CN102776130B - 一株金龟子绿僵菌及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一株金龟子绿僵菌及其应用。本发明所提供的金龟子绿僵菌是金龟子绿僵菌（Metarhizium anisopliae）JF-6213，其在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的登记入册编号为CGMCC No.5952。该菌株生产性状好、产孢能力强；同时对甘蔗螟虫杀虫活性强，二次侵染甘蔗螟虫效果好，对3～4龄甘蔗螟虫的LT₅₀(致死中时)为7.44天。利用该菌株生产的杀虫真菌制剂，能有效控制甘蔗螟虫的种群数量。而且，金龟子绿僵菌（Metarhizium anisopliae）JF-6213还对椰心叶甲、东亚飞蝗、荔枝椿象及菠萝灰粉蚧具有强致病力，具有较强二次侵染能力和稳定性，比较适合在热带、亚热带地区应用。

Description

一株金龟子绿僵菌及其应用

技术领域

本发明涉及一株金龟子绿僵菌及其应用。

背景技术

甘蔗螟虫（sugarcane stem borer），俗称钻心虫，昆虫纲鳞翅目(Lepidoptera)，是在广大蔗区普遍发生、危害严重的一类害虫。其中有螟蛾科昆虫50种,夜蛾科12种,小卷蛾科,木蠹蛾科和蝶蛾科各1种。该虫田间发生密度大，甘蔗从下种至砍收的整个生长期都受其危害，在种苗期受害后种苗不能萌芽出土；苗期螟虫幼虫危害甘蔗生长点造成枯心苗，使苗数和有效茎减少，其枯心率一般在10%～20%，严重的田块达到60%以上；在甘蔗生长中后期幼虫钻蛀啮食危害蔗茎，破坏蔗茎组织，影响甘蔗生长，遇上强风，蔗茎常从虫口处折断，且虫啮后留下的创口也是赤腐病等病原菌的侵入口，致使虫害与病害交叠发生，不仅严重影响产量，也影响甘蔗的宿根性。目前，其防治主要靠化学农药，如呋喃丹、特丁磷、甲基异柳磷、克百威等，全是剧毒农药，不仅影响甘蔗本身的实用性，也严重影响到环境安全。而且长期使用这些化学农药，螟虫会产生抗药性，势必要进一步加大施药量，既增加成本，又加剧环境恶化，造成恶性循环。因此，用生物农药防治甘蔗螟虫就成为一条新的防治途径。

目前国内外分离绿僵菌菌株防治对象大部分为蝗虫、棉铃虫、菜青虫、小菜蛾等，对于地上触杀性害虫，Bt等微生物农药也表现很强竞争力。可是，对于地下害虫、钻蛀性和粉蚧等难以直接触杀重要害虫，目前除了有些使用高毒农药有点效果，基本上都没有什么好方法。

发明内容

本发明所要解决的一个技术问题是提供一株金龟子绿僵菌。

本发明所提供的金龟子绿僵菌是金龟子绿僵菌（Metarhizium anisopliae）JF-6213，其在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的登记入册编号为CGMCC No.5952。该菌种已于2012年04月06日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（简称CGMCC）。

本发明金龟子绿僵菌（Metarhizium anisopliae）JF-6213在28℃，在PDA培养基上的特征为，菌落初长白色，以后逐渐扩大，其上产生稀疏、暗绿色的分生孢子层并呈环状分布。菌丝分枝，有隔，无色光滑，宽2.2μm-3.2μm；分生孢子梗单生或分枝，分枝顶端具2-5个柱形的产孢细胞，大小为5.2-9.0μm×2.5-3.2μm，其上产生向基式的分生孢子链；单个分生孢子无色，柱形两端钝圆，大小为4.5-6.8μm×1.8-2.9μm。

