KR102071706B1 - 박테리오파지 pp2 및 카로신 d를 포함하는 채소 무름병 방제용 조성물 및 이의 용도 - Google Patents

Abstract

본 발명은 박테리오파지 PP2(기탁번호 : KACC 97029P) 및 카로신 D를 유효성분으로 포함하는 채소 무름병 방제용 조성물에 관한 것으로, 상기 조성물은 펙토박테리움 카로토보룸 종 및 펙토박테리움 아트로셉티쿰 종의 증식 억제 또는 사멸하여, 신선채소의 무름병에 방제 효과가 있어 채소의 무름병 방제를 위한 미생물 농약으로 활용될 수 있고, 항생제 대신 사용될 수 있으므로, 항생제 내성균 출현 가능성을 감소시키고, 환경 안전성을 높일 수 있다.

Description

박테리오파지 PP2 및 카로신 D를 포함하는 채소 무름병 방제용 조성물 및 이의 용도{Vegetable soft rot controlling composition containing bacteriophage PP2 and carocin D and its use}

본 발명은 채소 무름병원균 억제 효과를 가지는 박테리오파지 PP2 및 카로신 D를 포함하여 방제 효과를 향상시킨 우수한 채소 무름병 방제용 조성물 및 이를 이용한 방제 방법에 관한 것이다.

무름병은 독특한 냄새가 나면서 흐물흐물해져서 썩는 식물의 병해를 지칭하는 것으로, 흔히 연부병(軟腐病)이라고도 한다. 무름병에 걸리면 세포벽 중간층의 펙틴질이 녹아 처음에는 물기가 보이는 것에 그치나, 점차로 물러져 썩고 액체처럼 흐물흐물해진다. 무름병은 채소에 많이 나타나는 병해이나, 그 밖에 토마토, 고구마, 감자에도 많이 나타난다.

배추를 포함하는 야채에 무름병을 발생시키는 펙토박테리움 카로토보룸 아종 카로토보룸(Pectobacterium carotovorum subsp. carotovorum)은 생장 적온이 26~28℃이나, 다른 식물 병원 세균과는 달리 상온인 36℃ 정도에서도 잘 자라, 여름철 배추 생산에 가장 큰 장애 요인이다. 무름병균은 배추를 비롯하여 거의 모든 식물에 침입하여 발병할 수 있는데, 한번 침입하면 주변의 다른 채소로 옮겨가 발병을 전파한다.

최근 웰빙 문화의 확산으로 신선 채소의 소비가 급증하고 있는데, 신선 채소에서도 무름병 발병이 급증하고 있다. 특히, 진열대에 진열한 신선 채소는 신선도 유지를 위하여 수분을 계속 공급하는데, 수분을 통해서도 무름병균이 전파된다. 무름병은 배추나 신선 채소에 한번 발생하면 방제가 매우 까다로운데, 소비자들이 배추나 채소를 익히지 않고, 대부분 그대로 섭취하기 때문이다. 또한, 병원균인 펙토박테리움 카로토보룸 아종 카로보토룸(Pectobacterium carotovorum subsp. carotovorum)은 토양에서 비교적 오랫동안 생존이 가능하며, 농약에 의한 방제 효과도 일반적으로 낮은 것으로 알려져 있다.

따라서, 친환경적이면서도 효과적인 방제기술 개발이 시급한데, 지금까지 각종 작물의 병 방제는 주로 저항성 품종의 개발과 농약 사용에 의한 화학적 약제에 크게 의존하였다. 이 중 저항성 품종의 개발에는 많은 기술적경제적 그리고 시간적 제약이 따르며, 새로운 저항성 품종을 선발하여도 번식 속도가 빠른 세균이 바로 적응할 수 있는 능력을 키우게 되어 저항성을 상실하게 되는 문제가 발생한다. 그리고 화학 약제로 알려진 항생제는 동물세균에도 같이 작용하여 항생제 저항성 균을 조장할 수 있는 문제를 발생한다.

이에 대한 대응책으로 생물학적 방제 기법이 현재 부각되고 있는데, 병원균에 대해 길항 및 경쟁 미생물을 분리하여 배양한 후, 토양, 종자 또는 식물체에 직접 처리하여 병원균의 침입을 막거나, 살균 물질을 분비하여 병원성 세균의 증식을 억제하는 방법이 알려져 있고, 세균만을 특이적으로 공격하여 용균시키는 박테리오파지란 바이러스를 이용하는 방법이 알려져 있다. 이와 같은 생물학적 방제는 유기 합성 농약이 가지는 환경오염, 약해 및 잔류 독성의 문제가 없다는 점에서 매우 바람직한 것으로 받아들여지고 있다.

파지가 발견된 1910년부터 1930년대에 걸쳐 파지는 숙주 특이성과 숙주 세균의 내독소, 외독소 등 그 당시 과학적으로 풀지 못하는 문제 및 1929년 플래밍에 의해 발견된 페니실린과 1943년 워크스만에 의한 스트렙토마이신으로 대표되는 화학적 치료제(약)의 발견으로 인해 그 활용 및 개발이 잠시 주춤하였다.

한편, 그 당시에 파지를 치료제로 사용하기에는 몇 가지 문제가 있었다. 그 중, 특이성이 높아 몇몇 균주에만 특이적으로 작용하는 점과 저항성이 높아 사용 후 바로 저항성 균이 나타나 치료제로서의 효과가 바로 없어진다는 것이 가장 문제였다. 반면에 화학적 치료제는 항균 범위가 넓으며, 최초 적용시에는 내성균 문제도 없었기 때문에 광범위하게 활용되었고, 그 결과 파지 요법은 거의 사라지게 되었다. 그 후로 1950년대에 WHO에 의해 파지 요법은 무효 선언되었으며, 동구권과 구소련연방에서만 그 명맥이 겨우 유지되어 왔다.

그러나, 1980년대에 들어 파지 요법에 대한 생각이 바뀌게 되는데, 1982년 영국의 연구자그룹인 스미스와 휴긴스는 마우스를 이용한 뇌막염 치료 모델 실험을 하였다. 마우스의 피하 근육 내에 균을 주사하고 반대쪽의 피하에는 균의 특이적인 용균 파지를 주사한 결과, 파지를 주사하지 않은 대조군은 100% 폐사한 것에 비해 파지를 주사한 경우(실험군) 100% 생존하였으며, 항생제(스트렙토마이신 등)의 효과보다도 우월한 것이 확인되었다. 이때, 파지의 저항성 문제도 여러 종류의 파지를 칵테일로 사용하여 해결할 수 있었다.

파지의 크기는 세균의 약 1/10로 그 모양은 전자현미경으로 관찰할 수밖에 없다. 그러나, 파지가 균을 용균하면 한천 배지 상에 증식한 세균 집락에 투명한 반점(플라크)이 형성되기 때문에 파지의 존재를 육안으로도 확인할 수 있다.

