CN110367284A - 一种生物农药组合物及其制备方法和在防治生姜姜瘟病中的应用 - Google Patents

一种生物农药组合物及其制备方法和在防治生姜姜瘟病中的应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种生物农药组合物，包括解淀粉芽孢杆菌TR‑01(Bacillus amyloliquefaciens TR‑01)和噻森铜。本发明还公开了该生物农药组合物的制备方法及用于防治生姜姜瘟病的应用。本发明的生物农药组合物能够有效控制姜瘟病，并且在应用中解淀粉芽孢杆菌TR‑01和噻森铜的协同使用效果显著高于各自单剂的使用效果，在保证稳定防效的同时还大大的减少了噻森铜的使用量，减少环境污染，降低了对人安全健康的影响。

Description

一种生物农药组合物及其制备方法和在防治生姜姜瘟病中的 应用
技术领域
本发明涉及杀菌剂技术领域，更具体涉及一种生物农药组合物及其制备方法和在防治生姜姜瘟病中的应用。
背景技术
化学农药在有害生物防治中有着突出的优势，见效快、击倒力强，能在几天甚至是数小时内杀死有害生物，操作、使用简单直接，防治谱广，部分产品可以针对许多种类的农业有害生物，且效果显著，经济效益显著，国内外市场还有较大的需求。目前在农药大量使用情况下，全球仍有35％的农作物产量损失。根据联合国粮农组织(FAO)的调查，全世界每年被病虫害夺去的谷物量为预计收成量的20％-40％，经济损失达1200亿美元，因此，在以后的数十年化学农药仍然是植物保护的主体。
随着现代生物学技术和基因工程的发展以及它们在农药中的应用，生物农药的兴起已成为历史发展的趋势，近20年已经有了很大的发展，在世界范围内大概有1400种生物农药产品进行商业销售。生物农药的优势在于对非靶标生物、人畜、环境相对安全，多数只对某种特定病虫害起作用；能自然代谢，残留低、降解快；开发利用途径多，如天敌昆虫可人工繁育或引种，也可利用生物工程、基因重组、基因转化等多种途径开发生物化学农药；作用机理复杂、独特，它们的作用方式和靶标一般也较为复杂多样，与传统的神经毒剂不同；种类繁多，研发的选择余地大，自然界中动物、植物、微生物凡对病虫害有控制作用的活体或有效成分都可以作为研发的对象。
近年来化学农药毒性、残留、污染等问题越来越受到人们的关注，而生物农药则被过分的渲染，认为生物农药很快就会取代化学农药，这种观点是不科学的。生物农药是否会取代化学农药是多方面因素共同作用的结果，也取决于它们各自的发展水平和其产品在市场上的认可度，而不能主观臆断。而且生物农药也存在一些不足，如田间使用受环境因素的影响较大，防治效果不稳定等。施用化学农药和生物农药都是病虫害防治的有效手段，各有所长，它们应该在有害生物综合治理(IPM)原理的指导下，结合实际择优互补使用。现今，利用化学防治与生物防治相结合的协同增效作用进行作物病虫害防治的策略越来越受到各国植物保护专家的重视，这种策略既能有效控制病虫害，又能降低化学农药的使用量，是一种有效的有害生物综合治理手段。现今已有很多利用生物防治与化学防治协同使用的手段进行病害防治研究的实例，并且取得了较好的成效。
生姜姜瘟病是由青枯假单孢杆菌引起的一种传染病，是生姜最为严重的疾病，造成生姜严重减产，发病后一般减产20％～30％，重者达60％～80％，甚至失收。主要危害根茎，大多在近地面的茎基部和地下根茎上半部先发病。病菌在土壤及种姜内越冬，并可在土壤内存活2年。播种病姜后，在田间零星发生病，通过流水和地下害虫传播，造成全田发病，蔓延十分迅速。目前，通常是采用选择抗病性强的生姜品种和轮作套种的方式来防治姜青枯病，但是由于环境、管理等因素的干扰，其防治效果不理想。此外，由于姜瘟本身属于土传病害，采用青枯灵、姜瘟净等化学制剂的防治效果会受到限制，加之其病原菌容易产生耐药性，并且还会对环境造成严重污染以及造成药物残留。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是，克服以上背景技术中提到的不足和缺陷，提供一种生物农药组合物及其在防治生姜姜瘟病中的应用。