本发明所要解决的另一个技术问题是提供一种杀虫菌剂。

本发明所提供的杀虫菌剂，它的活性成分是上述金龟子绿僵菌（Metarhiziumanisopliae）JF-6213。

所述金龟子绿僵菌（Metarhizium anisopliae）JF-6213具体可为分生孢子或/和菌丝体。

所述杀虫菌剂具体可用于防治下述1）-5）植物害虫中的五种、任四种、任三种、任两种或任一种害虫：

1）甘蔗螟虫；

2）椰心叶甲（Brontispa longissima(Gestro)；

3）东亚飞蝗(Locusta migratoria manilensis Meyen)；

4）荔枝蝽蟓（Tessaratoma papillosa Drury）；

5）新菠萝灰粉蚧（Dysmicoccus neobrevipes(Beardsley)）。

所述甘蔗螟虫具体可为条螟(Chilo venosatus)。

本发明金龟子绿僵菌（Metarhizium anisopliae）JF-6213具体有如下的有益效果：

生产性状好、产孢能力强；同时对甘蔗螟虫杀虫活性强，二次侵染甘蔗螟虫效果好，对3～4龄甘蔗螟虫的LT₅₀(致死中时)为7.44天。利用该菌株生产的杀虫真菌制剂，能有效控制甘蔗螟虫的种群数量。而且，金龟子绿僵菌（Metarhizium anisopliae）JF-6213还对椰心叶甲、东亚飞蝗、荔枝椿象及菠萝灰粉蚧具有强致病力，具有较强二次侵染能力和稳定性，比较适合在热带、亚热带地区应用。

菌种名称：金龟子绿僵菌

拉丁名：Metarhizium anisopliae

菌株编号：JF-6213

保藏机构：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心

保藏机构简称：CGMCC

地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号

保藏日期：2012年04月06日

保藏中心登记入册编号：CGMCC No.5952

下面结合具体实施例详细描述本发明，这些实施例用于理解而不是限制本发明。

具体实施方式

下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。

下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。

下述实施例中的培养基：

每1L PDA培养基由如下物质制成：200g土豆、20.0g葡萄糖、20g琼脂和水。其中，用水将培养基定容至1000ml。

PDA培养基的配制方法如下：将切成小块的去皮土豆煮沸半小时，然后用纱布过滤，在滤液中，加入葡萄糖和琼脂，用水定容至1000mL，再121℃湿热灭菌30min得到PDA培养基。

以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的保护范围。

实施例1、金龟子绿僵菌（Metarhizium anisopliae）JF-6213的分离及鉴定

1、金龟子绿僵菌（Metarhizium anisopliae）JF-6213的分离

称取中国海南乐东尖峰岭树林的表层土壤不同土壤样品各10g，分别装入装有20mL的无菌水的50mL无菌三角瓶中，搅拌混匀后静置片刻，待土壤沉淀后，吸取5mL上清液至10mL无菌离心管中备用。

取准备好的已灭菌的燕麦琼脂培养基，50℃左右时加入34mg/mL的氯霉素溶液，使培养基中氯霉素浓度达到约500mg/L，摇匀后将燕麦琼脂培养基倒于25cm×15cm×3cm的无菌不锈钢方盘中，每个方盘大约倒200mL培养基。待培养基冷却凝固后，各取4mL不同土壤样品上清液用涂棒均匀涂布接种于不同方盘上，接种完毕盖上无菌玻璃板，放入28℃的恒温培养箱中培养。得到金龟子绿僵菌（Metarhizium anisopliae）JF-6213。

2、金龟子绿僵菌（Metarhizium anisopliae）JF-6213的鉴定

（1）形态学鉴定

将分离纯化到的金龟子绿僵菌（Metarhizium anisopliae）JF-6213菌株接种在PDA平板上，28℃观察菌落形态特征，产孢结构和孢子形状与大小。结果显示在PDA培养基上：菌落初长白色，以后逐渐扩大，其上产生稀疏、暗绿色的分生孢子层并呈环状分布。菌丝分枝，有隔，无色光滑，宽2.2μm-3.2μm；分生孢子梗单生或分枝，分枝顶端具2-5个柱形的产孢细胞，大小为5.2-9.0μm×2.5-3.2μm，其上产生向基式的分生孢子链；单个分生孢子无色，柱形两端钝圆，大小为4.5-6.8μm×1.8-2.9μm。