파지는 세균 감염 후 약 30분경에 100~200개의 새로운 파지를 만들고, 세균의 막을 파괴하며 밖으로 나온다. 세균은 2분열 증식을 하는데, 빠른 것은 약 20분에 2개의 개체, 40분에 4개의 개체, 60분에 8개의 개체로 된다. 파지의 경우에는 약 30분에 100개 이상의 새로운 파지가 생성되는데, 증식의 속도에서 세균에 비해 훨씬 우세하다. 특정 세균이 20분에 1회씩 무제한으로 증식한다면 하나의 세포에서 출발한 세균이 지구와 같은 무게가 되는 데는 단지 36시간밖에 걸리지 않으므로, 세균의 증식을 억제할 수 있는 중요한 후보로 파지가 고려될 수 있다.

파지는 용균 파지와 용원성 파지로 분류되며, 용균 사이클만 반복하는 것을 용균(virulent) 파지, 용원 사이클만 반복하는 것을 약독성(temperate) 파지로 정의한다. 약독성 파지(temperate phage)는 숙주세균의 유전체에 파지의 유전자 정보를 삽입하기 때문에 파지의 모양은 사라지고, 숙주세균이 파괴되지도 않는다. 이러한 상태는 숙주 세균이 좋은 환경조건에 있는 한 계속되는데, 숙주 세균의 환경이 악화되면, 숙주세균의 유전자에 있던 파지 유전자는 파지 입자를 만든 후, 용균 사이클로 변환되어 숙주세균을 용균시키고, 숙주세포 밖으로 탈출한다.

한편, 파지가 항생제에 비교하여 가지는 여러 가지 장점들을 나열하여 보면 다음과 같다. 첫째, 파지는 숙주가 있는 경우에만 복제가 가능하다. 둘째, 파지는 자연상태로 존재하며 세균이 있는 곳에는 어디서든 다 존재한다. 셋째, 파지는 어떤 진핵세포의 생물에도 안전하다. 넷째, 특이성이 높아 이로운 다른 세균에는 안전하다. 다섯째, 파지는 준비가 매우 쉽다.

상기와 같은 여러 가지의 장점 때문에, 최근 점점 더 많은 파지가 개발되고 있는 실정이다.

1. 한국등록특허 제10-1797462호 (등록 2017.11.08) 2. 한국등록특허 제10-1790019호 (등록 2017.10.19) 3. 한국등록특허 제10-1368328호 (등록 2014.02.21) 4. 한국등록특허 제10-1006084호 (등록 2010.12.29)

이에 본 발명은 채소 무름병 세균의 사멸을 유도할 수 있는 효과가 우수한 채소 무름병균 방제용 조성물 및 이를 이용한 채소 무름병 방제 방법을 제공하는데 그 목적이 있다.

상기 상술한 목적을 달성하기 위하여 본 발명은 박테리오파지 PP2 (기탁번호 : KACC 97029P) 및 카로신 D를 유효성분으로 포함하는 채소 무름병 방제용 조성물을 제공한다.

본 발명의 채소 무름병 방제용 조성물에 포함되는 박테리오파지 PP2는 서열목록 1의 염기 서열을 갖는 것을 특징으로 한다.

본 발명의 채소 무름병 방제용 조성물에 포함되는 카로신 D는 서열목록 2의 아미노산 서열을 갖는 것을 특징으로 한다.

본 발명의 채소 무름병 방제용 조성물이 적용되는 채소 무름병은 펙토박테리움 카로토보룸 종 (Pectobacterium carotovorum species) 및 펙토박테리움 아트로셉티쿰 종(Pectobacterium atrosepticum species) 중 어느 하나 이상으로 인해 발병되는 것을 특징으로 한다.

본 발명의 채소 무름병 방제용 조성물이 적용되는 채소는 배추 또는 상추인 것을 특징으로 한다.

본 발명은 박테리오파지 PP2 (기탁번호 : KACC 97029P) 및 카로신 D를 유효성분으로 포함하는 펙토박테리움 카로토보룸 종(Pectobacterium carotovorum species) 증식 억제 또는 사멸용 조성물을 제공한다.

본 발명은 박테리오파지 PP2 (기탁번호 : KACC 97029P) 및 카로신 D를 유효성분으로 포함하는 펙토박테리움 아트로셉티쿰 종(Pectobacterium atrosepticum species) 증식 억제 또는 사멸용 조성물을 제공한다.

본 발명은 박테리오파지 PP2 (기탁번호 : KACC 97029P) 및 카로신 D를 사용하는 채소 무름병 방제 방법을 제공한다.

본 발명은 박테리오파지 PP2 (기탁번호 : KACC 97029P) 및 카로신 D를 사용하는 펙토박테리움 카로토보룸 종 (Pectobacterium carotovorum species) 및 펙토박테리움 아트로셉티쿰 종(Pectobacterium atrosepticum species) 중 어느 하나 이상의 증식 억제 또는 사멸하는 방법을 제공한다.

상기에서 살펴본 바와 같이 본 발명에서 새롭게 분리한 박테리오파지 PP2는 신선채소의 무름병에 방제 효과가 있어 수확 후 농산물의 유통 및 저장 중 부패에 의한 손실을 막을 수 있고, 농작물의 무름병 방제를 위한 미생물 농약으로도 활용될 수 있다.

또한, 본 발명의 세균 생육 억제 또는 사멸능이 있는 박테리오파지는 항생제 대신 사용될 수 있으므로, 항생제 사용 절감을 통해 항생제 내성균 출현 가능성을 감소시키고, 환경 안전성을 높일 수 있다.

도 1은 본원발명의 항균 활성을 농도별로 확인한 실험 결과이다.
도 2는 재배 중인 상추에 본원발명을 처리한 후 무름병 이병율을 확인한 실험 결과이다.
도 3은 재배 중인 상추에 본원발명을 처리한 후 무름병 양상을 나타낸 사진이다.
도 4는 신선편이 제품 채소믹스를 본원발명으로 세척한 후 무름병균에 대한 항균활성을 확인한 실험 결과이다.
도 5는 신선편이 제품 채소믹스를 본원발명으로 세척한 후 무름병 양상을 나타낸 사진이다.
도 6은 상추에 본원발명을 분사 처리한 후 무름병균에 대한 항균활성을 확인한 실험 결과이다.
도 7은 상추에 본원발명을 분사 처리한 후 무름병 양상을 나타낸 사진이다.

상기 상술한 목적을 달성하기 위한 본 발명은 채소 무름병에 대해 방제능을 발휘하는 박테리오파지 PP2 (기탁번호 : KACC 97029P) 와 카로신 D를 포함하는 채소 무름병 방제용 조성물 및 이를 이용한 채소 무름병 방제 방법을 제공하는 것을 특징으로 한다. 이하 도면을 참조하여 본 발명을 구체적으로 설명한다.

