CN106011030B - 一种诱变菌株Bs6602v及其应用 - Google Patents

一种诱变菌株Bs6602v及其应用 Download PDF

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Abstract

本发明属于植物生防菌研发技术领域，具体涉及的是一种诱变菌株Bs6602v及其应用。一种诱变菌株Bs6602v，其分类学命名为枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis，于2016年03月03日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC No.12159。本发明是以前期筛选获得的枯草芽孢杆菌Bs6602菌株作为出发菌株，采用紫外线‑亚硝酸钠复合诱变法对其进行诱变处理，筛选出对香蕉炭疽病抑菌活性更强、传代稳定的正突变菌株Bs6602v，其抑菌活性比出发菌株提高83.80％。

Description

一种诱变菌株Bs6602v及其应用
技术领域
本发明属于植物生防菌研发技术领域，具体涉及的是一种诱变菌株Bs6602v及其应用。
背景技术
香蕉炭疽病由芭蕉炭疽菌(Colletotrichum musae)侵染引起，在香蕉大田生长期间就潜伏在果皮内，在香蕉采后贮运期间随着果实成熟逐渐显现症状，造成蕉果严重腐烂，是香蕉采后贮藏、运输过程中发生的主要病害之一。目前对该病的防治主要还是采用化学药剂。然而长期大量使用化学药剂，会使病原菌产生抗药性，也会造成农药残留，污染环境，危害人类健康。因此，采用无污染、无公害的采后处理方法防治香蕉炭疽病，已引起研究人员的广泛关注和重视。
枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)是一种大量存在于自然界的重要细菌，其生长快、营养简单、并形成抗逆能力较强的芽孢，对多种植物病原真菌具有较好的拮抗作用，因此被广泛应用到农业、环保等领域。自1945年Johnson发现枯草芽孢杆菌产生抗菌物质以后，便开始有大量的利用枯草芽孢杆菌防治植物病害的研究报道。Papavizas等人曾用枯草芽孢杆菌防治水稻的土传病害。Hwang等报道枯草芽孢杆菌可防治豌豆的Rhizoctonia根腐病。王雅平等从丝瓜根际土壤分离的枯草芽孢杆菌TG26菌株对小麦赤霉病和西瓜枯萎病有较强的抑制作用。顾真荣等用枯草芽孢杆菌G3防治菜豆和茄子苗期炭疽病和菌核病。尹华群等从烟草青枯病流行区分离到1株内生枯草芽孢杆菌，该菌株的田间防效为82.5％。然而，目前利用枯草芽孢杆菌对香蕉炭疽病进行防治的报道仍不多见。
本发明是以前期筛选获得的1株野生优良的枯草芽孢杆菌Bs6602菌株作为出发菌株，采用紫外线-亚硝酸钠复合诱变法对其进行诱变处理，筛选出对香蕉炭疽病抑菌活性更强、传代稳定的正突变菌株Bs6602v，并探讨其与化学药剂复配后的抗病效果，以提高其对香蕉炭疽病的防效，旨在为香蕉炭疽病的无害化防治和香蕉病害微生物农药的研制提供可以利用的资源。
公开于该背景技术部分的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解，而不应当被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已为本领域一般技术人员所公知的现有技术。
发明内容
本发明解决的问题在于提供一种诱变菌株Bs6602v及其应用，该菌是以前期筛选获得的枯草芽孢杆菌Bs6602菌株作为出发菌株，采用紫外线-亚硝酸钠复合诱变法对其进行诱变处理，筛选出对香蕉炭疽病抑菌活性更强、传代稳定的正突变菌株Bs6602v。
本发明的目的通过如下技术方案实现：
