CN107836465B - 一种以含有金龟子绿僵菌的发酵液和氟蚁腙为主要活性成分的杀虫组合物 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种含有金龟子绿僵菌发酵液和氟蚁腙为主要活性成分的杀虫组合物，该组合物是以金龟子绿僵菌粉、金龟子绿僵菌发酵液和氟蚁腙为主要活性成分；或者，该组合物是以含有金龟子绿僵菌的发酵液和氟蚁腙为主要活性成分。室内毒力测定结果显示本杀虫剂对德国小蠊具有良好灭杀效果，并有显著的增效作用。
Description
技术领域
本发明涉及一种杀虫组合物，具体涉及一种含有金龟子绿僵菌的发酵液和氟蚁腙为主要活性成分的杀虫组合物。
背景技术
金龟子绿僵菌（Metarhizium anisopliae）属于半知菌亚门绿僵菌属，是一种广谱的昆虫病原真菌，可寄生于多种昆虫体内。其具有分布范围大，寄生广谱等特点，对人、畜和作物无毒害，是当前世界上研究和应用最多的虫生真菌之一。据不完全统计，全世界约有200多种昆虫能被这种真菌感染致死。绿僵菌具有显著的杀虫效果，并且具有不同于现有杀虫剂的全新的作用机理，主要作用于昆虫血淋巴免疫系统，使之丧失免疫防御功能。绿僵菌感染后的死亡虫体有大量菌丝分布。全球对绿僵菌的研究已有100多年的历史，1879年，Metchnikoff首次利用绿僵菌防治金龟子幼虫并且取得成功，但由于受到许多因素的制约，导致其大田实际防效不稳定，极大地制约了其规模化生产和应用。
氟蚁腙（hydramethylnon）是由美国氰胺公司发现的一种新型卫生杀虫剂，主要防治蚁科、蜚蠊科等农业及卫生害虫，其特性为高效低毒，且具有“连锁灭蟑”的效果，是世界卫生组织和我国都推荐可采用的卫生害虫杀虫剂之一。但是，氟蚁腙对害虫的有效控制时间较短，且害虫对氟蚁腙逐渐产生抗药性也已经发展成为一个重要问题。采用农药复配技术或混合施用技术是克服或延缓抗药性的一个重要方法，因此，开发包含氟蚁腙的复配型杀虫剂具有重要意义。
发明内容
针对上述现有技术，本发明的目的是提供一种含有金龟子绿僵菌的发酵液和氟蚁腙为主要活性成分的杀虫组合物。
为实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：
本发明的第一个方面，提供一种防治蟑螂的组合物，该组合物是以金龟子绿僵菌粉、金龟子绿僵菌发酵液和氟蚁腙为主要活性成分；或者，该组合物是以含有金龟子绿僵菌的发酵液和氟蚁腙为主要活性成分。
本发明的第二个方面，提供上述防治蟑螂的组合物的制备方法，包括以下步骤：
将金龟子绿僵菌粉、金龟子绿僵菌发酵液和氟蚁腙混合均匀，或者将含有金龟子绿僵菌的发酵液和氟蚁腙直接混合均匀，制备得到所述防治蟑螂的组合物。
本发明的第三个方面，提供上述组合物在制备防治蟑螂制剂中的应用。
本发明的第四个方面，提供一种用于昆虫生物防治的的复配杀虫剂，该杀虫剂是由主剂和辅剂组成，所述主剂是由金龟子绿僵菌粉、金龟子绿僵菌发酵液和氟蚁腙组成；或者，所述主剂是由含有金龟子绿僵菌的发酵液和氟蚁腙组成。
本发明的第五个方面，提供上述复配杀虫剂的制备方法，包括以下步骤：将主剂和辅剂混合均匀，制备得到所述复配杀虫剂。
本发明的第六个方面，提供上述复配杀虫剂在防治蟑螂或其它咀嚼式口器昆虫中的应用。
与现有技术相比，本发明的技术方案具有如下有益效果：
1、金龟子绿僵菌粉、金龟子绿僵菌发酵液和氟蚁腙复配具有极强的应用潜力，绿僵菌在1×105～1×109CFU/ml和复配杀虫剂主剂中氟蚁腙含量范围为0.25%～1%复配下全部表现出极强的增效作用。
2、金龟子绿僵菌粉、金龟子绿僵菌发酵液和氟蚁腙科学复配起效快且控制时间长，将三者复配更有利于发挥三种单剂的功效，复配后有“一加一加一大于三”的协同效果，且氟蚁腙的使用量大大低于市面上普通的化学杀虫剂。
具体实施方式