상기의 목적을 달성하기 위해, 본 발명은 채소 무름병에 대해 방제능을 발휘하는 새롭게 분리, 동정된 박테리오파지 PP2 (기탁번호 : KACC 97029P) 와 카로신 D를 포함하는 채소 무름병 방제용 조성물을 제공한다.

본 발명자들은 무름병균 용균 효과, 숙주 특이성 등을 평가하여 우수한 효과를 가지는 신규한 박테리오파지를 선별하여 이를 박테리오파지 PP2로 명명하고, 이를 국립농업과학원에 2016년 9월 23일자로 기탁하여 KACC 97029P를 부여받았다.

본 발명의 박테리오파지 PP2는 서열목록 1의 염기서열로 이루어진다. 보다 구체적이고 다양한 서열정보는 GenBank : KX756572.1에서 얻을 수 있다. 본 발명자들은 박테리오파지 PP2 자체에 대하여 다양한 실험을 수행하고 정보를 수록하여 한국특허출원 제10-2016-0149480호로 출원하였다. 이에 상기 선행 명세서에 기재된 모든 내용은 본 명세서에 포함된다.

본 발명의 박테리오파지 PP2는 채소 무름병균을 숙주로 하여 수행한 실험에서 무름병균을 용해(lysis)시킴을 확인할 수 있었다. 특히, 본 발명의 박테리오파지는 펙토박테리움 카로토보룸 종(Pectobacterium carotovorum species), 보다 바람직하게는 펙토박테리움 카로토보룸 아종 브라질리언스(Pectobacterium carotovorum subsp. brasiliense) 또는 펙토박테리움 카로토보룸 아종 카로토보룸(Pectobacterium carotovorum subsp. carotovorum)을 특이적으로 용균시킬 수 있다는 사실을 실험을 통해 확인할 수 있었다.

본 발명의 카로신 D는 여러 종류의 세포벽 분해 효소를 가지고 있어 배추 등 거의 모든 채소를 무르고 썩게 하여 악취가 나게 하는 무름병을 일으키는 펙토박테리움 균만을 특이적으로 죽일 수 있는 박테리오신의 하나이다. 구체적으로 펙토박테리움 카로토보룸 아종 카로토보룸 Pcc21-M15(기탁번호 KACC 91406P)에서 유래할 수 있으며, 서열번호 2의 아미노산으로 구성된다. 상기 서열번호 2의 아미노산은 서열번호 3의 염기 서열에 의해 코딩될 수 있다. 카로신 D의 전체 유전자 정보는 GU354220.1에서 얻을 수 있다.

본 발명의 상기 카로신 D를 추가로 포함하는 조성물은 펙토박테리움 카로토보룸 종(Pectobacterium carotovorum species) 및 펙토박테리움 아트로셉티쿰 종(Pectobacterium atrosepticum species) 중 어느 하나 이상으로 인해 발병되는 채소 무름병, 보다 바람직하게는 펙토박테리움 카로토보룸 아종 브라질리언스(Pectobacterium carotovorum subsp. brasiliense), 펙토박테리움 카로토보룸 아종 카로토보룸(Pectobacterium carotovorum subsp. carotovorum) 또는 펙토박테리움 아트로셉티쿰 종(Pectobacterium atrosepticum species)으로 인해 발병하는 채소 무름병 방제에 효과적인 조성물을 제공할 수 있다.

상술한 본 발명에 따른 채소 무름병 방제용 조성물은 채소 무름병이 발생할 수 있는 채소 및 과일들, 예를 들어, 상추, 무, 배추, 토마토, 고구마, 감자 등에 이용될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니며, 특히, 본 발명은 배추 또는 상추의 무름병 방제에 효과적이다.

한편, 본 발명의 채소 무름병 방제용 조성물과 펙토박테리움 카로토보룸 종(Pectobacterium carotovorum species) 증식 억제 또는 사멸용 조성물 중 선택되는 어느 하나는, 일종의 미생물 농약으로서, 액상, 분말상 등의 다양한 형태로 제조될 수 있다. 또한, 필요에 의해 미생물 농약에 사용되는 공지된 여러 부형제를 첨가할 수도 있는데, 상기 부형제는 미생물 농약에 사용되는 것을 특정의 것에 한정하지 않고 사용할 수 있으므로, 부형제에 관한 설명은 생략하기로 한다. 일례로, 본 본 발명에 따른 조성물은 실제 포장에서 사용하기 적합한 안정적인 제제화를 목적으로 생화학 농약으로 사용가능한 계면활성제 또는 증량제 등을 사용하여 수화제, 입상수화제, 액상수화제, 액제, 수용제, 수용성입제 또는 캡슐화제의 형태로 제조될 수 있다.

상기 계면활성제의 일예로 알킬(C₈～C₁₂)아릴설포네이트, 디알킬(C₃～C₆)아릴설포네이트, 디알킬(C₈～C₁₂)설포숙시네이트, 리그닌설포네이트, 나프탈렌설포네이트축합물, 나프탈렌설포네이트포르말린축합물, 알킬(C₈～C₁₂)나프탈렌설포네이트포르말린축합물, 폴리옥시에틸렌알킬(C₈～C₁₂)페닐설포네이트와 같은 설포네이트 화합물의 나트륨염 또는 칼슘염, 알킬(C₈～C₁₂)설페이트, 알킬(C₈～C₁₂)아릴설페이트, 폴리옥시에틸렌알킬(C₈～C₁₂)설페이트, 폴리옥시에틸렌알킬(C₈～C₁₂)페닐설페이트와 같은 설페이트 화합물의 나트륨염 또는 칼슘염, 폴리옥시알킬렌숙시네이트와 같은 숙시네이트화합물의 나트륨염 또는 칼슘염, 나트륨 벤조에이트, 알킬카르복실레이트 등의 음이온성 계면활성제, 폴리옥시에틸렌알킬(C₈～C₁₂)에테르, 폴리옥시에틸렌알킬(C₈～C₁₂)페닐에테르, 폴리옥시에틸렌알킬(C₈～C₁₂)페닐폴리머, 에틸렌옥사이드 프로필렌옥사이드 코폴리머와 같은 비이온성 계면활성제, 폴리카복실레이트, 트리톤 100 및 트윈 80으로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 또는 둘 이상이 혼합되어 사용될 수 있으며, 이들 이외의 다른 계면활성제들도 사용될 수 있음은 당해 기술분야에서 통상의 지식을 갖은 자에게는 용이하게 이해될 수 있을 것이다.

증량제로는 벤토나이트(bentonite), 활석, 클레이, 카올린, 탄산칼슘, 규사, 경석, 규조토, 산성 백토, 제올라이트, 펄라이트, 화이트 카본, 암모늄 설페이트, 요소, 포도당, 덱스트린(dextrin), 콩가루, 쌀, 밀, 황토, 포도당 및 전분, 물 등이 단독으로 또는 2종 이상 혼합되어 사용될 수 있으며, 이들 이외의 다른 증량제들도 사용될 수 있음은 당해 기술분야에서 통상의 지식을 갖은 자에게는 용이하게 이해될 수 있을 것이다.