为解决上述技术问题，本发明提出的技术方案为：
一种生物农药组合物，所述生物农药组合物包括解淀粉芽孢杆菌TR-01(Bacillusamyloliquefaciens TR-01)和噻森铜，所述解淀粉芽孢杆菌TR-01(Bacillusamyloliquefaciens TR-01)保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为：CGMCC No.13485，保藏时间为2016年12月23日，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，邮编100101。
上述的生物农药组合物，优选的，所述生物农药组合物以重量百分数计包括：解淀粉芽孢杆菌TR-01(Bacillus amyloliquefaciens TR-01)10％-50％和噻森铜50％-90％。
优选的，所述解淀粉芽孢杆菌TR-01为解淀粉芽孢杆菌TR-01的菌悬液或芽孢沉淀，所述噻森铜为20％噻森铜(悬浮剂，有效成分含量：20％，浙江东风化工有限公司生产)。
优选的，所述解淀粉芽孢杆菌TR-01的菌悬液中菌株含量为20-100亿株/克。
优选的，所述20％噻森铜的浓度为100-500mg·kg-1。
基于一个总的技术构思，本发明还提供一种生物农药组合物的制备方法，包括如下步骤：
(1)将所述解淀粉芽孢杆菌TR-01菌株接种在LB固体培养基中，放进生化培养箱30℃培养4-8h后，将活化的解淀粉芽孢杆菌TR-01菌株接种于LB液体培养基中，于30℃的摇床中培养22-26h后，得到解淀粉芽孢杆菌TR-01的菌悬液；
(2)将所述步骤(1)后得到的菌悬液与噻森铜按比例混合，即得到所述的生物农药组合物。
本发明还提供另一种生物农药组合物的制备方法，包括如下步骤：
A)将所述解淀粉芽孢杆菌TR-01菌株接种于LB液体培养基中，于28℃摇床中培养5天，得到的菌悬液离心后去上清液，在75℃水浴锅中水浴10-20min获得芽孢沉淀，芽孢沉淀先用1.0M NaCl洗涤两遍，然后用灭菌的0.05M磷酸缓冲液洗涤三遍，离心后获得解淀粉芽孢杆菌TR-01的芽孢沉淀；
B)将所述步骤A)后得到的芽孢沉淀与噻森铜按比例混合，即得到所述的生物农药组合物。
基于一个总的技术构思，本发明还提供一种由上述的生物农药组合物在防治生姜姜瘟病中的应用，优选的，将所述生物农药组合物制成可湿性粉剂、粉剂、颗粒剂或水剂，所述生物农药组合物用300-500倍重量的水稀释后按照50L/亩对生姜进行喷雾或灌根。
解淀粉芽孢杆菌TR-01(Bacillus amyloliquefaciens TR-01)是从姜青枯病的区健康生姜植株及根围土壤分离获得的内生菌。具有一定的抗菌活性，能够产生抗菌蛋白及小分子的抗菌物质，从而能够对动植物的病原菌产生拮抗的作用。和大多数植物内生菌相同，由于能够在植物的体内占据有利的生态位点而定殖、与植物形成协同关系、产生一些抗菌的活性物质，是一种比较理想的生防微生物，可开发成生物农药用来防治农作物的病原菌。
噻森铜是噻唑类有机铜杀菌剂，对水稻白叶枯病、细菌性条斑病、白菜软腐病和生姜姜瘟病具有良好防效，是田间防治细菌病害的常用药剂。噻森铜具有高效、速效的优点，但也存在着靶标生物产生抗药性风险、生产成本高的缺点。
解淀粉芽孢杆菌TR-01是土壤中筛选出的生防细菌，这样的生防菌株对环境无害，并且在土壤中具有较好的适应能力，应用在姜青枯病中效果更佳，噻森铜具备高效广谱、毒性低、安全环保、无公害的特点，两者协同使用防治植物病害既能最大程度弥补化学农药和生物农药的缺点，又能发挥两者的优势，减少农药的使用，保护环境，降低农药残留。解淀粉芽孢杆菌TR-01和噻森铜的协同使用效果显著高于各自单剂的使用效果，在保证稳定防效的同时还大大的减少了噻森铜的使用量，减少环境污染，降低了对人安全健康的影响。