应该指出，以下详细说明都是示例性的，旨在对本发明提供进一步的说明。除非另有指明，本文使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属技术领域的普通技术人员通常理解的相同含义。
需要注意的是，这里所使用的术语仅是为了描述具体实施方式，而非意图限制根据本发明的示例性实施方式。如在这里所使用的，除非上下文另外明确指出，否则单数形式也意图包括复数形式，此外，还应当理解的是，当在本说明书中使用术语“包含”和/或“包括”时，其指明存在特征、步骤、操作和/或它们的组合。
术语解释：
本发明中的金龟子绿僵菌发酵液是指除去菌丝和孢子的金龟子绿僵菌发酵液。
正如背景技术所介绍的，针对化学防治昆虫产生的广泛抗药性、污染环境、对人畜毒害大，而生物防治起效慢等诸多问题，现有技术中的生物和化学复配制剂的协同效应大都不显著，只是简单的效应相加作用，为解决以上技术问题，本发明提出了一种新型防治蟑螂的组合物，该组合物是以金龟子绿僵菌粉、金龟子绿僵菌发酵液和氟蚁腙为主要活性成分；或者，该组合物是以含有金龟子绿僵菌的发酵液和氟蚁腙为主要活性成分。
金龟子绿僵菌通过与寄主之间的生理生化综合作用对寄主进行侵染，体壁接触是其侵染寄主的主要方式，除此之外还可以通过气门、消化道等多种途径进行侵染。而氟蚁腙为胃毒，氟蚁腙被蟑螂等昆虫吸收后作用于其线粒体上，通过抑制电子传递链（ETC）上的细胞色素b-c1的集合破坏细胞呼吸作用，从而抑制蟑螂等昆虫体内代谢系统，使细胞得不到足够的能量而弛缓性麻痹死亡。两者杀虫机理不同，从不同角度对德国小蠊进行灭杀，从而提高了灭杀效果。
绿僵菌与氟蚁腙都具有连锁灭蟑作用，绿僵菌寄生在德国小蠊体内会大量繁殖，在短时间内在寄主体表产生大量孢子，试虫间相互接触即可相互感染。另一方面进入蟑螂体内的氟蚁腙有50%的有效成分以未被代谢的完整分子形式随粪便排出，又因为蟑螂有食粪行为，所以有连锁灭蟑的效果。而绿僵菌在发酵过程中会产生虫草素等多种毒素，这些毒性产物其中一方面的作用就是扰乱昆虫肠道菌群稳态，使昆虫抵抗力降低；且能分泌表皮降解酶等物质破坏昆虫体壁。三种成分复配到一起提高了德国小蠊种群间感染的概率。
在本发明优选的实施方案中，所述金龟子绿僵菌粉、金龟子绿僵菌发酵液的添加比例为1g:1mL，氟蚁腙的质量占组合物总质量的0.25~1%，其中所述金龟子绿僵菌粉的活菌数为1×105～1×109CFU/g（即每克组合物含有1×105～1×109CFU的活菌）；
或者，氟蚁腙的质量占组合物总质量的0.25~1%，其中所述金龟子绿僵菌的活菌数为1×105～1×109 CFU/g（即每克组合物含有1×105～1×109CFU的活菌）。
在本发明优选的实施方案中，所述金龟子绿僵菌发酵液是通过以下方法制备得到的：接种后的斜面于28℃培养15d；然后再接种于摇瓶种子液体培养基中，置于旋转摇床中，转速150 ～160 r/min ，28℃培养4 d ，制备摇瓶种子；最后接种于发酵基础培养基中，在摇床上培养6d，转速150 ～160 r/min，发酵终止后，除去菌丝，滤液离心，去除沉淀，收集上清液，即为金龟子绿僵菌发酵液。
具体方法如下：
1 菌株与试剂
金龟子绿僵菌（Metarhizium anisopliae，CGMCC No.13170）分离并保存在山东师范大学动物抗性重点实验室；蔗糖；蛋白胨；酵母膏；麦麸；木糖；黄豆浆；(NH4)2SO4；KH2PO4；MgSO4·7H2O。
斜面种子培养基(g/L)：蔗糖25、黄豆3、酵母膏5、蛋白胨2 、麦麸3 、KH2PO4 1、MgSO4·7H2O 0.5、琼脂18，初始pH6。
摇瓶种子液体培养基(g/L)：蔗糖15 、蛋白胨4 、酵母膏2、麦麸5 、KH2PO4 1、MgSO4·7H2O 0.5，初始pH6；发酵基础培养基(g/L)：葡萄糖20、蛋白胨4、酵母膏2、KH2PO4 1、MgSO4·7H2O 0.5，初始pH6。
