541 health Effects 0.000 description 3
- 210000005229 liver cell Anatomy 0.000 description 3
- 244000144972 livestock Species 0.000 description 3
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 3
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 3
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 3
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 3
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 3
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 3
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 3
- 241000607528 Aeromonas hydrophila Species 0.000 description 2
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- 241001600157 Portunus Species 0.000 description 2
- 241000132116 Sebastiscus Species 0.000 description 2
- 241000607598 Vibrio Species 0.000 description 2
- 241000607594 Vibrio alginolyticus Species 0.000 description 2
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 2
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 2
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 2
- 230000000845 anti-microbial effect Effects 0.000 description 2
- 238000009360 aquaculture Methods 0.000 description 2
- 244000144974 aquaculture Species 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 2
- 125000002091 cationic group Chemical group 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 2
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 2
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 2
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- 239000005457 ice water Substances 0.000 description 2
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 2
- 210000005228 liver tissue Anatomy 0.000 description 2
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 2
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 2
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 2
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 2
- 239000008055 phosphate buffer solution Substances 0.000 description 2
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 2
- 244000144977 poultry Species 0.000 description 2
- 239000013535 sea water Substances 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 241000607534 Aeromonas Species 0.000 description 1
- GSHKMNKPMLXSQW-KBIXCLLPSA-N Ala-Ile-Gln Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)N)C(=O)O)NC(=O)[C@H](C)N GSHKMNKPMLXSQW-KBIXCLLPSA-N 0.000 description 1
- AUFACLFHBAGZEN-ZLUOBGJFSA-N Ala-Ser-Cys Chemical compound N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O AUFACLFHBAGZEN-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 1
- YFBGNGASPGRWEM-DCAQKATOSA-N Arg-Asp-His Chemical compound C1=C(NC=N1)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)N YFBGNGASPGRWEM-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- HYQYLOSCICEYTR-YUMQZZPRSA-N Asn-Gly-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O HYQYLOSCICEYTR-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- 108010077805 Bacterial Proteins Proteins 0.000 description 1
- 238000009010 Bradford assay Methods 0.000 description 1