与现有技术相比，本发明的有益效果为：
本发明的生物农药组合物能够有效控制姜瘟病，并且在应用中解淀粉芽孢杆菌TR-01和噻森铜的协同使用效果显著高于各自单剂的使用效果，在保证稳定防效的同时还大大的减少了噻森铜的使用量，减少环境污染，降低了对人安全健康的影响。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1是实施例中TR-01菌悬液对生姜姜瘟病菌的抑制效果(a、TR-01菌悬液；b、TR-01发酵滤液；c、清水)；
图2是实施例中TR-01菌悬液和20％噻森铜(a、100mg·kg-1；b、200mg·kg-1；c、300mg·kg-1；d、400mg·kg-1；e、500mg·kg-1)对生姜姜瘟病菌的协同抑制效果。
具体实施方式
为了便于理解本发明，下文将结合说明书附图和较佳的实施例对本发明做更全面、细致地描述，但本发明的保护范围并不限于以下具体实施例。
除非另有定义，下文中所使用的所有专业术语与本领域技术人员通常理解含义相同。本文中所使用的专业术语只是为了描述具体实施例的目的，并不是旨在限制本发明的保护范围。
除非另有特别说明，本发明中用到的各种原材料、试剂、仪器和设备等均可通过市场购买得到或者可通过现有方法制备得到。
实施例：
一种本发明的生物农药组合物，以重量百分数计，包括解淀粉芽孢杆菌TR-01(Bacillus amyloliquefaciens TR-01)10-50％和20％噻森铜悬浮剂(SC)50％-90％。其中，20％噻森铜悬浮剂由浙江东风化工有限公司提供，20％噻森铜悬浮剂的浓度为100-500mg·kg-1；解淀粉芽孢杆菌TR-01可以是菌株菌悬液，也可以是芽孢沉淀，菌株菌悬液中菌株含量为20-100亿株/克。
该解淀粉芽孢杆菌TR-01(Brevibacillus brevis)TR-01是从病区烟草植株体内分离获得的内生菌，其保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为：CGMCC No.13485，保藏时间为2016年12月23日，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，邮编100101。该解淀粉芽孢杆菌TR-01的分离筛选过程如下：
1)供筛细菌的分离及纯化
取出从浙江金华、杭州等地采取患有姜青枯病的田块里的健康生姜植株及根围土壤，土壤10g放入已消毒的200ml的三角瓶中，再向其中加入100ml无菌水，放入振荡培养箱中(180r/min)振荡培养15min并以此浓度为标准浓度。培养好后，在超净工作台下对已混合均匀的样本进行稀释处理，用移液枪取100μL土壤悬浮液加入已灭菌的2mL离心管中，再用移液枪加入900μL无菌水中到该离心管中，振荡混匀，标记为溶液1，该土壤悬浮液的体积浓度记为10-1。再从溶液1中，用移液枪移取100μL溶液加入2mL离心管，再加入900μL无菌水中振荡混匀标记为溶液2，体积浓度记为10-2，依次稀释土壤悬浮液，后得到浓度为10-3、10-4、10-5的溶液，分别记为溶液3、溶液4、溶液5。用移液枪吸取溶液1中100μL的土壤悬浊液，加入到LB固体平板中，用接种环推平，标号为Y-1，用封口膜封好后倒置培养(溶液1、2、3、4、5分别重复三次该实验)。之后将其放入培养箱中，倒置培养24h。
从培养箱中取出已经培养好的细菌，通过观察，选取出菌落分布较为均匀的平板(此实验中在溶液4浓度下的平板上，细菌菌落分布较为均匀)。在经20min紫外灭菌后的超净工作台下，先用接种环分别挑取这些平板内的单独的细菌菌落，然后在倒置好的平板内划线培养，以此方法来得到纯的细菌菌落，以供筛选。
2)拮抗细菌的筛选