一种诱变菌株Bs6602v，其分类学命名为枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis，于2016年03月03日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCCNo.12159。
本发明还提供了所述的诱变菌株Bs6602v的复合诱变方法，包括以下步骤：
(1)先将20w紫外灯预热20min，取15mL浓度为108CFU/mL的菌株Bs6602种子液至灭菌的培养皿，放置在磁力搅拌器上搅拌，调整照射距离为50cm，打开皿盖，搅拌照射15s；
(2)再将菌株Bs6602种子液中加入灭菌的3mol/L NaNO2溶液，使NaNO2浓度达到300mmol/L，充分混匀后反应60min，即得到突变菌株Bb6602v。
本发明还提供了所述的诱变菌株Bs6602v在抑制植物病原真菌芭蕉炭疽菌、香蕉新月弯孢霉、香蕉嘴突脐蠕孢、香蕉小窦氏霉、香蕉链格孢、香蕉弥泽那拟盘多毛孢、香蕉多主棒孢、香蕉大茎点霉、香蕉串珠镰孢、尖孢镰孢菌西瓜专化型、尖孢镰孢菌古巴专化型、龙眼链格孢和胶孢炭疽菌中的用途。
本发明还提供了所述的诱变菌株Bs6602v在防治香蕉炭疽病中的用途。
与现有技术相比，本发明具有以下有益的技术效果：
1.本发明是以前期筛选获得的1株野生优良的枯草芽孢杆菌Bs6602菌株作为出发菌株，采用紫外线-亚硝酸钠复合诱变法对其进行诱变处理，筛选出对香蕉炭疽病抑菌活性更强、传代稳定的正突变菌株Bs6602v，其抑菌活性比出发菌株提高83.80％。
2.本发明的诱变菌株Bs6602v在抑制植物病原真菌芭蕉炭疽菌、香蕉新月弯孢霉、香蕉嘴突脐蠕孢、香蕉小窦氏霉、香蕉链格孢、香蕉弥泽那拟盘多毛孢、香蕉多主棒孢、香蕉大茎点霉、香蕉串珠镰孢、尖孢镰孢菌西瓜专化型、尖孢镰孢菌古巴专化型、龙眼链格孢和胶孢炭疽菌中的用途，其中，对香蕉多主棒孢的抑菌活性最强，抑菌圈直径达66.39mm。
3.本发明提供的菌株Bs6602v菌株的抑菌谱测试结果表明，其对13种植物病原真菌具有较强的抑菌活性，其中对香蕉多主棒孢的抑菌活性最强，抑菌圈直径达66.39mm。对香蕉炭疽病防治的试验结果表明，香蕉贮藏15d后，Bs6602v菌株的防效明显高于出发菌株，为63.94％；Bs6602v菌株与43 200倍咪鲜胺稀释液混用后，其防效最高达70.27％，与咪鲜胺1350倍稀释液防效相当，表明该菌株与低浓度咪鲜胺复配后，对香蕉炭疽病的防治具有一定的增效作用，在生产上应用时可达到减少农药使用量的目的。
保藏信息说明
枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis 6602v，保藏编号为CGMCC No.12159，保藏日期为2016年03月03日，保藏单位为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所。
附图说明
图1为紫外诱变时间对Bs6602菌株致死率的影响；
图2为NaNO2浓度对Bs6602菌株致死率的影响；
图3为NaNO2诱变时间对Bs6602菌株致死率的影响；
图4为拮抗菌株对香蕉炭疽病菌的抑菌作用；
图5为Bs6602v菌株的遗传稳定性；
图6为突变菌株Bs6602v对13种植物病原真菌的抑制作用；
有关附图标记的说明：
a-Bs6602菌株；b-诱变菌株Bs6602v；1-尖孢镰孢菌西瓜专化型；2-香蕉新月弯孢霉；3-龙眼链格孢；4-香蕉链格孢；5-尖孢镰孢菌古巴专化型；6-香蕉串珠镰孢；7-胶孢炭疽菌；8-香蕉弥泽那拟盘多毛孢；9-香蕉大茎点霉；10-芭蕉炭疽菌；11-香蕉嘴突脐蠕孢；12-香蕉小窦氏霉；13-香蕉多主棒孢。
具体实施方式
