CN117546875A - 一种魔芋种芋包衣剂及其包衣方法 - Google Patents
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Abstract
本发明属于种子包衣剂技术领域，涉及一种魔芋种芋包衣剂及其包衣方法。本发明提供了一种魔芋种芋的包衣方法，将生防菌、中药提取物、生长调节剂、诱抗剂和成膜剂混合形成包衣剂后，将种芋放入包衣剂中浸润或将包衣液喷洒至种芋表面，用填充剂将种芋包裹完整，置于阴凉处晾干。本发明在魔芋种芋种植前采用生物药剂进行包衣，可在出苗期和生长期起到长效防治魔芋软腐病，防治效果达68.79％以上，减少后期化学药物的使用，提高魔芋种芋出苗率和促进生长的作用，提高植物抗性及产量，同时包衣剂所用成分安全可降解，利于魔芋的食品安全和环境保护，同时保证了魔芋种芋的有效保存，避免在保存和运输途中的经济损失。
Description
技术领域
本发明属于种子包衣剂技术领域，涉及一种魔芋种芋包衣剂及其包衣方法。
背景技术
魔芋又名蒟蒻、鬼芋，含有大量的葡甘聚糖，是已知植物胶中粘度最大的天然高分子多糖，加工后的魔芋精粉因良好胶粘等特性而被广泛应用于食品、医药、化工、纺织、造纸、石油钻探、环保、高分子材料等领域。
但是魔芋两大主要病害软腐病和白绢病都属于土传性病害，严重时甚至造成绝收，由于病原菌主要来自魔芋种芋或土壤，目前大多采用化学药物噻菌铜、高锰酸钾等化学药物对魔芋进行浸泡后播种或者魔芋种植后期灌根或叶面喷施，浸泡魔芋种芋防治效果不够理想，种植后期灌根或叶面喷施由于药物难以到达土壤深层，对土传性病害的治疗效果甚微。同时，由于长期的化学防治，出现了病原菌对现有杀菌剂的抗药性以及对土壤环境的污染和农产品的农药残留等问题。
比如，现有技术中，申请人在之前曾筛选获得了一株新菌，并用其做了喷施菌剂，专利公开号为CN108795830A，公开了一种埃吉类芽孢杆菌SWL-W8对于魔芋种芋软腐病的防治，其将埃吉类芽孢杆菌稀释后的液体菌剂进行灌根、叶面、花蕾和果实表面喷施或全株喷施，或同时喷洒于植物栽培的土壤，但是由于药物难以到达土壤深层，对土传性病害的治疗效果有限。
CN101455213A公开了一种魔芋种衣剂及其制备方法和包衣方法，种衣剂由成膜剂、抑菌剂、营养剂、生长调节剂和助剂组成。成膜剂为海藻酸钠、聚乙烯醇、羧甲基纤维素钠、魔芋粉和黄原胶中的几种，抑菌剂为大蒜提取物，营养剂为只含无机成分的MS营养液，生长调节剂为赤霉素、6-苄氨基腺嘌呤；助剂包括吐温-80、脂肪醇聚氧乙烯醚、十二烷基磺酸钠、乙二醇、二甲基硅油。可知其制备的助剂中含有多种有害的化学物质，会造成土壤污染以及会造成魔芋种芋化学物质残留的问题。
因此，亟需一种对魔芋软腐病防效好、且不污染环境的生物防治方法来解决目前存在的问题。
发明内容
本发明的目的是提供一种魔芋种芋包衣剂及其包衣方法。魔芋种芋皮薄易于损伤而感染病菌，本发明通过将生防菌、中药提取物、生长调节剂、诱抗剂和成膜剂混合形成包衣剂后，将种芋放入包衣剂中浸润或将包衣液喷洒至种芋表面，用填充剂将种芋进行包衣干燥，能有效防治魔芋种芋储存期、苗期和生长期软腐病的发生，防治效果达68.79％以上，同时促进了魔芋的生长、提高了魔芋抗性和产量。
基于上述目的，本发明通过提供一种魔芋种芋包衣剂来解决所属领域的这种需要。
一方面，本发明涉及一种魔芋种芋包衣剂，所述包衣剂成份为：生防菌、中药提取物、生长调节剂、诱抗剂和成膜剂；
所述生防菌为埃吉类芽孢杆菌SWL-W8；
所述中药提取物为和厚朴酚或厚朴酚。