3 仪器与设备
全自动高压灭菌器（HVE-50，日本Hirayama公司）；微量移液器（日本NICHIRYO公司产品）；高性能无菌实验台（DL-CJ-1N型，哈尔滨市东联电子技术开发有限公司北京分公司）；精密天平（感量1/1000g，北京赛多利斯仪器系统有限公司）；恒温培养振荡器（HS-100B，上海和呈仪器制造有限公司）；涡旋震荡器（Vortex3000，北京桑翌科技发展有限公司）；烧杯；药匙；镊子等。
4 培养及样品制备
接种后的斜面于28℃培养约15d，置于4℃保存备用；500mL 摇瓶装200mL 培养液，然后置于旋转摇床，转速1 50 ～1 60 r/min ，2 8℃培养4 d ，制备摇瓶种子。250mL 摇瓶装150mL 发酵基础培养基，接种体积分数3%，然后如前所述，在摇床上培养6d，3 个重复。发酵终止后，用灭菌滤纸过滤去除菌丝，滤液5000r/min离心15min，去除沉淀，收集上清为金龟子绿僵菌发酵液。
在本发明优选的实施方案中，还提供上述防治蟑螂的组合物的制备方法，包括以下步骤：
将金龟子绿僵菌粉、金龟子绿僵菌发酵液和氟蚁腙混合均匀，或者将含有金龟子绿僵菌的发酵液和氟蚁腙直接混合均匀，制备得到所述防治蟑螂的组合物。
在本发明优选的实施方案中，还提供上述组合物在制备防治蟑螂制剂中的应用。
在本发明优选的实施方案中，还提供一种用于昆虫生物防治的的复配杀虫剂，该杀虫剂是由主剂和辅剂组成，所述主剂是由金龟子绿僵菌粉、金龟子绿僵菌发酵液和氟蚁腙组成；或者，所述主剂是由含有金龟子绿僵菌的发酵液和氟蚁腙组成。
其中，所述主剂的质量百分比为10.25%~11%，辅剂的质量百分比为89.75%~89%。
在本发明优选的实施方案中，所述金龟子绿僵菌粉、金龟子绿僵菌发酵液的添加比例为1g:1mL，氟蚁腙的质量占组合物总质量的0.25~1%，其中所述金龟子绿僵菌粉的活菌数为1×105～1×109CFU/g（即每克组合物含有1×105～1×109CFU的活菌）；
或者，氟蚁腙的质量占组合物总质量的0.25~1%，其中所述金龟子绿僵菌的活菌数为1×105～1×109 CFU/g（即每克组合物含有1×105～1×109CFU的活菌）。
在本发明优选的实施方案中，所述辅剂是由溶剂和其它辅剂组成，其质量比例为1：2.5~3.0，进一步优选的为1：2.7。
其中，所述溶剂为不饱和脂肪酸类，优选的，所述不饱和脂肪酸类为油酸和/或亚油酸。
进一步的，所述不饱和脂肪酸类，可混合有少量饱和脂肪酸。
所述其它辅料为小鼠全价饲料（优选粉末）和红糖，所述小鼠全价饲料可为常规市售的小鼠全价饲料，比如可通过江苏省协同医药生物工程有限责任公司进行购买。
在本发明优选的实施方案中，所述金龟子绿僵菌粉中的金龟子绿僵菌为金龟子绿僵菌(Metarhiziumanisopliae) EB0732，该菌株记载在专利CN106544278A中，该菌株的分类命名是金龟子绿僵菌（Metarhizium anisopliae），编号为EB0732，该菌株已于2016年10月31日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为保藏编号为CGMCC No.13170。
在本发明优选的实施方案中，含有金龟子绿僵菌的发酵液是金龟子绿僵菌(Metarhiziumanisopliae)EB0732发酵液。
在本发明优选的实施方案中，所述氟蚁腙的产品形式为粉末配制物。
在本发明优选的实施方案中，提供上述复配杀虫剂的制备方法，包括以下步骤：将主剂和辅剂混合均匀，制备得到所述复配杀虫剂；通过常规的技术手段可将复配杀虫剂加工成固体。
在本发明优选的实施方案中，还提供上述复配杀虫剂在防治蟑螂或其它咀嚼式口器昆虫中的应用。