본 발명은 박테리오파지 PP2 (기탁번호 : KACC 97029P) 및 카로신 D를 사용하는 채소 무름병 방제 방법을 제공한다.

본 발명은 박테리오파지 PP2 (기탁번호 : KACC 97029P) 및 카로신 D를 사용하는 펙토박테리움 카로토보룸 종 (Pectobacterium carotovorum species) 및 펙토박테리움 아트로셉티쿰 종(Pectobacterium atrosepticum species) 중 어느 하나 이상의 증식 억제 또는 사멸하는 방법을 제공한다.

이하, 실시 예를 통해서 본 발명을 보다 상세히 설명하기로 한다. 하지만, 이들은 본 발명을 보다 상세하게 설명하기 위한 것일 뿐 본 발명의 권리범위가 이에 한정되는 것은 아니다.

[실시예 1] 박테리오파지 PP2 분리

배추 무름병이 발생한 식물이 재배되고 있는 토양으로부터 배추 무름병 균에 대한 박테리오파지를 분리하고자 하였다.

50mL 튜브에 토양 20g과 10ml의 10mM MgCl₂를 넣고 기주가 되는 펙토박테리움 카로토보룸 아종 카로토보룸(Pectobacterium carotovorum subsp. carotovorum) Pcc8을 16시간 배양하여 각 토양 샘플에 0.4 ml씩 첨가하였다. 16시간 동안 28℃에서 180 rpm으로 배양한 후, 4000 rpm에서 5분 동안 원심분리하고 여과시켜(0.45 μm) 잔여물을 제거하였다. 상기 샘플 0.1 mL과 12시간 이상 배양한 배추 무름병균 0.1 mL의 현탁액을 피펫으로 추출한 후에 섞어주었다. 이 혼합액을 아가(0.4%) 배지와 함께 섞어서 1.5% 아가 배지를 포함하는 플레이트에 부은 후, 28℃에서 6시간 동안 배양하였다.

목적하는 박테리오파지가 플레이트 상에 나타난 경우, 독립되고 투명한 플라그(plaque)가 관찰되면, 이 플라그 영역을 백금 루프를 이용하여 분리해 낸 다음, 새로운 박테리아 배양액에 넣었는데, 배양액이 맑아짐을 관찰할 수 있었다.

그 후에 배양액을 원심분리한 후, 상층액만을 취해 박테리오파지만을 포함하는 여과액을 회수할 수 있었다. 회수된 박테리오파지 여과액을 염화세슘(CsCl) 밀도차를 이용한 초고속 원심분리를 통해 순수한 박테리오파지를 얻을 수 있었다.

이와 같이 얻은 박테리오파지는 Pcc8을 포함하는 펙토박테리움 종 (Pectobacterium carotovorum species), 특히 펙토박테리움 카로토보룸 아종 카로토보룸(Pectobacterium carotovorum subsp. carotovorum) 또는 펙토박테리움 카로토보룸 아종 브라질리언스(Pectobacterium carotovorum subsp. brasiliense)에 특이적으로 사멸효과가 우수하며, 이를 PP2로 명명하였으며, 농업유전자원센터에 2016년 9월 23일자로 기탁하여 기탁번호 KACC97029P를 부여받았다.

[실시예 2] 박테리오파지 PP2 모양 및 분류

본원발명의 박테리오파지 PP2에 대하여 페놀-클로로포름을 사용하여 DNA를 추출하여 454 게놈 시퀀서 FLX(로슈, 독일)을 이용하여 유전자를 분석하였다.

분석 결과, 상기 박테리오파지 PP2는 서열목록 1에 기재된 47개 단백질을 코딩하는 41,484 bp의 이중-나선 DNA로 이루어지고, 포도비리대(Podoviridae) 과의 오토그라피비리내(Autographivirinae) 아과에 속하는 박테리오파지인 것으로 판명되었다. 또한, 상기 박테리오파지 PP2는 약 55nm의 머리와 약 15nm의 꼬리를 갖는 것으로 판명되었다.

[실시예 3] 본원발명의 항균능력 확인

본원발명의 채소 무름병균에 대한 항균능력을 확인하기 위해, 카로신 D 와 박테리오파지 PP2는 spot-on-lawn 법을 사용하여 항균 활성을 확인하였다.

구체적으로, 카로신 D와 박테리오파지 PP2는 각각 혹은 혼합하여 TSA 배지에 10 μl 씩 떨어뜨려 건조한 뒤 대상 균주의 배양액을 0.7 % 소프트 아가와 1:1,000 비율로 섞어 준 뒤 부어주고 10분간 아가를 굳힌 뒤 24시간 배양하여 항균 물질에 의한 투명환의 생성 여부를 관찰하였다. 관찰 결과 항균 물질에 의한 투명환이 생성되는 경우를 +로, 그렇지 않은 경우를 -로 기재하여, 하기 표 1에 기재하였다.

타겟 박테리아	스트레인	박테리오 파지 PP2 처리	카로신 D 처리	혼합물 처리 (박테리오 파지 PP2 + 카로신 D)
P. atrosepticum	KACC10478	-	+	+
P. atrosepticum	KACC10480	-	+	+
P. carotovorum subsp. brasiliensis	Pcc1	+	-	+
P. carotovorum subsp. brasiliensis	Pcc2	-	+	+
P. carotovorum subsp. brasiliensis	Pcc21	+	-	+
P. carotovorum subsp. brasiliensis	Pcc49	+	-	+
P. carotovorum subsp. brasiliensis	Pcc87	+	+	+
P. carotovorum subsp. brasiliensis	Pcc99	+	-	+
P. carotovorum subsp. brasiliensis	E3	+	-	+
P. carotovorum subsp. brasiliensis	E10	+	-	+
P. carotovorum subsp. brasiliensis	E35	+	-	+
P. carotovorum subsp. brasiliensis	Pcc40	-	+	+
P. carotovorum subsp. carotovorum	Pcc3	+	+	+
P. carotovorum subsp. carotovorum	Pcc8	+	+	+
P. carotovorum subsp. carotovorum	Pcc29	+	+	+
P. carotovorum subsp. carotovorum	Pcc50	-	+	+
P. carotovorum subsp. carotovorum	Pcc101	+	+	+
P. carotovorum subsp. odoriferum	Pcc89	-	+	+
P. carotovorum subsp. odoriferum	E4	-	+	+
P. carotovorum subsp. odoriferum	E14	-	+	+

실험 결과, 본원발명의 박테리오파지 PP2를 처리한 경우 펙토박테리움 카로토보룸 아종 브라질리엔시스 및 펙토박테리움 카로토보룸 아종 카로토보룸의 다양한 스트레인의 균주에 대하여 항균성을 보였고, 카로신 D를 처리한 경우에는 펙토박테리움 카로토보룸 아종 브라질리엔시스, 펙토박테리움 카로토보룸 아종 카로토보룸에 펙토박테리움 카로토보룸 아종 오도리페룸 및 펙토박테리움 아트로셉티쿰에 대해서도 항균활성을 나타내었고, 박테리오파지 PP2와 카로신 D를 모두 혼합한 혼합물을 처리한 경우 실험한 균주 모두에 대하여 항균활성을 나타냄을 확인하였다.