进一步的，本发明的一种魔芋种芋包衣剂，包括：微生物浓度在105cfu/mL到1010cfu/mL生防菌配合中药提取物5-10g，0.01％生长调节剂30-50mL，诱抗剂1-3g，10％成膜剂500-2000mL；
所述生防菌为埃吉类芽孢杆菌SWL-W8；
所述中药提取物选自和厚朴酚或厚朴酚。
进一步地，本发明提供的魔芋种芋包衣剂中，所述中药提取物为和厚朴酚。
进一步地，本发明提供的魔芋种芋包衣剂中，所述生长调节剂为芸苔素内酯。
进一步地，本发明提供的魔芋种芋包衣剂中，所述诱抗剂为鞭毛蛋白。
进一步地，本发明提供的魔芋种芋包衣剂中，所述成膜剂选自海藻酸钠、聚丙烯酰胺、羧甲基纤维素中的一种。
进一步地，本发明提供的魔芋种芋包衣剂中，所述成膜剂为海藻酸钠。
进一步地，本发明提供的魔芋种芋包衣剂中，还包括填充剂，每1-10L 107cfu/mL所述生防菌配合5-6kg填充剂。
进一步地，本发明提供的魔芋种芋包衣剂中，所述填充剂选自硅藻土、生石灰、膨润土、高岭土中的一种。
进一步地，本发明提供的魔芋种芋包衣剂中，所述填充剂为膨润土。
第二方面，一种魔芋种芋包衣剂的制备方法，包括以下步骤：
步骤1：埃吉类芽孢杆菌SWL-W8的制备；
发酵培养：将埃吉类芽孢杆菌SWL-W8接种至发酵培养基中培养36-48h，获得生防菌发酵液；
步骤2：中药提取物的加工，取中药提取物和厚朴酚和/或厚朴酚于少量无水乙醇中溶解；
步骤4：诱抗剂鞭毛蛋白的制备：
(1)解淀粉芽孢杆菌菌种活化；
(2)解淀粉芽孢杆菌菌种发酵；
(3)解淀粉芽孢杆菌鞭毛蛋白沉淀；
(4)解淀粉芽孢杆菌鞭毛蛋白纯化；
(5)解淀粉芽孢杆菌鞭毛蛋白分析及保存；
步骤5：成膜剂的制备：
将海藻酸钠、聚丙烯酰胺、羧甲基纤维素中任意一种的配成10倍浓缩液，使充分溶胀后，备用；
步骤6：包衣剂的制备：
将上述制备好的埃吉类芽孢杆菌SWL-W8菌液、中药提取物溶液、0.01％芸苔素内酯、鞭毛蛋白、成膜剂浓缩液混合均匀，即得包衣剂。
第三方面，本发明涉及上述任一项所述的魔芋种芋包衣剂的使用方法，包括：将魔芋种芋放入所述魔芋种芋包衣剂中充分浸润或将所述魔芋种芋包衣剂均匀喷雾在魔芋种芋表面；魔芋种芋表面覆盖魔芋种芋包衣剂后填充剂包裹均匀，置于阴凉处晾干。
本发明与现有技术相比具有以下有益效果或者优点：
本发明可在魔芋种芋种植前采用生物药剂进行包衣，可在保存期、出苗期和生长期起到长效防魔芋软腐病，防治效果达68.79％以上，减少后期化学药物的使用。同时具有提高魔芋种芋出苗率和促进生长的作用，具有促根壮苗的技术效果，可以在魔芋出苗期和生长期起到长效防病、促进生长的作用，提高产量的目的。同时保证了魔芋种芋的长效保存，避免在运输途中的经济损失。另外，包衣剂所用成分环保，可降解，且无毒，利于魔芋的食品安全和环境保护。
附图说明
图1是鞭毛蛋白的SDS聚丙烯酰胺凝胶的电泳图。图中M泳道为蛋白Marker泳道，1泳道为鞭毛蛋白泳道。
图2是鞭毛蛋白的LC-MS/MS质谱解析图。
图3是魔芋种芋包衣前后对比图。
具体实施方式
下面，结合实施例对本发明的技术方案进行说明，但是，本发明并不限于下述的实施例。
下述各实施例中实验方法和检测方法，如无特殊说明，均为常规方法；所述药剂和材料，如无特殊说明，均可在市场上购买得到；所述指标数据，如无特殊说明，均为常规测量方法。
埃吉类芽孢杆菌SWL-W8，保藏编号为CCTCCNO.M2017113，保藏在中国典型培养物保藏中心。
解淀粉芽孢杆菌为本实验室保藏菌株。
本实施例提供了一种魔芋种芋包衣剂的制备方法，包括以下步骤：