下面结合具体的实施例对本发明做进一步的详细说明，所述是对本发明的解释而不是限定。
下述实施例中所用的材料和试剂，如无特殊说明，均可从商业途径得到。下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
实施例1：
1材料与方法
1.1材料
1.1.1供试菌株
拮抗菌：枯草芽孢杆菌Bs6602菌株，从香蕉根围分离筛选得到。
病原菌：芭蕉炭疽菌(Colletotrichum musae)、香蕉新月弯孢霉(Curvularialunata)、香蕉嘴突脐蠕孢(Exserohilum rostratum)、香蕉小窦氏霉(Deightoniellatorulosa)、香蕉链格孢(Alternaria musae)、香蕉弥泽那拟盘多毛孢(Pestalotiopsismenezesiana)、香蕉多主棒孢(Corynespora cassiicola)、香蕉大茎点霉(Macrophomamusae)、香蕉串珠镰孢(Fusarium moliforme)、尖孢镰孢菌西瓜专化型(Fusariumoxysporum f.sp.niveum)、尖孢镰孢菌古巴专化型(Fusarium oxysporum f.sp.cubense)、龙眼链格孢(Alternaria alternata)、胶孢炭疽菌(Colletotrichum gloeosporioidesPenz)。以上菌株均由广西农业科学院微生物研究所生物防治研究室分离保存。
1.1.2培养基
NA培养基：牛肉膏3g，蛋白胨10g，NaCl 5g，琼脂15g，水1 000mL，pH 7.0；以不加琼脂作为液体培养基。
PSA培养基：马铃薯去皮后，取200g切成小块煮沸30min，用纱布过滤，滤汁加入蔗糖20g，琼脂15g，充分溶解后，补水至1 000mL。
1.1.3供试香蕉
试验香蕉品种为‘威廉斯B6’，采自广西南宁市武鸣县香蕉园，采收前3个月内未喷施杀菌剂。
1.2方法
1.2.1拮抗菌种子液的制备
将拮抗菌株接入NA液体培养基中，置28℃，120r/m振荡培养16h后，5 000r/m离心3min，弃上清液，沉淀用无菌水洗涤3次，制成108cfu/mL的菌悬液，4℃保存备用。
1.2.2拮抗菌发酵液的制备
将拮抗菌株的种子液按1％(V/V)接种量移入NA液体培养基中，于28℃，120r/m振荡培养72h，即得发酵液，此时菌液浓度约为109cfu/mL。
1.2.3拮抗菌株抑菌活性的测定
将香蕉炭疽病菌接入PSA试管斜面上，于28℃下恒温培养10d，每管加入5mL无菌水，轻微振荡将孢子洗下，收集得到香蕉炭疽病菌的孢子悬浮液(孢子浓度约为106cfu/mL)，4℃保存备用。
在9cm培养皿中加入5mL熔化的2％水琼脂，冷凝后在平板上距中央2.5cm处对称放置3个灭菌牛津杯。将熔化的PSA培养基冷却至45℃，加入1％(V/V)香蕉炭疽病菌孢子液，振荡摇匀，迅速加入到琼脂平板上，待凝固后取出牛津杯，形成直径7mm的小孔，置28℃培养6h。将待测拮抗菌株的发酵液于5 000r/m离心3min，上清液用细菌过滤器过滤后，分别取20μL加入每个小孔，以无菌水为对照，每处理重复3次，每重复3个平板。然后置28℃下恒温培养，48h后测量抑菌圈直径d(mm)。计算突变菌株的抑菌活性提高率：
抑菌活性提高率(％)＝(d突变菌株﹣d出发菌株)/(d出发菌株-7)×100
1.2.4Bs6602菌株紫外诱变条件的确定
20w紫外灯预热20min后，取15mL Bs6602菌株的种子液至灭菌的培养皿中(内置一灭菌磁力搅拌子)，并放置在磁力搅拌器上，调整照射距离为50cm，打开皿盖后，分别搅拌照射5、10、15、20、25、30和35s；以未经紫外照射的菌液为对照，每个处理3次重复。用无菌水将照射后的菌液进行适当稀释，分别取100μL涂布至NA平板上，置28℃下避光培养，诱变后所有操作均在红灯下进行。24h后，对平皿上的单菌落进行计数，计算致死率。选择致死率90％左右的条件为紫外诱变的最适条件。