在本发明优选的实施方案中，所述蟑螂为德国蟑螂德国小蠊(Blatellagermanica)、褐带蟑螂长须皮蠊(Supellalongipaloa)、东方蟑螂东方蜚蠊(Blattaorientalis)、烟褐蟑螂烟色大蠊(Periplanetafuliginosa)、美洲蟑螂美洲大蠊(Periplaneta Americana)、土耳其斯坦蟑螂(Blattalateralis)、田野蟑螂(Blattavaga)的一种或多种，其他咀嚼式口器昆为蝗虫。
在本发明中，金龟子绿僵菌可通过体壁接触传播病原孢子。
发明人通过大量的室内筛选试验，发现金龟子绿僵菌、金龟子绿僵菌发酵液和氟蚁腙混配对德国小蠊具有协同增效作用。为了更好的理解发明的实质，下面结合实例对本发明的技术内容作详细的说明，但本发明的内容并不局限如此，不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。
实施例1
一种用于昆虫生物防治的的复配杀虫剂，该杀虫剂是由主剂和辅剂组成，所述主剂的质量百分比为10.25%，辅剂的质量百分比为89.75％，所述主剂是由含有金龟子绿僵菌的发酵液和氟蚁腙组成，氟蚁腙的质量占复配杀虫剂总质量的0.25%，其中所述金龟子绿僵菌的活菌数为1×105 CFU/g；所述辅剂是由溶剂和其它辅剂组成，其质量比例为1：2.7，所述溶剂为油酸，所述其它辅剂为小鼠全价饲料粉末和红糖。
其中，所述金龟子绿僵菌粉中的金龟子绿僵菌为金龟子绿僵菌(Metarhiziumanisopliae) EB0732，该菌株已于2016年10月31日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为保藏编号为CGMCC No.13170。
所述用于昆虫生物防治的的复配杀虫剂的制备方法，包括以下步骤：
（1）含有金龟子绿僵菌的发酵液的制备：
1 菌株与试剂
金龟子绿僵菌(Metarhizium anisopliae)保存在山东师范大学动物抗性重点实验室；蔗糖；蛋白胨；酵母膏；麦麸；木糖；黄豆浆；(NH4)2SO4；KH2PO4；MgSO4·7H2O。
斜面种子培养基(g/L)：蔗糖25、黄豆3、酵母膏5、蛋白胨2 、麦麸3 、KH2PO4 1、MgSO4·7H2O 0.5、琼脂18，初始pH6。
摇瓶种子液体培养基(g/L)：蔗糖15 、蛋白胨4 、酵母膏2、麦麸5 、KH2PO4 1、MgSO4·7H2O 0.5，初始pH6；发酵基础培养基(g/L)：葡萄糖20、蛋白胨4、酵母膏2、KH2PO4 1、MgSO4·7H2O 0.5，初始pH6。
3 仪器与设备
全自动高压灭菌器（HVE-50，日本Hirayama公司）；微量移液器（日本NICHIRYO公司产品）；高性能无菌实验台（DL-CJ-1N型，哈尔滨市东联电子技术开发有限公司北京分公司）；精密天平（感量1/1000g，北京赛多利斯仪器系统有限公司）；恒温培养振荡器（HS-100B，上海和呈仪器制造有限公司）；涡旋震荡器（Vortex3000，北京桑翌科技发展有限公司）；烧杯；药匙；镊子等。
4 培养及样品制备
接种后的斜面于28℃培养约15d，置于4℃保存备用；500mL 摇瓶装200mL培养液，然后置于旋转摇床，转速150 ～160 r/min ，28℃培养4d，制备摇瓶种子。250mL摇瓶装150mL发酵基础培养基，接种体积分数3%，然后如前所述，在摇床上培养6d，3个重复。发酵终止后，即得含有金龟子绿僵菌的发酵液。
（2）将主剂和辅剂混合均匀，制备得到所述复配杀虫剂。
实施例2
一种用于昆虫生物防治的的复配杀虫剂，该杀虫剂是由主剂和辅剂组成，所述主剂的质量百分比为11%，辅剂的质量百分比为89％，所述主剂是由含有金龟子绿僵菌发酵液和氟蚁腙组成，氟蚁腙的质量占复配杀虫剂总质量的0.50%，其中所述金龟子绿僵菌的活菌数为1×106 CFU/g；所述辅剂是由溶剂和其它辅剂组成，其质量比例为1：2.7，所述溶剂为油酸，所述其它辅剂为小鼠全价饲料粉末和红糖。