步骤1：埃吉类芽孢杆菌SWL-W8的制备
发酵培养：将埃吉类芽孢杆菌SWL-W8以8％的接种量接种至发酵培养基中，35℃，150r/min，培养36-48h，稀释成107cfu/mL的埃吉类芽孢杆菌SWL-W8的发酵液。发酵培养基的组分为：葡萄糖浓度30g、酵母浸粉9g、磷酸氢二钾1.5g、鱼粉10g、磷酸二氢钾1g、七水硫酸镁0.6g、水1000mL，初始pH为6。
步骤2：中药提取物的加工
取中药提取物和厚朴酚和/或厚朴酚于少量无水乙醇中溶解。
步骤3：诱抗剂鞭毛蛋白的制备。
解淀粉芽孢杆菌菌种活化：将解淀粉芽孢杆菌接种于LB固体培养基上，32℃培养24h。
解淀粉芽孢杆菌菌种发酵：将活化的解淀粉芽孢杆菌接种LB液体培养基中，32℃，150r/min，培养72h后，4℃，4000rpm离心20min收集发酵液上清。
解淀粉芽孢杆菌鞭毛蛋白沉淀：将50％的硫酸铵溶液加至发酵液上清中，溶解后4℃沉淀过夜，4℃，10000rpm，离心20min收集解淀粉芽孢杆菌鞭毛蛋白沉淀。
解淀粉芽孢杆菌鞭毛蛋白纯化：加入pH 7.4 Tris HCl溶解蛋白沉淀，8000rpm离心10min得蛋白上清液，放入透析袋截留7000Da蛋白，透析液为pH 7.4 Tris HCl，换液3次，透析结束后，采用DEAE琼脂糖离子层析，分别用0.1，0.2，0.3，0.4，0.5，0.6，0.7mol/LNaCl溶液各100mL进行洗脱，获得8个洗脱峰BP1-BP8，收集第8个洗脱峰BP8。采用Sephadex G-75葡聚糖凝胶过滤层析对BP8进行层析，洗脱液为Tris HCl(pH7.4)，得到2个峰：BP8-1，BP8-2，收集第二个洗脱峰BP8-2即为目标蛋白溶液。
解淀粉芽孢杆菌鞭毛蛋白分析及保存：对收获的目标蛋白进行SDS-PAGE，结果如图1所示，在35-40kDa出现蛋白条带，与鞭毛蛋白的大小一致，切下蛋白条带，进行LC-MS/MS质谱鉴定，质谱结果如图2所示，结果表明蛋白条带为解淀粉芽孢杆菌的鞭毛蛋白。将收集到的目标蛋白溶液冷冻干燥浓缩后得到鞭毛蛋白。
步骤4：成膜剂的制备
将海藻酸钠、聚丙烯酰胺、羧甲基纤维素中的配成10倍浓缩液，使充分溶胀后，备用。
步骤5：包衣剂的制备
将上述制备好的埃吉类芽孢杆菌SWL-W8菌液、中药提取物溶液、0.01％芸苔素内酯、诱抗剂、成膜剂浓缩液混合均匀，即得包衣剂。
实施例1
称取5g厚朴酚溶于少量无水乙醇，倒入11L水中，搅拌均匀，依次加入30mL 0.01％芸苔素内酯、1g鞭毛蛋白、500mL10％海藻酸钠溶液、1L埃吉类芽孢杆菌发酵液(107cfu/mL)，混合均匀即得包衣剂。
包衣处理时：种芋浸泡在包衣剂中1-2分钟后取出，用膨润土包裹均匀。经过处理后的种芋放置于室内阴凉通风处，平铺晾放。
实施例2
称取5g厚朴酚、5g和厚朴酚溶于少量无水乙醇，倒入5.75L水中，搅拌均匀，依次加入40mL0.01％芸苔素内酯、2g鞭毛蛋白、1250mL10％聚丙烯酰胺溶液、5L埃吉类芽孢杆菌发酵液(1010cfu/mL)，混合均匀即得包衣剂。
包衣处理时：与实施例1不同的是本实施例采用硅藻土。
实施例3
称取10g和厚朴酚溶于少量无水乙醇后加入10L埃吉类芽孢杆菌发酵液(105cfu/mL)中，搅拌均匀，依次加入0.01％芸苔素内酯50mL、鞭毛蛋白3g、10％羧甲基纤维素2L，混合均匀即得包衣剂。
包衣处理时：与实施例1不同的是本实施例采用高岭土。
实施例4
称取5g和厚朴酚溶于少量无水乙醇，倒入10.5L水中，搅拌均匀，依次加入30mL0.01％芸苔素内酯、1g鞭毛蛋白、500mL10％海藻酸钠溶液，混合均匀即得包衣剂。