（2）菌株的ITS序列扩增、序列测定及分子鉴定

无菌条件下，配制金龟子绿僵菌（Metarhizium anisopliae）JF-6213孢子悬浮液，取500μL孢子悬浮液接种于装有50mL液体葡萄糖蛋白胨液体培养基（2%葡萄糖和1%蛋白胨）的三角瓶中，置于200转/min的摇床上28℃恒温下培养。培养3-5d后，采用真空抽滤方法收集菌丝体，并将菌丝体保存于-20℃冰箱中备用。菌丝体用液氮研磨成粉末状后，采用SDS法提取基因组DNA。提取的DNA经0.8%琼脂糖凝胶电泳检测和紫外分光光度仪测OD₂₆₀值后，将样品稀释至约10ng/μL备用。

以总DNA为模板，采用Curran等设计的ITS1-5.8S-ITS2区扩增引物进行PCR扩增，所用引物为TW81：5’-GTTTCCGTAGGTGAACCTGC-‘3和AB21:5’-ATATGCTTAAGTTCAGCGGGT-‘3，产生547bp扩增条带。PCR反应在PCR仪上的反应程序：94℃预变性5min；94℃变性30s，53℃退火30s，72℃延伸1min，进行35个循环；最后72℃延伸10min。将扩增产物用凝胶回收试剂盒回收纯化，由宝生物工程（大连）有限公司测序部测序。测序结果表明金龟子绿僵菌（Metarhizium anisopliae）JF-6213的ITS1-5.8S-ITS2区域的序列如序列表中的序列1所示。

金龟子绿僵菌（Metarhizium anisopliae）JF-6213已于2012年04月06日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（简称CGMCC）其在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的登记入册编号为CGMCC No.5952。

3、金龟子绿僵菌（Metarhizium anisopliae）JF-6213的抗逆特性

金龟子绿僵菌（Metarhizium anisopliae）JF-6213有较强的抗逆性，在pH值4～9范围内的PDA培养基中均可以生长，其最适生长pH值为8；在NaCl浓度为0.05～0.25mol/L条件下，NaCl对菌株JF-6213的生长有一定的促进作用，浓度越大促进越明显，有较强的耐盐能力；高温条件及紫外光对绿僵菌孢子萌发有较强的抑制作用。

实施例2、金龟子绿僵菌（Metarhizium anisopliae）JF-6213 CGMCC No.5952对甘蔗螟虫室内杀虫活性的测定

将分离纯化到的金龟子绿僵菌（Metarhizium anisopliae）JF-6213 CGMCCNo.5952菌株接种在PDA平板上在28℃培养8-9天；收集在PDA平板上培养的成熟孢子，用0.05%（0.05g/100ml）吐温-80水溶液分散，配制成终浓度为1×10⁸个孢子/ml（1×10⁸cfu/ml）的悬浮液，该悬浮液即为金龟子绿僵菌菌剂。

实验设两个处理，分别为金龟子绿僵菌菌剂组（简称菌剂组）和对照组。每个处理各3个重复，每个重复各设2株甘蔗苗。

将体形大小相近、健康的3～4龄甘蔗螟虫(条螟(Chilo venosatus))30只(3龄23只、4龄7只)接于2株分蘖初期六片叶的甘蔗苗上及甘蔗苗附近土壤中，该甘蔗苗种在塑料盒（15cm×10cm×5cm）中，每个塑料盒2株。然后将甘蔗苗随机分为菌剂组和对照组。菌剂组的处理方法如下：用手持喷雾器喷施金龟子绿僵菌菌剂，均匀喷雾至蔗苗滴水，重点喷施蔗苗喇叭口和叶鞘处。对照组用0.05%（0.05g/100ml）吐温-80水溶液替代金龟子绿僵菌菌剂进行同样的喷雾。喷完在25-32℃培养，观察15天，隔天记录死虫数，计算存活率，经SPSS11.5软件统计分析得到金龟子绿僵菌（Metarhizium anisopliae）JF-6213 CGMCC No.5952对3～4龄甘蔗螟虫的LT₅₀(致死中时)为7.44天（表1）。