致死率(％)＝(对照活菌数-诱变后活菌数)/对照活菌数×100。
1.2.5Bs6602菌株亚硝酸钠诱变条件的确定
分别取5mL Bs6602菌株的种子液，测定亚硝酸钠诱变的最适浓度时，加入灭菌的3mol/L NaNO2溶液，使NaNO2浓度分别为25、50、100、150、200、250、300和350mmol/L，充分混匀后反应30min；而测定亚硝酸钠诱变的最适时间时，则加入600μL灭菌的3mol/L NaNO2溶液和400μL无菌水，充分混匀后反应10、20、30、40、50、60和70min。最后分别加入300μL5.6mol/L的Na2HPO4缓冲液(pH 8.6)终止反应，以未经NaNO2处理的菌液为对照，每个处理3次重复。用无菌水将处理后的菌液进行适当稀释，各取100μL涂布至NA平板上，于28℃下培养24h后，对平皿上的单菌落进行计数，计算致死率。致死率计算同1.2.4。选择致死率90％左右的条件为亚硝酸钠诱变的最适条件。
1.2.6Bs6602菌株的紫外线-亚硝酸钠复合诱变
将Bs6602菌株的种子液以紫外诱变的最适条件进行诱变反应，对诱变后平皿上的单菌落进行抑菌活性的测定。然后选取抑菌活性最高的5株突变菌株以亚硝酸钠诱变的最适条件进行诱变反应，对诱变后平皿上的单菌落进行抑菌活性的测定，保存抑菌活性最高的5株突变菌株。Bs6602菌株的紫外线-亚硝酸钠复合诱变共进行2次。
1.2.7诱变菌株的遗传稳定性测定
将经紫外线-亚硝酸钠复合诱变得到的抑菌活性最高的诱变菌株，转接到NA试管斜面上，28℃下培养24h，置4℃冰箱保存，每隔7d转接1次，连续转接10代后，参照1.2.7的方法测定各代菌株的抑菌活性。
1.2.8Bs6602野生菌株和诱变菌株的抑菌谱测试
以Bs6602菌株和抑菌活性最高的诱变菌株作为测试菌株，分别测定其对供试的13种植物病原真菌的抑菌活性，方法参照1.2.7。
1.2.9咪鲜胺对Bs6602野生菌株和诱变菌株最低抑菌浓度(MIC)的测定
采用试管二倍稀释法，用NA液体培养基(1mL/管)将450g/L咪鲜胺对倍稀释成系列浓度，使咪鲜胺的稀释浓度分别为675、1 350、2 700、5 400、10 800、21 600、43 200、86400、172 800、345 600和691 200倍液，每个浓度3次重复，然后加入0.1mL供试菌株的种子液。以加菌液但不加咪鲜胺的试管为阳性对照，以不加菌液和咪鲜胺的试管为空白对照。置28℃，120r/m振荡培养24h，以浑浊度为指标检查管中是否有细菌生长。管内无细菌生长而咪鲜胺浓度最低者，即为咪鲜胺对该试验菌株的MIC。
1.2.10香蕉炭疽病的防治试验
田间采收八成熟的蕉果，洗净晾干，并除去伤病的蕉果，落梭后分成每梭5～6个蕉果。共设置6个处理：处理Ⅰ，Bs6602菌株发酵液的10倍稀释液；处理Ⅱ，Bs6602v菌株发酵液的10倍稀释液；处理Ⅲ，咪鲜胺1 350倍稀释液；处理Ⅳ，咪鲜胺43 200倍稀释液；处理Ⅴ：Bs6602菌株发酵液的10倍稀释液(含43 200倍咪鲜胺)；处理Ⅵ：Bs6602v菌株发酵液的10倍稀释液(含43 200倍咪鲜胺)；处理Ⅶ：清水对照。将蕉果在以上各处理中浸泡2min后取出，室温下晾干，用塑料袋封装后，放入纸箱，置25℃下，RH78％放置贮藏。每个处理设3次重复，每重复5kg蕉果。
在蕉果开始发病时进行第1次病情调查，蕉果完全成熟后进行第2次调查；香蕉炭疽病的病情分级参照Fu[11]等的标准进行。
病情指数＝∑(各级病果数×相对级数值)/(调查总果数×9)×100；
防治效果(％)＝(对照区病情指数-处理区病情指数)/对照区病情指数×100。