- 210000003771 C cell Anatomy 0.000 description 1
- 101800003223 Cecropin-A Proteins 0.000 description 1
- 108010077544 Chromatin Proteins 0.000 description 1
- 241001466864 Clarias fuscus Species 0.000 description 1
- 241001337994 Cryptococcus <scale insect> Species 0.000 description 1
- UKVGHFORADMBEN-GUBZILKMSA-N Cys-Arg-Arg Chemical compound [H]N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O UKVGHFORADMBEN-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- 241000255581 Drosophila <fruit fly, genus> Species 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000747105 Fuscoporia Species 0.000 description 1
- BSWLQVGEVFYGIM-ZPFDUUQYSA-N Ile-Gln-Arg Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)N)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)O)N BSWLQVGEVFYGIM-ZPFDUUQYSA-N 0.000 description 1
- 108700022013 Insecta cecropin B Proteins 0.000 description 1
- 108010065920 Insulin Lispro Proteins 0.000 description 1
- LZDNBBYBDGBADK-UHFFFAOYSA-N L-valyl-L-tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(NC(=O)C(N)C(C)C)C(O)=O)=CNC2=C1 LZDNBBYBDGBADK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WMTOVWLLDGQGCV-GUBZILKMSA-N Leu-Glu-Cys Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)N WMTOVWLLDGQGCV-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- ORWTWZXGDBYVCP-BJDJZHNGSA-N Leu-Ile-Cys Chemical compound SC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)CC)NC(=O)[C@@H](N)CC(C)C ORWTWZXGDBYVCP-BJDJZHNGSA-N 0.000 description 1
- JDBQSGMJBMPNFT-AVGNSLFASA-N Leu-Pro-Val Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O JDBQSGMJBMPNFT-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- 108010079364 N-glycylalanine Proteins 0.000 description 1
- BQVUABVGYYSDCJ-UHFFFAOYSA-N Nalpha-L-Leucyl-L-tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(NC(=O)C(N)CC(C)C)C(O)=O)=CNC2=C1 BQVUABVGYYSDCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 1
- 238000012408 PCR amplification Methods 0.000 description 1
- 108010019160 Pancreatin Proteins 0.000 description 1
- WOIFYRZPIORBRY-AVGNSLFASA-N Pro-Lys-Val Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O WOIFYRZPIORBRY-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- FUOGXAQMNJMBFG-WPRPVWTQSA-N Pro-Val-Gly Chemical compound OC(=O)CNC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 FUOGXAQMNJMBFG-WPRPVWTQSA-N 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- DLPXTCTVNDTYGJ-JBDRJPRFSA-N Ser-Ile-Cys Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O DLPXTCTVNDTYGJ-JBDRJPRFSA-N 0.000 description 1
- VMLONWHIORGALA-SRVKXCTJSA-N Ser-Leu-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C([O-])=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H]([NH3+])CO VMLONWHIORGALA-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- IFLVBVIYADZIQO-DCAQKATOSA-N Ser-Met-Lys Chemical compound CSCC[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CO)N IFLVBVIYADZIQO-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- FLONGDPORFIVQW-XGEHTFHBSA-N Ser-Pro-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)[C@@H](N)CO FLONGDPORFIVQW-XGEHTFHBSA-N 0.000 description 1