表1.甘蔗螟虫的死亡情况

2、金龟子绿僵菌（Metarhizium anisopliae）JF-6213 CGMCC No.5952对甘蔗螟虫的二次侵染能力测定

实验设两个处理，分别为药剂组和对照组。每个处理各3个重复，每个重复各设2株甘蔗苗。

药剂组采用的药剂是感染金龟子绿僵菌（Metarhizium anisopliae）JF-6213CGMCC No.5952的甘蔗螟虫，具体制备方法是将体形大小相近、健康的3～4龄条螟(Chilo venosatus)30只(3龄23只、4龄7只)接于2株分蘖初期六片叶的甘蔗苗上及甘蔗苗附近土壤中，该甘蔗苗种在塑料盒（15cm×10cm×5cm）中，每个塑料盒2株。然后用手持喷雾器喷施本实施例步骤1的金龟子绿僵菌菌剂，均匀喷雾至蔗苗滴水，重点喷施蔗苗喇叭口和叶鞘处。喷完在25-32℃培养，直至甘蔗螟虫表皮长出绿僵菌孢子（条螟已死亡）。表皮长出绿僵菌孢子的条螟就是感染金龟子绿僵菌（Metarhizium anisopliae）JF-6213 CGMCC No.5952的甘蔗螟虫。

药剂组的处理方法如下：将2株种在塑料盒（15cm×10cm×5cm）中的处于分蘖初期六片叶的甘蔗苗（每个塑料盒2株甘蔗苗），按照下述方法进行处理：将上述感染金龟子绿僵菌（Metarhizium anisopliae）JF-6213 CGMCC No.5952的甘蔗螟虫部分置于甘蔗苗喇叭口、叶鞘，部分放于甘蔗苗附近土壤，每个塑料盒放30只上述感染金龟子绿僵菌（Metarhizium anisopliae）JF-6213 CGMCC No.5952的甘蔗螟虫和30只体形大小相近、健康的3～4龄甘蔗螟虫(螟蛾科的条螟(Chilo venosatus))（3龄23只、4龄7只）。同时设置只放30只体形大小相近、健康的3～4龄甘蔗螟虫(螟蛾科的条螟(Chilo venosatus))（3龄23只、4龄7只）的对照，作为对照组。实验隔日观察甘蔗螟虫感病情况及死亡率，持续观察15天。结果表明药剂组对3～4龄条螟的LT₅₀(致死中时)为8.12天（表2）。

表2.甘蔗螟虫的死亡情况

实施例3、金龟子绿僵菌（Metarhizium anisopliae）JF-6213 CGMCC No.5952对甘蔗螟虫的室外防治效果

实验设在上一年度有甘蔗螟虫危害的地块。实验设两个处理，分别为金龟子绿僵菌菌剂组（处理1）和对照组（处理2）。每个处理100行（5亩）。

金龟子绿僵菌菌剂组下种时采用金龟子绿僵菌菌剂肥，金龟子绿僵菌菌剂肥按照如下方法制备：将分离纯化到的金龟子绿僵菌（Metarhizium anisopliae）JF-6213CGMCC No.5952菌株接种在PDA平板上在28℃培养8-9天；收集在PDA平板上培养的成熟孢子，用0.05%（0.05g/100ml）吐温-80水溶液分散，配制成终浓度为1×10⁸个孢子/ml（1×10⁸cfu/ml）的悬浮液。取10L悬浮液与10公斤甘蔗渣和15公斤积肥混匀后，得到金龟子绿僵菌菌剂肥，这些金龟子绿僵菌菌剂肥下种时撒入100行（5亩）的蔗沟中。

对照组下种时采用对照肥，对照肥按照如下方法制备：将0.05%（0.05g/100ml）吐温-80水溶液10L与10公斤甘蔗渣和15公斤积肥混匀后得到对照肥，这些对照肥下种时撒入100行（5亩）的蔗沟中。

金龟子绿僵菌菌剂组的处理方法如下：下种时，将上述制备的金龟子绿僵菌菌剂肥均匀撒入挖好的蔗沟。在甘蔗开始拔节时，用手持喷雾器喷施绿僵菌菌液（用0.05%（0.05g/100ml）吐温-80水溶液分散金龟子绿僵菌（Metarhizium anisopliae）JF-6213CGMCC No.5952的孢子配制成的终浓度为1×10⁸个孢子/ml（1×10⁸cfu/ml）的悬浮液），均匀喷雾至蔗苗滴水，重点喷施蔗苗喇叭口和叶鞘。

对照组的处理方法如下：下种时，将上述制备的对照肥均匀撒入挖好的蔗沟。在甘蔗开始拔节时，用手持喷雾器喷施0.05%（0.05g/100ml）吐温-80水溶液，均匀喷雾至蔗苗滴水，重点喷施蔗苗喇叭口和叶鞘。