1.3数据统计与分析
研究所得数据用Excel进行汇总、平均值计算和作图，差异显著性采用DPS7.05软件的LSD法进行分析。
2结果与分析
2.1紫外诱变时间对Bs6602菌株致死率的影响
由图1可知，紫外线对Bs6602菌株的致死率随着其照射时间的增加而提高。当照射时间为15s时，Bs6602菌株的致死率为91.49％；当照射时间大于25s时，Bs6602菌株的致死率均趋于平缓并接近100％。
2.2亚硝酸钠浓度对Bs6602菌株致死率的影响
由图2可知，NaNO2对Bs6602菌株的致死率随着其浓度的增加而提高。当NaNO2的浓度为300mmol/L时，其对Bs6602菌株的致死率为87.86％。
2.3亚硝酸钠诱变时间对Bs6602菌株致死率的影响
由图3可知，NaNO2对Bs6602菌株的致死率随着其诱变时间的增加而提高。当NaNO2诱变的时间为60min时，其对Bs6602菌株的致死率为90.78％。
2.4Bs6602菌株的紫外线-亚硝酸钠复合诱变
通过两次紫外线-亚硝酸钠复合诱变，以Bs6602菌株为出发菌株共得到143株正突变菌株。
由图4可知，经过抑菌活性的测定，最终得到5株对香蕉炭疽病抑菌活性最高的突变菌株。
表1诱变菌株的抑菌活性
注：表中同列数据后不同大、小写字母分别表示在1％和5％水平下的差异显著性。
由表1可知，5株突变菌株的抑菌圈直径为41.01～44.18mm，其抑菌活性均比Bs6602菌株提高了70.03％以上。其中，Bs6602v菌株的抑菌活性最高，提高了83.80％。
此外本研究还发现，紫外线或亚硝酸钠的单一诱变和紫外-亚硝酸钠复合诱变均能提高Bs6602菌株的抑菌活性。与紫外线诱变相比，进行复合诱变后Bs6602菌株的抑菌活性提高了30.91％；而与亚硝酸钠诱变相比，则提高了18.35％。由此可知，复合诱变比单一诱变更能提高Bs6602菌株的抑菌活性。
2.6突变株Bs6602v菌株的遗传稳定性
将突变株Bs6602v菌株每隔7d传代1次，连续传代10次，由图5可知，随着传代次数的增加，该菌株的抑菌活性逐渐降低，但7代内其抑菌活性无明显变化，表明Bs6602v菌株在7代内具有较好的遗传稳定性。
2.7原始菌株Bs6602及诱变菌株Bs6602v抑菌谱的测试
由图6可知，Bs6602及其突变株Bs6602v菌株对13种植物病原真菌均有较强的抑菌活性。Bs6602菌株的抑菌圈直径在8.44～42.14mm之间，而Bs6602v菌株的则在11.93～66.39mm之间。突变株Bs6602v菌株的抑菌活性均比出发菌株Bs6602菌株有所提高，其提高率在6.65％～242.92％之间。其中，Bs6602v菌株对香蕉多主棒孢、香蕉小窦氏霉和香蕉嘴突脐蠕孢的抑菌作用最强，其抑菌圈直径分别为66.39mm和53.69mm和45.18mm。
2.8咪鲜胺对Bs6602菌株及其突变株Bs6602v菌株的MIC
最低抑菌浓度的测试结果表明，咪鲜胺对Bs6602菌株及其突变株Bs6602v菌株的MIC值相同，均为20.83μg/mL。当咪鲜胺的稀释倍数大于43200倍，即咪鲜胺浓度小于10.42μg/mL时，其对2株菌株的生长无影响。
2.9拮抗菌株对香蕉炭疽病的防治效果
由表2可知，香蕉贮藏15d开始发病，各处理病情指数在13.78～55.15之间；突变株Bs6602v菌株的防效为63.94％，显著高于出发菌Bs6602菌株(51.83％)；Bs6602v菌株与43200倍咪鲜胺稀释液混用后，其防效为70.27％，与咪鲜胺1 350倍稀释液(75.01％)相当。贮藏至17d香蕉完全成熟，各处理区的病情指数均有增长，在28.48～95.71之间；Bs6602v菌株与43 200倍咪鲜胺稀释液混用的处理，其防效(58.85％)与咪鲜胺43 200倍稀释液(55.59％)差异不显著。两次调查结果显示，Bs6602v菌株与43 200倍咪鲜胺稀释液液混用后的防效均高于单独使用Bs6602v菌株。