将之前从生姜块茎中提取出的纯的青枯病菌，在紫外灭菌20min后的超净工作台下，加入到50℃左右，尚未冷却凝结的LB固体培养基中，摇匀，倒入已经准备好的培养皿中，冷却凝结。再从姜块茎周围土壤中提取出的纯的细菌菌落，用接种环挑取加入到带有青枯菌的LB固体培养皿中，倒置培养24h。最终挑选出对青枯病菌具有拮抗作用的菌落(抑菌圈直径达到12mm)，初步命名为TR-01。
LB固体培养基的配方：胰化蛋白胨10g，酵母提取物5g，NaCl 10g，琼脂粉15g，pH＝7。
3)解淀粉芽孢杆菌TR-01的鉴定
TR-01形态特征：TR-01菌落在LB培养基上呈淡黄色，圆形，表面光滑，不透明。
Biolog鉴定：采用Biolog Gen III微孔板对供试细菌进行鉴定，4-6h培养鉴定结果SIM值≥0.75是可以接受的结果；16-24h培养后读取结果时，SIM值≥0.5是可以接受的结果。经18h培养，经仪器自动扫描读数并查询细菌数据库，以SIM值≥0.5为标准，将TR-01鉴定为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)，其SIM值为0.673，PROB值为0.977，DIST值为5.774。
分子鉴定：采用试剂盒提取菌株DNA，所用扩增引物由华大基因公司合成：
上游引物(如SEQ ID NO.1所示)为5’-AGAGTTTGATCMTGGCTCAG-3’；
下游引物(如SEQ ID NO.2所示)为5’-TACGGCTACCTTGTTACGACTT-3’。
扩增反应体系为：10×Buffer(Mg2+)4μl，dNTPs 3μl，引物各1μl，菌体DNA 2μl，TaqDNA聚合酶1μl，加去离子水至50μl。
PCR反应条件：94℃5min，94℃30s，55℃40s，72℃60s；40个循环；最后于72℃保存10min。
PCR产物采用琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒进行目的片段回收，回收产物测序工作由华大基因公司完成。测序结果进入GenBank数据库进行比对。将TR-01的16S rDNA序列共2377bp与解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)(N1564-A29)的同源性为100％，与Biolog鉴定的结果吻合，因此将该菌株TR-01鉴定为解淀粉芽孢杆菌(Bacillusamyloliquefaciens)。
解淀粉芽孢杆菌TR-01菌悬液制备方法为：用接种环从装有解淀粉芽孢杆菌TR-01菌株的试管中将解淀粉芽孢杆菌TR-01菌株接种在LB固体培养基(酵母提取物5g，蛋白胨10g，NaCl 10g，琼脂15g，无菌水1000mL，PH 7.0)平板上划线，然后将接种后的平板放进生化培养箱30℃培养，活化解淀粉芽孢杆菌TR-01菌株；待培养4-8h后，用接种环将LB固体培养基中的解淀粉芽孢杆菌TR-01菌株接种于LB液体培养基(胰蛋白胨10g，酵母提取物5g，氯化钠10g，蒸馏水1000ml，pH7.0)，于180rpm、30℃摇床中培养24h，即得到解淀粉芽孢杆菌TR-01的菌悬液。
解淀粉芽孢杆菌TR-01芽孢沉淀制备方法为：将解淀粉芽孢杆菌TR-01接种于LB液体培养基(胰蛋白胨10g，酵母提取物5g，氯化钠10g，蒸馏水1000ml，pH7.0)中，于180rpm、28℃摇床中培养，5天后，菌悬液于离心机中8000r/min离心15min，去上清液后75℃水浴锅中水浴15min获得芽孢沉淀，沉淀先用1.0M NaCl洗涤两遍，然后用灭菌的0.05M磷酸缓冲液(PBS，PH 7.0)洗涤三遍，离心后获得解淀粉芽孢杆菌TR-01的芽孢沉淀。
将上述得到的解淀粉芽孢杆菌TR-01菌悬液或解淀粉芽孢杆菌TR-01芽孢沉淀与噻森铜按比例混合，即得到所述的生物农药组合物。