또한, 박테리오파지 PP2, 카로신 D 및 이의 혼합물 각각을 농도별로 처리하여 항균성을 확인하였다. 박테리오파지 PP2 와 카로신 D를 각각 혹은 혼합하여 펙토박테리움 카로토보룸 아종 카로토보룸 PCC3 액체 배양액과 섞어서 30분간 처리한 뒤 이 배양액을 TSA 배지에 도말하여 박테리오파지 PP2 와 카로신 D를 처리한 실험군과 처리하지 않은 실험군에서 PCC3 균주의 콜로니 수를 세어 비교를 통해 항균활성을 확인하였다.

실험 결과, 박테리오파지 PP2와 카로신 D를 각각 처리한 경우 처리 농도가 증가할수록 생장억제 정도가 증가하였고, 더불어 이들의 혼합물을 처리한 경우 각각 처리한 경우보다 무름병균의 생장억제가 더 상승되는 것을 확인하였다. (도 1 참조)

[실시예 4] 농산물 재배시 적용 가능성 확인

본원발명을 농산물 재배시 무름병 방제에 적용할 수 있는지 여부를 확인하기 위해, 온실에서 화분에 재배 중인 상추를 대상으로 박테리오파지 PP2와 카로신 D를 처리하는 실험을 수행하였다. 펙토박테리움 카로토보룸 Pcc3에 오염된 재배 중인 상추에 카로신 D 또는 혼합물(박테리오파지 PP2+카로신 D, cocktail)를 스프레이한 후 3일 동안 상추의 무름병 이병율 감소 효과를 확인하였다.

구체적으로, 펙토박테리움 카로토보룸 아종 카로토보룸 PCC3 는 고체배지에 접종한 뒤 28℃에서 24시간 배양한 후 MgCl₂로 현탁하여 10⁷ CFU/ml 농도로 제작하였다. 균액을 접종하기 직전에 접종 양의 1/20의 비율로 미네랄오일을 첨가한 후 재배 중인 상추에 스프레이를 이용하여 접종하였다. 접종 후 3시간 뒤 항균물질을 스프레이를 이용하여 처리하였다. 이후 3일 동안 매일 상추의 이병율을 확인하고 사진을 찍어 관찰하였다.

실험 결과, 펙토박테리움 카로토보룸 Pcc3에 오염된 상추(PCC3)는 이병율이 85%로서 무름병이 발생한 반면, 카로신 D 처리군(PCC3+carocin D) 및 혼합물 처리군(PCC3+cocktail)에서는 무름병의 이병율이 60% 밖에 되지 않아 무름병 발병이 억제됨을 확인할 수 있었다(도 2 참조).

또한, 도 3을 살펴보면, 상기 실험의 병균에 오염된 상추는 3일 후 무름병이 와서 축 늘어진 반면, 카로신 D 처리군(PCC3+carocin D) 및 혼합물 처리군(PCC3+cocktail)에서는 무름병이 억제되어 상추잎이 처지지 않았음을 육안으로 알 수 있다.

[실시예 5] 농산물 세척시 적용 가능성 확인

본원발명의 농산물 가공 및 세척 시 처리 가능성 확인을 위해 시중에서 판매하는 채소믹스를 대상으로 항균물질 처리 실험을 수행하였다. 이를 위해 펙토박테리움 카로토보룸 Pcc3이 오염된 채소믹스를 미세척(untreated), 물세척(water), 카로신 D 세척(Carocin D), 혼합물(박테리오파지 PP2+카로신 D, cocktail) 세척(cocktail)으로 각각 처리하여 무름병균의 감소 여부를 확인하고, 아무것도 처리하지 않은 군을 대조군(Control)으로 사용하였다.

구체적으로, 채소믹스에 초기농도 10⁶ CFU로 대상균주 접종한 뒤 멸균백에 넣고 각 실험군 별로 카로신 D(Carocin D), 박테리오파지 PP2+카로신 D 혼합물(cocktail)이 포함되거나 포함되지 않은 증류수로 처리한다. 액체를 모두 제거한 채소믹스에 50ml의 인산완충식염수(PBS)를 넣고 1분간 미생물시료균질기(stomacher) 처리하였다. 여액을 회수한 후 희석 및 도말하여 37℃ 24시간 배양하고 집락 수를 계수하였다. 항균물질 처리 후 채소믹스의 변화 관찰을 위해 칭량접시에 채소믹스를 담고 각각의 처리군을 3일간 매일 사진을 찍어 관찰하였다.

실험 결과, 펙토박테리움 카로토보룸 Pcc3에 오염된 채소믹스를 미세척(untreat) 또는 물세척(water)한 경우에는 채소가 무르고 부패가 발생한 반면, 카로신 D 세척(Carocin D) 및 혼합물 세척(cocktail)한 경우에는 무름병균이 감소하고 채소가 무르지 않음을 확인하였다(도 4 참조).

또한, 도 5를 살펴보면, 상기 실험의 펙토박테리움 카로토보룸 Pcc3에 오염된 채소믹스를 미세척(untreat) 또는 물세척(water)한 경우에 채소가 무른 것을 육안으로 확인할 수 있는 반면, 카로신 D 세척(Carocin D) 및 혼합물 세척(cocktail)한 경우에는 전혀 병균에 오염되지 않았던 대조군처럼 채소가 무르지 않은 것을 육안으로 확인할 수 있다.

[실시예 6] 농산물 유통 및 진열시 적용 가능성 확인

본원발명을 농산물 유통 및 진열시 무름병 방제에 적용할 수 있는지 여부를 확인하기 위해 상추를 대상으로 항균물질 안개분사 실험을 수행하였다.

구체적으로, 마트에서 구매한 상추의 크기와 무게를 1장씩 각각 측정하고 대상균주를 상추 1장당(평균 5g) 10⁵ CFU 씩 접종한 후 10분 동안 두었다. 가습기에 항균물질이 포함되거나 포함되지 않은 증류수를 담고 준비해 둔 챔버에 접종한 상추와 함께 넣어준 후 가습기를 30분간 가동시켰다. 가습기마다 분사량의 차이를 보여 분사량을 확인하기 위해 페트리디쉬를 함께 넣어주어 페트리디쉬의 표면적당 수집된 액체의 양을 계산하여 수분발생량을 측정하였다. 처리가 끝난 상추를 각각 멸균백에 넣고 50ml의 인산완충식염수를 넣고 1분간 미생물시료균질기 처리하였다. 여액을 회수한 후 희석 및 도말하여 37℃, 24시간 배양하고 집락 수를 계수하였다. 안개분사 시 상추의 변화를 보기 위해 안개분사 처리한 후의 상추를 사진을 찍어 관찰하였다.