金龟子绿僵菌菌剂组和对照组的其它管理方式均相同。将甘蔗培育至分蘖后期，马上开始拔节的时候，统计枯心率（枯心率=枯心苗数/总苗数），将甘蔗培育至收获期统计甘蔗产量。

结果表明金龟子绿僵菌菌剂组甘蔗的枯心率为3.9%，对照组甘蔗的枯心率为8.9%；金龟子绿僵菌菌剂组甘蔗的产量为20.2吨，对照组甘蔗的产量为14.6吨。说明金龟子绿僵菌菌剂组不但甘蔗的枯心率显著低于对照组，并且甘蔗产量显著高于对照组。

实施例4、金龟子绿僵菌（Metarhizium anisopliae）JF-6213 CGMCC No.5952对椰心叶甲、东亚飞蝗、荔枝椿象及菠萝灰粉蚧的室内杀虫活性测定

下述每个实验均包含如下两个处理，分别为金龟子绿僵菌JF-6213菌剂组和空白对照组。

下述金龟子绿僵菌JF-6213菌剂组采用的药剂均是金龟子绿僵菌JF-6213菌剂。金龟子绿僵菌JF-6213菌剂按照如下方法制备：将分离纯化到的金龟子绿僵菌（Metarhizium anisopliae）JF-6213 CGMCC No.5952菌株接种在PDA平板上在28℃培养8天；收集在PDA平板上培养的成熟孢子，用0.05%（0.05g/100ml）吐温-80水溶液分散，配制成终浓度为1×10⁸个孢子/ml（1×10⁸cfu/ml）的悬浮液，该悬浮液即为金龟子绿僵菌JF-6213菌剂。

下述空白对照组采用的药剂均是是0.05%（0.05g/100ml）吐温-80水溶液。

1、对椰心叶甲的室内杀虫活性测定

该实验中总共设二个处理，分别为金龟子绿僵菌JF-6213菌剂组（简称菌剂组）和空白对照组。

实验方法如下：取椰心叶甲（Brontispa longissima(Gestro)成虫置于培养皿中，将药剂均匀喷洒在试虫上，每个处理均3个重复，每重复30头，药剂用量为3mL/30头。记录死虫数，计算存活率，经SPSS11.5软件统计分析得到真菌LT₅₀(致死中时)。结果表明金龟子绿僵菌JF-6213菌剂组对椰心叶甲（Brontispa longissima(Gestro)成虫的LT₅₀为6.06天（表3）。

表3.椰心叶甲的死亡情况

2、对东亚飞蝗的室内杀虫活性测定

该实验中总共设二个处理，分别为金龟子绿僵菌JF-6213菌剂组（简称菌剂组）和空白对照组。

实验方法如下：

处理笼内放入东亚飞蝗(Locusta migratoria manilensis Meyen)4龄蝗蝻，每个处理3个重复，每重复30头蝗虫，药剂剂量为5mL/30头。利用小喷雾器直接喷雾于养虫笼内。记录死虫数，计算存活率，经SPSS11.5软件统计分析得到真菌LT₅₀(致死中时)。结果表明金龟子绿僵菌JF-6213菌剂组对东亚飞蝗(Locusta migratoriamanilensis Meyen)4龄蝗蝻的LT₅₀为5.67天（表4）。

表4.东亚飞蝗的死亡情况

3、对新菠萝灰粉蚧（Dysmicoccus neobrevipes(Beardsley)）的室内杀虫活性测定

该实验中总共设二个处理，分别为金龟子绿僵菌JF-6213菌剂组（简称菌剂组）和空白对照组。

实验方法如下：

每个处理笼内放入2片剑麻（Agave sisalana）叶子，新菠萝灰粉蚧（Dysmicoccusneobrevipes(Beardsley)）2-3龄若虫(3龄占70%、2龄占30%)接于剑麻叶子上，每个处理3个重复，每个重复30只新菠萝灰粉蚧（Dysmicoccus neobrevipes(Beardsley)，处理剂量为3ml/30只。利用小喷雾器直接喷雾于处理笼内。记录死虫数，计算存活率，经SPSS11.5软件统计分析得到真菌LT50(致死中时)。结果表明金龟子绿僵菌JF-6213菌剂组对新菠萝灰粉蚧（Dysmicoccus neobrevipes(Beardsley)）的LT50为8.95天（表5）。