- 108020005038 Terminator Codon Proteins 0.000 description 1
- TZJSEJOXAIWOST-RHYQMDGZSA-N Thr-Lys-Arg Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)N TZJSEJOXAIWOST-RHYQMDGZSA-N 0.000 description 1
- KKPOGALELPLJTL-MEYUZBJRSA-N Thr-Lys-Tyr Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 KKPOGALELPLJTL-MEYUZBJRSA-N 0.000 description 1
- XIHGJKFSIDTDKV-LYARXQMPSA-N Thr-Phe-Trp Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(O)=O XIHGJKFSIDTDKV-LYARXQMPSA-N 0.000 description 1
- CDPXXGFRDZVVGF-OYDLWJJNSA-N Trp-Arg-Trp Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(O)=O CDPXXGFRDZVVGF-OYDLWJJNSA-N 0.000 description 1
- YODDULVCGFQRFZ-ZKWXMUAHSA-N Val-Asp-Ser Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O YODDULVCGFQRFZ-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 230000002353 algacidal effect Effects 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000000137 annealing Methods 0.000 description 1
- 239000004599 antimicrobial Substances 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 230000005907 cancer growth Effects 0.000 description 1
- HCQPHKMLKXOJSR-IRCPFGJUSA-N cecropin-a Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@H](C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)NCC(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(N)=O)[C@@H](C)CC)C(C)C)[C@@H](C)CC)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@@H](N)CCCCN)C1=CC=CC=C1 HCQPHKMLKXOJSR-IRCPFGJUSA-N 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 description 1
- 210000003483 chromatin Anatomy 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 1
- 108010016616 cysteinylglycine Proteins 0.000 description 1
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 description 1
- 230000007123 defense Effects 0.000 description 1
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 1
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 1
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- VPZXBVLAVMBEQI-UHFFFAOYSA-N glycyl-DL-alpha-alanine Natural products OC(=O)C(C)NC(=O)CN VPZXBVLAVMBEQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000003494 hepatocyte Anatomy 0.000 description 1
- 108010025306 histidylleucine Proteins 0.000 description 1
- 230000036737 immune function Effects 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 230000015788 innate immune response Effects 0.000 description 1
- 230000002147 killing effect Effects 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- 230000031700 light absorption Effects 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 238000009630 liquid culture Methods 0.000 description 1
- 231100000053 low toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 238000001819 mass spectrum Methods 0.000 description 1
- 210000003470 mitochondria Anatomy 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 231100001083 no cytotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical group 0.000 description 1