실험 결과, 펙토박테리움 카로토보룸 Pcc3에 오염된 상추를 무처리(untreat) 또는 물처리(water)한 경우에는 채소가 무르고 부패가 발생한 반면, 카로신 D 처리(Carocin D) 및 혼합물 처리(cocktail)한 경우에는 무름병균이 감소하고 채소가 무르지 않음을 확인하였다(도 6 참조).

또한, 도 7을 살펴보면, 상기 실험의 펙토박테리움 카로토보룸 Pcc3에 오염된 상추에 물 처리(water)한 경우에 채소가 무른 것을 육안으로 확인할 수 있는 반면, 카로신 D 처리(Carocin D) 및 혼합물 처리(cocktail)한 경우에는 채소가 무르지 않은 것을 육안으로 확인할 수 있다.

이상에서, 출원인은 본 발명의 바람직한 실시 예들을 설명하였지만, 이와 같은 실시예들은 본 발명의 기술적 사상을 구현하는 일 실시예일 뿐이며 본 발명의 기술적 사상을 구현하는 한 어떠한 변경예 또는 수정예도 본 발명의 범위에 속하는 것으로 해석되어야 한다.

농업생명공학연구원 KACC97029P 20160923

<110> REPUBLIC OF KOREA(MANAGEMENT : RURAL DEVELOPMENT ADMINISTRATION) <120> Vegetable soft rot controlling composition containing Bacteriophage PP2 and carocin D and its use <130> P18-014 <160> 3 <170> KoPatentIn 3.0 <210> 1 <211> 41841 <212> DNA <213> Unknown <220> <223> Bacteriophage(Pectobacterium phage) PP2 <400> 1 cagagagtaa ctcaagggac ggtacataga gagacaccat agagacgcac tcacagaggt 60 attagcgagg tcacgatagc atcggagtaa ctacagagta actatggggt tggcctatac 120 cacaaatcac cttcatagta aagcaatacc gctcactata gagtaactca gaggttatct 180 attaatttca tctaccgagt aaataagtgt tgcattcctc aagcaatctc tgtagagtgc 240 atcacatcag gacggcagca ctaccgcaga gcaatactcc gagttactca gtgggctgtc 300 agaacgaaca agtagctagg ttgaggcatt cgaaagttca accaaggcag tacgacagga 360 tagttgaata caggtcgtta actaggacac ttccatatgg tgagacacca taggtcatca 420 cagacgataa cgtgaatgtc tcaatagtag tatcgtactg gaagtggtgg gaagttatac 480 gtttaacact ctgcttaacg ctcaataggc tgtatgcagg gttaaatcaa cggtgactca 540 tcacaggtac attgtaacac cgctctttaa caacctgcta 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aacacagccg gactaccctt cagacgtcga 36420 gattatcccg gtgcttcgtg accgtcagta cattgtatct gggcgctccg tgagcggttc 36480 tactaagaag agccgcacaa ctgagaagta ctcggttaac cgggtcaacg gctgctacat 36540 gcacgtaacc acccgagggt ggcacacact tactttcgct atgggtgcca acgcaggtga 36600 cgtcgctgtt gaaggtctgg tctgcgacag ctggtctaac gtcaagaaca atgatgtgtt 36660 cggaggtgta tctggtgctg tttactacaa ggacgctgta gcagaggtta caggtttcct 36720 gactactgca gtacaggtgg ccactggtgt atacgacgtt agcatgagta acctcgtacc 36780 ggagaactac cgagtacacg tagagtgtac tgaagatgtg gactacgtgc agtggcggtt 36840 aatcttcaag gcggaaggtg gattccggtt gcacttctac gataaagaca acgtgttggt 36900 agacccaacg tcattcaggg ccactgttat cggaggccgc taatataaga ggctcatatg 36960 tggctggtgg acaaaaccac cagtaaggta gccgagacca tagcgccccc tgctatggta 37020 tctgggctta ctctgctggg tgttagtttg caggattggg tgtacatact gacgattgtg 37080 tatttactcg tcatgatttc taagacactg tataccacag tgcgtgattg gtggagtggt 37140 agaaaagatg gatagagaag aagaattcga agacgaactg gatgcagatg cacagttaga 37200 gcgggaggct aagctcgtag cctttaaggc gcttcttgcg agtatggata acgaagacct 37260 tgccaagctc ctgttgaata agtctctaat caagctggct gttctcttag aagaggacat 37320 ggctaccgca gcggacttca acgtaatccg ggctatcctt aaggataaca agattggcat 37380 cgtgcctaca cgtacaaatg ccatgggcgc tctcaaggct cagcttgata agcggtctaa 37440 ggagaatcag tccagtaagg gcgtaattcc ggtggatgag ttagacaagg tagacttgga 37500 cgacttcgta cagaggcatt aatggaaata ccttataacg tactgttaga cccagatgag 37560 gccttagcgg ccaaactgga ggaggagggc aatgccctcc catacctatc cgatgaggac 37620 ttcgcagcct tgcctgattt ggagaaagag cggcgtgtgc gtatggagca gatagtagcc 37680 cttcgcattc actactcaga cttcaaagta ttcctcacag acgttatggt cgaactcggc 37740 tttagcgtct caaagattca ggctgatatc gctgacttta tggtcaacgg tggtcagtac 37800 atcatgattg aagcgcagcg ctcacaggcc aagacgacta tcgcagccgc cttctgtgtg 37860 tggcagctta tcatggacac acgccaccgt gttctgatta tctccgcagg tggtagtcag 37920 gcatccgata tcagtacgtt ggtaatccgt atcatcatga atatggatgt gctggagtgt 37980 atgcgcccgg ataagtccaa gggtgaccgt gtatccgttg agaagttcga cctacactac 38040 tcgctgcgta aactggacaa gtccgcttcg gttagctgct gtggtatcac tgcgaacttg 38100 cagggccgtc gagcagatac ccttcttgct gatgacatag agtcacagaa gaactcctta 38160 acggccttga tgcgtgagca gctactcgct aagtctctgg acttcacatc aatcaaccaa 38220 tctggccgta tcatttatct aggtactccc cagagcagtg actcaatcta caacaccttg 38280 ccgggacgtg gctataacgt gcgcatctgg ccgggtcggt tccctacgtt ggagcagctc 38340 ccctactacg gagagcatct ggcacctctg ttgcgcagga tacttacaca gtatccccaa 38400 gtaacatgtg gcggtggtct tgatggtctt cagggtgttc ctattgaacc gggtttcctc 38460 ggtgaggttg tactccagaa gaaagaacgt gaccaagggc cagcatggtt ccagttacag 38520 cacatgctca acacaaagct gatggacgct gagcggtatc cgcttaagac ggataactgc 38580 atcgtaatgc ccatccggcc cggtgatgag cttccactgg aagttaagag aggttatgaa 38640 taccgtgagt accaaattga aggaaaatcg tatcgattcg ctaagcctca cacttattcc 38700 acagaacttg ccaagcctac gggaatcgtc ttctacgtcg accccgcagg tggtggtaaa 38760 ggaaaaggta caagaggtgg tgacgaaacc gggtgggcgt gtaccgcgtt cctaaacggt 38820 aatatcttcg tactcggtta cgggggtatt aagggaggtt acgaaggact ccagatgcag 38880 cagctggccg accttgttct gaaatacaag cccaatgtgg ttaagattga gatgaacttt 38940 ggttacggtg cgctgcgtgc agtattcctt cctatcctcc gagaggtcta cccagactgc 39000 tcggtagagg atgacttcgt tacagggcaa aaagagattc gtatcatcga tactctggag 39060 cctatcattg cccgaggctc tctaatcttt gcagaagaag catgtcagtc ggagaaggtg 39120 actcttcaga ttcaccctga tgtaaaccgc atgacatact gcatgatgca gcagatgaac 39180 cacatcactc gcgacaggga ctccctgata catgatgacc gactggatgc ccttgagggc 39240 gcttgcaggc attgggtaga ccttttggta attgaccaga agaaagagcg ggagaagatg 39300 gcagaggcgg aggctaaggc gttctggaaa gacccgttgc agcacaaccg ttacaaacga 39360 cctgtacaca ctaacaatat tctggcgcat cgccgggcac agaagggccg acgataggct 39420 ctaaggacta ttatgattac ctcacaagca ccattcctgt ctgcactgca aggcgctaag 39480 ctgcgcactc tggctgttaa tctccagaac tatgcagata ataaccccgg cgctaaacct 39540 gcggtctacc agttctggca gtcccagaag acactcgcca gcgcagatag cggtatccct 39600 tcggacggca cttacatccc cggtgttaag gatttgcgcc ctacgtgcta caaggtgctg 39660 tcccactacc gcaccttccc tacttcagat atcacggagt atacagattt ctgtgacttc 39720 ttctctgcgg ctaatgctcc tgtagtagag gaattggtgt tctccttaaa tctgcctgag 39780 actaaggagg tagcgcaagg cgcaacactg