表5.新菠萝灰粉蚧的死亡情况

4、对荔枝蝽蟓（Tessaratoma papillosa Drury）的室内杀虫活性测定

该实验中总共设二个处理，分别为金龟子绿僵菌JF-6213菌剂组（简称菌剂组）和空白对照组。

实验方法如下：

将大小相近、健康的荔枝蝽蟓（Tessaratoma papillosa Drury）3-4龄若虫(3龄占80%、4龄占20%)接于新鲜的荔枝嫩枝、嫩梢和花穗上,然后用手持喷雾器喷施药剂,均匀喷雾至虫体和枝花叶滴水为止。每处理重复3次,每重复30头,笼内用棉花球保湿,以保持相对湿度85%以上,室温25-32℃。记录死虫数，计算存活率，经SPSS11.5软件统计分析得到真菌LT₅₀(致死中时)。结果表明金龟子绿僵菌JF-6213菌剂组对荔枝蝽蟓3-4龄若虫的LT₅₀为8.22天（表6）。

表6.蝽蟓的死亡情况

5、对甘蔗螟虫室内杀虫活性的测定

该实验中总共设五个处理。除上述金龟子绿僵菌JF-6213菌剂组和空白对照组外，还设绿僵菌JF813菌剂组、绿僵菌MA3菌剂组和绿僵菌MA4菌剂组。

绿僵菌JF813菌剂组采用的药剂是绿僵菌JF813菌剂。绿僵菌JF813菌剂按照如下方法制备：将分离纯化到的绿僵菌（Metarhizium ssp.）JF813（绿僵菌对甘蔗螟虫的室内致病力测定.刘磊；梁昌聪；杨腊英；黄志；陆红霞；黄俊生.热带作物学报.2010年第31卷第2期235-240页；公众可从中国热带农业科学院环境与植物保护研究所获得）菌株接种在PDA平板上在28℃培养8天；收集在PDA平板上培养的成熟孢子，用0.05%（0.05g/100ml）吐温-80水溶液分散，配制成终浓度为1×10⁸个孢子/ml（1×10⁸cfu/ml）的悬浮液，该悬浮液即为绿僵菌JF813菌剂。

绿僵菌MA3菌剂组采用的药剂是绿僵菌MA3菌剂。绿僵菌MA3菌剂按照如下方法制备：将分离纯化到的绿僵菌（Metarhizium ssp.）MA3（绿僵菌对东亚飞蝗的室内致病力测定.代鹏 唐复润 石晓珍 程子路 黄俊生.热带作物学报.2006年第27卷第4期87-90页；公众可从中国热带农业科学院环境与植物保护研究所获得）菌株接种在PDA平板上在28℃培养8天；收集在PDA平板上培养的成熟孢子，用0.05%（0.05g/100ml）吐温-80水溶液分散，配制成终浓度为1×10⁸个孢子/ml（1×10⁸cfu/ml）的悬浮液，该悬浮液即为绿僵菌MA3菌剂。

绿僵菌MA4菌剂组采用的药剂是绿僵菌MA4菌剂。绿僵菌MA4菌剂按照如下方法制备：将分离纯化到的绿僵菌（Metarhizium ssp.）MA4（绿僵菌对甘蔗螟虫的室内致病力测定.刘磊；梁昌聪；杨腊英；黄志；陆红霞；黄俊生.热带作物学报.2010年第31卷第2期235-240页；公众可从中国热带农业科学院环境与植物保护研究所获得）菌株接种在PDA平板上在28℃培养8天；收集在PDA平板上培养的成熟孢子，用0.05%（0.05g/100ml）吐温-80水溶液分散，配制成终浓度为1×10⁸个孢子/ml（1×10⁸cfu/ml）的悬浮液，该悬浮液即为绿僵菌MA4菌剂。其中，绿僵菌（Metarhizium ssp.）MA4即为如下文献中的金龟子绿僵菌（Metarhizium anisopliae（Metschnikoff））MA4：海南椰心叶甲病原菌金龟子绿僵菌的分离、鉴定及其生防潜力.詹儒林 覃伟权 宋妍 张世清 H H HO 许天委 黄俊生.生态学报.2007年第4期。