- 230000010355 oscillation Effects 0.000 description 1
- 229940055695 pancreatin Drugs 0.000 description 1
- 244000045947 parasite Species 0.000 description 1
- 238000009304 pastoral farming Methods 0.000 description 1
- 238000012257 pre-denaturation Methods 0.000 description 1
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 1
- 230000035939 shock Effects 0.000 description 1
- 239000002689 soil Substances 0.000 description 1
- 210000001082 somatic cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 1
- 229910021642 ultra pure water Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000012498 ultrapure water Substances 0.000 description 1
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
- C07K14/461—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from fish
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23B—PRESERVING, e.g. BY CANNING, MEAT, FISH, EGGS, FRUIT, VEGETABLES, EDIBLE SEEDS; CHEMICAL RIPENING OF FRUIT OR VEGETABLES; THE PRESERVED, RIPENED, OR CANNED PRODUCTS
- A23B4/00—General methods for preserving meat, sausages, fish or fish products
- A23B4/14—Preserving with chemicals not covered by groups A23B4/02 or A23B4/12
- A23B4/18—Preserving with chemicals not covered by groups A23B4/02 or A23B4/12 in the form of liquids or solids
- A23B4/20—Organic compounds; Microorganisms; Enzymes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23K—FODDER
- A23K20/00—Accessory food factors for animal feeding-stuffs
- A23K20/10—Organic substances
- A23K20/142—Amino acids; Derivatives thereof
- A23K20/147—Polymeric derivatives, e.g. peptides or proteins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L3/00—Preservation of foods or foodstuffs, in general, e.g. pasteurising, sterilising, specially adapted for foods or foodstuffs
- A23L3/34—Preservation of foods or foodstuffs, in general, e.g. pasteurising, sterilising, specially adapted for foods or foodstuffs by treatment with chemicals
- A23L3/3454—Preservation of foods or foodstuffs, in general, e.g. pasteurising, sterilising, specially adapted for foods or foodstuffs by treatment with chemicals in the form of liquids or solids
- A23L3/3463—Organic compounds; Microorganisms; Enzymes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Oncology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Animal Husbandry (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Nutrition Science (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
本发明公开了一种褐鲳鲉抗菌肽LEAP2及其应用，其氨基酸序列如SEQ ID NO：01所示。本发明褐鲳鲉抗菌肽sm‑LEAP2对多种革兰氏阴性菌、革兰氏阳性菌及真菌有显著的抗菌活性。其中，对谷氨酸棒杆菌的最小抑菌浓度为1.56‑3.125μM；对重要致病菌金黄色葡萄球菌最小抑菌浓度为1.56‑3.125μM；对施氏假单胞菌最小抑菌浓度为3.125‑6.25μM；对新型隐球菌的最小抑菌浓度为3.125‑6.25μM。与许多已知的海洋动物抗菌肽比较，sm‑LEAP2抗菌效果好、杀菌速率快，显示出极大的应用价值，在制备防霉防腐剂、水生抗菌药物方面有良好的应用前景。
Description
技术领域
本发明属于海洋分子生物学技术领域，具体涉及一种褐鲳鲉抗菌肽LEAP2及其应用。
背景技术
自抗生素在医疗领域普及使用以来，人类疾病治愈率上升，为保障人类健康做出了极大的贡献；此外，抗生素的应用在一定程度上提高了畜牧和水产养殖业的经济效益及饲料的利用率，保障了社会迅速发展增长的食物需求。在中国，每年有约40％的抗生素投用于畜牧养殖业。近年来抗生素残留物污染养殖土壤、水体，加速了抗生素耐药性菌的产生，耐药性菌引起的多种疾病难以用现有抗生素治愈，给人类健康安全和带来了严重威胁。此外，残留于畜禽、水产品中的抗生素通过食物链进入人体中，严重威胁人类健康。因此，寻求高效、绿色的抗生素替代品成为亟待解决的重要课题。在众多的抗菌活性物质中，抗菌肽以其特有的生物安全性、广谱抗菌活性、不易产生耐药性等特点，成为抗生素的理想替代物。