表2拮抗菌株对香蕉炭疽病的防治效果
注：表中同列数据后不同大、小写字母分别表示在1％和5％水平下的差异显著性。
综上所述，本发明本研究以野生枯草芽孢杆菌Bs6602菌株作为出发菌株，经过紫外线-亚硝酸钠复合诱变，得到对香蕉炭疽病菌抑菌活性较高的突变株Bs6602v菌株，其抑菌活性比出发菌株提高了83.80％。
本发明的Bs6602v菌株的复合诱变方法得到的Bs6602v菌株的抑菌活性比单纯紫外线诱变提高了30.91％，比单纯亚硝酸钠诱变提高了18.35％。
本发明的Bs6602v菌株对香蕉炭疽病的防治结果显示，贮藏15d后，该菌株的防效为63.94％。
本发明的Bs6602v菌株与咪鲜胺43 200倍稀释液混用后表现出较好的防治效果，香蕉贮藏15d后其防效与咪鲜胺1 350倍稀释液差异不显著；至17d，其防效仍与咪鲜胺43200倍稀释液相当。表明该菌株与低浓度咪鲜胺混用，对香蕉炭疽病的防治具有增效作用，应用时可达到减少农药使用量的目的。而Bs6602v菌株对香蕉生产上重要的病原真菌都具有较强的抑制作用，因此利用该菌株开发高效、对环境友好的生物农药，对香蕉产业的发展具有重要的意义。
前述对本发明的具体示例性实施方案的描述是为了说明和例证的目的。这些描述并非想将本发明限定为所公开的精确形式，并且很显然，根据上述教导，可以进行很多改变和变化。对示例性实施例进行选择和描述的目的在于解释本发明的特定原理及其实际应用，从而使得本领域的技术人员能够实现并利用本发明的各种不同的示例性实施方案以及各种不同的选择和改变。本发明的范围意在由权利要求书及其等同形式所限定。

Claims (3)

1.一种诱变菌株Bs6602v，其分类学命名为枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis，于2016年03月03日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCCNo.12159。
2.根据权利要求1所述的诱变菌株Bs6602v在抑制植物病原真菌芭蕉炭疽菌、香蕉新月弯孢霉、香蕉嘴突脐蠕孢、香蕉小窦氏霉、香蕉链格孢、香蕉弥泽那拟盘多毛孢、香蕉多主棒孢、香蕉大茎点霉、香蕉串珠镰孢、尖孢镰孢菌西瓜专化型、尖孢镰孢菌古巴专化型、龙眼链格孢和胶孢炭疽菌中的用途。
3.根据权利要求1所述的诱变菌株Bs6602v在防治香蕉炭疽病中的用途。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
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CN109485476A (zh) * 2018-09-06 2019-03-19 广西壮族自治区农业科学院 一种南方大棚厚皮甜瓜栽培基质及其制备方法
CN109380726A (zh) * 2018-09-06 2019-02-26 广西壮族自治区农业科学院 一种南方西瓜甜瓜育苗基质及其制备方法
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CN111808785B (zh) * 2020-08-10 2022-04-01 六盘水师范学院 红花龙胆内生贝莱斯芽孢杆菌及其应用
CN112940994B (zh) * 2021-04-25 2022-08-23 金禾佳农（北京）生物技术有限公司 一种枯草芽孢杆菌、培养方法及应用

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