实验方法如下：每个处理3个重复，每重复30只3～4龄条螟2株甘蔗苗。

将体形大小相近、健康的3～4龄甘蔗螟虫(条螟(Chilo venosatus))30只(3龄23只、4龄7只)接于2株分蘖初期六片叶的甘蔗苗上及甘蔗苗附近土壤中，该甘蔗苗种在塑料盒（15cm×10cm×5cm）中，每个塑料盒2株。用手持喷雾器喷施药剂，均匀喷雾至蔗苗滴水，重点喷施蔗苗喇叭口和叶鞘处。喷完在25-32℃培养，观察15天，隔天记录死虫数，计算存活率，经SPSS11.5软件统计分析得到LT₅₀(致死中时)。结果表明金龟子绿僵菌JF-6213菌剂组对3～4龄甘蔗螟虫的LT₅₀(致死中时)为7.44天（表7），绿僵菌JF813菌剂组对3～4龄甘蔗螟虫的LT₅₀(致死中时)为8.09天（表8），绿僵菌MA4菌剂组对3～4龄甘蔗螟虫的LT₅₀(致死中时)为8.39天（表9），绿僵菌MA3菌剂组对3～4龄甘蔗螟虫的LT₅₀(致死中时)为8.01天（表10）。

表7.金龟子绿僵菌JF-6213菌剂组对条螟的致死情况

表8.绿僵菌JF813菌剂组对条螟的致死情况

表9.绿僵菌MA4菌剂组对条螟的致死情况

表10.绿僵菌MA3菌剂组对条螟的致死情况

Claims (8)

1.金龟子绿僵菌（Metarhizium anisopliae），其特征在于：所述金龟子绿僵菌（Metarhizium anisopliae）的菌株号为JF-6213，其在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的登记入册编号为CGMCC No.5952。 

2.一种杀虫菌剂，它的活性成分是权利要求1所述的金龟子绿僵菌（Metarhizium anisopliae）。 

3.根据权利要求2所述的菌剂，其特征在于：所述金龟子绿僵菌（Metarhizium anisopliae）为分生孢子或/和菌丝体。 

4.根据权利要求2或3所述的菌剂，其特征在于：所述杀虫菌剂用于防治下述1）-5）植物害虫中的五种、四种、三种、两种或一种害虫： 

1）甘蔗螟虫； 

2）椰心叶甲（Brontispa longissima(Gestro)）； 

3）东亚飞蝗(Locusta migratoria manilensis Meyen)； 

4）荔枝蝽蟓（Tessaratoma papillosa Drury）； 

5）新菠萝灰粉蚧（Dysmicoccus neobrevipes(Beardsley)）。 

5.根据权利要求4所述的菌剂，其特征在于：所述甘蔗螟虫为条螟(Chilo venosatus)。 

6.权利要求1所述的金龟子绿僵菌（Metarhizium anisopliae）在制备植物杀虫剂中的应用；所述植物杀虫剂的靶标害虫为下述1）-5）植物害虫中的五种、四种、三种、两种或一种害虫： 

1）甘蔗螟虫； 

2）椰心叶甲（Brontispa longissima(Gestro)）； 

3）东亚飞蝗(Locusta migratoria manilensis Meyen)； 

4）荔枝蝽蟓（Tessaratoma papillosa Drury）； 

5）新菠萝灰粉蚧（Dysmicoccus neobrevipes(Beardsley)）。 

7.权利要求2或3所述的菌剂在制备植物杀虫剂中的应用；所述植物杀虫剂的靶标害虫为下述1）-5）植物害虫中的五种、四种、三种、两种或一种害虫： 

1）甘蔗螟虫； 

2）椰心叶甲（Brontispa longissima(Gestro)）； 

3）东亚飞蝗(Locusta migratoria manilensis Meyen)； 

4）荔枝蝽蟓（Tessaratoma papillosa Drury）； 

5）新菠萝灰粉蚧（Dysmicoccus neobrevipes(Beardsley)）。 

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于：所述甘蔗螟虫为条螟(Chilo  venosatus)。