包衣处理时填充剂与实施例1相同。
实施例5
将30mL0.01％芸苔素内酯、1g鞭毛蛋白、500mL10％海藻酸钠溶液和1L埃吉类芽孢杆菌发酵液(107cfu/mL)加入10.5L水中，搅拌均匀，混合均匀即得包衣剂。
包衣处理时填充剂与实施例1相同。
实施例6
称取5g和厚朴酚溶于少量无水乙醇，倒入10.5L水中，搅拌均匀，依次加入30mL0.01％芸苔素内酯、500mL10％海藻酸钠溶液、1L埃吉类芽孢杆菌发酵液(107cfu/mL)，混合均匀即得包衣剂。
包衣处理时：与实施例1不同的是本实施例采用生石灰。
实施例7魔芋种芋包衣方法
本实施例提供了一种魔芋种芋包衣方法，具体步骤如下：
挑选的健康种芋均匀摊放在室外晾晒1-2天后，破损和腐烂的种芋要先切除腐烂和破损部分，并晾晒至伤口结痂后单独另行包衣处理。
取实施例1制备的包衣剂，将魔芋种芋放入包衣剂中浸润后，用填充剂将魔芋种芋包裹完整，置于阴凉处晾干。魔芋种芋包衣前后对比图如图3所示。
实施例8魔芋种芋包衣方法
与实施例7不同的是，本实施例将包衣液喷洒至种芋表面后，用填充剂将魔芋种芋包裹完整，置于阴凉处晾干。
实施例9对比试验
本实施例采用实施例1-6制备的包衣剂和对照组1、对照组2、对照组3，来说明制备的包衣可以对完整或者破损的魔芋种芋有较好的保存效果。
对照组1：将1L埃吉类芽孢杆菌发酵液(107cfu/mL)倒入4.5L水中，混合均匀即得包衣剂。包衣处理：种芋浸泡在包衣液中1-2分钟后取出，用膨润土包裹均匀。经过处理后的种芋放置于室内阴凉通风处，平铺晾放。
对照组2：魔芋种芋用0.3％高锰酸钾药剂处理，浸泡1-2分钟后取出。经过处理后的种芋放置于室内阴凉通风处，平铺晾放。
对照组3：种芋用清水浸泡1-2分钟后取出。经过处理后的种芋放置于室内阴凉通风处，平铺晾放。
挑选健康和破损的魔芋种芋分为9组，每组魔芋种芋的个数为200个，每组含有的健康和破损魔芋种芋数量相同。将每组魔芋种芋用实施例1-6和对照组1-3的包衣剂包衣处理后，放置于室内阴凉通风处，平铺晾放，每隔15天直至播种前统计发病种芋数量。表1为不同处理对魔芋种芋储存期软腐病的发病率和防效，发病率和防效的计算公式如下：
发病率＝感染个数/种芋个数×100％
防效＝(对照组发病率-处理组发病率)/处理组发病率×100％
表1不同处理对魔芋种芋储存期软腐病的发病率和防效
由上述表1结果可见，本发明的包衣处理对魔芋种芋储存期软腐病具有较好的防治效果，防效达71.43％，优于对照组2采用0.3％高锰酸钾处理的33.33％，说明采用本发明的包衣剂比传统化学包衣材料效果更优。实施例1-3的防治效果近似，说明加入的埃吉类芽孢杆菌发酵液、中药提取物厚朴酚或者和厚朴酚、0.01％芸苔素内酯、鞭毛蛋白和成膜剂的成份与用量都对发病率和防效影响较小。
但是，实施例1-3包衣剂处理的魔芋种芋的发病率和防效都显著优于实施例4-6的包衣剂。这是因为，实施例4和实施例1-3相比，包衣剂原材料中缺少了埃吉类芽孢杆菌发酵液，感病个数和发病率就成倍增加，防效几乎减半。实施例5的包衣剂中缺少了中药提取物厚朴酚或者和厚朴酚成份，发病率明显增加，防效降低也比较明显。实施例6的包衣剂中缺少了鞭毛蛋白，效果也降低比较明显。而对照组1只是使用了埃吉类芽孢杆菌SWL-W8，防效就更差。说明本发明包衣剂的多个成份相互影响，缺一不可，与埃吉类芽孢杆菌SWL-W8之间有协同增效的技术效果。只有这几个物质同时组合才能达到对完整和破损的魔芋种芋有较好的保存效果，可减少魔芋种芋运输途中或者保存期的经济损失。