accctacagg gtgctgtgac tggtggcgtc 39840 tccccttaca cttacgcatg gttgaaggat gatgttgtta ttgaagggcg tgtaagcgcg 39900 tcattcacta agtctaactt tgacgtgtcc gacgagggta agtacgtcct acaggttaca 39960 gatgcagagt ctactgttat cctgtcgcag gcgtgcggtg tgtctctcgc agtctaatcg 40020 gagggccggg agtagtcccg gcatttacta tggcagttag gcaggcaatc ctgtatggct 40080 ccattgcggc tgttctctcc acagtagcag ttaactaccc cggtgagctt acaacctccc 40140 cggagggttt agagaacatc gcgcaatggg agaagtatgc cacccgtact tatctggacg 40200 gtgttggtgt tcccactatt ggtgtaggtt ctacacgttg gttcgacggt aaggcaccta 40260 gaagctcaca gacggcttct gtagatgagg cagcacgtct attcatccga gatgtgaaag 40320 aggctgagaa gtgcgttaag gagcgtatgt cgggtaatct gatgccgcag aaggtgttcg 40380 actcggcggt ctcactggtc tacaacgtgg gatgttctgg cgtcacttgg aaccctaagt 40440 acaacaggca aaccaatatc cggctacagg ccaacgcata caactggact aaggtgtgtt 40500 accacttagg tgacttcatc tactctggtg gcaagcgtac 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tagcttgtga gttactacat ggtgtatcct 41400 ccgtgttgtt cagtgaggct attacatcat agtgaatcgg cagagtcaac actttatttc 41460 actcggtagg taaccagagg tggaaccagc gtagcgccta ggaaggacac agggagactc 41520 agagaggtat ccggtagggt aaccagccta agcaccttcc aagggcacag agaggcatag 41580 aggcggtatc agagctatgc ggagtattat agggaggtag gcgggctatc tatttcgttg 41640 gttattcatt gtgtcttatc cggttactca gagcagtaaa tctgaattgg catccctata 41700 actacagagc gaactagtag gctttgcgga gtacatagta actcatgagt acggcacaca 41760 gtacctcata ggagtagcac agagcagcac ctcagagagg caccatagag gtagactata 41820 gagcaggcat agagaggtaa g 41841 <210> 2 <211> 836 <212> PRT <213> Unknown <220> <223> carocin D <400> 2 Met Ile Lys Tyr Arg Leu Tyr Ala Pro Asn Asp Gly Asp Thr Met Thr 1 5 10 15 Val Ser Gly Gly Gly Gly Trp Val Ser Asn Asp Asp Arg Lys Gly Gly 20 25 30 Asn Asp Arg Asp Asn Gly Lys Gly Gly Ser Ala Val Asp Phe Ser Lys 35 40 45 Asn Pro Glu Lys Gln Ala Ile Val Asn Pro Tyr Leu Ala Ile Ala Ile 50 55 60 Pro Met Pro Val Tyr Pro Leu Tyr Gly Lys Leu Gly Phe Thr Ile Asn 65 70 75 80 Thr Thr Ala Ile Glu Thr Glu Leu Ala Asn Val Arg Ala Ala Ile Asn 85 90 95 Thr Lys Leu Ala Thr Leu Ser Ala Val Ile Gly Arg Ser Leu Pro Val 100 105 110 Val Gly Arg Val Phe Gly Val Thr Ala Ala Gly Met Trp Pro Ser Ser 115 120 125 Thr Ala Pro Ser Ser Leu Asp Ser Ile Tyr Asn Gln Ala His Gln Gln 130 135 140 Ala Leu Ala Gln Leu Ala Ala Gln Gln Gly Val Leu Asn Lys Gly Tyr 145 150 155 160 Asn Val Thr Ala Met Pro Ala Gly Phe Val Ser Ser Leu Pro Val Ser 165 170 175 Glu Ile Lys Ser Leu Pro Thr Ala Pro Ala Ser Leu Leu Ala Gln Ser 180 185 190 Val Ile Asn Thr Glu Leu Ser Gln Arg Gln Leu Ala Leu Thr Gln Pro 195 200 205 Thr Thr Asn Ala Pro Val Ala Asn Ile Pro Val Val Lys Ala Glu Lys 210 215 220 Thr Ala Met Pro Gly Val Tyr Ser Ala Lys Ile Ile Ala Gly Glu Pro 225 230 235 240 Ala Phe Gln Ile Lys Val Asp Asn Thr Lys Pro Ala Leu Ala Gln Asn 245 250 255 Pro Pro Lys Val Lys Asp Asp Ile Gln Val Ser Ser Phe Leu Ser Ser 260 265 270 Pro Val Ala Asp Thr His His Ala Phe Ile Asp Phe Gly Ser Asp His 275 280 285 Glu Pro Val Tyr Val Ser Leu Ser Lys Ile Val Thr Ala Glu Glu Glu 290 295 300 Lys Lys Gln Val Glu Glu Ala Lys Arg Arg Glu Gln Glu Trp Leu Leu 305 310 315 320 Arg His Pro Ile Thr Ala Ala Glu Arg Lys Leu Thr Glu Ile Arg Gln 325 330 335 Val Ile Ser Phe Ala Gln Gln Leu Lys Glu Ser Ser Val Ala Thr Ile 340 345 350 Ser Glu Lys Thr Lys Thr Val Ala Val Tyr Gln Glu Gln Val Asn Thr 355 360 365 Ala Ala Lys Asn Arg Asp Asn Phe Tyr Asn Gln Asn Arg Gly Leu Leu 370 375 380 Ser Ala Gly Ile Thr Gly Gly Pro Gly Tyr Pro Ile Tyr Leu Ala Leu 385 390 395 400 Trp Gln Thr Met Asn Asn Phe His Gln Ala Tyr Phe Arg Ala Asn Asn 405 410 415 Ala Leu Glu Gln Glu Ser His Val Leu Asn Leu Ala Arg Ser Asp Leu 420 425 430 Ala Lys Ala Glu Gln Leu Leu Ala Glu Asn Asn Arg Leu Gln Val Glu 435 440 445 Thr Glu Arg Thr Leu Ala Glu Glu Lys Glu Ile Lys Arg Asn Arg Val 450 455 460 Asn Val Ser Thr Phe Gly Thr Val Gln Thr Gln Leu Ser Lys Leu Leu 465 470 475 480 Ser Asp Phe Tyr Ala Val Thr Ser Leu Ser Gln Ser Val Pro Ser Gly 485 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aacaggtgaa taccgctgca aaaaatcgcg acaattttta taatcaaaat 1140 agaggtctgt taagtgcggg tataactggg ggaccgggat atcctattta tcttgcttta 1200 tggcaaacga tgaataactt tcatcaggct tatttcagag caaataatgc attggaacaa 1260 gagagtcatg ttctgaacct ggctcgttct gatctggcta aggctgagca attgcttgct 1320 gagaataatc gacttcaggt tgaaacggag cgaacgcttg ccgaagaaaa agagataaaa 1380 cgcaacaggg ttaatgtatc aacatttggc acagtgcaaa ctcaacttag taaattgctg 1440 tcagattttt atgctgttac atcactttcc caaagtgttc cttcgggggc attagcctct 1500 ttttcatata atccacaagg gatgattggc agcggtaaga ttgttgggaa ggatgtcgat 1560 gttttatttt ccatcccagt aaaagatatt ccgggatata aatctcctat taacttggac 1620 gatttagcca agaaaaatgg aagtctggat cttcccattc gtctggcatt ttctgatgag 1680 aatggagaaa gggttcttcg ggcattcaaa gcggatagtc tgcgaatccc ttcgagtgtc 1740 agaggtgtag cgggcagtta tgacaaaaat acgggtattt ttagtgcaga aattgatggt 1800 gtttcatctc gccttgtact ggaaaaccca gcgtttcctc cgaccggaaa tgtcggtaat 1860 acgggtaata ctgcacctga ctataaagca ttactgaata ctggtgttga tgttaaacct 1920 gttgataaaa tcacagttac ggtaacacca gttgctgatc cagtggatat tgatgactat 1980 ataatctggt tgccaactgc gtctggttct ggcgtggaac ccatttatgt cgtgtttaac 2040 agtaatccgt atggtgggac ggaaaaagga aaatatagca aacgttatta taatccagat 2100 aaggcaggcg gtccgatctt ggagctggat tggaaaaacg ttaagattga ccatgcaggt 2160 gtggacaatg ttaaattaca cacagggcgt ttcaaagcgt cggttgaaaa caaagtgatg 2220 attgaacgtt tggaaaacat actgaatggt caaatcacgg ccacggatac tgacaagcga 2280 ttctatacgc atgaattaag agagttaaac cgctacagaa atttaggcat caaagacggt 2340 gaagtgccta gtagcattca agaagaaagc gctgtttgga acgacacaca cacagcgacg 2400 cttgaagact acaaaattaa tgagaaagag caaccgttgt acactgatgc tgctttgcag 2460 gcagcctacg aacaggaact caaagacgca ttaggaggga aacatggcta a 2511