抗菌肽(antimicrobial peptide，AMP)作为先天性免疫的重要组成部分，广泛存在于生物体内，具有较为广谱的抗菌活性，是机体抵抗病原菌感染的重要防线。天然抗菌肽通常由12-100个氨基酸组成，具有较好的热稳定性和水溶性。自1972年瑞典科学家Boman等在果蝇中发现抗菌肽及其免疫功能后，随之于1981年成功分离得到天蚕素A和B。迄今为止，约有2800种抗菌肽被成功分离和研究。抗菌肽能够通过多种不同作用机制发挥其活性功能，主要分为膜破坏模型及非膜破坏模型：膜破坏模型主要指抗菌肽直接以其二级结构(如α螺旋等)直接破坏细胞质膜结构，导致微生物膜破裂，胞质内容物泄露，最终导致微生物死亡；非膜破坏模型主要指抗菌肽进入微生物胞内后，攻击微生物线粒体、抑制细菌蛋白质合成及细胞壁形成及与微生物染色质结合发挥其杀菌功能等。近年来，研究者们发现一些抗菌肽甚至具有抑杀病毒、寄生虫、抑制癌细胞生长等能力，且对高等动物的正常体细胞无明显细胞毒性，不易使受试菌产生耐药性。在越来越多耐药性微生物被发现的今天，抗菌肽以其通过物理吸附、破坏微生物膜的作用机理不易使细菌产生耐药性等特征，在临床医药等领域具有良好的应用前景。随着对未知抗菌肽的深入研究和对已知抗菌肽的进一步改造，更多新型、高效、有针对性的低毒抗菌肽及其制品必将会在畜禽和水产养殖领域广泛应用。
发明内容
本发明的目的在于提供一种褐鲳鲉抗菌肽LEAP2。
本发明的另一目的在于提供上述褐鲳鲇抗菌肽LEAP2的应用。
本发明的技术方案如下：
一种褐鲳鲇抗菌肽sm-LEAP2，其氨基酸序列如SEQ ID NO：01所示，其分子式为C409H670N118O106S7，分子量为9160.97道尔顿，由79个氨基酸组成，来源于褐鲳鲇肝脏组织，具有抗菌功能的多肽。该抗菌肽的成熟肽预测分子量为6364.50道尔顿，所含54个氨基酸中包含10个带正电荷的氨基酸残基和2个带负电荷的氨基酸残基，根据氨基酸残基电荷预测该抗菌肽等电点为10.22，在pH等于7.0时带有3个正电荷。该抗菌肽的亲水性平均系数为-0.472，具有亲水的水溶性，是一种带有正电荷的阳离子多肽。
采用固相化学合成方法即可获得纯度达95％以上的上述褐鲳鲇抗菌肽sm-LEAP2。
在本发明的一个优选实施方案中，其开放阅读框的核苷酸序列如SEQ ID NO：02所示。
本发明的另一技术方案如下：
一种水生生物抗菌药物，其有效成分包括上述褐鲳鲉抗菌肽sm-LEAP2。
在本发明的一个优选实施方案中，其有效成分为上述褐鲳鲇抗菌肽sm-LEAP2。
上述褐鲳鲇抗菌肽sm-LEAP2在制备水生生物抗菌药物中的应用。
本发明的再一技术方案如下：
一种哺乳动物饲料添加剂，其有效成分包括上述褐鲳鲇抗菌肽sm-LEAP2。
在本发明的一个优选实施方案中，其有效成分为上述褐鲳鲉抗菌肽sm-LEAP2。
上述褐鲳鲉抗菌肽sm-LEAP2在制备哺乳动物饲料添加剂中的应用。
本发明的又一技术方案如下：
一种防霉防腐剂，其有效成分包括上述褐鲳鲇抗菌肽sm-LEAP2。
上述褐鲳鲉抗菌肽sm-LEAP2在制备防霉防腐剂中的应用。
本发明的有益效果是：
1、本发明褐鲳鲉抗菌肽sm-LEAP2对多种革兰氏阴性菌、革兰氏阳性菌及真菌有显著的抗菌活性。其中，对谷氨酸棒杆菌的最小抑菌浓度为1.56-3.125μM；对重要致病菌金黄色葡萄球菌最小抑菌浓度为1.56-3.125μM；对施氏假单胞菌最小抑菌浓度为3.125-6.25μM；对新型隐球菌的最小抑菌浓度为3.125-6.25μM。与许多已知的海洋动物抗菌肽比较，sm-LEAP2抗菌效果好、杀菌速率快，显示出极大的应用价值，在制备防霉防腐剂、水生生物抗菌药物方面有良好的应用前景。
2、本发明的褐鲳鲇抗菌肽sm-LEAP2对小鼠肝实质细胞AML12无细胞毒性；在较低浓度时(接近体外抗菌效应浓度)对人正常肝细胞L02具有一定的细胞毒性，预示其在一定浓度等条件下可安全用于药物治疗或者作为饲料添加剂使用。
附图说明
图1为褐鲳鲇抗菌肽sm-LEAP2对施氏假单胞菌和新型隐球菌的杀菌动力学曲线图。在图1中，横坐标为时间(min)，纵坐标为存活菌落数相对于起始菌落数的百分比。
图2为MTS法检测褐鲳鲉抗菌肽sm-LEAP2对非癌细胞系小鼠肝实质细胞AML12和人正常肝细胞L02增殖影响的实验图。其中，星号表示显著抑制细胞生长的浓度(*：p＜0.05)。
具体实施方式
以下通过具体实施方式对本发明的技术方案进行进一步的说明和描述。
下述实施例涉及的菌种有：蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、谷氨酸棒杆菌(Corynebacterium glutamicum)、表皮葡萄球菌(Staphylococcus epidermidis)、铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)、荧光假单胞菌(Pseudomonas fluorescens)、施氏假单胞菌(Pseudomonas stutzeri)、嗜水气单胞菌(Aeromonashydrophila)、大肠埃希氏菌(Escherichia coli)、弗氏志贺氏菌(Shigellaflexneri)、副溶血弧菌(Vibrioparahaemolyticus)、解藻弧菌(Vibrio alginolyticus)、白假丝酵母(Candidaalbicans)、新型隐球菌(Cryptococcus neoformans)等，均购自于中国科学院微生物研究所菌种保藏中心。
实施例1褐鲳鲉抗菌肽sm-LEAP2核苷酸序列扩增
所述褐鲳鲉抗菌肽sm-LEAP2开放阅读框序列为：
通过对褐鲳鲉肝脏转录组测序，获得了褐鲳鲇抗菌肽sm-LEAP2基因全长cDNA序列。褐鲳鲉抗菌肽sm-LEAP2基因的开放阅读框为240bp(含终止密码子TGA)。
表1 PCR扩增引物
根据所获得的sm-LEAP2基因的全长cDNA序列，设计基因特异性引物(表1)，通过PCR技术对其序列进行进一步验证。以第一对引物为例，PCR反应体系如下：
混合均匀，进行PCR反应。反应程序如下所述：
1)95℃预变性5min；
2)95℃变性30s，55℃退火30s，72℃延伸1min，30个循环；
3)72℃延伸5min；
4)4℃停止。
将PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳分离，切下含有目的片段的琼脂糖凝胶，放入1.5mL离心管中。使用Wizard SV Gel and PCR Clean-Up System回收试剂盒回收目的DNA片段。具体步骤如下：
(1)称量凝胶重量，按照每100mg琼脂糖凝胶对应100μL溶液BD的比例，向离心管中加入溶液BD；
(2)60℃水浴10min，直至凝胶完全融化；
(3)将溶液置于DNA纯化柱中，静置1min；16 000g离心1min，弃溶液；
(4)将纯化柱置于原收集管中，加入700μL Membrane Wash Solution，16 000g离心1min，弃滤液；
