CN106479904B - 一株平沙绿僵菌及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开一株平沙绿僵菌及其应用，该菌株于2016年7月7日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，分类名为分类命名为：平沙绿僵菌Metarhizium pingshaense，保藏号CGMCC 12765。该菌株是目前所有报道的杀虫真菌中杀虫效果最好的；具有速效性，对害虫产生半数致死的时间低于目前所有报道的杀虫真菌；具有速效性：从接种到虫子死亡(且确认是由于该菌致死)的时间很短。

Description

一株平沙绿僵菌及其应用
技术领域
本发明属于生物防治技术领域，具体涉及一株平沙绿僵菌及其应用。
背景技术
目前我国大力推行农药减施，实现农业的绿色安全生产。其中利用杀虫微生物进行生物防治是实现这一目标的重要途径。目前可用于生物防治的微生物包括细菌、真菌和病毒。因为真菌能够在自然条件下即可通过体壁接触感染并杀死害虫，而细菌、病毒等其它昆虫病原微生物只能通过消化道摄入的方式侵染寄主，所以真菌不仅可用于防治咀嚼式口器害虫，还能防治刺吸式口器害虫，具有更广泛的应用价值。迄今研究开发的丝孢类杀虫真菌制剂主要集中在自僵菌、绿僵菌及拟青霉等种类。它们的有效侵染体是分生孢子，可附着到虫体表面，在适宜条件下萌发并产生芽管，穿透寄主体壁进入血腔，继而利用寄主的营养在血腔中繁殖，当血腔中充满菌丝体时寄主死亡变僵，在适宜环境条件下菌丝从昆虫体壁长出并形成分生孢子梗而产生分生孢子，开始新的侵染。生防真菌在昆虫体表产生的分生孢子是气生分生孢子，对昆虫奇主而言是最有效的自然侵染体。丝孢类生防真菌在自然条件下对刺吸式口器害虫的侵染致死作用通常为小概率事件，害虫微生物防治的根本目的就是通过对潜力菌株有效侵染体的生产和制剂化，以田间大量布菌的形式，将自然的小概率事件变为人为可控的大概率事件，从而控制害虫种群的增长及危害。因此，生防菌株的分离和筛选是杀虫真菌制剂的技术关键。虽然生防真菌的自然分离物很多，但具备多方面优异性状并可深度研究开发的菌种或菌株并不多见。
发明内容
本发明的目的在于提供一株平沙绿僵菌。该菌株于2016年7月7日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏单位地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号。分类命名为：平沙绿僵菌(Metarhizium pingshaense)，保藏号CGMCC 12765。
本发明的另一目的在于提供上述平沙绿僵菌菌株在制备杀虫剂中的应用。
本发明的又一目的在于提供一种杀虫剂。
本发明的目的可以通过以下技术方案实现：
一株平沙绿僵菌，该菌株于2016年7月7日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，分类名为分类命名为：平沙绿僵菌Metarhizium pingshaense，保藏号CGMCC12765。
该菌株于2015年7月份于江苏省江浦采集的一头有明显感染真菌的金龟子幼虫尸体分离，在本实验室内用PDA、SDAY(均加入50mg/mL多果定、200mg/Ml氯霉素)和孟加拉红培养基分离，在PDA培养基上纯化得到。在PDA培养基上培养15d，表层真菌颜色为墨绿色，底部颜色浅黄色至浅黄褐色，成熟孢子为梭形，两端对称。研究表明该菌株用于防治农作物害虫效果显著，且具有速效性。
上述平沙绿僵菌菌株在制备杀虫剂中的应用。所述的杀虫剂用于防除农业害虫、卫生害虫和危害动物健康的害虫。所述的农业害虫、卫生害虫和危害动物健康的害虫包括但不限于半翅目害虫(褐飞虱、灰飞虱、白背飞虱、中黑盲蝽、烟粉虱、禾谷缢管蚜、黑尾叶蝉等)，鳞翅目害虫(二化螟、三化螟、小菜蛾、甜菜夜蛾、茶尺蠖等)，双翅目昆虫(黑腹果蝇、家蝇、柑橘小实蝇、麦黄吸浆虫、淡色按蚊等)，直翅目害虫(东亚飞蝗等)、鞘翅目(马铃薯甲虫等)、等翅目(黑翅土白蚁)、蛛形纲(二斑叶螨)。
一种杀虫剂，该杀虫剂以上述的平沙绿僵菌为主要有效成分。
上述的杀虫剂，优选的，所述的平沙绿僵菌在杀虫剂中的含量为103～1011孢子/克。
上述的杀虫剂，其在于以所述的平沙绿僵菌为主要有效成分和农药助剂、赋型剂配制成农药上允许的任意一种剂型，所述的剂型包括但不限于溶液剂、乳剂、混悬剂、粉剂、泡沫剂、糊剂、颗粒剂、气雾剂、用活性成分浸渍的天然的和合成的材料、微胶囊剂、包衣剂。