实施例10：
实施例1-6与对照组1-3的包衣剂包衣处理后，将没有发病的魔芋种芋种植后继续进行实验，此次种植实验每组魔芋种芋的种植数量为300个；将包衣后的魔芋种芋于2021年3月种植于在西安植物园试验基地和汉中市汉台区武乡镇吴庄村魔芋试验基地，在出苗期统计出苗率，2021年11月进行采收，统计并计算膨大系数，发病率和防率。表2为不同处理组魔芋种芋的生长情况统计，发病率、防效和膨大系数的计算公式如下：
发病率＝感染个数/种芋个数×100％
防效＝(对照组发病率-处理组发病率)/处理组发病率×100％
膨大系数＝(魔芋总收量﹣种芋用量)/种芋用量。
表2不同处理组魔芋种芋生长情况
从表2的数据能够看出，同样本发明的包衣处理能提高魔芋出苗率，增加产量，减少软腐病发病率，最高防效能达到68.79％。
结果和实施例9结果完全一致，本发明实施例1-3的包衣剂防治效果优于对照组2采用0.3％高锰酸钾，且对产量也有明显提升，说明采用本发明的包衣剂比传统化学包衣材料效果更优。实施例1-3的防治效果近似。
另外，实施例1-3包衣剂处理的魔芋种芋的发病率和防效都显著优于实施例4-6的包衣剂。实施例4缺少了埃吉类芽孢杆菌发酵液，实施例5缺少了中药提取物厚朴酚或者和厚朴酚成份，实施例6的包衣剂中缺少了鞭毛蛋白，均出现效果明显降低，产量和膨大系数都降低了，尤其实施例4的包衣剂处理的因为没有了微生物菌剂，发病率提升明显。对照组1只是使用了埃吉类芽孢杆菌SWL-W8，防效就更差。这再次说明本发明包衣剂的多个成份相互影响，缺一不可，本申请加入的中药提取物、鞭毛蛋白与埃吉类芽孢杆菌SWL-W8之间有协同增效的技术效果。同时也说明使用包衣的方案优于对照组3采用清水对照的方案。
如上所述，即可较好地实现本发明，上述的实施例仅仅是对本发明的优选实施方式进行描述，并非对本发明的范围进行限定，在不脱离本发明设计精神的前提下，本领域普通技术人员对本发明的技术方案做出的各种改变和改进，均应落入本发明确定的保护范围内。
Claims (10)
1.一种魔芋种芋包衣剂，其特征在于，所述包衣剂成份为：生防菌、中药提取物、生长调节剂、诱抗剂和成膜剂；
所述生防菌为埃吉类芽孢杆菌SWL-W8；
所述中药提取物为和厚朴酚和/或厚朴酚。
2.根据权利要求1所述的魔芋种芋包衣剂，其特征在于，微生物浓度在105cfu/mL到1010cfu/mL生防菌配合中药提取物5-10g，生长调节剂30-50mL，诱抗剂1-3g，成膜剂500-2000mL；
所述生防菌为埃吉类芽孢杆菌SWL-W8；
所述中药提取物为和厚朴酚和/或厚朴酚。
3.根据权利要求1所述的魔芋种芋包衣剂，其特征在于，所述中药提取物为和厚朴酚。
4.根据权利要求1所述的魔芋种芋包衣剂，其特征在于，所述生长调节剂为0.01％芸苔素内酯，所述诱抗剂为鞭毛蛋白。
5.根据权利要求1所述的魔芋种芋包衣剂，其特征在于，所述成膜剂选自海藻酸钠、聚丙烯酰胺和羧甲基纤维素中的任意一种或两种。
6.根据权利要求1所述的魔芋种芋包衣剂，其特征在于，还包括填充剂，每1-10L107cfu/mL所述生防菌配合5-6kg填充剂。
7.根据权利要求1所述的魔芋种芋包衣剂，其特征在于，所述填充剂选自硅藻土、生石灰、膨润土和高岭土中的一种。
8.一种魔芋种芋包衣剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤1：埃吉类芽孢杆菌SWL-W8的制备；
发酵培养：将埃吉类芽孢杆菌SWL-W8接种至发酵培养基中培养36-48h，稀释成107cfu/mL的埃吉类芽孢杆菌SWL-W8的发酵液；