(5)重复1次步骤(4)；
(6)将纯化柱置于原收集管中，16 000g再次离心1min，彻底去除纯化柱中残留的液体；
(7)将离心柱至于新的1.5mL离心管中，向纯化柱的中央处滴加30～50μLNuclease-Free Water；16 000g离心1min，管底部即为目的DNA片段，置于-20℃保存。
(8)取部分回收的DNA样品进行1.5％琼脂糖凝胶电泳检测，用凝胶成像系统对电泳结果拍照。
PCR产物与载体连接并转化
(1)使用pMD19-T Vector试剂盒，在离心管中配置如下反应体系：
(2)16℃反应30min；
(3)全量加入到感受态细胞中，在冰水中放置30min；
(4)42℃热激45s，然后迅速放置在冰水中1min；
(5)加入890μLLB液体培养基，37℃、200rpm振荡培养2h，然后4000rpm离心10min，从底部吸取100μL菌液，在含Amp的固体培养基上培养过夜(14h)；
(6)在平板培养基中挑选5个白色菌落加入5mL含Amp的LB液体培养基中，20℃、200rpm，培养时间约3.5h。
PCR法快速鉴定阳性克隆
利用通用引物M13F-47和M13R-48，对克隆的sm-LEAP2cDNA序列进行验证。
(1)使用2×HS Mix试剂构建PCR反应体系，菌落PCR体系如下：
(2)混合均匀后，按以下程序进行PCR反应：
94℃、3min；
94℃、30sec，55-68℃、30sec，72℃、1min，30个循环；
72℃、10min；
4℃停止反应。
(3)吸取5μL扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳检测，用凝胶成像系统在紫外灯下观察电泳结果，并拍照。
核酸序列测定与分析
将鉴定含有重组阳性克隆的大肠杆菌按照15％的比例加入灭菌甘油进行保种，样品送至生物公司进行核苷酸序列测定。利用生物信息学软件对所测的序列进行拼接和比对。
综上分析，所述sm-LEAP2基因来源于褐鲳鲇肝脏，其氨基酸序列为：
所述褐鲳鲇抗菌肽sm-LEAP2的氨基酸分子式为C409H670N118O106S7，分子量为9160.97道尔顿。抗菌肽sm-LEAP2由79个氨基酸组成，来源于褐鲳鲇肝脏组织，具有抗菌功能的多肽。其成熟肽54个氨基酸中包含10个带正电荷的氨基酸残基和2个带负电荷的氨基酸残基，根据氨基酸残基电荷预测该抗菌肽等电点为10.22，在pH等于7.0时带有3个正电荷。该抗菌肽的亲水性平均系数为-0.472，具有亲水水溶性，是一种带有正电荷的阳离子多肽。
采用固相化学合成方法即可获得纯度达95％以上的褐鲳鲇抗菌肽sm-LEAP2。
本实施例中褐鲳鲉抗菌肽sm-LEAP2委托上海辉孚实业有限公司通过固相化学合成方法获得，并提供多肽分子量、HPLC、质谱等鉴定信息。
实施例2褐鲳鲉抗菌肽sm-LEAP2最小抑菌浓度(MIC：minimum inhibitionconcentration)和最小杀菌浓度(MBC：minimum bactericidal concentration)的测定
(a)将保种的蜡状芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、谷氨酸棒杆菌、表皮葡萄球菌、铜绿假单胞菌、荧光假单胞菌、施氏假单胞菌、嗜水气单胞菌、大肠埃希氏菌、弗氏志贺氏菌等在营养肉汤平板上划线，副溶血弧菌、解藻弧菌在2216E海水肉汤平板上划线，在相应培养最适温度倒置培养12-16h；白假丝酵母、新型隐球菌在YPG平板上划线，于28℃培养3-7天。从各平板上挑取菌落接种于相应培养基斜面上，细菌继续培养10-16h，真菌继续培养1-3d后，用10mM磷酸盐缓冲液(pH7.4)冲洗斜面，细菌用MH液体培养基：10mM磷酸缓冲液＝2∶3的混合培养基稀释至OD600＝0.003；弧菌用海水培养基调整稀释至OD600＝0.0006；酵母用YPD液体培养基：10mM磷酸缓冲液＝2：3的混合培养基调整稀释至OD600＝0.00067。准备好的菌液须在20min内使用。
(b)将抗菌肽sm-LEAP2经0.22μm滤膜过滤后，利用Bradford法测定蛋白浓度，倍比稀释蛋白浓度为1.56、3.12、6.25、12.5、25、50μM，4℃保存备用。
(c)在96孔细胞培养板上进行最小抑菌浓度检测实验，每种被测菌按照以下操作设置空白对照组、阴性对照组和待测样品实验组，每组设置3个平行样：
阴性对照组：加50μL灭菌超纯水和50μL菌悬液；
空白对照组：加50μL待测蛋白样品和50μL磷酸盐缓冲液；
样品实验组：加50μL待测蛋白样品和50μL菌悬液。
对于细菌，将培养板置于各菌种相对应的最适培养温度下，培养18-24h，观察结果；
对于真菌，将培养板置于28℃培养1-2d，观察结果。
将96孔细胞培养板待测实验组中肉眼观察未有菌生长的孔中培养液混匀后，吸取2μL接种于相应固体培养基平板上，置于各最适生长温度继续培养24-48h，观察MBC(minimum bactericidal concentration)结果。
褐鲳鲇抗菌肽sm-LEAP2MIC、MBC抗菌谱如表2所示：
表2 褐鲳鲉抗菌肽sm-LEAP2抗菌活性测定
注：MIC：最小抑菌浓度(μM)，肉眼未见菌体生长的最低蛋白浓度。
MBC：最小杀菌浓度(μM)，能够杀死99.9％菌体的最低蛋白浓度。
实施例3褐鲳鲉抗菌肽sm-LEAP2杀菌动力学曲线
本实施例选取一种革兰氏阴性菌(施氏假单胞菌)及一种真菌(新型隐球菌)作为被测菌进行褐鲳鲇抗菌肽sm-LEAP2杀菌动力学曲线的测定。
(a)将保种的施氏假单胞菌涂布于营养肉汤平板上，将保种的新型隐球菌涂布于YPD上，在最适培养温度倒置培养。
(b)从平板上挑取菌落接种于斜面上继续培养，用10mM磷酸盐缓冲液(pH 7.4)冲洗斜面，用MH液体培养基(或YPD液体培养基)：10mM磷酸缓冲液＝2∶3的混合培养基调整菌悬液浓度至OD600＝3.3×104cfu/mL。
(c)将sm-LEAP2蛋白经过0.22μm滤膜过滤后，稀释蛋白至所需实验浓度，置于冰上待用。
(d)在96孔细胞培养板上，设置阳性对照组、待测实验组，每组设置三个平行样：
阳性对照组：加100μL菌悬液和100μL 10mM磷酸缓冲液。
待测实验组：加100μL菌悬液和100μL待测蛋白样品。
将96孔细胞培养板置于28℃培养箱中继续培养，于不同时间点取适量培养液稀释后涂布营养肉汤平板或YPD平板，平板于菌种最适温度继续培养至单克隆生长，计数每个平板上克隆数目，统计分析并作杀菌动力学曲线。如图1所示，结果表明：2倍MBC浓度可在作用2h内杀死50％以上的新型隐球菌，在9h后杀菌指数达到100％；2倍MBC浓度的sm-LEAP2与施氏假单胞菌作用5h后，杀菌指数达到100％。
实施例4褐鲳鲉抗菌肽sm-LEAP2对动物细胞系增殖的影响
本实施例选取人正常肝细胞L02、小鼠肝脏实质细胞AML12作为受试细胞株，进行褐鲳鲇抗菌肽sm-LEAP2对不同细胞增殖影响的检测。
(a)将AML12细胞、L02细胞在对应细胞培养基中培养至细胞接合度80-90％后，用含EDTA的胰酶消化并用相应细胞培养基重悬，以相应细胞培养基调整细胞密度，在96孔细胞培养板中每孔接种2×104个细胞，置于37℃细胞培养箱在5％的CO2条件下过夜培养。