其中，所述金龟子绿僵菌粉中的金龟子绿僵菌为金龟子绿僵菌(Metarhiziumanisopliae) EB0732，该菌株已于2016年10月31日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为保藏编号为CGMCC No.13170。
所述用于昆虫生物防治的的复配杀虫剂的制备方法，包括以下步骤：
（1）含有金龟子绿僵菌的发酵液的制备：
1 菌株与试剂
金龟子绿僵菌(Metarhizium anisopliae)保存在山东师范大学动物抗性重点实验室；蔗糖；蛋白胨；酵母膏；麦麸；木糖；黄豆浆；(NH4)2SO4；KH2PO4；MgSO4·7H2O。
斜面种子培养基(g/L)：蔗糖25、黄豆3、酵母膏5、蛋白胨2 、麦麸3 、KH2PO4 1、MgSO4·7H2O 0.5、琼脂18，初始pH6。
摇瓶种子液体培养基(g/L)：蔗糖15 、蛋白胨4 、酵母膏2、麦麸5 、KH2PO4 1、MgSO4·7H2O 0.5，初始pH6；发酵基础培养基(g/L)：葡萄糖20、蛋白胨4、酵母膏2、KH2PO4 1、MgSO4·7H2O 0.5，初始pH6。
3 仪器与设备
全自动高压灭菌器（HVE-50，日本Hirayama公司）；微量移液器（日本NICHIRYO公司产品）；高性能无菌实验台（DL-CJ-1N型，哈尔滨市东联电子技术开发有限公司北京分公司）；精密天平（感量1/1000g，北京赛多利斯仪器系统有限公司）；恒温培养振荡器（HS-100B，上海和呈仪器制造有限公司）；涡旋震荡器（Vortex3000，北京桑翌科技发展有限公司）；烧杯；药匙；镊子等。
4 培养及样品制备
接种后的斜面于28℃培养约15d，置于4℃保存备用；500mL 摇瓶装200mL 培养液，然后置于旋转摇床，转速150～160 r/min ，28℃培养4d，制备摇瓶种子。250mL摇瓶装150mL发酵基础培养基，接种体积分数3%，然后如前所述，在摇床上培养6d，3个重复。发酵终止后，即得含有金龟子绿僵菌的发酵液。
（2）将主剂和辅剂混合均匀，制备得到所述复配杀虫剂。
实施例3
一种用于昆虫生物防治的的复配杀虫剂，该杀虫剂是由主剂和辅剂组成，所述主剂的质量百分比为10.5%，辅剂的质量百分比为89.5％，所述主剂是由含有金龟子绿僵菌发酵液和氟蚁腙组成，氟蚁腙的质量占复配杀虫剂总质量的0.75%，，其中所述金龟子绿僵菌的活菌数为1×104 CFU/g；所述辅剂是由溶剂和其它辅剂组成，其质量比例为1：2.7，所述溶剂为油酸，所述其它辅剂为小鼠全价饲料粉末和红糖。
其中，所述金龟子绿僵菌粉中的金龟子绿僵菌为金龟子绿僵菌(Metarhiziumanisopliae) EB0732，该菌株已于2016年10月31日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为保藏编号为CGMCC No.13170。
所述用于昆虫生物防治的的复配杀虫剂的制备方法，包括以下步骤：
（1）含有金龟子绿僵菌发酵液的制备：
1 菌株与试剂
金龟子绿僵菌(Metarhizium anisopliae)保存在山东师范大学动物抗性重点实验室；蔗糖；蛋白胨；酵母膏；麦麸；木糖；黄豆浆；(NH4)2SO4；KH2PO4；MgSO4·7H2O。
斜面种子培养基(g/L)：蔗糖25、黄豆3、酵母膏5、蛋白胨2 、麦麸3 、KH2PO4 1 、MgSO4·7H2O 0.5、琼脂18，初始pH6。