Claims (9)

1. 박테리오파지 PP2 (기탁번호 : KACC 97029P) 및 카로신 D를 유효성분으로 포함하는 채소 무름병 방제용 조성물.
2. 제1항에 있어서, 상기 박테리오파지 PP2는 서열목록 1의 염기 서열을 갖는 것을 특징으로 하는 채소 무름병 방제용 조성물.
3. 제1항에 있어서, 상기 카로신 D는 서열목록 2의 아미노산 서열을 갖는 것을 특징으로 하는 채소 무름병 방제용 조성물.
4. 제1항에 있어서, 상기 채소 무름병은 펙토박테리움 카로토보룸 종 (Pectobacterium carotovorum species) 및 펙토박테리움 아트로셉티쿰 종(Pectobacterium atrosepticum species) 중 어느 하나 이상으로 인해 발병되는 것을 특징으로 하는 채소 무름병 방제용 조성물.
5. 제1항에 있어서, 상기 채소는 배추 또는 상추인 것을 특징으로 하는 채소 무름병 방제용 조성물.
6. 박테리오파지 PP2 (기탁번호 : KACC 97029P) 및 카로신 D를 유효성분으로 포함하는 펙토박테리움 카로토보룸 종(Pectobacterium carotovorum species) 증식 억제 또는 사멸용 조성물.
7. 박테리오파지 PP2 (기탁번호 : KACC 97029P) 및 카로신 D를 유효성분으로 포함하는 펙토박테리움 아트로셉티쿰 종(Pectobacterium atrosepticum species) 증식 억제 또는 사멸용 조성물.
8. 박테리오파지 PP2 (기탁번호 : KACC 97029P) 및 카로신 D를 사용하는 채소 무름병 방제 방법.
9. 박테리오파지 PP2 (기탁번호 : KACC 97029P) 및 카로신 D를 사용하는 펙토박테리움 카로토보룸 종 (Pectobacterium carotovorum species) 및 펙토박테리움 아트로셉티쿰 종(Pectobacterium atrosepticum species) 중 어느 하나 이상의 증식 억제 또는 사멸하는 방법.

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