(b)待每孔细胞生长到接合度约60-70％时，吸取细胞培养基，用相应细胞培养基倍比稀释sm-LEAP2蛋白至0、5、10、20、40μM，以含10μM牛血清蛋白(BSA)的正常细胞培养基为对照，每组设置3个平行样。
将96孔细胞培养板放入37℃、5％的CO2条件下继续培养48h后，每孔加入20μLMTS试剂，放入培养环境反应2h后，用酶标仪测定在波长为490nm时的吸光值。如图2所示，结果表明：褐鲳鲇抗菌肽sm-LEAP2对小鼠肝脏实质细胞AML12无抑制其生长的作用；在低浓度时(5μM)时可显著抑制人正常肝细胞L02的生长。
以上所述，仅为本发明的较佳实施例而已，故不能依此限定本发明实施的范围，即依本发明专利范围及说明书内容所作的等效变化与修饰，皆应仍属本发明涵盖的范围内。
序列表
<110> 自然资源部第三海洋研究所
<120> 一种褐鲳鲉抗菌肽LEAP2及其应用
<160> 6
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 79
<212> PRT
<213> 褐鲳鲉(Sebastiscus marmoratus)
<400> 1
Met Arg Thr Leu Arg Glu Lys Ile Ile Val Leu Ser Val Leu Val Thr
1 5 10 15
Leu Ile Cys Ala Ile Gln Val Asp Ser Leu Pro Val Pro Lys Val Trp
20 25 30
Asn Gly Leu Ile Gln Arg Thr Lys Arg Ser Leu Leu Trp Arg Trp Asn
35 40 45
Ser Met Lys Pro Val Gly Ala Ser Cys Arg Asp His Leu Glu Cys Gly
50 55 60
Thr Lys Tyr Cys Arg Arg Ser Ile Cys Thr Phe Trp Ser Pro Thr
65 70 75
<210> 2
<211> 240
<212> DNA
<213> 褐鲳鲉(Sebastiscus marmoratus)
<400> 2
atgaggactc ttcgggaaaa aatcattgtt ctctcagttc ttgtgactct gatctgtgcc 60
attcaggttg attcactgcc cgtacctaaa gtctggaatg gtctgatcca gcggaccaaa 120
cggtctctcc tgtggcgttg gaacagcatg aagcccgtgg gtgccagctg cagggatcac 180
ttggagtgtg gcacaaaata ctgcaggaga agtatctgta ccttctggag ccccacctga 240
<210> 3
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artifical Sequence)
<400> 3
gtcaacgggt aactcctccc 20
<210> 4
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artifical Sequence)
<400> 4
gatgaagtgc cagcaggtct 20
<210> 5
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artifical Sequence)
<400> 5
gccaaacctc agcctcagtc 20
<210> 6
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artifical Sequence)
<400> 6
tttcagacgg gtcgctttgg 20
Claims (9)
1.一种褐鲳鲉抗菌肽sm-LEAP2，其特征在于：其氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。
2.一种水生生物抗菌药物，其特征在于：其有效成分包括权利要求1所述的褐鲳鲉抗菌肽sm-LEAP2。
3.如权利要求2所述的一种水生生物抗菌药物，其特征在于：其有效成分为权利要求1所述的褐鲳鲉抗菌肽sm-LEAP2。
4.权利要求1所述的褐鲳鲉抗菌肽sm-LEAP2在制备水生生物抗菌药物中的应用。
5.一种哺乳动物饲料添加剂，其特征在于：其有效成分包括权利要求1所述的褐鲳鲉抗菌肽sm-LEAP2。
6.如权利要求5所述的一种哺乳动物饲料添加剂，其特征在于：其有效成分为权利要求1所述的褐鲳鲉抗菌肽sm-LEAP2。
7.权利要求1所述的褐鲳鲉抗菌肽sm-LEAP2在制备哺乳动物饲料添加剂中的应用。
8.一种防霉防腐剂，其特征在于：其有效成分包括权利要求1所述的褐鲳鲉抗菌肽sm-LEAP2。
9.权利要求1所述的褐鲳鲉抗菌肽sm-LEAP2在制备防霉防腐剂中的应用。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201910231875.5A CN111748025B (zh) | 2019-03-26 | 2019-03-26 | 一种褐鲳鲉抗菌肽leap2及其应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201910231875.5A CN111748025B (zh) | 2019-03-26 | 2019-03-26 | 一种褐鲳鲉抗菌肽leap2及其应用 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN111748025A CN111748025A (zh) | 2020-10-09 |
| CN111748025B true CN111748025B (zh) | 2021-09-17 |
Family
ID=72672007
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201910231875.5A Active CN111748025B (zh) | 2019-03-26 | 2019-03-26 | 一种褐鲳鲉抗菌肽leap2及其应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN111748025B (zh) |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2008220198A (ja) * | 2007-03-09 | 2008-09-25 | Japan Agengy For Marine-Earth Science & Technology | カサゴ細胞株 |