步骤2：中药提取物的加工，取中药提取物和厚朴酚和/或厚朴酚于少量无水乙醇中溶解；
步骤4：诱抗剂鞭毛蛋白的制备：
(1)解淀粉芽孢杆菌菌种活化；
(2)解淀粉芽孢杆菌菌种发酵；
(3)解淀粉芽孢杆菌鞭毛蛋白沉淀；
(4)解淀粉芽孢杆菌鞭毛蛋白纯化；
(5)解淀粉芽孢杆菌鞭毛蛋白分析及保存；
步骤5：成膜剂的制备：
将海藻酸钠、聚丙烯酰胺、羧甲基纤维素中任意一种的配成10倍浓缩液，使充分溶胀后，备用；
步骤6：包衣剂的制备：
将上述制备好的埃吉类芽孢杆菌SWL-W8菌液、中药提取物溶液、0.01％芸苔素内酯、鞭毛蛋白、成膜剂浓缩液混合均匀，即得包衣剂。
9.一种魔芋种芋包衣剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤1：埃吉类芽孢杆菌SWL-W8的制备；
发酵培养：将埃吉类芽孢杆菌SWL-W8接种至发酵培养基中，35℃，150r/min，培养36-48h，稀释成107cfu/mL的埃吉类芽孢杆菌SWL-W8的发酵液；
发酵培养基的质量份比为：葡萄糖浓度30份、酵母浸粉9份、磷酸氢二钾1.5份、鱼粉10份、磷酸二氢钾1份、七水硫酸镁0.6份、水1000份，培养基的初始pH为6；
步骤2：中药提取物的加工：取中药提取物和厚朴酚和/或厚朴酚于少量无水乙醇中溶解；
步骤3：诱抗剂鞭毛蛋白的制备：
(1)解淀粉芽孢杆菌菌种活化：将解淀粉芽孢杆菌接种于LB固体培养基上，32℃培养24h；
(2)解淀粉芽孢杆菌菌种发酵：将活化的解淀粉芽孢杆菌接种LB液体培养基中，32℃，150r/min，培养72h后，4℃，4000rpm离心20min收集发酵液上清；
(3)解淀粉芽孢杆菌鞭毛蛋白沉淀：将50％的硫酸铵溶液加至发酵液上清中，溶解后4℃沉淀过夜，4℃，10000rpm，离心20min收集解淀粉芽孢杆菌鞭毛蛋白沉淀；
(4)解淀粉芽孢杆菌鞭毛蛋白纯化：加入pH 7.4Tris HCl溶解蛋白沉淀，离心得蛋白上清液，放入透析袋截留7000Da蛋白，透析结束后，采用DEAE琼脂糖离子层析，分别用0.1，0.2，0.3，0.4，0.5，0.6，0.7mol/LNaCl溶液各100mL进行洗脱，获得8个洗脱峰BP1-BP8，收集第8个洗脱峰BP8，采用Sephadex G-75葡聚糖凝胶过滤层析对BP8进行层析，洗脱液为pH7.4的Tris HCl，得到2个峰：BP8-1，BP8-2，收集第二个洗脱峰BP8-2即为目标蛋白溶液；
(5)解淀粉芽孢杆菌鞭毛蛋白分析及保存：对收获的目标蛋白进行SDS-PAGE，在35-40kDa出现蛋白条带，与鞭毛蛋白的大小一致，切下蛋白条带，将收集到的目标蛋白溶液冷冻干燥浓缩后得到鞭毛蛋白；
步骤4：成膜剂的制备：
将海藻酸钠、聚丙烯酰胺、羧甲基纤维素中任意一种的配成10倍浓缩液，使充分溶胀后，备用；
步骤5：包衣剂的制备：
将上述制备好的埃吉类芽孢杆菌SWL-W8菌液、中药提取物溶液、0.01％芸苔素内酯、鞭毛蛋白、成膜剂浓缩液混合均匀，即得包衣剂。
10.一种魔芋种芋包衣剂的使用方法，其特征在于，将魔芋种芋放入权利要求1-9任一项所述魔芋种芋包衣剂中充分浸润；
或将权利要求1-9任一项所述魔芋种芋包衣剂均匀喷雾在魔芋种芋表面；
魔芋种芋表面覆盖魔芋种芋包衣剂后用填充剂包裹均匀，置于阴凉处晾干；所述填充剂选自硅藻土、膨润土和高岭土中的一种。
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