本发明的生物农药组合物可加入常规助剂，经常规工艺可加工成可湿性粉剂、粉剂、颗粒剂、水剂等常规剂型，施用方式为用300-500倍重量的水稀释后按照50L/亩对生姜进行喷雾或灌根。
1、解淀粉芽孢杆菌TR-01菌悬液的抑菌活性测定：
采用抑菌圈法，将生姜姜瘟病菌活化，液体摇菌36-48h，吸取液体培养后的生姜姜瘟病菌菌液600μL，移入融化的的LB 200mL的固体培养基中，摇匀，倒板；在凝固好的平板打孔，吸取解淀粉芽孢杆菌TR-01的菌悬液30μL打入孔内(处理号：a)，再在其他平板上打孔注入离心过的解淀粉芽孢杆菌TR-01的菌悬滤液30μL(处理号：b)，同时在另外的平板上打孔注入清水作为对照(处理号：c)。每组处理设置三个重复，倒置培养36-48h，观察生姜姜瘟病菌的生长(如图1)及是否出现抑菌圈，并测量抑菌圈的直径，见表1。
表1：解淀粉芽孢杆菌TR-01的菌悬液对生姜姜瘟病菌的拮抗作用
实验结果表明，解淀粉芽孢杆菌TR-01菌悬液和TR-01菌悬滤液对生姜姜瘟病菌都具有明显的抑制作用。
2、解淀粉芽孢杆菌TR-01与不同浓度噻森铜的相容性测定：
分别配制浓度100mg·kg-1、200mg·kg-1、300mg·kg-1、400mg·kg-1、500mg·kg-1的20％噻森铜悬浮剂(SC)溶液，按照20％噻森铜悬浮剂(SC)︰TR-01菌悬液体积比200︰1加入TR-01菌悬液后摇培，观察TR-01在噻森铜溶液中的生长情况，同时设置只加入TR-01菌悬液不加入噻森铜的空白对照。吸取各个浓度的噻森铜和TR-01的混合液500μL到离心管中，然后以10000r/s的转速离心10min后，将上清液倒掉得到菌体；再吸取1000μL的无菌水，上下颠倒，继续离心10min，以上步骤重复3次后，得到清洗干净的解淀粉芽孢杆菌TR-01菌体。将生姜姜瘟病菌活化，液体摇菌36-48h，吸取液体培养后的生姜姜瘟病菌600μL，移入融化的LB固体培养基200mL中，摇匀，倒板；选取凝固好的平板，在平板上用打孔器打孔，在孔内注入离心清洗3次后的解淀粉芽孢杆菌TR-01菌体。每个浓度设置三个重复。放入恒温箱倒置培养36-48h，观察菌落的生长(如图2所示)，测量抑菌圈的直径，见表2。
表2：TR-01菌株菌悬液和20％噻森铜悬浮剂(SC)对生姜姜瘟病的协同抑制作用
实验结果表1和表2显示，TR-01菌悬液和20％噻森铜悬浮剂(SC)两者混合的抑菌带宽度最小值达到1.73要大于TR-01菌悬液单独的抑菌带宽度最大值1.53，通过表2结果可以得知TR-01菌悬液(1.0×108cfu·mL-1)与500mg·kg-1的20％噻森铜悬浮剂(SC)协同防治效果最佳，因此20％的噻森铜(SC)不仅不会对TR-01菌的生长造成不利影响，两者具有良好的相容性，而且两者结合后能够有效控制姜瘟病病菌，效果显著高于单独采用TR-01菌悬液的使用效果。
3、解淀粉芽孢杆菌TR-01与20％噻森铜协同防控姜瘟的盆栽试验：
在生姜苗的四到六叶期，将生姜的幼苗移植到塑料盆(高11cm，直径16.5cm)，每个灌装混合物(田间土：营养土＝2:1)。待生姜幼苗长大些，用本发明的生物农药组合物(TR-01菌悬液和20％噻森铜的重量百分比各为50％)用400倍重量的水稀释后对生姜进行灌根，然后使用青枯菌液诱导生姜苗发病，保证发病条件(高温高湿)。每种处理设置五个重复，接种后两周确定疾病发病率，14d后记录发病情况，计算病情指数及相对防治效果，实验做两次。关于解淀粉芽孢杆菌TR-01和20％噻森铜对生姜幼苗的综合作用的实验处理如下：
数据计算：
病情指数＝∑[各级病叶数×相应级数]×100/调查总叶数×5
防治效果(％)＝(病情指数-处理病情指数)/病情指数×100
校正防效(％)＝[1－(处理区药后病情指数×对照药前病情指数)×对照药前病情指数)/处理区药前病情指数×对照药后病情指数×100
测量得到的实验数据如表3所示。