一种复配杀虫组合物，该复配杀虫组合物的主要有效成分包含组分(a)和组分(b)：
(a)权利要求1所述的平沙绿僵菌；
(b)细菌、真菌和化学农药中的至少一种。
上述的复配杀虫组合物，所述的主要有效成分和农药助剂、赋型剂配制成农药上允许的任意一种剂型。所述的平沙绿僵菌孢子在复配杀虫组合物中的含量为103～1011孢子/克。
本发明的有益效果：
(1)目前所有报道的杀虫真菌中杀虫效果最好的。
(2)具有速效性。对害虫产生半数致死的时间低于目前所有报道的杀虫真菌。
(3)速效性：从接种到虫子死亡(且确认是由于该菌致死)的时间很短。
附图说明
图1为毒力回归曲线。
图2为接种平沙绿僵菌菌株后东亚飞蝗累计死亡率。
具体实施方式
一、分离及生测数据：
该菌株于2015年7月份于江苏省江浦采集的一头有明显感染真菌的金龟子幼虫尸体分离，在本实验室内用PDA、SDAY(均加入50mg/mL多果定、200mg/Ml氯霉素)和孟加拉红培养基分离，在PDA培养基上纯化得到。在PDA培养基上培养15D，表层真菌颜色为墨绿色，底部颜色浅黄色至浅黄褐色，成熟孢子为梭形，两端对称。该菌株NJMp2103于2016年7月7日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，分类名为分类命名为：平沙绿僵菌Metarhizium pingshaense，保藏号CGMCC 12765。
将生长旺盛的菌株NJMp2103孢子加入到含0.05％(v/v)吐温-80的灭菌水中，涡旋混匀，取100微升加入到PDA固体培养基中(培养基在直径为9cm的一次性灭菌塑料培养皿中)，在25℃培养箱中黑暗培养10天左右。收集绿僵菌孢子，用含0.05％的吐温-80灭菌水将其混匀，并用血球计数板计数，并将其稀释到1×108孢子/mL。试虫为本实验室饲养多年的敏感型褐飞虱，用手持式喷雾器对初羽化雌成虫采用喷雾法进行室内毒力测定，三次重复结果见表1(其中结果1是每24小时统计一次死亡率)：
表1室内毒力测定结果
采用108、107、106、105、104对初羽化褐飞虱进行室内毒力测定，结果见表2：
表2梯度浓度的孢子悬液对初羽化褐飞虱的室内毒力测定
浓度 死亡率％
1×10^8 92.59259
1×10^7 83.4423
1×10^6 58.81896
1×10^5 63.18841
1×10^4 49.10256
CK 5.56
如图1所示的毒力回归曲线(6天致死中浓度为3.26±0.27*104，95％致死浓度为8.63±0.47*107。单位均为孢子/mL)。
如图2所示注射1微升含5000个芽生孢子的PDA培养液(培养液对昆虫无毒)，东亚飞蝗累计死亡率。
对4龄东亚飞蝗进行室内毒力测定(1×108孢子/mL喷雾法)，五天死亡率96％左右。
对四龄蝗虫注射1微升含5000个芽生孢子的PDA培养液(培养液对昆虫无毒)，六天死亡率82.78％，对照组(注射1微升PDA培养液)死亡率15.40％。
平沙绿僵菌菌株NJMp2103对不同害虫毒力结果如表3和表4所示(生测孢子浓度均为1×108孢子/mL)：
表3为平沙绿僵菌NJMp2103对不同害虫毒力结果
表4为平沙绿僵菌NJMp2103对不同害虫毒力结果
备注：①平沙绿僵菌NJMp2103对害虫3天累积致死率
②平沙绿僵菌NJMp2103对害虫6天累积致死率
结果显示：(1)本发明所筛选的平沙绿僵菌菌株NJMp2103是目前所有报道的杀虫真菌中杀虫效果最好的。(2)具有速效性。对害虫产生半数致死的时间低于目前所有报道的杀虫真菌。(3)速效性：从接种到虫子死亡(且确认是由于该菌致死)的时间很短。

Claims (4)

1.一株平沙绿僵菌，该菌株分类命名为：平沙绿僵菌（Metarhizium pingshaense），于2016年7月7日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏号CGMCCNo.12765。
2.一种杀虫剂，其特征在于该杀虫剂以权利要求1所述的平沙绿僵菌为主要有效成分。
3.根据权利要求2所述的杀虫剂，其特征在于所述的平沙绿僵菌在杀虫剂中的含量为103~1011孢子/克。
4.根据权利要求2或3所述的杀虫剂，其特征在于以所述的平沙绿僵菌为主要有效成分和农药助剂配制成农药上允许的任意一种剂型。
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