| WO2009149554A1 (en) * | 2008-06-11 | 2009-12-17 | National Research Council Of Canada | Antimicrobial components of the mucus and extruded slime of hagfish (myxine glutinosa) |
| CN104450751A (zh) * | 2014-12-24 | 2015-03-25 | 厦门大学 | 一种褐菖鲉cyp1b1基因全长序列及其克隆方法 |
| CN106222175A (zh) * | 2016-08-02 | 2016-12-14 | 上海海洋大学 | 斑点叉尾鮰leap‑2成熟肽的优化基因及其重组蛋白的制备方法 |
-
2019
- 2019-03-26 CN CN201910231875.5A patent/CN111748025B/zh active Active
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2008220198A (ja) * | 2007-03-09 | 2008-09-25 | Japan Agengy For Marine-Earth Science & Technology | カサゴ細胞株 |
| WO2009149554A1 (en) * | 2008-06-11 | 2009-12-17 | National Research Council Of Canada | Antimicrobial components of the mucus and extruded slime of hagfish (myxine glutinosa) |
| CN104450751A (zh) * | 2014-12-24 | 2015-03-25 | 厦门大学 | 一种褐菖鲉cyp1b1基因全长序列及其克隆方法 |
| CN106222175A (zh) * | 2016-08-02 | 2016-12-14 | 上海海洋大学 | 斑点叉尾鮰leap‑2成熟肽的优化基因及其重组蛋白的制备方法 |
Non-Patent Citations (4)
| Title |
|---|
| "Antimicrobial activity and mechanisms of multiple antimicrobial peptides isolated from rockfishSebastiscus marmoratus";Jun Bo et al.;《Fish and Shellfish Immunology》;20190823;第93卷;第1007-1017页 * |
| "QEM39059.1 LEAP-2 [Sebastiscus marmoratus]";Bo,J.et al.;《GenBank》;20190911;第1页 * |
| "Selective Algicidal Action of Peptides against Harmful Algal Bloom Species";Seong-Cheol Park et al.;《PLoS ONE》;20111026;第6卷(第10期);第1-10页 * |
| "鱼类及两栖动物抗菌肽的研究进展";薛林贵 等;《生物技术通报》;20171231;第33卷(第12期);第61-66页 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN111748025A (zh) | 2020-10-09 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN111205359B (zh) | 一种拟穴青蟹抗菌肽Scyreprocin及其应用 | |
| CN112159460B (zh) | 一种拟穴青蟹抗菌肽Spamprin4-23及其应用 | |
| RU2724464C1 (ru) | Штаммы, биопрепарат, способ получения биопрепарата и способ биологической защиты сельскохозяйственных культур от фузариоза | |
| CN113999296B (zh) | 一种拟穴青蟹新型抗菌多肽Spgillcin177-189及其应用 | |
| CN113321708B (zh) | 一种人工设计抗菌肽的制备及其在水产上的应用 | |
| CN112812159A (zh) | 源自布拉迪酵母的酵母多肽及其制备方法和应用 | |
| CN111748025B (zh) | 一种褐鲳鲉抗菌肽leap2及其应用 | |
| CN110003318B (zh) | 褐鲳鲉抗菌肽moronecidin及其应用 | |
| CN113880933B (zh) | 一种抗菌肽SsNKL27及其应用 | |
| CN109251936B (zh) | 一种光滑鳖甲丝氨酸蛋白酶抑制剂融合蛋白及制备与应用 | |
| MXPA02001464A (es) | Materiales y metodos para la produccion eficiente de pasteuria. | |
| CN114773436B (zh) | 一种拟穴青蟹抗菌多肽SpRR20及其应用 | |
| CN114957429B (zh) | 一种青蟹广谱抗菌多肽Scyrephemin60-81及其应用 | |
| CN118165091A (zh) | 虎纹蛙抗菌肽cathelicidin-1及其编码序列和应用 | |
| CN115246876B (zh) | 一种拟穴青蟹抗菌多肽Scyrepsin34-55及其应用 | |
| CN114957430B (zh) | 一种拟穴青蟹抗菌多肽Sparepcin173-194及其应用 | |
| CN111909871B (zh) | 一种拮抗桃细菌性穿孔病菌的粪产碱杆菌及应用 | |
| CN118165092A (zh) | 虎纹蛙抗菌肽cathelicidin-2及其编码序列和应用 | |
| CN111040975B (zh) | 一株产酶、喜盐芽孢杆菌及其在咸水水产养殖防治病原菌中的应用 | |
| CN117567565A (zh) | 一种大弹涂鱼抗菌多肽Boleopectin及其应用 | |
| CN117567584A (zh) | 一种大黄鱼抗菌多肽Larimicin及其应用 | |
| CN117683089A (zh) | 大弹涂鱼抗菌肽Boleophtin及其应用 | |
| CN117126246A (zh) | 一种大弹涂鱼抗菌多肽Bolespleenin及其应用 | |
| CN118754960A (zh) | 一种拟穴青蟹抗菌多肽Sparadin342-364及其应用 | |
| CN118108808A (zh) | 一种拟穴青蟹抗菌多肽Scycin及其应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |