CN112391294A - 集峰曲霉及其在黄野螟防治中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了集峰曲霉(Aspergillus nomius)Q527，经中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心于2019年3月11日保藏，保藏的编号为CGMCC NO.17079，保藏单位为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号。本发明的集峰曲霉分离自黄野螟死亡幼虫体内，对黄野螟幼虫具有极强的致病性，可用于土沉香黄野螟幼虫的生物防治。集峰曲霉Q527的孢子浓度为108时，其悬浮液对黄野螟幼虫6d校正致病率达85.00％。本发明可以用于土沉香黄野螟幼虫的防治，前景广阔。
Description
技术领域
本发明公开了一种防治黄野螟的微生物制剂，具体涉及集峰曲霉Q527 在土沉香黄野螟生物防治中的应用。
技术背景
土沉香(Aquilaria sinensis(Loureiro)Sprenger)是我国的濒危树种，其木材可加工成药材也可作为香水工业的原料，经济价值显著。但是土沉香也受到一种重要食叶害虫危害——黄野螟，该虫常将土沉香叶片成片吃光，严重影响土沉香的健康生长。
由于黄野螟低龄幼虫聚集危害，利用常规的化学药剂防治虽然有一定的效果，但是也带来了严重的抗药性和环境安全问题。有关集峰曲霉的研究已有报道在白蚁防治种具有明显的作用，但是未见在鳞翅目害虫幼虫的防治中有过报道。
螟蛾类害虫可以选择多种天敌，如赤眼蜂、白僵菌、苏云金杆菌等，也有很多文献报道了有关黄野螟的化学防治方法。本发明利用一种提取自黄野螟死亡幼虫体内的致死菌(集峰曲霉)进行培养，然后再次用来防治黄野螟幼虫，从而达到生物防治黄野螟的目的。
发明内容
本发明所提供的一种集峰曲霉(Aspergillus nomius)Q527，经过中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心于2019年3月11日保藏，保藏单位为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号。保藏的编号为CGMCCNO.17079。
本发明提供的集峰曲霉(Aspergillus nomius)Q527对土沉香重要害虫黄野螟具有较强的致病性，用于黄野螟的生物防治前景广阔。
一种防治黄野螟幼虫的悬浮孢子液，其活性成分是集峰曲霉 (Aspergillusnomius)Q527。
本发明的集峰曲霉Q527的孢子浓度为108时，其悬浮液对黄野螟幼虫 6d校正致病率达85.00％。本发明可以用于土沉香黄野螟幼虫的防治，对有效控制黄野螟虫口密度前景广阔。
附图说明
图1为集峰曲霉(Aspergillus nomius)Q527在PDA上的生长情况和菌落孢子特征；
图2为基于16SrDNA序列构建的集峰曲霉(Aspergillus nomius)Q527 系统发育树。
具体实施方式
为了进一步解释本发明所描述的内容，本发明结合具体的实施例对集峰曲霉(Aspergillus nomius)Q527的分离和鉴定进行说明。
本实施例的结果是对本发明的具体分析，不对发明中的任何内容构成限制。
菌株Q527的收集、分离
菌株Q527收集：2018年8月收集广西凭祥土沉香林黄野螟自然死亡幼虫，经组织分离和单孢纯化获得菌株。
菌株Q527分离：超净台紫外灭菌30min，准备好无菌培养基。将虫尸用70％酒精冲洗两次，0.1％升汞溶液浸洗30s，再用无菌水冲洗10-15s，放入干净的培养皿内。用无菌手术刀片切取5mm发病位置的虫尸，将切割好的虫体放置在PDA中心位置，在培养皿外侧做标记，用封口膜将接种好的培养皿密封，置于26℃恒温培养，待菌落长至1/2皿，挑取少量菌丝移入新PDA继续培养，并记录时间和分离率。纯化培养和斜面试管培养，保存菌株，命名菌株编号为Q527，于4℃冰箱保存。PDA培养基为使用马铃薯块的常规培养基。
菌株Q527鉴定
菌株Q527形态鉴定：
PDA培养基上的致病菌菌株生长呈规则的圆形，边缘整齐，菌丝生长形态疏密有秩，菌丝初期呈白色丝状，后期呈黄绿色，5d后菌落背面颜色深黄色，出现明显的轮纹。分生孢子直径3.5～5.7um，梗直立，无分枝，分生孢子头生长初期近球形，产孢结构为单层，圆形至近圆形的分生孢子表面具有光滑的孢子壁外，并呈散状生长在瓶梗上，生长后期由中心开始逐渐转变为黑色。
菌株Q527分子生物学鉴定：
采用ITS引物ITS1 5`-TCCGTAGGTGAACCTGCGG-3`和ITS4 5`-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3`进行PCR扩增，ITS测序结果：
使用MEGA7软件制作系统发育树如图2，通过鉴定发现所测Q527菌株为集峰曲霉(Aspergillus nomius)。
菌株Q527对黄野螟的毒力检验
酶液制备：取含1.0×108个孢子·mL-1集峰曲霉孢子悬浮液，用血球计数板测量浓度，依次配制成浓度为1×104、1×105、1×106、1×107的孢子液。
试虫准备：将20头4龄黄野螟幼虫置于2皿，共5组，三个重复，将孢子液喷至土沉香叶片饲喂幼虫。连续观察10d，每天统计死亡的幼虫并取出，计算死亡率、致死中浓度(LC50)。
表1集峰曲霉对黄野螟幼虫的致死率
从表1可以看出，随着孢子浓度和时间的增加，幼虫在第6d的浓度为 1.0×108孢子液死亡率达到85.00％。
表2集峰曲霉对黄野螟幼虫的LC50
通过从死亡幼虫体内再次分离菌株，并继续按照上述方法培养、鉴定，再次获得了集峰曲霉的致病菌株。
综上所述，本发明从黄野螟幼虫体内提取到的集峰曲霉，本发明的菌株取自黄野螟死亡幼虫体内，不受其他曲霉发明的限制，可以用于黄野螟幼虫的防治。
Claims (3)
1.集峰曲霉及其在黄野螟防治中的应用，其特征在于：集峰曲霉(Aspergillusnomius)Q527，经中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心于2019年3月11日保藏，保藏编号为CGMCC NO.17079。
2.权利要求1所述的集峰曲霉(Aspergillus nomius)Q527，分离自黄野螟死亡幼虫体内，主要用于黄野螟幼虫的生物防治。
3.一种防治黄野螟幼虫的孢子悬浮液，其特征在于，活性成分为集峰曲霉(Aspergillus nomius)Q527。
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Legal Events
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| GR01 | Patent grant | ||
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Application publication date: 20210223 Assignee: GUANGXI YUKOU INNOVATION AGRICULTURE CO.,LTD. Assignor: GUANGXI ZHUANG AUTONOMOUS REGION FORESTRY Research Institute Contract record no.: X2023980045104 Denomination of invention: Jifeng Aspergillus and Its Application in the Control of Yellow Field Borer Granted publication date: 20230808 License type: Common License Record date: 20231102 |
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