表3：解淀粉芽孢杆菌TR-01和噻森铜对生姜姜瘟的盆栽实验
由试验结果可以看出，解淀粉芽孢杆菌TR-01与20％噻森铜悬浮剂(SC)协同使用能够有效的防治姜瘟，两者的协同使用效果显著高于各自单剂的使用效果。20％噻森铜(SC)300mg·kg-1的20％噻森铜(SC)与TR-01(1.0×108cfu·mL-1)菌悬液混合使用的防效达到了69.78％，与单剂500mg·kg-1的20％噻森铜(SC)的防效无显著性差异，在保证稳定防效的同时还大大的减少了20％噻森铜(SC)的使用量。
综上可知，本发明的生物农药组合物能够有效控制姜瘟病，并且在应用中解淀粉芽孢杆菌TR-01和噻森铜的协同使用效果显著高于各自单剂的使用效果，在保证稳定防效的同时还大大的减少了噻森铜的使用量，减少环境污染，降低了对人安全健康的影响。

Claims (10)

1.一种生物农药组合物，其特征在于，所述生物农药组合物包括解淀粉芽孢杆菌TR-01(Bacillus amyloliquefaciens TR-01)和噻森铜，所述解淀粉芽孢杆菌TR-01(Bacillusamyloliquefaciens TR-01)保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为：CGMCC No.13485，保藏时间为2016年12月23日。
2.根据权利要求1所述的生物农药组合物，其特征在于，所述生物农药组合物以重量百分数计包括：解淀粉芽孢杆菌TR-01(Bacillus amyloliquefaciens TR-01)10％-50％和噻森铜50％-90％。
3.根据权利要求2所述的生物农药组合物，其特征在于，所述解淀粉芽孢杆菌TR-01为解淀粉芽孢杆菌TR-01的菌悬液或芽孢沉淀，所述噻森铜为20％噻森铜。
4.根据权利要求3所述的生物农药组合物，其特征在于，所述解淀粉芽孢杆菌TR-01的菌悬液中菌株含量为20-100亿株/克。
5.根据权利要求3所述的生物农药组合物，其特征在于，所述20％噻森铜的浓度为100-500mg·kg-1。
6.一种如权利要求1-5中任一项所述的生物农药组合物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)将所述解淀粉芽孢杆菌TR-01菌株接种在LB固体培养基中，放进生化培养箱30℃培养4-8h后，将活化的解淀粉芽孢杆菌TR-01菌株接种于LB液体培养基中，于30℃的摇床中培养22-26h后，得到解淀粉芽孢杆菌TR-01的菌悬液；
(2)将所述步骤(1)后得到的菌悬液与噻森铜按比例混合，即得到所述的生物农药组合物。
7.一种如权利要求1-5中任一项所述的生物农药组合物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
A)将所述解淀粉芽孢杆菌TR-01菌株接种于LB液体培养基中，于28℃摇床中培养5天，得到的菌悬液离心后去上清液，在75℃水浴锅中水浴10-20min获得芽孢沉淀，芽孢沉淀先用1.0M NaCl洗涤两遍，然后用灭菌的0.05M磷酸缓冲液洗涤三遍，离心后获得解淀粉芽孢杆菌TR-01的芽孢沉淀；
B)将所述步骤A)后得到的芽孢沉淀与噻森铜按比例混合，即得到所述的生物农药组合物。
8.一种由权利要求1-5中任一项所述或由权利要求6或7所述的制备方法得到的生物农药组合物在防治生姜姜瘟病中的应用。
9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，将所述生物农药组合物制成可湿性粉剂、粉剂、颗粒剂或水剂。
10.根据权利要求8或9所述的应用，其特征在于，所述生物农药组合物用300-500倍重量的水稀释后按照50L/亩对生姜进行喷雾或灌根。
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