摇瓶种子液体培养基(g/L)：蔗糖15 、蛋白胨4 、酵母膏2、麦麸5 、KH2PO4 1、MgSO4·7H2O 0.5，初始pH6；发酵基础培养基(g/L)：葡萄糖20、蛋白胨4、酵母膏2、KH2PO4 1、MgSO4·7H2O 0.5，初始pH6。
3 仪器与设备
全自动高压灭菌器（HVE-50，日本Hirayama公司）；微量移液器（日本NICHIRYO公司产品）；高性能无菌实验台（DL-CJ-1N型，哈尔滨市东联电子技术开发有限公司北京分公司）；精密天平（感量1/1000g，北京赛多利斯仪器系统有限公司）；恒温培养振荡器（HS-100B，上海和呈仪器制造有限公司）；涡旋震荡器（Vortex3000，北京桑翌科技发展有限公司）；烧杯；药匙；镊子等。
4 培养及样品制备
接种后的斜面于28℃培养约15d，置于4℃保存备用；500mL 摇瓶装200mL培养液，然后置于旋转摇床，转速150～160 r/min，28℃培养4d ，制备摇瓶种子。250mL 摇瓶装150mL发酵基础培养基，接种体积分数3%，然后如前所述，在摇床上培养6d，3个重复。发酵终止后，即得含有金龟子绿僵菌的发酵液。
（2）将主剂和辅剂混合均匀，制备得到所述复配杀虫剂。
实验例
实验对象为德国小蠊（Blattellagermanica）雄性敏感品系成虫。实验分为三个大组分别为绿僵菌试验组、氟蚁腙试验组和复配试验组，所述金龟子绿僵菌粉中的金龟子绿僵菌为金龟子绿僵菌(Metarhiziumanisopliae) EB0732。通过前期的预实验的结果分析确定，要使试验达到最佳效果，每只试虫上投放的绿僵菌浓度应在1×105～1×109CFU/g之间，复配杀虫剂主剂中氟蚁腙最佳含量范围为0.25%～1%。所以设计给试虫投放的绿僵菌孢子浓度梯度为：1×105，1×106，1×107，1×108，1×109CFU/g；复配杀虫剂主剂中氟蚁腙含量梯度为：0.25%、0.5%、0.75%、1%。每个大组内均含有一个对照组，如若对照组试虫死亡率超过10%则重新进行试验。投放药剂后按照一定的时间间隔定时观察和记录各组试虫的死亡数，以备后期进行数据分析。复配药剂增效与否分析采用Mansour法，即共毒因子法。共毒因子数值超过+20为增效作用，低于-20为拮抗作用，在+20～-20之间为相加作用。其计算公式为：
“混剂实际死亡率”是实际观察的各组混剂实际死亡率，“混剂的理论死亡数”是从各单剂的毒力回归线上直接查出或由单剂的回归方程计算出相应的死亡率相加而成。
实验结果如表：
表1 各试验回归方程及单剂7d理论死亡率
表2 复配剂7d共毒因子
表3 半数致死时间比较
实验结果：
(1)共毒因子方面：
全部20组不同配比的复配剂的共毒因子数值中，全部复配剂共有16组的共毒因子数值超过+20，属于增效作用，无一出现拮抗作用。
(2)第7d累积死亡率方面：
两种单剂理论死亡率之和在第7d时最高死亡率为94%，而复配制剂在第7d时，已有11组实验的试虫死亡率达到100%，有9组实验试虫的累积死亡率大于90%。
（3）达到半数致死的时间方面：
相同条件下，单独使用绿僵菌或氟蚁腙时各种浓度药剂使试虫累计死亡率达到50%的平均时间分别为15.6d和7d，而将两者复配后各浓度的药剂使试虫累计死亡率达到50%的平均时间只需4.2 d。
综上所述，加入金龟子绿僵菌发酵液，在金龟子绿僵菌与氟蚁腙按一定比例复配之后是可以起到增效作用的，而且复配之后起效时间大大缩短，将三者复配更有利于发挥三种单剂的灭蟑功效，复配后有“一加一加一大于三”的效果。相同条件下，复配剂使试虫达到半数致死的平均时间比两种单剂所用平均时间都要短，其起效速度超过纯化学药剂。所以将绿僵菌、发酵液和氟蚁腙进行复配的增效作用明显，防效明显加强，可以克服绿僵菌反应缓慢和氟蚁腙控制时间有限且易使德国小蠊产生抗药性的缺陷。不仅如此，氟蚁腙与金龟子绿僵菌还有对人和其他哺乳动物无毒无害，复配之后高效环保、安全健康的优点。
上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。
Claims (10)
1.一种防治蟑螂的组合物，其特征是：该组合物是以金龟子绿僵菌粉、氟蚁腙为主要活性成分；
氟蚁腙与金龟子绿僵菌粉的浓度配比为：0.25%氟蚁腙：1x105CFU/g、0.50%氟蚁腙：1x105CFU/g、0.75%氟蚁腙：1x105CFU/g、1.00%氟蚁腙：1x105CFU/g、0.25%氟蚁腙：1x106CFU/g、0.50%氟蚁腙：1x106CFU/g、0.75%氟蚁腙：1x106CFU/g、1.00%氟蚁腙：1x106CFU/g、0.25%氟蚁腙：1x107CFU/g、0.50%氟蚁腙：1x107CFU/g、0.75%氟蚁腙：1x107CFU/g、0.25%氟蚁腙：1x108CFU/g、0.50%氟蚁腙：1x108CFU/g、0.75%氟蚁腙：1x108CFU/g、0.25%氟蚁腙：1x109CFU/g或0.50%氟蚁腙：1x109CFU/g。
2.权利要求1所述的防治蟑螂的组合物在制备防治蟑螂制剂中的应用。
3.一种用于昆虫生物防治的的复配杀虫剂，该杀虫剂是由主剂和辅剂组成，其特征是：所述主剂是由金龟子绿僵菌粉和氟蚁腙组成；
所述主剂的质量百分比为10.25%~11%，辅剂的质量百分比为89.75%~89%；
氟蚁腙与金龟子绿僵菌粉的浓度配比为：0.25%氟蚁腙：1x105CFU/g、0.50%氟蚁腙：1x105CFU/g、0.75%氟蚁腙：1x105CFU/g、1.00%氟蚁腙：1x105CFU/g、0.25%氟蚁腙：1x106CFU/g、0.50%氟蚁腙：1x106CFU/g、0.75%氟蚁腙：1x106CFU/g、1.00%氟蚁腙：1x106CFU/g、0.25%氟蚁腙：1x107CFU/g、0.50%氟蚁腙：1x107CFU/g、0.75%氟蚁腙：1x107CFU/g、0.25%氟蚁腙：1x108CFU/g、0.50%氟蚁腙：1x108CFU/g、0.75%氟蚁腙：1x108CFU/g、0.25%氟蚁腙：1x109CFU/g或0.50%氟蚁腙：1x109CFU/g。
4.如权利要求3所述的复配杀虫剂，所述辅剂是由溶剂和其它辅剂组成，其质量比例为1：2.5~3.0。
5.如权利要求4所述的复配杀虫剂，所述溶剂为不饱和脂肪酸类。
6.如权利要求5所述的复配杀虫剂，所述不饱和脂肪酸类为油酸和/或亚油酸。
7.如权利要求5所述的复配杀虫剂，所述不饱和脂肪酸类，可混合有少量饱和脂肪酸。
8.如权利要求1所述的组合物或如权利要求5所述的复配杀虫剂，其特征是：所述金龟子绿僵菌粉中的金龟子绿僵菌为金龟子绿僵菌(Metarhiziumanisopliae) EB0732，该菌株已于2016年10月31日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为保藏编号为CGMCC No.13170。
9.权利要求3所述的复配杀虫剂在防治蟑螂或其它咀嚼式口器昆虫中的应用。
10.如权利要求9所述的应用，其特征是：所述蟑螂为德国蟑螂德国小蠊(Blatellagermanica)、褐带蟑螂长须皮蠊(Supellalongipaloa)、东方蟑螂东方蜚蠊(Blattaorientalis)、烟褐蟑螂烟色大蠊(Periplanetafuliginosa)、美洲蟑螂美洲大蠊(Periplaneta Americana)、土耳其斯坦蟑螂(Blattalateralis)、田野蟑螂(Blattavaga)的一种或多种，其他咀嚼式口器昆虫为蝗虫。
Priority Applications (1)
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